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III Simpósio Nacional de

Aplicações Biotecnológicas

Comissão Organizadora

COORDENADOR GERAL DO III SINABIOTEC

Nilson Nicolau Júnior

COMISSÃO DE PATROCÍNIO

Mariele de Fátima Alves Venâncio

Lorena Polloni

Lorraine Cristina Polloni

Pedro Serafim Marques

Asaph Souza Diniz

COMISSÃO DE DIVULGAÇÃO E APOIO

Cristiane Angélico Duarte

LoynaNobile Carvalho

Natália Marques Vieira

Ian Faria Paniago

Natássia Caroline Resende Corrêa

Isabela Lemos De Lima

Larissa Caroline Da Silva

Bruna Moreira Silva Lemos

Larissa Fontoura Reis Rezende

Letícia de Souza Castro Filice

Sávio Ferreira Borges

José Augusto Leôncio Gomide

Lucas de Oliveira Carneiro

COMISSÃO CIENTÍFICA

Ana Paula Oliveira Nogueira

Luiz Fernando Ribeiro Zabisky

Fernanda Carvalho de Souza

Luiza Diniz Ferreira Borges

Leticia Lopes Dantas

Patrícia da Silva Lopes

COMISSÃO DE MINICURSO

Letícia Silveira Barcelos

Lorrayne Cristina Moura Garcia

Paula de Souza Santos

Rhaysa Mateus Tiago

Laura Calazans de Melo Gomes

Isabela Rodrigues Anjona

Tayane Trindade Fontes

Larissa Prado Maia

Letícia Santos Pimentel

Lucas Oliveira Corumbá

Carolina Alvarenga Turini

Esther Campos Fernández

Paula Cristina Batista de Faria Gontijo

SECRETARIA

Karen Ramos de Oliveira

Luana Felix Rosa

Luanna Almeida de Oliveira

Joyce Silva Reis

Natalia LorrayneTavernelli

Leticia Regina Lonardoni

Serena Mares Malta

Lucas Matos Martins Bernardes

Kellen Cristina Torres Costa

Apresentação

O evento I Encontro Nacional do INCT-

Teranóstica e Nanobiotecnologia, III Simpósio

Nacional de Nanotecnologia e Nanomedicina, III

Simpósio Nacional de Aplicações Biotecnológicas

reuniu cientistas e profissionais das diferentes áreas

da Biotecnologia trazendo temas atuais e

possibilitando estabelecer fortes colaborações em

projetos de pesquisa e parcerias com grandes

empresas da área. O evento consistiu de palestras

técnicas, mini-cursos práticos e teóricos e

apresentação de resultados de pesquisas realizadas

pelos acadêmicos e pesquisadores.

Prof. Dr. Nilson Nicolau Júnior

Coordenador Geral do III SINABIOTEC

Programação Universidade Federal de Uberlândia, Anfiteatro Bloco 8C,

Campus Umuarama, 4 a 6 de Julho de 2018.

Dia 04.07.2018

8:00-8:30 Palestra: Nanofarmacêutica como solução para doenças

negligenciadas.

Palestrante: Prof. Dr Nelson Eduardo Duran Caballero (UNICAMP)

8:40-9:10 Palestra: Bioprospecção de marcadores imunogenéticos na infecção

pelo HTLV-1.

Palestrante: Prof. Dr Antônio Valinoto (UFPA)

9:20-9:50 Palestra: Aplicações de Radiotraçadores e Nanotecnologia na área de

Saúde.

Palestrante: Prof. DrValbert Nascimento (UFMG)

10:00-10:20 Coffe Break

10:20-10:50 Palestra: Tecnologias microfluídicas e aplicações em sensores.

Palestrante: Prof. Dr Marcos Vinicius Dias Vermelho (UFAL)

11:00-11:30 Palestra: Tecnologia de Nanofibras por SolutionBlowSpinning e

Aplicações.

Palestrante: Prof. Dr Eliton Souto de Medeiros (UFPB)

11:40-12:10 Palestra: Soluções em citometria de fluxo para análise de

nanopartículas.

Palestrante: Misael Silva (Especialista de aplicação da MERCK)

12:00-14:00 Intervalo (Almoço)

14:00-14:30 Palestra: Hidrogéis, Nanopartículas de Albumina e Papaína e

Aplicações.

Palestrante: Prof. Dr Ademar Benévolo Lugão (IPEN)

14:40-15:10 Palestra: Desenvolvimento de nanocristais e suas diversas

aplicações.

Palestrante: Profa. DraAnielle Christine Almeida Silva (UFU)

15:20-15:50 Palestra: Biologia Molecular e Computacional de Fungos e suas

Aplicações em Nanotecnologia.

Palestrante: Prof. Dr Aristóteles Góes-Neto (UFMG)


16:20-16:50 Palestra: Aplicações da Nanofotônica: Novas Nanopartículas para

Imagem Fototérmica In Vivo.

Palestrante: Prof. Dr Carlos Jacinto da Silva (UFAL)

17:00-17:30 Palestra: Sistemas Nanoestruturados para a Administração de

Fármacos e Cosméticos.

Palestrante: Profa. Dra Silvia Stanisçuaski Guterres (UFRGS)

17:30-18:00 Palestra: Desenvolvimento de Aptâmeros para o Controle da

Dengue.

Palestrante: Prof. Dra Adriana Freitas Neves (UFG)

18:00-18:30 Palestra: Desenvolvimento de peptídeos miméticos de antígenos

de M. leprae e novas plataformas diagnósticas.

Palestrante: Prof. Dra Mayara Ingrid de Sousa Lima (UFMA)

18:30-20:30Happy hour/ Apresentação dos trabalhos

Dia 05.07.2018

8:00-8:30 Palestra: Engenharia de Bactérias Láticas: probióticos inovadores.

Palestrante: Prof. Dr Vasco Ariston de Carvalho Azevedo (UFMG)

8:40-9:10 Palestra: Aplicações da tecnologia de FT-IR como plataforma

diagnóstica.

Palestrante: Prof. Dr Robinson Sabino Silva (UFU)

9:20-9:50 Palestra: Esportômica: construindo um novo conceito de estudo

metabólicos e ciências de exercícios.

Palestrante: Prof. Dr Luiz Cláudio Cameron (UNIRIO)


10:20-10:50 Palestra: Aplicações biomédicas de polímeros biorreabsorvíveis

na engenharia tecidual.

Palestrante: Profa. Dra Eliana Aparecida de Rezende Duek (UFSCAR)

11:00-11:30 Palestra: Pericitos na encruzilhada entre doença e regeneração

tecidual.

Palestrante: Prof. Dr Alexander Birbrair (UFMG)

11:40-14:00 Intervalo (Almoço)

14:00-14:30 Palestra: A Genética Forense a serviço do Direito de Família.

Palestrante: Profa. Dra Regina Maria Barretto Cicarelli (UNESP)

14:40-15:10 Palestra: Desenvolvimento de plantas transgênicas resistentes a

viroses.

Palestrante: Prof. Dr. Flávio TetsuoSassaki (UFU - Monte Carmelo)

15:20-15:50 Palestra: Biotecnologias de reprodução assistida e o melhoramento

genético animal.

Palestrante: Prof. Dr Maurício Machaim Franco (EMBRAPA)


16:20-16:50 Palestra: Biorremediação de solo contaminado.

Palestrante: Prof. Dr Juliano de Carvalho Cury (UFSJ)

17:00-17:30 Palestra: Biologia sintética.

Palestrante: Profa. Dra Danielle BiscaroPedrolli (UNESP)

Dia 06.07.2018

Minicursos

Premiações e Encerramento

Minicursos Minicurso 1: Manipulação de animais de laboratório: Aspectos

comportamentais e influência do manejo na pesquisa (teórico com visita

técnica)

Ministrante: MsC. Taísa Carrijo de Oliveira Camargos

Local: Sala 8C 305 com visita ao Centro de Bioterismo e

Experimentação Animal

Vagas: 15

Minicurso 2: Conceitos Fundamentais em Modelagem de Proteínas –

Bioinformática (Teórico-Prático)

Ministrante: Prof. Dr. Nilson Nicolau Junior

Local: Ilha Digital – Bloco 8C

Vagas: 20

Minicurso 3: Aspectos morfológicos crânio cervicais gerais e indiciários para

análises periciais - Ciências Foreses (Prático)

Ministrante: Prof. Dr. Roberto Bernardino Junior

Local: Laboratório de Anatomia – Bloco 2A

Vagas: 15

Minicurso 4: Mutagênese experimental em Drosophila (Prático)

Ministrante: Prof. Dr. Mário Spanó

Local: Laboratório Multidisciplinar ICBIM – 2B 130

Vagas: 15

Minicurso 5: Expressão heteróloga de proteínas em bactérias (Prático)

Ministrante: Dra. Fabiana de Almeida Araújo Santos

Local: Laboratório de Ensino Biotecnologia – Bloco 6P

Vagas: 20

Minicurso 6: Comunicação Científica e Apresentação Científica (Teórico)

Ministrante: Prof. Dr. Luiz Carlos Oliveira Junior

Local: Sala 8C 216

Vagas: 30

Minicurso 7: Biotecnologia vegetal: avanços e aplicações (Teórico)

Ministrante: Profa. Dra. Hebréia Oliveira Almeida Souza e MsC. Jéssica

Brito de Souza

Local: Sala 8C 217

Vagas: 30

Minicurso 8: Espectrometria de massa aplicada à análise metabolômica

(Teórico)

Ministrante: Profa. Dra. Raquel Maria Ferreira de Sousa (Inst. Química)

Local: Sala 8C 219

Vagas: 30

Minicurso 9: Edição de genomas com enfoque em CrisPR/CAS9 (Teórico)

Ministrante: Profa. Dra. Ana Maria Bonetti e MsC. Tamiris Sabrina

Rodrigues

Local: Sala 8C 307

Vagas: 30

Minicurso 10: Sequenciamento de DNA de última geração (Teórico)

Ministrante: MsC. Emília Rezende Vaz e Dra. Patrícia Tiemi Fujimura

Local: Sala 8C 308

Vagas: 30

Minicurso 11: Detecção de biomarcadores em biópsia líquida (Teórico)

Ministrante: MsC. Aline Gomes de Souza

Local: Sala 8C 309

Vagas: 30

ANAIS

RESUMOS SIMPLES

ÁREA I: BIOINFORMÁTICA

ANÁLISE IN SILICO DA ATIVIDADE ANTIVIRAL DE PEPTÍDIOS DERIVADOS

DA PROTEINA DE FUSÃO DO ENVELOPE DO VÍRUS RESPIRATÓRIO SINCICIAL

SUBGRUPO A

Elcana Werneck Pádua de Sousa1; Felipe Belagamba Joffily de Souza1; Willow de Moura

Candeias1; Guilherme Ramos Oliveira e Freitas1

1 Laboratório de Microbiologia, Universidade Federal de Uberlândia, Campus Patos de Minas, Patos de Minas,

MG. E-mail do autor correspondente: [email protected]

O vírus respiratório sincicial (VRS) é o principal responsável por infecções respiratórias

agudas (IRAs) em crianças contribuindo para a morbidade e mortalidade infantil. Até o momento,

não existe vacina, e o único fármaco disponível é utilizado apenas em pacientes considerados de

alto risco. A pesquisa e o desenvolvimento de peptídeos com atividade antiviral (AVPs) é uma

opção atrativa para o tratamento de infecções virais, incluindo as IRAs. Assim, o objetivo deste

estudo foi a análise in silico de AVPs derivados da proteína de fusão (F) do VRS A. Foram obtidas

57 sequências de nucleotídeos do gene F e suas respectivas sequências proteicas de diferentes cepas

depositadas no GenBank (NCBI). Utilizando a ferramenta CAP3 Sequence Assembly Program foi

realizada uma série de alinhamentos múltiplos progressivos para a identificação de regiões

conservadas nas sequências de nucleotídeos e para obter as sequências consenso. As regiões

conservadas das sequências consenso da proteína F do VRS A foram inseridas nos servidores

AVPpred e AVP-IC50pred para a predição dos AVPs. Sequências de peptídeos com resultados

>50% nos modelos de características físico-químicas e composição de aminoácidos foram

considerados prováveis AVPs e foram selecionados para a modelagem da estrutura 3D, com o

software PEP-FOLD. No total, foram obtidas 7 sequências consenso, cujas regiões conservadas

originaram 41 prováveis AVPs. Dentre esses, oito AVPs são inéditos, ou seja, nunca haviam sido

descritos na literatura. As análises do IC50, baseadas na composição de aminoácidos e nas

propriedades físico-químicas dos AVPs variam de 0,05 a 2,28 µM e de 0,01 a 3,39 µM,

respectivamente. A partir dos resultados das análises in silico, os 8 AVPs foram apontados como

efetivos contra o VRS A. Assim, a estratégia aqui apresentada pode ser uma alternativa para a

triagem de AVPs contra o VRS e outros paramixovírus respiratórios, reduzindo custos e tempo de

experimentação.

Palavras-chave: infecções respiratórias agudas, peptídeos com atividade antiviral, VRS A.

Apoio financeiro: UFU.

ANÁLISE DA ORDEM DE UTILIZAÇÃO DE NANOPARTÍCULAS DE ZnO EM

IMUNOSSENSOR DE AMILASE SALIVAR HUMANA

Tainá Marques Sampaio*1, Ana Karoline Silva Rocha de Farias1, Beatriz Rodrigues Martins2,

Anielle Christine Almeida Silva3, Noelio Oliveira Dantas3, Foued Salmen Espindola4, Renata

Roland Teixeira4, Renata Pereira Alves Balvedi1.*E-mail: [email protected];

1Laboratório de Nanobiossensores, UFTM- Campus Iturama; 2Programa de Pós-Graduação em Ciências

Fisiológicas, UFTM-Uberaba; 3Instituto de Física-INFIS- UFU, Uberlândia; 4Instituto de Genética e Bioquímica –

UFU, Uberlândia

As nanopartículas que possuem composição específica na transferência de elétrons entre as

biomoléculas e/ou superfície dos eletrodos de biossensores. O sinal biológico convertido em sinal

elétrico, possibilita a quantificação e na detecção de doenças. A alfa-amilase salivar humana

(HSA), encontrada em maior concentração na saliva secretada pela glândula parótida, é usada como

indicador de stress físico/psicológico, esquizofrenia, depressão, distúrbio cardiovascular, Diabetes

Mellitus tipo II, Síndrome de Down, Câncer oral, entre outras doenças. Sendo assim, o biossensor

possui aplicação diagnóstica e de monitoramento das fisiopatologias em questão. A pesquisa

avaliou eletroquimicamente a interação da nanopartículas de óxido de zinco com Cobre (ZnO:4 Cu)

com biomoléculas anti-amilase (HSA-anti) em biossensor. As soluções foram preparadas em água

MilliQ, solução de ferri/ferrocianeto de potássio e KCl (5 mmol L-1 - 0,1 mol L-1). Foram

utilizadas amostras reais de amilase salivar humana (HSA), coletadas com aprovação do CEP UFU.

As análises eletroquímicas foram realizadas pelo potenciostato EmStat1 (PalmSens) por

voltametria cíclica. Os eletrodos selecionados foram os de grafite (DPR-110, DropSens) para

imobilização da alfa amilase salivar (0,00186 mg. mL-1) por adsorção, caseína (0,7 g. ml-1) como

solução bloqueio, sendo a análise da interação da NPs ao anticorpo permitiu avaliar e concluir que

o processo de reconhecimento ocorre especificamente. Os resultados demonstraram que HSA-anti,

caseína e nanopartícula apresenta a condutividade referência do imunosensor, sendo que a HSA

promove redução na condutividade após acoplamento. Nos testes efetuados alterando a ordem da

HSA (antes ou depois da nanopartícula) revelaram que ordem HSA e após ZnO4Cu apresenta

melhor condutividade em 62,9%. Com esse trabalho podemos concluir que as NP além de

influenciarem a condutividade eletroquímica estas interagem de forma particular com as

biomoléculas.

Palavras Chave: Imunosensor, anti-amilase, alfa-amilase.

DESENVOLVIMENTO DE UM BIOELETRODO MULTIPLEX ESPECÍFICO PARA

STAPHYLOCOCCCUS AUREUS

Rafaela Cristina dos Santos Peres1; José Manoel Flauzino Rodrigueiro1; Lizandra Ferreira de

Almeida e Borges2; João Marcos Madurro1; Ana Graci Brito-Madurro1

1Laboratório de biossensores, Instituto de Biotecnologia, Universidade federal de Uberlândia, Uberlândia, MG;

2Instituto de Ciências biomédicas - Microbiologia, Universidade Federal de Uberlândia, MG; E-mail:

[email protected]

A detecção rápida e precisa de Staphylococcus aureus em alimentos contaminados é de grande

importância para a segurança alimentar e nutricional, visto que a Staphylococcus aureus é o terceiro

patógeno que mais causa doenças no Brasil. Sendo assim, este trabalho teve como objetivo

construir um bioeletrodo mutiplex para a detecção desta bactéria. Eletodos de grafite modificados

com um nanocompósito de óxido de grafeno reduzido e poli(ácido 3-hidroxibenzoíco) foram

usados como eletrodo de trabalho, fio de platina como contra-eletrodo e Ag/AgCl como eletrodo de

referência. Dois oligonucleotídeos específicos para regiões distintas do gene NUC, denominados

STAP A1 e STAP B1, foram utilizados como sondas. A imobilização foi feita gotejando-se

soluções de sonda (STAP A1 ou STAP B1 ou STAP A1 + STAP B1), com o objetivo de verificar a

melhor plataforma para o desenvolvimento do bioeletrodo. A técnica de voltametria de pulso

diferencial foi utilizada para a detecção dos oligonucleotídeos imobilizados, medindo-se a carga de

oxidação do resíduo de base nitrogenada guanina. Foi verificado uma carga média de 861 mC, 1243

mC e 1115 mC para STAP A1, STAP B1 e multiplex respectivamente. Apesar da redução de carga

de cerca de 11%, a plataforma multiplex apresentou melhor reprodutibilidade com valor inferior de

desvio padrão, quando comparado a plataforma STAP B1. Além disso, a plataforma multiplex

permite a detecção simultânea de regiões distintas do genoma da bactéria, contornando eventuais

mutações nessas regiões. Sendo assim, a plataforma multiplex mostrou-se mais eficiente para o

desenvolvimento futuro de um biossensor para a detecção de Staphylococcus aureus, visando o

controle de qualidade do alimentos.

Palavras-chave: Bioeletrodo, Mutiplex, Staphylococcus aureus.

Fomento e/ou Agradecimentos: Fapemig, CAPES, CNPq e Rede Mineira de Química.

AVALIAÇÃO DA PRODUÇÃO DE PROTEASE DE Aspergillus terreus VSP-22 POR

FERMENTAÇÃO EM ESTADO SÓLIDO

Sabrina Laís Bispo Magalhães1, Nathiele Contrera Gimenes2, Ubirajara Coutinho-Filho3, Elias

BasileTambourgi2, Edgar Silveira Campos1

1Instituto de Biotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia-MG; 2Faculdade de Engenharia

Química, Universidade Estadual de Campinas, Campinas-SP; 3Faculdade de Engenharia Química, Universidade

Federal de Uberlândia, Uberlândia-MG. E-mail: [email protected]

As proteases, enzimas hidrolíticas, desempenham papel fundamental em processos como

diferenciação e morte celular, além de serem amplamente aplicadas em indústrias catalíticas e

farmacêuticas. O objetivo do trabalho foi avaliar a produção da protease de Aspergillus terreus

VSP-22 por fermentação em estado sólido (FES) e, analisar o congelamento como método de

armazenamento do extrato enzimático. Inicialmente, a protease foi produzida por FES, utilizando

erlenmeyers de diferentes capacidades: 125, 250 e 500 mL. Todos os meios continham farelo de

arroz em 50% de umidade, sendo os primeiros em menor volume (10 g de farelo de arroz e 10 mL

de células ressuspendidas) e, o último, com quantidade 10 vezes maior. Após 72 h de fermentação,

em temperatura ambiente, obteve-se o extrato enzimático, o qual foi submetido a atividade

proteolítica e determinação de proteínas totais. O extrato da melhor condição da FES foi

armazenado à -4 °C e o teste de congelamento realizado por 40 dias. Avaliou-se o congelamento

como método de armazenamento e, a capacidade da protease em suportar estresses térmicos de

congelamento/descongelamento. A avaliação da FES demonstrou que a fermentação em

erlenmeyers de 250 mL foi mais eficiente, atingindo maiores atividade proteolítica (12,50 U/mL) e

proteínas totais (0,6046 mg/mL). O aumento da escala de fermentação resultou em baixa produção

de protease (3,11 U/mL). Assim, a FES utilizando 10 g de substrato em erlenmeyer com capacidade

de 250 mL foi escolhida para obtenção de extrato enzimático. O teste de congelamento evidenciou,

após 2º dia, uma redução da atividade em 8,56%. Já a análise congelamento/descongelamento

resultou perda de 7,68% no 14º dia. Logo, o congelamento não afetou significativamente a protease

e confirmou ser eficaz para o armazenamento do extrato. Conclui-se que as análises foram

fundamentais para padronizar as condições de cultivo e armazenamento da protease de Aspergillus

terreus VSP-22, para futuros estudos de imobilização.

Palavras-Chave: Protease, Fermentação em Estado Sólido, Congelamento.

Fomento: CNPq, CAPES.

mailto:[email protected]

AVALIAÇÃO DO POTENCIAL DA MICROALGA Spirulina platensis NO

TRATAMENTO DE EFLUENTES

Tamires de Almeida Pires¹; Vicelma Luiz Cardoso¹; Fabiana Regina Xavier Batista¹

¹Faculdade de Engenharia Química, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia/MG. E-mail:

[email protected]

Nos últimos anos, estudos têm sido realizados para avaliar o potencial das microalgas em

produzir diversos produtos de alto valor comercial, como proteína, clorofila, lipídeos e

carboidratos. Além disso, esses microrganismos possuem elevada capacidade de biossorção de

componentes presentes no meio em que são cultivadas, podendo diminuir, dessa forma, a carga

orgânica, além de metais pesados. Devido à fácil manutenção e ampla aplicação, a produção desses

indivíduos tem sido bastante visada. Sendo assim, o presente estudo teve como objetivo avaliar a

remoção de carbono, nitrogênio e fósforo por ação da microalga Spirulina platensis, bem como a

produção de metabólitos. O cultivo da microalga foi realizada em meio Zarrouk. Os ensaios

partiram de uma concentração algal inicial de 0,1 g/L, sendo medido ao longo dos dias a densidade

celular, a quantidade de carbono, nitrogênio e fósforo do meio e o acúmulo de clorofila e proteína.

Houve um aumento de biomassa no período avaliado, atingindo a uma concentração de 0,59 gSV/L

no 12º dia. A Spirulina platensis foi capaz de remover 70,9% de nitrogênio, 24,6% de carbono total

e 14% de fósforo do meio. Durante os 12 dias o teor de clorofila presente na microalga passou de

1,82 para 5,44 mg/L, um aumento de 299%. Além disso, obteve-se uma concentração de 317,32

mg/L de proteína no meio, o que equivale a 53,7% da biomassa. Dessa forma, demonstrou-se que

esse microrganismo foi capaz de remover quantidades significativas dos nutrientes analisados, fato

que indicou seu potencial como agente de transformação no tratamento de efluentes para a remoção

de carga orgânica. Além disso, a Spirulina platensis acumulou clorofila e alto teor de proteína total.

Palavras-chave: Microalga, Spirulina platensis, Tratamento de efluentes.

Agradecimentos: Cnpq e Fapemig.

PREDIÇÃO DE ALVOS FUNCIONAIS NA HEMAGLUTININA POR REGRESSÃO

LOGÍSTICA

Gustavo Santos de Oliveira1; Marcos Augusto dos Santos2 1Instituto de Ciências Biológicas, Universidade Federal de Minas Gerais, Belo Horizonte, MG; 2Instituto de

Ciências Exatas, Universidade Federal de Minas Gerais, Belo Horizonte, MG; E-mail: [email protected]

O vírus da Influenza A é responsável por diversos problemas de saúde. A hemaglutinina é uma

das principais proteínas responsável pela entrada do vírus na célula. Tratamentos contra a infecção

tem sido um desafio, devido à alta taxa evolutiva dessas proteínas. Nesse contexto, foi aqui

proposta uma nova metodologia, capaz de identificar resíduos conservados, associados à

hemaglutinina, por meio da técnica de regressão logística. As sequências proteicas da

hemaglutinina de 5466 estirpes do vírus H5N1, um tipo altamente patogênico, e 259 do vírus

H2N3, menos patogênico, foram extraídas da base UNIPROT. O modelo foi construído utilizando

o MATLAB®, a partir da criação de uma janela deslizante, capaz de contabilizar a frequência de

todos os tripletos de resíduos de cada sequência. A matriz contendo todos os possíveis tripletos de

todas as sequências foi submetida à técnica de Decomposição de Valores Singulares (SVD) para

homogeneização e amostragem, e a análise de regressão logística executada, a fim de encontrar os

tripletos associados com o possível aumento do efeito patogênico da hemaglutinina. Essa

metodologia permitiu a detecção de regiões críticas, aparentemente, associadas à atividade

patogênica da proteína. Esse foi o caso do motif RRKKR, localizado no interior de um laço

conectivo entre as subunidades HA1 e HA2 e conhecido alvo proteolítico para ativação da

hemaglutinina. Também, destacou-se a prevalência do tripleto SII, localizado no interior de uma

alfa-hélice, na subunidade HA2, associado à estabilização da conformação da proteína, quando

submetida a alterações de pH. Outras regiões de destaque foram os resíduos SNEQG, localizado na

porção carboxiterminal de HA2 e responsável pela indução de poros na membrana, e KIA,

localizado em uma região de folhas beta e associada à estabilização da proteína em ambientes

acidicos. Em conclusão, essa abordagem foi capaz de predizer regiões chave, associadas aos

mecanismos de ação da hemaglutinina.

Palavras-chave: hemaglutinina, influenza, regressão logística.

Agradecimentos: Fapemig.

TRIAGEM VIRTUAL NA BUSCA DE POTENCIAIS INIBIDORES DA PROTEÍNA

TRANSPORTADORA DE SEROTONINA SÓDIO-DEPENDENTE HUMANA (SERT)

Danilo Caixeta Moreira1; Ian Faria Paniago1; Nilson Nicolau Junior1. 1Laboratório de Modelagem Molecular, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, MG. E-mail do autor

correspondente: [email protected]

Os inibidores de recaptação de serotonina são fármacos usados em transtornos de ansiedade,

tais como o Transtorno de Ansiedade Generalizada, Transtorno de Estresse Pós-Traumático, no

Transtorno Obsessivo-Compulsivo e na Depressão. Os fármacos disponíveis atualmente causam

diversos efeitos adversos, isso faz com que muitos pacientes desistam do tratamento. Neste trabalho

foram usados métodos computacionais em descobrimento de fármacos visando a busca de novas

moléculas com potencial de inibição da SERT. Para tanto, foram usados bancos de dados de

compostos da empresa ChemBridge (CL e EXP) juntamente com os bancos de dados do NuBBE e

ZINC, os quais, foram filtrados para retirar as moléculas que não possuíam propriedades

farmacológicas e, posteriormente, confôrmeros foram gerados para cada uma. Existem 14

moléculas atualmente utilizadas como antidepressivos, estas foram usadas para produzir

alinhamentos, visando a geração de um modelo baseado em forma. Este modelo foi usado na

triagem virtual in silicodas moléculas dos bancos de dados com intuito de encontrar aquelas que

possuem características estruturais e biofísicas similares aos dos antidepressivos já existentes. Para

validação do modelo baseado em forma, foi utilizado o programa vROCS, o qual gerou um gráfico

(ROC) que indica a capacidade do modelo de selecionar moléculas ativas contra a SERT. O modelo

realizado com o alinhamento gerou uma pontuação de 0,95, sendo o mínimo esperado para um bom

modelo o valor de 0,8. Assim, os bancos de dados já tratados foram triados pela técnica de triagem

virtual (programa vROCS) utilizando o modelo baseado em forma previamente gerado. O resultado

da triagem foi ranqueado, sendo selecionado os 500 melhores compostos de cada banco. Na

próxima fase os compostos selecionados na triagem serão submetidos a ancoragem molecular.

Palavras-chave: antidepressivo, docking molecular, SERT.

A TRIAGEM VIRTUAL E SEU USO NA BUSCA DE INIBIDORES DA PROTEÍNA

ESTEROL 14-ALFA DESMETILASE

João Gabriel Oliveira Miceli1; Lucas de Oliveira Carneiro1; Nilson Nicolau Junior1 1Laboratório de bioinformática, Instituto de Genética e Bioquímica, Universidade Federal de Uberlândia. E-mail:

[email protected]

As leishmanioses são doenças infecto-parasitárias causadas por protozoários do gênero

Leishmania e da família Trypanosomatidae. Devido a alta taxa de mortalidade dessa doença, em

conjunto com o fato de que os tratamentos atualmente disponíveis para a sua terapia estarem

relacionados com muitos efeitos colaterais, além de um esquema terapêutico complexo, de alto

custo e que, por vezes, pode resultar na não cura da doença (visto que tem sido observado o

aumento do surgimento de cepas resistentes), é fato que a busca por tratamentos melhores é

necessária. A partir daí, foi tomada a decisão de buscar novos possíveis inibidores da proteína

esterol 14-alfa desmetilase (CYP51) por meio de métodos computacionais na busca de novos

fármacos. Foram preparados e usados os bancos de dados comerciais e não comerciais do NuBBE,

ZINC, Chembridge sendo que estes foram filtrados para características de drogas (druglikeness) e

confôrmeros espaciais foram gerados. A estrutura do fluconazol, o inibidor mais utilizado e

conhecido da CYP51, foi obtida nos bancos de dados do PDB. Por meio do programa vROCS um

modelo baseado na forma do fluconazol foi gerado visando a busca de compostos com semelhança

estrutural e biofísica a esta droga. Uma análise da seletividade do modelo para a seleção de

compostos ativos nos bancos de dados foi gerada e o resultado, 0,8098, permitiu validar o modelo

como adequado para a triagem virtual. Com base nessa pontuação, os bancos de dados foram

triados pela técnica de triagem virtual in silico (vROCS) para determinar as moléculas que possuem

características semelhantes ao fluconazol. Os melhores 500 compostos de cada banco foram

selecionados durante a triagem sendo que estes serão submetidos, em uma próxima fase, à

ancoragem molecular.

