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DRK-Blutspendedienst West
3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten
HIV-1 NAT-Testversager durch Mutationen
Dr. B. Müller, NAT-Labor, Hagen
DRK-Blutspendedienst West
Folie 2
3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten
Aktueller Fall in Österreich vom 28.02.2013 „Diagnostische Fensterspende“
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Folie 3
Überblick
3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten
Bundesgesundheitsbl. 2012, 55:907-913 Nübling et al., Transfusion 2009 Schmidt et al., Transfusion, 2009 Chudy et al., Transfusion, 2012
Prävalenz bei Neuspendern/100.000 Untersuchungen: 11,1 (m) bzw. 2,3 (w)
Sicherheitsgewinn durch NAT: Verkleinerung der diagn. Fensterphase (ca. 10 Tage)
Dokumentation von 23 HIV-1 NAT-only Fällen (NAT positiv, anti-HIV negativ) zwischen 2004 und 2010 (insges. 31 Mio. NAT-getestete Spenden)
Bislang 3 HIV-1 Übertragungsfälle trotz NAT dokumentiert:
a) 1998 (HIV-1 M, Subtyp A) (in-House-PCR, Primer-Mismatch)
b) 2007 (Roche CAP/CTM, anti-sense Primer, gag)
c) 2009 (Roche CTS/MPX, Primer, LTR)
Geschätztes Restrisiko für transfusionsassoziierte HIV-1 Infektionen 1 : 4,3 Mio.
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Folie 4
Falsch negative NAT-Resultate - Ursachenanalyse
3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten
Sequenzierung und detaillierte Untersuchung mit weiteren 11 CE-zertifizierten Testsystemen
~3 Mio. untersuchte Spenden zwischen Januar 2010 und Februar 2013
4 Spenden mit falsch-negativen NAT-Ergebnissen (Routine-NAT: GFE-Blut, Virus Screening PCR Kit, VSPK)
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Folie 5
Spenderinformationen - Überblick
3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten
RD = Mehrfachspender
FTD = Erstspender
n.d. = nicht detektierbar
/ = nicht untersucht
Fall Spender Geschlecht Alter Spende-zeitpunkt
NAT- Assay
Screening Resultate
LIA HIV-1-Konz. (IU/ml)
1 RD F 57 Aug. 2012 Juli 2004
VSPK v1.2 In-House
Ab pos RNA neg Ab neg RNA neg
pos /
n.d. n.d.
2 RD M 30 Sep. 2011 Mai 2011 Feb. 2011
VSPK v1.2 VSPK v1.2 VSPK v1.2
Ab pos RNA pos Ab neg RNA neg Ab neg RNA neg
/ / /
541.200a
<33 n.d.
3 FTD F 31 Juli 2012 VSPK v1.2 Ab pos RNA neg pos 20.410b
4 FTD M 18 Okt. 2010 VSPK v1.1 Ab pos RNA neg pos 5.300a
Ab = anti-HIV-1/2 Assay
LIA = Line Immunoassay
a = Roche CAP/CTM v2.0 b = Abbott RT HIV
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Folie 6
Spenderinformationen (low viral load)
3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten
Fall Spender Geschlecht Alter Spende-zeitpunkt
NAT- Assay
Screening Resultate
LIA HIV-1-Konz. (IU/ml)
1 RD F 57 Aug. 2012 Juli 2004
VSPK v1.2 In-House
Ab pos RNA neg Ab neg RNA neg
pos /
n.d. n.d.
2 RD M 30 Sep. 2011 Mai 2011 Feb. 2011
VSPK v1.2 VSPK v1.2 VSPK v1.2
Ab pos RNA pos Ab neg RNA neg Ab neg RNA neg
/ / /
541.200a
<33 n.d.
3 FTD F 31 Juli 2012 VSPK v1.2 Ab pos RNA neg pos 20.410b
4 FTD M 18 Okt. 2010 VSPK v1.1 Ab pos RNA neg pos 5.300a
RD = Mehrfachspender
FTD = Erstspender
n.d. = nicht detektierbar
/ = nicht untersucht
Ab = anti-HIV-1/2 Assay
LIA = Line Immunoassay
a = Roche CAP/CTM v2.0 b = Abbott RT HIV
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Folie 7
Ergebnisse der Screening NAT-Teste (low viral load)
3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten
*positiv in 2 von 6 Replikaten
Fall VSPK v1.2 (GFE Blut)
CTS/MPX (Roche)
CAS v1.5 (Roche)
Ultrio (Novartis)
Ultrio Plus (Novartis)
Ultrio Elite (Novartis)
1 neg neg neg (s) neg +* neg
2 neg + neg / + +
Screening NAT
anti-retrovirale Therapie
Diagnostische Fensterspende
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Folie 8
Ergebnisse der quantitativen NAT-Teste (low viral load)
3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten
Bestätigungstest/quantitative NAT
Fall CAP/CTM v2
(Roche) HPS/CTM v2
(Roche) AM v1.5 (Roche)
CAM v1.5 (Roche)
RT HIV (Abbott)
artus HIV (Qiagen)
1 neg neg neg (s) neg (us) neg neg
2 23 cp/ml <34 cp/ml neg (s) <400 cp/ml <70 IU/ml 240 IU/ml
s = Standard
us = Ultrasensitive
neg = negativ
anti-retrovirale Therapie
Diagnostische Fensterspende
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Folie 9
Spenderinformationen (Mutationen)
3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten
RD = Mehrfachspender
FTD = Erstspender
n.d. = nicht detektierbar
/ = nicht untersucht
Fall Spender Geschlecht Alter Spende-zeitpunkt
NAT- Assay
Screening Resultate
LIA HIV-1-Konz. (IU/ml)
1 RD F 57 Aug. 2012 Juli 2004
VSPK v1.2 In-House
Ab pos RNA neg Ab neg RNA neg
pos /
n.d. n.d.
