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REDVET Rev. Electrón. vet. http://www.veterinaria.org/revistas/redvet 2018 Volumen 19 Nº 3 - http://www.veterinaria.org/revistas/redvet/n030318.html

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REDVET - Revista electrónica de Veterinaria - ISSN 1695-7504 Encephalitozoon cuniculi en conejo doméstico. reporte de un caso - Encephalitozoon cuniculi in domestic rabbit. report of a case

Murcia Marroquín Edgar Humberto1; Buendía Polanía Deriany Janeth2; Gómez Montenegro Carolina2; Roa Cortes YeisonAndres2

1. Médico Veterinario Universidad Nacional de Colombia, Especialista Sanidad

Animal UDCA, Bogotá-Colombia, Docente Universidad de la Amazonia* 2. Estudiantes de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad de la

Amazonia.

*Autor para correspondencia: [email protected] Resumen Ingresa a consulta una coneja doméstica (Oryctolagus cuniculus Linnaeus), blanca, de dos meses de edad, con inclinación de la cabeza, incapacidad de manterse en pie y andar en círculos. Se informa que hace unos días otro conejo orinó sobre su cabeza y al poco tiempo inició con estos síntomas. Se sospecha síndrome vestibular, se toman muestras para exámenes de laboratorio: Hemograma, química sanguínea, uroanálisis, coprológico. Inicialmente se establece tratamiento para encefalitozoonosis con fenbendazol, el diagnóstico es confirmado posteriormente y se mantiene con este antiparasitario por 28 días con excelentes resultados. La encefalitozoonosis es una enfermedad zoonótica poco conocida por los tenedores de este tipo de mascotas, por lo tanto debe hacerse más difusión sobre la misma, máxime si como en este caso quien transmitió la infección fue otro conejo asintomático. Palabras Clave: coneja, encefalitozoonosis, inclinación cabeza, síndrome vestibular, zoonosis. Abstract A domestic rabbit (Oryctolagus cuniculus Linnaeus), white, two months old, with head tilt, inability to stand upright and walk in circles, enters the clinic. It is reported that a few days ago another rabbit urinated on his head and soon began with these symptoms. Vestibular syndrome is suspected, samples are taken for laboratory tests: blood count, blood chemistry, urinalysis, coprology. Initially treatment is established for encephalitozoonosis with fenbendazole, the diagnosis is confirmed later and is maintained with this antiparasitic for 28 days with excellent results. Encephalitozoonosis is a zoonotic disease little known by the holders of this type of pets, therefore more diffusion must be done about it, especially if, as in this case, the one who transmitted the infection was another asymptomatic rabbit. Keywords: rabbit, encephalitozoonosis, head tilt, vestibular syndrome, zoonosis.



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INTRODUCCIÓN Dentro de las especies de animales que el hombre ha involucrado en su vida como mascota o animal de compañía, están los conejos, pasa a ser compañero de muchas personas, por su tamaño, docilidad, belleza y fácil manejo, sumado a su potencial zootécnico, ya que además de las características anteriores, es aprovechado por su prolificidad y rentabilidad por su “carne, piel, patas, sangre orina, estiércol y uso experimental” (1). El conejo ha sido considerado como una plaga, una de las 100 especies exóticas invasoras más dañinas del mundo, y aunque en Colombia se tiene reporte de su presencia desde 1547, no se le considera dañina (2). Pese a lo anterior mencionado, se ha encontrado que estos animales presentan una gran diversidad de parásitos internos y externos, que varía de acuerdo a la distribución geográfica, sexo y edad del conejo (3), convirtiéndose así en posibles diseminadores de enfermedades que pueden llegar a ser zoonóticas, razón por la cual algunos entes investigadores y comunidades de científicos han realizado grandes estudios, hasta el punto de presentar manuales de medicina, cirugía, odontología de conejos, entre otros, como BSAVA (British Small Animal Veterinary Association) (4). Dentro de las enfermedades encontradas está la encefalitozoonosis, producida por el Encephalitozoon cuniculi, el cual es un importante parásito zoonótico que infecta un amplio rango de especies: conejos, cobayos, hámster, ratones, zorros, visones, perros, gatos, vacas, ovejas, caballos, primates no humanos (5), al hombre, principalmente en estado de inmunosupresión, básicamente con cáncer o SIDA, causando encefalitis, cataratas, insuficiencia renal y la muerte (6,7), y en aves se han hallado en escretas de paloma doméstica (8). El encephalitozoon es un patógeno muy común en conejos de cría y domésticos, siendo estos los únicos que presentan signos clínicos en adultos sanos, encontrándose una prevalencia del 52% en el Reino Unido (9). Este parásito fue identificado por primera vez en un grupo de conejos de laboratorio en 1922, causando enfermedad vestibular (6). En perros solo se ha observado en cachorros quienes presentan signos neurológicos e incluyen ceguera, ataxia y convulsiones (6). En Colombia el primer reporte de un caso fue en 1997, en la Universidad de Antioquia, en conejo que presentó muerte súbita (7), siendo positiva a esta enfermedad. Además se ha encontrado que hay una alta prevalencia, encontrada en conejos asintomáticos sacrificados con fines comerciales en la Hacienda El Progreso de La Universidad de Antioquia, de donde se infiere que esta enfermedad de carácter zoonótico, afecta a la industria cunícola y es un factor de riesgo para la salud humana (7). Características del Agente Etiológico El Encephalitozoon cuniculi es un parásito intracelular obligatorio que pertenece al orden Microsporidia del phylum Microspora, del cual hay más de 1200 especies (7,6),