Palavras chave: Fluconazol, CYP51, Leishmaniose.

ÁREA II: BIOTECNOLOGIA AMBIENTAL

AVALIAÇÃO DO pH DO PROCESSO DE COAGULAÇÃO/FLOCULAÇÃO DE SORO

DE QUEIJO BRUTO UTILIZANDO SEMENTE DE MAMÃO

Raissa Araújo de Oliveira Campos1; Lucas Vinícius Batista Ferreira1; Amanda Carmelo da

Rocha1; Vicelma Luiz Cardoso1; Patrícia Angélica Vieira1 1Laboratório de Biotecnologia da Faculdade de Engenharia Química, Universidade Federal de Uberlândia,

Uberlândia, MG. E-mail: [email protected]

O pré-tratamento por coagulação/floculação de soro de queijo de alta turbidez e carga orgânica

permite a redução desses parâmetros favorecendo posteriores processos de tratamento físico-

químico e biológicos. O objetivo do presente trabalho foi determinar o efeito do pH no processo de

coagulação/floculação do efluente de soro de queijo bruto (tipo ricota) empregando um coagulante

natural, semente de mamão, gerado como resíduo doméstico. A coleta do efluente foi realizada em

uma indústria de laticínios localizada na cidade de Uberlândia/MG. A caracterização desse efluente

foi realizada segundo turbidez (unidades nefelométricas), demanda química de oxigênio em g/L,

carbono orgânico total em g/L e pH. O coagulante natural empregado foi a semente de mamão

Carica papaya processada, na concentração de 1 g/L. Os valores de pH avaliados foram de 8,3

(conforme a literatura), 10 e 12. As respostas acompanhadas foram em redução dos parâmetros de

turbidez, DQO e COT. Os testes foram realizados em Jar-test a uma agitação intermitente de 6

ciclos de 15 minutos de agitação a 10 rpm e 45 minutos de repouso. Os valores iniciais obtidos de

turbidez, DQO, COT e pH do efluente foram 1.000 UNT, 56,2 g/L, 21,04 g/L e 3-4,

respectivamente. Ao realizar o processo de coagulação/floculação do efluente em pH 8,3 os

resultados de redução de turbidez, DQO e COT não foram satisfatórios. Em pH 10 obteve-se

reduções de 64,1% de turbidez, 9,6% de DQO e 7,5% de COT, e pH final 8,5. Em pH 12 obteve-se

reduções de 79,2% de turbidez, 11,5% de DQO e 10,7% de COT, e pH final de 10. A formação de

flocos coagulados foi observada em todos os testes, entretanto, a sedimentação somente ocorreu nos

processos de coagulação/floculação em pH 10 e 12. Assim, pôde-se concluir, que a utilização de

maiores valores de pH proporcionou maior eficiência da coagulação/floculação do soro de queijo

bruto. Estes resultados mostram a potencial aplicação da semente de mamão como coagulante de

efluente de soro de queijo bruto.

Palavras-chave: pH, Tratamento de Efluente, Soro de queijo.

Fomento e/ou Agradecimentos: Cnpq e Fapemig.

AVALIAÇÃO DO PRÉ-TRATAMENTO DE EFLUENTE GERADO NA INDÚSTRIA

LÁCTICA EMPREGANDO COAGULANTES NATURAIS: QUITOSANA E TANFLOC

Amanda Carmelo da Rocha1; Vicelma Luiz Cardoso1; Patrícia Angélica Vieira1 1Laboratório de Biotecnologia da Faculdade de Engenharia Química, Universidade Federal de Uberlândia,


Dentre os coagulantes naturais destaca-se a quitosana obtida a partir de cascas de animais

marinhos e o emprego de taninos, como o Tanfloc, derivados de vegetais. Assim, neste trabalho

determinou-se a eficiência dos agentes coagulantes quitosana e Tanfloc no processo de

coagulação/floculação de efluente de indústria láctica. Foi realizada a coleta do efluente de uma

indústria de laticínios localizada em Uberlândia/MG e sua caracterização foi realizada em termos

de turbidez em unidades nefelométricas de turbidez, demanda química de oxigênio (DQO) em g/L e

pH. As concentrações iniciais empregadas de quitosana em pó (POLIMAR) e Tanfloc SG em pó

(TANAC) foram 265 mg/L e 315 mg/L como testes iniciais (Experimento 1). Posteriormente, foi

avaliado o efeito da redução das concentrações destes agentes coagulantes em 25 e 50 mg/L

(Experimentos 2 e 3). Após o ajuste do pH para 8,3 realizou-se os testes em Jar-test a uma agitação

intermitente de 6 ciclos de 15 minutos de agitação a 10 rpm e 45 minutos de repouso. A turbidez,

DQO e pH do efluente inicial apresentaram valores de: 1.000 UNT, 3,713 g/L e 3,5–4,5,

respectivamente. As reduções de turbidez e DQO resultante do emprego da quitosana como

coagulante no Exp. 1 foram de 87% e 75%, no Exp. 2 de 38% e 38%, e no Exp. 3 de 19% e 34 %,

respectivamente. Já os valores de reduções de turbidez e DQO resultante do emprego do Tanfloc

como coagulante no Exp. 1 foram de 99% e 76%, no Exp. 2 de 99% e 70% e no Exp. 3 de 98% e

61 %, respectivamente. Após a realização dos ensaios o pH atingiu a neutralidade. Com estas

avaliações prévias em relação ao tipo de coagulante natural aplicado e concentração de coagulante,

verificou-se que o Tanfloc foi o mais eficiente no processo de coagulação/floculação por promover

maiores reduções nos valores de turbidez e DQO em menor concentração avaliada de 215 mg/L.

Isto demonstra sua potencialidade no processo de coagulação/floculação como pré-tratamento de

efluentes gerados da indústria láctea avaliada.

Palavras-chave: Tratamento de Efluente, Quitosana, Tanfloc.

Fomento e/ou Agradecimentos: Cnpq e Fapemig.

INFLUÊNCIA DO PH E DA CONCENTRAÇÃO DE BIOSSURFACTANTE NA

REMOÇÃO DE CROMO DE MEIO AQUOSO UTILIZANDO FLOTAÇÃO POR AR

DISSOLVIDO

Olga Silva Santos1; Ana Luísa Velludo Fugeiro¹; Maria Paula Virgilio Damis¹; Miriam Maria

de Resende1; Vicelma Luiz Cardoso1 1Laboratório do Núcleo de Biotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, MG. E-mail do autor

correspondente: [email protected]

O setor industrial, em sua maioria, apresenta como característica o uso de grandes volumes de

água e metais pesados em seus processos, gerando efluentes líquidos com concentrações

preocupantes destes metais, dentre os quais destaca-se o cromo. Tal elemento em seu estado

hexavalente apresenta alta toxicidade e propriedades carcinogênicas, necessitando, assim, de

tratamento para sua remoção. São várias as técnicas empregadas para este fim, sendo que a flotação

por ar dissolvido (FAD) tem sido muito utilizada por apresentar diversas vantagens. Para isso,

vários fatores são estudados a fim de que a operação ocorra em condições otimizadas. Sendo assim,

o trabalho apresentou como objetivo analisar a influência do pH e da concentração de

biossurfactante no processo de flotação do cromo. Foi realizada a produção de biossurfactante a

partir de Pseudomonas aeruginosa 10145 por meio de fermentação durante 48h em uma mesa

agitadora a 30,0 ± 1,0 ºC e 120 rpm, utilizando melaço de soja a 120g/L como substrato. A

avaliação da produção de biossurfactante foi feita resultando nas análises: tensão superficial de

33,21 mN/m, índice de emulsificação de 100% e concentração de biossurfactante de 8,55 g/L. Os

ensaios de flotação foram realizados a fim de verificar a influência da concentração de

biossurfactante (9 e 4,5 g/L) e do pH (4 e 6) para uma concentração inicial de cromo (VI) de 100

mg/L em efluente sintético. Os melhores resultados para remoção de cromo (VI) e cromo total

foram obtidos em pH 4 e concentração de biossurfactante de 9 g/L, sendo igual a 59,02% e 39,20%,

respectivamente, sendo que em valores menores de pH ocorre a redução de Cr (VI) para Cr (III), o

que contribui para a remoção da forma hexavalente do meio. Os resultados obtidos apontam um

potencial do biossurfactante e da FAD na remoção de cromo de soluções aquosas, sendo necessário

um estudo mais afundo, em etapas futuras, a fim de otimizar as condições e melhorar a eficiência

do processo.

Palavras-chave: Cromo, biossurfactante, flotação por ar dissolvido.

Fomento e/ou Agradecimentos: CNPq, FAPEMIG, CAPES e NUCBIO.

AVALIAÇÃO DAS CONDIÇÕES INICIAIS DE BIOLIXIVIAÇÃO DE BATERIAS DE

ÍONS DE LÍTIO POR FUNGO

Leonardo Masin Mesquita1; Luis Henrique dos Reis Menêzes1; Vicelma Luiz Cardoso1;

Miriam Maria de Resende1; Juliana de Souza Ferreira1 1NUCBIO– Núcleo de Processos Biotecnológicos, Universidade Federal de Uberlândia, Campus Santa Mônica,


O consumo de celulares aumenta paralelamente à evolução tecnológica, que acaba gerando um

alto volume de resíduos eletrônicos, como as baterias de íons de lítio (LIBs), que prejudicam o

meio ambiente e a saúde humana e, além disso, são fontes secundárias de metais valiosos como

lítio e cobalto.Nos processos pirometalúrgicos aplicados para recuperação de metais, há emissãode

gases poluentes, alto gasto energéticoe não é possível recuperar o Li.Como método alternativo,

tem-se a utilização de microrganismos na solubilização desses resíduos. O presente trabalho avaliou

a condição inicial para a biolixiviação pelo Penicilliumoxalicum, ao se testar diferentes substratos:

a dextrosee permeado do soro do leite (PSL), como fonte de lactose.Os ensaios foram realizados em

erlenmeyers de 250 mL, utilizando um volume de 100 mL de meio líquido sintético modificado(pH

5,5)e 1 mL do inóculo (107 esporos/mL). Avaliou-se a adaptaçãodo fungo nas concentrações de

açúcar 10, 30, 50, 75 e 100 g/L e ao final de 4 dias fez-seanálises de consumo do substrato e

produção de ácidos orgânicos por HPLC,de pH e de concentração celular. O pH do meio utilizando

dextrose atingiu um valor final de aproximadamente 2,5, enquanto o do meio com PSL finalizou

em torno de 7,1. Ambos os meios aumentaram a concentração celular com a maior oferta do

substrato, entretanto, com permeado na concentração de 100 g/L obteve um valor 59% maior,

sendo de 10,3gsv/L. Houve um consumo maior de dextrose do que do permeado ao longo dos 4

dias. Com relação à produção de produção de ácidos orgânicos, ácido oxálico e cítrico, foram

identificados em ambos os meios, sendo que no meio com PSL a concentração dos ácidos foi

concentração maior, indicando um meio com maior potencial para ser usando na biolixiação de

LIBs pelo P. oxalicum. Além disso, o uso do permeado do soro do leite, que é um coproduto da

indústria láctea, podendo ser integrado como matéria-prima de baixo custo no processo de

biolixiviação.

Palavras-chave: biolixiviação – permeado do soro do leite – lítio – cobalto.

Fomento e/ou Agradecimentos: Capes, CNPq e Fapemig.

PRODUÇÃO DE MEIO LIXIVIANTE RICO EM ÁCIDO LÁCTICO ATRAVÉS DA

FERMENTAÇÃO PARA RECUPERAÇÃO DE METAIS DE BATERIAS DE ÍONS DE

LÍTIO

Guilherme Henrique da Silva Moura1; Luis Henrique dos Reis Menêzes1; Vicelma Luiz

Cardoso1; Miriam Maria de Resende1; Juliana de Souza Ferreira1

1NUCBIO– Núcleo de Processos Biotecnológicos, Universidade Federal de Uberlândia, Campus Santa Mônica,


A procura por meios eficientes e sustentáveis de recuperação de metais pesados se intensificou

nos últimos anos devido ao crescente uso de baterias de íons de lítio. Um dos métodos estudados é

a hidrometalurgia que se baseia na lixiviação dos metais por meio ácido ou básico, apresentando

alta eficiência na recuperação desses resíduos, mas usa alta quantidade de reagentes de elevado custo e gera efluentes

indesejados. Assim, a fim de minimizar as desvantagens, foi proposta a utilização de um efluente de

fermentação rico em ácidos orgânicos que são biodegradáveis, reduzindo os impactos causados por

ácidos inorgânicos. O objetivo desse trabalho foi produzir um meio lixiviante obtido por

fermentação rico em ácido láctico utilizando consórcio microbiano em um processo de batelada

com ciclos de alimentação da fonte de carbono, que foi o permeado de soro de leite.Utilizou-se um

meio sintético para fermentação e o inóculo aplicado no ensaio de produção do lixiviante foi

proveniente do Núcleo de Processos Biotecnológicos da FEQ/UFU e foi tratado previamente por

choque térmico por 30 min a 97ºC. O teste de fermentação foi conduzido em duplicata em

erlenmeyers de 250 mL, empregando-se um volume reacional de 125 mL, contendo o meio

sintético e 1,6% (v/v) de inóculo, em condições anaeróbicas, à temperatura de 30°C, com pH

mantido em 5,5, sem exposição de luz e com agitação de 130 rpm em shaker. Periodicamente, uma

alíquota foi coletada para a quantificação,através do HPLC, da lactose e dos ácidos produzidos.

Após 900 h de fermentação, o ácido láctico apresentou uma concentração de 61,40 g/L, 2,5 vezes

maior que a concentração de butíricoe, em menores concentrações, ácidos acético e propiônico. Em

ensaios de lixiviação previamente realizados, a recuperação de metais com ácido láctico se mostrou

promissora. Portanto, este estudo mostrou que as condições de processo empregadas foram

eficientes na produção de um efluente com potencial para ser usado na solubilização dos metais.

Palavras-chave: biolixiviação – permeado do soro do leite – baterias de íons de lítio.

Fomento e/ou Agradecimentos: Capes, CNPq e Fapemig.

FOTOCATÁLISE DE CROMO USANDO ALGA Chrorella vulgaris

Igor Geraldo Fiuza Costa1; Amanda Oliveira Rodrigues2; Fabiana Regina Xavier Batista3;

Miria Hespanhol Miranda Reis4

1Mestrando em Engenharia Química pela Universidade Federal de Uberlândia. Eng. químico; 2Graduanda em

Engenharia Química pela Universidade Federal de Uberlândia; 3Doutora em Engenharia Química pela Universidade

Federal de Campinas. Docente da Universidade Federal de Uberlândia. Eng. Química; 4Doutora em Engenharia

Química pela Universidade Federal de Campinas. Docente da Universidade Federal de Uberlândia. Eng. química.

E-mail: [email protected]

Em virtude da progressiva demanda de produtos industrializados à população, o aparecimento

de metais pesados em resíduos industriais se torna um problema cada vez mais comum. Devido tal

situação, se fazem necessários métodos eficientes para tratamento de efluentes contaminados antes

do seu devido descarte. O cromo hexavalente, muito presente em resíduos de indústrias de

curtimento, por exemplo, é considerado um metal tóxico e danoso tanto a saúde humana quanto a

dos animais. Um dos métodos de tratamento que se mostra promissor é a fotocatálise. O principal

objetivo desse trabalho foi avaliar a eficiência da fotocatálise na redução de Cromo VI a Cromo III

em solução aquosa de pH 7, sob radiação ultravioleta (UV) na presença de alga Chrorella vulgaris.

A partir de uma solução padrão de 500 mg L-1 Cr(VI), foram preparados 100 mL de solução 10 mg

L1 Cr(VI), usando água destilada como solvente. Em seguida, adicionou-se biomassa alga. A

solução foi submetida a constante agitação magnética e foram retiradas alíquotas para analise de

Cr(VI) e de biomassa em determinados intervalos de tempo. Notou-se um o aumento da densidade

celular que foi diretamente influenciado pelo pH em que solução foi mantida , visto que 7 é o valor

de pH ideal para o crescimento da alga Chrorella vulgaris. Foi obtido uma taxa de redução de

Cr(IV) de aproximadamente 18% no período de 24 horas de experimento e de 38% em 48 horas.

Percebeu-se, que o aumento do tempo de experimento foi necessário para que houvesse resultados

mais satisfatórios de fotoredução. A fotocatálise na presença de alga, portanto, se mostrou um

procedimento promissor para tratamento de efluentes contendo Cromo hexavalente.

Palavras-chave: Cromo, Chrorella vulgaris, fotocatálise.

ÁREA III: BIOTECNOLOGIA ANIMAL

ESTUDO BIOPROSPECTIVO DA ATIVIDADE ANTIMICROBIANA DA PEÇONHA

DE Ectatomma opaciventre

Thamires Silva Santos1; Lucas Ian Veloso Correia1; Jean Carlos Santos2; Renata Santos

Rodrigues1

1Laboratório de Bioquímica e Toxinas Animais da Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia – MG;

2Laboratório de Ecologia – Evolução e Biodiversidade da Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia - MG.

E-mail: [email protected]

As peçonhas das formigas apresentamrica diversidade em sua constituição molecular,

fazendodestasuma fonte para pesquisas biotecnológicas.Com o uso indiscriminado de antibióticos,

tem-se visto o aumento da resistência a esses fármacos por parte dos microorganismos causadores

de certas infecções. Diante dessa situação, este estudo teve por objetivo a caracterização da

atividade antimicrobiana da peçonha de Ectatomma opaciventre,frente a dois tipos importantes de

bactérias, servindo de base para posteriores pesquisas na busca portratamentos alternativos.Foram

coletadas formigas na Reserva Ecológicado Panga, propriedade da Universidade Federal de

Uberlândia, com o auxílio de pinças e armazenadas em tubos. Foi realizada extração da glândula

venenífera, seguida da extração e preparação da peçonha, dosagem eliofilização.Para o teste

antimicrobiano, foram utilizadas as cepas das bactérias Staphylococcus aureus ATCC 25923

eEscherichia coli ATCC 25922. A metodologia utilizada para o teste antimicrobiano foi a Spot

Test, onde foram aplicados10μl da solução de peçonha bruta, com concentração de 15 μg da

peçonha, nos inóculos de cada cepa. Como controle positivo, utilizou-se gentamicina, e como

controle negativo, água destilada. Para análise do experimento, considerou-se como atividade

antimicrobiana a presença de halo de inibição do crescimento bacteriano em torno do spot aplicado.

O grau de inibição foi determinado pelo diâmetro do halo formado e pela sua limpeza. Para as duas

cepas bacterianas, observou-se atividade antimicrobiana da peçonha bruta, porémem níveis

distintos, havendo maior inibição sobre Staphylococcus aureus ATCC 25923.Assim, os

componentes presentes nessa peçonha mostraram desempenhar um importante papel no controle do

crescimento dessas bactérias.Os resultados aqui demonstrados oferecem suporte para futuras

pesquisas de isolamento de biomoléculas dessa peçonha, podendo ser aplicadas no

desenvolvimento de novos antimicrobianos.

Palavras-chave: Antimicrobianos, peçonha de formiga, bioprospecção.

CORRELAÇÃO ENTRE QUANTIDADE DE MICRONÚCLEOS E

DISPONIBILIDADE DE LEUCÓCITOS EM Antilophia galeata (PASSERIFORMES:

PIPRIDAE)

Paulo Vitor Alves Ribeiro1; Camilla Queiroz Baesse2; Vitor Carneiro de Magalhães Tolentino1;

Luís Pedro Mendes Paniago1; Luís Paulo Pires1; Giancarlo Ângelo Ferreira1; Márcia Cristina

Cury3; Celine de Melo1

1Instituto de Biologia, 2Instituto de Genética e Bioquímica, 3Instituto de Ciências Biomédicas. Universidade

Federal de Uberlândia, Uberlândia – MG. E-mail do autor correspondente: [email protected]

Micronúcleos são mutações cromossômicas que atuam como biomarcadores para a

carcinogênese, estando relacionados à poluição e/ou estresse. Quando presentes localizam-se no

citoplasma das células e apresentam características cromáticas semelhantes às do núcleo principal.

A quantificação leucocitária em aves tem sido utilizada como uma ferramenta de mensuração de

estresse, pois corticosteroides em níveis elevados tendem a aumentar a disponibilidade de

heterófilos (H) em relação à de linfócitos (L), o que ocasiona aumento nos valores da razão H/L,

indicativo de estresse. O objetivo foi verificar se há relação entre quantidade de micronúcleos e

disponibilidade de leucócitos dos indivíduos. Em um fragmento florestal de Cerrado (Uberlândia –

MG), de 2013 a 2015, foram capturados 89 indivíduos de Antilophia galeata, os quais tiveram

amostras de sangue coletadas para realização de extensões sanguíneas (fixadas em metanol e

coradas em Giemsa), para posterior análise em microscopia óptica. Os micronúcleos estiveram

presentes em 55 (61,7%) indivíduos, sendo contabilizados 87 micronúcleos ( = 1,27 ± 0,135). A

variação foi de zero a quatro micronúcleos por indivíduo. Houve correlação entre quantidade de

micronúcleos e os valores totais de leucócitos (r = 0,343; gl = 43; p = 0,024), heterófilos (r = -

0,335; gl = 53; p = 0,012), basófilos (r = 0,280; gl = 53; p = 0,039) monócitos (r = 0,277; gl = 53; p

= 0,041) e razão H/L (r = -0,273; gl = 53; p = 0,044). A formação de micronúcleos ocorre por meio

de alterações cromossômicas espontâneas ou decorrentes de distúrbios ambientais, havendo relatos

no aumento das taxas de micronúcleos devido à antropização. Alterações ambientais também

exercem influência no perfil leucocitário, pois há na literatura associações entre poluição e

aumentos nos valores das razões H/L em diferentes espécies de aves. Assim, conclui-se que a

utilização de metodologias como a análise de micronúcleos e razão H/L podem ser interessantes

para verificação de estressores ao serem aplicadas em conjunto, uma vez que apresentaram

correlação.

Palavras-chave: aves silvestres, eritrócitos, razão H/L.

Fomento: CNPq – PELD: 403733/2012-0; FAPEMIG – CRA-APQ: 01654-12.

ÁREA IV: BIOTECNOLOGIA HUMANA

PAPEL DOS TRANSCRITOS DO GENE TNRC6A NO DIAGNÓSTICO DO CÂNCER

DE MAMA

Helen Soares Valença Ferreira1; Bárbara Enoki Elisio1; Sara Teixeira Soares Mota2; Adriana

Freitas Neves3; Dayanne Silva Borges1; Yara Cristina de Paiva Maia2; Luiz Ricardo Goulart2;

Thaise Gonçalves de Araújo1,2

1Laboratório de Genética e Biotecnologia, Instituto de Genética e Bioquímica, Universidade Federal de

Uberlândia, Campus Patos de Minas, Patos de Minas, MG; 2Laboratório de Nanobiotecnologia, Instituto de Genética e

Bioquímica, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, MG; 3Laboratório de Biologia Molecular, Universidade

Federal de Goiás, Catalão, GO. E-mail: [email protected]

O câncer de mama (CM) é uma das doenças mais incidentes entre as mulheres, caracterizada

pela proliferação desordenada das células dos lóbulos e/ou ductos mamários. Em termos clínicos, o

uso dos biomarcadores ganha destaque, pois podem indicar a presença da doença. O gene de

repetição trinucleotídica contendo 6Adeninas (TNRC6A), faz parte do Complexo de Indução do

Silenciamento do RNA (RISC) que, em conjunto com os miRNAs, se ligam ao RNAm alvo e

impossibilitam que os ribossomos consigam acessar a informação genética. Nosso estudo objetivou

avaliar o papel desse gene no CM quantificando os seus transcritos em 48 pacientes (27 com CM e

21 com doença benigna da mama – DBM) por qPCR. A expressão do gene TNRC6A foi duas vezes

maior em pacientes com DBM (p<0,05). Análises da curva ROC demonstraram sensibilidade de

85.7% e especificidade de 55.6% para transcritos inferiores a 0.58 (p<0.05), o que conferiu uma

chance 6,92 vezes maior de desenvolver a doença OR=6.92: IC 1.66-29.94-p<0,05). O gene

TNRC6A, ao participar ativamente de uma via de regulação gênica, mostra-se um possível

candidato envolvido na tumorigênese mamária. No presente estudo, menores níveis transcricionais

foram verificados em pacientes com CM. Portanto, o gene em questão certamente auxiliará na

compreensão da gênese dessa doença auxiliando na busca de novas alternativas diagnósticas e

terapêuticas, uma vez que alterações moleculares podem ser traduzidas em diferentes padrões de

detecção e evolução do tumor.

Palavras-chave: TNRC6A, miRNA, câncer de mama.

Apoio financeiro: CNPq, FAPEMIG, CAPES, UFU.

ATIVIDADE MODULATÓRIA DE FAGOS MIMÉTICOS AO PEG3 EM CÉLULAS

DE CÂNCER DE PRÓSTATA

Dayanne Silva Borges1; Douglas Alexsander Alves1,2; Sara Teixeira Soares Mota1,2; Helen

Soares Valença Ferreira1; Flávia Mirelle Silva1; Luiz Ricardo Goulart2; Thaise Gonçalves de

Araújo1. E-mail: [email protected] 1Laboratório de Genética e Biotecnologia, Instituto de Biotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia, Patos

de Minas, MG; 2Laboratório de Nanobiotecnologia, Instituto de Biotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia,


O Câncer de Próstata (CaP) é o sexto tipo de câncer mais comum e o mais diagnosticado em

homens. Os índices são alarmantes e as chances de cura restritas aos casos diagnosticados

precocemente. Portanto, é necessário o estudo de novos biomarcadores que sejam capazes de

diagnosticar precisamente o CaP, além de permitir seu acompanhando e direcionar as estratégias

terapêuticas. O gene 3 do câncer de próstata (PCA3) é expresso especificamente na próstata e

apresenta-se super expresso nas neoplasias desse órgão. Trata-se de um RNA longo não codificante

cuja expressão é regulada por androgênios. Fagos ligantes à região promotora do gene PCA3 foram

previamente selecionados por Phage Display. Neste estudo, objetivou-se avaliar o efeito na

proliferação de células tumorais prostáticas, mediado pelo fago mimético ao PEG3. Foram

conduzidos ensaios de citotoxicidade na linhagem LNCaP. Esta foi cultivada em meio RPMI1640

com e sem suplementação de 10% de soro fetal bovino. As células foram tratadas com os fagos em

três títulos diferentes (105, 107 e 109 fagos/poço) por 24h e 48h. Os valores obtidos foram

normalizados com os dados do fago selvagem. Após 24 horas de tratamento, os recombinantes

titulados a 105 fagos/poço aumentaram a viabilidade celular, tanto na linhagem suplementada

(***p<0,001) quanto na sem soro (*p<0,05). Em contrapartida, depois de 48 horas as células

proliferaram na titulação de 107 fagos/poço nas duas linhagens (*p<0,05). Ambos os tratamento

comparados ao controle (100% de viabilidade). Os fagos recombinantes demonstraram potencial

biotecnológico modulando a proliferação da linhagem tumoral LNCaP. Estudos adicionais são

necessários visando avaliar o efeito molecular desses peptídeos para, assim, compreender a

tumorigênese prostática.

Palavras-chave: Câncer de próstata; PCA3; biomarcador; PEG3.

Fonte de Financiamento: CNPq, CAPES e FAPEMIG.

EFEITO DO EXTRATO DE Campomanesia sessiliflora (GUABIROBA VERDE) SOBRE

A HIDRÓLISE DE NUCLEOTÍDEOS EM SORO DE RATOS

Leonardo Oliveira Fonseca1; Daniele de Oliveira Freitas1; Mikaelle Costa Correia1; João Lucas

Gomes Costa1; Janayne Luihan Silva2; Joyce Ferreira da Costa Guerra1; Cristina Ribas Fürstenau1

1Instituto de Biotecnologia (IBTEC), Universidade Federal de Uberlândia, Patos de Minas-MG, Brasil; 2Instituto

de Ciências Biológicas (ICB), Universidade Federal de Minas Gerais, Belo Horizonte-MG, Brasil. E-mail:

[email protected]

A hipertensão arterial sistêmica (HAS) é um problema mundial de saúde. A sinalização

purinérgica tem se demonstrado bastante promissora como alvo de tratamento dessa patologia, uma

vez que regula processos importantes que podem ser modulados a fim de restabelecer a homeostase

do fluxo sanguíneo. A Campomanesia sessiliflora, popularmente conhecida como guabiroba-verde,

pertence à família Myrtaceae, a qual já tem sido vastamente empregada na medicina popular. Os

objetivos do presente estudo são: obter o extrato metanólico das folhas de Campomanesia

sessiliflora, determinar sua atividade antioxidante, o conteúdo de flavonoides e de fenóis totais e

avaliar o efeito do extrato sobre as hidrólises de ATP, ADP e AMP em soro sanguíneo de ratos. O

extrato foi obtido utilizando-se metanol como solvente. O conteúdo de fenóis totais, flavonoides e a

determinação da atividade antioxidante foram realizados por métodos colorimétricos. A

determinação da concentração de fosfatos livres resultantes da hidrólise enzimática, após

tratamento ou não com o extrato em diversas concentrações (0, 125, 250 e 500 µg/mL), também foi

obtida por ensaio colorimétrico. O rendimento do extrato metanólico foi de 12,6%, o conteúdo de

fenóis totais resultou em 62,30 ± 2,42 mg Eq AG/ g e o de flavonoides de 16, 74 ± 1,3 mg Eq

quercetina/g. Além disso, o extrato exibiu uma alta atividade antioxidante, sendo capaz de inibir o

radical DPPH• em 57,12%, 69,37% e 90,2% nas concentrações de 200, 250 e 500 µg/ mL,

respectivamente. Não foram observados resultados significativos para a modulação das atividades

de hidrólise dos nucleotídeos pelo extrato metanólico de Campomanesia sessiliflora. Embora a

Campomanesia sessiliflora não tenha demonstrado modulação significativa na sinalização

purinérgica em soro de ratos, ela exibiu potente atividade antioxidante e grande conteúdo de

flavonoides, cujo potencial farmacológico deve ser melhor aprofundado tendo em vista as ações

terapêuticas atribuídas a essas moléculas.

