POTENSI KOMBINASI EKSTRAK ETANOL DAUN

KARAMUNTING (Rhodomyrtus tomentosa) DAN DAUN LIDAH

BUAYA (Aloe vera) SEBAGAI ANTIHIPERLIPIDEMIK

PADA TIKUS PUTIH (Rattus novergicus) JANTAN DIABETES

Kajian Terhadap Kadar Kolesterol Total

Usulan Penelitian

Diajukan guna menyusun Karya Tulis Ilmiah untuk memenuhi

sebagian syarat memperoleh derajat Sarjana Kedokteran

Universitas Lambung Mangkurat

Diajukan Oleh :

Novita Sari

I1A007066

UNIVERSITAS LAMBUNG MANGKURAT

FAKULTAS KEDOKTERAN

BANJARBARU

Mei, 2010

HALAMAN PENGESAHAN

Usulan Penelitian KTI 1 oleh Novita Sari Telah dipertahankan di depan dewan penguji

Pada tanggal 24 Mei 2010

Dewan Penguji

Ketua (Pembimbing Utama)

Dra. Fujiati, M.Si

Anggota

(Pembimbing Pendamping)

dr. Edyson, M.Kes

BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang Masalah

Diabetes Mellitus merupakan penyakit tidak menular yang akan meningkat

jumlahnya dimasa datang. Diabetes sudah merupakan salah satu ancaman utama

bagi kesehatan umat manusia pada abad 1. Perserikatan Bangsa-bangsa (WHO)

membuat perkiraan bahwa pada tahun 2000 jumlah pengidap diabetes di atas

umur 20 tahun berjumlah 150 juta orang dan dalam kurun waktu 25 tahun

kemudian,pada tahun 2025, jumlah itu akan membengkak menjadi 300 juta orang

(1).

Pada Diabetes Mellitus (DM) terjadi gangguan metabolisme karbohidrat,

lemak, dan protein serta ditandai dengan tingginya kadar gula dalam darah

(hiperglikemia) dan urin (glukosuria) (2). Hal ini disebakan karena kekurangan

hormon insulin yang dapat berakibat pada metabolisme di dalam tubuh manusia

baik dari proses metabolisme karbohidrat, lipid dan protein (3).

Insulin berperan meningkatkan pemakaian glukosa sebagai energi bagi

jaringan tubuh, dan secara otomatis mengurangi pemakaian sumber lain yaitu

lemak. Oleh karena itu, bila insulin tidak ada atau tubuh kekurangan insulin maka

terjadi gangguan metabolisme lipid. Defisiensi insulin akan meningkatkan

terjadinya pemecahan lemak di jaringan adiposa yang kemudian dilepaskan ke

aliran darah (4).

1

Bila insulin tidak ada atau sangat sedikit maka enzim LSH menjadi sangat

aktif untuk menghidrolisis trigliserida yang disimpan di jaringan adiposa sehingga

terjadi pelepasan asam lemak dan gliserol pada sirkulasi darah dalam jumlah

sangat banyak. Kolesterol diangkut dalam darah sebagai komponen lipoprotein

darah. Dalam darah kilomikron akan beralih menjadi sisa kilomikron yang kaya

kolesterol dan akan membentuk asam lemak dan kolesterol bebas. Asam lemak

bebas yang berlebihan dalam plasma akan meningkatkan pembentukan kolesterol

bebas. Defisiensi insulin akan menghambat proses lipogenesis di jaringan adipose

dan hati sehingga terjadi peningkatan kadar kolesterol, VLDL,LDL, dan

rendahnya kadar HDL. Akumulasi lipid dalam darah akan meningkatkan oksidasi

dan menyebabkan terjadinya sumbatan dan plak di pembuluh darah sehingga

mengakibatkan berbagai komplikasi fatal (5).

Untuk mengatasi berbagai komplikasi penyakit akibat tingginya kadar gula

dan kolesterol dalam darah, harus dilakukan upaya diet makanan yang rendah

kalori dan lemak, selain itu juga dibantu dengan pemberian obat antihiperglikemik

sekaligus antihiperlipidemik yang menggunakan obat herbal melalui pemanfaatan

bahan alam yang relatif tidak memiliki efek samping,harganya juga relatif murah

dan mudah dibudidayakan sendiri salah satu contohnya adalah daun karamunting

dan lidah buaya.

Berdasarkan penelitian Sulistyo dkk, daun karamunting (Rhodomyrtus

tomentosa), menunjukkan adanya senyawa golongan flavonoid, steroid,

triterpenoid, tanin galat, tanin katekat, kuinon dan unsur natrium, kalsium, kalium

serta magnesium (22).

Diantara zat-zat tersebut flavonoid merupakan zat yang paling efektif

menurunkan kadar kolesterol darah karena flavonoid bekerja meningkatkan

kolesterol HDL. Daun lidah buaya memiliki fungsi membantu menstabilkan kadar

kolesterol darah (7). Ishii, melaporkan bahwa pemberian lidah buaya gel pada diet

menyebabkan penurunan total lemak, menurunkan kadar kolesterol total, trigliserida,

meningkatkan kadar HDL dan menormalkan kadar gula darah (8).

Penelitian yang mengkaji pemanfaatan masing-masing ekstrak daun

karamunting dan lidah buaya sebagai antihiperglikemik pada pasien diabetes

mellitus sudah pernah dilakukan. Namun, penelitian yang mengkaji tentang

pemanfaatannya sebagai kombinasi antihiperlipidemik (kajian terhadap kadar

kolesterol total) belum pernah dilakukan. Sehingga pada penelitian ini akan dikaji

lebih lanjut mengenai potensi kombinasi ekstrak etanol daun karamunting dan

lidah buaya sebagai antihiperlipidemik dengan mengukur kadar kolesterol total

pada darah tikus diabetes.

B.Rumusan Masalah

Berdasarkan uraian pada latar belakang masalah,maka permasalahan yang

akan diteliti adalah dapatkah ekstrak etanol daun karamunting dan lidah buaya

menurunkan kadar kolesterol total pada darah tikus jantan yang didiabeteskan?

C.Tujuan penelitian

Tujuan umum dari penelitian ini untuk membuktikan adanya pengaruh dari

pemberian ekstrak metanol daun karamunting dan lidah buaya terhadap kadar

kolesterol total pada tikus putih jantan diabetik .

