kajian penggunaan berbagai konsentrasi ba dan naa
TRANSCRIPT
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
i
KAJIAN PENGGUNAAN BERBAGAI KONSENTRASI BA DAN NAA TERHADAP PEMBENTUKAN TUNAS JARAK PAGAR
(Jatropha curcas L.) PADA KULTUR IN VITRO
Skripsi Untuk memenuhi sebagian persyaratan guna memperoleh derajat
Sarjana Pertanian di Fakultas Pertanian Universitas Sebelas Maret
Jurusan/ Program Studi Agronomi
Disusun oleh :
CITRA OKTAVIANA YUSWINDASARI H 0106044
FAKULTAS PERTANIAN UNIVERSITAS SEBELAS MARET
SURAKARTA 2010
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
ii
HALAMAN PENGESAHAN
KAJIAN PENGGUNAAN BERBAGAI KONSENTRASI BA DAN NAA TERHADAP PEMBENTUKAN TUNAS JARAK PAGAR
(Jatropha curcas L.) PADA KULTUR IN VITRO
yang dipersiapkan dan disusun oleh
CITRA OKTAVIANA YUSWINDASARI
H 0106044
telah dipertahankan di depan Dewan Penguji
Pada tanggal 15 Oktober 2010
dan dinyatakan telah memenuhi syarat
Susunan Tim Penguji
Ketua Anggota I Anggota II
Prof. Dr. Ir. Ahmad Yunus, MS.
NIP. 196107171986011001
Dr. Samanhudi, SP., MSi. NIP. 196806101995031003
Ir. Maidatun Kamilah H, MP. NIP. 196807221997022001
Surakarta, Oktober 2010
Universitas Sebelas Maret Surakarta Fakultas Pertanian
Dekan
Prof. Dr. Ir. H. Suntoro, MS NIP. 195512171982031003
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
iii
KATA PENGANTAR
Segala puji bagi Allah SWT atas segala limpahan rahmat-Nya kepada
penulis sehingga penyusunan skripsi dengan judul “Kajian Penggunaan
Berbagai Konsentrasi BA dan NAA terhadap Pembentukan Tunas Jarak
Pagar (Jatropha curcas L.) pada Kultur In Vitro” dapat diselesaikan dengan
baik tanpa halangan yang berarti.
Penulis menyadari bahwa dalam penyelesaian skripsi ini tidaklah lepas
dari dukungan berbagai pihak, oleh karena itu penulis menyampaikan terima kasih
yang sebesar-besarnya kepada :
1. Prof. Dr. Ir. Suntoro, MS selaku Dekan Fakultas Pertanian Universitas Sebelas
Maret Surakarta.
2. Ir. Wartoyo SP., MS selaku Ketua Jurusan Program Studi Agronomi FP UNS
3. Prof. Dr. Ir. Ahmad Yunus, MS. dan Dr. Samanhudi, SP., MSi. selaku
Pembimbing Utama dan Pendamping Skripsi atas segala bimbingan, ilmu
serta pengarahan.
4. Ir. Maidatun Kamilah H, MP selaku Pembahas Skripsi yang telah memberikan
saran dan masukan dalam penulisan skripsi ini.
5. Ir. Warsoko W. selaku Pembimbing Akademik
6. Keluargaku tersayang: Bapak, Ibu, dek Dhini, mas Ardian yang selalu
mendukung dan mendoakan penulis sehingga penulis bisa menyelesaikan
skripsi ini.
7. Rekan-rekan sesama penelitian kultur jaringan, teman-teman IMAGO 06 dan
semua pihak yang telah membantu demi kelancaran penelitian dan penulisan
skripsi ini yang tidak dapat disebutkan satu persatu.
Penulis menyadari bahwa penulisan skripsi ini masih jauh dari sempurna.
Penulis mengharapkan kritik dan saran yang membangun. Demikian, semoga
skripsi ini bermanfaat bagi penulis khususnya dan pembaca pada umumnya.
Surakarta, Oktober 2010
Penulis
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
iv
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ......................................................................................... i
HALAMAN PENGESAHAN ........................................................................... ii
KATA PENGANTAR ....................................................................................... iii
DAFTAR ISI ...................................................................................................... iv
DAFTAR TABEL ............................................................................................. vi
DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... vii
DAFTAR LAMPIRAN ..................................................................................... viii
RINGKASAN .................................................................................................... ix
SUMMARY ....................................................................................................... x
I. PENDAHULUAN.......................................................................................... 1
A. Latar Belakang .......................................................................................... 1
B. Perumusan Masalah .................................................................................. 3
C. Tujuan Penelitian ...................................................................................... 4
D. Hipotesis.................................................................................................... 4
II. TINJAUAN PUSTAKA ................................................................................ 5
A. Jarak Pagar (Jatropha curcas L.) .............................................................. 5
B. Kultur Jaringan .......................................................................................... 7
C. Zat Pengatur Tumbuh ............................................................................... 8
III. METODE PENELITIAN ............................................................................. 10
A. Waktu dan Tempat Penelitian ................................................................... 10
B. Bahan dan Alat Penelitian ......................................................................... 10
1. Bahan Penelitian ................................................................................. 10
2. Alat Penelitian ..................................................................................... 10
C. Cara Kerja Penelitian ................................................................................ 11
1. Rancangan Penelitian .......................................................................... 11
2. Pelaksanaan Penelitian ........................................................................ 11
3. Variabel Pengamatan .......................................................................... 13
4. Analisis Data ....................................................................................... 15
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
v
IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ..................................................................... 16
A. Kalus ......................................................................................................... 16
1. Saat Muncul Kalus .............................................................................. 16
2. Warna Kalus ........................................................................................ 18
3. Tekstur Kalus ...................................................................................... 19
4. Berat Segar Kalus................................................................................ 21
B. Tunas ......................................................................................................... 23
1. Saat Muncul Tunas.............................................................................. 23
2. Jumlah Tunas ...................................................................................... 25
C. Daun .......................................................................................................... 27
1. Saat Muncul Daun ............................................................................... 27
2. Jumlah Daun ....................................................................................... 28
D. Akar ........................................................................................................... 31
1. Saat Muncul Akar ............................................................................... 31
2. Jumlah Akar ........................................................................................ 32
V. KESIMPULAN DAN SARAN ..................................................................... 35
A. Kesimpulan ............................................................................................... 35
B. Saran ....................................................................................................... 35
DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 36
LAMPIRAN ......................................................................................................... 41
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
vi
DAFTAR TABEL
Nomor Judul Halaman 1. Pengaruh konsentrasi BA dan NAA terhadap warna kalus ................. 18
2. Pengaruh konsentrasi BA dan NAA terhadap tekstur kalus ................ 20
3. Pengaruh NAA terhadap purata berat segar kalus ............................... 23
4. Pengaruh NAA terhadap purata jumlah daun ...................................... 30
5. Pengaruh interaksi BA dan NAA terhadap purata jumlah akar ........... 33
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
vii
DAFTAR GAMBAR
Nomor Judul Halaman 1. Pengaruh konsentrasi BA dan NAA terhadap saat muncul kalus
(HST) ................................................................................................... 16
2. (a) Kalus jarak pagar berwarna hijau kekuningan (Skor 2) ................ 18
(b) Kalus jarak pagar berwarna hijau kecoklatan (Skor 4) .................. 18
3. Kalus yang terbentuk pada eksplan jarak pagar .................................. 21
4. Pengaruh konsentrasi BA dan NAA terhadap berat segar kalus .......... 22
5. Pengaruh konsentrasi BA dan NAA terhadap saat muncul tunas (HST) ................................................................................................... 24
6. Pengaruh konsentrasi BA dan NAA terhadap jumlah tunas ............... 26
7. Pengaruh konsentrasi BA dan NAA terhadap saat muncul daun (HST) ................................................................................................... 28
8. Pengaruh konsentrasi BA dan NAA terhadap jumlah daun ................. 29
9. Pengaruh konsentrasi BA dan NAA terhadap saat muncul akar (HST) ................................................................................................... 31
10. Akar yang terbentuk pada eksplan ....................................................... 32
11. Pengaruh konsentrasi BA dan NAA terhadap jumlah akar ................. 33
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
viii
DAFTAR LAMPIRAN
Nomor Judul Halaman 1. Hasil pengamatan saat muncul kalus (HST) ........................................ 42
2. Hasil pengamatan warna kalus ............................................................. 42
3. Hasil pengamatan tekstur kalus ........................................................... 43
4. Hasil pengamatan berat segar kalus ..................................................... 43
5. Hasil pengamatan saat muncul tunas (HST) ........................................ 44
6. Hasil pengamatan jumlah tunas .......................................................... 44
7. Hasil pengamatan saat muncul daun (HST) ......................................... 45
8. Hasil pengamatan jumlah daun ........................................................... 45
9. Hasil pengamatan saat muncul akar (HST).......................................... 46
10. Hasil pengamatan jumlah akar ............................................................ 46
11. Analisis ragam berat segar kalus (transformasi ) ..................... 47
12. Analisis ragam jumlah daun (transformasi ) ............................. 47
13. Analisis ragam jumlah akar (transformasi ) ............................. 47
14. Komposisi media Murashige dan Skoog ............................................. 48
15. Cara menentukan konsentrasi BA dan NAA ....................................... 49
16. Gambar-gambar penelitian jarak pagar secara in vitro pada 30 HST . 50
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
1
I. PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Krisis energi yang terjadi terutama dari bahan bakar fosil yang bersifat
non renewable disebabkan semakin menipisnya cadangan minyak bumi.