Palavras-chave: Atividade antioxidante; sinalização purinérgica; hipertensão arterial

sistêmica.

AVALIAÇÃO CITOTÓXICA DO EXTRATO DE Campomanesia Sessiliflora EM

LINHAGENS PROSTÁTICAS

Mikaelle Costa Correia1; Leonardo Oliveira Fonseca1; Antonielle Oliveira Cordeiro2; Cristina

Ribas Fürstenau1; Thaise Gonçalves Araújo2

1Laboratório de Bioquímica Vascular, Universidade Federal de Uberlândia, Campus Patos de Minas, Patos de

Minas, MG; 2 Laboratório de Genética e Biotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia, Campus Patos de Minas,

Patos de Minas, MG. E-mail: [email protected]

O câncer de próstata é o segundo tipo de neoplasia maligna mais prevalente entre homens,

apresentando uma alta possibilidade de ampliar o número de novos casos nos próximos anos devido

ao aumento da expectativa de vida. A espécie Campomanesia sessiliflora apresenta compostos

fenólicos, os quais estão associados a propriedade antioxidante da planta, que podem atuar contra

células tumorais devido à sua ação citotóxica. Neste estudo, objetivou-se avaliar a atividade

citotóxica do extrato de Campomanesia sessiliflora em linhagens celulares prostáticas. O extrato

metanólico foi obtido através da trituração das folhas em contato com o solvente metanol, e

mantido em repouso por 72 horas em temperatura ambiente e ausência de luz. O método MTT foi

utilizado para avaliar a citotoxicidade do extrato metanólico da planta nas concentrações de 1

μg·μL-1 a 0,007 μg·μL-1 nas linhagens celulares de próstata PC3 (carcinoma hormônio

independente), LNCap (carcinoma hormônio dependente) e RWPE (linhagem não neoplásica).

Após 24 horas de tratamento, houve um aumento na proliferação das linhagens LNCap e PC3 na

menor concentração, quando comparadas às não tumorigênicas (P<0,05). Nas concentrações 0,062;

0,125 e 0,25 μg·μL-1 a viabilidade das LNCap foi inferior à RWPE (p<0,05). Após 48 horas de

tratamento o perfil se repetiu, com efeito proliferativo na menor concentração. Da concentração

0,05 μg·μL-1 até 0,5 μg·μL-1, a viabilidade de ambas as linhagens tumorais foi inferior à não

tumorigênica. Conforme os resultados, observamos que a fração de Campomanesia sessiliflora

testada não apresentou atividade citotóxica frente a células tumorais prostáticas. Novos solventes

devem ser utilizados visando avaliar o potencial terapêutico da espécie.

Palavras-chave: Câncer de próstata, Neoplasia, Antioxidante.

Fomento: Financiamento próprio.

INFLUÊNCIA DO POLIMORFISMO -196/-174 DEL DO RECEPTOR TOLL-LIKE 2

(TLR2) NA SUSCEPTIBILIDADE AO CÂNCER DE PRÓSTATA EM HOMENS

BRASILEIROS

Angelo Borges de Melo Neto¹; Francielle Galindo Santos1; Luciana de Oliveira Almeida1;

Laura de Castro Rezende1; Thaise Gonçalves Araújo¹ 1Laboratório de Genética e Biotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia, Campus Patos de Minas, MG. E-

mail: [email protected]

A família Toll-like (TLR) representa o principal grupo de receptores responsável pelas

respostas do sistema imune inato a fatores antigênicos, incluindo aos Padrões Moleculares

Associados a Danos celulares, os quais são produzidos por células cancerígenas. Considerando o

Câncer de Próstata (CaP), a regulação gênica, a sinalização celular, a consequente secreção de

citocinas e o recrutamento de células imunes relacionadas à ativação de TLR2 ainda necessitam

ser descritos. Este trabalho objetivou verificar a influência do polimorfismo -196/-174del deste

receptor na susceptibilidade ao CaP em indivíduos brasileiros. Por meio de PCR alelo-específica,

23 pacientes com CaP e 23 com hiperplasia prostática benigna (HPB) foram genotipados. Estes

foram caracterizados em Ins/Ins (Inserção/Inserção), quando ambos os seus alelos continham 288

pb, Ins/Del como heterozigotos e Del/Del (Deleção/Deleção) quando continham alelos com 266pb.

Não foi verificada diferença estatisticamente significante entre as idades e os valores de PSA entre

os grupos de estudo (p = 0,12 e p = 0,17, respectivamente). A frequência genotípica se mostrou em

equilíbrio de Hardy-Weinberg (p=0.90 para CaP e 0.43 para HPB). Além disso, os genótipos não

diferenciaram os pacientes de CaP e HPB, contudo, houve uma maior prevalência do alelo deletério

em pacientes acometidos pela doença. Um maior número de indivíduos necessita ser avaliado, bem

como análises do número de transcritos do gene TLR2 devem ser conduzidas para, assim, definir o

impacto dessa mutação nas lesões prostáticas.

Palavras-chave: TLR 2, Câncer de próstata, genótipos.


EFEITO ANTINOCICEPTIVO DO TRATAMENTO ORAL COM O ALCALOIDE

APORFÍNICO ESTEFALAGINA

Karen Ramos de Oliveira1; Allisson Benatti Justino2; Foued Salmem Espíndola2; Marcos

Pivatto2; Cássia Regina Silva1 1Laboratório de Bioquímica e Toxinas Animais, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, MG;

2Laboratório de Bioquímica e Biologia Molecular, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, MG. E-mail:

[email protected]

Condições dolorosas agudas e crônicas ainda são de difícil tratamento. Na investigação de

novos fármacos a partir de produtos naturais, a classe dos alcaloides apresenta grande potencial

analgésico e alcaloides aporfínicos parecem interagir com Receptores de Potencial Transitório

(TRPs), em especial os TRPV1 (vanilóide) e TRPA1 (anquirina), importantes na modulação da dor

e inflamação. Assim, o presente trabalho avaliou o possível efeito antinociceptivo de um novo

alcaloide aporfínico, a estefalagina, isolado da Annona crassiflora Mart, e sua possível interação

com receptores TRP em camundongos. Os animais foram submetidos a injeção intra-plantar (i.pl.)

(20 uL) do agonista TRPV1 capsaicina (1,6 µg), ou do agonista TRPA1 cinamaldeído (1,3 µg), ou

de formalina (2,5%), e tratados com a estefalagina (1 mg/kg, via oral) ou veículo (salina, vo), 1 h

antes das injeções i.pl.. Os animais foram observados quanto ao desenvolvimento de respostas

nociceptivas (lambida de pata), e todos os procedimentos foram aprovados pelo Comitê de Ética no

Uso de Animais da UFU (protocolo 018/17). Além disso, foi realizado um ensaio de influxo de Ca

estimulado pela aplicação de capsaicina em amostras de sinaptossoma de medula espinhal, na

presença ou não de estefalagina. Foi observado que o tratamento com a estefalagina é capaz de

prevenir a nocicepção causada pela administração i.pl. dos agonistas dos receptores TRPA1 e

TRPV1 (58% e 68% de prevenção, respectivamente), e ainda da formalina (32% na primeira fase e

31% na segunda fase). Foi observado que a estefalagina é capaz de reduzir o influxo de Ca

induzido pela aplicação de capsaicina em 38%, efeito similar ao do antagonista dos receptores

TRPV1 SB366991, que causou 32% de redução. Os resultados sugerem que a estefalagina é

promissora para o desenvolvimento de novas drogas analgésicas, e sua possível interação com

receptores TRP deve ser melhor investigada para elucidarmos o mecanismo molecular destes

efeitos.

Palavras-chave: dor, estefalagina, TRPV1, TRPA1, nocicepção.

PERFIL TRANSCRICIONAL DO GENE ARID1A EM CÉLULAS DE CÂNCER DE

PRÓSTATA

Isabella Castro Martins1; Luisa Nogueira e Silva1; Douglas Cardoso Brandão1; Sara Teixeira

Soares Mota2; Adriana Freitas Neves3; Luiz Ricardo Goulart2; Thaise Gonçalves de Araújo1,2

1Laboratório de Genética e Biotecnologia, Instituto de Biotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia,

Campus Patos de Minas, Patos de Minas, MG; 2Laboratório de Nanobiotecnologia, Instituto de Biotecnologia,

Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, MG; 3Laboratório de Biologia Molecular, Universidade Federal de

Goiás, Catalão, GO. E-mail: [email protected]

O câncer de próstata (CaP) é, atualmente, o segundo com maior incidência entre os homens,

após o câncer de pele não melanoma. Diversos mecanismos encontram-se envolvidos no

surgimento e progressão da doença, sobretudo aqueles que regulam a expressão de diferentes genes.

A proteína ARID1A (Domínio 1A de interação a regiões ricas em AT) é a uma das subunidades

que confere especificidade ao complexo de remodelagem da cromatina SWI/SNFA (BAF), descrita

como supressora tumoral. Porém, seu papel no CaP ainda não foi elucidado. Nesse sentido,

avaliamos o papel dos transcritos do gene ARID1A na tumorigênese prostática por qPCR. Foram

extraídos os RNAs das linhagens tumorais prostáticas LNCaP (hormônio-dependente) e DU145 e

PC3 (hormônio-independentes) e da não tumorigênica RWPE. Foi otimizada a curva padrão

relativa e utilizado o método Cq comparativo a fim de avaliar os transcritos normalizados pelo gene

B2M (Beta-2 Microglobulina). A expressão do gene foi 1,2 e 1,15 vezes maior nas linhagens

LNCaP e PC3 quando comparadas à RWPE (p<0,05), respectivamente. Esse comportamento não

foi identificado para a DU145. Não foi verificada diferença estatisticamente significante entre as

linhagens tumorais, sugerindo o papel do ARID1A no surgimento da doença, regulando a

expressão de genes envolvidos na transformação oncogênica. Estudos adicionais são necessários a

fim de avaliar seu comportamento e suas interações no CaP.

Palavras-chave: ARID1A, qPCR, Câncer de próstata.


VIABILIZAÇÃO DA IMOBILIZAÇÃO DA ENZIMA FOSFATASE ALCALINA

SOBRE ELETRODOS MODIFICADOS COM FILME POLIMÉRICO

Iara Pereira Soares1; Tallita Stéfanne e Silva1; Letícia Raphaela Gonçalves Lacerda1; Diego

Leoni Franco1

1Laboratório de Eletroquímica Aplicado à Biotecnologia e Engenharia de Alimentos (LEABE) – Universidade

Federal de Uberlândia – Patos de Minas. E-mail: [email protected]

O desenvolvimento de sensores biológicos se mostra necessário e eficiente para a detecção de

inúmeras condições clínicas em seres humanos. A fosfatase alcalina é uma enzima que está

presente em nosso organismo, seus níveis elevados são indícios de problemas principalmente no

fígado e nos ossos. Os kits comerciais não apresentam respostas colorimétricas tão sensíveis, e

necessitam de equipamento e mão de obra cara e especializada. Assim, iniciou-se a construção de

um biossensor eletroquímico enzimático. Eletrodos de trabalho de carbono grafite de lapiseira

foram modificados com polímero derivado de ácido 4-hidroxibenzóico. Os grupos ácido

carboxílico presentes foram ativados com carbodiimida e succinimida, permitindo que os

grupamentos amino da enzima interagissem com o polímero através de ligação química. O eletrodo

modificado entrou em contato com a enzima (15 U) por 18 horas. O segundo eletrodo foi somente

modificado com o polímero, e o terceiro eletrodo foi mantido limpo para comparações. A técnica

escolhida para a detecção foi a Espectroscopia de Impedância Eletroquímica em solução de

ferricianeto de potássio e cloreto de potássio. O eletrodo limpo apresentou resistência à

transferência de carga (Rtc) relativamente baixa (cerca de 60 Ω). Já o eletrodo com o polímero

apresentou uma elevada resistência (cerca de 800 Ω). Isso se deve ao fato dos grupos ácido

carboxílico estarem presentes e desprotonados (pH em torno de 7), o que permite uma maior

repulsão eletrostática com os ânions ferricianeto em solução. Já com a enzima imobilizada, há um

decréscimo na resistência (cerca de 300 Ω), o que mostra que os sítios carregados negativamente do

polímero foram cobertos com um material diferente. Como neste caso, a etapa diferente foi a adição

de enzima, esta queda refere-se à sua presença, mostrando que o método de imobilização foi

eficiente para construção do biossensor e que servirá de estudo inicial para otimizar os parâmetros

de imobilização e de detecção.

Palavras-chave: Eletroquímica, biossensor, fosfatase alcalina.

Fomento: FAPEMIG, CNPQ, PROPP/UFU e Rede Mineira de Química.

AVALIAÇÃO DA CITOTOXICIDADE DO EXTRATO HIDROMETANÓLICO DE

Sabicea brasiliensis EM CÉLULAS DE CÂNCER DE MAMA

Rayra Jordana Silva Pereira1, Antonielle Oliveira Cordeiro1,2, Douglas Cardoso Brandão1,

Cristina Ribas Fürstenau3, Douglas Souza Oliveira3, Raquel Pereira Cruz1, Luiz Ricardo Goulart2,

Thaise Gonçalves Araújo1,2

1Laboratório de Genética e Biotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia, Campus Patos de Minas;

2Laboratório de Nanobiotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia, Campus Uberlândia; 3Laboratório de Cultura

de Células Animais, Universidade Federal de Uberlândia, Campus Patos de Minas E-mail: [email protected]

O Câncer de Mama (CM) é uma das neoplasias mais receada pelas mulheres. O diagnóstico é,

em sua maioria, encarado com dificuldade e o tratamento quimioterápico ainda culmina com efeitos

colaterais debilitantes. O estudo de produtos naturais como drogas antineoplásicas requer ampla

pesquisa sobre a planta e análise de seus constituintes. Este tem se mostrado promissor, ao permitir

identificar substâncias com atividade antitumoral inibindo o início do processo carcinogênico e

controlando a multiplicação celular durante as fases de promoção e progressão da doença. Neste

estudo objetivou-se analisar o efeito do extrato hidrometanólico de Sabicea brasiliensis, L. sobre

linhagens tumorais mamárias. Para a avaliação de seus efeitos citotóxicos, foram conduzidos

ensaios de MTT em diferentes concentrações (1ug/uL, 0,5ug/uL, 0,25ug/uL e 0,125ug/uL,

0,0625ug/uL, 0,03125ug/uL, 0,015625ug/uL e 0,0078125ug/uL) nas linhagens MCF10 (não

tumorigênica), MCF7 (tumorigênica de fenótipo luminal) e MDA-MB231 (tumorigênica de

fenótipo triplo-negativo). Os tratamentos foram realizados por 24 e 48 horas. No primeiro caso,

observou-se efeito antiproliferativo sobre a linhagem MCF7 quando comparada às demais (p<0,05)

na maior concentração testada. Após 48 horas, a atividade antitumoral do extrato foi mais evidente

na linhagem triplo-negativa no intervalo de 0,5ug/uL a 0,031ug/uL. A 0,015ug/uL o efeito

citotóxico se mostrou interessante, uma vez que ambas, MCF7 e MDA-MB231 tiveram sua

viabilidade significantemente comprometida quando comparadas ao controle e às células MCF10.

Estudos adicionais são necessários a fim de isolar os compostos desse extrato e seu efeito sobre

tumores mamários.

Palavras-chave: câncer de mama, citotoxicidade, MTT, Sabicea brasiliensis.


EFEITO ANTIPROLIFERATIVO DE UM COMPLEXO METÁLICO TERNÁRIO A

BASE DE COBRE E DE SEUS LIGANTES, Β–DICETONA E 1,10 FENANTROLINA,

SOBRE LINHAGENS TUMORAIS DE MAMA

Paula Marynella Alves Pereira Lima1; Douglas Cardoso Brandão1; Raquel Pereira Cruz1;

Matheus Fernandes da Silva2; Priscila Capelari Orsolin2; Wendell Guerra3; Thaise Gonçalves de

Araújo1; Robson José de Oliveira Júnior1

1Universidade Federal de Uberlândia, Instituto de Biotecnologia, Laboratório de Genética e Biotecnologia, Patos

de Minas – MG; 2Centro Universitário de Patos de Minas – UNIPAM, Patos de Minas – MG; 3Universidade Federal de

Uberlândia, Instituto de Química, Uberlândia – MG. E-mail: [email protected]

Complexos de cobre associados a 1,10 fenantrolina e a β–dicetona são excelentes candidatos a

possíveis quimioterápicos. Ambos ligantes apresentam efeito sobre a seletividade do complexo e

grau de atividade biológica em células tumorais e não tumorais. Estas propriedades estão

diretamente relacionadas ao seu poder de modular as propriedades redox do cobre. Nesse sentido,

esse estudo objetivou avaliar o potencial antiproliferativo do complexo ternário

Cu(BTA)(Phen)ClO4 e de seus ligantes por meio de ensaios baseados em MTT (brometo-3-(4,5-

dimetiltiazol2-il)-2,5-difeniltetrazólio). Para o experimento foram utilizadas as linhagens de câncer

de mama T47D e MCF-7. O composto e seus ligantes foram testados nas concentrações de 50µM;

25µM; 12,5µM; 10µM; 5µM; 1µM, e incubados por 24, 48 e 72 horas, em triplicatas. Os resultados

obtidos mostraram que o composto foi citotóxico às linhagens tumorais, apresentando efeitos dose

dependente. Quando comparado aos ligantes, a atividade antiproliferativa do composto diferiu

significativamente, com maior efeito antiproliferativo quando associados ao cobre. Portanto, pode-

se concluir que ambos ligantes apresentam atividade citotóxica a células tumorais mamárias.

Contudo, seu efeito antitumoral é mais evidente quando associado ao cobre. Nossos resultados

abrem novos caminhos para o tratamento do Câncer de Mama, sobretudo baseado no sinergismo

entre diferentes moléculas associadas ao cobre.

Palavras-chave: Câncer de mama. Cu(BTA)(Phen)ClO4. Citotoxicidade.

Fomento: FAPEMIG, UFU, UNIPAM.


AVALIAÇÃO DOS EFEITOS DO CITALOPRAM EM Drosophila melanogaster: UM

MODELO DE CRISE EPILÉPTICA

Marcos Paulo de Oliveira1, Luiz Carlos de Oliveira Júnior1, Jéssica Regina da Costa Silva1,

Carlos Ueira-Vieira1, Ana Maria Bonetti1

1Instituto de Biotecnologia. Universidade Federal de Uberlândia, Minas Gerais, Brasil.

Epilepsia é atualmente a quarta doença neurológica mais ocorrente no mundo afetando todas

idades de acordo com a Epilepsy Foundation e é caracterizada de várias formas, uma delas é a

presença de crises convulsivas recorrentes em curto tempo.A enfermidade está relacionada a uma

desordem de neurotransmissores que afetam a atividade elétrica dos neurônios gerando as

convulsões.Contudo a condição não está presente exclusivamente em humanos e por isso o

emprego de modelos é comumente utilizado na pesquisa.Um deles é a linhagem mutante bss1 de

Drosophila melanogaster escolhida para o presente estudo, a qual apresenta crises similares a de

humanos e fenótipo fortemente característico.Testes referentes a toxicidade e indução de crise

foram feitos para demonstrar os efeitos do citalopram sobre as moscas.Para determinar a toxicidade

do fármaco foi avaliado a sobrevivência de aproximadamente 300 indivíduos de 0 a 5 dias pós

eclosão ao serem tratadas com doses de 0,625mM; 1,25mM; 2,5mM e 5mM e controle (água), onde

em cada grupo tratado houve a contagem de indivíduos que pereceram por aproximadamente 31

dias.A análise dos dados foi feita pelo software Prisma (versão 5) utilizando o teste estatístico

Kruskal-Wallis (P<0.05) e a partir disto foi gerado um gráfico de sobrevivência.Segundo a análise,

as diferentes concentrações não apresentaram toxicidade significante em relação ao controle,

mostrando que não houve efeito do citalopram sobre o tempo de vida das moscas.Para o teste de

indução de crise, foram utilizadas moscas de 0 a 5 dias pós eclosão, divididas em 5 grupos de

tratamento: controle (água) e as doses de 0.625mM, 1.25mM, 2.5mM e 5mM de citalopram.Os

tratamentos foram diluídos no meio de purê de batata e cada grupo foi feito em triplicata, contendo

cerca de 15 a 20 moscas.A crise epilética foi induzida por agitação vigorosa durante 10 segundos

em cada grupo e as avaliações da resposta aguda foram feitas após 24, 48 e 72 horas de tratamento

com o citalopram considerando os tempos de retorno da crise.A análise do tempo de retorno foi

feita a partir da contagem da quantidade de indivíduos que retornaram ao normal nos intervalos de

30, 60, 90 e 120 segundos após a indução da crise.Os resultados para 24h de tratamento

demonstraram que a resposta aguda ao uso de citalopram tem uma tendência de diminuir o tempo

de retorno da crise comparando-se as doses de tratamento e controle.Para 72h de tratamento, apenas

as 3 maiores doses mostraram induzir certo efeito inibitório sobre a crise epiléptica quando se

comparado ao controle.O tratamento por 48h não foi eficaz em modular a crise epiléptica nas

moscas.Maiores investigações são necessárias para avaliar o efeito do citalopram nascrisescrônicas.

Palavras-chave: epilepsia, citalopram, Drosophila melanogaster.

Suporte Financeiro: FAPEMIG, CNPq, FINEP.

REDUÇÃO DA MIGRAÇÃO CELULAR ESTIMULADA POR INSULINA E ÁCIDO

GRAXO SATURADO EM CÉLULAS NORMAIS E TUMORAIS DE PRÓSTATA PELA

AÇÃO DA METFORMINA

Beatriz Pelegrini Bosque1; Breno Costa Landim1; Claudio Vieira da Silva2; Renata Graciele

Zanon3; Daniele Lisboa Ribeiro1

1Departamento de Biologia Celular, Histologia e Embriologia; 2Departamento de Imunologia; 3Departamento de

Anatomia; Instituto de Ciências Biomédicas- ICBIM. Universidade Federal de Uberlândia- UFU. E-mail:

[email protected]

O câncer de próstata (CaP) é mais incidente e possui pior prognóstico em pacientes obesos, de

acordo com estudos clínicos. Contudo, o principal mecanismo estimulador ainda não é bem

compreendido. Assim, o presente trabalho visa avaliar os efeitos de diferentes meios obesogênicos

em células normais e tumorais de próstata e investigar se a droga antidiabética metformina

apresenta papel protetor. Células epiteliais normais (PNT1A) e tumorais (PC3) foram tratadas com

o ácido graxo saturado palmitato 100μM, insulina (50 μU) ou ambos, diluídos em DMEM por 48h,

enquanto o controle recebeu apenas DMEM. Esses grupos foram tratados ou não com metformina

100 μM por igual período. Foi realizado o ensaio de migração cell scratch e as células foram

avaliadas entre os tempos 0 e 48hrs. O sobrenadante foi recolhido para análise de atividade de

metaloproteinases (MMP) por zimografia. Notou-se que, nas células normais, somente a insulina

estimulou aumento significativo da migração, sendo esse efeito reduzido pela metformina. Já nas

células tumorais, a migração foi maior do que nas normais e o palmitato incrementou-a de modo

mais significativo do que a insulina ou ambos. A metformina reduziu em 44% o efeito do

palmitato, mas, para os demais tratamentos, surpreendentemente, essa redução foi menos intensa do

que em PNT1A. Os dados da zimografia corroboram com esses achados, visto que células normais

elevaram a atividade de MMP-9 em cerca de 18% e, quando tratadas com metformina, reduziram-

na. O mesmo padrão foi observado para as tumorais, com efeito ainda mais notável. Conclui-se que

a migração em células normais é mais estimulada pela insulina enquanto o palmitato tem maior

efeito nas células tumorais, sendo a metformina capaz de controlar tais efeitos, e que os meios

obesogênicos podem estimular a migração pela maior atividade de MMP-9 nas células prostáticas,

sendo também reduzida pela droga. Assim, a metformina pode ser importante no tratamento contra

o câncer de próstata.

Palavras-chave: Câncer de Próstata, Obesidade, Metformina.

Apoio financeiro: CNPq.

ESPECTROSCOPIA FTIR-ATR NA URINA COMO DIAGNÓSTICO ALTERNATIVO

DE DIABETES MELLITUS

Douglas Carvalho Caixeta1,2; Léia Cardoso Sousa1; Foued Salmen Espindola2; Robinson

Sabino da Silva1

1Departamento de Fisiologia, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia,

MG; 2Instituto de Biotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, MG. Email:

[email protected]

O diagnóstico rápido, específico, não invasivo e com boa relação custo-benefício do diabetes

mellitus (DM) é essencial para evitar o aparecimento de complicações desta sindrome metabólica.

Consequentemente, a busca por um método de diagnóstico de DM mais eficaz é de grande

interesse. A espectroscopia no infravermelho com transformada de Fourier (FTIR-ATR) pode ser

empregada para monitorar uma impressão digital molecular presente em células, tecidos e fluídos

biológicos e tem sido utilizada no diagnóstico de algumas doenças, no entanto, as aplicações em

doenças endócrinas é um campo emergente. Neste estudo, o objetivo foi inverstigar as alterações no

perfil molecular da urina e identificar picos específicos que indicam alterações patogênicas que

poderiam ser detectadas pela espectroscopia FTIR-ATR como alternativa para o diagnóstico de

DM. Ratos Wistar machos foram divididos em três grupos: não-diabético (ND), diabético (D) e

diabético 6U-tratado com insulina (D6U). Os animais foram submetidos a 28 dias de diabetes, e no

21º dia, o tratamento foi iniciado por 7 dias com insulina ou soro fisiológico de acordo com o

grupo. O perfil urinário foi analisado por FTIR-ATR e os modos vibracionais foram avaliados

quanto à capacidade diagnóstica. Em comparação com o ND, os picos 2883cm-1, 1625cm-1,

1359cm-1, 1197cm-1, 1045cm-1 e 570cm-1 de ratos D obteve uma sensibilidade e especificidade de

100% (p < 0.001) e o pico 1389cm-1 uma sensibilidade de 85.7% e especificidade de 87.5% (p =

0.0018). Além disso, os sete modos espectrais demonstraram alta correlação com glicemia e com a

concentração de glicose na urina. Altos níveis de glicose são capazes de induzir uma alteração na

estrutura dos componentes da urina e o uso de ATR-FTIR foi capaz de diferenciar essas diferenças

no perfil molecular da urina. Assim, o FTIR-ATR pode ser utilizado para caracterizar várias

características espectrais específicas do diabetes, indincando uma nova alternativa robusta para

diagnóstico de DM.

Palavras-chave: diabetes, urina e diagnóstico.

Fomento e/ou Agradecimentos: FAPEMIG, CNPq e CAPES.


CARACTERIZAÇÃO BIOLÓGICA DA PEÇONHA DE Ectatomma opaciventre: UMA

RICA FONTE DE COMPOSTOS BIOATIVOS

Lucas Ian Veloso Correia1, Fernanda Van Petten de Vasconcelos Azevedo1, Mônica Soares

Costa1, Mariana Alves Pereira Zóia2, Kelly Aparecida Geraldo Yoneyama1, Jean Carlos Santos3,

Veridiana de Melo Rodrigues1, Renata Santos Rodrigues1

1Laboratório de Bioquímica e Toxinas Animais, Instituto de Biotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia,

MG, Brasil; 2Laboratório de Nanobiotecnologia, Instituto de Biotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia, MG,

Brasil; 3Laboratório de Ecologia, Instituto de Biologia, Universidade Federal de Uberlândia, MG, Brasil. E-mail:

[email protected]

As peçonhas de formiga exibem várias funções e papéis biológicos, no entanto, as formigas são

um dos grupos menos explorados na bioprospecção de compostos bioativos com aplicações

biotecnológicas. Neste contexto, descrevemos pela primeira vez a caracterização bioquímica,

enzimática e funcional da peçonha de Ectatomma opaciventre. A glândula venenífera foi pinçada,

transferida para um microtubo contendo 15% de acetonitrila, 0,1% de ácido trifluoracético,

rompidas por ondas ultrassônicas e centrifugadas a 320×g por 2 min. Realizou-se SDS-PAGE para

visualização do conteúdo de proteínas e peptídeos da peçonha. Atividade coagulante, fosfolipásica,

hemolítica, hialuronidásica em diferentes substratos, atividades trombolítica, zimograma,

azocaseinolítica, fibrinogenolítica e inibição da agregação plaquetária foram realizadas conforme

descrito na literatura, utilizando diferentes concentrações de peçonha de acordo com a sensibilidade

de cada método. Para descrever suas propriedades funcionais, realizou-se ensaio de citotoxicidade

por MTT sobre Leishmania spp. e células tumorais (MDA-MB-231, MCF7 e A549) e células não

tumorigênicas (MCF10A, BEAS e BMDM). Verificou-se a inibição da migração celular por

Wound Healing. Os resultados obtidos revelam que a peçonha de Ectatomma opaciventre é uma

fonte rica de moléculas inexploradas. SDS-PAGE apresentou compostos com massas de 1-116

kDa, destacando a complexidade deste veneno. A peçonha influi na hemostasia degradando

coágulos vermelhos e inibindo a agregação plaquetária. Ensaios enzimáticos demonstraram a

presença de algumas classes de proteínas na peçonha com alta atividade enzimática. Quanto à

caracterização funcional, a peçonha apresentou efeito citotóxico para Leishmania spp. e células

tumorais, não apresentando toxicidade nas linhagens controle, sendo capaz de inibir parcialmente a

migração celular. Portanto, a peçonha de Ectatomma opaciventre apresenta um novo cenário de

bioprospecção de toxinas com interesse biotecnológico.

Palavras-chave: Ectatomma opaciventre, peçonha de formiga, bioprospecção.

Fomento: FAPEMIG, CAPES, CNPq, UFU.