Tujuan khusus ini untuk mengukur kadar kolesterol total pada tikus putih

jantan yang hiperglikemia setelah diberikan kombinasi ekstrak etanol daun

karamunting dan lidah buaya.

D.Manfaat Penelitian

Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi klinis mengenai

khasiat kombinasi ekstrak etanol daun karamunting dan lidah buaya sebagai bahan

alam yang berkhasiat untuk menurunkan kadar kolesterol total pada kasus

diabetes melitus. sehingga berguna bagi pengembangan keilmuan lebih lanjut dan

membentuk gagasan-gagasan baru tentang terapi herbal terbaru untuk mencegah

komplikasi pada diabetes mellitus.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

A. Diabetes Mellitus dan Hiperlipidemia

Diabetes Mellitus (DM) merupakan suatu kelompok penyakit metabolik

dengan karakteristik hiperglikemia yang terjadi karena kelainan sekresi insulin,

kerja insulin atau kedua-duanya (9).

Secara klinis terdapat 2 macam diabetes tetapi sebenarnya ada yang

berpendapat diabetes hanya merupakan suatu spektrum defisiensi insulin. Individu

yang kekurangan insulin secara total atau hampir total dikatakan sebagai diabetes

juvenile onset atau insulin dependent atau ketosis prone, karena tanpa insulin

dapat terjadi kematian dalam beberapa hari yang disebabkan ketoasidosis. Pada

ekstrem yanglain terdapat individu yang stable atau maturity onset atau non-

insulin dependent. Orang-orang ini hanya menunjukkan defisiensi insulin yang

relatif dan walaupun banyak diantara mereka mungkin memerlukan suplementasi

insulin, tidak akan terjadi kematian karena ketoasidosis walaupun insulin eksogen

dihentikan (10).

Hiperglikemia didefinisikan sebagai kadar glukosa darah di atas nilai normal

yaitu lebih dari 110 mg/dl (11). Hiperglikemia merupakan penyebab awal

terjadinya kerusakan jaringan pada diabetes melitus. Sel yang paling peka dan

mengalami kerusakan akibat hiperglikemia adalah sel endotelial retina, sel

mesangial glomerulus, sel neuron dan sel schwan pada jaringan saraf perifer (12).

5

Lemak diperoleh dari makanan atau dibentuk di dalam tubuh,terutama di

hati dan bisa disimpan di dalam sel-sel lemak untuk digunakan di kemudian hari.

Sel-sel lemak juga melindungi tubuh dari dingin dan membantu melindungi tubuh

terhadap cedera. Lemak merupakan komponen penting dari selaput sel, selubung

saraf yang membungkus sel-sel saraf serta empedu (10).

B. Lipid dan lipoprotein

Di dalam darah manusia ditemukan tiga jenis lipid yaitu kolesterol,trigliserid

dan fofolipid. Oleh karena sifat lipid yang susah larut dalam lemak,maka perlu

dibuat bentuk yang terlarut. Untuk itu dibutuhkan suatu zat pelarut yaitu suatu

protein yang dikenal sembilan jenis apoprotein yang diberi nama secara alfabetis

yaitu Apo A,Apo B,Apo C, Apo E.Senyawa lipid dengan apoprotein ini dikenal

dengan nama lipoprotein (10).

C. Metabolisme lipid pada penderita Diabetes Melitus

Pada penderita Diabetes Melitus akan terjadi kelainan metabolisme tubuh,

dan salah satunya adalah lipid, yaitu peningkatan katabolisme lipid dengan

peningkatan pembentukan benda- benda keton dan juga menurunnya sintesis asam

lemak dan trigliserid (13). Dengan kelainan metabolisme lipid yang besar inilah,

maka diabetes melitus sering disebut sebagai suatu penyakit metabolisme lemak.

Lima puluh persen glukosa yang dimakan dibakar menjadi CO2 dan H2O, 5%

diubah menjadi glikogen, dan sekitar 30 40% diubah menjadi lemak dalam

depot lemak. Bagi penderita diabetes melitus terjadi penurunan pengubahan

glukosa menjadi asam lemak dalam depot lemak karena defisiensi glukosa intrasel

(140. Insulin menghambat lipase sensitif hormon dalam jaringan adiposa, dan

tanpa enzim ini terjadi peningkatan 2 kali kadar asam lemak bebas plasma.

Peningkatan glukagon juga meningkatkan mobilisasi asam lemak (15). Jadi, pada

penderita diabetes melitus kadar lemak bebas paralel dengan kadar glukosa darah

merupakan indikator baik mengenai beratnya diabetes melitus (16)

Dalam hati dan jaringan lain, asam lemak dikatabolisme menjadi asetil ko-

A. Sebagian asetil ko-A dibakar bersama dengan residu asam amino menjadi CO2

dan H2O dalam siklus asam sitrat tetapi suplainya melebihi kapasitas katabolisme

asetil ko-A jaringan. Di hati penderita diabetes melitus terjadi peningkatan

glukoneogenesis dan banyaknya glukosa dalam sirkulasi, selain itu juga terdapat

kegagalan pengubahan asetil ko-A menjadi malonil ko-A yang kemudian menjadi

asam lemak (17).

D.Kadar Kolesterol Darah dan Pengaturannya

Kadar kolesterol darah adalah kadar kolesterol yang terlarut dalam plasma

darah. Kolesterol terdapat dalam jaringan dan lipoprotein plasma yang bisa berupa

kolesterol bebas atau gabungan dengan asam lemak rantai panjang sebagai ester

kolesterol. Kolesterol sangat larut dalam lemak tetapi hanya sedikit yang larut

dalam air, dan membentuk ester dengan asam lemak. Kolesterol merupakan

produk metabolisme hewan sehingga terdapat banyak pada makanan yang berasal

dari hewan seperti kuning telur, daging, hati, dan otak (4).

Separuh dari jumlah kolesterol tubuh berasal dari sintesis dan sisanya

berasal dari makanan sehari-hari yang berupa karbohidrat (glukosa ), lemak (

asam lemak), dan protein (asam amino). Pada dasarnya kolesterol beredar dalam

bentuk lipoprotein plasma yang dibentuk oleh hati, tetapi semua sel tubuh selain

hati juga membentuk kolesterol meskipun dalam jumlah yang sedikit. Manfaat

kolesterol non membran adalah untuk membentuk asam kolat di dalam hati.

