eličková , j veselá, e stará 1 , z zemanová , a jonášová j ...€¦ · eličková 1, j...
TRANSCRIPT
![Page 1: eličková , J Veselá, E Stará 1 , Z Zemanová , A Jonášová J ...€¦ · eličková 1, J Veselá, E Stará1, Z Zemanová2, A Jonášová2, J Čermák1 1 Ústav hematologie a](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022011813/5e39a330fc40335c8355884c/html5/thumbnails/1.jpg)
Beličková1, J Veselá1, E Stará1, Z Zemanová2, A Jonášová2, J Čermák1 1 Ústav hematologie a krevní transfuze, Praha 2 Všeobecná fakultní nemocnice, Praha
![Page 2: eličková , J Veselá, E Stará 1 , Z Zemanová , A Jonášová J ...€¦ · eličková 1, J Veselá, E Stará1, Z Zemanová2, A Jonášová2, J Čermák1 1 Ústav hematologie a](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022011813/5e39a330fc40335c8355884c/html5/thumbnails/2.jpg)
Myelodysplastický syndrom (MDS) je heterogenní skupina klonálních
onemocnění s neefektivní hematopoézou (porucha diferenciace a
nekontrolovaná proliferace) a dysplastickými změnami buněk.
neefektivní hematopoéza periferní cytopenie (postihující jednu či více vývojových linií)
zvýšená buněčnost KD
MDS
![Page 3: eličková , J Veselá, E Stará 1 , Z Zemanová , A Jonášová J ...€¦ · eličková 1, J Veselá, E Stará1, Z Zemanová2, A Jonášová2, J Čermák1 1 Ústav hematologie a](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022011813/5e39a330fc40335c8355884c/html5/thumbnails/3.jpg)
• Incidence onemocnění : 2-5 na 100 000 obyvatel
u osob starších 70 let : 15-40 na 100 000 obyvatel
• 1/3 všech pacientů přechází neoplastickou transformací v akutní myeloidní
leukemii.
• postupná malignizace mutované kmenové buňky
vhodným in vivo modelem vzniku leukemie
MDS
![Page 4: eličková , J Veselá, E Stará 1 , Z Zemanová , A Jonášová J ...€¦ · eličková 1, J Veselá, E Stará1, Z Zemanová2, A Jonášová2, J Čermák1 1 Ústav hematologie a](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022011813/5e39a330fc40335c8355884c/html5/thumbnails/4.jpg)
patogeneze MDS není doposud objasněna
• defekt hematopoetické buňky není dostatečně charakterizován
• nepravděpodobné, že by jediná odchylka způsobila poruchu
• postupné hromadění genetických a epigenetických změn spolu s
alterovaným buněčným mikroprostředím
• vícestupňový proces
MDS
![Page 5: eličková , J Veselá, E Stará 1 , Z Zemanová , A Jonášová J ...€¦ · eličková 1, J Veselá, E Stará1, Z Zemanová2, A Jonášová2, J Čermák1 1 Ústav hematologie a](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022011813/5e39a330fc40335c8355884c/html5/thumbnails/5.jpg)
1. Transplantace kostní dřeně nebo hematopoetických kmenových buněk 2. Lenalidomid: imunomodulační lék, který může měnit či regulovat činnost
imunitního systému
• pacienti s MDS s del (5q)
3. Demetylační léky: Vidaza, Decitabin • inhibují DNA methyltransferázu a májí přímý cytotoxický účinek na
abnormální hematopoietické buňky KD
4. Podpůrná léčba: růstové faktory, chelatační léčba
LÉČBA
MDS
![Page 6: eličková , J Veselá, E Stará 1 , Z Zemanová , A Jonášová J ...€¦ · eličková 1, J Veselá, E Stará1, Z Zemanová2, A Jonášová2, J Čermák1 1 Ústav hematologie a](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022011813/5e39a330fc40335c8355884c/html5/thumbnails/6.jpg)
17p13.1
11 exonů (z nichž první se nepřekládá), 10 intronů
Funkční molekula je tetramer
Transkripční faktor řady genů ovlivňující proliferaci, apoptózu, reparaci DNA
nebo angiogenezi
FCE: TP53 monitoruje poškození DNA ANO spustí transkripci genu p21 zastaví dělení buňky, dokud není poškozené místo reparováno Pokud to nelze APOPTÓZA
![Page 7: eličková , J Veselá, E Stará 1 , Z Zemanová , A Jonášová J ...€¦ · eličková 1, J Veselá, E Stará1, Z Zemanová2, A Jonášová2, J Čermák1 1 Ústav hematologie a](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022011813/5e39a330fc40335c8355884c/html5/thumbnails/7.jpg)
Protein p53 se za normálních okolností v buňkách vyskytuje jen v nízké
koncentraci, jeho hladina je kontrolována negativní autoregulační smyčkou
skrz MDM2
Za stresových podmínek je aktivovaný a jeho koncentrace se zvyšuje
TP53 často podléhá bodovým mutacím
TP53