EXPRESSÃO DIFERENCIAL DO GENE TNRC6A EM LINHAGEM DE CÂNCER DE

MAMA TRIPLO-NEGATIVA

Bárbara Enoki Elisio1; Laura de Castro Rezende1; Sara Teixeira Soares Mota2; Adriana Freitas

Neves3; Yara Cristina de Paiva Maia2; Luiz Ricardo Goulart2; Thaise Gonçalves de Araújo1,2

1Laboratório de Genética e Biotecnologia, Instituto de Genética e Bioquímica, Universidade Federal de

Uberlândia, Campus Patos de Minas, Patos de Minas, MG; 2Laboratório de Nanobiotecnologia, Instituto de Genética e

Bioquímica, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, MG; 3Laboratório de Biologia Molecular, Universidade

Federal de Goiás, GO. E-mail: [email protected]

O Câncer de Mama (CM) se encontra em uma escala epidêmica e representa um problema para

a saúde pública. Considerada uma doença heterogênea, atualmente é classificada em diferentes

subtipos. Os triplo-negativos são caracterizados pela ausência de receptores hormonais e de

crescimento epidérmico, responsável por 15% dos casos, em geral mais agressivos. Portanto,

encontrar biomarcadores que possam auxiliar na compreensão desses tumores tem se tornado

premente. O gene de repetição trinucleotídica contendo 6 Adeninas (TNRC6A) participa do

mecanismo de silenciamento gênico pós-transcricional mediado por miRNA, cujo papel no CM

ainda não foi descrito. Hipotetizamos que esse gene possa apresentar diferentes perfis relacionados

à malignidade de tumores mamários. No presente trabalho foi quantificada, por qPCR, a expressão

diferencial dos transcritos do gene TNRC6A em três linhagens mamárias: MCF10A (não

tumorigênica), MCF-7 (fenótipo luminal) e MDA-MB-231 (fenótipo triplo negativo). Verificou-se

maior expressão do gene, com significância estatística (P=0,0291) na linhagem MCF10A quando

comparada à MCF-7. Também foram quantificados maiores níveis transcricionais nas células

tumorais triplo-negativas quando comparadas as luminais (P=0,0006). De caráter agressivo, o

tratamento dos tumores triplo-negativos tem sido um desafio. Portanto, compreender sua biologia

se torna crucial e conhecer os mecanismos que regulam seu funcionamento poderá auxiliar na

descoberta de vias-chave para a malignidade desses tumores.

Palavras-chave: TNRC6A, Câncer de Mama, tumores triplo-negativos.


EFEITOS DE DIFERENTES MODALIDADES DE EXERCÍCIO FÍSICO EM

INDIVÍDUOS TREINADOS SOBRE BIOMARCADORES SALIVARES E PLASMÁTICOS

DE ESTRESSE OXIDATIVO E INTENSIDADE DE EXERCÍCIO

Adriele Vieira de Souza1; Jéssica Sanjulião Giolo2; Renata Roland Teixeira1; Leonardo Gomes

Peixoto1; Danielle Diniz Vilela 1; Douglas Carvalho Caixeta1; Guilherme Morais Puga2; Foued

Salmen Espindola1

1Instituto de Biotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, MG; 2Faculdade de Educação Física

e Fisioterapia, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, MG. Email: [email protected]

O aumento das respostas antioxidantes promovido pela prática de exercícios físicos está

associado com a atenuação do estresse oxidativo crônico e à melhora da saúde cardiometabólica

induzida pelo exercício, sendo importante compreender como diferentes tipos de exercício podem

promover diferencialmente estas alterações bioquímicas. Neste estudo, objetivou-se avaliar como

diferentes protocolos de exercício (HIIE: exercício intervalado de alta intensidade, EC: exercício

contínuo, ER: exercício resistido) podem alterar os biomarcadores salivares e plasmáticos de

estresse oxidativo e de intensidade do exercício, além dos níveis de óxido nítrico (NO). 13

indivíduos saudáveis e fisicamente treinados foram submetidos aos 3 protocolos de exercício (HIIE,

EC e RE). Amostras de sangue e saliva foram coletadas nos momentos: pre-exercício, pós-exercício

e 3 horas pós-exercício. Foram avaliados biomarcadores de estresse oxidativo (capacidade

antioxidante total, proteína carbonilada, atividades de superóxido dismutase e catalase, níveis de

glutationa reduzida e ácido úrico, marcadores de intensidade de exercício (proteína total salivar PT

e atividade de amilase) e níveis salivares de NO. Todos os protocolos apresentaram aumento na

concentração de proteína total e atividade de amilase salivar, indicando a alta intensidade dos

testes, além de aumento nos níveis de NO. O perfil de resposta antioxidante das amostras salivares

mostrou-se similar ao plasma, indicando a saliva como uma ferramenta alternativa no estudo do

estresse oxidativo em diferentes protocolos de exercício. A resposta antioxidante aumentou após os

exercícios, de modo que o HIIE mostrou um padrão de resposta antioxidante similar ao EC,

enquanto que o ER apresentou menores alterações. Assim, sugere-se que as adaptações favoráveis

que ocorrem em resposta ao estresse oxidativo induzido pelo exercício possam ser alcançadas de

forma relativamente rápida através da prática do treinamento intervalado de alta intensidade.

Palavras-chave: Estresse oxidativo; exercício; biomarcadores.

Agradecimentos: FAPEMIG, CNPq e CAPES.


ATIVIDADE ANTIPROLIFERATIVA DE COMPOSTOS NATURAIS EM

LINHAGENS DE CÂNCER DE PRÓSTATA

Antonielle Oliveira Cordeiro1,2; Flávia Mirelle Silva1, Mariana Alves Pereira Zóia2; Lara

Vecchi2; Sara Teixeira Soares Mota1,2; Ademar Alves da Silva Filho3, Luiz Ricardo Goulart2;

Thaise Gonçalves Araújo1,2

1Laboratório de Genética e Biotecnologia, Instituto de Biotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia;

2Laboratório de Nanobiotecnologia, Instituto de Biotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia; 3Faculdade de

Farmácia, Universidade Federal de Juiz de Fora. E-mail: [email protected]

O Brasil possui aproximadamente 25% da biodiversidade mundial, com apenas 2% das

espécies caracterizadas. O uso sustentável desses recursos naturais é uma grande oportunidade de

desenvolvimento econômico, sobretudo na área de fármacos. Em oncologia, os quimioterápicos são

amplamente utilizados, contudo, causam diversos efeitos colaterais. Pacientes com Câncer de

Próstata (CaP) são submetidos a esse tipo de terapia sistêmica e sucumbem com as reações

adversas. Portanto, torna-se necessária a busca por formas adicionais ou complementares de

tratamento. Nesse contexto, os produtos naturais emergem como promissores, frente à suas

atividades antioxidantes e antiproliferativas. O CaP se destaca no cenário mundial por sua

frequência, mortalidade e morbidade populacional. Melhores formas de tratamento auxiliarão no

controle da doença e na mudança desse cenário epidemiológico. O presente estudo objetivou

avaliar a atividade antiproliferativa dos extratos de Erimanthus erytropappus e Centaurea

benedicta em células tumorais de CaP. Foram cultivadas as inhagens celulares tumorais de próstata,

PC3 e LNCaP e a linhagem não tumoral, RWPE. O efeito antiproliferativo foi avaliado pelo teste

de MTT por 24 horas nas concentrações de 1,0ug/uL; 0,5ug/uL; 0,25ug/uL e 0,125ug/uL. O extrato

de Erimanthus erytropappus, nas três menores concentrações, agiu sobre as linhagens não tumorais

reduzindo de maneira significativa (P<0,05) sua proliferação quando comparada às demais células.

As células tumorais também diminuíram em mais de 50% sua viabilidade. O extrato de Centaurea

benedicta apresentou efeito citotóxico seletivo às células não-neoplásicas em todas as

concentrações, também significativo em relação às outras linhagens (P<0,05). Novos ensaios são

necessários com outros compostos, visando a busca de novas terapias para o CaP.

Palavras-chave: Extratos vegetais. Câncer de próstata. MTT. Proliferação celular.


ESTUDO IN VITRO DA AÇÃO DE EXTRATOS BRUTOS DAS PLANTAS DO

CERRADO Campomanesiaadamantium E Caryocar brasiliensis NO CONTROLE DO

FUNGO PATOGÊNICO Aspergillusfumigatus

Priscila Silva Ribeiro1; João Lucas Gomes1; Enyara Rezende Morais1 1Laboratório de Bioquímica e Biologia Molecular, Instituto de Biotecnologia, Universidade Federal de

Uberlândia, Campus Patos de Minas, Patos de Minas, MG. E-mail: [email protected]

Aspergilose é uma doença que pode ser causada por fungos do gênero Aspergillus, sendo que,

aproximadamente 90% dos casos são causados pelo Aspergillusfumigatus. O presente estudo teve

como objetivo avaliar in vitro o potencial antifúngico dos extratos vegetais de plantas do bioma

Cerrado, Campomanesiaadamantium(Gabiroba) e Caryocar brasiliensis (Pequi), a fim de avaliar

seu efeito inibitório sobre o fungo patogênico Aspergillusfumigatus.Os extratos foram produzidos a

partir das folhas e cascas das plantas que após liofilizadas foram trituradas. Em seguida, a extração

foi realizada utilizando o solvente etanol absoluto para a folha de gabiroba, etanol 96% para a casca

de pequi, metanol 100% para a folha de pequi. A homogeneização dos extratos ocorreu durante 15

dias com trocas de solventes a cada 3 dias, por fim os extratos foram rotaevaporados. A avaliação

dos extratos brutos sobre o fungo foi realizada em triplicatas independentes comparando com o

antifúngico padrão, porém nenhum dos extratos mostrou efeito inibitório. Portanto, as plantas do

cerrado possuem um alto potencial medicinal e faz-se interessante o estudo das espécies vegetais

que possam estar agindo contra diversos patógenos como o A. fumigatus.

Palavras chave: Fungo patogênico. Bioprospecção. Tratamento.

Fomento e/Agradecimentos: PROPP-UFU. CNPq.

ANÁLISE FITOQUÍMICA E ANTIFÚNGICA DO EXTRATO BRUTO DE Punica

granatum

João Lucas Gomes Costa¹; Leonardo Oliveira Fonseca¹; Joyce Ferreira da Costa Guerra¹;

Enyara Rezende Morais¹ 1Instituto de Biotecnologia, UFU, Patos de Minas, MG. Email: [email protected]

O fungo Aspergillusfumigatus é o agente patogênico da aspergilose pulmonar, uma das

micoses mais graves que acometem os humanos e, ainda, é uma das infecções mais frequentes no

meio nosocomial. Diversos fatores contribuem para que esse quadro seja alarmante, entre eles: a

falta de medicamentos e terapias que sejam realmente efetivas para erradicar o desenvolvimento do

fungo no organismo e a resistência adquirida pelo patógeno aos medicamentos disponíveis. A

utilização de plantas com finalidades terapêuticas tem se mostrado uma medida alternativa

promissora para conter diversas patologias causadas por microrganismos, visto que a célula vegetal

é capaz de sintetizar compostos que apresentam atividade inibitória contra fungos, bactérias e vírus.

O presente estudo objetivou averiguar se o extrato hidroalcóolico bruto das folhas e casca do fruto

de P. granatum (romã) apresentam capacidade de inibir o desenvolvimento do A. fumigatus,

mensurar os fenóis totais e a capacidade antioxidante. Os resultados obtidos, utilizando-se o

método de difusão em ágar, demonstraram que os extratos não apresentam atividade inibitória

sobre o fungo patogênico em estudo, uma vez que não foi observada a formação de halos de

inibição. Quanto a dosagem de fenóis totaispelo método o espectrofotométrico de Folin-

Ciocalteau,a casca do fruto, com 230,20 mg/g, apresentou valor superior ao extrato da folha, com

191,04 mg/g. Sobre a presença de flavonoides, aplicando-se o teste estatístico t, constatamos que

não houve diferença significativa em P< 0,05 entre a casca (29,5 mg/g) e folha (25,9 mg/g). Ainda,

ao avaliar a capacidade antioxidante pelo método de sequestro do radical DPPH, observa-se que ela

é maior na concentração 250 µg/mL de extrato, onde a % de inibição do DPPH de ambas amostras

são superiores a 60%; ressalta-se que não houve diferença significativa (P < 0,05) de atividade

antioxidante entre os extratos da casca e folha em nenhuma das concentrações utilizadas no ensaio.

Dessa forma, apesar de não se ter encontrado atividade antifúngica contra o A. fumigatus, a romã

evidenciou ser uma potencial fonte de metabólitos secundários que possuem atividade antioxidante,

tal como os compostos fenólicos. Tendo em vista que os fenóis também apresentam atividade

antimicrobiana, esse vegetal é um promissor candidato para testes inibitórios contra outros

microrganismos patogênicos ao homem.

Palavras-chave: Doença fúngica. Metabólitos secundários. Desenvolvimento de fármacos.

Fomento: CNPq(IC-20170483), PROPP-UFU.

ÁREA V: BIOTECNOLOGIA DE MICROORGANISMOS

BACTÉRIAS PROBIÓTICAS LACTOBACILLUS PARACASEI ATCC 335,

ADMINISTRADAS POR VIA ORAL, AUXILIAM NO COMBATE À INFECÇÃO

EXPERIMENTAL POR TOXOPLASMA GONDII EM CAMUNDONGOS C57BL/6

Mariele De Fátima Venâncio1, Carlos Antônio Trindade1, Neide Maria Silva1 1Laboratório de Imunopatologia, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, MG.

[email protected]

A infecção por Toxoplasma gondii causa inflamação intestinal em certas linhagens de

camundongos, como C57BL/6, com uma resposta Th1 que se não tratada pode levar a morte dos

animais. A resposta inflamatória nesses animais induzida pela infecção se assemelha aquela que

acontece em doença intestinal inflamatória em humanos, como a doença de Chron. O Lactobacillus

paracasei ATCC 335 é uma bactéria probiótica, que em estudos prévios demonstrou ter uma

capacidade anti-inflamatória, nesse sentido objetivou-se avaliar o efeito da administração oral de

Lactobacillus paracasei no número de células caliciformes e de Paneth no intestino delgado de

animais C57BL/6 experimentalmente infectados. Os camundongos foram tratados por via oral com

100 uL de solução de 1 x 109 CFU de Lactobacillus paracasei diluídas em leite de Molico 3%,

diariamente, durante sete dias antes e sete dias após a infecção oral com 10 cistos da cepa ME-49

de Toxoplasma gondii. Em paralelo, um grupo de animais foi tratado apenas com o veículo, 100

uL de leite Molico 3%, diariamente sete dias antes e sete dias após a infecção oral. Como grupo

controle, tivemos os camundongos não infectados. Os órgãos dos animais foram coletados no 8°

dia de infecção e processados para análise histológica, cortes histológicos foram corados com

hematoxilina e eosina ou Alcian Blue para avaliar células de Paneth ou caliciformes,

respectivamente. Reação de imunohistoquímica foi realizada para quantificação do parasitismo

tecidual. A infecção por Toxoplasma gondii diminuiu o número de células de Paneth e

caliciformes. O tratamento com Lactobacillus paracasei diminuiu o parasitismo intestinal e

preservou, pelo menos parcialmente o número de células de Paneth e caliciformes. Em conjunto

estes dados demonstram que o tratamento com L actobacillus parasei foi capaz de reduzir o

parasitismo e preservar células que são importantes na homeostasia intestinal em animais

infectados com Toxoplasma gondii.

Palavras-chave: Lactobacillus paracasei, Toxoplasma gondii, probióticos.

ANÁLISE IN SILICO DA ATIVIDADE ANTIVIRAL DE PEPTÍDEOS DERIVADOS

DA PROTEÍNA DE FUSÃO DO ENVELOPE DO VÍRUS RESPIRATÓRIO SINCICIAL

Willow de Moura Candeias1; Felipe Belagamba Joffily de Souza1; Elcana Werneck Padua de

Sousa1; Guilherme Ramos Oliveira e Freitas1

1Laboratório de Microbiologia, Instituto de Biotecnologia (IBTEC), Universidade Federal de Uberlândia, Campus

Patos de Minas, MG. E-mail: [email protected]

As infecções respiratórias agudas (IRAs) são responsáveis por uma grande parcela da

mortalidade e morbidade infantil em todo o mundo, sendo o vírus respiratório sincicial (VRS) o

principal agente dessas infecções. Atualmente, não há vacina disponível contra esse patógeno e

assim, o desenvolvimento de peptídeos com atividade antiviral (AVPs) derivados de fontes naturais

se torna uma opção atrativa para o tratamento das IRAS. Utilizando a bioinformática, estudos de

predição de AVPs podem ser realizados, poupando tempo e custos. O objetivo desse estudo foi

avaliar in silico a atividade antiviral de peptídeos específicos derivados da proteína de fusão (F) do

VRS B. 25 sequências de nucleotídeos do gene F do VRS B e as suas respectivas sequências

proteicas foram obtidas a partir do GenBank. Alinhamentos múltiplos progressivos foram

realizados para identificar as regiões conservadas. As sequências consenso para o gene F foram

obtidas através do CAP3 e posteriormente traduzidas com a ferramenta Translate Tool (Expasy). As

regiões conservadas das sequências consenso da proteína F foram usadas nos servidores AVPpred e

AVP-IC50pred para a predição de AVPs. Aqueles com resultados >50% nos modelos de

características físico-químicas e composição de aminoácidos foram modelados tridimensionalmente

com o PEP-FOLD. A partir do AVPpred foram identificados de 9 AVPs inéditos (A, B, C, D, E, F,

G, H e I). A análise de IC50 indicou que as concentrações dos AVPs necessárias para bloquear 50%

da atividade do VRS baseadas na composição de aminoácidos variaram de 0,24 µM a 4,18 µM. Já a

análise baseada nas propriedades físico-químicas mostrou que a concentração necessária para a

maioria dos peptídeos variaram de 1,04 µM a 11,01 µM. Levando em consideração os resultados

obtidos, foram considerados AVPs promissores os compostos A, D, E, F e I. A estratégia aqui

apresentada pode ser uma alternativa para a triagem de AVPs contra o VRS e outros paramixovírus

respiratórios.

Palavras-chave: VRS, bioinformática, AVPs.

Fomento: UFU, FAPEMIG.

ATIVIDADE ANTIVIRAL DE COMPOSTOS NATURAIS E SINTÉTICOS NA

INFECÇÃO DO ZIKV IN VITRO

Daniel Oliveira Silva Martins1,2; Suely Silva1,2; Jacqueline Farinha Shimizu1,2; Luís Octávio

Regasini4; Caroline Sprengel Lima4; Leticia Ribeiro de Assis4; Andres Meritis3; Ana Carolina

Gomes Jardim1,2

1Laboratório de Virologia, Instituto de Ciências Biomédicas, ICBIM, Universidade Federal de Uberlândia, MG,

Brasil; 2Laboratório de Estudos Genômicos, Universidade do Estado de São Paulo, IBILCE, São José do Rio Preto,

Brasil; 3 Instituto de Tecnologia, Universidade de Tartu, Tartu, Estônia; 4 Laboratório de Química Verde e Medicinal,

Universidade do Estado de São Paulo, IBILCE, São José do Rio Preto, Brasil. E-mail: [email protected]

O vírus Zika (ZIKV) pertence à família Flaviviridade e o gênero Flavivirus. É um vírus

envelopado, medindo 25-30 nm, de fita de RNA simples e polaridade positiva com

aproximadamente 22 kb. O vírus é responsável por causar a febre Zika, uma arbovirose que foi

considerada pela Organização Mundial da Saúde um grave problema da saúde pública, devido ao

número de casos de má formação congênita e distúrbios neurológicos vinculados à infecção, como

microcefalia e síndrome de Guillain-Barré. Não existe atualmente antiviral específico contra o

ZIKV. Neste sentido há uma corrida na busca de possíveis candidatos antivirais contra a infecção

do ZIKV. Esse estudo teve como objetivo avaliar a atividade antiviral de doze compostos naturais

ou sintéticos na infecção do ZIKV in vitro. Foram produzidas partículas do ZIKV com repórter de

luminescência nano luciferase. Células vero foram infectadas com ZIIKV nanoluciferase

(MOI=0.1) e tratadas com concentrações não tóxicas de 12 compostos por 72 horas. DMSO foi

utilizado como controle não tratado. A atividade antiviral foi avaliada em ensaios de luminescência

pela quantificação da atividade da enzima Renilla luciferase. Os resultados demonstraram que dois

compostos, um natural extraído da Pterogyne nitens, conhecida com amendoim bravo, e um

sintético inibiram 60 e 70 % a infecção do ZIKV em células vero, respectivamente, demonstrando

que esses compostos são potentes candidatos para o tratamento de infecções com ZIKV. Ensaios

adicionais estão sendo realizados para um melhor entendimento de como esses compostos atuam no

ciclo replicativo do ZIKV.

Palavras chave: zika vírus; antiviral; screening.

Fomento: Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico – 445021/2014-4;

2017BIO026, FAPEMIG (Fundação de Amparo a Pesquisa de Minas Gerais - APQ-00587-14,

SICONV 793988/2013), Royal Society–Newton Advanced Fellowship (NA 150195) e CAPES

(Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior).

INIBIÇÃO DO ZIKV IN VITRO POR PEPTÍDEOS SINTÉTICOS COM

ESTRUTURAS ANÁLOGAS A PROTEÍNAS ISOLADAS DE INSETOS

Débora Moraes de Oliveira1; Daniel Oliveira Silva Martins1,2; Suely da Silva1,2; Jacqueline

Farinha Shimizu1,2; Marcia Perez dos Santos Cabrera2; Carolina Colombelli Pacca3; Andres

Merits4; Ana Carolina Gomes Jardim1,2 1Laboratório de Virologia, Universidade Federal de Uberlândia, UFU, Uberlândia, MG; 2Instituto de Biociências,

Letras e Ciências Exatas, Universidade Estadual Paulista “Júlio Mesquita Filho” UNESP, São José do Rio Preto, SP; 3Instituto de Farmacologia, Faculdade de Medicina em São José do Rio Preto – FACERES; 4Universitade de Tartu,

Tartu, Estônia. E-mail: [email protected]

A febre Zika é uma arbovirose causada pelo vírus Zika (ZIKV) que tem como sintomas febre,

dores musculares, dores nas articulações, irritações na pele, má formação congênita e distúrbios

neurológicos vinculados à infecção, como microcefalia e síndrome de Guillain-Barré. Em 2016, foi

considerada pela Organização Mundial da Saúde como um grave problema de saúde pública devido

ao grande aumento no número de recém-nascidos com microcefalia. Não existe atualmente vacina

ou tratamento antiviral eficaz contra a infecção por ZIKV, se fazendo necessário o

desenvolvimento emergencial de novas terapêuticas. Peptídeos sintetizados com base em moléculas

naturais bioativas se apresentam como uma abordagem alternativa para novas terapias, sendo uma

fonte rica para o desenvolvimento de antivirais. Deste modo, o presente trabalho teve como

objetivo avaliar os efeitos de peptídeos sintéticos, desenvolvidos com base em moléculas naturais

isoladas de venenos de insetos, na infecção do ZIKV in vitro. Para avaliar o efeito dos peptídeos no

ZIKV, foram utilizadas células Vero e o vírus ZIKV-Nanoluc, uma construção viral que possui o

gene repórter Nanoluc. As células com o ZIKV foram tratadas com os peptídeos em diferentes

concentrações por 72 horas e submetidas a ensaio viabilidade celular (MTT) e replicação

(Luciferase). Dentre os peptídeos selecionados, os resultados mostraram que os peptídeos 1 e 3

inibiram cerca de 90% a infecção do ZIKV e o peptídeo 2 inibiu mais de 90% da infecção do vírus

em concentrações não tóxicas para as células. Análises adicionais serão realizadas para avaliar o

modo de ação dos peptídeos e em qual etapa do ciclo replicativo do vírus esses peptídeos agem.

Palavras-chave: ZIKV, Peptídeos, Atividade antiviral.

Fomento: CNPq (Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico –

445021/2014-4; 2017BIO026), FAPEMIG (Fundação de Amparo à Pesquisa de Minas Gerais -

APQ-00587-14, SICONV 793988/2013), Royal Society–Newton Advanced Fellowship (NA

150195), CAPES (Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior).

CARACTERIZAÇÃO DAS PROTEÍNAS LIC11711 E LIC12587 DE Leptospira

interrogans COM COMPONENTES DO SISTEMA COMPLEMENTO DO HOSPEDEIRO

Leandro Toshio Kochi1,2; Luis Guilherme Virgílio Fernandes1; Gisele Oliveira de Souza3;

Sílvio Arruda Vasconcellos3; Marcos Bryan Heinemann3; Eliete Caló Romero4 e Ana Lucia Tabet

Oller Nascimento1 1Laboratório Especial de Desenvolvimento de Vacinas, Instituto Butantan, São Paulo, SP; 2Instituto de Ciências

Biomédicas, Universidade de São Paulo, São Paulo, SP; 3Laboratório de Zoonoses Bacterianas, Faculdade de Medicina

Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, São Paulo, SP; 4Centro de Bacteriologia, Instituto Adolfo Lutz,

São Paulo, SP. E-mail: [email protected]

A leptospirose é uma zoonose de ocorrência mundial, causada por espécies patogênicas de

Leptospira. Ainda não foram elucidados todos os mecanismos envolvidos na evasão o sistema

imune, contudo algumas proteínas de membrana externa de leptospira já foram descritas como

ligantes de componentes ou reguladores do sistema complemento, garantindo o sucesso do

patógeno na disseminação e colonização dos órgãos-alvo. Neste trabalho, duas proteínas putativas

codificadas pelos genes LIC12587 e LIC11711 de L. interrogans foram caracterizadas quanto à

localização celular e a interação com componentes do sistema complemento. As proteínas

recombinantes rLIC11711 e rLIC12587 foram expressas em E. coli DE3 Star pLysS e purificadas

por cromatografia de afinidade ao metal. Para o ensaio de localização das proteínas nativas, as

células intactas de L. interrogans patogênica e L. biflexa saprófita foram imobilizadas e detectadas

com antissoro homólogo e anticorpo secundário anti-camundongo/HRP por ELISA. Foi avaliado a

capacidade de ligação das proteínas recombinantes aos componentes do sistema complemento

provenientes de soro humano e a afinidade de ligação por dose-resposta quantitativa por ELISA. As

proteínas recombinantes foram expressas e purificadas da fração solúvel após cromatografia de

afinidade ao Ni2+. Ambas as proteínas foram detectadas em L. interrogans intactas, mas ausentes na

L. biflexa saprófita. LipL31, uma proteína citosólica, foi obtida apenas em nível basal, sugerindo

que ambas as proteínas estão expostas na superfície da bactéria. LIC11711 recombinante ligou-se à

C8 e vitronectina, enquanto que a rLIC12587 interagiu de forma dose-dependente e saturável com

C7, C8 e C9 da via terminal do sistema complemento, além da vitronectina. As proteínas também

foram capazes de capturar os componentes do soro humano. Os resultados indicam que as proteínas

tem o potencial de capturar componentes da via terminal do sistema complemento, auxiliando na

evasão imune das leptospiras.

Palavras-chave: leptospirose, proteína recombinante, sistema complemento.

Agradecimentos: CNPq, FAPESP e Fundação Butantan.

ESTUDO DA CONCENTRAÇÃO DE AÇÚCARES E PRESENÇA DE NUTRIENTES

NA FERMENTAÇÃO DO MELAÇO DE CANA-DE-AÇÚCAR

Cristiane Vieira Camargos1, Adam Gonçalves Arruda¹, Vitória Demétrio Moraes1, Júlia

Arakaki Peres1, Carla Zanella Guidini1, Líbia Diniz Santos1

1Laboratório de Processos Fermentativos e Enzimáticos, Faculdade de Engenharia Química, Universidade Federal

de Uberlândia, Campus Patos de Minas, Patos de Minas, MG. E-mail: [email protected]

O bioetanol é uma alternativa ao uso dos combustíveis fósseis, desempenhando papel

econômico, ambiental e social. Com a finalidade de reduzir os custos de produção, estudos são

impulsionados na direção de encontrar leveduras e processos alternativos que alcancem altos

rendimentos para a fermentação alcoólica. A utilização de leveduras floculantes permite a

eliminação da etapa de centrifugação, devido sua habilidade de decantar na ausência de açúcares

fermentescíveis. O objetivo deste trabalho foi avaliar o rendimento alcóolico da fermentação de

solução de melaço em diferentes concentrações na presença e ausência de nutrientes. A levedura

utilizada no processo foi a Saccharomyces cerevisiae C2/00 de características floculantes. A

fermentação, realizada em triplicata, foi conduzida em shaker, à 32°C e 150 rpm por um período de

18 horas, com concentração celular de 18% de célula decantada. O meio utilizado foi a base de

melaço de cana-de-açúcar (83°Brix) nas concentrações de 16,4; 20,5 e 24,6% v/v, com presença e

ausência de nutrientes: KH2PO4 (5 g/L), MgSO4∙7 H2O (1 g/L), [NH4]2SO4 (2 g/L) e extrato de

levedura (6 g/L). O pH do meio foi corrigido para 4,5 com adição de ácido clorídrico. Nos tempos 0

e 18 horas foram retiradas amostras para determinação da concentração de açúcares e etanol por

cromatografia líquida de alta eficiência e concentração celular por contagem em câmara de

Neubauer. O rendimento alcóolico foi determinado como a razão do etanol produzido pelo açúcar

total adicionado, e esta razão por sua vez foi dividida pelo rendimento teórico. Para todas condições

estudadas os rendimentos obtidos apresentaram valores próximos, sendo o maior rendimento

(72,47%) encontrado na fermentação da solução de melaço 16,4% v/v na ausência de nutrientes. No

estudo verificou-se que a presença de nutrientes não influenciou positivamente no rendimento da

fermentação.

Palavras-chave: Bioetanol, Floculante, Melaço de cana-de-açúcar.

Fomento e/ou Agradecimentos: Fapemig, Capes, CPQBA.

