Instrucciones generales 1. En todas las prácticas es indispensable que cada estudiante tenga los materiales siguientes:

1.1. Bata blanca larga, de manga larga y abotonada. 1.2. Manual de laboratorio impreso y encuadernado (en espiral).

Nota: el estudiante que no presente los materiales indicados NO PODRÁ INGRESAR AL LABORATORIO. 2. Asistencia

2.1. La asistencia mínima al laboratorio es del 80% para tener derecho a su nota. 2.2. Los implementos adicionales como lentes, mascarilla, guantes de látex desechables, entre otros, serán indicados una semana antes de la práctica.

3. Comportamiento dentro del laboratorio

3.1. No se permite comer, beber ni fumar dentro del laboratorio. 3.2. No debe ingresar objetos que distraigan a los estudiantes y pongan en peligro su seguridad y el éxito de la práctica. 3.3. Se exigirá orden y disciplina para evitar accidentes y así contribuir a un ambiente de trabajo seguro y productivo. 3.4. Se deben realizar únicamente las actividades que el instructor indique. 3.5. Al ingresar al laboratorio apague o ponga en vibrador el teléfono celular. No se permite el uso de este aparato dentro del laboratorio. 3.6. Al finalizar la actividad debe dejar limpio y ordenado todo el espacio empleado.

4. Examen corto 4.1. Al iniciar cada práctica se realizará un examen corto. 4.2. En este examen se evaluarán los contenidos de la guía de estudio y del

instructivo de cada práctica. EL ESTUDIANTE DEBE LEER EL INSTRUCTIVO DE LA PRÁCTICA Y RESOLVER LA GUÍA DE ESTUDIO ANTES DE PRESENTARSE AL LABORATORIO. 5. Las actividades prácticas del laboratorio de Biología deben registrarse en el cuaderno de campo según las especificaciones dadas. 6. El instructor formará grupos de trabajo para llevar a cabo diversas actividades a lo largo del curso.

1. Elaborar un diagrama de flujo del método científico 2. Defina cada parte del método científico 3. Describa como se aplica el método científico en el caso anterior. 4. Proponga un caso en donde utilizaría el método científico. (identifique cada paso)

II OBJETIVO Identificar los diferentes grupos de compuestos orgánicos: carbohidratos, lípidos, proteínas y ácidos nucleicos, en alimentos caseros, por medio de pruebas químicas sencillas. III MATERIAL Y EQUIPO Papas Manzanas y/o piñas en trozos pequeños Aguacates Leche (no descremada) Aceite de oliva o aceite vegetal Germen de trigo Detergente Reactivo de Benedict en goteros Reactivo de Lugol en goteros Reactivo de Biuret en goteros Alcohol al 95% Reactivo Sudán III en goteros Solución de albúmina 5% Solución de almidón 5% Solución de glucosa al 5% Agua destilada en goteros Gradilla para tubos de ensayo

Tubos de ensayo Pinzas para tubos de ensayo Vidrios de reloj Balanza Mortero y pistilo Mechero Termómetro Estufa Varillas de vidrio Fósforos Micropipetas Beaker de 50 ml Papel mayordomo Espátulas Pipeta de 10 ml Succionadores para pipeta Hojas de afeitar

IV PROCEDIMIENTO soluciones patrón

Almidón. En un tubo de ensayo, coloque 1 ml de la muestra que se encuentra en el laboratorio y agréguele 1-2 gotas de reactivo de Lugol. La muestra se tornará de color azul-violeta a negro.

Azúcares reductores. En un tubo de ensayo, coloque 1-2 ml de solución de glucosa y agregue 5 gotas de reactivo de Benedict, calentando de 5 a 10 segundos a llama directa. Se evidenciará un cambio de coloración de verde a naranja hasta un precipitado rojo ladrillo.

Lípidos. En un tubo de ensayo, coloque aproximadamente 1 ó 2 ml de cualquier aceite para cocinar y agregue 1 gota del reactivo de Sudán III. La formación de un anillo rojo en el borde de la muestra es una reacción positiva (NO AGITAR).

Proteínas. En un tubo de ensayo, coloque 2 ml de solución de la proteína albúmina y agréguele 5 gotas de reactivo de Biuret. Si la reacción es positiva, se observará una coloración violeta.