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caracterizados por la etapa infecciosa es por esporas que contienen un túbulo polar a través del cual inocula el material infectivo a las células hospedadoras (10).

Los microsporidios carecen de mitocondrias, forman esporas que son la forma infecciosa (11) muy resistentes al medio ambiente (9), son uninucleadas, miden 2 a 4 micrómetros de largo y 1 a 1,5 de ancho y presentan 5 a 7 vueltas del tubo polar, ordenadas en una hilera (12), poseen una cápsula muy Gram-negativa. Contiene un filamento polar en espiral que se puede extruir para inyectar esporoplasma en una vacuola, donde se desarrollan las esporas maduras, donde se multiplican y luego se rompe y las libera, lo que desencadena una respuesta inflamatoria y el subsecuente desarrollo de lesiones granulomatosas (5). Ciclo Biológico E cuniculi tiene un ciclo de vida directo, con transmisión horizontal y vertical (transplacentaria) (9). (Figura 2). Fisiopatología

La infección en conejos se da principalmente por vía horizontal, tras la ingestión de alimentos contaminados con ooquistes, generalmente en orina infectada, o por inhalación

Figura 1. Espora de un microsporidio y sus principales componentes. (10)

Figura 2. Ciclo biológico de Cryptosporidium. En tracto gastrointestinal. (10)



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de esporas (tracto respiratorio) (9), para diseminarse a otros órganos, como el riñón, el sistema nervioso central (SNC) y el corazón (5,13); y la vía transplacentaria (7), la que se presenta en perros, conejos, caballos y vacas, pero no en humanos (6). E. cuniculi es un parásito intracelular obligado y por ello pasa todo su ciclo de vida dentro de una vacuola parasitoforosa (PV) (14). Una vez el ooquiste ingresa al organismo, entra al epitelio intestinal del anfitrión u hospedero, principalmente en macrófagos, el tejido linfoideo, la médula ósea y neutrófilos (15) donde se lleva a cabo la primera fase de multiplicación masiva, que ocasiona el rompimiento de la célula infectada permitiendo la salida del parásito por vía sanguínea, con tropismo por células del túbulo renal, células endoteliales y macrófagos, pero preferente el tejido nervioso, cardíaco, hepático y pulmonar ocasionando encefalitis granulomatosa, nefritis intersticial, focos necróticos, degeneración hialina, necrosis hepática focal no supurativa y neumonía intersticial (12,7,9,16,17) y signos clínicos como cataratas, inclinación de la cabeza, parálisis y muerte en conejos (6). Manifestaciones Clínicas Existe una gran variedad de manifestaciones clínicas de encefalitozoonosis en conejos. Los signos neurológicos agudos, como la enfermedad vestibular que puede variar en severidad desde una inclinación menor de la cabeza hasta un animal que no puede enderezarse y está rodando y hemiparético (5), o las convulsiones que pueden ser potencialmente mortales. Las lesiones miocárdicas crónicas pueden causar insuficiencia cardíaca y muerte (5), y se han notificado trastornos renales y oculares (9). Diagnóstico Los hallazgos clínicos son a menudo confusos y hasta contradictorios, lo que dificulta la interpretación, repercutiendo en el diagnóstico y tratamiento de la enfermedad, (18) siendo muy frecuentemente confundido con un diagnóstico de enfermedad vestibular causada por una infección bacteriana (6). El E.Cuniculi en conejos puede ser asintomático o mostrar solo signos clínicos menores, como respuesta lenta a estímulos, pero por lo general suelen ser básicamente neurológicos, comprometiendo en algunos casos la visión. El decaimiento y la postura anormal de la cabeza (inclinación) son los primeros signos, para luego complicarse con ataxia, paresia con parálisis del tren posterior. La afectación renal ocasiona polidipsia y poliuria, y En casos extremos se presenta la parálisis completa y la muerte (6) En la necropsia, no se observan cambios importantes aparte de las lesiones renales menores (5), donde se encuentran los riñones encogidos, fibróticos y de apariencia picada (6). Microscópicamente se pueden identificar las esporas en los contenidos de tejidos, orina o lentes (5), y se recomienda realizar un análisis coprológico directo y por concentración para observar los ooquistes del parásito con objetivo de 40X (10) (Ver Figura 3)



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Métodos de Tinción Las diferentes técnicas de tinción actuales permiten la identificación de microsporidios pero no distinguir entre especies, sumado también a que las esporas son muy pequeñas y son difíciles de observar aisladas y a menudo estos se pueden confundir con bacterias o levaduras, mientras que si se encuentran en grumos y tinciones especiales tal como la de Weber, que tiñe las esporas de un color rojo intenso que sobresale del color verde de contraste, si se pueden identificar (19,6). (Ver Figura 4 y 5). A través de la microscopía electrónica de transmisión también se pueden identificar y diferenciar entre especies de microsporidios, pero no siempre se encuentran ya que por lo general se ven en el riñón y el cerebro (5,6), y es frecuente observar meningoencefalitis tras el examen histológico (6).

Métodos Sexológicos La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) puede usarse para identificar positivamente especies de microsporidios en materia fecal, sedimentos de orina o muestras de tejidos y es la alternativa más confiable que la tinción para su diagnóstico (6). Se basa en realizar esta prueba en tiempo real, aislando el ADN del parásito de estas muestras (20).

Se han desarrollado anticuerpos monoclonales y policlonales para varios microsporidios entre ellos el E. cuniculi para su uso en pruebas de Ensayo de inmunofluorescencia (IFA) con carácter experimental y en algunos laboratorios de diagnóstico con buenos resultados (6). El ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) es otro método para el diagnóstico de infección por microsporidia (6). Figura 4. Esporas teñidas con la técnica de Weber. 1000 X (19)

Figura 3. Ooquistes de Cryptosporidium sp. En fresco y tinción ácido alcohol. (40)



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Figura 5.

E. cuniculi , tinción Gram Cromotropo, donde se destaca el pequeño tamaño de las esporas (1 a 2

micras) que adquieren un color violeta. 100 X (12). MATERIALES Y MÉTODOS Anamnesis Ingresa a consulta al Centro Veterinario Murcia en Florencia (Caquetá), una coneja de raza Oryctolagus cuniculus Linnaeus (21), blanca, de dos meses de edad, con inclinación de la cabeza, incapacidad de manterse en pie y andar en círculos. Se informa que hace unos días otro conejo orinó sobre su cabeza y al poco tiempo inició con estos síntomas. (Ver Figura 6 y 7).

Figura 6. Postura anormal de la cabeza

Figura 8. Animal postrado, incapaz de mantenerse en pie Examen Clínico Al examen físico se encontró un paciente de 1 Kg de peso corporal, con buen estado anímico, sin reacción dolorosa a la palpación del cuello, constantes fisiológicas dentro de los rangos normales (Ver Tabla 1).

Figura 7. Animal postrado, incapaz de mantenerse en pie



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Tabla 1. Constantes Fisiológicas

Resultados Valores de Referencia* Temperatura 38.6 38.5 ºC - 40 ºC

120 130 - 300 60 50-60

Tiempo Llenado Capilar 2 2 seg * (22,23,24,25)

Ayudas Diagnósticas Hemograma

Tabla 2. Hemograma

RESULTADOS

VALORES DE

REFERENCIA*

Hematocrito 38 30-50 % Hemoglobina 11.1 8-15 g/dl RBC 4.5 4.5-7 x 106/ul

WBC 6.1 5 – 12 x 103/ul Plaquetas 365 290-650 x 103/ ul

Proteínas 6.3 5.0-7.5 g/dl Leucocitos 11.2 5.1-9.7 x 103/ ul Neutrófilos 68 35-55 % Linfocitos 42.2 25-50 % Monocitos 3.1 2-10 % Eosinófilos 4.8 2-5 % Basófilos 0 2-7 %

No se observaron hemoparásitos en la muestra Se observa leucocitosis por neutrofilia y eosinofilia en la muestra analizada.

Tabla realizada por Autores.

Química Sanguínea

Tabla 3. Química Sanguínea Examen Resultado Valores De Referencia ALT (SGPT) 33 14-80 UI/L AST 27 14 – 113 U/L CREATININA 0.9 0,8 – 2.5 mg/dl

Tabla realizada por Autores.