AVALIAÇÃO QUÍMICA E MICROBIOLÓGICA IN VITRO DE EXTRATOS

GLICÓLICOS COMERCIAIS PARA O DESENVOLVIMENTO DE FORMULAÇÕES

FITOCOSMÉTICAS

Tamara Marques da Silva1,Valeska Nathane Mendes2, Gustavo Magalhães Moreira2,

Guilherme Ramos Oliveira e Freitas2, Marcos de Souza Gomes1, Enyara Rezende Morais1

1Laboratório de Bioquímica e Biologia Molecular, Instituto de Biotecnologia, Universidade Federal de

Uberlândia, Campus Patos de Minas, Patos de Minas, MG. 2Laboratório de Microbiologia, Instituto de Biotecnologia,

Universidade Federal de Uberlândia, Campus Patos de Minas, Patos de Minas, MG. E-mail:

[email protected]

Extratos vegetais glicólicos são amplamente utilizados em formulações cosméticas devido às

várias atividades clínicas atribuídas aos mesmos. O presente trabalho teve por objetivo selecionar a

partir de quatro extratos glicólicos comerciais não padronizados: Alecrim (Rosmarinus officinalis),

Calêndula (Calendula officinalis), Barbatimão (Stryphnodendron barbatiman) e Erva doce

(Pimpinella anisum), os com maiores teores de polifenóis, maior atividade antioxidante e

antimicrobiana, para o desenvolvimento de formulações cosméticas. Foram realizados testes in

vitro para controle de três espécies de bactérias Gram-positivas Staphylococcus aureus,

Staphylococcus epidermidis e Enterococcus faecalis, duas espécies de Gram-negativas Escherichia

coli e Pseudomonas aeruginosa e sobre fungo o Aspergillus fumigatus. O método de difusão em

ágar foi utilizado, os extratos testados na concentração de 500 mg/mL e os resultados foram

expressos pelo diâmetro do halo de inibição. Para avaliar a atividade antioxidante destes extratos,

realizou-se o método de sequestro de radicais livres DPPH, e a determinação do teor de fenólicos

totais pelo método colorimétrico Folin-Ciocalteu. Os extratos que apresentaram conteúdos de

compostos fenólicos (EqAG/g) e potencial antioxidante (AA) em sequestrar radicais livres foram o

de barbatimão (10,38 mg Eq AG/g e AA % igual a 94%, respectivamente) e o de alecrim (3,39 mg

Eq AG/g e AA% igual a 26%, respectivamente). Diante destes resultados, ambos os extratos

glicólicos foram selecionados para ser acrescentada a base cosmética. Estes extratos se mostraram

capazes de inibir o crescimento microbiano de bactérias Gram-positivas quando incorporados á

formulação de sabonete líquido. Portanto, devido ao alto teor de fenóis nestes extratos, metabolitos

esses que podem ser responsáveis pela atividade antioxidante encontrada, podendo ser utilizados

como antioxidantes naturais, ou seja, conservantes naturais que podem ser empregados pelas

indústrias de cosméticos.

Palavras–chave: Fitocosméticos. Antioxidante. Produtos naturais.

EXPRESSÃO E EFEITO CITOTÓXICO DE UMA PROTEASE CLONADA DA

PEÇONHA DE Bothrops pauloensis SOBRE DIFERENTES LINHAGENS TUMORAIS

Marília de Freitas Oliveira 1; Anna Cecília Vieira Carneiro1; Tassia Rafaella Costa2; Daiana

Silva Lopes1; Suely Vilela Sampaio2; Kelly Aparecida Geraldo Yoneyama1; Veridiana de Melo

Rodrigues1; Renata Santos Rodrigues1

1Laboratório de Bioquímica e Toxinas Animais, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, MG; 2Departamento de Análises Clínicas e Toxicológicas, Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, SP. E-mail:

[email protected]

Bothrops pauloensis é uma serpente peçonhenta característica da região do Triângulo Mineiro.

Na busca por moléculas que apresentam interesse biotecnológico e farmacêutico, as toxinas de

serpentes têm sido alvo de estudo de diversos pesquisadores. Vários artigos demonstraram o efeito

de toxinas isoladas de peçonha de serpentes em inibir a proliferação celular e promover a morte de

células tumorais. Apesar do papel das serinoproteases ser bem elucidado na hemostasia, sua

atividade antitumoral e citotóxica ainda é desconhecida. Nesse estudo, objetivou-se expressar uma

serinoprotese recombinante (rBpSP-I) clonada da peçonha de Bothrops pauloensis e a analisar seu

efeito citotóxico por MTT em diferentes linhagens tumorais. A expressão da rBpSP-I em Pichia

pastoris foi feita em dois estágios. No primeiro estágio houve o crescimento das células no meio

BMGY, já o segundo ocorreu a indução da expressão da proteína de interesse no meio BMMY por

96 horas. Após 96 horas, o sobrenadante foi purificado por cromatografia de afinidade em resina

Ni-NTA Superflow. Posteriormente, atividades citotóxicas foram feitas por MTT em células

tumorais (HL-60, HepG2, MCF7) e células não tumorais (Hek293 e PBMC). Nos ensaios

citotóxicos, os resultados indicaram que a rBpSP-I mostrou pouca citotoxicidade às células não

tumorais, mas mostrou atividade citotóxica às células tumorais. A rBpSP-I (50µg/mL) apresentou

apenas 19,11% de citotoxicidade em uma das linhagens celulares não tumorais (Hek-293). A maior

citotoxicidade da rBpSP-I (6,25µg/mL) às células tumorais foi observada na linhagem MCF7 com

36,29% de morte celular. Portanto, o sistema de expressão de Pichia pastoris permitiu uma

expressão e purificação eficiente da rBpSP-I, a qual apresentou um efeito citotóxico sobre

diferentes linhagens tumorais.

Palavras-chave: Serinoproteases, Proteína Recombinante, Efeito Citotóxico.

Fomento e/ou Agradecimentos: FAPEMIG, CNPq, CAPES, FAPESP, USP, UFU.

DESENVOLVIMENTO BIOTECNOLÓGICO PARA PRODUÇÃO DE ÁCIDOS

ORGÂNICOS DE INTERESSE COMERCIAL

Isabela Nascimento Tardivo1, Vitor Olien Sanches1, Felipe Santos Moreira1, Fabiana Regina

Xavier Batista1, Vicelma Luiz Cardoso1, Juliana de Souza Ferreira1

1Núcleo de Processos Biotecnológicos, Faculdade de Engenharia Química da Universidade Federal de Uberlândia,


Os ácidos orgânicos são compostos de extrema importância em diversas indústrias, com

destaque nas indústrias de alimentos e bebidas, onde atuam como aditivos, agentes de

processamento e conservantes. Portanto, estudos para promover avanços na produção destes

compostos por fermentação a partir de fontes de carbono renováveis devem ser abordados. Diante

da necessidade de se alcançar rotas alternativas para a produção desses metabólitos, propôs-se neste

trabalho o uso da Enterobacter cloacae, em fermentações com a presença e ausência de luz. As

fermentações foram conduzidas em batelada alimentada, utilizando um biorreator tipo tanque

agitado de 1,5 L, em condições anaeróbicas, à temperatura de 30°C e pH de 5,5. Empregou-se um

volume reacional de 700 mL, sendo 1,6% v/v de inóculo e 98,4% v/v de meio sintético. Para

manter o sistema anaeróbio, borbulhou-se nitrogênio após a inoculação do meio para retirada do

oxigênio dissolvido. Utilizou-se a glicose como substrato, com concentração inicial ajustada para

10 g/L no meio caldo nutriente. Amostras do caldo fermentado foram analisadas através de

metodologias de cromatografia líquida de alta performance (HPLC) e a concentração celular

determinada através de espectrofotometria (λ= 650 nm). Através dos resultados obtidos, observou-

se que os principais produtos ao final das fermentações foram ácido lático, ácido butírico, seguidos

de ácido acético e ácido propiônico. Nos ensaios sem a presença de luz, foi favorecida a produção

significativa dos ácidos lático (14,45 g/L) e butírico (6,26 g/L), enquanto nos ensaios com a

presença de luz, o ácido lático teve destaque em produção em relação aos outros ácidos, atingindo

12,32 g/L. As rotas trazem resultados satisfatórios para a produção dos ácidos orgânicos. Uma

maior investigação faz-se necessária, de modo a induzir a maior produção do ácido orgânico

desejado.

Palavras-chave: ácidos orgânicos, Enterobacter cloacae, fermentação.

Fomentos e agradecimentos: CAPES, CNPq, FAPEMIG e Vale S.A.

AVALIAÇÃO DA PARTIÇÃO ENZIMÁTICA DE LIPASES OBTIDAS POR

FERMENTAÇÃO EXTRATIVA UTILIZANDO PEG/SULFATO DE AMÔNIO

Natália B. Melani1; Lara D. Sette2; Edgar Silveira3; Elias B. Tambourgi1

1Faculdade de Engenharia Química, Universidade Estadual de Campinas, Campinas, SP; 2Departamento de

Bioquímica e Microbiologia, Universidade Estadual Paulista Campus Rio Claro, Rio Claro, SP; 3Instituto de

Biotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, MG. E-mail: [email protected]

Lipases (E.C. 3.1.1.3) são enzimas que realizam a hidrólise de triacilglicerois em ácidos graxos

e glicerol. Devido à sua capacidade e enantioseletividade e regioseletividade, aplicações em

diversas áreas (alimentícias, têxteis, farmacêuticas e de biodiesel), fazem-nas um produto de

importante valor no mercado. O gargalo dos processos biotecnológicos encontra-se, principalmente,

na etapa de purificação, controlando os custos do processo. Sendo assim, o objetivo do trabalho foi

integrar os processos de fermentação e extração de lipases frio-adaptadas de Metschnikowia

australis. As fermentações extrativas foram realizadas em frascos de erlenmeyer de 250 mL com 50

g de meio de cultura contendo: peptona 0,2% (p/v), nitrato de sódio 0,2% (p/v), ureia 0,2% (p/v),

extrato de levedura 0,4% (p/v), azeite de oliva 2% (p/v), 2, tween 80 2% (p/v), glicerol (p/v),

polietilenoglicol (PEG) 6000 20% (p/p) e sulfato de amônio 8% (p/p), sendo a massa final

completada com tampão fosfato de sódio. Diferentes pHs (6 e 7,4) foram testados e as fermentações

foram conduzidas à temperatura ambiente por 144 h à 200 rpm. A atividade enzimática e as

proteínas totais das fases foram quantificadas a cada 24 h para avaliação dos parâmetros coeficiente

de partição enzimática (Ke) e recuperação de lipase. As melhores condições foram notadas às 120

horas em pH 7,4, com log Ke 9,59 e 86,8% de recuperação. Isso demonstra que a lipase particiona

preferencialmente na fase superior (rica em PEG). A queda nos valores registrados no último ponto

deve-se pelo crescimento celular e a massa molecular do PEG acarretarem no aumento na

viscosidade da fase superior, limitando a transferência de oxigênio e compromentendo a produção

da lipase. Conclui-se que esta metologia demonstrou-se capaz de ser aplicada como método

primário para isolar a enzima dos outros componentes do extrato durante o processo de

fermentação.

Palavras-chave: Polietilenoglicol, Metschnikowia australis, Sistema Bifásico Aquoso.

Fomento e/ou Agradecimentos: CNPq, CAPES.

CULTIVO DE BACTÉRIAS PÚRPURAS SULFUROSAS EM MEIO CONTENDO

MELAÇO DE SOJA PARA A PRODUÇÃO DE ÁCIDOS ORGÂNICOS

Warley Rosa Cunha1, Julia Barbosa Villani de Araujo2, Priscilla Stephanie Lamounier2, Juliana

de Souza Ferreira2

1Instituto de Genética e Bioquímica, 2Núcleo de Processos Biotecnológicos, Faculdade de Engenharia Química.

Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, MG. E-mail: [email protected]

Nas últimas décadas, tem-se observado avanços significativos na produção de ácidos orgânicos

pela transformação de biomassa via fermentação microbiana. Estes ácidos orgânicos podem ser

usados diretamente, neste caso destaca-se o uso para a aplicação na indústria de alimentos, como

também constituem moléculas chaves para a produção de outros compostos químicos. Neste

contexto, este trabalho abordou a produção de ácidos orgânicos por bactérias púrpuras não-

sulfurosas empregando o melaço de soja como fonte de carbono. Comparou-se o sistema

Rhodobacter capsulatus em cultura pura e em co-cultura (1:1) com a Rhodopseudomonas palustris.

Os ensaios foram realizados em frascos de penicilina de 100 mL, sendo 75% de volume útil, sendo

que o volume de inóculo foi de 10%. O meio de fermentação foi constituído de efluente

proveniente de fermentação por consórcio microbiano anaeróbio, suplementado com os minerais e

vitamina do meio RCV e a concentração inicial de açúcares de 10 g/L provenientes do melaço de

soja. Em seguida, os frascos foram lacrados e seringas graduadas inseridas no septo para

armazenamento do biogás produzido. Os frascos foram mantidos a 30 °C e intensidade luminosa de

2200 lux. Em intervalos de 2 dias foram coletadas amostras para análise de açúcares e metabólitos

por HPLC. A concentração inicial de ácidos no efluente foi de 18 g/L de ácido butírico, 9,7 g/L de

ácido láctico e 0,7 g/L de cada um dos ácidos acético e propiônico. Durante a fermentação, houve

produção maior de ácido láctico e ácido acético, sendo que a concentração atingiu 26 g/L e 6 g/L

respectivamente. A concentração de ácido butírico sofreu um ligeiro aumento de 15% e o ácido

propiônico foi consumido. Este trabalho, mostra que as bactérias, altamente empregadas na

produção de hidrogênio, também podem ser usadas para a produção de ácidos orgânicos,

vinculando o aproveitamento de um resíduo agroindustrial (melaço de soja) como biomassa para a

produção de composto de valor agregado.

Palavras-chave: ácidos orgânicos, biomassa, fotofermentação.

Fomentos e agradecimentos: CAPES, CNPq, FAPEMIG e Vale S.A.

AVALIAÇÃO DO EQUILÍBRIO LÍQUIDO-LÍQUIDO VARIANDOTIPO DE SAL E

MASSA MOLECULAR DE POLIETILENOGLICOL (PEG)

Victor Borges Zema Rosa1; Larissa Ribeiro Polli1; Arthur Godoy Cottas1; Érica Ohta

Watanabe1 e Juliana de Souza Ferreira1 1Núcleo de Processos Biotecnológicos, Faculdade de Engenharia Química, Universidade Federal de Uberlândia,

Uberlândia. Email: [email protected]

Os sistemas bifásicos aquosos (SABs) são formados por soluções aquosas de dois polímeros ou

um polímero e um sal, formando duas fases e sendo aplicados na separação de biomoléculas.

Recentemente os SABs têm sido empregados para recuperação de ficobiliproteínas (FBP), que são

pigmentos fotossintéticos solúveis em água encontrados em cianobactérias e algas vermelhas. O

objetivo deste trabalho foi a determinação das curvas binodais a 15ºC dos sistemas polietilenoglicol

(PEG)-sal. Foram usados PEG com diferentes pesos molares (1500 e 6000) e os sais empregados

foram fosfato de potássio, sulfato de amônio e citrato de sódio. A curvas binodais foram obtidas por

turbidimetria, a partir de soluções estoque dos polímeros e dos sais com concentração de 50%

(m/m) e 30% (m/m), respectivamente. Em tubos falcon, foram pipetadas amostras de 5 mL da

solução estoque de PEG, variando de 5% até 50%, sempre com diluições utilizando água

deionizada. Os tubos foram colocados em banho termostático a 15ºC por 1 hora e foi acrescentada a

cada amostra um volume de solução de sal de modo a atingir a turbidez no sistema, sendo este

volume utilizado para o cálculo do equilíbrio líquido-líquido e obtenção da curva binodal. Após o

equilíbrio, as amostras foram recolocadas no banho por 24 horas, para garantir o equilíbrio. Dentre

os resultados obtidos, observou-se que o aumento da massa molecular do PEG favoreceu a

separação das fases. Sobre o efeito do sal, não houve diferença significativa entre as curvas

contendo sulfato de amônio e citrato de sódio, sendo que o fosfato de potássio foi o sal que mais

favoreceu a separação de fases. A partir das curvas binoidais obtidas neste trabalho, será possível

definir as composições globais que resultem em sistemas bifásicos a serem utilizadas, em

sequência, no estudo da composição de PEG-sal que leve a maior recuperação de ficobiliproteínas

de cianobactérias.

Palavras-chave: Sistemas aquosos bifásicos, Curva binodal, Ficobiliproteínas.

Fomento e/ou Agradecimentos: Os autores agradecem pelo apoio da FAPEMIG, CNPq e

CAPES.

ANÁLISE DA HIDROFOBICIDADE CELULAR DA LEVEDURA Rhotodorula

mucilaginosa

Gabriel Silame Corte1; Hugo Almeida Camargo1; Antônio Manoel Drumond de Oliveira

Rocha1; Thamirys Gimenes Coutinho de Sousa1; Edgar Silveira Campos1

1Laboratório de Bioquímica, Universidade Federal de Uberlândia, Campus Santa Mônica, Uberlândia, MG. E-


Acreditava-se, antigamente, que os microrganismos estavam suspensos nas soluções, porém

com o avanço dos estudos foi comprovado que grande parte deles está, na verdade, aderido em

biofilmes interfaciais (liquido-ar ou sólido-ar) e que essa fixação se dá devido a hidrofobicidade

celular e a carga de sua membrana. Esta adesão celular pode acarretar problemas de higiene dentro

de certos locais, como por exemplos em indústrias. Este trabalho avaliou a hidrofobicidade da

levedura Rhotodorula mucilaginosa, codificada como L69, em querosene, óleo de soja e óleo

mineral utilizando leveduras de uma pré-cultura que foram lavadas e suspendidas com tampão

PUM (22,02 g.L-1 K2HPO4.3H2O, 7,26 g.L-1 KH2PO4, 1,8 g.L-1ureia, 0,2 g.L-1 MgSO4.7H2O)

em um volume final de 100mL e uma densidade ótica ( a 600nm) de 1,0. Vários volumes (0; 0,4;

0,8 e 1,2) de hidrocarboneto (querosene, óleo de soja e óleo mineral) foram adicionados a

suspensão de células, a qual foi incubada a 30°C por 10 minutos, e logo após foram agitadas em

vortex por 120 segundos seguido de um descanso de 10 minutos para que o hidrocarboneto se

separasse da fase aquosa. Após isso, foi retirado a amostra e a absorbância da fase aquosa foi

medida a 600nm. O óleo de soja foi o que apresentou maior porcentagem de hidrofobicidade (de

aproximadamente 80%) em todos os volumes, ao contrário da querosene e do óleo mineral , que

apresentaram uma hidrofobicidade menor (abaixo de 20% para todos os volumes testados) e por

conta disso, um maior efeito do biossurfactante. Com isso foi possível concluir que a levedura,

Rhotodorula mucilaginosa, apresentou elevada hidrofobicidade no óleo de soja, mostrando assim

que este não é o meio mais recomendável para o uso em experimentos. Além disso, fica evidente

que o óleo mineral e a querosene apresentaram bons resultados e devem ser os utilizados como

meio em ensaios com os biossurfactante.

Palavras-chave: biofilmes, hidrofobicidade, levedura.

Agradecimento: CNPq.

COMPARAÇÃO DE DIFERENTES METODOLOGIAS PARA A EXTRAÇÃO DE

BIOSSURFACTANTE

Antônio Manoel Drumond de Oliveira Rocha¹; Thamirys Gimenes Coutinho de Sousa²; Hugo

Almeida Camargo¹; Gabriel Silame Corte¹; Edgar Silveira Campos¹. E-mail:

[email protected] 1Universidade Federal de Uberlândia, Instituto de Genética e Bioquímica; 2Universidade Federal de Uberlândia,

Faculdade de Engenharia Química.

Os biossurfactantes são moléculas caracterizadas pela sua natureza anfipática, sendo polar e

apolar ao mesmo tempo. Esses compostos despertaraminteresse das indústrias, devido a sua

capacidade de reduzir a tensão superficial e interfacial do meio e sua capacidade de emulsificação.

Os biossurfactantes apresentam vantagens em relação aos surfactantes químicos, por serem

biodegradáveis e possuírem baixa toxicidade. O trabalho teve como objetivo analisar seis diferentes

metodologias para a extração do biossurfactante através de diferentes solventes, com intuito de

descobrir o melhor solvente, ou seja, o que produz um maior rendimento. A primeira metodologia

utilizou acetato de etila (99,5%) e metanol (99,9%) em uma proporção de 4:1, segundo Rivardo et.

al. 2009. Na segunda metodologia,Sen et. al. 2017 propôso acetato de etila (99,5%) como solvente.

Na metodologia três, de acordo com Lopes et. al. 2015 acetato de etila (99,5%)foi o solvente

selecionado para realizar a extração, enquanto que na quarta metodologia utilizou uma solução de

clorofórmio (100% puro) e metanol (99,9%) na proporção (2:1), Silva et. al. 2010.A metodologia

cinco, utilizou o acetato de etila (99,5%) como solvente, de acordo com Daverey e Pakshirajan,

2010. Por fim, na metodologia seis, acetona fria (99,5%) a 4ºC foi o solvente selecionado para

extração, conforme Pruthi e Cameotra, 1995.De acordo com os resultados obtidos o solvente que

apresentou melhor desempenho em extrair o biossurfactante do meio fermentado foi a acetona fria,

ou seja, a metodologia seis, obtendo um rendimento de aproximadamente 27 g.L-1.A partir dos

dados obtidos decidiu-se substituir o método de extração quatro pelo seis nos experimentos futuros

do projeto.

Palavras-chave: biossurfactante, extração, rendimento.

Fomento e/ou Agradecimentos: CNPQ e FAPEMIG.

AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE LIPOLÍTICA DOS EXTRATOS DE FUNGO

CULTIVADO EM CAFÉ, SOJA E ARROZ

Luiza Hipólito Mundim Porto1; Nícollas Emanuel Tolentino Melo1; Lucas Pires Rodrigues1;

Líbia Diniz Santos2; Gilvan Caetano Duarte1,3; Rosana Maria Nascimento de Assunção4 1Laboratório de Bioquímica e Biologia Molecular, Universidade Federal de Uberlândia, Campus Patos de Minas,

Patos de Minas, MG; 2Laboratório de Processos Fermentativos e Enzimáticos, Universidade Federal de Uberlândia,

Campus Patos de Minas, Patos de Minas, MG; 3Laboratório de Microscopia, Universidade Federal de Uberlândia,

Campus Patos de Minas, Patos de Minas, MG; 4Laboratório de Reciclagem de Polímeros, Universidade Federal de

Uberlândia, Uberlândia, MG. E-mail: [email protected]

Lipases (E.C.3.1.1.3) constituem um importante grupo de enzimas responsáveis pela hidrólise

de ligações éster de acilgliceróis. Podem ser encontradas em animais e vegetais, produzidas por

fungos e bactérias,além de possuírem diversas aplicações, na indústria, farmácia, dentre outras. Um

fungo componente da microbiota de amostras de solo do interior da Mata de Galeria do Parque

Municipal do Mocambo, em Patos de Minas, foi avaliado quanto à produção de enzimas lipolíticas.

O isolado fúngico foi cultivado em meio submerso, em erlenmeyers contendo 1% dos resíduos

lignocelulósicos das safras agrícolas de soja, café e arroz, por cinco dias, a 28°C e 100 rpm.

Posteriormente, os extratos fúngicos foram submetidos a filtração a vácuo e utilizados nos ensaios

de atividade lipolítica.Para tal, 0,1 mL dos filtrados enzimáticos foi misturada com 0,9 mL de meio

reacional, contendo p-nitro fenil palmitato (pNFP). A mistura foi submetida a dois banhos, um a

50ºC por 10 minutos e o outro a 92ºC por dois minutos. Depois dos banhos, 1 mL de tetraborato

saturado foi adicionado e, posteriormente,fez-se a quantificação do p-nitro fenilem

espectrofotômetro a 410 nm, formado pela atividade de lipase do extratosfúngico. Atividade

lipolítica correspondeu a 2,04.10-1 U/mL, 3,80.10-1 U/mL e 0,25.10-2 U/mL, respectivamente,

para os extratos brutos dos resíduos do café, soja e arroz. Além de identificar a capacidade de

produção de enzimas lipolíticas pelo fungo cultivado, os resultados evidenciam que diferentes

resíduos influenciam em diferentes níveis no processo de produção de lipases pelo fungo.O estudo

confirma a capacidade produção de lipases pelo fungo isolado no Parque Municipal do Mocambo e,

dentre os substratos utilizados no cultivo do isolado, o resíduo da soja proporcionou expressiva

produção destas enzimas.

Palavras-chave: substrato; enzima; atividade lipolítica.

SELEÇÃO DE MICRORGANISMOS PRODUTORES DE CELULASE PARA A

PRODUÇÃO DE ETANOL DE SEGUNDA GERAÇÃO

Adam Gonçalves Arruda1; Cristiane Vieira Camargos1; Larissa Soares de Menezes1; Líbia

Diniz Santos1; Carla Zanela Guidini1

1Universidade Federal de Uberlândia, Campus Patos de Minas, Patos de Minas, MG. E-mail:

[email protected]

O setor energético é de grande relevância econômica no Brasil quanto para diversos países no

mundo. Combustíveis fosseis são os mais empregados, mas que acarretam em impactos ambientais

e são uma fonte não renovável. Para substituir e suprir essa grande demanda a utilização de

biocombustíveis tem tido grande interesse econômico. O etanol de segunda geração (E2G) que é

produzido a partir de material lignocelulósico tratado, muitas das vezes como resíduos ou

subprodutos, tem sido uma alternativa promissora, mas por outro lado as usinas possuem desafios

para tornar viável a operação em larga escala. Uma das principais operações do processo é a

hidrólise enzimática, etapa de alto custo. Este trabalho teve como objetivo avaliar o uso de variadas

cepas de fungos para obtenção de complexos enzimáticos para produção de E2G. Foram avaliadas

oitos cepas de fungos produtores de celulases. Estes microrganismos foram cultivados em placas de

petri em meio PDA (Potato Dextrose Agar), durante três dias, em seguida inoculados em meio

Czapek líquido durante 48 h para que a concentração celular chegasse na ordem de 106 esporos/mL.

Na produção do complexo enzimático foi utilizado a fermentação em estado sólido (FES), com

60% de bagaço de cana e 40% de farelo de arroz como substrato, juntamente com as células do

inóculo e 40g de água, durante 72 h e temperatura controlada (28 ± 2 ºC). Os resultados dos

complexos enzimático foram expressos em termos da atividade de celulase (FPase). Os fungos que

apresentaram resultados mais promissores para a produção de celulase foram: Penicillium oxalicum

0,069 FPU/ml, Trichoderma reesei 0,054 FPU/ml, Mucor racemosus 0,044 FPU/ml. O E2G tem

uma grande perspectiva a médio longo prazo, devido a possibilidade do reaproveitamento de

diversos resíduos agroindustriais. No entanto, a sua aplicação industrialmente tem um cenário a ser

aprimorado devido aos custos elevados na obtenção dos complexos enzimáticos, além da

otimização das operações envolvidas.

Palavras-chave: Biocombustível, Fermentação, Fungos.

Agradecimentos: FAPEMIG e CNPq, pelo apoio financeiro.

ÁREA VI: BIOTECNOLOGIA VEGETAL

CITOTOXICIDADE E PRODUÇÃO DE ÓXIDO NÍTRICO EM CÉLULAS RAW 264.7

TRATADAS COM EXTRATO AQUOSO DE Campomanesia xanthocarpa

Luana do Nascimento Pinto1; Vitor Hugo Sanchez Silva1; Danielle Reis Napolitano1; Luiz

Borges Bispo-da-Silva1; Celene Maria Oliveira Silva Alves1

1Departamento de Farmacologia, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade Federal de Uberlândia,


A família Myrtaceae compreende várias espécies encontradas principalmente em regiões

tropicais e subtropicais, como a Campomanesia xanthocarpa. Taninos e flavonoides,metabólitos

secundários detentores de atividades anti-inflamatórias, já foram identificados no extrato aquoso

das folhas da referida espécie. Assim, no presente estudo investigamos os possíveis efeitos anti-

inflamatórios e citotóxicos do extrato aquoso das folhas da Campomanesia xanthocarpaem células

macrophage-like RAW 264.7. O extrato aquoso foi obtido a partir das folhas secas,

trituradas,colocadas em água destilada (20%, m/v) e mantidas à temperatura ambiente por 48 horas.

O extrato obtido foi congelado, liofilizado e acondicionado em freezer a -20oC até a utilização. A

citotoxicidade do extrato daC. xanthocarpa foi avaliada empregando-se o ensaio de MTT

(tetrazólio de metiltiazol) e a produção de óxido nítrico (NO) foi quantificada pelo método de

Griess.Células RAW 264.7 (2x104 células/200 μL) foram tratadas com concentrações crescentes de

extrato (1,95 a 500 μg/mL) por 24 horas e, posteriormente, pulsadas com MTT (0,5 mg/mL). Para a

determinação de NO, as células (1x106 células/200µL) foram tratadas com diferentes concentrações

do extrato de C. xanthocarpa (1,95 a 500 μg/mL) ou com LPS (0,5 μg/mL). O extrato aquoso da

C.xanthocarpa apresentou citotoxicidade em concentrações superioresa125 µg/mL (p<0,05), como

evidenciado pela baixa viabilidade celular quando comparada àquela de células não-tratadas

(controles). Em concentrações iguais ou inferiores a 62,5 µg/mL, o extrato não foi capaz de induzir

a produção de NO em células RAW 264.7 (p>0,05). Portanto, o extrato da

Campomanesiaxanthocarpa parece interferir com o ciclo celular em células RAW 264.7 e, em

concentrações não citotóxicas, não constitui estímulo suficiente para induzira produção de NO.

Palavras-chave: Campomanesia xanthocarpa, citotoxicidade, anti-inflamatório.

Agradecimentos: Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós-Graduação (PROPP/UFU).

AVALIAÇÃO DA CITOTOXICIDADE E DA ATIVIDADE ANTI-INFLAMATÓRIA

IN VITRO DO EXTRATO AQUOSO DAS FOLHAS DA Eugenia dysenterica

(MYRTACEAE)

Vitor Hugo Sanchez Silva1; Luana do Nascimento Pinto1; Danielle Reis Napolitano1; Luiz

Borges Bispo da Silva1; Celene Maria de Oliveira Simões Alves1 1Laboratório de Farmacologia, Departamento de Farmacologia, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade

Federal de Uberlândia, Uberlândia, MG. E-mail: [email protected]

A Eugenia dysenterica é uma espécie vegetal nativa do Cerrado brasileiro, pertencente à

família Myrtaceae. Estudos fitoquímicos demonstraram que essa espécie produz, dentre os

metabólitos secundários, flavonoides e taninos, os quais possuem atividades anti-inflamatórias.