2 RD M 30 Sep. 2011 Mai 2011 Feb. 2011
VSPK v1.2 VSPK v1.2 VSPK v1.2
Ab pos RNA pos Ab neg RNA neg Ab neg RNA neg
/ / /
541.200 <33 n.d.
3 FTD F 31 Juli 2012 VSPK v1.2 Ab pos RNA neg pos 20.410
4 FTD M 18 Okt. 2010 VSPK v1.1 Ab pos RNA neg pos 5.300
Ab = anti-HIV-1/2 Assay
LIA = Line Immunoassay
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Folie 10
NAT-Assay Target-Regionen (Mono Target)
3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten
VSPK v1.2 (GFE Blut) CTS/MPX (Roche) artus HIV (Qiagen)
CAS v1.5 (Roche) AM v1.5 (Roche) CAM v1.5 (Roche)
RT HIV (Abbott)
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Folie 11
NAT-Assay Target-Regionen (Dual Target)
3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten
Ultrio (Novartis) Ultrio Plus (Novartis) Ultrio Elite (Novartis)
pol LTR LTR gag
CAP/CTM v2 (Roche) HPS/CTM v2 (Roche)
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Folie 12
Ergebnisse der Screening NAT-Teste (Mutationen)
3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten
Fall
VSPK v1.2 (GFE Blut)
LTR
CTS/MPX (Roche)
LTR
CAS v1.5 (Roche)
gag
Ultrio (Novartis) LTR + pol
Ultrio Plus (Novartis) LTR + pol
Ultrio Elite (Novartis) LTR + pol
1 neg neg neg (s) neg +* neg
2 neg + neg / + +
3 neg neg + (+) (+) (+)
4 + + + (+) / /
Screening NAT
(+) = Verringerte Detektion
+ = Konsistente Detektion
neg = negativ
s = Standard
/ = nicht untersucht
Vorversion VSPK v1.1 negativ
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Folie 13
Ergebnisse der quantitativen NAT-Teste (Mutationen)
3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten
Bestätigungstest/quantitative NAT
Fall CAP/CTM v2
(Roche) LTR + gag
HPS/CTM v2 (Roche)
LTR + gag
AM v1.5 (Roche)
gag
CAM v1.5 (Roche)
gag
RT HIV (Abbott)
pol
artus HIV (Qiagen)
LTR
1 neg 1 neg (s) neg (us) neg neg
2 23 cp/ml <34 cp/ml neg (s) <400 cp/ml <70 IU/ml 240 IU/ml
3 3.760 cp/ml 5.530 cp/ml 10.253 cp/ml / 19,387 IU/ml neg
4 3.294 cp/ml / / 1.750 cp/ml (s) 3.166 IU/ml 70 IU/ml
s = Standard
us = Ultrasensitive
neg = negativ
/ = nicht untersucht
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Folie 14
Sequenzanalyse LTR-Bereich (Fall Nr. 3)
3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten
56 bp Deletion
Primer 2
Primer 1
Müller et al., submitted
VSPK v1.2
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Folie 15
Sequenzanalyse LTR-Bereich (Fall Nr. 3)
3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten
Müller et al., submitted
52 bp Insertion
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Folie 16
Sequenzanalyse LTR-Bereich (Fall Nr. 4)
3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten
modifiziert nach Chudy et al., Transfusion, 2012
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Folie 17
3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten
§ Bekanntmachung über die Zulassung von Arzneimitteln
- Abwehr von Arzneimittelrisiken - Vom 15. Juni 2012
Anordnung von Maßnahmen zur Risikominimierung beim Einsatz von HIV-1 NAT-Testsystemen
Bescheid Bei der Herstellung von zellulären Blutkomponenten, therapeutischen Einzelplasmen und
Stammzellzubereitungen zur hämatopoetischen Rekonstitution, die nach dem 01.01.2015
für den Verkehr freigegeben werden, müssen bei dem Spender-Screening HIV-1 NAT (Nukleinsäure-Amplifikationstechnik) Testsysteme eingesetzt werden, die geeignet sind, die mögliche Unterbestimmung bzw. die Nichterkennung einer Zielregion auszugleichen oder auszuschließen. Ein möglicher Ansatz ist die Verwendung eines sogenannten
Dual-Target NAT-Tests, bei dem zwei (oder mehrere) verschiedene Abschnitte des
HIV-Genoms amplifiziert und nachgewiesen werden. Die Methode muss so ausgelegt sein, dass sie die Anforderung des PEI an die Mindestsensitivität für alle amplifizierten Genregionen erfüllt. Diese ist derzeit der verlässliche Nachweis einer HIV-1-RNA-Konzentration von mindestens 10.000 IU/mL, bezogen auf die Einzelspende.
BAnz AT 12.09.2012 B6
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Folie 18
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Vielen Dank!