Untuk mengatasi hal tersebut, pemerintah dan masyarakat perlu
mengupayakan diversifikasi energi atau mencari alternatif lain dan segera
mensosialisasikan kampanye hemat energi guna mengurangi ketergantungan
kepada bahan bakar fosil. Salah satu program diversifikasi adalah
mengembangkan bahan bakar nabati (biofuel), meliputi biodiesel, bioetanol
dan biooil. Biodiesel sebagai subtitusi minyak solar, bioetanol sebagai
substitusi premium dan biooil sebagai substitusi minyak tanah atau minyak
bakar (Anwar et al., 2010).
Beberapa tanaman yang berpotensi sebagai bahan bakar nabati antara
lain kelapa sawit, jagung, singkong, tebu dan lain sebagainya yang
merupakan minyak pangan (edible oil), sehingga penggunaanya akan
bersaing dengan kebutuhan konsumsi. Salah satu tanaman yang termasuk non
edible oil adalah jarak pagar. Minyak jarak pagar atau biasa disebut curcas
biodiesel merupakan sumber minyak terbarukan (reneweble fuels) sehingga
berpotensi sebagai sumber bahan bakar alternatif pengganti bahan bakar
minyak (BBM) di Indonesia.
Tanaman jarak pagar menghasilkan biji yang memiliki kandungan
minyak cukup tinggi, yaitu sekitar 30-50%. Minyak yang dihasilkan dari
jarak pagar sangat potensial untuk dimanfaatkan sebagai bahan bakar
alternatif (Hambali et al., 2006). Menurut Sumanto (2005) kelebihan minyak
jarak pagar dibanding dengan solar adalah pada minyak jarak pagar banyak
terdapat oksigen sehingga pembakarannya sempurna. Hal ini menimbulkan
gas buangan yang lebih bersih dan tidak berbahaya. Sementara solar tidak
memiliki oksigen sehingga gas buangnya berkarbon monoksida, berasap,
kotor, dan berbahaya.
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
2
Semakin meningkatnya permintaan dan kebutuhan akan bahan
tanaman jarak pagar, maka perlu dilakukan upaya perbanyakan tanaman
dalam jumlah besar dan dalam waktu yang singkat. Penyediaan bibit unggul
merupakan salah satu faktor pendukung keberhasilan pengembangan jarak
pagar. Perbanyakan tanaman secara konvensional masih dibatasi oleh
kemampuan tanaman untuk menghasilkan bibit baru dalam jumlah banyak,
seragam dan dalam waktu singkat. Sampai saat ini bibit jarak pagar
diproduksi dengan dua cara, yaitu dengan menggunakan biji dan stek.
Penggunaan biji untuk perbanyakan tanaman dalam jumlah banyak akan
mengurangi jumlah biji yang dapat diolah menjadi minyak. Teknik
perbanyakan melalui stek menghasilkan tanaman dengan jumlah terbatas,
membutuhkan pohon induk yang cukup banyak sementara pohon induk yang
tersedia sangat terbatas selain itu dikhawatirkan akan merusak tanaman induk
(Lizawati et al., 2009).
Untuk mengatasi masalah tersebut dapat ditempuh melalui teknik
kultur jaringan. Kultur jaringan tanaman merupakan teknik menumbuh-
kembangkan bagian tanaman, baik berupa sel, jaringan atau organ dalam
kondisi aseptik secara in vitro. Teknik ini dicirikan oleh kondisi aseptik,
penggunaan media kultur buatan dengan kandungan nutrisi lengkap dan ZPT
(zat pengatur tumbuh), serta kondisi ruang kultur yang suhu dan
pencahayaannya terkontrol (Yusnita, 2004).
Perbanyakan tanaman melalui teknik kultur jaringan menawarkan
peluang besar untuk menghasilkan jumlah bibit tanaman yang banyak dalam
waktu relatif singkat sehingga ekonomis. Teknik perbanyakan ini dapat
dilakukan sepanjang tahun tanpa bergantung musim. Selain itu perbanyakan
dengan teknik in vitro mampu mengatasi kebutuhan bibit dalam jumlah besar,
serentak, dan bebas penyakit sehingga bibit yang dihasilkan lebih sehat dan
seragam.
Keberhasilan pengadaan bibit jarak pagar melalui kultur jaringan
dipengaruhi oleh beberapa faktor antara lain: (1) Media kultur, media
mempunyai dua fungsi utama yaitu untuk menyuplai nutrisi dan
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
3
mengarahkan pertumbuhan melalui zat pengatur tumbuh, (2) Eksplan yaitu
bagian kecil jaringan atau organ yang dipisahkan dari tanaman induk
kemudian dikulturkan. Keberhasilan pertumbuhan eksplan tergantung pada
ukuran, umur fisiologis, serta genotipe eksplan, (3) Zat Pengatur Tumbuh
(ZPT) yang berfungsi untuk menstimulasi pertumbuhan, misalnya
pertumbuhan kalus, akar, dan tunas, dan (4) Lingkungan meliputi cahaya,
suhu, kelembaban, pH dan wadah untuk kultur (Puslitbangbun, 2007).
Zat pengatur tumbuh (ZPT) adalah senyawa organik yang dalam
jumlah sedikit dapat merangsang, menghambat, dan mengubah proses
fisiologi tumbuhan. Auksin dan sitokinin adalah zat pengatur tumbuh yang
sering ditambahkan dalam media tanam karena mempengaruhi pertumbuhan
dan organogenesis dalam kultur jaringan dan organ. Penambahan sitokinin
pada media kultur jaringan akan merangsang pembelahan sel, sedangkan
auksin berperan dalam pembesaran sel, sehingga interaksi keduanya dapat
meningkatkan pertumbuhan dan ukuran sel. ZPT yang digunakan dalam
penelitian ini adalah BA (Benzyladenin) dari golongan sitokinin dan NAA
(Naphthaleneacetic Acid ) dari golongan auksin.
B. Perumusan Masalah
Kultur jaringan merupakan salah satu alternatif pemecahan masalah
untuk mendapatkan bibit jarak pagar dalam jumlah banyak dalam waktu yang
singkat. Salah satu faktor yang mendukung keberhasilan perbanyakan jarak
pagar melalui kultur jaringan adalah ZPT.
Terbentuknya bagian-bagian tanaman dipengaruhi oleh adanya ZPT
dalam media tanam karena ZPT yang terdapat alami dalam eksplan belum
cukup untuk membantu pembelahan dan diferensiasi sel. Pada penelitian ini
ZPT yang digunakan adalah BA dan NAA. Berdasarkan uraian diatas maka
permasalahan yang ingin diketahui dari penelitian ini adalah konsentrasi BA
dan NAA yang sesuai terhadap pertumbuhan tunas eksplan jarak pagar.
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
4
C. Tujuan Penelitian
Mendapatkan konsentrasi BA dan NAA yang tepat terhadap
pertumbuhan tunas eksplan jarak pagar secara in vitro.
D. Hipotesis
Diduga bahwa pemberian BA dan NAA pada konsentrasi tertentu akan
memberikan pengaruh yang paling baik untuk pertumbuhan tunas eksplan
tanaman jarak pagar.
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
5
II. TINJAUAN PUSTAKA
A. Jarak Pagar (Jatropha curcas L.)
Tanaman jarak pagar termasuk famili Euphorbiaceae, satu famili
dengan karet dan ubi kayu. Klasifikasi tanaman jarak pagar adalah sebagai
berikut:
Divisio : Spermatophyta
Subdivisio : Angiospermae
Klasis : Dicotyledoneae
Ordo : Euphorbiales
Familia : Euphorbiaceae
Genus : Jatropha
Spesies : Jatropha curcas L.
(Hambali et al., 2006).
Jarak pagar mempunyai habitus perdu. Tanaman perdu adalah
tumbuhan berkayu yang tetap rendah, umumnya memiliki tinggi 3-4 meter.
Perdu menghasilkan percabangan banyak dari pangkal atau dasar tanaman.
Habitus perdu pada tanaman jarak pagar memberikan keuntungan pada
kegiatan budidaya tanaman dibandingkan habitus pohon karena proses
pemanenan buah jarak pagar lebih mudah dilakukan pada habitus perdu
(Saparni, 2008).
Tinggi tanaman jarak pagar bisa mencapai 5-10 m dengan manajemen
kanopi 2-3 m, batang tumbuh membentuk cabang (simpodial), berwarna abu-
abu atau coklat, batang bersifat sukulen (berair). Daun berlekuk 5-7 tersusun
berselang-seling membentuk spiral, pinggir daun rata atau bergerigi, berwarna
hijau muda sampai hijau tua. Bunga berumah satu (monoecius), uni seksual,
kadang-kadang ditemukan bunga hermaprodit. Berbunga sampai masak
memerlukan waktu 60-70 hari (satu rangkaian bunga), biji bersifat ortodoks
(disimpan pada kadar air 5-7%), perkecambahan bersifat epigeal (daun embrio
muncul ke atas permukaan) (Anonim, 2008).
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
6
Buah jarak pagar termasuk buah sejati tunggal yang kering. Bentuk
buah jarak pagar ovoid, ujung buah cenderung runcing sedangkan pangkal
buah cenderung membulat. Biji jarak pagar berbentuk ellipsoid (bulat telur),
hal ini diduga berkaitan dengan bentuk buah yang juga berbentuk bulat telur
(ovatus) (Nugroho, 2008). Buah jarak pagar biasa disebut kapsul. Kapsul
dipanen setelah masak untuk mendapatkan kadar minyak yang optimal.
Penentuan tingkat kemasakan dilihat dari penampakan warna kulit. Kapsul
masak ditandai dengan perubahan warna kulit dari hijau menjadi kuning
(Saparni, 2008).
Minyak jarak pagar atau biasa disebut curcas biodiesel tidak bersifat
toksik, kadar sulfur rendah atau bahkan tidak ada, volatilitas rendah dan
memiliki kandungan oksigen lebih tinggi sehingga lebih menjamin proses
pembakaran yang sempurna, daya pelumasnya tinggi sehingga meningkatkan
efisiensi fungsi mesin. Selain itu emisinya bersih sehingga berpeluang
mengurangi polusi udara berupa karbon monoksida, hidrokarbon, dan racun-
racun lainnya (Prana, 2006).
Secara agronomis tanaman ini dapat tumbuh dengan baik pada
berbagai kondisi lahan bahkan pada lahan marginal sekalipun. Tanaman ini
tidak membutuhkan perawatan dan pengolahan lahan yang terlalu intensif
sehingga dapat mengurangi biaya produksi. Selain itu tanaman ini juga dapat
bermanfaat untuk reklamasi lahan-lahan kritis (Barlanti, 2007). Tanaman
dapat digunakan untuk mencegah erosi tanah, untuk mengembalikan (reclaim)
tanah, sebagai pagar hidup, dan juga ditanam sebagai tanaman komersial
(Heller, 1996).
Teknik in vitro telah digunakan untuk propagasi banyak spesies
tanaman. Teknik kultur jaringan ini menawarkan pasokan cepat dan
berkelanjutan bahan tanam. Perbanyakan J. curcas melalui kultur jaringan
menghasilkan tanaman yang lebih baik dibandingkan perbanyakan melalui biji
(Kaewpoo dan Te-chato, 2009). Teknik ini memberikan laju multiplikasi
tinggi dibandingkan dengan pemuliaan konvensional dan juga meminimalkan
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
7
risiko infeksi oleh mikroba dan hama, mengurangi erosi genetik, kebutuhan
ruang dan beban biaya tenaga kerja (Wei et al., 2004).
B. Kultur Jaringan
Kultur jaringan tanaman adalah suatu upaya mengisolasi bagian-
bagian tanaman (protoplas, sel, jaringan, dan organ), kemudian
mengkulturkannya pada nutrisi buatan yang steril dibawah kondisi lingkungan
yang terkendali sehingga bagian-bagian tanaman tersebut dapat beregenerasi
menjadi tanaman lengkap kembali (Zulkarnain, 2009).
Kultur jaringan akan lebih besar persentase keberhasilannya bila
menggunakan jaringan meristem. Jaringan meristem adalah jaringan muda,
yaitu jaringan yang terdiri dari sel-sel yang selalu membelah, dindingnya tipis
belum mempunyai penebalan dari zat pektin, plasmanya penuh dan
vakuolanya kecil-kecil (Hendaryono dan Wijayani, 1994).
Bagian tanaman yang akan dikulturkan disebut eksplan. Eksplan bisa
berupa mata tunas, anthera, batang, daun dan akar yang masih muda dan
terdiri dari sel-sel meristematis, yang mana sel-selnya masih aktif membelah-
belah dan apabila dikulturkan pada media yang sesuai secara in vitro, maka
eksplan tersebut akan tumbuh dan berkembang biak menjadi banyak (Nugroho
dan Sugito, 2004).
Salah satu bagian jaringan meristem pada tanaman terdapat pada
bagian tunas. Eksplan berupa tunas pucuk merupakan eksplan yang paling
tinggi persentasenya menghasilkan planlet, terutama jika ditumbuhkan pada
media tanpa auksin (Irawati, 2000).
Media yang tepat untuk digunakan dalam kultur jaringan belum dapat
dipastikan karena masih ada faktor-faktor yang berpengaruh, seperti jenis
tanaman yang dikulturkan, umur tanaman induk, umur eksplan, jenis eksplan
yang digunakan, kebutuhan zat pengatur tumbuh, dan proses yang dilakukan
dalam kultur jaringan (Wetherell, 1982).
Keistimewaan medium MS (Murashige and Skoog) adalah kandungan
nitrat, kalium dan ammoniumnya yang tinggi, dan jumlah hara anorganiknya
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
8
yang layak untuk memenuhi kebutuhan banyak sel tanaman dalam kultur
(Wetter dan Constabel, 1991).
Dibandingkan dengan perbanyakan tanaman secara konvensional,
perbanyakan tanaman secara kultur jaringan mempunyai beberapa kelebihan
sebagai berikut:
1. Untuk memperbanyak tanaman tertentu yang sulit atau sangat lambat
diperbanyak secara konvensional.
2. Perbanyakan tanaman secara kultur jaringan tidak memerlukan tempat
yang luas.
3. Teknik perbanyakan secara kultur jaringan dapat dilakukan sepanjang
tahun tanpa bergantung pada musim.
4. Bibit yang dihasilkan lebih sehat.
5. Memungkinkan dilakukannya manipulasi genetik.
(Yusnita, 2004).
C. Zat Pengatur Tumbuh
Zat pengatur tumbuh pada tanaman adalah senyawa organik yang
bukan hara yang dalam jumlah sedikit dapat mendukung (promote),
menghambat dan merubah proses fisiologi tumbuhan (Abidin, 1995).
Zat pengatur tumbuh golongan auksin dan sitokinin dalam
keseimbangannya merupakan keberhasilan penerapan teknik kultur jaringan.
Sitokinin sebagai senyawa organik yang dikombinasikan dengan auksin akan
mendorong pembelahan sel dan menentukan arah diferensiasi sel tanaman,
jika konsentrasi auksin dalam jaringan tanaman tinggi maka kemungkinan
akan terbentuk kalus dan akar, bila konsentrasi sitokinin tinggi maka
kemungkinan akan terbentuk tunas (Wattimena, 1988).
Auksin pada kultur jaringan dikenal sebagai hormon yang berperan
menginduksi kalus, menghambat kerja sitokinin membentuk klorofil dalam
proses embriogenesis dan juga mempengaruhi kestabilan genetik sel tanaman
(Santoso dan Nursandi, 2004). Menurut Wattimena (1992) auksin sintetik
perlu ditambahkan karena auksin yang terbentuk secara alami sering tidak
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
9
mencukupi untuk pertumbuhan jaringan eksplan. Auksin mempunyai peranan
terhadap pertumbuhan sel, dominasi apikal dan pembentukan kalus. Kisaran
konsentrasi auksin yang biasa digunakan adalah 0,01 – 10 ppm.
NAA merupakan golongan auksin sintetis yang mempunyai sifat lebih
stabil daripada IAA, karena tidak mudah terurai oleh enzim-enzim yang
dikeluarkan oleh sel atau oleh pemanasan pada proses sterilisasi, tetapi NAA
mempunyai sifat yang tidak baik karena mempunyai kisaran kepekatan yang
sempit. Batas kepekatan yang meracun dari zat ini sangat mendekati
kepekatan optimum untuk perakaran. Dengan demikian perlu kewaspadaan
dengan pemakaiannya agar kepekatan optimum ini tidak terlampaui
(Hendaryono dan Wijayani, 1994).
Zat pengatur tumbuh NAA dapat berperan sebagai perangsang
terbentuknya enzim-enzim yang aktif dalam pembelahan sel. Tanpa pemberian
NAA, walaupun telah diberikan sitokinin, eksplan yang ditumbuhkan secara
in vitro belum mampu berakar, sedangkan pada media MS dengan adanya
penambahan NAA dapat merangsang pertumbuhan akar (Simatupang, 1991).
Penggunaan sitokinin mempunyai peranan penting jika bersamaan
dengan auksin yaitu merangsang pembelahan sel dalam jaringan yang dibuat
eksplan serta merangsang pertumbuhan tunas dan daun (Wetherell, 1982).
Golongan sitokinin yang sering ditambahkan dalam media antara lain
adalah BAP/BA. BAP/BA merupakan golongan sitokinin aktif yang bila
diberikan pada tunas pucuk akan mendorong ploriferasi tunas yaitu keluarnya
tunas lebih dari satu (Wilkins, 1989). BA termasuk golongan sitokinin,
merupakan ZPT yang banyak digunakan untuk memacu inisiasi dan poliferasi
tunas. Terutama untuk mendorong pembelahan sel, menginduksi tunas
adventif dan dalam konsentrasi tinggi menghambat inisiasi akar (Pierik,
1987). Menurut Mariska et al., (1987) Benzyl Adenine (BA) merupakan zat
pengatur tumbuh sintetik yang daya rangsangnya lebih lama dan tidak mudah
dirombak oleh sistem enzim dalam tanaman. BA dapat merangsang
pembentukan akar dan pembentukan tunas.
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
10
III. METODE PENELITIAN
A. Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian dilaksanakan pada bulan Juli sampai Agustus 2010
bertempat di Laboratorium Fisiologi Tumbuhan dan Bioteknologi Fakultas
Pertanian Universitas Sebelas Maret Surakarta.
B. Bahan dan Alat Penelitian
1. Bahan Penelitian
a. Eksplan jarak pagar (Jatropha curcas L.) berupa pucuk tanaman
(berasal dari biji yang dikecambahkan secara steril)
b. Media MS (Murashige & Skoog)
c. ZPT BA (Benzyladenin) dan NAA (Naphthaleneacetic Acid)
d. Alkohol
e. Clorox (sunclin)
f. Sabun cuci
2. Alat Penelitian
a. Laminar Air Flow Cabinet
(LAFC)
b. Autoclave
c. Magnetic stirrer
d. Petridish
e. Labu takar
f. Beker glass
g. Pipet
h. Timbangan analitik
i. Botol-botol kultur
j. Rak kultur
k. Plastik pp 0,3 mm
l. Pinset besar dan kecil,
m. Aluminium foil
n. Pisau scalpel
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
11
C. Cara Kerja Penelitian
1. Rancangan Penelitian
Penelitian ini menggunakan rancangan lingkungan berupa
Rancangan Acak Lengkap (RAL) yang disusun secara faktorial terdiri atas
dua faktor perlakuan sebagai berikut:
a. Faktor pertama yaitu konsentrasi BA:
B1 : Perlakuan tanpa penambahan BA
B2 : Perlakuan dengan penambahan BA 0,5 ppm
B3 : Perlakuan dengan penambahan BA 1 ppm
B4 : Perlakuan dengan penambahan BA 1,5 ppm
b. Faktor kedua yaitu konsentrasi NAA:
N1 : Perlakuan tanpa penambahan NAA
N2 : Perlakuan dengan penambahan NAA 0,5 ppm
N3 : Perlakuan dengan penambahan NAA 1 ppm
N4 : Perlakuan dengan penambahan NAA 1,5 ppm
Sehingga diperoleh 16 kombinasi perlakuan, yaitu :
Kemudian masing-masing kombinasi perlakuan diulang tiga kali.
2. Pelaksanaan Penelitian
a. Pembuatan larutan stok
Pembuatan larutan stok dengan cara menimbang bahan-bahan
kimia hara makro, mikro dan vitamin sesuai komposisi media MS
(Lampiran 14) yang telah dikalikan menjadi beberapa kali konsentrasi,
misalnya untuk unsur hara makro dikalikan 10 dan unsur hara mikro
dikalikan 100 kali konsentrasi. Kemudian melarutkan bahan-bahan
kimia tersebut ke dalam aquadest. Larutan tersebut diaduk sampai
B1N1
B1N2
B1N3
B1N4
B2N1
B2N2
B2N3
B2N4
B3N1
B3N2
B3N3
B3N4
B4N1
B4N2
B4N3
B4N4
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
12
homogen dengan magnetic stirrer, lalu dimasukkan dalam botol yang
diberi label dan disimpan dalam refrigerator.
b. Penyiapan media
Media yang digunakan adalah media MS. Dalam setiap
pembuatan media, dibuat ¼ liter (250 ml), untuk 10 botol kultur.
Pembuatannya dengan cara mencampurkan larutan stok, BA dan NAA
sesuai dengan konsentrasi yang diinginkan (Lampiran 15) serta gula 7,5
g kemudian dilarutkan dengan aquades sampai 250 ml. Larutan
dikondisikan pada pH 6,3 dengan menambahkan NaOH untuk
menaikkan pH dan HCl untuk menurunkan pH. Larutan ditambah agar-
agar 2 g, kemudian diaduk dengan magnetic stirrer dan dipanaskan
hingga mendidih. Larutan dituangkan ke dalam botol kultur ±25
ml/botol, kemudian ditutup dengan plastik PP 0,3 mm dan diikat
dengan karet. Media dimasukkan ke dalam autoclave untuk disterilisasi
dengan tekanan 1,5 kg/cm2 selama 45 menit. Botol-botol kultur berisi
media selanjutnya disimpan pada rak-rak kultur.
c. Sterilisasi botol dan alat
Alat-alat yang harus disterilkan adalah botol kultur, petridish,
scalpel, pinset, dan pisau pemes. Alat-alat tersebut dicuci sampai bersih
lalu dikeringkan. Setelah kering, baru dimasukkan ke dalam autoclave
pada tekanan 1,5 kg/cm2 selama 45 menit.
d. Pengecambahan biji
Penanaman biji dilakukan di dalam Laminar Air Flow Cabinet
(LAFC). LAFC adalah tempat menanam eksplan dan subkultur dengan
kondisi aseptik. Sebelum penanaman, biji dicuci dengan menggunakan
air sabun dan dibilas hingga tidak berbusa. Kulit biji dikupas dengan
menggunakan tang. Sebelum ditanam biji disterilisasi dengan larutan
clorox 100 % selama 1 menit. Kemudian dengan menggunakan pinset
dan scalpel biji dibuka dan diambil embrionya. Setelah itu menanam
embrio pada media MS tanpa ZPT dalam botol dan selama penanaman
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
13
mulut botol selalu didekatkan dengan api bunsen. Kemudian menutup
botol dengan aluminium foil dan melapisi dengan plastik pp.
e. Penanaman eksplan
Penanaman eksplan dengan cara memotong pucuk tanaman
yang telah dikecambahkan secara steril (umur 10 HST) dengan
menggunakan pisau scalpel. Sebelum botol ditanami, terlebih dahulu di
bagian mulut botol dipanaskan agar tidak terjadi kontaminasi. Dengan
hati-hati tutup botol selanjutnya dibuka. Eksplan ditanam, kemudian
menutup botol dengan aluminium foil dan melapisi dengan plastik pp.
Setelah itu menanam eksplan dalam botol, selama penanaman mulut
botol selalu didekatkan dengan api bunsen. Kemudian menutup botol
dengan aluminium foil dan melapisi dengan plastik pp.
f. Pemeliharaan
Pemeliharaan botol-botol kultur dilakukan dengan cara
meletakkan pada rak-rak kultur. Botol-botol tersebut setiap dua hari
sekali disemprot dengan spirtus untuk mencegah kontaminasi.