Sekitar 80% kolesterol digunakan untuk membentuk asam kolat ini. Selain itu

kolesterol berkonjugasi dengan zat lain untuk membentuk garam empedu, yang

membantu pencernaan dan absorpsi lemak. Sisanya sekitar 20% kolesterol

digunakan untuk berbagai keperluan antara lain membentuk hormon

adrenokortikal, membentuk progesteron dan estrogen, dan untuk membentuk

testosteron. Sebagian besar kolesterol diendapkan dalam lapisan korneum (4).

Sekitar 1 gram kolesterol dieliminasi dari tubuh setiap hari. Separuh dari

kolesterol ini diekskresikan ke dalam feses setelah dikonversi menjadi asam

empedu, dan sisanya diekskresikan sebagai kolesterol (18).

Peningkatan jumlah kolesterol yang dicerna tiap hari sedikit meningkatkan

konsentrasi plasma, tetapi bila kolesterol diabsorbsi oleh selsel tubuh maka

peningkatan konsentrasi kolesterol menghambat enzim 3- hidroksi-3metilglutaril

KoA reduktase untuk pembentukan kolesterol, dan ini menjadi suatu sistem

kontrol umpan balik intrinsik untuk mencegah peningkatan konsentrasi kolesterol

plasma yang berlebihan. Akibatnya konsentrasi kolesterol darah biasanya tidak

berubah naik atau turun kurang lebih 15%, kecuali apabila dilakukan pengubahan

jumlah kolesterol dalam diet. Diet lemak yang sangat jenuh meningkatkan

konsentrasi kolesterol darah 15 25%. Kondisi ini diakibatkan oleh peningkatan

penimbunan lemak dalam hati yang menyebabkan peningkatan jumlah asetil Ko-

A dalam sel hati untuk menghasilkan kolesterol. Oleh karena itu, untuk

menurunkan konsentrasi kolesterol darah sangat penting yaitu dengan

mempertahankan diet rendah lemak jenuh dan diet rendah kolesterol. Pada

penderita diabetes melitus yang kekurangan insulin terjadi peningkatan

konsentrasi kolesterol darah (4).

Gambar 2.1 Kolesterol (Cholest-5-en-3-ol)

Kadar kolesterol darah yang meningkat inilah yang dapat mempercepat

terjadinya penyakit aterosklerosis vaskuler yang merupakan komplikasi dari

diabetes melitus ini (19). Peningkatan kolesterol darah disebabkan oleh kenaikkan

kolesterol yang terdapat pada very-low- density beta lipoprotein dan low

density- beta lipoprotein sekunder karena peningkatan trigliserida yang besar

dalam sirkulasi (16).

Biosintesis kolesterol dapat dijelaskan sebagai berikut : Dua molekul asetil

Ko-A berkondensasi membentuk asetoasetil KoA yang dikatalisis oleh enzim

sitosol tiolase. Asetoasetil KoA berkondensasi dengan molekul asetil KoA

berikutnya yang dikatalisis oleh enzim HMG-KoA sintase untuk membentuk

HMG-KoA. Selanjutnya HMG-KoA dikonversi menjadi mevalonat dengan

dikatalisis oleh enzim HMG- KoA reduktase. Setelah terbentuk mevalonat, maka

mevalonat mengalami fosforilasi oleh ATP untuk membentuk beberapa

intermediet terfosforilasi aktif dan kemudian mengalami dekarboksilasi untuk

membentuk unit isoprenoid aktif yaitu isopentenil difosfat yang mengalami

kondensasi membentuk farnesil difosfat. Proses ini terjadi lewat isomerisasi

senyawa isopentenil difosfat yang melibatkan pergeseran ikatan rangkap untuk

membentuk dimetilalil difosfat yang berkondensasi dengan isopentenil difosfat

lainnya untuk membentuk intermediet dengan 10 karbon yaitu geranil difosfat.

Kondensasi lebih lanjut dengan isopentenil difosfat membentuk farnesil difosfat

tersebut di atas (4).

Dua molekul farnesil difosfat berkondensasi dengan ujung difosfat dalam

sebuah reaksi yang melibatkan eliminasi pirofosfat anorganik untuk membentuk

pra skualen difosfat dan kemudian diikuti oleh reduksi NADPH yang disertai

eliminasi radikal pirofosfat anorganik sisanya dan dihasilkan skualen, kemudian

skualen dikonversi menjadi lanosterol melalui proses siklisasi (4).

Tahap terakhir yaitu pembentukan kolesterol dari lanosterol yang

berlangsung dalam membran retikulum endoplasma dan melibatkan perubahan

pada inti steroid serta rantai samping. Kolesterol dihasilkan saat ikatan rangkap

rantai samping direduksi (4).

Pengaturan sintesis kolesterol terjadi pada tahap HMG KoA reduktase HMG

KoA reduktase ini di hati dihambat oleh mevalonat. Sintesis kolesterol juga

dihambat oleh LDL kolesterol yang diambil lewat reseptor LDL sedangkan

pemberian hormon insulin meningkatkan aktivitas HMG KoA reduktase.

Peningkatan kolesterol dapat terjadi akibat pengambilan lipoprotein yang

mengandung kolesterol oleh reseptor LDL atau reseptor skavenger, pengambilan

kolesterol bebas dari lipoprotein yang kaya kolesterol ke membran sel, sintesis

kolesterol, dan hidrolisis ester kolesterol oleh enzim ester kolesteril hidrolase

(4).Sedangkan penurunan kolesterol dapat terjadi karena aliran kadar kolesterol

dari membran sel ke lipoprotein yang potensial kolesterolnya rendah (20).

Lebih jelasnya, biosintesis kolesterol dapat dilukiskan dengan bagan:

Gambar 2.2 : Biosintesis kolesterol

E. Kadar kolesterol

Kadar kolesterol normal pada manusia adalah < 200 mg/dl. Kadar kolesterol

dikatakan tinggi apabila kadar kolesterol > 240 mg/dl. Mekanisme peningkatan

kadar kolesterol darah pada penderita diabetes melitus yang resistensi insulin

,hormon sensitive lipase di jaringan adipose akan menjadi aktif sehingga lipolisis

trigliserid (10).

.

F.Tanaman karamunting

Taksonomi dari karamunting adalah sebagai berikut (21):

Kingdom : Plantae

Subkingdom : Tracheobionta

Superdivisi : Spermatophyta

Divisi : Magnoliophyta

Kelas : Magnoliopsida

Sub-Kelas : Rosidae

Ordo : Myrtales

Familia : Myrtaceae

Genus : Rhodomyrtus

Spesies : Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk

Karamunting ini berupa perdu, tegak, tinggi 0,5-4m, banyak bercabang,

bersisik dan berambut.Daun tunggal, bertangkai, letak berhadapan dan bersilang.

Helai daun berbentuk bundar telur memenjang sampai lonjong,ujung lancip,

pangkal membulat, tepi rata, permukaan berambut pendek yang jarang dan kaku

sehingga terba kasar dengan 3 tulang daun yang melengkung, panjang 2-20 cm,

lebar 0,75-8,5, bewarna hijau (22).

Tanaman karamunting berkembang biak dengan biji.perbungaan majemuk

keluar di ujung cabang berupa malai rata dengan jumlah bunga tiap malai 4018,

mahkota 5, bewarna ungu tua kemerahan.biji kecil-kecil, bewarna cokelat. Buah

dapat dimakan, sedangkan daun muda bisa dimakan sebagai lalapan atau disayur.

Karamunting tumbuh liar pada tempat-tempat yang mendapat cukup sinar

matahari, yaitu di lereng gunung,semak belukar, lapangan yang tidak terlalu

gersang,atau di daerah obyek wisata sebagai tanaman hias. Tumbuhan ini dapat

ditemukan hingga ketinggian 1.650m di atas permukaan laut. Secara lebih jelas

dapat dilihat pada gambar di bawah ini.

Gambar 2.3 Morfologi daun karamunting (Rhodomyrtus tomentosa)

Secara umum karamunting mengandung berbagai senyawa kimia

diantaranya senyawa golongan flavonoid, saponin, tanin katekat/galat, steroid,

triterpenoid, dan unsur anorganik seperti natrium, kalium, kalsim serta magnesium

(22).

Flavonoid merupakan zat yang paling efektif menurunkan kadar kolesterol

darah karena flavonoid bekerja dengan cara menekan pembentukan oksidasi LDL

dan proses inflamasi pada dinding arteri (23).

Daun merupakan bagian dari tanaman karamunting yang digunakan di

masyarakat sebagai obat tradisional dan telah dikaji secara ilmiah sebagai penurun

gula darah (hipoglikemik) (6).

G.Tanaman Lidah buaya

Taksonomi dari lidah buaya adalah sebagai berikut : (23)

Kingdom : Plantae (Tumbuhan)

Subkingdom : Tracheobionta (Tumbuhan berpembuluh)

Super Divisi : Spermatophyta (Menghasilkan biji)

Divisi : Magnoliophyta (Tumbuhan berbunga)

Kelas : Liliopsida (berkeping satu / monokotil)

Ordo : Asparagales

Famili : Asphodelaceae

Genus : Aloe

Spesies : Aloe vera L.

Aloe vera merupakan tanaman yang tumbuh setinggi 60-100 cm (24-39

inci). Daunnya tebal, berwarna hijau hingga hijau keabu-abuan, dengan beberapa

variasi bintik-bintik putih pada bagian atas dan permukaan yang lebih rendah.

Tepi daunnya bergigi tajam dan mempunyai gerigi putih yang kecil berukuran

panjang 40-60 cm dan lebar pelepah bagian bawah 8-13 cm dan tebal antara 2-3

cm. Bunganya dihasilkan pada musim panas, sejenis paku-pakuan yang mencapai

tinggi 90 cm (35 inci), masing-masing bunga terjuntai dengan mahkota bunga

berwarna kuning berukuran panjang 2-3 cm (0.8-1.2 inci). Seperti spesies Aloe

yang lain, Aloe vera membentuk arbuscular mycorrhiza, simbiosis yang membuat

tanaman ini dapat mengambil nutrisi mineral dari tanah dengan baik (24). Secara

lebih jelas dapat dilihat pada gambar di bawah ini.

Gambar 2.4. Morfologi lidah buaya (Aloe vera)

Penggunaan ekstrak gel lidah buaya dapat menurunkan kadar glukosa darah,

transaminase heapatic, plasma dan jaringan, kolesterol, trigliserid, asam lemak

bebas dan fosfolipid dan dapat meningkatkan plasma insulin (25). Pada gel lidah

buaya terdapat glukomanan yang merupakan bahan aktif penurun kolesterol yang

berlebih (24).

Glukomanan adalah serat tinggi yang penting untuk membersihkan sistem

pencernaan. Glukomanan merupakan serat larut (Selube Dietary Fiber, SDF),

karena glukomanan dapat menyerap 200 kali berat air. Glukomanan dapat

mengontrol kegemukan, kadar gula darah, membantu mencegah kanker, sembelit,

dan mereduksi kolesterol. Glukomanan juga efektif untuk obat pencahar atau

laxative (26).

Glukomanan dapat menurunkan kadar kolesterol darah dengan dua cara.

Pertama, glukomanan bergabung dengan kolesterol di dalam asam empedu (cairan

berwarna kekuningan yang diproduksi oleh hati untuk memecah lemak di dalam

usus kecil). Sebagian besar kolesterol di dalam asam empedu akan dikeluarkan

bersama serat sebagai bahan buangan dan tidak diserap lagi. Kolesterol

merupakan bahan dasar pembentuk asam empedu. Untuk menggantikan asam

empedu yang hilang, kolesterol dikeluarkan dari peredaran darah. Peristiwa ini

dapat menurunkan kadar kolesterol. Kedua, serat di dalam usus mengikat asam

lemak sehingga menghambat penyerapan asam lemak yang akhirnya menghalangi

sintesis kolesterol (26).

Beberapa penelitian membuktikan bahwa rendahnya kadar kolesterol dalam

darah ada hubungannya dengan kandungan serat makanan. Secara fisiologis, serat

makanan yang larut (SDF) lebih efektif dalam mereduksi plasma kolesterol yaitu

low density lipoprotein (LDL), serta meningkatkan kadar high density lipoprotein

(HDL) (9).

H. Tikus Putih (Rattus norvegicus) dalam Penelitian

Tikus putih merupakan hewan mamalia dari famili Muridae yang dapat

ditemukan di berbagai bagian bumi. Klasifikasi ilmiah tikus putih adalah sebagai

berikut (27):

Kingdom : Animalia

Filum : Chordata

Kelas : Mammalia

Ordo : Rodentia

Famili : Muridae

Genus : Rattus

Spesies : Rattus norvegicus

Terdapat 2 cara yang dapat dilakukan untuk membuat R. norvegicus

hiperglikemia, yaitu dengan pengangkatan pankreas dan pemberian zat kimia.

