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8/16/2019 Instructivo para Espermatograma.pdf

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MANUAL DE METODOS DE ENSAYO Código :

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Título:INSTRUCTIVO PARA ESPERMATOGRAMA

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Mayo 2015

RevN°

ELABORADOpor

FECHA REVISADOpor

FECHA APROBADOpor

FECHA

00 T.M. Hugo Quispe 25/07/2009 Angelica SalazarLuis Ñanez

10/07/2009 Dr. Saul Mendoza 05/08/2009

01 T.M. Hugo Quispe 27/10/2014 Celina Cruz 04/06/2015 Luis Ñanez 04/06/2015

Confidencial - no debe ser fotocopiado sin permiso del Coordinador de Calidad de Medlab S.A.C.


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TABLA DE CONTENIDO

1 OBJETIVO

2 CAMPO DE ACCIÓN

3 RESPONSABLES

4 FINALIDAD DEL USO5 CONSIDERACIONES PARA LA TOMA DE MUESTRA

6 REQUISITOS PARA SU ENVIO

7 CAUSA DE RECHAZO

8 BIOSEGURIDAD EN EL MANEJO DE LAS MUESTRAS

9 PROCEDIMIENTO

10 REGISTRO DE RESULTADOS

11 RANGOS REFERENCIALES

12 GLOSARIO

13 REFERENCIA BIBLIOGRAFICA



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1. OBJETIVO

El presente manual presenta los elementos necesarios para efectuar el análisis morfológicocualitativo y cuantitativo de una muestra de semen, delimitando especialmente la motilidad yviabilidad para establecer criterios de fertilidad.

2. CAMPO DE APLICACIÓN

La aplicación de este procedimiento está dirigido hacia el correcto desarrollo e interpretación

del espermatograma como prueba cualitativa de la fertilidad3. RESPONSABLES

Personal de Medlab Central en el área de Inmunología Especial y sedes según corresponda.

4. FNALIDAD DEL USO

El espermograma es el examen de diagnóstico más importante y sencillo para iniciar elestudio de la fertilidad masculina. En él se evaluán los aspectos físicos del semen, como elvolúmen, pH, viscosidad, color , etc y los aspectos celulares que estudia el espermatozoideen relación con el número, movilidad, morfología y vitalidad.

5. CONSIDERACIONES PARA LA TOMA DE MUESTRA5.1 Explicar el procedimiento al paciente y lo importante que es para su médico la información que

se obtenga del examen

5.2 Se recomienda obtener la muestra de semen entre los 2 a 7 dias de abstinencia sexual. Parareducir la variabilidad de los resultados de los análisis del semen.

5.3 En la etiqueta del frasco se debe anotar el nombre del paciente, periodo de abstinencia, fechay hora de recolección, el lugar donde fue emitida la muestra (casa o sede Medlab). Comunicaral área de Inmunología especial si el paciente usa fármacos que puede disminuir los nivelesde espermatozoides ( estrógenos, meiltestosterona, cimetidina, antineoplasicos, etc).

.

5.4 Lo ideal es que la muestra se obtenga en los servicios higiénicos del mismo laboratorio. Si lamuestra va a ser recogida en el domicilio del paciente, debemos explicarle que evite colocarloen la refrigeración y mantenerlo a la temperatura corporal para evitar una reducción en lamotilidad de los espermatozoides mientras lo transporta al laboratorio en menos de 1 hora

5.5 La muestra debe obtenerse mediante masturbación y eyaculación dentro de un recipiente devidrio o plástico de boca ancha

5.6 No se debe usar los condones de látex para recoger el semen, porque puedencomprometerla viabilidad de los espermatozoides. El coito interruptus no es aceptable parahacer la recolección del semen por que puede perderse la primera porción del eyaculado, quesuele contener la mayor concentración de espermatozoides.

5.7 Es importante destacar el hecho que la muestra de semen deben ser completa ( todo eleyaculado )



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6. REQUISITOS PARA SU ENVIO

6.1 Antes de enviar la muestra, verificar que el frasco este correctamente rotulado con el nombrey código del paciente, periodo de abstinencia, fecha y hora de recolección y el lugar donde fueemitida la muestra ( casa o sede Medlab).