D. Variabel Pengamatan
1. Saat Muncul Kalus
Diamati dan dicatat saat muncul kalus (dinyatakan dalam Hari
Setelah Tanam, HST), ditandai dengan munculnya jaringan berwarna
kehijauan pada permukaan eksplan.
2. Warna Kalus
Pengamatan warna kalus dilakukan pada akhir pengamatan (30 HST)
dengan mengamati secara visual. Penentuan warna kalus ditetapkan
berdasarkan skoring :
0 : putih
1 : hijau keputihan
2 : hijau kekuningan
3 : hijau
4 : hijau kecoklatan
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
14
3. Tekstur Kalus
Pengamatan tekstur kalus dilakukan pada akhir pengamatan (30
HST) dengan mengamati tekstur kalus yang terbentuk, apakah termasuk
kalus yang kompak atau remah.
4. Berat Segar Kalus
Berat segar kalus dinyatakan dalam gram (g) dan pengukuran berat
segar kalus dilakukan pada akhir pengamatan (30 HST). Berat segar kalus
dihitung dengan menggunakan rumus:
Wk = Wt – Wo
Keterangan:
Wk = berat segar kalus (g)
Wt = berat botol + penutup + kalus (g)
Wo = berat botol + penutup (g)
5. Saat Muncul Tunas
Diamati dan dicatat saat munculnya tunas (dinyatakan dengan
HST). Terbentuknya tunas ditandai dengan adanya tonjolan berwarna
putih kehijauan (± 2 mm) pada permukaan eksplan bagian atas.
6. Jumlah Tunas
Jumlah tunas diamati pada akhir pengamatan (30 HST), dilakukan
dengan menghitung jumlah tunas yang muncul.
7. Saat Muncul Daun
Penentuan saat muncul daun dalam penelitian ini didasarkan pada
daun yang telah membuka sempurna.
8. Jumlah Daun
Jumlah daun dihitung pada saat akhir pengamatan (30 HST) dengan
cara menghitung jumlah daun yang terbentuk.
9. Saat Muncul Akar
Diamati dan dicatat saat munculnya akar (dinyatakan dalam HST),
ditandai dengan adanya tonjolan-tonjolan putih kekuningan (± 2 mm)
pada bagian bawah eksplan.
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
15
10. Jumlah Akar
Jumlah akar dilakukan pada akhir pengamatan (30 HST), dengan
menghitung jumlah akar primer yang muncul pada eksplan.
E. Analisis Data
Data saat muncul kalus, tunas, daun dan akar, serta warna dan tekstur
kalus dianalisis menggunakan metode deskriptif. Sedangkan data berat segar
kalus, jumlah daun dan akar dianalisis ragam berdasarkan uji F taraf 5% dan
dilanjutkan dengan analisis pembandingan rataan menggunakan metode
DMRT taraf 5%.
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
16
IV. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Kalus
1. Saat Muncul Kalus
Indikator dalam kultur jaringan salah satunya adalah tumbuhnya
kalus pada eksplan. Kalus muncul sebagai akibat dari pelukaan pada
permukaan eksplan dan respon terhadap hormon, baik itu endogen ataupun
yang ditambahkan pada media. Sebagai indikator pertumbuhan eksplan
dalam kultur jaringan, kalus didefinisikan sebagai suatu jaringan hidup
hasil dari suatu pertumbuhan yang terdiri dari massa yang tidak teratur
(Wetherell, 1982). Sedangkan Prihatmanti dan Mattjik (2004) menyatakan
bahwa kalus sebagai masa sel yang pertumbuhannya tidak terorganisasi
sehingga tampak seperti gumpalan berwarna putih, kuning, atau hijau.
Semakin cepat muncul kalus semakin baik karena dengan adanya
kalus diharapkan mampu berdeferensiasi menjadi tunas atau akar. Pada
penelitian ini, kalus pertama kali terbentuk pada ujung eksplan yang
kontak dengan media. Diawali dengan pembengkakan pada eksplan
kemudian kalus muncul pada dasar eksplan berwarna kehijauan.
Keterangan : B1 : 0 ppm BA B2 : 0,5 ppm BA B3 : 1 ppm BA B4 : 1,5 ppm BA N1 : 0 ppm NAA N2 : 0,5 ppm NAA N3 : 1 ppm NAA N4 : 1,5 ppm NAA ppm : part per million (mg/l)
Gambar 1. Pengaruh konsentrasi BA dan NAA terhadap saat muncul kalus (HST).
5,33
Series1, B2N4, 6.67
5,33
Series1, B3N3, 6.67
Series1, B3N4, 6.67
Saat
mun
cul k
alus
(H
ST)
Perlakuan
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
17
Berdasarkan Gambar 1 dapat diketahui bahwa hampir semua
perlakuan mampu memunculkan kalus. Terbentuknya kalus merupakan
akibat dari pelukaan pada permukaan eksplan dan pengaruh perlakuan zat
pengatur tumbuh yang diberikan pada medium kultur (Zulkarnain, 2009).
Terbentuknya kalus terjadi pada bagian luka bekas irisan kemudian
berlanjut dengan pertumbuhan kalus sebagai akibat dari proliferasi sel-sel
penyusun kalus. Hal ini sesuai dengan pendapat Dodds dan Robert (1982)
cit. Utami et al. (2007) yang menyatakan bahwa terjadinya kalus ditempat
irisan bertujuan untuk menutup luka. Dalam hal ini zat pengatur tumbuh
yang diberikan yaitu BA dan NAA.
Pada perlakuan tanpa NAA (0 ppm) tidak tumbuh kalus. Hal ini
disebabkan auksin endogen yang terdapat dalam eksplan belum mampu
untuk menginduksi terbentuknya kalus. Auksin umumnya ditambahkan ke
dalam nutrisi media untuk menginduksi kalus dari eksplan (George dan
Sherrington, 1984). Wattimena (1992) menyatakan untuk pembentukan
kalus dibutuhkan konsentrasi auksin tinggi (NAA) dengan konsentrasi
sitokinin yang rendah (BA). Ditambahkan oleh Pierik (1987) bahwa
auksin dikenal sebagai hormon yang mampu berperan menginduksi kalus.
Perlakuan BA 0,5 ppm di kombinasikan dengan NAA 1 ppm dan
perlakuan BA 1 ppm dikombinasikan dengan NAA 0,5 ppm memberikan
saat muncul kalus sama yaitu 5,33 HST. Diduga hal ini disebabkan karena
konsentrasi BA dan NAA yang diberikan dalam jumlah yang seimbang
sehingga mampu merangsang pertumbuhan kalus tercepat. Sedangkan
pada perlakuan B2N3, B3N3, dan B3N4 saat muncul kalus paling lama
meskipun NAA yang ditambahkan konsentrasinya tinggi, hal ini
disebabkan karena auksin yang diberikan terlalu tinggi. Hal ini sesuai
dengan pernyataan Hendaryono dan Wijayani (1994) bahwa pada kadar
yang tinggi auksin lebih bersifat menghambat daripada merangsang
pertumbuhan.
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
18
2. Warna Kalus
Variabel warna kalus diamati pada 30 HST atau pada akhir
pengamatan. Perbedaan warna kalus menunjukkkan tingkat perkembangan
dari kalus. Kualitas kalus yang baik memiliki warna hijau. Warna kalus
mengindikasikan keberadaan klorofil dalam jaringan, semakin hijau warna
kalus semakin banyak pula kandungan klorofilnya. Warna terang atau
putih dapat mengindikasikan bahwa kalus masih cukup baik (Fatmawati,
2008). Berdasarkan warna kalus juga dapat diketahui apakah suatu kalus
masih memiliki sel-sel yang aktif membelah atau masih hidup ataukah
telah mati.
Tabel 1. Pengaruh konsentrasi BA dan NAA terhadap warna kalus
BA (ppm) NAA (ppm)
0 0,5 1 1,5
0 - 2 4 2
0,5 - 4 2 2
1 - 4 2 2
1,5 - 2 2 2 Keterangan skoring warna kalus : 0 = Putih 1 = Hijau keputihan 2 = Hijau kekuningan 3 = Hijau 4 = Hijau kecoklatan ppm : part per million (mg/l)
a b
Gambar. 2 (a) Kalus jarak pagar berwarna hijau kekuningan (skor 2), (b) Kalus jarak pagar berwarna hijau kecoklatan (skor 4).
Berdasarkan Tabel 1 diketahui bahwa sebagian besar kalus yang
dihasilkan pada penelitian ini berwarna hijau kekuningan (Gambar 2 a)
dan terdapat pula kalus yang berwarna hijau kecoklatan (Gambar 2 b).
Pertama kali muncul kalus berwarna hijau kekuningan dan selanjutnya
kalus kalus
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
19
semakin bertambahnya umur kalus warna kaluspun berubah menjadi
semakin gelap dan akhirnya menjadi cokelat
Warna hijau kekuningan menunjukkan warna paling cerah dengan
kandungan klorofil lebih banyak bila dibandingkan dengan kalus hijau
kecoklatan. Warna kalus menunjukkan tingkat perkembangan kalus yang
terbentuk. Warna kalus semakin gelap (menjadi cokelat) berarti
pertumbuhan kalus semakin menurun. Jika hal ini terjadi diperlukan
subkultur untuk proliferasi kalus lebih lanjut. Pada akhir pengamatan,
warna kalus pada perlakuan B1N3, B2N2, dan B3N2 berubah menjadi
hijau kecoklatan, hal ini menandakan kalus mengalami proses penuaan
(senesensi) sehingga memerlukan subkultur. Penuaan atau senesensi ini
dapat terjadi karena adanya perombakan butir-butir klorofil dan protein
dalam sel.
Biasanya pertumbuhan yang cepat dan warna kalus yang cenderung
terang mengindikasikan bahwa kondisi kesehatan kultur tersebut cukup
baik. Sedangkan warna coklat hingga hitam secara umum menunjukkan
keadaan kalus yang sel-selnya telah mati. Kalus akan menunjukkan warna
kuning bening dan akan berubah menjadi kecoklatan seiring dengan
pertumbuhan kalus yang semakin tua (Abdullah et al., 1998).
Terbentuknya warna kalus dipengaruhi oleh adanya zat pengatur
tumbuh auksin dan sitokinin. Seperti yang dinyatakan oleh Santoso dan
Nursandi (2004) bahwa dalam aktivitas kultur jaringan, auksin sangat
dikenal sebagai hormon yang menghambat kerja sitokinin membentuk
klorofil dalam kalus, sedangkan hormon sitokinin berfungsi mendorong
pembentukan klorofil pada kalus.
3. Tekstur Kalus
Turhan (2004) menyatakan bahwa tekstur kalus dapat dibedakan
menjadi tiga macam, yaitu: kompak (non friable), intermediet dan remah
(friable). Kalus dengan struktur remah (friable) merupakan kalus yang
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
20
terbentuk dari sekumpulan sel yang mudah lepas sedangkan kalus kompak
terdiri dari sekumpulan sel yang kuat (Syahid et al., 2010).
Pierik (1987) menyatakan bahwa tekstur kalus dapat bervariasi dari
remah sampai kompak. Perbedaan tekstur kalus tergantung pada jenis
tanaman yang digunakan, komposisi nutrisi yang terdapat didalam media,
zat pengatur tumbuh, dan kondisi lingkungan kultur.
Penentuan tekstur kalus dapat dilakukan dengan cara mengambil
kalus tersebut dari dalam botol. Kalus yang remah akan mudah terurai
ketika diambil dengan pinset sedangkan kalus yang kompak tidak mudah
terurai karena tekstur kalus cenderung keras. Kalus yang muncul pada
seluruh perlakuan bersifat remah (Tabel 2), sel-sel kalus yang terbentuk
antara satu sel dengan sel yang lain dengan mudah bisa dipisahkan.
Tabel 2. Pengaruh konsentrasi BA dan NAA terhadap tekstur kalus
BA (ppm) NAA (ppm)
0 0,5 1 1,5 0 - remah remah remah
0,5 - remah remah remah 1 - remah remah remah
1,5 - remah remah remah Keterangan: ppm : part per million (mg/l)
Kalus yang remah mempunyai susunan sel yang longgar sehingga
mudah dipisah-pisahkan dan sel-selnya bersifat meristematik serta aktif
membelah (Street (1993) cit. Widyawati (2009). Disebutkan oleh Steves
dan Sussex (1994), sel-sel yang menyusun kalus yang bertektur remah
cenderung berbentuk tidak teratur, relatif kecil ukurannya, inti selnya
besar dan sitoplasmanya masih kental. Terbentuknya kalus yang bertekstur
remah ini juga dipacu oleh adanya hormon auksin endogen yang
diproduksi secara internal oleh eksplan yang telah tumbuh membentuk
kalus tersebut.
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
21
Gambar 3. Kalus yang terbentuk pada eksplan jarak pagar.
Kalus yang baik diasumsikan memiliki tekstur remah (friable)
(Gambar 3). Tekstur kalus yang remah dianggap baik karena memudahkan
dalam pemisahan menjadi sel-sel tunggal pada kultur suspensi, disamping
itu akan meningkatkan aerasi oksigen antar sel.
Menurut Syahid et al. (2010) bahwa aplikasi kombinasi auksin dan
sitokinin pada konsentrasi tepat mampu menghasilkan kalus dengan
struktur remah. Penambahan sitokinin ke dalam media yang sudah
mengandung auksin dapat merangsang pertumbuhan kalus karena kedua
zat pengatur tumbuh tersebut bekerja secara sinergis. Adanya sitokinin
yang dapat meningkatkan pembelahan sel dalam proses sitokinesis
terutama pada saat sintesis RNA dan protein akan memacu aktivitas auksin
dalam pembelahan sel membentuk kalus
4. Berat Segar Kalus
Berat segar kalus dihitung pada 30 HST atau akhir pengamatan.
Berat segar kalus merupakan parameter pertumbuhan kalus, karena
merupakan hasil dari pembelahan dan perbesaran sel.
Berat basah yang dihasilkan sangat tergantung pada kecepatan sel-sel
tersebut membelah diri, memperbanyak diri, dan dilanjutkan dengan
membesarnya kalus. Zat pengatur tumbuh auksin dan sitokinin yang
diberikan pada perbandingan yang tepat dapat menginisiasi pembelahan
sel dan meningkatkan pertumbuhan sel (Rahayu et al., 2003).
kalus
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
22
Keterangan : B1 : 0 ppm BA B2 : 0,5 ppm BA B3 : 1 ppm BA B4 : 1,5 ppm BA N1 : 0 ppm NAA N2 : 0,5 ppm NAA N3 : 1 ppm NAA N4 : 1,5 ppm NAA ppm : part per million (mg/l)
Gambar 4. Pengaruh konsentrasi BA dan NAA terhadap berat segar kalus.
Berdasarkan Gambar 4 dapat diketahui bahwa berat segar kalus yang
dihasilkan terlihat bervariasi. Semakin banyak NAA yang ditambahkan
maka berat kalusnya semakin meningkat. Berat segar total tertinggi
didapatkan pada perlakuan BA 1 ppm dikombinasikan dengan NAA 1,5
ppm yaitu 4,16 gram. Sedangkan berat kalus terendah pada perlakuan BA
0,5 ppm dikombinasikan dengan NAA 0,5 ppm yaitu 1,31 gram. Berat
kalus yang berbeda-beda disebabkan kemampuan jaringan dalam
menyerap air dan unsur hara berbeda-beda yaitu kemampuan mengadakan
proses difusi, osmosis dan tekanan turgor sel (Sriyanti (2000) cit.
Widyawati (2009).
Tingginya berat segar kalus yang diperoleh berhubungan dengan
tekstur kalus yang diperoleh yaitu remah. Menurut Syahid et al. (2010)
semakin remah kalus yang diperoleh, semakin cepat proses pembelahan
selnya sehingga massa kalus makin banyak dan bobot meningkat.
Berdasarkan hasil sidik ragam (Lampiran 11) menunjukkan bahwa
pemberian NAA berpengaruh sangat nyata terhadap berat segar kalus
sedangkan pemberian BA dan interaksi antara keduanya tidak berpengaruh
nyata. Auksin umumnya ditambahkan ke dalam nutrisi media untuk
menginduksi kalus dari eksplan (George dan Sherrington, 1984).
1,31
4,16
Ber
at k
alus
(g)
Perlakuan
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
23
Penambahan NAA pada media menyebabkan sel-sel kalus aktif
dalam pembelahan sel, pembesaran sel, menaikkan tekanan osmotic dan
meningkatkan sintesis protein (Widyawati, 2009). Menurut Wetherell
(1982) penambahan auksin dalam jumlah yang lebih besar, atau
penambahan auksin yang lebih stabil misalnya NAA atau 2,4 D cenderung
menyebabkan terjadinya pertumbuhan kalus dari eksplan. Mekanisme kerja
auksin salah satunya adalah mempengaruhi perpanjangan sel. Auksin
mendorong elongasi sel pada koleoptil dan ruas-ruas tanaman. Elongasi sel
terutama terjadi pada arah vertikal dan diikuti dengan pembesaran sel dan
peningkatan bobot basah. Sitokinin memiliki aktivitas utama dalam
mendorong terjadinya pembelahan sel (Wattimena, 1988).
Tabel 3. Pengaruh NAA terhadap purata berat segar kalus NAA (ppm) Purata berat kalus (gram)
0 0,00 a 0,5 1,90 b 1 2,93 c
1,5 3,27 c Keterangan : Angka yang diikuti huruf yang sama menunjukkan
tidak berbeda nyata pada DMRT 5%
Setelah dilakukan uji Duncan 5% (Tabel 3) dapat diketahui bahwa
perlakuan tanpa NAA (0 ppm) memberikan pengaruh yang berbeda nyata
dengan perlakuan NAA 0,5 ppm, 1 ppm, dan 1,5 ppm. Akan tetapi
penggunaan NAA 1 ppm memberikan pengaruh yang tidak berbeda nyata
dengan NAA 1,5 ppm. Dapat dikatakan bahwa pemberian 1 ppm NAA
paling optimal untuk berat segar kalus karena peningkatan konsentrasinya
memberikan pengaruh yang tidak berbeda nyata secara DMRT 5% pada
variabel berat segar kalus.
B. Tunas
1. Saat Muncul Tunas
Saat muncul tunas merupakan salah satu faktor penting di dalam
perbanyakan tanaman dengan metode kultur jaringan. Semakin cepat
muncul tunas maka semakin cepat dihasilkan bahan untuk perbanyakan
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
24
tanaman. Pengaruh konsentrasi BA dan NAA terhadap eksplan jarak pagar
disajikan pada Gambar 5.
Keterangan : B1 : 0 ppm BA B2 : 0,5 ppm BA B3 : 1 ppm BA B4 : 1,5 ppm BA N1 : 0 ppm NAA N2 : 0,5 ppm NAA N3 : 1 ppm NAA N4 : 1,5 ppm NAA ppm : part per million (mg/l)
Gambar 5. Pengaruh konsentrasi BA dan NAA terhadap saat muncul tunas (HST).
Pada penelitian ini, hampir semua perlakuan mampu merangsang
pembentukan tunas kecuali pada perlakuan tanpa BA maupun NAA. Hal
ini disebabkan tidak adanya zat pengatur tumbuh yang ditambahkan
walaupun pada eksplan sudah terdapat zat pengatur tumbuh endogen tetapi
belum mampu untuk merangsang pembentukan tunas.
Hal ini didukung oleh pendapat Wattimena (1992) bahwa zat
pengatur tumbuh adalah salah satu faktor yang penting diantara faktor
lainnya yang dapat mempengaruhi pertumbuhan organ dari potongan
jaringan yang ditanam baik jenis maupun konsentrasinya. Menurut Pierik
(1987) BA termasuk golongan sitokinin merupakan ZPT yang banyak
digunakan untuk memacu inisiasi dan poliferasi tunas. Terutama dalam
mendorong pembelahan sel, menginduksi tunas adventif dan dalam
konsentrasi tinggi menghambat inisiasi akar.
Pada perlakuan BA 0,5 ppm dan NAA 0 ppm menunjukkan
pengaruh paling cepat dalam merangsang kemunculan tunas yaitu pada
9,67 hari setelah tanam. Hal serupa juga ditunjukkan pada penelitian
Kaewpoo dan Te-chato (2009) dan pada penelitian Hartono (2010) bahwa
9,67Sa
at m
uncu
l tun
as
(HST
)
Perlakuan
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
25
perlakuan BA 0,5 ppm mampu mempengaruhi saat muncul tunas tercepat.
Pada perlakuan tanpa BA eksplan mampu membentuk tunas. Seperti
diungkapkan oleh George dan Sherrington (1984) bahwa sitokinin alami
yang terkandung didalam tubuh eksplan dapat merangsang eksplan untuk
membentuk tunas.
Penambahan NAA tidak mampu mempercepat saat muncul tunas.
Hariyanti et al. (2004) menyatakan bahwa pemberian auksin eksogen yang
semakin meningkat, pengaruh hambatannya terhadap waktu pembentukan
tunas semakin meningkat pula. Pada penelitian ini, pengaruh penambahan
NAA terhadap saat muncul tunas terlihat bervariasi. Menurut Hendaryono
dan Wijayani (1994) bahwa pada kadar yang tinggi auksin lebih bersifat
menghambat daripada merangsang pertumbuhan.
Pada penelitian Widyawati (2009), penambahan NAA juga tidak
mampu mempercepat saat kemunculan tunas. Hal ini dimungkinkan
bahwa didalam eksplan telah terkandung auksin endogen yang kadarnya
tidak sama persis. Keseragaman ukuran dan cara pengambilan eksplan
kemungkinan besar tidak diikuti dengan keseragaman hormon endogen
tanaman sehingga penambahan auksin eksogen ke dalam media kultur
akan menimbulkan respon yang bervariasi.
2. Jumlah Tunas
Dalam penelitian ini, jumlah tunas diamati pada akhir penelitian
yaitu 30 HST. Dalam kultur jaringan jumlah tunas dapat diindikasikan
sebagai keberhasilan dalam multiplikasi. Semakin banyak tunas yang
terbentuk maka semakin tinggi tingkat multiplikasinya.
Wetherell (1982) menyebutkan bahwa sitokinin mempunyai dua
peranan penting untuk propagasi secara in vitro yaitu merupakan
perangsang pembelahan sel dalam jaringan yang dibuat eksplan dan
merangsang pertumbuhan tunas daun.
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
26
Keterangan : B1 : 0 ppm BA B2 : 0,5 ppm BA B3 : 1 ppm BA B4 : 1,5 ppm BA N1 : 0 ppm NAA N2 : 0,5 ppm NAA N3 : 1 ppm NAA N4 : 1,5 ppm NAA ppm : part per million (mg/l)
Gambar 6. Pengaruh konsentrasi BA dan NAA terhadap jumlah tunas.
Berdasarkan Gambar 6 dapat diketahui bahwa hampir semua
perlakuan mampu memunculkan tunas kecuali pada perlakuan tanpa BA
dan NAA. Penambahan konsentrasi BA maupun NAA belum mampu
menumbuhkan tunas lebih dari satu. Pada penelitian Nursetiadi (2008),
eksplan pucuk manggis juga hanya mampu memunculkan satu tunas saja.
Hal ini juga diduga karena jenis eksplan yang digunakan. Diduga eksplan
pucuk mempunyai kecenderungan memunculkan bakal tunas satu. Tunas
yang terbentuk berasal dari hasil pemanjangan tunas pucuk batang
tanaman.
Penambahan konsentrasi BA sampai 1,5 ppm memberikan hasil yang
sama dengan perlakuan tanpa BA. Hal ini dimungkinkan pemberian BA
dengan konsentrasi 1,5 ppm belum mampu untuk multiplikasi tunas.
Penambahan hormon eksogen akan berpengaruh terhadap jumlah dan kerja
hormon endogen untuk mendorong pertumbuhan dan perkembangan
eksplan (Gunawan 1998).
Menurut George dan Sherrington (1984) bahwa konsentrasi sitokinin
yang lebih tinggi dibandingkan dengan konsentrasi auksin akan memacu
multiplikasi tunas. Riyadi dan Tahardi (2009) menyatakan bahwa proses
Jum
lah
tuna
s
Perlakuan
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
27
multiplikasi tunas tanaman memerlukan adanya hormon tumbuh eksternal
khususnya golongan sitokinin seperti BA karena untuk mendapatkan
tingkat multiplikasi tunas yang tinggi, sitokinin internal masih kurang.
C. Daun
Daun dinyatakan sebagai lembaran berwarna hijau baik yang masih
menggulung maupun telah terbuka (Prihatmanti dan Mattjik, 2004). Daun
mempunyai fungsi utama sebagai organ utama fotosintesis pada tumbuhan
tingkat tinggi (Gardner et al., 1991). Penentuan saat muncul daun pada
penelitian ini didasarkan pada daun yang telah membuka sempurna. Hal ini
sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh Widyawati (2009) dan Hanifah
(2007) pada eksplan jarak pagar.
1. Saat Muncul Daun
Pengamatan daun sangat penting sebagai acuan apakah pertumbuhan
dan perkembangan tanaman berlangsung dengan baik karena daun
merupakan perkembangan lebih lanjut dari tunas yang telah tumbuh pada
eksplan. Tanda paling awal akan adanya perkembangan daun menurut
Salisbury dan Ross (1992) adalah pembelahan poliklinal sel terluar yang
diikuti dengan pertumbuhan sel anak yang menyebabkan timbulnya
tonjolan yaitu primordial daun. Pertumbuhan daun merupakan proses
diferensiasi tunas dan dengan penambahan zat pengatur tumbuh auksin
dan sitokinin dapat mendorong proses diferensiasi tersebut.