Anote los colores que observe, en la tabla al final del procedimiento. Guarde las soluciones patrón y continúe con la preparación de muestras. Preparación de muestras

Papa. Tome un trozo de papa y colóquelo en un mortero. Agregue 4 ml de agua destilada y machaque con el pistilo hasta obtener jugo. Tome 4 tubos de ensayo y numérelos de 1 a 4. En cada uno de ellos coloque aproximadamente 1 ml del jugo de papa. - Tubo No. 1: agregue 1-2 gotas del reactivo de Lugol. Compare con la solución patrón y anote el resultado. - Tubo No. 2: agregue 5 gotas del reactivo de Benedict. Caliente directamente en el mechero (CUIDADO CON LAS PROYECCIONES). Compare con la solución patrón y anote el resultado. - Tubo No. 3: agregue 1-3 gotas del reactivo de Sudán III (NO AGITAR). Compare con la solución patrón y anote el resultado. - Tubo No. 4: agregue 5 gotas de reactivo de Biuret. Compare con la solución patrón y anote el resultado.

Repita este procedimiento con las frutas, el aguacate y la leche. Anote los resultados en la siguiente tabla.

Guía de estudio

II OBJETIVOS 1. Desarrollar destrezas en el uso y transporte del microscopio y del estereoscopio. 2. Identificar las partes del microscopio y del estereoscopio mediante su manipulación, con la guía del instructor de laboratorio. 3. Adquirir habilidad en la preparación de montajes húmedos. 4. Enfocar correctamente y observe diversos objetos y estructuras biológicas a través del microscopio y del estereoscopio. 5. Esquematizar y describa las estructuras biológicas observadas al microscopio y estereoscopio, aplicando las técnicas adecuadas. III MATERIAL Y EQUIPO

oscopio

-lentes

especies para realizar un montaje húmedo de polen

IV PROCEDIMIENTO

Revisar el equipo a utilizar y si encuentra alguna anomalía al revisar el equipo, debe reportarla al instructor de laboratorio. Uso del microscopio con montajes húmedos

ario; para esto tome con la mano derecha el brazo del microscopio y con la izquierda la base (o lo contrario, si usted es zurda/o), procurando mantener el microscopio pegado a su cuerpo. Transporte el microscopio a su mesa de trabajo.

mesa de trabajo en ángulo recto con relación al largo de la misma y alejado del borde. Cuando trabaje con el microscopio, quite de la mesa de trabajo los objetos que no sean absolutamente necesarios.

colóquela bajo la mesa de trabajo.

de Biología General están disponibles varios tipos de microscopios. Observe las diferencias entre ellos.

DEJE EL EXCESO DE CABLE SOBRE LA MESA: si lo deja colgando, corre el riesgo de tirar del cordón y botar el microscopio.

cambiando hacia objetivos con mayor aumento, debiendo estar hasta abajo cuando se usa el objetivo de 4x y completamente pegado a la platina cuando se usa el objetivo de inmersión (QUE NO SERÁ UTILIZADO).

máxima capacidad. NO LO HAGA AL REVÉS, pues puede fundir la bombilla del microscopio.

contrario, dependiendo del tipo de muestra; para material bioinfeccioso, utilice los oculares del lado opuesto al brazo. El cabezal se puede girar.

l número que indica el aumento del ocular. Revise cada uno de los objetivos; localice la cifra que indica el aumento de cada uno (seco débil, 10x; y seco fuerte, 40x ó 43x). Su instructor le indicará cómo obtener el aumento total con la combinación objetivo-ocular, de la siguiente forma:

Aumento total = aumento del ocular x aumento del objetivo Separe los oculares hasta que pueda ver la misma imagen con ambos ojos. Observe y memorice la distancia que marca la regla que se encuentra en medio de los oculares, pues ésta es la distancia que existe entre sus pupilas, y es la misma en todos los microscopios.