Contudo, até o presente momento, não existem trabalhos que tenham avaliado o potencial anti-

inflamatório da referida espécie. Assim, o presente estudo investigou possíveis efeitos citotóxicos e

anti-inflamatórios do extrato aquoso das folhas da Eugenia dysenterica utilizando modelo

experimental in vitro. Células da linhagem macrophage-like RAW 264.7 foram tratadas com

diferentes concentrações de extrato durante 1 e 24 horas. Em seguida, a citotoxicidade foi avaliada

por meio do método de conversão do azul de tiazolil (MTT) e a produção de óxido nítrico (NO) foi

quantificada nos sobrenadantes das culturas pelo método de Griess. Os dados obtidos mostraram

que houve redução da viabilidade celular apenas em células tratadas durante 24 horas com as

maiores concentrações do extrato (500 e 250 μg/mL; p<0,05). Em células tratadas com

concentrações intermediárias (125,0 a 31,25 μg/mL; p<0,05), foi observado aumento da viabilidade

celular. Portanto, o extrato aquoso das folhas da Eugenia dysenterica apresenta um efeito dual,

concentração dependente, sobre a viabilidade celular, induzindo tanto citotoxicidade como

estimulando a proliferação celular. Os efeitos opostos observados podem estar relacionados a

diferenças na concentração de substâncias citotóxicas e mitogênicas no extrato. Macrófagos

ativados expressam a síntese do óxido nítrico induzível (iNOS) e produzem NO, um importante

mediador inflamatório; contudo, o extrato não foi capaz de estimular a produção de NO. Assim,

apesar de não interferir com a produção de NO, os efeitos mitogênicos do extrato aquoso das folhas

da Eugenia dysenterica sugerem um possível efeito imunomodulador, cuja natureza pró ou anti-

inflamatória merece ser investigada.

Palavras-chave: Eugenia dysenterica, citotoxicidade, óxido nítrico.

Agradecimentos: Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós-Graduação (PROPP) / UFU.


COMPOSTOS BIOATIVOS DE Bauhinia forficata COM ATIVIDADES

ANTIOXIDANTE E ANTIGLICANTE

Victor Hugo Mota Alves1; Rodrigo Franco Rodrigues1; Luiz Fernando Ribeiro Zabisky1;

Allison Benatti Justino1; Foued Salmen Espindola1

1Laboratório de Bioquímica e Biologia Molecular, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, MG. E-mail:

[email protected]

A pata-de-vaca (Bauhinia forficata) é uma espécie nativa do Cerrado, cujas folhas são

tradicionais no tratamento complementar do Diabete Mellitus tipo 2 (DMT2). A literatura mostra

diversos estudos envolvendo a planta, que por sua vez apresenta potencial proeminente para

combater a hiperglicemia e o estresse oxidativo. O objetivo deste trabalho foi investigar a atividade

antioxidante e antiglicante das frações do extrato etanólico das folhas de B. forficata bem como sua

atividade citotóxica pelo método de hemólise. A partição líquido-líquido foi realizada com os

solventes: hexano (H), diclorometano (D), acetato de etila (E), n-butanol (B) e água residual (A).

As propriedades antioxidantes foram avaliadas pelos métodos FRAP (capacidade de redução do íon

ferro), ORAC (Capacidade de absorção de radicais de oxigênio) e DPPH (2,2-difenil-1-

picrilhidrazil). A capacidade antiglicante foi avaliada pelos métodos albumina sérica bovina

(BSA)/Frutose, BSA/metilglioxal (MGO) e Arginina (R)/MGO. A capacidade hemolítica foi

determinada utilizando-se amostra de sangue de ratos Wistar. As análises indicaram que os

melhores resultados antioxidantes pelos métodos de FRAP (mmol Trolox eq/L) E: 1,46; B: 1,48 e

A: 1,20 (Ác. ascórbico: 1,67), ORAC (mmol Trolox eq/g de extrato) H: 1,25; D: 1,37; E: 1,29; B:

1,23 e (Ác. ascórbico: 1,48); e no IC50 DPPH (μg/ml): E: 0.2±1.1; B: 0.8±0.5 e A: 1.4±0.8 0 (Ác.

ascórbico: 1.1±1.8). Os melhores resultados para a antiglicação (μg/ml) foram: BSA/frutose: E:

9,7±2,5; B: 9,0±3,0 e A: 11,66±2,82, quercetina: 10,97±3,641; BSA/MGO: H: 452±171; E:

289±107, quercetina: 38,13±5,604; e R/MGO: H:389±99; E: 305±68, quercetina: 18,77±1,205. As

frações não mostraram atividade hemolítica: H (25±6,8); D (82±26); E (37±19); B (21±14) e

A(15±12). Assim, estes resultados abrem novas perspectivas para a identificação e isolamento dos

constituintes presentes nessas frações, subsidiando estudos futuros para avaliar o potencial

antidiabético das folhas de B. forficata.

Palavras-chave: Bauhinia forficata, antioxidantes, glicação proteica, diabetes.

PROSPECÇÃO DAS PROPRIEDADES ANTIOXIDANTES, ANTIGLICANTES E

CAPACIDADE HEMOLÍTICA DOS COMPOSTOS BIOATIVOS PRESENTES NO

EXTRATO ETANÓLICO DAS FOLHAS DE Syzygium cumini (L.) Skeels (JAMBOLÃO)

Luiz Fernando Ribeiro Zabisky1, Rodrigo Franco Rodrigues1, Victor Hugo Mota Alves1,

Allisson Benatti Justino1, Foued Salmen Espindola1

1Laboratório de Bioquímica e Biologia Molecular, Universidade Federal de Uberlândia, Campus Umuarama,


Syzygium cumini (L.) Skeels, conhecido como jambolão, é uma árvore de origem asiática usada

popularmente como planta medicinal para diabetes. O objetivo deste estudo foi fracionar o extrato

etanólico da folha de S. cumini e avaliar seu potencial antioxidante, antiglicante e sua capacidade

citotóxica pelo método hemolítico. O particionamento líquido-líquido foi realizado com os

solventes: hexano (H), diclorometano (D), acetato de etila (Ac), n-butanol (B) e água residual (A).

As propriedades antioxidantes foram avaliadas pelos métodos FRAP (determinação do poder de

redução do íon ferro), ORAC (Capacidade de absorção de radicais de oxigênio) e DPPH (2,2-

difenil-1-picrilhidrazil). A capacidade antiglicante foi avaliada pelos métodos BSA(albumina sérica

bovina) /Frutose (FRUT), BSA/Metilglioxal(Met) e Arginina/Met. A capacidade hemolítica foi

determinada em eritrócitos de ratos Wistar. As frações possuem propriedades antiglicantes e

antioxidantes promissoras como revelaram as análises. Para capacidade antioxidante observou-se:

FRAP (H: 161,0; D: 635,5; Ac: 1154,5; B: 1178,3; A: 1187,1 mmol Trolox eq/L), ORAC(H:

1125,2; D: 1326,9; Ac: 1242,6; B: 1313,5; A: 1370,3 mM trolox eq/g de extrato) e DPPH IC50(H:

377,5±67,1; D: 43,7±5,9; Ac:15,7±2,4; B: 23,5±2,7; A: 31,4±3,9 mg.mL-1). Os ensaios de

antiglicação apresentaram: BSA/FRUT(IC50: H: 53,9±11,0; D: 16,3±3,9; Ac: 8,2± 2,3; B: 9,4±2,9;

A: 8,3±1,7 µg.mL-1), Arginina/Met (IC50: H: 88,5±32,1; D: 382,0±80,7; Ac: 128,9±31,4; B:

117,2±25,0; A: 821,6± 225,9 µg.mL-1). Para o ensaio BSA/MET não houve atividade. As frações

de S.cumini comparadas ao controle não demonstraram capacidade hemolítica (µg.mL-1):

H(2,7±0,9); D(3,0±1,5); Ac(8,8±2,9); B (30,1±14,2) e A (48,3±31,2). Portanto, as atividades

antioxidante, antiglicante e a ausência de hemólise potencializam S.cumini como planta medicinal.

Estudos estão sendo conduzidos para determinar a melhor fração para reduzir o estresse oxidativo

em modelo experimental de diabetes mellitus.

Palavras-chave: Syzygium cumini, produto natural, estresse oxidativo.

IDENTIFICAÇÃO DOS FATORES ASSOCIADOS À PATOGENICIDADE E

VIRULÊNCIA DE Xylella Fastidiosa 9A5C E FB7

Jessica Brito de Souza1; Hebréia Oliveira Almeida Souza1; Paulo Adriano Zaini1,2; Aline

Gomes de Souza1; Luiz Ricardo Goulart Filho1; Abhaya M. Dandekar2; Rafael Nascimento1

1Laboratório de Nanobiotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, MG; 2Departamento de

Ciências Vegetais, Universidade da Califórnia, Davis, EUA. E-mail: [email protected]

Xylella fastidiosa (Xf) é uma bactéria que coloniza o xilema das plantas, causando doenças

com impacto econômico relevante. A cepa 9a5c foi isolada de laranjeira no Estado de São Paulo e a

cepa FB7, isolada de laranja na Argentina. Técnicas de genômica funcional e de genética molecular

possibilitam uma comparação detalhada destes genomas com outras fitobactérias. Tal fato reforça a

hipótese de que os mecanismos de infecção de Xf consistem em múltiplos fatores, porém a grande

maioria ainda são desconhecidos. Tendo isso em vista, este trabalho tem como objetivo analisar e

identificar os fatores associados à patogenicidade e virulência de Xf 9a5c e Xf FB7. Considerando-

se que a cepa FB7 é mais virulenta que a 9a5c foi feita uma análise proteômica diferencial das

proteínas do lisado da cultura celular de ambas as cepas, na qual identificou-se 119 proteínas

diferencialmente sintetizadas. Para validar esta análise foi realizada a qRT-PCR. Foi possível

observar que praticamente todas as proteínas avaliadas foram mais expressas na cepa Fb7. Estudos

prévios indicaram que a enzima lipase (LipA) é um importante fator de virulência na infecção de Xf

Temécula. Para avaliar a influência dessa enzima na infectividade de 9a5c e FB7 avaliou-se a

atividade esterásica e lipásica dos extratos bacterianos. A atividade esterásica, determinada por

meio do substrato 4-metilumbeliferil butirato (4-MUB), apresentou valores significativos e

distintivamente expressos. No caso, a cepa FB7 exibiu uma atividade consideravelmente maior

quando comparado a 9a5c. A atividade lipásica foi analisada pelo cultivo das bactérias em meio

PD3 ágar – suplementado com 1% de tributinina. Neste teste verificou-se a maior formação do halo

na cepa FB7. Os resultados indicam que a LipA de Xf 9a5c e FB7 exerce um importante papel na

infectividade destas cepas e esse estudo contribuiu para a identificação e compreensão dos

principais fatores de virulência que são responsáveis pela patogenicidade dessas cepas de Xf.

Palavras-chave: Proteômica, Fitopatógeno, Lipase.

Fomento: FAPEMIG.

SELEÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE PEPTÍDEOS INIBIDORES DE UMA

LIPASE/ESTERASE (LesA) ENVOLVIDA NA VIRULÊNCIA DO FITOPATÓGENO

Xylella fastidiosa

Hebréia Oliveira Almeida Souza1;Jessica Brito de Souza1; Luiz Ricardo Goulart Filho1;

Abhaya M. Dandekar2; Rafael Nascimento1

1Laboratório de Nanobiotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, MG; 2Departamento de

Ciências Vegetais, Universidade da Califórnia, Davis, EUA. E-mail: [email protected]

Xylella fastidiosa é uma bactéria fitopatogênica responsável por diversas doenças com um

amplo espectro de hospedeiros de grande importância econômica. Resultados obtidos anteriormente

por nosso grupo de pesquisa comprovaram que a proteína LesA está diretamente envolvida na

virulência da bactéria X. fastidiosa na Doença de Pierce (PD) da videira. Essa bactéria é também

responsável por causar a doença Clorose Variegada do Citros (CVC) que é um dos principais

fatores limitantes da produção de laranjas no Brasil. Assim, tornou-se necessários estudos do

envolvimento da proteína LesA na virulência da cepa 9a5c, causadora da CVC no Brasil. Este

trabalho caracterizou parcialmente o papel da proteína LesA de X. fastidiosa 9a5c como fator de

virulência envolvido na patogênese da CVC. Foi possível correlacionar os sintomas foliares da

CVC e a presença da enzima LesA, como observado na PD. Verificou-se que a proteína LesA

também é secretada por X. fastidiosa 9a5c, como observado na cepa Temecula 1 causadora da PD

e a presença dessa proteína foi comprovada no proteoma das folhas de citros infectadas comparado

às folhas sadias. Esses resultados indicam que a enzima LesA possui um importante papel no

processo de infecção das plantas pela X. fastidiosa causadora da CVC. Posteriormente, fizemos a

seleção de peptídeos inibidores da atividade enzimática da proteína LesA recombinante por phage

display. Foram selecionados três peptídeos com capacidade de inibir a atividade enzimática em até

45%. Esses peptídeos foram sintetizados quimicamente e avaliada sua capacidade inibitória sendo

que dois deles mostraram-se muito promissores com inibição superior a 70% avaliando-se a

enzima purificada. Esses peptídeos são possivelmente aplicáveis como ferramenta biotecnológica

no desenvolvimento de plantas geneticamente modificadas que sejam mais resistentes à CVC e à

Doença de Pierce.

Palavras-chave: Clorose Variegada do Citros, Doença de Pierce, Phage display.

Fomento: Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq).

DISSIMILARIDADE GENÉTICA ENTRE MATRIZES DE UMA POPULAÇÃO DE

PEQUIZEIRO (Caryocar brasiliense) PRODUTORES DE FRUTOS COM E SEM

ESPINHOS NO ENDOCARPO

Bruno Henrique Gomes1, Mariana Gonçalves Mendes2, Paula Guimarães Rabelo1, Marcos

Vieira de Faria1, Ana Maria Bonetti2, Ana Paula Oliveira Nogueira1

1Laboratório de Genética e Melhoramento de Plantas, Instituto de Biotecnologia, Universidade Federal de

Uberlândia, Uberlândia, MG. 2Laboratório de Genética, Instituto de Biotecnologia, Universidade Federal de

Uberlândia, Uberlândia, MG. E-mail: [email protected]

O pequizeiro (Caryocar brasiliense) é uma planta frutífera nativa do cerrado brasileiro que tem

seus frutos amplamente consumidos. A caracterização biométrica traz informações importantes que

em conjunto permitem a diferenciação de espécies congêneres, além de permitir a seleção de

matrizes mais produtivas e adaptadas a determinados ambientes. Este trabalho teve como objetivo

agrupar diferentes matrizes de pequizeiro oriundos de uma população que apresentam frutos com e

sem espinhos no endocarpo. Foram analisados 11 descritores de natureza quantitativa, por meio da

medição dos frutos. Os caracteres avaliados foram massa de fruto, altura de fruto, comprimento de

fruto, largura de fruto, altura de caroço, comprimento de caroço, diâmetro de caroço, massa de

caroço, massa da casca, espessura da casca e rendimento de pirênios. Os dados foram submetidos à

estatística descritiva e, posteriormente, seguida de análise multivariada UPGMA (Unweighted Pair-

Group Method using Arithmetic Avarages). Ao adotar o corte em 40% das distância genéticas, o

dendrograma obtido pelo UPGMA mostrou os genótipos distribuído em três grupos e permitiu a

identificação de parentais para cruzamentos, sendo que o ideal além de selecionar genótipos

pertencentes a grupos distintos também selecione os que possuem bom desempenho para as

características de interesse.

Palavras-chave: Cerrado, pequi, diversidade.

Fomento: FAPEMIG, CAPES.

INFLUÊNCIA DE REGULADORES DE CRESCIMENTO NA DIFERENCIAÇÃO

CELULAR in vitro DE EXPLANTES FOLIARES DE PEQUIZEIRO

Ana Paula Caetano Procópio1, Bruno Henrique Gomes1, Mariana Gonçalves Mendes2, Marcos

Vieira de Faria1, Ana Maria Bonetti2, Ana Paula Oliveira Nogueira1

1Laboratório de Cultura de Tecidos Vegetais, Instituto de Biotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia,

Uberlândia, MG; 2Laboratório de Genética, Instituto de Biotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia,


O pequizeiro (Caryocar brasiliense) apresenta sementes com baixa taxa de germinação, assim

as técnicas de cultivo in vitro são importantes para a produção e micropropagação de mudas em

larga escala. O objetivo deste trabalho foi avaliar o comportamento de explantes foliares juvenis de

pequizeiro na regeneração in vitro. Foram realizados dois tratamentos com os seguintes reguladores

de crescimento: Ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D: 0, 1, 2 e 4 mg L-1) x Cinetina (KIN: 0, 1, 2

e 4 mg L-1) e Ácido indol butírico (AIB:0, 1, 2 e 4 mg L-1) x Cinetina (0, 1, 2 e 4 mg L-1). Cada

tratamento foi composto por três repetições e cada repetição por um frasco de cultivo contendo 10

explantes, em um delineamento inteiramente casualizado. O meio de cultura foi composto por 0,7%

de ágar e 3% de sacarose, pH = 5,8, sendo autoclavado a 121 ºC com 1,1 atm, antes da inoculação.

Ao final dos 60 dias foram avaliados a porcentagem de enraizamento e formação de calos. Os

dados foram submetidos a análise de variância e as médias comparadas pelo teste Tukey (p ≤ 0,05).

Foi observada a capacidade de diferenciação dos explantes foliares em calos e raízes. Foram

encontrados calos friáveis e compactos, com coloração variando entre branco, verde e marrom, com

média de 8 e 15 calos nos tratamento com 2,4-D 1 mg L-1 associado com KIN 1 mg L-1 e 2 mg L-1,

respectivamente. Com bases na contagem do número de raízes por explante, foi notado que a

utilização de AIB isolado (média de 14 raízes) ou em associação com 1 mg L-1 de KIN (média de

18 raízes) foi eficaz no processo de rizogênese. De acordo com os resultados obtidos e nas

condições testadas, explantes foliares de pequizeiro apresentam competência e totipotência,

podendo ser empregados em processo de micropropagação in vitro.

Palavras-chave: Calogênese, Rizogênese, Fito hormônios.

Fomento: FAPEMIG.

ANÁLISE DE GERAÇOES EM SOJA PARA CARACTERES DA FASE

VEGETATIVA

Marcella Alves Nogueira1; Bruna Alves Mundim Borges1; Ana Paula Oliveira Nogueira1;

Osvaldo Toshiyuki Hamawaki1; Jade Alves Martins1 1Programa de Melhoramento de Soja da Universidade Federal de Uberlândia (UFU), Uberlândia, MG. E-mail:

[email protected]

Entre as principais espécies cultivadas, a soja [Glycine max (L.) Merrill] é a oleaginosa com

maior área plantada no mundo e a principal cultura no país. Nessa cultura, a hibridação artificial é

essencial para o desenvolvimento de novas cultivares, uma vez que, de cruzamentos entre parentais

bons e contrastantes, são desenvolvidas populações com variabilidade genética, para aplicação de

métodos apropriados de avaliação e seleção de caracteres superiores. Objetivou-se nesse

estudo,estimar parâmetros genéticos para caracteres da fase vegetativa em soja na população F2

proveniente do cruzamento entre TMG801 x BMX Desafio. O experimento foi conduzido em

campo, na Fazenda Capim Branco da Universidade Federal de Uberlândia. O plantio foi feito em

cova, em 6 linhas de 12 metros, contendo 22 plantas do parental 1 (TMG 801), 20 plantas do

parental 2 (BMX Desafio), 10 plantas F1 e 217 plantas F2, dispostas de forma intercalada, com

espaçamento de 30cm. Foram avaliadas,no estádio vegetativo V4, o comprimento do epicótilo

(CE), do primeiro internódio (1ºI), comprimento do pecíolo da folha unifoliolada (CPU) e da

trifoliolada (CPT) e o comprimento da raque (CR) e os dados foram analisados no Programa Genes.

As variâncias fenotípicas foram 0,70, 0,41, 0,12, 2,52 e 0,08 para CE, 1ºI, CPU, CPT e CR,

respectivamente, enquanto as variâncias genotípicas foram de 0,12 para CE, 0,10 para 1ºI, 0,0075

para CPU, 0,82 para CPT e 0,01 para CE. A herdabilidade variou de 6,47% a 32,54%, sendo

considerada de baixa magnitude para todos os caracteres em estudo, indicando que grande parte da

variância encontrada, não é resultante de causas genéticas. Conclui-se que para todos os caracteres,

a variância genotípica não foi a maior causa da variância fenotípica, indicando grande influência

ambiental.

Palavras-chave: Glycinemax, avanço de geração, parâmetros genéticos.

Agradecimentos: Ao CNPq e a Fapemig pelo apoio financeiro.

ÁREA VII: NANOBIOTECNOLOGIA

AVALIAÇÃO DA INIBIÇÃO DA ATIVIDADE ENZIMÁTICA POR INTERAÇÕES

COM NANOPARTÍCULAS DE OURO ULTRAPEQUENAS

André L. Lira1; Rodrigo S. Ferreira1; Maria Luiza V. Oliva1; Alioscka A. Sousa1

1 Departamento de Bioquímica, Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo, SP, Brasil. E-


A capacidade de regular a atividade enzimática através de interações controladas com

receptores sintéticos oferece um meio para modular os processos biológicos intra e extracelulares.

Devido as suas dimensões nanométricas, química superficial semelhante a proteínas e facilidade de

síntese, as nanopartículas de ouro (NPs) podem ser projetadas para atuarem como receptores

sintéticos, potencialmente permitindo a regulação de processos moleculares importantes, tais como

atividade enzimática e interações proteína-proteína. O objetivo deste trabalho foi investigar as

interações moleculares de NPs de ouro ultrapequenas com proteases e verificar o impacto dessas

interações na atividade enzimática. Nestes estudos, α-trombina e proteína C ativada (APC) foram

utilizadas como proteases modelo. NPs ultrapequenas (2 nm em diâmetro) foram passivadas com

ácido p-mercaptobenzóico (AuMBA) conferindo carga total negativa. As biointerações moleculares

entre AuMBA e as enzimas foram caracterizadas por fluorescência no estado estacionário. Os

ensaios enzimáticos na presença de AuMBA foram quantificados pela hidrólise de substratos

cromogênicos. Os experimentos foram realizados em tampão Tris suplementados com 100 mM de

NaCl. Os ensaios de fluorescência revelaram que as NPs interagem com ambas enzimas. As

interações com NPs causaram inibição parcial da atividade enzimática da trombina (~ 60%) e

inibição total da APC (~ 90%). Dados de fluorescência também mostraram que as interações

induziram a modificações estruturais no sítio ativo da trombina. Em suma, os resultados sugerem

que interações com NPs são capazes de regular a atividade enzimática de proteases.

Palavras-chave: Nanopartículas de Ouro, Inibição, Atividade Enzimática.

Agradecimentos: FAPESP, CNPq and CAPES.

BIOADESIVO NANOESTRUTURADO LIPÍDICO-BIOPOLIMÉRICO PARA

ANESTESIA TÓPICA EM MUCOSA ORAL

Lígia Nunes de Morais Ribeiro1, Michelle Franz-Montan2, Ana Clécia Santos de Alcântara3,

Viviane Aparecida Guilherme1, Simone Ramos de Castro1, Gustavo Henrique Rodrigues da Silva1,

Eneida de Paula1

1Departamento de Bioquímica e Biologia Tecidual, Instituto de Biologia, Universidade Estadual de Campinas,

Campinas, SP; 2Departamento de Ciências Fisiológicas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba, Universidade

Estadual de Campinas, Piracicaba, SP; 3Departamento de Química, Instituto de Química, Universidade Federal do

Maranhão, São Luís, MA. E-mail: [email protected]

A administração de anestésicos locais em Odontologia é o principal fator que ocasiona fobia e

dor. Muitas vezes é o motivo do abandono do paciente ao tratamento, o que resulta em severas

consequências para sua saúde bucal. Os anestésicos tópicos foram criados com o intuito de aliviar a

sensação dolorosa inerente à injeção e administração do fármaco. Entretanto, as formulações

comercialmente disponíveis apresentam baixa eficácia e o avanço científico relatado na área ainda é

escasso. A atual pesquisa compreende o desenvolvimento de carreadores lipídicos nanoestruturados

(NLC) que encapsulam uma mistura eutética entre lidocaína e prilocaína (ambas à 2,5%). Tal

componente lipídico nanoestruturado foi incorporado em matrizes biopoliméricas à base de

quitosana e pectina, processados como bioadesivos, para uso em anestesia tópica em mucosa oral,

na busca de uma maior eficiência e menor toxicidade. A caracterização dos bioadesivos lipídico-

biopoliméricos foi realizada por espectroscopia no infravermelho (FTIR-ATR), análise térmica

(DSC), microscopia eletrônica de varredura (MEV) e de transmissão (MET). O perfil in vitro de

liberação foi avaliado através de célula de difusão vertical do tipo Franz e quantificado por

cromatografia líquida de alta eficiência. A biocompatibilidade e eficácia das formas farmacêuticas

foram elucidadas por ensaios de viabilidade celular com células 3T3 e HaCat pelo método de MTT,

e de atividade analgésica in vivo em camundongos (Tail Flick). A caracterização estrutural

demonstrou uma excelente compatibilidade entre os excipientes, comprovando o desenvolvimento

de um novo nanomaterial. O perfil de liberação observado por ambos os anestésicos foi bimodal,

com eficiente efeito de burst release nas horas iniciais, acompanhado de uma liberação prolongada

por até 24 horas. A biocompatibilidade foi comprovada pelo estudo de viabilidade celular por

ambas as linhagens celulares testadas e a analgesia superficial em camundongos foi demonstrada

por até 7 horas, sendo aproximadamente 4 vezes mais eficiente que a formulação comercialmente

disponível.

Palavras-chave: Anestesia tópica, carreadores lipídicos nanoestruturados, biopolímeros.

Fomento e/ou Agradecimentos: Processo FAPESP 2014/25372-0.

BIOELETRODO PARA DETECÇÃO DO DNA DE ALICYCLOBACILLUS

ACIDOTERRESTRIS EM SUCO DE MANGA

José Manuel Rodrigueiro Flauzino1; Eduardo Loureiro Pimentel2; Ana Graci Brito-Madurro1;

João Marcos Madurro2

1Instituto de Biotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia-MG; 2Instituto de Química,

Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia-MG. E-mail: [email protected]

Alicyclobacillus acidoterrestris é uma bactéria associada à contaminação de sucos de frutas.

Seus esporos resistem à pasteurização e, quando reativados, modificam as propriedades

organolépticas do suco, impactando negativamente na indústria agrícola brasileira. Visando o

desenvolvimento de um biossensor para controle da qualidade do suco de manga, este trabalho

relata a detecção eletroquímica do DNA genômico de Alicyclobacillus acidoterrestris no alimento

supracitado. Eletrodos de grafite modificados com um nanocompósito de óxido de grafeno reduzido

eletroquimicamente e poli(ácido 3-hidroxibenzóico) foram usados como eletrodo de trabalho, fio de

platina como eletrodo auxiliar e Ag/AgCl como eletrodo de referência. Um oligonucleotídeo

específico para Alicyclobacillus acidoterrestris foi utilizado como sonda, e um lisado da bactéria

como alvo. A solução contendo a sonda foi gotejada sobre o eletrodo de trabalho, o qual foi

incubado e tratado com albumina de soro bovino. Posteriormente, suco de manga contaminado com

o lisado foi gotejado sobre este eletrodo. Lavagens com solução tampão fosfato foram efetuadas

após cada etapa. Os eletrodos com e sem a presença do lisado foram avaliados por voltametria de

pulso diferencial, monitorando-se o pico de oxidação do composto Hoechst 33258, um ligante do

sulco menor do DNA dupla fita. Foi observado um aumento de 28% nos valores de corrente do

pico de oxidação do Hoechst 33258, após incubação com o alvo, indicando a hibridização da sonda

com o DNA presente no lisado. Os resultados indicam a aplicabilidade deste bioeletrodo para

detecção de Alicyclobacillus acidoterrestris, visando o controle da qualidade do suco de manga.

Palavras-chave: bioeletrodo, Alicyclobacillus acidoterrestris, suco de manga.

Fomento: FAPEMIG, CAPES, CNPQ e Rede Mineira de Química.

VACINA ANTI-ANAPLASMOSE BOVINA UTILIZANDO NANOTUBOS DE

CARBONO DE PAREDES MÚLTIPLAS FUNCIONALIZADOS COMO CARREADORES

Leticia Santos Pimentel1; Carolina Alvarenga Turini1; Paula de Souza Santos1; Luiz Orlando

Ladeira2; Clascidia Aparecida Furtado3; Luiz Ricardo Goulart1; Paula Cristina Batista de Faria1 1Laboratório de Nanobiotecnologia, Instituto de Genética e Bioquímica, Universidade Federal de Uberlândia,

Uberlândia; 2Laboratório de Nanomateriais, Departamento de Física, Instituto de Ciências Exatas, Universidade Federal

de Minas Gerais, Belo Horizonte; 3Laboratório de Química de Nanoestruturas de Carbono, Centro de Desenvolvimento

da Tecnologia Nuclear (CDTN/CNEN), Belo Horizonte. E-mail: [email protected]

Introdução: A anaplasmose bovina é causada pela bactéria gram-negativa intraeritrocitária

Anaplasma marginale. A doença está relacionada a significativas perdas econômicas na pecuária

bovina como baixo ganho de peso, diminuição na produção de leite, abortos, custos com o

tratamento dos animais e perdas por mortalidade. Os nanotubos de carbono (CNTs) são alótropos

de carbono compostos por folhas de grafeno organizadas de forma tubular. Devido a sua incrível

resistência mecânica e a sua capacidade de atravessar membranas biológicas e entregar

biomoléculas no citoplasma, os CNTs vêm se mostrando uma ferramenta interessante para o

desenvolvimento de vacinas. Objetivos: Nesse estudo avaliamos o potencial do peptídeo sintético

Am1 acoplado a Nanotubos de Carbono de Paredes Múltiplas (MWCNT) de induzir a produção de

anticorpos antígeno-específicos contra A. marginale em comparação à vacinação com o peptídeo

administrado sem as nanopartículas como carreadores. Metodologia: Os animais foram imunizados

por meio de três injeções via subcutânea com intervalos de quinze dias e então desafiados com a

bactéria A. marginale. Foram avaliados quanto a mudança de peso, sobrevivência e a resposta

imune humoral por meio de ELISA. Resultados: Os animais apresentaram peso corporal estável e

nenhuma mortalidade. A imunização com o peptídeo Am1 acoplado ao MWCNT induziu a

produção de anticorpos semelhante ao peptídeo Am1 com Adjuvante de Freund. Conclusão: Os

animais imunizados com o peptídeo Am1 acoplado ao MWCNT não tiveram uma resposta imune

melhor que os animais imunizados com o peptídeo sem as nanopartículas.