Zat kimia sebagai induktor (diabetogen) yang bisa digunakan yaitu aloksan,

streptozotosin, diaksosida, adrenalin, glukagon, ethylenediaminetetraacetic

acid (EDTA) yang diberikan secara parenteral.

Tikus putih yang hiperglikemia dapat diperoleh melalui penggunaan

senyawa kimia seperti aloksan. Senyawa ini telah banyak digunakan untuk

menginduksi keadaan hiperglikemia secara eksperimental karena kemampuannya

merusak sel- pankreas yang menghasilkan insulin. Aloksan bereaksi dengan

merusak substansi esensial di dalam sel beta pankreas sehingga menyebabkan

berkurangnya granula granula pembawa insulin di dalam sel beta pankreas (28).

Penelitian terhadap mekanisme kerja aloksan secara invitro menunjukkan bahwa

aloksan menginduksi pengeluaran ion kalsium dari mitokondria yang

mengakibatkan proses oksidasi sel terganggu. Keluarnya ion kalsium dari

mitokhondria ini mengakibatkan gangguan homeostasis yang merupakan awal

dari matinya sel (29).

BAB III

LANDASAN TEORI DAN HIPOTESIS

A. Landasan Teori

Diabetes melitus disebabkan oleh menurunnya atau berhentinya pengeluaran

insulin dari sel pankreas. Hiperlipidemia juga merupakan masalah besar, karena

diperkirakan kenaikan kadar lemak pada penderita diabetes kira-kira 40--90%.

Akibatnya pasien diabetes mengalami kenaikan kematian 2--3 kali lipat akibat

kelainan jantung bila dibandingkan pasien nondiabetes (9).

Mekanisme peningkatan kadar kolesterol darah pada penderita diabetes

melitus adalah glukosa, asam lemak, dan asam amino yang diperoleh dari

makanan tidak dapat dimetabolisme oleh tubuh secara normal karena reseptor

yang seharusnya cukup menerima asupan yang sesuai mendapat kapasitas yang

lebih sehingga banyak glukosa yang tidak mendapat reseptor (15). Akibatnya,

banyak timbunan glukosa di pembuluh darah yang akan menyebabkan terjadinya

peningkatan kolesterol dan dapat menyebabkan terjadinya komplikasi lanjutan

berupa aterosklerosis dan penyakit vaskular lainnya (18).

Untuk mencegah hal tersebut, maka diperlukan antioksidan yang dapat

menurunkan kadar kolesterol total . Antioksidan tersebut dapat terkandung dalam

bahan alam, salah satunya tumbuhan karamunting (Rhodomyrtus tomentosa) dari

famili Myrtaceae yang diketahui memiliki kandungan senyawa antioksidan, yaitu

flavonoid. Flavonoid merupakan zat yang paling efektif menurunkan kadar

kolesterol darah karena flavonoid bekerja dengan cara menekan pembentukan

19

oksidasi LDL dan proses inflamasi pada dinding arteri sehingga dapat mencegah

komplikasi dari diabetes melitus (24).

Selain itu, juga dapat digunakan lidah buaya (Aloe vera) mengandung

glukomanan yang merupakan serat larut (Selube Dietary Fiber, SDF). Yang

mempunyai kemampuan menarik senyawa kolesterol dari sistem pencernaan (26).

Gambar 3.1 Skema pengaruh kombinasi ekstrak etanol R. tomentosa dan A.vera

terhadap kadar kolesterol total pada Rattus novergicus jantan

diabetes.

Diabetes

Hiperlipidemik

Induksi aloksan

Kadar kolesterol

Total

Kadar kolesterol

Total

Tanpa ekstrak etanol

R. tomentosa & A.vera

Lipolisis

Dengan ekstrak etanol

R. tomentosa & A.vera

Tikus putih jantan normal

B. Hipotesis

Hipotesis yang diajukan pada usulan penelitian ini adalah kadar kolesterol

total pada darah tikus putih (R.novergicus) jantan yang diabetes setelah pemberian

kombinasi ekstrak etanol daun karamunting (R.tomentosa) dan lidah buaya

(A.vera) lebih rendah dibandingkan dengan yang tidak diberi kombinasi ekstrak

etanol daun karamunting (R.tomentosa) dan lidah buaya (A.vera).

BAB IV

METODE PENELITIAN

A. Rancangan Penelitian

Metode penelitian yang digunakan adalah studi eksperimental dengan

Posttest-Only with Control Group Design. Jumlah minimal pengulangan untuk

setiap kelompok perlakuan adalah 6 ekor dengan menggunakan rumus Federer

(lampiran 1) ditambah 2 ekor untuk antisipasi kematian pada hewan uji.

B. Bahan dan Alat Penelitian

1. Bahan penelitian

Bahan yang digunakan adalah darah yang diambil dari jantung 32 ekor

tikus putih jantan dengan berat badan sekitar 250350 gram dan berumur sekitar

3-4 bulan, ekstrak etanol daun karamunting dan lidah buaya, pakan G untuk tikus,

CMC-Na, aloksan, etanol 96%, NaCl 0,9%, reagen EDTA, buffer sitrat 0,1 M (pH

4,5), aquadest, glukosa 5%, metformin dan eter.

2. Alat penelitian

Alat yang digunakan adalah alat pengukur kadar glukosa darah Easy

Touch (Blood Glucose/Uric Acid Dual-Function Monitoring System). Bioptic

Technology, Inc Taiwan, alat gelas (Pyrex), neraca analitik (Gibertini

), sonde

oral tikus, spuit injeksi 3 cc, kandang hewan, timbangan (Hanson

), tempat pelet,

tempat minum, kapas, plester, sarung tangan, masker, dan spektrofotometer

(Genesys 20), sentrifuge (Centurion), kertas saring, dan aluminium foil.

22

C. Variabel Penelitian

1. Variabel bebas

Variabel bebas pada penelitian ini adalah kombinasi ekstrak etanol daun

karamunting dan lidah buaya.

2. Variabel terikat

Variable terikat penelitian ini adalah kadar kolesterol total pada tikus

jantan.

3. Variabel pengganggu

a. Subyek Penelitian (R. norvegicus)

1). Umur, dikendalikan dengan memilih tikus dengan umur seragam, yaitu

sekitar 3-4 bulan.