![Page 8: eličková , J Veselá, E Stará 1 , Z Zemanová , A Jonášová J ...€¦ · eličková 1, J Veselá, E Stará1, Z Zemanová2, A Jonášová2, J Čermák1 1 Ústav hematologie a](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022011813/5e39a330fc40335c8355884c/html5/thumbnails/8.jpg)
MUTACE: nejčastěji v DNA-vazebné doméně (exony 5-8)
nejčastější mutace jsou bodové substituce typu missense , méně časté frameshift či
non-sense
MDM2 není schopna degradovat mutantní TP53 zvyšování koncentrace
Důsledek mutace: zkrácené a nefunkční formy proteinu nebo konformačně pozměněný protein
bodové
MUTACE :
• Loss of function: ztráta tumor-supresorových vlastností (schopnosti vazby na
promotor cílových genů a následnou regulaci)
• Gain of function : získaná odolnost vůči chemoterapeutikům
TP53
![Page 9: eličková , J Veselá, E Stará 1 , Z Zemanová , A Jonášová J ...€¦ · eličková 1, J Veselá, E Stará1, Z Zemanová2, A Jonášová2, J Čermák1 1 Ústav hematologie a](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022011813/5e39a330fc40335c8355884c/html5/thumbnails/9.jpg)
10 % pacientů s MDS
17% MDS s del5q
72% MDS s komplexním karyotypem a -5/5q-
Negativní prognostický faktor (detekce rizikových pacientů)
Rezistence na léčbu, zvýšená progrese do AML
MDS a TP53
BJH; 2013; Kulasekararaj
![Page 10: eličková , J Veselá, E Stará 1 , Z Zemanová , A Jonášová J ...€¦ · eličková 1, J Veselá, E Stará1, Z Zemanová2, A Jonášová2, J Čermák1 1 Ústav hematologie a](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022011813/5e39a330fc40335c8355884c/html5/thumbnails/10.jpg)
Běžně používanými laboratorními technologiemi ( Sangerovo sekvenování,
Fassay analýza) nelze detekovat minoritní klony mutovaných buněk
„Ultra deep“ sekvenování pomocí 454 GS Junior od firmy Roche
Amplikonové sekvenování , plata s primery pro 11 pacientů
Studie v rámci ELN (The European LeukemiaNet )
Sekvenovali jsme nejčastěji mutovanou oblast (exony 4-11)
K přípravě amplikovonové knihovny je nutno PCR produkt 3x přečistit:
Biomek® 3000 od firmy Beckman Coulter
![Page 11: eličková , J Veselá, E Stará 1 , Z Zemanová , A Jonášová J ...€¦ · eličková 1, J Veselá, E Stará1, Z Zemanová2, A Jonášová2, J Čermák1 1 Ústav hematologie a](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022011813/5e39a330fc40335c8355884c/html5/thumbnails/11.jpg)
PACIENTI + METODY:
47 low-risk MDS pacientů s del(5q) v době diagnózy nebo v počátcích
choroby.
Median věku pacientů: 69.5 let (48-82).
19 pacientů bylo léčeno lenalidomidem.
TP53 byla analyzována z DNA izolované z CD34+ a CD34- buněk KD a
CD3+ a CD14+ buněk z PK pomocí MACS separátoru.
Průměrná coverage genu získané sekvence byla 900 čtení.
> 20% mutantních klonů, mutace potvrzena Sangerovým sekvenováním
![Page 12: eličková , J Veselá, E Stará 1 , Z Zemanová , A Jonášová J ...€¦ · eličková 1, J Veselá, E Stará1, Z Zemanová2, A Jonášová2, J Čermák1 1 Ústav hematologie a](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022011813/5e39a330fc40335c8355884c/html5/thumbnails/12.jpg)
VÝSLEDKY :
TP53 mutace byly zjištěny u 6 (z 47) pacientů (12,8%), 1 pacient měl dva mutované klony.
Velikost mutovaného klonu byla v rozmezí 3.5 do 49.6%.
6 mutací typu missense, 1 typu nonsense.
Zjistili jsme signifikantní rozdíly ve velikosti mutovaného klonu mezi buňkami KD a PK .
Leukemické transformace byla pozorována u 4 (z 6) pacientů nesoucích mutaci TP53.
Jeden pacient vykazoval značný pokles ve velikosti mutovaného klonu (23,9 - 2,3%) po léčbě lenalidomidem. Druhý pacient vykázal mírný nárůst mutantní klon (14,7 - 17,5%) v průběhu léčby.
Nezjistili jsme signifikantní rozdíl v expresi mRNA genů TP53, MDM2, MYC a CDKN1A mezi pacienty s mutací a pacientů bez mutace.
![Page 13: eličková , J Veselá, E Stará 1 , Z Zemanová , A Jonášová J ...€¦ · eličková 1, J Veselá, E Stará1, Z Zemanová2, A Jonášová2, J Čermák1 1 Ústav hematologie a](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022011813/5e39a330fc40335c8355884c/html5/thumbnails/13.jpg)
TP53 mutace byly spojeny s zvýšeným rizikem transformace
MDS pacientů do AML.
Identifikovaná velikost mutovaného klonu závisí na typu
buněk. Analýzu provádět z buněk kostní dřeně.
Uvažuje se zavést vyšetřování mutací v TP53 genu do
mezinárodní prognostického skórovacího systému MDS.
ZÁVĚRY: