fase stazionaria in hplc
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Fase stazionaria in HPLC. HPLC. Lab. Chimica Analitica II _. Cromatogramma di eluizione LSC. HPLC. Lab. Chimica Analitica II _. HPLC. Lab. Chimica Analitica II _. Processi di silanizzazione. Possibili gruppi funzionali sulla superficie della silice. - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
Lab. Chimica Analitica II _ HPLC
Lab. Chimica Analitica II _ HPLC
Cromatogramma di eluizione LSC
Lab. Chimica Analitica II _ HPLC
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Reazioni di silanizzazione per la produzione di fasi legate
Possibili gruppi funzionali sulla superficie della silice
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Effetto della lunghezza di catena sulle prestazioni di una colonna di silossano in fase inversa riempita con particelle di 5 m.
MeOH: H2O = 50%, 1ml/min
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Forza del solvente (su silice) di alcune miscele di solventi.
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Forza del solvente (0) come funzione della composizione. Il solvente A è eptano
Confronto dei cromato-grammi dell’acrilamide ottenuti con quattro fasi mobili, ognuna con polarità 0.53
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Effetti della variazione della composizione sul fattore di capacità k’ (a,b) e sul fattore di selettività (c,d,e). Composti: 1) prednisone, 2) cortisone, 3) idrocortisone, 4) dexametasone, 5) corticosterone, 6) cortoexolone
Effetti della variazione della composizione della miscela eluente
Eluente:
MeOH : H2O (H3PO4 0.5 %)
1 ml/min
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Effetti della variazione del pH su di una separazione in fase inversa
Colonna C18 5 m, 150 x 4.6 mm
Eluente: KH2PO4 20 mM: CH3CN = 95 : 5
1 ml/min, 40°C, UV 270 nm
1) Acido solfanilico
2) Solfamerazina
3) Solfisossazolo
4) Solfopiridina
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a) Additivi per bibite analcoliche
Colonna 250 x 4.6mm, 1 ml/min, AcOH : H2O = 6 :
94
b) Insetticidi organofosforati
Colonna C8 250 x 4.5 mm, 5 m, 2 ml/min,
gradiente MeOH : H2O da 67 : 33 a 80 : 20
Tipiche applicazioni della cromatografia in fase legata
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Cromatogramma di 30 amminoacidi derivatizzati con o-ftalaldeide.
Colonna RP-C18
, 5 m
Solvente A: MeOH : THF : H2O (Na
2HPO
4 0.05 M, pH 7.4) = 96 : 2 : 2
Solvente B: MeOH : H2O = 65 : 35
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Cu(II)
Mix enantiomeri
Scambiatore di legame (D) – penicillamina, accettore di
elettroni per la separazione di:
• - aminoacidi e derivati
• - idrossiacidi, alcoli amminici
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Proprietà degli eluenti, modificabili per ottenere l’eluizione a gradiente:• Forza ionica• pH• Capacità di formare ponti idrogeno• Forza della serie eluotropica• Costante dielettrica• Concentrazione dei reagenti
in competizione sui siti della fase stazionaria
Differenze di separazione in funzione del tipo di gradiente applicato: a) gradiente lineare, b) a
gradini
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Variazioni nella separazione indotte dal
cambiamento della pendenza del
gradiente, ottenuta variando la forza
ionica del NaCl
Colonna: DEAE-Sephadex A-50
Eluente: TRIS-HCl 0.1 M, pH 8.3 / NaCl
8 ml/cm2h
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Variazioni nella separazione indotte dal
cambiamento del gradiente da lineare a
non lineare
Colonna: DEAE-Sephadex A-50
Eluente: TRIS-HCl 0.1 M, pH 8.3 / NaCl
8 ml/cm2h
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Effetto della temperatura in HPLC