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ESTUDIO CROMATOGRÁFICO (HPLC) DE CAFEINA EN MUESTRAS FARMACÉUTICAS Y CAFÉ SOLUBLE
Fernando de J. Amézquita L. Diana Mendoza O.
V. Odemarys Vallejo T. Miguel Ángel Pérez Landeros
Universidad de Guanajuato
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Primera parte obtención de la curva de calibración para la cafeína
• En esta parte conocerás el tiempo de retención de la cafeína utilizando como fase móvil la mezcla MeOH/H2O en la proporción 30:70 v, a un flujo de 1,5 mL/min, una columna marca Alltech con fase estacionaria de Adsorbosphore HS C18 7µ de 150 mm x 4,6 mm, dando un tiempo de 5 minutos para la elución y detectados a longitud de onda de 254 nm.
• Los cromatogramas fueron obtenidos para la cafeína a (50, 100, 200, 300 y 500) mg/L.
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• Después de haber revisado los tres cromatogramas anteriores, es posible que ya puedas decir cual el tiempo de retención de la cafeína.
• ¿Cuál es? • Recuerda que ese valor es una constante,
atendiendo a la fase movil, tipo de columna y la velocidad de flujo.
• Revisa bien los cromatogramas. Observa las escalas.
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Con los datos de área del pico correspondiente a la cafeína elabora la curva de calibración, obtén la ecuación de la recta y pide el factor de correlación.
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Segunda parte:
• Toda vez que has conocido el tiempo de retención de la cafeína, ahora la identificarás en diferentes productos.
• Y utilizando la ecuación de la recta obtenida, haz el cálculo de las concentraciones de cafeína en cada muestra.
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• Las muestras anteriores fueron de café soluble, la primera corresponde a un café con cafeína y el segundo a un café descafeinado. ¿Observas la diferencia?
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• Ahora se presentan los cromatogramas de los siguientes medicamentos:
• Cafiaspirina • Empirina • Sedalmerck • Andox plus • Sacidol • Nordinet
Tercera parte:
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• Los medicamentos tienen las siguientes formulaciones: • Cafiaspirina (cafeína y ac. Acetil salicílico -AAS). • Empirina (cafeína, AAS y fenacetina). • Andox plus (cafeína y paracetamol). • Sedalmerck, lo hay con dos (cafeína, fenilefrina y
paracetamol) y (cafeína y paracetamol). • Sacidol (cafeína, paracetamol y AAS). • Nordinet (cafeína, AAS, fenacetina y acetanilida).
• A partir de la señal de cafeína podrás ir identificando
cada compuesto. Auxíliate de los cromatogramas de paracetamol.
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Tercera parte: Ahora harás el estudio del efecto de la velocidad
de flujo en el tiempo de retención. Consiste en inyectar la misma muestra a
diferentes velocidades. Al finalizar haz el gráfico del tiempo de retención en función del flujo.
Y para concluir llena la plantilla con los datos.
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• Cuarta parte: Como una aplicación adicional se
presentan dos cromatogramas de café soluble comercial de la marca Nescafé, tipo Clásico. Uno de ellos corresponde a la presentación normal y otro a Descafeinado. ¿Notas la diferencia?
¿Qué opinas? es cierto que son lo mismo según dice el comercial.
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Cromatograma (a)
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Cromatograma (b)
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A continuación encontrarás cinco cromatogramas de cafeína que fueron obtenidos bajo las mismas características que en la primera parte, modificando solamente el flujo a 1 mL/min. (a)¿Te queda claro porque la elución se hizo a 7 minutos? (b) Anota en tus observaciones todas las diferencias que notes en ellos respecto a los de la primera parte.
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Con los datos de Área y concentración repite la curva de calibración y anota en tus observaciones lo que consideres importante al hacer el análisis de los datos.
mg/L Área 50 17839
100 28641 200 63463 300 104030 500 180241
y = 349.48x - 3297.1 R² = 0.9915
0
50000
100000
150000
200000
0 200 400 600
Área
Concentración mg/L
Gráfico de Calibración para Cafeína, en MeOH/H2O 30/70 % v, medida a un 1 mL/Min
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Ahora obtén el cromatograma a las mismas condiciones de velocidad de flujo para los medicamentos: Andox plus a 7 min Sacidol a 7 min Empirina a 7 min Nordinet a 15 min Sigue el orden propuesto. Sabiendo la formulación haz la identificación de cada constituyente en el cromatograma, el cálculo de la cafeína en cada uno y anota tus conclusiones en el manual.
¡Esperamos que hayas disfrutado la práctica!
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