6.1 Enviar inmediatamente la muestra al laboratorio para su proceso.

6.2 Transportar la muestra a temperatura ambiente, CM anotara la hora en que fue recibida lamuestra en el laboratorio

7. CAUSA DE RECHAZO

7.1 Muestra refrigerada, recoleccion incompleta del eyaculado, pasado mas de 1 hora de habersido emitido la muestra ( si es para espermatograma ). Para cultivo no mayor de 3 horas derecolección.

8. BIOSEGURIDAD EN EL MANEJO DE LAS MUESTRAS

El personal de laboratorio debe saber que las muestras de semen pueden contener viruspatógenos, por ejemplo, VIH, virus de la hepatitis y del herpes y por consiguiente deben sermanejas con precaución.

9. PROCEDIMIENTO

El espermatograma consiste en realizar un análisis de todo el eyaculado. Para ello, despuésde 2 a 7 días de abstinencia sexual se recoge el líquido seminal y se realiza el análisis físico(aspecto, color, consistencia, volúmen, viscosidad, licuefaccion y pH ), microscópico(presencia de leucocitos, hematies, Trichomonas, Candida etc), recuento de espermatozoidespor ml y por eyaculado, morfología (anormalidades de cabezan cuello o cola), motilidad yvitalidad

EXAMEN MACROSCOPICO

Licuefacción

Una muestra de semen normal se licua dentro de los 60 minutos de la eyaculación a temperaturaambiente, aunque esto suele ocurrir dentro de los primeros 15 minutos. En algunos casos, lalicuefacción no es completa a los 60 minutos y esto debe ser informado La muestra debe ser mezclada cuidadosamente en el recipiente original evitando batirlavigorosamente AspectoLa muestra de semen debe ser examinada inmediatamente después de su licuefacción o dentrode los 60 minutos de emitida por simple inspección a temperatura ambiente. Una recolecciónnormal tiene una apariencia homogénea gris opalescente. Puede aparecer menos opaca cuandola concentración de espermatozoides es muy baja, marrón cuando contiene glóbulos rojos oamarillenta en el caso de un paciente con ictericia o que consume algunas vitaminas

VolúmenEl volúmen del eyaculado puede ser medido usando un tubo graduado de base cónica



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ViscosidadLa viscosidad de la muestra licuada ( a menudo denominada “consistencia” ) puede ser estimadaaspirando la muestra en una pipeta de 5 ml y permitiendo la libre caída de las gotitas, en las quese observa la longitud del filamento formado. En una muestra normal se observan gotas pequeñasy bien definidas, mientras que en una muestra de viscosidad anormal se formara un filamentomayor de 2 cm. Como método alternativo, la viscosidad se puede evaluar introduciendo una varillade vidrio en la muestra y observando la longitud del filamento que se forma al retirarla. Este nodebe exceder los 2 cm

pHEl pH debe ser medido dentro de una hora de la eyaculación, se distribuye una gota del semensobre el papel de pH ( rango de pH: 6.1 – 10.0 ó 6.4 – 8.0 ), al cabo de 30 segundos el color de lazona impregnada debe ser uniforme y se compara con la cartilla patrón para determinar el pH dela muestra. Cuando el pH es menor a 7.0 en una muestra con azoospermia se debe sospecharobstrucción de la vías eyaculatorias o ausencia bilateral de los vasos deferentes.

EXAMEN MICROSCOPICO

Examen directo

Colocar 10 µl de semen en una lámina portaobjetos y colocar una laminilla cubreobjetos de 22 x22 mm, evitando la formación de burbujas. Se debe permitir que la muestre se estabilice duranteaproximadamente un minuto y observar con objetivo de 40X determinado el número deespermatozoides por campo para decidir la dilución a utilizar en el recuento de espermatozoides

• < 15 espermatozoides, dilución de 1 : 5• 15 – 40 espermatozoides, dilución de 1 : 10• 40 – 200 espermatozoides, dilución de 1 : 20• 200 espermatozoides, dilución de 1 : 50

Buscar la presencia de otros elementos no espermáticos : células, hematíes, leucocitos,levaduras, Trichomonas, etc

MotilidadExaminar cinco campos microscópicos para evaluar la motilidad de los espermatozoides como

sigue : Motilidad progresiva (MP) : Los espermatozoides se mueven activamente en forma linealo en grandes circulos sin tener en cuenta la velocidad

Motilidad No Progresiva (NP) : Todos los otros patrones de motilidad con ausencia deprogresion. Ej. Nadar en pequeños circulos, el flagelo se mueve con dificultad, etc