2). Berat badan dikendalikan dengan memilih R.norvegicus jantan dengan

berat badan yang seragam, yaitu 250-350 gram.

3). Jenis kelamin, dikendalikan dengan memilih R. norvegicus jantan.

b. Bahan penelitian

Variabilitas individual tanaman karamunting dan lidah buaya

dikendalikan dengan memperoleh dari tanaman yang sama. Daun karamunting

dikendalikan dengan memilih panjang daun 5-7 cm dan lebar 2-3,5 cm

berbentuk oval meruncing. Daun lidah buaya dikendalikan dengan memilih

panjang 40-60 cm dan lebar pelepah bagian bawah 8-13 cm dan tebal antara 2-

3 cm.

c. Alat penelitian

Variabel laboratorium berupa standarisasi alat dikendalikan dengan

melakukan pengkalibrasian alat sebelum melakukan penelitian.

d. Suhu ruangan

Suhu ruangan penelitian dikendalikan dengan menempatkan subyek

penelitian pada ruangan yang sama pada setiap kelompok perlakuan.

e. Faktor fisik dan psikologis hewan penelitian

Faktor fisik dan psikologis hewan penelitian dikendalikan dengan

memberikan perlakuan yang sama pada semua hewan penelitian.

D. Definisi Operasional

1. Kadar glukosa darah adalah kadar gula darah yang diukur pada darah perifer

R. norvegicus jantan hiperglikemia sebelum diberikan ekstrak etanol daun

karamunting dan lidah buaya (untuk memastikan tikus mengalami

hiperglikemia) dalam satuan mg/dl. Kadar glukosa ini diukur dengan alat

pengukur kadar glukosa darah (Easy Touch

) selama 30 detik.

2. Tikus putih jantan hiperglikemia adalah tikus putih (R. norvegicus) jantan

dengan kadar glukosa darahnya dipertimbangkan melebihi kadar glukosa

darah kontrol negatif (> 200 mg/dl).

3. Kadar kolesterol total adalah jumlah kolesterol yang terlarut dalam plasma

darah yang manifestasi dari hasil proses lipogenesis di dalam tubuh.

4. Kombinasi ekstrak etanol daun karamunting dan lidah buaya ialah penyarian

zat yang terkandung dalam daun karamunting dan lidah buaya dengan

menggunakan pelarut etanol.

E. Prosedur Penelitian

1. Persiapan hewan uji dan pembagian kelompok

R. norvegicus sebanyak minimal 32 ekor. Selanjutnya R. norvegicus

tersebut dipisahkan secara acak ke dalam minimal 32 kandang kecil untuk

adaptasi selama 1 minggu. Setiap kandang berisi 1 ekor tikus. Kemudian dibagi

menjadi empat kelompok, dimana kelompok 3 yang diberi perlakuan berupa

pemberian aloksan dan kombinasi ekstrak etanol karamunting dan lidah buaya

serta kelompok 4,dengan perlakuan pemberian aloksan dan metformin yang

dijadikan sebagai dua kelompok perlakuan dan kelompok 1 serta 2 sebagai

kelompok kontrol. Dalam masa adaptasi tikus putih mendapat makanan khusus

tikus dan diberikan secara ad libitum dan sesuai standar Balai Penyidikan dan

Penelitian Veteriner (BPPV) Banjarbaru.

2. Pengumpulan dan determinasi bahan tanaman

Daun karamunting dan lidah buaya dikumpulkan dari tanaman yang

tumbuh di Banjarbaru, Kalimantan Selatan. Identifikasi spesies tanaman yang

akan diteliti dilakukan oleh Jurusan Biologi FMIPA Universitas Lambung

Mangkurat.

3. Pembuatan ekstrak etanol daun karamunting dan daun lidah buaya

Pembuatan ekstrak

Daun karamunting dibersihkan dan dikeringanginkan secara tidak

langsung di bawah sinar matahari kemudian diblender kasar. Pada penelitian ini,

metode ekstraksi yang digunakan ialah maserasi. Sebanyak 100 gram sampel

dimasukkan dalam alat maserasi. Kemudian larutan penyari (etanol) dituangkan

secara perlahan-lahan ke dalam alat maserasi yang berisi sampel sebanyak

minimal 5 kali berat sampel sambil diaduk-aduk hingga merata. Larutan

penyaring dituangkan hingga 1 cm di atas permukaan sampel. Maserasi dilakukan

selama 3 hari. Filtrat disaring dan pelarut diganti dengan yang baru sambil sekali-

kali diaduk. Penggantian pelarut dilakukan hingga cairan berwarna bening.

Setelah itu ekstrak dikumpulkan dan diuapkan dengan menggunakan rotary

evaporator pada tekanan rendah dengan temperatur 40C sampai didapatkan

ekstrak etanol yang kental.

Daun lidah buaya dibersihkan dan dipotong kecil-kecil kemudian

dikeringanginkan secara tidak langsung di bawah sinar matahari. Proses

selanjutnya sama dengan maserasi daun karamunting.

Pemeriksaan ekstrak bebas etanol

Ekstrak 1 tetes ditambah larutan asam sulfat pekat 1 tetes. Campuran

tersebut kemudian ditambahkan dengan 1 tetes larutan kalium permanganat pekat

dan didiamkan selama 10 menit. Tambahkan tetes demi tetes larutan natrium

bisulfit pekat ke dalam campuran tersebut hingga warna permanganat (coklat)

hilang. Bila masih ada warna coklat maka tambahkan 1 tetes larutan larutan asam

fosfat hingga larutan tidak berwarna lagi. Larutan yang sudah tidak berwarna itu

kemudian ditambah 5 ml asam kromatoprat lalu dipanaskan pada penangas

dengan suhu 50C selama 10 menit. Larutan bebas etanol terlihat dengan tidak

adanya warna pada larutan tersebut.

Pembuatan suspensi ekstrak

Pembuatan suspensi untuk mempermudah dalam pemberian pada hewan

uji. Pembuatan suspensi yaitu ekstrak etanol dicampur dengan suspending agent,

yaitu CMC-Na, kemudian ditambahkan aquadest sedikit demi sedikit hingga

terbentuk massa dan berwarna putih, setelah itu ditambahkan aquadest hingga

homogen, kemudian dimasukkan ke wadah botol kaca tertutup.

