Evolis Twin Plus(ELISA)

분석항목 - 현재 검사 진행중인 항목 Galactomanan toxokara

- 우리가 검사해야할 항목 TNF-a, IL-1b, IL-6, IL-8, IL-10

분석원리- Evolis Twin Plus 는 검체 Sampling,

희석 , 시약분주 , 항온 , 세척 , Plate 이동 , Read-

ing 등을 해주는 전자동화 기기이다 . Evolis Twin Plus 는 Windows 에서 구동이

되며 Assay 는 Bio-Rad Assay 에서 수정하여 사용 가능하다 .

- OD 값 측정

- 검체 : Serum or plasma

- 종목당 필요량 : 10~20ul (+Dead Volume 150ul)

- 준비물 : 1)D.W: Prime/Rinse/Dispense and Aspirate 2) Wash Solution 3)Tip 4)Diution Plate( 필요시 )

검사방법 (menual)*Galactimanan*

1. 검체를 Rac 에 순서대로 정리하고 뚜껑 open 후 튜브를 Sample 수만큼 꽂아놓음 .

2. 튜브에 Labeling 한다 .(5 단위로 기록 ) Heating block 을 미리 켜놓는다 .

3. Sample 300ul 에 Treatment (R7) 을 100ul 씩 첨가한다 .

4. 미리켜둔 Heating Block 이 120 도가 되면 6 분간 가열한다 . ( 단백질 제거를 위해 )

그 후 10 분간 원심한다 .

여기까지가 검체의 전처리 과정

5. 원심을 한 검체는 상층액 50ul 를 사용하며 , Well 에 conjugate 50ul를 넣는다 .

6. 파라필름으로 실링후 1 시간 15 분간 37 도에서 Incubation 한다 .

7. Washing. ( 기 계 에 8 번 으 로 맞 춰 있 음 ) Washing Solution 은 D.W940+Buffer 60

8. TMB Solution 200ul 씩 분주 .

9. RT 에서 암실에 30 분간 Incubation. 빛차단이 필수이므로 호일로 감싼다 .

10. Stop Solution 100ul 첨가

11. 450nm 에서 흡광도 측정

Menual 기계