BY MARIA ALEJANDRA PALACIO VELASQUEZ

JUAN NICOLAS SARMIENTO NARANJOMEDICINE STUDENTS

III SEMESTER

INTRODUCTION

CALPAIN

Cytoplasmic cysteine

protease

Requiring calcium ions for activity

• Signal transduction

• Cell proliferation

• Cell cycle progression

• Apoptosis

Funtions

APOPTOSIS

Programmed Cell Death

Mediated by

proteolytic enzymes

called caspasesInitiated by

extracellular or

intracellular death signals

P38 MAPK

Signaling pathway

Allows cells to interpret

External signals

Respond appropriately way

HEAT STRESS

Body’s means of controlling

internal temperature

Starts to fail

ACUTE LUNG INJURY

MOST COMUN CAUSE INFECTION BY

GRAM NEGATIVE BACTERIALS

LPSINDUCDE

CALPAIN ACTIVATION PHOSPHORYLATION OF p38 MAPK

ENDOTHELIAL CELLS APOPTOSIS ACTIVE CASPACE 3 DNA FRAGMENTS

HEAT STRESS

OBJETIVE

This study investigated how calpain activation mediated apoptosis and

whether heat stress regulated calpain activation in LPS-stimulated

PMECs.

METODOS Y MATERIALES

CULTIVO PMECs(Células endoteliales pulmonares microvasculares)

Experimento realizado con el fin de aislar células de un organismo en condiciones especificas que permitan su supervivencia y crecimiento, y donde se tenga control de su desarrollo.

Se utilizaron células endoteliales microvasculares de ratones para poder manipular de manera practica y realizar control de los procedimientos realizados.

FLUORESENCIA

Técnica para localización de proteínas dentro de una célula, y su posterior

observación por microscopía de fluoresencia. Un fluorocromo se define como la sustancia capaz de emitir luz a

cierta longitud de onda especifica.

• Caspasa 3: se usó fluoresencia para estudiar la actividad de la Caspasa 3, iniciadora de la via extrínseca de la apoptosis.

• Calpaina: Se utiliza un sustrato fluorescente que permite marcar la proteasa Calpain.

ELISATécnica usada para estudiar la unión de un anticuerpo frente a un antígeno en la muestra establecida, junto con la enzima que corresponde a la señal de la unión frente al complejo antígeno-anticuerpo.

Se utilizó para reconocer el DNA libre en la muestra causado por la fragmentación, y de esta manera determinar si hubo apoptosis causado

por la sepsis bacteriana.

TRANSFORMACIÓN Procedimiento por el cual las células de un cultivo se mezclan con un vector de DNA recombinante, donde posteriormente la célula incorporará el DNA plasmídico, y se reproducirá con esta variable.

Células endoteliales microvasculares pulmonares fueron infectadas con Adenovirus recombinante donde se observó el proceso de

transformacion con la transferencia del gen.

WESTERN BLOT-IMMUNOBLOT

Proceso para detectar una proteína particular la cual combina la resolución de la electroforesis en gel, especificidad de anticuerpos y sensibilidad de pruebas enzimáticas. Separa e identifica una proteína particular.

Se uso con el fin de observar la expresión de Calpain y p38 MAPK, usando anticuerpos

específicos.

RESULTADOS

El estrés por calor inhibe la apoptosis de las PMECs estimulada por la LPS

El choque térmico disminuye la expresión y activación de la calpaina en las PMEC.

El shock térmico atenúa la apoptosis inducida por la Calpain

El shock térmico inhibe la fosforilación de MAPKs inducida por LPS

Activación de la Calpaina promueve la fosforilacion de P38

DISCUSSION

AUTHORS WHAT DID THEY SAY? YES NOT

Joyeux-Faure M and el at.

“heat shock has been widely recognized to protect cardiomyocytes against ischemia/reperfusion-induced injury”

Wong HR and el at.

“The heat-shock response attenuated LPS-mediated apoptosis in cultured sheep pulmonary artery endothelial cells”

Bouchama A and el at. Moulin M and el at.

“Severe heat stress has been reported to have a direct cytotoxic effect, such as in heatstroke”

Chen G and el at. Heidemann SM el at.

Heat pre-treatment has been demonstrated to attenuate inflammation and pulmonary microvascular leakage in mouse and rat models of endotoxemia or sepsis

CONCLUSION

Bacterial infection has the capacity to induce apoptosis in a tissue.

Heat stress, as a physiological way, allows prevent apoptosis.

Calpain are very important to induce an apoptotic process.

The Calpastain, an endogenous inhibitor of Calpain, reduced acute lung injury.

By María Alejandra Palacio Velásquez

• Juan Nicolás Sarmiento Naranjo

Bibliografia

• PROTEÍNAS DE CHOQUE TÉRMICO, MUERTE CELULAR Y RESPUESTA ANTITUMORAL. S. Fiorentino , A. Barreto , A. Asea. Revista de la Facultad de Ciencias Vol. 12 N° 2, 5-22. Pontificia Universidad Javeriana.

• Biología Celular y Molecular. Lodish, H., Berk, A., et. Al. 5 Edición, Editorial Panamericana.