-lentes.

l macrométrico y el micrométrico. La función del macrométrico es acercar el objetivo a la muestra, desplazando el cabezal o levantando la platina (según el tipo de microscopio). La función del micrométrico es afinar el enfoque logrado con el macrométrico.

montaje húmedo (vea la figura 1). Espere un momento antes de colocar el cubreobjetos, para que el papel se humedezca. Mantenga el cubreobjetos en un ángulo de 45° respecto al portaobjetos y bájelo lentamente.

n el centro del orificio de la

platina.

macrométrico hasta que la imagen esté clara.

la letra a través del microscopio y a simple vista. ¿Qué parece sucederle a la letra? Mueva el portaobjetos hacia la derecha. ¿En qué dirección se desplaza la imagen? Responda la primera pregunta de su hoja de descripciones.

observe únicamente con el derecho. Enfoque la imagen lo mejor posible con el tornillo micrométrico. Abra su ojo izquierdo y cierre el derecho, ahora enfoque la imagen girando el ocular izquierdo. NO MUEVA NINGUNO DE LOS TORNILLOS. Observe y memorice el valor que indica el ocular, pues este valor será el mismo en cualquier microscopio y corrige la diferencia de graduación entre los dos ojos. Anótelo en su hoja de descripciones.

OBSERVE con atención (la luz nunca debe lastimar los ojos).

ÚNICAMENTE el tornillo micrométrico. Repita este procedimiento hasta que llegue al aumento deseado.

disección, tome distintos granos de polen y prepare un montaje húmedo con ellos. Observe con el microscopio. Esquematice y describa en su hoja de descripciones.

correctamente, según indique el instructor. Notas:

éste sirve para señalar algún detalle específico de la muestra. Estereoscopio

cómoda. entifique con ayuda de su instructor y del esquema de la figura 2:

- Oculares - Objetivos - Tornillo de descenso de objetivos - Base - Platina

platina. descender el objetivo lo más que pueda, mediante el tornillo.

objeto con el ojo derecho. ar compensador.

de descripciones.

Esquematice y describa en su hoja de descripciones.

V GUÍA DE ESTUDIO 1. Investigue la diferencia de uso entre el microscopio óptico común y el estereoscopio (o microscopio estereoscópico o de disección). 2. ¿Cuáles son los cuidados y precauciones que se deben tomar en cuenta en el empleo de un microscopio y un estereoscopio? 3. Los estereoscopios poseen una platina con un lado negro y el otro blanco. ¿Para qué sirve cada uno? 4. Complete las figuras 2 y 3 de su práctica y estúdielas.

Práctica No. 6 Preparación de medios de cultivo

I INTRODUCCIÓN El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento de los microorganismos. La composición precisa dependerá de la especie que se quiera cultivar, porque las necesidades nutricionales varían considerablemente. Hay microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en medios de laboratorio normales y microorganismos muy exigentes que necesitan determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer. Existen medios cuya composición permite el crecimiento de: 1. un gran número de especies (agar nutritivo, caldo ordinario, agar de Sabouraud), 2. determinados microorganismos (impidiendo el desarrollo de otros), son los denominados medios selectivos. 3. Otros en cambio, se desarrollan para el estudio de determinadas pruebas fisiológicas o test bioquímicos (utilización de citratos, acidificación a partir de azúcares, etc.). Los medios de cultivo poseen una serie de componentes: 1. Indispensables: Entre los primeros se incluye el agua, nutrientes orgánicos (hidratos de carbono, aminoácidos, vitaminas, etc) y nutrientes inorgánicos (P, Fe, N, Mg, S, etc) 2. Alternativos: sustancias isosmotizantes (NaCl), agente solidificante (agar-agar), tampones, indicador de pH, etc. II OBJETIVOS 1. Preparar medios de cultivo como soporte y fuente de nutrientes para el desarrollo de los microorganismos in vitro. 2. Manejar los instrumentos de uso rutinario, a la vez que imprescindibles, en el laboratorio de microbiología. 3. Hacer un primer acercamiento a la manipulación de microorganismos. Adquirir la idea de la importancia del trabajo en condiciones de esterilidad y las técnicas más comunes para realizarlo. III MATERIAL Y EQUIPO

10 Cajas de Petri

4 paquetes de gelatina sin sabor

Azúcar

Cubos de caldo de pollo (Consome)

Olla, hielo sal común

Beaker de 1000 mL

Varilla de agitción

Probeta

IV PROCEDIMIENTO

Esterilice todos los elementos a utilizar especialmente las cajas de Petri.

Cree su área de esterilidad.

Mezcle cuatro paquetes de gelatina, cuatro tazas de agua, 8 cucharadas de azúcar, cuatro cucharadas de consomé o cuatro cubos de consomé en un aolla

Hierva los ingredientes lentamente mezclando continuamente.