Pembuatan larutan CMC-Na 0,5%

CMC-Na sebanyak 0,5 g dilarutkan dengan aquades panas sedikit demi

sedikit sampai semua CMC-Na larut. Sisa aquades ditambahkan sampai

didapatkan volume larutan CMC-Na sebanyak 100 ml.

4. Induksi aloksan pada hewan uji

Setelah aklimatisasi selama 1 minggu, hewan uji pada tiap-tiap kelompok

dipuasakan selama 16 jam (overnight). Tikus pada kelompok kontrol positif dan

dua kelompok perlakuan kemudian dibuat diabetes dengan diinduksi aloksan 70

mg/kgBB secara intraperitonial.

5. Pengukuran glukosa darah

Pada hari ke-3 setelah induksi aloksan, sampel darah diambil dari ekor

tikus seluruh kelompok kontrol dan kelompok perlakuan untuk diukur kadar

glukosanya. Kadar glukosa diukur menggunakan alat pengukur kadar glukosa

darah (Easy Touch). Hewan uji dipertimbangkan hiperglikemia jika konsentrasi

glukosa melebihi kadar glukosa pada kontrol negatif. Penelitian dilakukan pada

hari ke-4 setelah induksi aloksan dan dipertimbangkan sebagai hari pertama

penelitian. Penelitian dilanjutkan selama 30 hari.

6. Pemberian perlakuan

Perlakuan yang diberikan pada tiap-tiap kelompok dilakukan selama 21

hari, dimulai pada hari ke-4 induksi aloksan dan dipertimbangkan sebagai hari ke-

1 penelitian, adalah sebagai berikut:

a. Kelompok 1 : Kelompok kontrol negatif, diberi CMC-Na dan placebo

b. Kelompok 2 : Kelompok kontrol positif, diberi aloksan 70 mg/kgBB.

c. Kelompok 3 : Kelompok perlakuan, diberi aloksan dan kombinasi ekstrak

etanol daun karamunting 100 mg/kgBB dan lidah buaya 250

mg/kgBB (perbandingan 1:1)

d. Kelompok 4 : Kelompok perlakuan, diberi aloksan 70 mg/kgBB dan

Metformin 10 mg/kgBB.

F. Pengukuran kadar kolesterol total

Setelah pemberian perlakuan yakni pada hari ke-21, dilakukan euthanasia

tikus. Tikus dimasukkan ke dalam beaker glass, lalu diberi eter, dan beaker glass

ditutup agar eter tidak menguap. Tunggu beberapa saat hingga tikus tersebut mati.

Selanjutnya, tikus dibedah pada bagian toraks untuk diambil darahnya melalui

jantung. Setelah dibedah, pada jantung ditetesi 1-2 tetes reagen EDTA.

Berdasarkan jumlah yang diperlukan, maka darah tikus diambil dengan spuit 3 cc

sebanyak 1 ml. Kemudian jarum injeksi dilepaskan dari tabung spuit dan darah

dituangkan ke dalam tabung reaksi secara perlahan-lahan melalui dinding tabung

untuk menghindari kerusakan mekanis dari sel darah dan usahakan jangan sampai

terjadi buih. Darah didiamkan selama 15 menit dan disentrifuse selama 20 menit

dengan kecepatan 3000 rpm. Serum darah dipipet dengan pipet mikro sebanyak

0,01 ml dimasukkan dalam tabung reaksi. Kemudian ditambahkan dengan larutan

pereaksi kolesterol sebanyak 1 ml lalu dicampur dengan menggunakan vortex.

Dan dibiarkan selama 20 menit pada suhu kamar.ukur serapan pada panjang

gelombang 500 nm terhadap blanko.Sebagai blanko digunakan pereaksi kolesterol

1 ml dan aquadest 0,01 ml. Pengukuran serapan standar sama dengan pengukuran

serapan kolesterol total, tetapi serum darah diganti dengan standar kolesterol.

Kadar kolesterol total dihitung dengan rumus : C = As x F

C = Kolesterol total

As = Resapan sampel

F = Blanko

G. Teknik Pengumpulan Data

Darah yang sudah diambil diperiksa di laboratorium Kimia/ Biokimia

Fakultas Kedokteran Universitas Lambung Mangkurat. Selanjutnya, dilakukan

pemeriksaan kadar kolesterol total dengan mengukur absorbansinya menggunakan

alat spektrofotometer. Data kadar kolesterol total kemudian dicatat, ditabulasi,

diedit, lalu dibuat reratanya pada setiap kelompok perlakuan.

H. Cara Analisis Data

Data kadar kolesterol total pada setiap kelompok ditampilkan dalam

bentuk tabel dan diperjelas dengan grafik. Data yang diperoleh, diuji

normalitasnya dengan uji Shapiro-Wilk dan diuji homogenitasnya dengan uji

Levene. Setelah data diketahui berdistribusi normal dan homogen, dilakukan uji

ANOVA klasifikasi satu arah, dengan taraf kepercayaan 95%. Selanjutnya,

dilakukan uji LSD (Least Square Different) untuk dianalisis kebermaknaannya,

dengan tingkat p < 0,05. Jika data tidak terdistribusi normal dan homogen maka

dilakukan uji Kruskal Wallis dengan taraf kepercayaan 95%. Seluruh analisis data

tersebut diolah secara komputerisasi.

I. Tempat dan Waktu Penelitian

Penelitian akan dilaksanakan di Laboratorium Kimia/ Biokimia Fakultas

Kedokteran Universitas Lambung Mangkurat Banjarbaru. Waktu penelitian

selama 6 bulan seperti ditunjukkan pada tabel 4.1.

Kegiatan Penelitian Waktu Penelitian (bulan ke-)

1 2 3 4 5 6

Penyusunan Proposal

Konsultasi

Seminar KTI I

Perbaikan

Pelaksanaan Penelitian

Pengolahan & Analisis Data

Seminar KTI II

Perbaikan

Penyusunan Laporan

J. Biaya Penelitian

Penelitian ini diperkirakan memerlukan biaya sebagai berikut:

1. Tikus putih jantan 32 ekor & ongkos kirim Rp. 67.000,-

2. Pakan tikus 20 kg (untuk 1 minggu adaptasi &

15 hari perlakuan) Rp. 12.000,-

3. Kandang hewan @Rp 8.000 x 32 buah Rp. 22.000,-

4. Etanol 96% 2,5 L Rp 34.000,-

5. Sewa sonde lambung dan tempat air minum tikus Rp. 20.000,-

6. Spuit 3 cc & sarung tangan 30 buah Rp. 85.000,-

7. Aloksan & ongkos kirim Rp. 25.000,-

8. Metformin x 10 tablet Rp 100.000,-

9. Pemeriksaan kolesterol total @Rp 22.000 x 32 sampel Rp. 704.000,-

10. Penggandaan dan penjilidan 5 buah Rp. 25.000,-

Jumlah Rp 1.094.000,-

DAFTAR PUSTAKA

1. M, Angelyn Bethel. MD, Frank A. Sloan, PhD; Daniel Belsky, BA; Mark N. Feinglos, MD, CM. Longitudinal Incidence and Prevalence of Adverse

Outcomes of Diabetes Mellitus in Elderly Patients. Arch Intern Med 2007;

Vol 167.