Coprológico



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Coprológico Tabla 4. Coprológico

Tabla realizada por Autores RESULTADOS Y DISCUSIÓN El hemograma mostró valores dentro de la normalidad, con un muy leve aumento de los leucocitos, básicamente neutrófilos, dado a que el proceso inflamatorio conlleva a la exudación de líquido y atracción de leucocitos, principalmente neutrófilos (28,29,30). No se presentaron alteraciones en la actividad sérica de las enzimas hepáticas alanina aminotransferasa (ALT) ni en la Aspartato Aminotransferasa (AST), que aumentan cuando hay daño en el hepatocito, músculo cardíaco y esquelético (31). Resultados análisis urinario entre los rangos normales. Lo anterior es muy favorable ya que no involucró daños a nivel sistémico, lo que permitía pensar en una favorable evolución, como al final se dió. Para el coprológico, se reporta del laboratorio la observación de 6 y 10 esporas por campo, de color rosa claro sobre el fondo verde, con una pequeña línea central, que corresponde al túbulo polar característico del Encephalitozoon sp., siendo el diagnóstico confirmativo.

Examen Físico

Color Marrón

Consistencia Dura

Examen Microscópico

Restos

alimenticios

Negativo

Fibra vegetal Positivo ++

Fibra muscular Negativo

Flora bacteriana Normal

Leucocitos 1-2 x campo

Hematíes 1 x campo

Sangre oculta Negativo

Moco Negativo

Método Tinción cromotrópica de Weber

Se observaron entre 6 y 10 esporas por campo, de color rosa claro sobre el fondo verde, con una pequeña línea central, que corresponde al túbulo polar característico del Encephalitozoon sp.



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Importante recordar que todos los animales inmunocompetentes expuestos a E. cuniculi desarrollan anticuerpos que pueden persistir durante la vida del huésped (32), esto pudo haber pasado en el conejo mayor que la infectó, ya que nunca presentó síntomas. Dentro de todos los protocolos diagnósticos mencionados, el uso de PCR se torna en una prueba complementaria en el diagnóstico de infección por E. cuniculi en conejos domésticos (33). PROTOCOLO DE TRATAMIENTO Se decide comenzar con un tratamiento sintomático, mientras se reportan los resultados de los exámenes de laboratorio, basado en la sintomatología, así: Fenbendazole (Aurozole 25 Co® Suspensión oral), 0.1 ml vía oral cada 24 horas durante 4 semanas para atacar esporas resistentes (34,35) y Dexametasona (Ampolla 4mg/ml) 0.05 ml IM, única dosis con el fin de evitar la inmunosupresión propia de los esteroides (36,32). El objetivo de los benzimidazoles es bloquear la síntesis de tubulina en la subunidad beta, que es el constituyente principal del citoesqueleto, impidiendo la división de los microsporidios (37). EVOLUCIÓN Se pudo observar mejoría pronta una vez instaurado el tratamiento, y cada vez fue presentando acomodación de la cabeza y caminar con orientación.

Figura 8. Postura de la cabeza, 8 días de iniciado el tratamiento

Figura 9. Postura del animal,

día 15 de tratamiento. Figura 10. Postura de la cabeza a los 28 días de tratamiento.



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CONCLUSIONES La encefalitozoonosis es una enfermedad que puede mantenerse en estado latente, asintomática, y presentar diferentes manifestaciones clínicas que van desde problemas neurológicos, hasta oftálmicos y renales. Generalmente aparece como enfermedad vestibular, por lo tanto se precisa de un diagnóstico diferencial con exámenes adecuados para instaurar el tratamiento específico. Dentro de los diagnósticos diferenciales están la tortícolis por otitis, causada ya sea por microorganismos o neoplasias. Aunque en varios artículos se encontró el uso de corticoesteroides para combatir el síndrome vestibular, en este caso se usó una dosis única, con el fin de evitar una posible inmunosupresión posterior. Actualmente existe una mayor conciencia y comprensión de las nuevas patologías que afectan a los conejos, sobre todo cuando pueden ser zoonóticas, lo que lleva a sus propietarios a instaurar campañas de prevención y control con el fin de evitar riesgos. Las pruebas diagnósticas sofisticadas, no siempre se consiguen en algunos lugares, no solo por su implementación sino por su costo, lo que obliga a buscar agentes etiológicos mediante técnicas convencionales con algunas modificaciones. El uso del fenbendazole ha sido exitoso en conejos con este padecimiento, además es de fácil adquisición ya que se usa comúnmente en las veterinarias como antiparasitario.

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REDVET: 2018, Vol. 19 Nº 3

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