Vierta la mezcla caliente en las cajas de Petri hasta la mitad.

Enfríe hasta que la mezcla esté sólida.

Proteja la mezcla de cualquier contaminación durante el proceso de mezclado.

Una vez frio frota las cajas con las muestras indicadas, ten cuidado de no contaminarlas.

Deja reposar una semana, observa los cambios día tras día.

Genera el reporte y observa. V GUÍA DE ESTUDIO Investigar sobre los medios de cultivo.

Práctica No. 8 Microscopía III

I OBJETIVOS Identificar las distintas características de las materias orgánicas presentes en la práctica. Utilizar correctamente el microscopio. II MATERIAL Y EQUIPO

Frasco de agua estancada

Cebolla

Jitomate

Lugol, reactivo de flehling A, B.

Glucosa al 1 %

Almidón 1%

Jugos de: naranja, limón, piña, refresco cola y bebida Light

Galleta

Papa, tortilla, manzana, zanahoria, plátano

yogurt o del caldo de pollo

Microscopio

Portaobjetos y cubreobjetos

Gotero

Bisturí

Caja de petri

Pipeta

Colorante de azul de metileno

Gradilla

Tubos de Ensayo

Pipeta graduada

Aguja de disección

Mechero bunsen o de alcohol

Asa bacteriológica III PROCEDIMIENTO AGUA ESTANCADA Material: Frasco de agua estancada, 1.- coloca una gota de agua estancada sobre un portaobjetos y cúbrela con el cubreobjetos 2.- coloca la preparación sobre la platina y sujétala con las pinzas 3.- observa la preparación con el objetivo de menor aumento 4.- acciona el tornillo micrométrico, mirando por el ocular hasta que alcances el punto enfoque. 5.- Cuando puedas observar la preparación, afina el enfoque con el tornillo micrométrico. 6.- Puedes observar con el objetivo de mayor aumento girando el revolver y anota tus resultados

CEBOLLA Material: Cebolla, Jitomate 1.- coloca un corte delgado de la epidermis de la cebolla en el portaobjetos, agrega una gota de azul de metileno, coloca el cubreobjetos encima y observa al microscopio iniciando por el objetivo de menor aumento, enfoca la imagen con la ayuda del tornillo macro y micrométrico. Observa con cuidado y haz un esquema del tejido 2.- realizar el mismo procedimiento con un poco de pulpa de jitomate. 3.- observar a distintos campos de menor y mayor aumento AZUCARES Material: Jugos de: naranja, limón, piña, refresco cola y bebida Light, Galleta, Papa, tortilla, manzana, zanahoria, plátano. AZUCARES SIMPLES (PARTE I) 1.- Coloca en una gradilla tubos de ensaye de 13 X100 y rotula cada uno de ellos con el nombre de cada material biológico a utilizar 2.- Coloca 3 ml de solución de glucosa a 1 % en un tubo de ensayo, en el tubo que rotulaste con su nombre y este será tubo número No 1 3.- prepara las muestras liquidas: jugos y refrescos en tubos de ensayo, colocando 3 ml de cada una. 4.- Numera los tubos con cuidado, colócalos en Baño María por unos minutos y observa cambio de color .anota en que muestras hubo cambio de color y la intensidad. Comparando con el primer tubo, que es la muestra patrón. AZUCARES COMPLEJOS (PARTE II) 1.- Prepara un tubo con 3 ml de solución de almidón a 1 % agrégales 2 gotas de lugol, observa el color obtenido con la muestra patrón. 2.-. Prepara pequeñas rebanadas de diversos productos: manzana, zanahoria, papa, plátano, galleta. 3.- Agrega 2 gotas de Lugol y observa los cambios de color y anota tus resultados. CELULAS Material: yogurt o del caldo de pollo 1.-observación de elodea 2.-observación de leucoplastos en la papa 3.-observación de los cromoplastos en la bugambilia 4.-observacion de vacuolas en la col morada A) Coloca una rebanada de cada uno del material biológico traído, en el portaobjetos. B) Agrega una gota de agua y coloca el cubre objetos C) Observa al microscopio a distintos aumentos D) Realiza un esquema señalando la forma en que observas IV REPORTAR