Inmóviles (IM ) : Sin movimiento

VitalidadPara el estudio de la vitaidad, colocar 10 µl de semen en una lámina mas 1 gota de Eosina Y al0.5 % en solución acuosa de 9 gr/L de ClNa. Mezclar y colocar una laminilla.Obsevar a 40 X el porcentaje de espermatozoides que no se colorean y debe coincidir con lasuma de MP+NPLos espermatozoides muertos lisan su membrana y permite la entrada del colorante supravital

( Eosina Y )



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Recuento Se utiliza la cámara de Neubauer, la dilución se determina ( 1:5, 1:10,1:20, 1:50 ) de acuerdo

a la estimación preliminar de la concentración espermática en el examen directo. Ej . unadilución 1:20 se prepara con 5 µl de semen y 95 µl de diluyente

Diluyente : 50 gr de bicarbonato de sodio ( Na HCO3 ) y 10 ml de formol al 36 % ( v / v ) y aguadestilada suficiente para 1,000 ml

Cargar la cámara de Neubauer con 10 µl de la dilución por duplicado y leer en el cuadradocentral ( de hematíes ) que esta dividido en 25 cuadrados.

Para muestras con menos de 10 espermatozoides por cuadrado, se debe contar todo elcuadrado central ( es decir los 25 cuadrados ). Ver figura mas adelante

Para los que contienen 10 – 40 espermatozoides por cuadrado pueden estudiarse 10cuadrados. Ver figura mas adelante

Para los que contienen más de 40 espermatozoides por cuadrado es suficiente analizar 5cuadrados. Ver figura mas adelante

Si un espermatozoides esta en la línea que divide a dos cuadrados adyacentes, solo se debecontar si esta en el lado superior o izquierdo del cuadrado que se estudia

Calcular el recuento / ml, multiplicando por el factores correspondientes :

Ejm : Si el recuenro se realiza en los 5 cuadrados de la retícula central de los hematíes y se obtuvocomo resultado 120 espermatozoides con una dilución de semen de 1/10

Recuento : 120 espermatozoides / 2 ( factor de corección) = 60 espermatozoides

Recuento / ml = 60 x 1´000,000 ( factor de dilución ) = 60´000,000 espermatozoides / ml



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Calcular el recuento / eyaculado, multiplicando el recuento / ml por el volúmen del semen

Ejm : Volúmen de semen : 2.5 ml

Recuento / eyaculado = 60´0000,0000 x 2.5 ml = 150´000,000 espermatozoides / eyaculado

OTROS FACTORES

Dilución del semenFactor de corrección

5 cuadrados contados 10 cuadrados contados 25 cuadrados contados1 / 10 2 4 101 / 20 1 2 51 / 50 0.4 0.8 2

FORMULA GENERAL :

Nº de espermatozoides contados en los cuadradosRecuento / ml = --------------------------------------------------------------------- x 106

Factor de corrección

MorfologíaSe realiza en el mismo preparado del examen directo con Eosina Y al 0.5 % ( Vitalidad ) Se evalua las caracteristicas morfológicas y se expresa en porcentajes :

Defectos en la cabeza : grande, pequeña, acintada, piriformes, amorfa y vacuolada, cabezasdobles, etc

Defecto del cuello Defectos de la cola : corta, múltiple, doblada ( > 90° ), irregular, etc

Ejm :

Defecto de cabeza 12 % Defecto de cuello 05 % Defectos de la cola 05 %

----------------TOTAL 22 %



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Espermatozoideanormal : cabezaalargada opiriforme

Espermatozoide normal

Espermatozoide con defecto de cabeza

Espermatozoide normal :Cabeza ovalada 4 x 5 µm delongitud y 2.5 x 3.5 µm deancho. Cola derecha yuniforme de 45 µm de largo



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Cabeza de alfiler Cabeza piriforme

Dos colas Dos cabezas y dos colas

Cola enrrollada



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10. REGISTRO DE RESULTADOS

Todos los resultados se anotarán en la hoja de trabajo F-IN-P-02-02Todo hallazgo anormal debe ser consultado con el Supervisor del Área o Médico Jefe delDepartamento para proponer los comentarios necesarios o indicar examenescomplementarios si es que fuera necesario