Palavras-chave: Nanotubo de carbono de parede múltipla, anaplasmose bovina, vacina.

Apoio financeiro: CAPES, FAPEMIG e CNPq.

DESENVOLVIMENTO DE BIOELETRODO PARA DETECÇÃO DE MARCADOR

ESPECÍFICO PARA DISTÚRBIOS DA TIREOIDE

Barbara Duarte Cunha¹; José Manuel Rodrigueiro Flauzino¹; João Marcos Madurro¹; Ana

Graci Brito-Madurro¹

¹Laboratório de Biossensores Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, MG. E-mail:

[email protected]

Este trabalho consiste no desenvolvimento de um bioeletrodo para diagnóstico molecular do

hormônio tireoidiano, através da incorporação de sondas específicas sobre superfície de grafite

modificada, sendo capaz de imobilizar um anticorpo específico para a detecção de L-triiodotironina

(L-T3), um dos hormônios produzido pela tireoide, um marcador para diversos distúrbios

hormonais. Os estudos eletroquímicos foram realizados em célula eletroquímica de três

compartimentos acoplada a um potenciostato, sendo eletrodo de trabalho de grafite (EG), eletrodo

auxiliar de platina e eletrodo de referência Ag/AgCl. Foi feita sobre a superfície dos eletrodos de

grafite a redução eletroquímica por voltametria cíclica de Óxido de Grafeno (OG), em tampão

fosfato (0,1 mol L-1, pH: 7,4, 10 varreduras, entre 0 V e -1,5 V, 50 mVs-1). Os eletrodos

modificados com o OG reduzido eletroquimicamente (EG/OGRE) foram modifiados com

politiramina (PTir). Os eletrodos contendo o filme polimérico e o nanocompósito foram analisados

em solução de HClO4 (0,5 mol.L-1, 2 varreduras, entre 0 V e 0,85 V, 50 mV s-1). Para os testes de

imobilização, 20 μL da solução do anticorpo anti L-T3 (25 µg.mL-1) foram gotejados sobre os

EG/OGRE/PTir. Para o bloqueio da superfície foram gotejados 30 μL de solução bloqueadora de

soro albumina bovina (BSA) 0,5%. Para a detecção foi utilizado 25 µL de solução de L-T3 (0,25

ng/ml). Observou-se pela técnica de voltametria de pulso diferencial um aumento no pico de

oxidação referente ao aminoácido triptofano (~0,7 V vs. Ag/AgCl) com a adição do alvo, indicando

uma possível mudança conformacional do anticorpo anti L-T3, na qual podem ter ficado expostos à

oxidação mais resíduos desse aminoácido. Estes resultados indicam a aplicabilidade desde

bioeletrodo na detecção de hormônios tireoidianos.

Palavras-chave: Biossensor; hormônio tireoidiano; grafite.

Fomento e/ou Agradecimentos: FAPEMIG, CNPq e Pró-reitoria de Pesquisa e Extensão da

Universidade Federal de Uberlândia (Propp-UFU).

AVALIAÇÃO DA BIODISTRIBUIÇÃO E DA TOXICIDADE AGUDA IN VIVO DE

NANOTUBOS DE CARBONO DE PAREDES MÚLTIPLAS

Carolina Alvarenga Turini1; Letícia Santos Pimentel1; Léia Cardoso de Sousa2; Luiz Ricardo

Goulart1; Luiz Orlando Ladeira3; Clascídia Aparecida Furtado4; Robinson Sabino Silva2; Paula

Cristina Batista de Faria1

1Laboratório de Nanobiotecnologia. Instituto de Genética e Bioquímica. Universidade Federal de Uberlândia,

Uberlândia, MG; 2Área de Ciências Fisiológicas. Instituto de Ciências Biomédicas. Universidade Federal de

Uberlândia, Uberlândia, MG; 3Laboratório de Nanomateriais, Departamento de Física, Instituto de Ciências Exatas,

Universidade Federal de Minas Gerais, Belo Horizonte, MG; 4Laboratório de Química de Nanoestruturas de Carbono,

Centro de Desenvolvimento da Tecnologia Nuclear (CDTN/CNEN), Belo Horizonte, MG. E-mail:

[email protected]

Os nanomateriais vêm sendo bastante utilizados no campo biomédico, inclusive em sistemas de

entregas de drogas, podendo ser adaptados para ligação a diversos agentes terapêuticos. Dentre os

nanomateriais mais utilizados encontram-se os nanotubos de carbono de paredes múltiplas

(MWCNTs), devido à sua alta e eficaz capacidade carreadora. Com o uso crescente, veio também

uma maior preocupação quanto aos seus efeitos no organismo. O estudo da toxicidade de

nanotubos é bastante complexo, devido à singularidade de cada nanopartícula fabricada, fornecendo

resultados de avaliações de toxicidade discrepantes. Tornou-se então essencial a avaliação da

biodistribuição e da capacidade tóxica sistêmica de cada MWCNTs. No presente estudo,

procuramos esclarecer aspectos relacionados à biodistribuição de MWCNTs funcionalizados com

grupamentos carboxila (COOH) e o seu efeito tóxico sistêmico agudo in vivo. Foram realizadas

injeções em 64 camundongos Balb-c fêmeas com soluções contendo diferentes concentrações de

nanotubos (10μg, 20μg e 50μg), e avaliamos em tempos diferentes de exposição (12 horas, 24 horas

e 48 horas), através da via de administração subcutânea. Os animais permaneceram durante 24

horas em gaiola metabólica para coleta de urina. Em seguida, foi realizado o monitoramento da

respiração desses animais através da espirometria, e o soro foi coletado para avaliação bioquímica

dos níveis séricos de AST, ALT, GGT, CK e ureia. Foram retirados também os órgãos dos animais

para o cálculo do índice peso órgão/peso corporal. A espirometria indicou um aumento geral agudo

do volume corrente após as nanoinjeções. Não foram registradas diferenças nos indicadores

bioquímicos ou nos índices peso órgão/ peso corporal. Nossos resultados mostram que a síntese e

funcionalização realizada para esses MWCNTs provocaram alterações na função respiratória dos

animais analisados, apesar de não ter causado alterações urinárias, bioquímicas, ou nos indicadores

de biodistribuição.

Palavras-chave: Nanotubos de carbono de paredes múltiplas, toxicidade sistêmica, avaliação

respiratória e bioquímica.

Fomento e/ou Agradecimentos: CNPq, FAPEMIG.

ESTUDO ELETROQUÍMICO DE NANOPARTÍCULAS DE ÓXIDO DE ZINCO

DOPADAS COM COBRE

Ana Karoline Silva Rocha de Farias1; Tainá Marques Sampaio1; Beatriz Rodrigues Martins2;

Anielle Christine Almeida Silva3; Noelio Oliveira Dantas3; Renata Pereira Alves Balvedi1

1Laboratório de Nanossensores, UFTM, Campus Iturama; 2Departamento Programa de Pós-Graduação em

Ciências Fisiológicas, UFTM-Uberaba; 3Departamento de Física-INFIS- UFU, Uberlândia. E-mail:

[email protected]

A utilização de nanopartículas em sensores eletroquímicos é um método que promove a

melhoria da sensibilidade do sistema diagnóstico de doenças. A nanotecnologia desenvolve

partículas com particularidades únicas quando o material se encontra nesta escala pode ser

extremamente útil para otimização de biossensores eletroquímicos, que têm chamado atenção

devido aos diagnósticos rápidos e específicos. Diante do exposto, a técnica selecionada será a

eletroquímica por ser rápida barata sendo desnecessário o pré-tratamento da amostra. Nesse

contexto, esse trabalho teve o objetivo de realizar análises de uma nova síntese de nanopartículas de

óxido de zinco, dopadas com concentrações crescentes de cobre em 5 tipos (ZnO: 01 Cu; ZnO: 04

Cu; ZnO: 1 Cu; ZnO: 4 Cu; ZnO: 12 Cu), sendo selecionada em sua caracterização e propriedade

eletroquímica para melhor nanopartícula a ser utilizada. O procedimento dos experimentos foi

submetido na temperatura de 28 ± 1 °C, sendo a água ultrapura (MiliQ) utilizada para a preparação

de soluções contendo [Fe (CN) 6 ] 4 - / [Fe (CN) 6]

3− (3,0 mol. L– 1) e KCL pH 7,4 suporte eletrólito

(0,1 mol.L− 1). O experimento foi conduzido no potenciostato EmStat1 (PalmSens), por

voltametrias cíclicas (0.1 mV.s-1) a fim de avaliar o perfil voltamétrico (corrente x potencial) da

condutividade e em eletrodos de grafite (110 DropSens). Os resultados obtidos indicaram que a

substituição dos íons zinco por íons cobre, na seguinte dopagem ZnO:4Cu, na concentração 0,25

mg/mL-1, apresenta-se respostas eletroquímicas ideais, tanto na oxidação quanto na redução, com

isso indicando uma melhora de 49.3%. Mostrando que esta nanopartícula

é.potencialmente.utilizada.em.biossensores.eletroquímicos.

Palavras-chave: Biossensores, nanopartículas, eletroquímica.

Fomento: FAPEMIG.

ESTUDO DO EFEITO DE NANOCRISTAIS DE SIMONKOLLEITE E ÓXIDO DE

ZINCO NO TRATAMENTO DA CITOTOXICIDADE EM LINHAS TUMORAIS DE

CÂNCER DE MAMA IN VITRO

Annelise Arantes Rocha1; Anielle Christine Almeida Silva2; Noelio Oliveira Dantas2; Marcelo

José Barbosa Silva3

1Laboratório de Nanobiotecnologia, na Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, MG; 2Laboratório de

Novos Materiais Isolantes e Semicondutores do Instituto da Física na Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia,

MG; 3Laboratório de Imunologia, Instituto de Ciências Biomédicas na Universidade Federal de Uberlândia,


INTRODUÇÃO: Neste estudo, investigou-se o efeito citotóxico de nanocristal (NC) de

Simonkolleite (SM), e Óxido de Zinco (ZnO) bem como seus nanocompósitos (NCT), em células

tumorais. OBJETIVO: Avaliar os efeitos citotóxicos dos NCs de SM, ZnO e NCT em células

tumorais mamárias in vitro. MÉTODOS: Para estudar os efeitos dos NCs, foram utilizadas duas

linhagens tumorais celulares de mama, MDA-MB-231 (ATCC® HTB-26 ™) e MCF-7 (ATCC®

HTB -22 ™) e uma linhagem não tumorigênicas MCF-10ª. Foi feito o teste de citotoxicidade, para

isso plaqueou em placa de 96 poços, em densidade de 1x104/poço, o controle e o tratamento foi

incubado por 72 horas em triplicata e por último removeu-se o tratamento e foi adicionada a

solução de MTT([3- (4,5- dimetiltiazol-2il) -2,5-difenil-tetrazólio] (SIGMA), para posteriormente

analisar no aparelho GloMax, com comprimento de onda de 560nm. A análise estatística foi

utilizada o “ANOVA one-way” do programa GraphPad Prism 6. RESULTADO E DISCUSSÃO:

Observou-se que na linhagem MCF-7, a concentração de 15μg/ml de SM, foi estatisticamente

significativo com p <0,001 em comparação com o ZnO e NCT. Na MDA-MB 231, a concentração

de 30μg/ml de SM, foi estatisticamente significativo com p <0,05 em comparação com o

tratamento ZnO. Notou-se que o MCF-7 foi mais sensível à droga SM que a MDA-MB 231, por

uma concentração baixa de 15μg/ml já ser o suficiente para observar a citotoxicidade do

tratamento, enquanto que na MDA-MB 231 precisaria de uma concentração maior. Na MCF-10A, a

concentração de 120μg/ml de SM, foi estatisticamente significativo com p <0,001 em comparação

com o tratamento ZnO. No nosso estudo ocorreu a morte de células não tumorais MCF-10A, porém

somente em altas concentrações e somente com o tratamento com SM pela alta citotoxicidade

comparado ao ZnO. CONCLUSÃO: O resultado esperado da citotoxicidade foi obtido com o

tratamento com SM, mostrando assim mais eficaz que nos outros tratamentos, e os melhores

resultados foram com a linhagem MCF-7.

Palavras-chave: Simonkolleite, câncer de mama e citotoxicidade.

Fomento: Fundação de Amparo à Pesquisa de MG (FAPEMIG).

ANÁLISE ELETROQUÍMICA DE NANOCRISTAIS DE ÓXIDO DE ZINCO

DOPADAS COM NÍQUEL E MANGANES PARA APLICAÇÃO EM BIOSSENSORES

Beatriz Rodrigues Martins1; Patrick Martins Silva2; Fábio Buzatti Nogueira3; Hugo Santos

Lintz3; Anielle Christine Almeida Silva3; Noélio Oliveira Dantas3; Renata Pereira Alves-Balvedi4 1Programa de Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas, UFTM, Uberaba; 2Instituto de Ciências Biológicas, UFU,

Uberlândia; 3Instituto de Física, UFU, Uberlândia; 4Laboratório de Nanossensores, UFTM, Campus Iturama. E-mail:

[email protected]

Os Nanocristais são utilizados em sensores eletroquímicos desde o século XX, já que,

comprovadamente, a associação é capaz de promover a potencialização das respostas em

plataformas diagnósticas. As rotas de sínteses de nanocristais são capazes de produzir diversidades

em seus produtos, com propriedades físico-químicas específicas e distintas, de cada rota e protocolo

de diluição-imobilização, serão responsáveis por potencializar os resultados nos biossensores.

Deste modo, foi analisado os seguintes nanocristais de óxido de zinco dopadas com Níquel (7

dopagens) e Manganês (8 dopagens), sendo suas caracterizações físico-químicas associadas às suas

propriedades eletroquímicas potencializadoras. Os experimentos foram realizados à temperatura

ambiente (25ºC ± 1ºC), e todas as soluções preparadas em água MiliQ. A solução de K3[Fe(CN)6] /

K4[Fe(CN)6] 3H2O e KCl (3,0 mol.L-1; 0,1 mol.L-1) foi solução avaliadora nas voltametria cíclicas

(0,1 V.s-1) utilizando potenciostato EmStat1- PalmSens e eletrodos de grafite da DropSens. Os

resultados que demonstram como substituição de íon zinco por íon manganês se mostra mais

eficiente que a substituição de íon de zinco por íon de níquel, na plataforma utilizada, sendo que, a

melhor dopagem observada foi ZnO:04Mn (0,5 mg.mL-1) em 49,78% melhor quando comparada

aos demais nanocristais de mesma natureza e em relação ao níquel essa eficiência é de 2,13% . A

partir desta análise, podemos afirmar que o nanocristal de Óxido de Zinco dopada com Manganês

na proporção 1:04 é potencialmente selecionada para desenvolvimento e aperfeiçoamento de

biossensores eletroquímicos devido sua melhor condutividade e progressão do sinal eletrônico.

Palavras-chave: Nanocristais, nanobiossensores, óxido de zinco.

CÁDMIO/SELÊNIO-QUANTUM DOTS REDUZEM A GERAÇÃO DE ESPÉCIES

REATIVAS DE OXIGÊNIO POR NEUTRÓFILOS E MACRÓFAGOS

André Luis Lopes Saraiva1; Danielle Diniz Vilela1; Luiz Ricardo Goulart Filho1; Noelio

Oliveira Dantas2; Anniele Christine Almeida Silva2; Foued Salmen Espindola1 1Instituto de Biotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia; 2Instituto de Física, Universidade

Federal de Uberlândia, Uberlândia. E-mail: [email protected]

Pontos quânticos (Quantum Dots- QD) são semicondutores nanocristalinos binários, sendo os

formados por cádmio e selênio, os mais bem estudados. Direcionamento de drogas, diagnóstico de

tumores e desenvolvimento de biossensores, são algumas aplicações dos QD. Recentemente foi

demonstrado que CdSe-QD reduzem a produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) por células

HeLa, um efeito atribuído as menores concentrações de Se sobre a superfície da nanopartícula.

Neste estudo, avaliamos o efeito dos QD com diferentes concentrações de Se sobre a produção de

ERO por neutrófilos e macrófagos. Neutrófilos foram isolados da medula óssea de camundongos

C57BL/6 através de gradiente de densidade de Percoll (63% e 72%) que, após centrifugação,

permitiu o isolamento da fração rica em células polimorfonucleares. Macrófagos foram

diferenciados a partir de células da medula óssea as quais foram cultivadas em meio RPMI

suplementado com 30% de meio condicionado de células L929. A geração de ERO foi monitorada

através da emissão de luminescência resultante da oxidação de luminol. O ensaio foi realizado com

um total de 0.2x106 células as quais foram pré-tratadas com QD com diferentes concentrações de

Se durante 30 min e, a seguir, estimuladas com zymosan opsonizado. Nossos resultados

demonstraram que o pré-tratamento com QD reduz a produção de ERO por neutrófilos

(F(5,12)=7.76, P<0.05) e por macrófagos (F(6,13)=30.18, P<0.05) sugerindo uma ação

imunomodulatória dos QD. Os efeitos dos QD não foram associados às concentrações de Se sobre

sua superfície. Embora a produção de ERO seja um dos principais mecanismos que neutrófilos e

macrófagos possuem contra infecções, sua produção excessiva contribui para o dano tecidual e está

associada a patofisiologia de doenças inflamatórias como artrite reumatoide, inflamação pulmonar

e esclerose múltipla. Assim, substâncias que possam modular a produção de ERO podem ser

importantes para o desenvolvimento de novas terapias anti-inflamatórias.

Palavras-chave: pontos quânticos; neutrófilos; macrófagos.

Fomento: CAPES; FAPEMIG.

DETECÇÃO ELETROQUÍMICA DE ANTICORPOS IGG E IGM ANTI-Toxoplasma

gondii UTILIZANDO PEPTÍDEO SINTÉTICO

Lívia Maria Alves1; Heber Leão Silva Barros2; José Roberto Mineo2; João Marcos Madurro3;

Ana Graci Brito-Madurro1

1Laboratório de Biossensores, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, MG; 2Laboratório de

Imunoparasitologia “Dr. Mario Endsfeldz”, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, MG; 3Laboratório de

Filmes Poliméricos e Nanotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia. E-mail: [email protected]

Polímeros condutores têm sido amplamente utilizados no desenvolvimento de biossensores

devido a sua estabilidade e rápida transferência de elétrons, sendo excelentes materiais para

imobilização de biomoléculas, atuando como biossensores eficientes para o diagnóstico molecular

de doenças. O Toxoplasma gondii é um protozoário parasita intracelular responsável pela

toxoplasmose, uma zoonose com importância médica e veterinária em todo o mundo. Neste

trabalho filmes poliméricos derivados do ácido 3-hidróxibenzóico foram eletrodepositados sobre

eletrodos de grafite em solução aquosa de ácido perclórico, por voltametria cíclica entre +0.0 e +1.2

V vs Ag/AgCl, 10 ciclos, 50 mV s−1. Um peptídeo originado de proteína imunodominante do

Toxoplasma gondii foi imobilizado sobre a superfície dos eletrodos modificados a 37 °C durante 30

minutos. O bloqueio de ligações não específicas foi realizado utilizando glicina 10 mmol.L-1 a 37 °

C durante 1 h. A análise foi realizada utilizando soro de camundongos infectados por Toxoplasma

gondii (0 dia de infecção - controle negativo e 60 dias de infecção - controle positivo). As amostras

(diluição 1:25) foram aplicadas ao sensor por 30 minutos, após a etapa de ligação do alvo, os

eletrodos foram lavados e o tampão fosfato foi utilizado como eletrólito para a detecção. Foi

observado um aumento de cerca de 37% nos valores de corrente na presença do controle positivo

referente a oxidação dos aminoácidos presentes nos anticorpos anti- Toxoplasma gondii. Os

resultados mostram que o sistema produzido foi capaz de diferenciar as amostras contendo

anticorpos anti-Toxoplasma gondii.

Palavras-chave: eletrodo modificado, poli (3-hidroxibenzóico) e biossensor.

Agradecimentos: UFU, CNPq, CAPES, FAPEMIG.

NANOCOMPÓSITOS DE ÓXIDO DE ZINCO DOPADOS COM PRATA E DIÓXIDO

DE TITÂNIO: DESENVOLVIMENTO E AÇÃO BACTERICIDA

Ana Luiza Silva Borges1,2; Vinícius Prado Bittar1,2; Ulisses Travaglini2; Lucas Ian Veloso

Correia3; Aline Teodoro de Paula1; Luiz Ricardo Goulart1; Noelio Oliveira Dantas.2; Anielle

Christine Almeida Silva.2

1Laboratório de Nanobiotecnologia, Departamento de Genética e Bioquímica, Universidade Federal de

Uberlândia, Uberlândia, Minas Gerais, Brasil; 2Laboratório de Laboratório de Novos Materiais Isolantes e

Semicondutores, Instituto de Física, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, Minas Gerais, Brasil; 3Laboratório de Bioquímica e Toxinas Animais, Instituto de Biotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia,

Uberlândia, Minas Gerais, Brasil. E-mail: [email protected]

O aumento da resistência bacteriana aos antimicrobianos convencionais tem apresentado riscos

à saúde humana e ao meio ambiente. Assim, o desenvolvimento de novos agentes bactericidas estão

sendo cada vez mais estudados para esse fim. O uso da nanotecnologia na síntese de novos

materiais visando a potencialização da ação bactericida vêm sendo uma ferramenta eficaz.

Nanocristais (NCs) à base de óxido de zinco (ZnO) e óxido de prata apresentam alto poder

antimicrobiano devido a formação de espécies reativas de oxigênio na sua superfície. NCs de

dióxido de titânio (TiO2) apresentam alto efeito catalítico. Portanto, a fim de investigar o efeito

bactericida da combinação desses nanocristais foram sintetizados e caracterizados NCs de ZnO

dopados com prata (Ag) e misturados a diferentes razões com NCs de TiO2. A caracterização dos

nanocristais e nanocompósitos foi realizada utilizando difração de Raios-X e microscopia eletronica

de varredura (MEV). A ação bactericida foi avaliada de acordo com a técnica “spot-test” que avalia

o efeito por meio da formação de halos de inibição. As cepas utilizadas foram Escherichia coli

(gram -), Enterocccus faecallis (gram +), Klebsiella pneumoniae (gram -) e sua cepa resistente,

Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC), Staphylococcus aureus (gram +) e sua cepa

resistente, Staphylococcus aureus resistente à Meticilina (MRSA). A Ampicilina foi utilizada como

controle positivo e água ultra pura como controle negativo. Nos difratogramas de Raios-X foram

observados picos de difração de Bragg característicos de ZnO e alterações confirmando a

incorporação de Ag, bem como os padrões do TiO2 nos nanocompósitos. As imagens de MEV

confirmaram a morfologia dos nanocristais e do nanocompositos. Nos ensaios bactericidas todas as

cepas, incluindo as resistentes, demonstraram suscetibilidade aos nanocompósitos, bem como os

nanocristais de ZnO dopados com Ag, com exceção dos nanocristais de TiO2, que não

apresentaram efeito bactericida. Com bases nesses resultados, demonstramos que esses

nanocompósitos são novas ferramentas em potencial em terapias antimicrobianas.

Palavras-chave: agente antimicrobiano, nanocristais, nanocompósitos, dopagem, prata, óxido

de zinco, dióxido de titânio.

Agradecimentos: FAPEMIG, CNPQ, INCT-TeraNano.

SÍNTESE E EFEITO BACTERICIDA DE NANOCOMPÓSITOS MAGNÉTICOS NO

COMBATE DE BACTÉRIAS PATOGÊNICAS

Vinícius Prado Bittar1,2; Ana Luiza Silva Borges1,2; Thais Karine de Lima 2; Lucas Ian Veloso

Correia3; Aline Teodoro de Paula1; Luiz Ricardo Goulart,.1; Noelio Oliveira Dantas.2; Anielle

Christine Almeida Silva.2


Uberlândia, Uberlândia, Minas Gerais, Brasil; 2Laboratório de Novos Materiais Isolantes e Semicondutores, Instituto de

Física, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, Minas Gerais, Brasil; 3Laboratório de Bioquímica e Toxinas

Animais, Instituto de Biotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, Minas Gerais, Brasil. E-mail:

[email protected]

Diversos casos de infecções hospitalares devido a bactérias patogênicas vêm sendo registrados

diariamente, assim, o desenvolvimento de novos materiais para morte desses patógenos é de

extrema importância. O uso da nanotecnologia permite o controle e a potencialização do efeito

bactericida em função da forma, tamanho e composição dos materiais. Assim, nesse trabalho,

investigamos o efeito da incorporação de íons de ferro em nanocristais de óxido de zinco, bem

como sua mistura com nanocristais de óxido de ferro (nanocompósito) na atividade bactericida em

contato com bactérias hospitalares. As propriedades estruturais e morfológicas dos nanocompósitos

magnéticos foram investigadas utilizando difração de Raio-X (DRX) e microscopia eletrônica de

varredura (MEV). Os efeitos antimicrobianos foram avaliados pelo método de Kirby-Bauer, que

consiste em usar discos de difusão para quantificar a atividade bactericida através dos halos de

inibição formados em meio ágar. As cepas utilizadas são as que apresentam maior patogenicidade

em humanos: Enterococcus faecalis (gram-positiva), Escherichia coli (gram-negativa),

Staphylococcus aureus (gram-positiva), Klebsiella pneumoniae (gram-negativa), Acinetobacter

baumannii (gram-negativa), Proteus vulgaris (gram-negativa), Pseudomonas aeruginosa (gram-

negativa). Os picos de difração de Bragg observados nos difratogramas confirmaram a estrutura

cristalina dos nanocristais, bem como a incorporação de íons de ferro no ZnO e a formação de

óxido de ferro. As imagens de MEV confirmaram a morfologia dos nanocristais. Nos ensaios

bactericidas os nanocompósitos magnéticos apresentaram halos de inibição apenas nas cepas

Acinetobacter baumanii (gram -), Escherichia coli (gram -), Klebsiella Pneumonie (gram -) e

Pseudomonas aeruginosa (gram -). Portanto, esses nanocompósitos magnéticos apresentam grande

potencial no combate de bactérias patogênicas.

Palavras-chave: nanocompósitos, nanocristais, magnéticos, óxido de zinco, bactérias

patogênicas, dopagem.

Agradecimentos: FAPEMIG, CNPQ, INCT-TeraNano.

EFEITO DE NANOCOMPÓSITOS E POLIFENÓIS NA FIBROGÊNESE,

ANGIOGÊNESE E FECHAMENTO DE FERIDAS DE PELE

Allisson Benatti Justino1, Francyelle Borges Rosa de Moura2, Bruno Antônio Ferreira3,

Fernanda de Assis Araújo3, Tatiana Carla Tomiosso2, Anielle Christine Almeida Silva4, Noelio

Oliveira Dantas4, Foued Salmen Espindola1

1Laboratório de Bioquímica e Biologia Molecular, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, MG;

2Laboratório de Genética e Biotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, MG; 3Laboratório de

Fisiologia, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, MG; 4Laboratório de Novos Materiais Isolantes e

Semicondutores, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, MG. E-mail: [email protected]

Os nanocompósitos (NCPs) apresentam propriedades antibacterianas, enquanto que os

polifenóis atuam no processo de cicatrização. A associação de NCPs e polifenois pode potencializar

as propriedades antioxidantes e anti-inflamatórias. Além disso, NCPs poderiam faverecer a

retenção e penetração no estrato córneo dos compostos naturais bioativos contribuindo para uma

melhor resposta no reparo tecidual. Assim, o objetivo deste estudo foi associar NCPs com um um

produto natural contendo uma a fração rica em polifenóis (FRP) tais como ácido clorogênico,

(epi)catequina, procianidinas B2 e C1, quercetina-glicosídeo, kaempferol e cafeoil-glicosídeo para

avaliar os seus efeitos na fibrogênese, angiogênese e no fechamento de feridas cutâneas. Quatro

feridas (5 mm) foram realizadas no dorso de camundongos Balc/C e as lesões foram tratadas por

sete dias com uma pasta base (vaselina 70% / lanolina 30%) e pasta base contendo FRP, NCPs ou

NCPs com FRP (NCPs + FRP). Os animais tratados com NCPs apresentaram maior porcentagem

de fechamento da ferida, após medições diárias com um paquímetro digital. A deposição de

colágeno e o número de vasos sanguíneos foram quantificados por análises histológicas com

Picrosirius Red e Gomori Trichrome, respectivamente. Observou-se aumento de deposição de

colágeno tipo III no grupo tratado com NCPs, enquanto que colágenos tipo I e III foram

aumentados no grupo FRP após o tratamento. O grupo tratado com NCPs + FRP apresentou maior

número de vasos sanguíneos. Portanto, NCPs e FRP quando associados levaram à modulação da

síntese de colágeno e aumento da angiogênese. Em situações de longo período para o tratamento de

feridas, nanocompósitos associados à polifenois poderiam contribuir para uma maior angiogênese e

assim um reparo tecidual mais eficiente. Para isto, mais estudos sobre inflamação e modulação da

matriz extracelular estão sendo realizados com NCPs e FRP em diferentes tempos de reparo

cutâneo.

Palavras-chave: nanobiotecnologia, cicatrização, flavonoides.

Fomento e/ou Agradecimentos: FAPEMIG, CAPES e CNPq.

