graduação em biotecnologia disciplina de técnicas instrumentais prof. fabricio rochedo...
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Graduação em BiotecnologiaDisciplina de Técnicas Instrumentais
Prof. Fabricio Rochedo Conceiçã[email protected]
08 de abril de 2011
CENTRIFUGAÇÃOCENTRIFUGAÇÃO
* A centrifugação é um processo de separação em que a força centrífuga relativa gerada pela rotação da amostra é usada para sedimentar sólidos em líquidos, ou líquidos imiscíveis de diferentes densidades, separando-os
* É usada em diferentes aplicações laboratoriais, industriais e domésticas
CENTRIFUGAÇÃOCENTRIFUGAÇÃO CENTRIFUGAÇÃOCENTRIFUGAÇÃO
• A força centrífuga relativa (FCR) é gerada quando uma partícula ou conjunto de partículas é sujeito a um movimento circular
• A força centrífuga relativa é calculada da seguinte forma:
FCR = 0.00001118 ×R ×N2
R= raio de centrifugação em centímetros (cm)N= velocidade de centrifugação em rotações por minuto (rpm)
• A unidade de medida da força centrífuga relativa é o "g", sendo 1g equivalente à aceleração da gravidade na superfície da terra
Princípio FísicoPrincípio FísicoPrincípio FísicoPrincípio Físico
CENTRÍFUGASCENTRÍFUGASCENTRÍFUGASCENTRÍFUGAS
São equipamentos que aplicam a força centrífuga relativa para separar as partículas de uma solução
* Células
* Vírus
* Organelas
* DNA, RNA e proteínas ...
• Separação de macromoléculas ou células recorrendo a
gradiente de concentração da solução base usada para a separação das
partículas
CENTRIFUGAÇÃO DIFERENCIALCENTRIFUGAÇÃO DIFERENCIALCENTRIFUGAÇÃO DIFERENCIALCENTRIFUGAÇÃO DIFERENCIAL
CENTRIFUGAÇÃO POR GRADIENTECENTRIFUGAÇÃO POR GRADIENTECENTRIFUGAÇÃO POR GRADIENTECENTRIFUGAÇÃO POR GRADIENTE
• “Peletização”
• Sobrenadante + “pellet” (sedimento)
TIPOS DE CENTRÍFUGASTIPOS DE CENTRÍFUGASTIPOS DE CENTRÍFUGASTIPOS DE CENTRÍFUGAS
BancadaBancadaBancadaBancada ClínicaClínicaClínicaClínica
4.600g
0,2 – 75 mL
17.000g
2 – 180 mL
MicrocentrífugaMicrocentrífugaMicrocentrífugaMicrocentrífuga
16.000g
0,2 – 2 mL
TIPOS DE CENTRÍFUGASTIPOS DE CENTRÍFUGASTIPOS DE CENTRÍFUGASTIPOS DE CENTRÍFUGAS
Alta velocidadeAlta velocidadeAlta velocidadeAlta velocidade
15.000g
30 – 500 mL
UltracentrífugaUltracentrífugaUltracentrífugaUltracentrífuga
800.000g
10 – 60 mL
ROTOR DE ÂNGULO FIXOROTOR DE ÂNGULO FIXOROTOR DE ÂNGULO FIXOROTOR DE ÂNGULO FIXO
ROTOR OSCILANTE ROTOR OSCILANTE ROTOR OSCILANTE ROTOR OSCILANTE
• Concentração de amostras• Mais rápido• Pode danificar as células
• Separa suavemente as células• Mais demorado
COMO CENTRIFUGAR?COMO CENTRIFUGAR?COMO CENTRIFUGAR?COMO CENTRIFUGAR?
1- Escolha da centrífuga e dos tubos - Volume - Composição do tubo: Baixa FCR (plástico, vidro ...) Alta FCR (nitrocelulose, polialômero ...) - Composição da amostra: Aquosa (plástico, vidro) Orgânica (vidros e certos plásticos)
2- Equilibre os tubos *** - Os tubos colocados frente a frente devem ter o “mesmo peso” - Microcentrífuga: ajuste pelo volume e não pelo peso - Equilibrar juntamente com tampas e suportes (partes removíveis) - Preencha os tubos até 1 a 2 cm da borda
3- Confira o peso ***
4- Coloque os tubos sempre na mesma orientação *Aba do Eppendorf
COMO CENTRIFUGAR?COMO CENTRIFUGAR?COMO CENTRIFUGAR?COMO CENTRIFUGAR?
5- Sempre colocar a cobertura do rotor - As centrífugas geram aerossóis - Quebra do tubo
6- Ajustar os parâmetros de centrifugação - Velocidade (RPM x FCR) - Temperatura - Tempo
7- Sempre espere a centrífuga alcançar a velocidade máxima antes de se afastar
8- Após a centrifugação: “gentileza” para remover tubos
COMO CENTRIFUGAR?COMO CENTRIFUGAR?COMO CENTRIFUGAR?COMO CENTRIFUGAR?
9- Remova o sobrenadante - Decantação (inversão do tubo) “aerossóis” - Aspiração 10- Limpe suportes e rotor
11- Secar o interior da centrífuga
12- Folha de registros e de reserva - Vida útil do rotor “segurança” - Manutenção
13- Feche a tampa das centrífugas refrigeradas no intervalo de uso para evitar condensação