11. RANGOS REFERENCIALES

VOLÚMEN Límite inferior de 1.5 mlpH 7.2 – 9.0LEUCOCITOS 0 – 2 x campo+MOTILIDAD PROGRESIVA (MP) Límite inferior de 32%MOTILIDAD TOTAL (MP + NP) Límite inferiro de 40%VITALIDAD Límite inferior de 58%MORFOLOGÍA NORMAL Mayor al 50 %DEFECTO DE CABEZA 18 %DEFECTO DE CUELLO 05 %DEFECTO DE COLA 05 %RECUENTO / mm3 Límite inferior 15 x 106 / mlRECUENTO / EYACULADO Límite inferior 39 x 106 / eyaculado

12. GLOSARIO

POLIZOOSPERMIA Concentración de espermatozoides mayor a 200 x 106 / mlNORMOZOOSPERMIA Eyaculado normal, Límite inferior 39 x 106 / ml / eyaculado

OLIGOZOOSPERMIA Concentración de espermatozoides menor al valor de referencia (Menor a 39 x 106 / ml / eyaculado)

ASTENOZOOSPERMIA Menos del 58 % de espermatozoides con progregresión lineal(movilidad MP+NP) o menos del 25 % con progresión rápida(movilidad MP).

TERATOZOOSPERMIA Menos del 50 % de espermatozoides con morfología normalAZOOSPERMIA Ausencia de espermatozoides en el eyaculadoASPERMIA No hay eyaculadoNECROZOOSPERMIA Concentración, morfología de los espermatozoides normal y aumento

de % de espermatozoides muertosHIPOSPERMIA Volúmen del semen menor a 1.5 ml

13. REFERENCIA BIBLIOGRAFICA

WHO.Laboratory manual for the examination and processing of human semen. 5taed. 2010



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CAMBIOS AL DOCUMENTO ANTES

1. RESPONSABLES Personal de Medlab Central en el area de Inmunologia Especial, personal de las ClinicasMaison Sante Lima, Chorrillos, Este, El Golf, Collique, PSB, CSMP, CSJD y Max Salud

AHORA

1. RESPONSABLES Personal de Medlab Central en el area de Inmunologia Especial y sedes según corresponda.

ANTES

5.2 Se recomienda obtener la muestra de semen entre los 3 a 5 días de abstinencia sexual.Para reducir la variabilidad de los resultados de los análisis del semen.

DESPUES

5.2 Se recomienda obtener la muestra de semen entre los 2 a 7 dias de abstinencia sexual.

Para reducir la variabilidad de los resultados de los análisis del semen.

ANTES

9. PROCEDIMIENTO

El espermatograma consiste en realizar un analisis de todo el eyaculado. Para ello, despuesde 3 a 5 dias de abstinencia sexual se recoge el liquido seminal y se realiza el analisis físico(aspecto, color, consistencia, volúmen, viscosidad, licuefaccion y pH ), microscópico(presencia de leucocitos, hematies, Trichomonas, Candida etc), recuento de espermatozoidespor ml y por eyaculado, morfología (anormalidades de cabezan cuello o cola), motilidad yvitalidad

AHORA

9. PROCEDIMIENTO

El espermatograma consiste en realizar un analisis de todo el eyaculado. Para ello, despuesde 2 a 7 dias de abstinencia sexual se recoge el liquido seminal y se realiza el analisis físico(aspecto, color, consistencia, volúmen, viscosidad, licuefaccion y pH ), microscópico(presencia de leucocitos, hematies, Trichomonas, Candida etc), recuento de espermatozoidespor ml y por eyaculado, morfología (anormalidades de cabezan cuello o cola), motilidad yvitalidad



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ANTES

MotilidadExaminar cinco campos microscópicos para evaluar la motilidad de los espermatozoides comosigue :

Grado A : Motilidad progresiva rápida Grado B : Motilidad progresiva lenta Grado C : Motilidad no progresiva Grado D : Inmóviles

Al menos el 50% de ellos debe mostrar movilidad con progresion ( grado A + B )

VitalidadPara el estudio de la vitaidad, colocar 10 µl de semen en una lámina mas 1 gota de Eosina Y al0.5 % en solucion acuosa de 9 gr/L de ClNa. Mezclar y colocar una laminilla.Obsevar a 40 X el porcentaje de espermatozoides que no se colorean y debe coincidir con lasuma de la motilidad de los espermatozoides grado A y BLos espermatozoides muertos lisan su membrana y permite la entrada del colorante supravital( Eosina )