AUMENTO DA CONCENTRAÇÃO DE SÊLENIO NA SÍNTESE DE PONTOS

QUANTICOS DE CdSe: UMA ESTRATÉGIA PARA CONTROLE DA

NEUROTOXICIDADE EM MODELO DE EMBRIÃO DE GALINHA

Danielle Diniz Vilela1; Adriele Vieira de Souza1; Luiz Fernando Zabisky1; Belchiolina Beatriz

Fonseca3; Rodrigo Rodrigues Franco1; Victor Hugo Mota Alves1; Anielle Christine Almeida Silva2;

Foued Salmen Espindola1 1Laboratório de Bioquímica e Biologia Molecular, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, MG;

2Laboratório de Novos materiais isolantes e semi-condutores, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, MG; 3Laboratório de nanobiotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, MG. E-mail:

[email protected]

Pontos quânticos de tamanho mágico (MSQDs) são amplamente utilizados como sondas

fluorescentes em sistemas biológicos. No entanto, podem ser citotóxicos devido ao seu tamanho e

composição. Por isso, novas rotas sintéticas vêm sendo propostas para controle de danos oxidativos

dessas nanopartículas. O objetivo desse trabalho foi verificar a neurotoxicidade de CdSe (MSQDs)

sintetizados com diferentes concentrações de Se, em cérebro de embrião de galinha. Para isso, 50

ovos foram mantidos durante 10 dias em chocadeira com controle de temperatura (37oC) e umidade

(65-75%). No nono dia (HH35) os ovos foram divididos em 5 grupos (n=10) e receberam uma

injeção no saco de ar contendo solução de CdSe (MSQDs) em 4 diferentes concentrações de Se

(0,4; 0,5; 0,8; 0,9 mM). Um grupo controle recebeu injeção de água. Após 24 horas, os ovos foram

abertos e o encéfalo foi coletado e homogeneizado para análises da atividade das enzimas

Superoxido Dismutase (SOD), glicose-6-fosfato desidrogenase, glutationa peroxidase (GPx) e

glutationa redutase (GR), quantificação da peroxidação lipídica (TBARS) e capacidade

antioxidante total (FRAP). A atividade das enzimas SOD, GPx e GR aumentou no encéfalo dos

embriões que receberam CdSe (MSQDs) nas concentrações de 0,4 e 0,5 mM de Se. Também houve

um aumento de TBARS e diminuição de FRAP nesses mesmos grupos em relação ao controle.

Uma maior concentração de Se faz com que uma menor quantidade de íons Cd2+ seja adsorvida na

superfície da nanopartícula e, dessa forma, diminui seu efeito citotóxico causado pela interação dos

íons Cd2+ com oxigênio das células. Nossos resultados mostraram que CdSe (MSQDs) sintetizados

com baixas concentrações de Selênio afetaram o sistema de defesa antioxidante no encéfalo,

enquanto em maiores concentrações de SE, não houve dano. Esses achados reforçam a importância

de novas rotas sintéticas para produção de nano materiais com menor toxicidade, visando seu uso

seguro em sistemas biológicos.

Palavras-chave: Pontos quânticos, estresse oxidativo, neurotoxicidade.

Fomento e/ou Agradecimentos: FAPEMIG, CAPES, CNPQ.

CITOTOXICIDADE DAS NANOPARTÍCULAS DE ZNO:AG DOPADAS COM

EURÓPIO EM CULTURA DE CTM-TA E LINHAGENS MC3T3-E1 E PC-3

Paloma Soares de Castro¹, Isabela Lemos de Lima¹, Nilson Ferreira de Oliveira Neto¹,

Cristiane Angélico Duarte¹, Luiz Ricardo Goulart¹, Anielle Christine Almeida Silva², Vivian

Alonso Goulart¹, Letícia de Souza Castro Filice¹

1 Laboratório de Nanobiotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia-MG; 2Laboratório de Novos

Materiais Isolantes e Semicondutores, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia-MG. E-mail:

[email protected]

As nanopartículas (NPs) são exemplos de materiais nanométricos que estão sendo

desenvolvidos e que representam uma área ativa de pesquisa com vários campos de aplicação. As

NPs de prata (Ag) e o Óxido de Zinco (ZnO) têm chamado atenção por apresentarem propriedades

antibacterianas. Porém, ainda existem lacunas de conhecimento em relação à toxicidade das NPs

em sistemas biológicos o que causa grande preocupação em relação ao seu potencial impacto na

saúde humana e meio ambiente. Diante disso, foi avaliado o efeito da citotoxicidade das NPs de

ZnO e Ag dopadas com Európio através do ensaio de MTT, em cultura de células-tronco

mesenquimais de tecido adiposo humano (CTM-TAs) e linhagens de células pré-osteoblástica

(MC3T3-E1) e tumor de próstata humano (PC-3) tratadas com NPs em diferentes concentrações e

tempos. No geral, as NPs estimularam a viabilidade das células, porém as NPs de ZnO:AgO:0.3 Eu

e as NPs ZnO:Ag apresentaram efeito citotóxico para a PC-3 numa concentração de 100ug/mL.

Além disso, as NPs ZnO:Ag com MC3T3-E1 no tempo de 24 e 48 hrs e as NPs ZnO:Eu em 24h

nas concentrações de 50 e 100ug/mL também apresentaram baixa viabilidade. Portanto, esses

resultados mostram que para as células tumorais as NPs podem ser usadas para o tratamento de

câncer, apresentando um efeito antineoplásico na concentração de 100ug/mL e em baixas

concentrações as NPs podem ser promissoras para a medicina regenerativa para todas as linhagens

de células testadas.

Palavras-chave: Nanopartículas, citotoxicidade, medicina regenerativa.

Agradecimentos: FAPEMIG e CNPq.

BIOELETRODO PARA DETECÇÃO DE MICRORNA ASSOCIADO A

TRANSTORNO DEPRESSIVO MAIOR

Pedro Henrique Gonçalves Guedes1; Anna Clara Rios Moço1; Ana Paula Mendes Silva3; José

Manuel Rodrigueiro Flauzino1; Jéssica Guimarães Brussaco2; Carlos Ueira Vieira1; João Antônio

Souza Pereira Rosa1; Ana Graci Brito Madurro1

1Instituto de Biotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, MG; 2Instituto de Química,

Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, MG; 3Departamento de Saúde Mental, Universidade Federal de

Minas Gerais, Belo Horizonte, MG. E-mail: [email protected]

Transtorno depressivo maior (TDM) consiste em um dos transtornos psiquiátricos que mais

acomete a população idosa, podendo levar a importante prejuízo funcional, variável resposta ao

tratamento, altas taxas de recorrência, cronicidade e taxas elevadas de comorbidades médicas e

mortalidade. A literatura mostra que o microRNA 184 é cerca de 4 vezes menor em idosos com

TDM comparando-se com controle (idosos saudáveis). Genossensores eletroquímicos são

plataformas utilizadas para a detecção de material genético em baixa concentrações, apresentando-

se como excelentes alternativas em relação aos métodos convencionais. Neste trabalho, visando

melhorar a sensibilidade do genossensor desenvolvido, eletrodos de ouro foram sensibilizados com

óxido de grafeno reduzido (OGr). Para a construção da plataforma, eletrodos de ouro (Au) foram

pré-condicionados utilizando solução de H2SO4 0.5 mol.L-1 e submetidos a voltametria cíclica entre

os potenciais +0.0 V e +1.2 V, 5 ciclos, 50 mV.s-1. OGr foi aplicado sobre a superfície dos

eletrodos de ouro e, em seguida, a sonda Dep1S (50 μmol.L-1) específica para o microRNA 184 foi

imobilizada sobre Au/GOr. A detecção foi conduzida por meio de voltametria de pulso diferencial

em tampão fosfato (0.1 mol.L-1, pH 7,4) sem a necessidade de uso de indicador. Os resultados

mostraram que a sonda DEP1S foi imobilizada com sucesso sobre Au/GOr, por meio do

monitoramento direto da oxidação da guanosina em ~ 6 µA e potencial de +0,92V. Conclui-se

assim que a plataforma se mostrou eficiente para a imobilização da sonda de DNA, visando o

desenvolvimento futuro de um genossensor para a detecção do microRNA 184 envolvido em

transtorno depressivo em idosos.

Palavras-chave: Transtorno depressivo maior, bioeletrodo, microRNA.

Fomento e/ou Agradecimentos: CAPES, FAPEMIG e PROPP-UFU.

TRANSFORMAÇÃO DE NANOCRISTAIS DE SIMONKOLLEITE EM ÓXIDO DE

ZINCO E SUA AÇÃO BACTERICIDA

Maria Paula Camargo Costa1,2; Lucas Ian Veloso Correia3; Aline Teodoro de Paula2; Luiz

Ricardo Goulart2; Noelio Oliveira Dantas1; Anielle Christine Almeida Silva1 1Laboratório de Novos Materiais Isolantes e Semicondutores, Instituto de Física, Universidade Federal de

Uberlândia, Uberlândia, Minas Gerais, Brasil; 2Laboratório de Nanobiotecnologia, Departamento de Genética e

Bioquímica, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, Minas Gerais, Brasil; 3Laboratório de Bioquímica e

Toxinas Animais, Instituto de Biotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, Minas Gerais, Brasil. E-


Doenças infecciosas bacterianas constituem um problema grave de saúde que tem atraído à

atenção de diversos pesquisadores. Assim, a fim de desenvolver novos agentes bactericidas a

nanotecnologia vem sendo uma ferramenta interessante nas áreas biomédicas e farmacêuticas. Os

nanomateriais apresentam propriedades que podem ser controladas ou intensificadas em função do

tamanho, forma, estrutura e composição. O nanocristal (NC) de óxido de zinco (ZnO) é um

nanomaterial biocompatível e que apresenta propriedades bactericidas. Esse efeito em

nanomateriais óxidos, em geral, é atribuído principalmente pela formação de espécies reativas de

oxigênio na sua superfície. Os NCs de simonkolleite vem sendo utilizados na área tecnológica por

apresentarem propriedades interessantes que potencializam a resposta em sensores. Contudo, não

há trabalhos reportando os seus efeitos biológicos, assim, nesse trabalho investigamos a

transformação de NCs de simonkolleite em ZnO e a sua ação bactericida. Os nanocristais foram

sintetizados via solução aquosa e caracterizados pelas técnicas de difração de Raios-X (DRX) e

microscopia eletrônica de varredura (MEV). A ação bactericida foi investigada por meio de

antibiogramas, realizados via disco-difusão, que geraram halos de inibição do crescimento

bacteriano. As bactérias utilizadas foram Stafilococcus aureus e Acinetobacter baumannii. Os

resultados de DRX e Raman, confirmam a transformação de NCs de simonkolleite em NCs de ZnO

em função da temperatura de tratamento térmico, bem como, as porcentagens de cada nanocristal.

As imagens de MEV reforçaram essa transformação e demonstraram as formas morfologias de cada

nanocristal. Nos antibiogramas verificou-se a formação de maiores halos de inibição nas amostras

contendo a mistura de NCs de simonkolleite com ZnO. Portanto, nesse trabalho, foi verificada a

ação bactericida de NCs de simonkolleite e a influência da sua transformação, demonstrando novos

agentes potenciais como agentes bactericidas.

Palavras-chave: óxido de zinco, simonkolleite, ação bactericida.

Fomento: FAPEMIG, CNPq e INCT- TeraNano.

COMPÓSITO NANOTECNOLÓGICO PARA A DETECÇÃO DO VÍRUS DA

DENGUE

Ana Cristina Honorato de Castro1; Luiza Santin Abbes1; Lucas Ferrarrzi1; FabioLuiz Pissetti1;

Alzira Maria Serpa Lucho1

1Grupo de Materiais e Eletroquímica, Universidade Federal de Alfenas, Rua Gabriel Monteiro da Silva, 700,

37130-001, Alfenas, MG, Brasil. E-mail: [email protected]

Sem vacina eficaz ou tratamento específico, a detecção precoce da dengue desempenha um

papel importante na diminuição das taxas de fatalidade e disseminação da doença. Os métodos

existentes são falhos, por isso é necessário o desenvolvimento de métodos simples e de fácil acesso

para o identificação do vírus da dengue (DENV). A sinergia entre nanotecnologia e a

bioeletroquímica cria novas possibilidade de miniaturização e otimização de dispositivos. Assim,

compósitos nanoestruturados representam componentes promissores no desenvolvimento de

biossensores eletroquímicos. Este trabalho tem como objetivo desenvolver uma plataforma

nanotecnológica usando um compósito com base em uma rede de sílica, funcionalizada com grupos

tióis, nanopartículas de prata (nAg) e grafite, para a detecção do material genético do DENV. A

síntese do polímero ocorreu pelo método sol-gel, usando o poli(dimetilsiloxano) funcionalizado

com grupos tiol e, posteriormente, adicionadas as nAg. O material obtido foi triturado e misturado

com pó de grafite na proporção de 3:1. O nanocompósito foi usado na construção dos eletrodos de

trabalho. Estes foram sensibilizados com a sonda especifica (DENV1 - 1 µmol.L-1) por

gotejamento. O processo de hibridização foi avaliado por voltametria de pulso diferencial,

monitorando o processo oxidativo das bases nitrogenadas do DNA, onde o sinal bioquímico é

convertido em sinal elétrico passível de ser mensurado. Dois picos foram observados, sendo um em

+0,90 V (guanina) e +1,30 V (adenina), vs Ag/AgCl. A presença das nAg mostrou-se muito eficaz

em reter a sonda, melhorando a taxa de imobilização em 10x. O reconhecimento do alvo

complementar resultou em um decréscimo na amplitude de sinal de corrente, pois durante a

hibridização do DNA são formadas ligações de hidrogênio levando a um duplex, diminuindo o pico

de oxidação das bases nitrogenadas. A plataforma mostrou-se promissora no desenvolvimento de

biossensores para diagnóstico point-of-care da dengue.

Palavras-chave: Biossensor, nanocompósito, dengue

Fomento: CNPq, FAPEMIG e CAPES.

EFEITO DA ADSORÇÃO DE NANOCRISTAIS DE ZNO PUROS E DOPADOS COM

NIQUEL NA RESPOSTA ELETROQUIMICA

Hugo Santos Lintz 1,2; Beatriz Rodrigues Martins 2; Fabio Buzatti Nogueira1,2; Noelio Oliveira

Dantas1; Renata Pereira Alves Balvedi2,3; Anielle Christine Almeida Silva 1

1Laboratório de Laboratório de Novos Materiais Isolantes e Semicondutores, Instituto de Física, Universidade

Federal de Uberlândia, Uberlândia, Minas Gerais, Brasil; 2Programa de Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas,

Universidade Federal do Triângulo Mineiro, Uberaba, Minas Gerais, Brasil; 3Laboratório de Nanossensores,

Universidade Federal do Triângulo Mineiro, Iturama, Minas Gerais, Brasil. E-mail: [email protected]

A dificuldade de diagnóstico clínico devido a exames laboratoriais muitas vezes sem uma

resposta rápida, motiva o desenvolvimento de novas tecnologias que objetivam o diagnóstico em

tempo real utilizando equipamentos portáteis e de fácil manuseio. Assim, a busca constante por

novos materiais que possam intensificar o sinal resposta em dispositivos eletroquímicos é de

extrema importância no desenvolvimento de uma plataforma portátil. A utilização da

nanotecnologia no desenvolvimento de novos materiais é fantástica, uma vez que é possível

sintonizar as propriedades físicas e químicas em função do tamanho, forma e estrutura das

nanopartículas. Em adição, a incorporação de íons de metais de transição, por exemplo, níquel em

nanopartículas possibilita presença de propriedades paramagnéticas, interessantes em dispositivos.

Então, com base nessas vantagens, nesse trabalho sintetizamos nanocristais de óxido de zinco

(ZnO) puros e dopados com íons de níquel (Ni), a fim de investigar o efeito da adsorção desses

materiais nas respostas eletroquímicas de sensores biológicos. Os nanocristais foram sintetizados

via solução aquosa, e suas propriedades foram investigadas pelas técnicas de absorção óptica e

espectroscopia Raman. Os ensaios eletroquímicos foram realizados no Potenciostato da PalmSens

(EmStar1), demonstrando a eficiência na intensificação dos sinais das plataformas quando essas

moléculas são incrementadas. Nos espectros de absorção óptica observou-se a banda de absorção

característica do ZnO, bem como, as do íon de Ni nas amostras dopadas, confirmando a presença

desse íon no nanocristal. Com base nos espectros Raman pode-se verificar os modos vibracionais

característicos do ZnO, bem como, alterações causadas pela incorporação de Ni. Dessa forma,

pode-se concluir que a implementação de nanocristais de ZnO puros e dopados com Ni apresenta

grande potencial no desenvolvimento de novos sensores relacionados à saúde, alimentação e meio

ambiente.

Palavras-chave: nanocristais, dopagem, resposta eletroquímica.

Agradecimentos: FAPEMIG, CNPQ.

DESENVOLVIMENTO E EFEITO DA INCORPORAÇÃO DE PRATA NO BIOVIDRO

SNCP NA CITOTOXICIDADE EM FIBROBLASTOS

Luíza Cristina Macêdo Silva1,2; Gabriela Leite de Souza1,2; Noelio Oliveira Dantas1; Camilla

Christian Gomes Moura2; Anielle Christine Almeida Silva1

1Laboratório de Novos Materiais Isolantes e Semicondutores, Instituto de Física, Universidade Federal de

Uberlândia, Uberlândia; 2Faculdade de Odontologia, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia. E-mail:

[email protected]

Em 1969, L.L. Hench descobriu um biomaterial chamado biovidro que se degrada

corporalmente levando à precipitação de hidróxido de apatita em sua superfície. Além disso, o

biovidro suporta a fixação celular e promove maior regeneração óssea em relação ás outras

cerâmicas. Nesse trabalho, sintetizamos o sistema biovítreo SiO2-Na2O-CaO-P2O5 e incorporamos

em sua composição concentrações de 0,25 à 1,50 de prata (SNCP:xAg) para investigar a sua

citotoxicidade. Estes foram sintetizados pelo método de fusão e suas propriedades ópticas e

estruturais foram avaliadas utilizando difração de Raios-X, espectroscopia de absorção óptica e

Raman. Os ensaios de viabilidade celular foram realizados em culturas de fibroblastos

imortalizados. Cada amostra foi diluída em três concentrações distintas e aplicada sobre as células

durante 24h após esse tempo foram realizadas análises de viabilidade celular pelo método MTT.

Nos espectros de absorção óptica observou-se a banda de absorção do biovidro e outra banda

característica dos íons de Ag. Quanto aos espectros Raman, pode verificar os modos vibracionais

do sistema vítreo e as alterações causadas pela incorporação de Ag. Nos difratogramas de Raios-X

a banda amorfa observada confirma a formação do sistema vítreo. Os ensaios de viabilidade celular

comprovaram a baixa toxicidade destes biomateriais. Os ensaios demonstram alto potencial desse

biovidro na odontologia.

Palavras-chave: biovidro, prata, citotoxicidade.

DETECÇÃO ELETROQUÍMICA DE ÁCIDO SALICÍLICO PARA CONTROLE DE

QUALIDADE DE FÁRMACOS

Tallita Stéfanne e Silva1; Iara Pereira Soares1; Letícia Raphaela Gonçalves Lacerda1; Diego

Leoni Franco1

1Laboratório de Eletroquímica Aplicado à Biotecnologia e Engenharia de Alimentos (LEABE) – Universidade

Federal de Uberlândia – Patos de Minas. E-mail: [email protected]

O controle e qualidade de fármacos é uma área extremamente importante para garantir que os

medicamentos disponibilizados no comércio atendam todas as exigências necessárias. Vários são os

métodos em laboratórios para analisar a presença de contaminantes, concentração correta do

princípio ativo, entre outros. Dentre os medicamentos presentes no mercado estão as pomadas ou

soluções líquidas contendo ácido salicílico, devido às suas propriedadesantitérmicas, analgésicas,

esfoliantes, antibacterianas e anti-inflamatórias. Este trabalho tem como objetivo mostrar a

possibilidade de uma detecção eletroquímica simples, fácil e rápida de ácido salicílico em soluções

líquidas utilizando eletrodos de trabalho de carbono grafite de lapiseira (CGL). Os CGLs foram

adquiridos em papelarias locais da cidade, lixados com lixas d’água, sonicados em ultrassom por 10

minutos em banho de água e depois limpos eletroquimicamente em solução de ácido sulfúrico. Os

eletrodos limpos foram adicionados em celas eletroquímicas contendo uma alíquota de

concentração conhecida de ácido salicílico do medicamento na presença do eletrólito suporte ácido

perclórico. O mesmo foi feito para uma solução de ácido salicílico padrão (99,9 % de pureza)

utilizando o mesmo eletrólito. A técnica utilizada para o procedimento eletroquímico foi a

voltametria cíclica, entre os potenciais de -0,5 à +1,30 V. Foi observado o mesmo perfil

voltamétrico em ambas as soluções. Um pico de oxidação à +1,18 V seguido de um pequeno pico

de redução à +0,81 V. Não foi encontrado no medicamento estudado, respostas dos outros

componentes na solução líquida. Com grafite de lapiseira (barato) em mãos, a resposta

eletroquímica direta (simples) pode ser encontrada em menos de um minuto de análise (rápido), o

que permite sua utilização como sistema de detecção. Otimizações da detecção como concentração,

pH, velocidade de varredura, limites de detecção e quantificação serão realizados para posterior

validação do método.

Palavras-chave: eletrodo de carbono grafite de lapiseira, ácido salicílico, fármaco.

Fomento: FAPEMIG, CNPQ, PROPP/UFU, Rede Mineira de Química.

DESENVOLVIMENTO DE PLATAFORMA ELETROQUÍMICA PARA ANÁLISE

DIFERENCIAL DE HERBICIDA COMERCIAL A BASE DE GLIFOSATO

João Lucas Cunha Stutz1; João Pedro Tannus Goulart3; Anderson Luís do Valle3; Aline

Teodoro de Paula3; Anielle Christine Almeida Silva4; Noelio Oliveira Dantas4; Luiz Ricardo

Goulart3; Renata Pereira Alves-Balvedi2 1Curso de Ciências Agrárias, UFU, Uberlândia; 2Laboratório de Nanossensores, UFTM-Campus Iturama;

3Programa de Pòs Graduação em Genética e Bioquímica, UFTM-Uberaba; 4Departamento de Física-INFIS- UFU,

Uberlândia. E-mail: [email protected]

Neste trabalho, foram abordados os estudos eletroquímicos de nanocristais (NCs) ZnO:Ag na

detecção de glifosato. Este protocolo proporcionou o desenvolvimento de uma metodologia

eletroanalítica para determinação do herbicida glifosato comercial simulando a sua interação com

nanocristais diferenciados de oxido de zinco com prata. Inicialmente, eletrodos screen-printed de

ouro (BT220- DropSens) foram selecionados como plataformas e por voltametria de pulso

diferencial encontrou-se os valores de oxidação inerentes ao glifosato e seus componentes

complementares, como surfactantes. O estudo inicial da interação entre glifosato e o microeletrodo

de ouro foi feito em meio de tampão fosfato e em seguida o enriquecimento com dois tipos NCs,

dopados e compósito. Para análise de superfície, microscopia de força atômica (AFM) foi utilizado

para caracterizar a rugosidade do sensor em cada etapa de montagem. Os equipamentos (software

PSTrace4.1 e minipotenciostato PalmSens3) empenhados neste trabalho foram utilizados com

sucesso na determinação eletroquímica de glifosato (480mg. L-1) em amostras de água ultra pura

potencialmente maiores quando NCs dopados foram utilizados e na análise de superfície a

quantificação permitiu a avaliação da rugosidade (Rq). Esta metodologia de detecção de glifosato

apresentou algumas vantagens, tais como, ausência de pré-tratamento da amostra, ou seja, não são

necessárias demoradas reações de derivatização da amostra; sem etapas de extração/limpeza da

amostra; assim análise direta é rápida e de baixo custo nas análises, quando comparado as análises

comumente utilizadas.

Palavras-chave: Glifosato, nanocristais, biossensores.

Fomento: FAPEMIG, CNPq, UFU, UFTM.

DESENVOLVIMENTO DE SENSORES A PARTIR DA APLICAÇÃO DE SISTEMAS

DE CAPTURA MAGNÉTICA- SENSORBEADS

Renata Pereira Alves-Balvedi1; João Pedro Tanús Goulart2; Anielle Christine Almeida Silva3;

Noelio Oliveira Dantas3; Luiz Ricardo Goulart2 1Laboratório de Nanossensores, UFTM-Campus Iturama; 2InstitutoGenética e Bioquímica, UFTM-Uberaba;

3Departamento de Física-INFIS- UFU, Uberlândia. E-mail: [email protected]

A utilização de Sensorbeads magnéticos funcionalizados com sondas são capazes de

reconhecer biomoléculas específicas. Este processo inovador permite a capturar, de forma

enriquecida, alvos biológicos em meios amostrais complexos, e detectar por metodologia fotônica e

consecutivamente eletroquímica. O processo iniciou-se com a utilização de beads

magnéticasfuncionalizadas (micrométricas) e ligadas a molécula específica (bacteriófagos). As

plataformas screenprinted de grafite (C110 DropSens), ímã de neodímio (d=4mm) e potenciostato

PalmSens 3 foram utilizados para a detecção eletroquímica e cubetas de quartzo para detecção por

RAMAN. Os resultados apresentaram efetiva (seletiva e específica) detecção com sondas tanto por

Técnica Fotônicacomo também,Eletroquímica (TFE).A sonda modelo, utilizada como prova de

conceito, foi o bacteriófago específico para detecção de LPS bacteriano sendo este capaz de

detectar e discriminar bactérias gram positivas e gram negativas. Assim, podemos concluir que

aplicação daTFE com beads magnéticos possibilita a utilização de eletrodos screen-printed no

processo de construção do sensor, convencionalmente realizadas através de ligações covalentes,

ligações cruzadas, aprisionamento ou adsorção física de biomoléculas.

Palavras-chave: Biossensores, beads magnéticas,eletroquímica.

Fomento: FAPEMIG, CNPq, UFU, UFTM.

BIOSSENSOR ELETROQUIMICO PARA DETECÇÃO INDIRETA DE

MYCOBACTERIUM LEPRAE EM AMOSTRA DE PACIENTES E CONTATOS

Scarllet Almeida Teixeira1; Fabiane Nunes Riello 1; Ana Flávia Oliveira Notário1; Luiz Ricardo

Goulart1; Isabela Maria Bernades Goulart2


Uberlândia, Uberlândia, Minas Gerais, Brasil; 2Centro de Referência Nacional em Dermatologia Sanitária e Hanseníase

(CREDESH), Hospital de Clínicas de Uberlândia, Uberlândia, Minas Gerais, Brasil. E-mail:

[email protected]

A hanseníase é uma doença infecciosa crônica causada por Mycobacterium leprae e consiste

em um problema de saúde pública. O diagnóstico precoce e o monitoramento de contatos são

fundamentais para diminuir a incidência da doença. O diagnóstico atual é baseado principalmente

na epidemiologia, em testes clínicos e exames dermatoneurológicos. Técnicas sorológicas como

ELISA são realizadas utilizando o antígeno PGL-1, contudo demanda tempo e mão obra específica.

Sendo assim, é necessário o desenvolvimento de novas técnicas de detecção que atuem com maior

rapidez, seletividade e especificidade, tais como ferramentas eletroquímicas que já são utilizadas no

diagnóstico de diversas doenças. Objetiva-se neste trabalho a criação de um imunossensor para

detecção de anti-PGL1 presente no soro de pacientes e contatos, monitorando assim a evolução da

doença; auxiliando no diagnóstico pré-clínico; e um possível prognóstico de indivíduos

susceptíveis a essa patologia. Para tanto, foram utilizadas amostras já classificadas por PCR em

tempo real de soro pacientes e contatos atendidos em um centro de referência em hanseníase. As

amostras foram avaliadas quanto à presença do anticorpo anti-PGL-1 com uso de um biossensor

eletroquímico desenvolvido com base na utilização de peptídeos sintéticos mimético de M. leprae

(M3R). O peptídeo foi adsorvido em eletrodo screen-printed de grafite tratados com polímeros. As

leituras foram realizadas pela técnica de voltametria cíclica em um potenciostato portátil EmStat.

Resultados preliminares geraram gráficos com potencial de diferenciação significativo, em torno de

80µA de diferença na corrente entre as amostras positivas (soro de pacientes PCR positivos) e

amostras negativas (contatos PCR negativa). A plataforma desenvolvida demonstrou ser eficiente

na detecção do antígeno podendo ser utilizada para a construção de sensores capazes de auxiliar na

triagem de pacientes de forma rápida, portátil, específica e com baixo custo.

Palavras-Chave: Hanseníase; Imunossensor; Eletroquímica.

BIOSSENSOR ELETROQUÍMICO PARA DETECÇÃO DE ANTÍGENO MIMÉTICO

DE Mycobacterium leprae

Fabiane Nunes Riello1; Ana Flávia OliveiraNotário1; Maria Júlia Rodrigues da Cunha1; Lucca

Pereira Merola1; Isabela Maria Bernardes Goulart2; Luiz Ricardo Goulart1

1Laboratório de Nanotecnologia, Universidade Federal de Uberlândia (MG), Brasil; 2Centro de Referência

Nacional em Dermatologia Sanitária e Hanseníase, Universidade Federal de Uberlândia (MG), Brasil. E-mail:

[email protected]

A hanseníase é um importante problema de saúde pública no Brasil. O diagnóstico precoce é

fundamental para diminuir tanto a incidência quanto as sequelas da doença. Ferramentas

eletroquímicas são plataformas alternativas para o diagnóstico de diversas doenças e chama a

atenção científica devido à facilidade, baixo custo e portabilidade.Até o presente momento não

existe relato na literatura utilizando essa técnica no diagnóstico da hanseníase.Nosso objetivo foi

otimizar a ferramenta eletroquímica para detecção de peptídeo mimético de antígeno de

Mycobacterium leprae(M3R) afim de futuramente padronizar uma plataforma para detecção em

amostras clínicas. Eletrodos screen-printed de grafite foram preparados com substância

eletroquímicapara uniformização da superfície de trabalho, propiciando maior adesão das amostras.

O anticorpo específico de reconhecimento (anti-PGL-1) foi adsorvido no eletrodo modificado para

captura doM3R, que também foi adsorvido. Dessa forma, foi obtidoum complexo antígeno-

peptídeo na superfície do eletrodo. As leituras eletroquímicas foram feitas por voltametria cíclica

em potenciostato portátil. Os resultados preliminares apresentaram potencial de diferenciação entre

amostras que tiveram a ligação anticorpo-peptídeo. No potencial de 0,25V, a corrente medida paras

as amostras positivas e negativas teve uma diferença de,aproximadamente,70 µA. A plataforma

desenvolvida utilizando biomateriais demonstrou ser eficiente como uma nova ferramenta,

possibilitando a construção de biossensores universais e estáveis tanto para o diagnóstico de

hanseníase como de outras doenças baseadas no reconhecimento antígeno-anticorpo.

Palavras-chave: Hanseníase, eletroquímica, biossensor.

Agradecimento: CAPES.

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