2. Sperling MA. Diabetes mellitus. Dalam: Nelson WE, Behrman RE, Kliegman RM, Arvin AM; penyunting. Nelson textbook of pediatrics; edisi

ke-15. Philadelphia: WB Saunders Co 1996;1646-66.

3. Lamster, Ira B. Lalla, Evanthia.The relationship between oral health and diabetes mellitus.Am Dent Assoc 2008;139;19S-24

4. Guyton,A.C. 1997. Fisiologi Kedokteran. Jakarta : Penerbit Buku Kedokteran.EGC.

5. Kandaswami & Middleton. 1997. Kandungan flavonoid jadi kekuatan ampuh.www.kompas.co.id/kesehatan/news/senior/gizi/0304/24/gizi2.htm

6. Sulistyo, Soediro I, Sutisna M, Yulinah E. Karakterisasi dan uji aktivitas topikal senyawa antibakteri dari daun karamunting (Rhodomyrtus tomentosa)

sebagai obat diabetes mellitus di daerah Pelaihari Kecamatan Pelaihari

kabupaten Tanah Laut Kalimantan Selatan. PKM Penelitian Unlam, 2006

7. Purbaya, J. R. 2003. Mengenal dan Memanfaatkan Khasiat Aloe Vera (Lidah Buaya). Bandung : Penerbit Pionir Jaya

8. Ishii, K. Tanizawa, Takino Y. Studies of aloe vera mechanism of cathartic effect. biological and pharmaceutical bulletin 2004; 47 : 651- 653.

9. Rajasekaran S, Ravi K, Sivagnanam K, Subramanian S. Beneficial effects of aloe vera leaf gel extract on lipid profile status in rats with streptozotocin

diabetes. Clinical and experimental pharmacology and physiology 2006; 33:

232237.

10. WS, Bambang S, Idrus A, Marcellus SK, Siti S. Buku ajar ilmu penyakit dalam jilid 3 edisi IV. Jakarta: Balai penerbit Fakultas Kedokteran Universitas

Indonesia,2006.

11. Iki K, Pour PM. Distribution of pancreatic endocrine cells including IAPP-expressing cells in non-diabetic and type 2 diabetic cases. Journal of

Histochemistry & cytochemistry 2007; 55(2): 111-118.

12. Brownlee M. Banting Lecture 2004: The pathobiology of diabetic complication. A unifying mechanism. Diabetes 2005;54:1615-25.

13. Goldberg IJ. Diabetic dyslipidemia: Causes and consequenses, Clinical review 124. The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism 2001; 86(3): 965-

971.

14. Mulvihill EE, Allister EM, Sutherland BG et al. Naringenin prevents Dyslipidemia, Apolipoprotein B Overproduction, and Hyperinsulinemia in ldl

Receptornull Mice with diet-induced insulin resistance. Diabetes 2009; 58:21982210.

15. Boer de Ian. Insulin Therapy, hyperglycemia, and hypertension in Type 1 Diabetes Mellitus. Arch Intern Med. 2008;168(17):1867-1873

16. Ganong. (lupa mencatat dapusnya,nanti ditambahkan)

17. Murray, Robert K, et al. Terjemahan Biokimia Harper. Jakarta: EGC, 2003

18. Gylling, Helena, Tuominen Juha A, Koivisto Veikko A, and Miettinen Tatu A. Cholesterol metabolism in type 1 diabetes. Diabetes.2004;2217-2222.

19. Weijenberg Matty P, Feskens Edith J. M, and Daan Kromhout. Total and high density lipoprotein cholesterol as risk factors for coronary heart disease in

elderly men during 5 Years of follow-up the zutphen elderly study. American

journal of epidemiology 1996; Vol. 143

20. Miettinen Tatu A. Low synthesis and high absorption of cholesterol characterize type 1 diabetes. Diabetes care 2004; 27:5358

21. Starr F, Starr K, Loope L. Rhodomyrtus tomentosa downy rose myrtle myrtaceae. United States geological survey-biological resources division

haleakala field station, Maui, Hawaii. 2003

22. Morin B. Nichols LA,Zalasky.KM, Davis. JW, Manthey JA, Holland LJ. The citrus flavonoids hesperetin and nobiletin differentially regulate low density

lipoprotein receptor gene transcription in HepG2 liver cells. J Nutr

2008;138:1274-1281

23. Widowati L, Dzulkarnain B, Saroni. Tanaman obat untuk diabetes mellitus. Cermin dunia kedokteran. 1997; 116: 53-9

24. ShanevMcWhorter L. Biological complementary therapies: a focus on botanical products in diabetes. Diabetes spectrum 2001;14:199-208

25. Yeh GY, Eisenberg DM, Kaptchuk TJ, Phillips RS. Systematic review of herbs and dietary supplements for glycemic control in diabetes. Diabetes care

2003;26: 1277-94

26. Tanaka M, Misawa E, Ito Y, et al. Identification of five phytosterols from aloe vera gel as anti-diabetic compunds. Biol Pharm Bull. 2006; 29(7): 14181422

27. Redmond WA. Rat. Microsoft 2007. (CD-ROM: Microsoft Encarta Dictionary 2007).

28. Islas Andrade S, Monsalve MCR, de la Pena JE, Polanco AC, Palomino MA, Velasco AF. Streptozotocin and alloxan in experimental diabetes: comparison

of the two models in rats. Acta Histochem Cystochem 2000;33(3):201-208.

29. Suharmiati. Pengujian Bioaktivitas anti diabetes mellitus tumbuhan obat. Cermin Dunia Kedokteran 2003;140:8-13.