AHORA

MotilidadExaminar cinco campos microscópicos para evaluar la motilidad de los espermatozoides comosigue :

Motilidad progresiva (MP) : Los espermatozoides se mueven activamente en forma linealo en grandes circulos sin tener en cuenta la velocidad

Motilidad No Progresiva (NP) : Todos los otros patrones de motilidad con ausencia deprogresion. Ej. Nadar en pequeños circulos, el flagelo se mueve con dificultad, etc

Inmoviles (IM ) : Sin movimiento

VitalidadPara el estudio de la vitaidad, colocar 10 µl de semen en una lámina mas 1 gota de Eosina Y al0.5 % en solucion acuosa de 9 gr/L de ClNa. Mezclar y colocar una laminilla.Obsevar a 40 X el porcentaje de espermatozoides que no se colorean y debe coincidir con lasuma de MP+NPLos espermatozoides muertos lisan su membrana y permite la entrada del colorante supravital( Eosina Y )

ANTES


VOLÚMEN 2.0 – 5.0 mlpH 7.2 – 9.0LEUCOCITOS 0 – 2 x campo+MOTILIDAD GRADO A Mayor al 25 %VITALIDAD Mayor al 50 %MORFOLOGÍA NORMAL Mayor al 50 %



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DEFECTO DE CABEZA 18 %DEFECTO DE CUELLO 05 %DEFECTO DE COLA 05 %RECUENTO / mm3 20 - 200 x 106 / mlRECUENTO / EYACULADO 40 - 300 x 106 / eyaculado

12. GLOSARIO

POLIZOOSPERMIA Concentración de espermatozoides mayor a 200 x 106 / mlNORMOZOOSPERMIA Concentración de espermatozoides entre 20 y 200 x 10 6 / mlOLIGOZOOSPERMIA Concentración de espermatozoides menor a 20 x 106 / mlASTENOZOOSPERMIA Menos del 50 % de espermatozoides con progregresión lineal

(movilidad A+B) o menos del 25 % con progresión rápida (movilidadA).

TERATOZOOSPERMIA Menos del 50 % de espermatozoides con morfología normalAZOOSPERMIA Ausencia de espermatozoides en el eyaculadoASPERMIA No hay eyaculadoNECROZOOSPERMIA Concentración, morfología de los espermatozoides normal y aumento

de % de espermatozoides muertosHIPOSPERMIA Volúmen del semen menor a 2 ml


OMS, Manual del Laboratorio de la OMS para el examen del semen humano y de lainteraccion entre el semen y el moco cervical. Ed. Medica Panamericana . 4ta ed. 2001

AHORA


VOLÚMEN Limite inferior de 1.5 mlpH 7.2 – 9.0LEUCOCITOS 0 – 2 x campo+MOTILIDAD PROGRESIVA (MP) Limite inferior de 32%MOTILIDAD TOTAL (MP + NP) Limite inferiro de 40%VITALIDAD Limite inferior de 58%MORFOLOGÍA NORMAL Mayor al 50 %DEFECTO DE CABEZA 18 %DEFECTO DE CUELLO 05 %DEFECTO DE COLA 05 %RECUENTO / mm3 Limite inferior 15 x 106 / mlRECUENTO / EYACULADO Limite inferior 39 x 106 / eyaculado



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12. GLOSARIO

POLIZOOSPERMIA Concentración de espermatozoides mayor a 200 x 106 / mlNORMOZOOSPERMIA E yaculado normal, Limite inferior 39 x 106 / ml / eyaculado

OLIGOZOOSPERMIA Concentracion de espermatozoides menor al valor de referencia (Menor a 39 x 106 / ml / eyaculado)

ASTENOZOOSPERMIA Menos del 58 % de espermatozoides con progregresión lineal

(movilidad MP+NP) o menos del 25 % con progresión rápida(movilidad MP).TERATOZOOSPERMIA Menos del 50 % de espermatozoides con morfología normalAZOOSPERMIA Ausencia de espermatozoides en el eyaculadoASPERMIA No hay eyaculadoNECROZOOSPERMIA Concentración, morfología de los espermatozoides normal y aumento

de % de espermatozoides muertosHIPOSPERMIA Volúmen del semen menor a 1.5 ml


WHO.Laboratory manual for the examination and processing of human semen. 5taed. 2010


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