Wetherell (1987) menyebutkan bahwa secara umum perbandingan
sitokinin dan auksin yang tinggi baik untuk pembentukan daun. Menurut
Yelnititis et al. (1996) cit. Yunus (2007) penambahan sitokinin dapat
mendorong meningkatnya jumlah dan ukuran daun.
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
28
Keterangan : B1 : 0 ppm BA B2 : 0,5 ppm BA B3 : 1 ppm BA B4 : 1,5 ppm BA N1 : 0 ppm NAA N2 : 0,5 ppm NAA N3 : 1 ppm NAA N4 : 1,5 ppm NAA ppm : part per million (mg/l)
Gambar 7. Pengaruh konsentrasi BA dan NAA terhadap saat muncul daun (HST).
Berdasarkan Gambar 7 diketahui bahwa saat muncul daun
menunjukkan hasil yang bervariasi. Saat muncul daun tercepat pada
perlakuan BA 0,5 ppm dikombinasikan dengan NAA 0 ppm serta pada
perlakuan BA 1 ppm dikombinasikan dengan NAA 0,5 ppm. Perlakuan
B1N4, B2N4, B3N1, dan B3N3 sudah muncul tunas, hanya saja pada
akhir pengamatan (30 HST) daun belum membuka secara sempurna
dikarenakan sudah layu ataupun rontok. Daun yang muncul pada
penelitian ini keseluruhan berwarna hijau.
2. Jumlah Daun
Jumlah daun dihitung berdasarkan akumulasi jumlah dari daun yang
terbentuk sampai akhir pengamatan yaitu 30 HST. Hal ini dikarenakan,
dalam perjalanannya banyak daun yang layu ataupun rontok. Perontokan
daun ini diduga karena eksplan sudah memasuki fase penuaan dan karena
nutrisi dalam media sudah berkurang. Widyawati (2009) melaporkan
bahwa planlet jarak pagar yang daunnya mengalami kerontokan
kemungkinan besar disebabkan oleh asupan hara yang semakin berkurang
dalam media karena diserap oleh tanaman untuk pertumbuhan dan
perkembangannya. Perontokan daun juga mungkin disebabkan karena
11,5 11,5
Saat
mun
cul d
aun
(HST
)Perlakuan
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
29
siklus tanaman jarak pagar yang memasuki fase perontokan daun, seperti
yang biasanya terjadi pada budidaya di lapangan.
Sedangkan Lizawati et al. (2009) menyatakan bahwa gugur daun
diduga berkaitan dengan adanya produksi gas etilen, kekurangan hara pada
media dan terjadinya toksisitas. Kekurangan hara diduga akibat dari
habisnya hara yang terdapat pada media dalam botol, oleh karena itu perlu
dilakukan subkultur pada 4 minggu setelah tanam agar gugur daun tidak
menyebabkan kematian. Hal ini diperkuat oleh Magdalita et al. (1997) cit.
Lizawati et al. (2009) menyatakan bahwa pengaruh akumulasi etilen
adalah mempercepat penuaan dan perontokan daun.
Salah satu proses fisiologi yang terjadi pada kultur in vitro adalah
senesen yaitu suatu proses yang dapat mempercepat proses penuaan
walaupun nutrisi pada media dan sirkulasi gas masih mencukupi. Proses
senesen pada kultur in vitro dapat terjadi melalui bentuk yang berbeda-
beda seperti daun menguning dan kalus berubah secara gradual menjadi
abu-abu lalu coklat. Kekurangan nutrisi dari media dan akumulasi racun
pada kultur juga merupakan penyebab senesen (Cachita dan Craciun
(1990) cit. Prihatmanti dan Mattjik (2004).
Keterangan : B1 : 0 ppm BA B2 : 0,5 ppm BA B3 : 1 ppm BA B4 : 1,5 ppm BA N1 : 0 ppm NAA N2 : 0,5 ppm NAA N3 : 1 ppm NAA N4 : 1,5 ppm NAA ppm : part per million (mg/l)
Gambar 8. Pengaruh konsentrasi BA dan NAA terhadap jumlah daun.
Series1, B1N3, 2
Series1, B3N4, 2
Jum
lah
daun
Perlakuan
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
30
Berdasarkan Gambar 8 dapat diketahui bahwa jumlah daun yang
dihasilkan bervariasi. Perlakuan BA 0,5 ppm dikombinasikan dengan
NAA 1 ppm serta perlakuan BA 0,5 ppm dikombinasikan dengan NAA
1,5 ppm menghasilkan jumlah daun terbanyak yaitu dua helai.
Berdasarkan hasil sidik ragam (Lampiran 12) menunjukkan bahwa
pemberian NAA memberikan pengaruh yang nyata terhadap jumlah daun,
sedangkan pemberian BA serta interaksi antara keduanya tidak
memberikan pengaruh yang nyata. Wetherell (1982) menyebutkan bahwa
perbandingan sitokinin-auksin yang tinggi, baik untuk pembentukan daun.
Namun, pada penelitian ini jumlah daun yang muncul pada eksplan
terlihat bervariasi. Variasi jumlah daun ini dimungkinkan karena adanya
hormon endogen yang kadarnya tidak persis sama sehingga responnya
terhadap penambahan zat pengatur tumbuh juga bervariasi. Gunawan
(1987) cit. Widyawati (2009) menyebutkan bahwa interaksi dan
peimbangan antara zat pengatur tumbuh yang diberikan dalam media dan
yang diproduksi oleh sel endogen menentukan arah perkembangan suatu
kultur. Penambahan auksin atau sitokinin eksogen mengubah level zat
pengatur tumbuh endogen sel.
Tabel 4. Pengaruh NAA terhadap purata jumlah daun NAA (ppm) Purata jumlah daun
0 0,42 a 0,5 1,08 b 1 0,67 ab
1,5 0,25 a Keterangan: Angka yang diikuti huruf yang sama menunjukkan tidak berbeda
nyata pada DMRT 5%
Berdasarkan Tabel 4 dapat diketahui bahwa perlakuan tanpa NAA
memberikan pengaruh yang tidak berbeda nyata dengan perlakuan NAA
1,5 ppm. Akan tetapi perlakuan tanpa NAA memberikan pengaruh yang
berbeda nyata dengan perlakuan NAA 0,5 ppm.
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
31
D. Akar
Akar merupakan salah satu organ penting tanaman. Menurut
Prihatmanti dan Mattjik (2004), akar dinyatakan sebagai tonjolan berbentuk
kerucut dan berbulu putih (bulu akar) dengan ujung berwarna kuning dan
akan tumbuh memanjang. Akar terutama berfungsi sebagai penopang tubuh
tanaman dan untuk penyerapan air dan mineral. Dua fungsi lain yang
berkaitan dengan akar adalah sebagai tempat penyimpanan dan sebagai
pengangkut (Zulkarnain, 2009).
1. Saat Muncul Akar
Saat munculnya akar menjadi faktor yang penting dalam
pertumbuhan tanaman karena tanaman akan lebih mudah menyerap unsur-
unsur yang terdapat dalam media kultur.
Keterangan : B1 : 0 ppm BA B2 : 0,5 ppm BA B3 : 1 ppm BA B4 : 1,5 ppm BA N1 : 0 ppm NAA N2 : 0,5 ppm NAA N3 : 1 ppm NAA N4 : 1,5 ppm NAA ppm : part per million (mg/l)
Gambar 9. Pengaruh konsentrasi BA dan NAA terhadap saat muncul akar (HST).
Berdasarkan Gambar 9 dapat diketahui bahwa perlakuan BA 1,5
ppm dikombinasikan dengan NAA 0,5 ppm menunjukkan kemunculan
akar tercepat. Hal senada juga ditunjukkan pada penelitian Artemesia oleh
Fitriani (2008) dan pada penelitian Gladiol kultivar Malang Strip dan
White Friendship oleh Badriah et al. (1998), inisiasi akar tercepat
Series1, B4N2, 6
Saat
mun
cul a
kar
(HST
)
Perlakuan
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
32
diperoleh dari media yang mengandung 0,5 ppm NAA. Sebagian eksplan
tidak mampu menumbuhkan akar. Hal ini diduga karena auksin yang
terdapat pada eksplan digunakan untuk pembentukan kalus. Menurut Beyl
(2005) cit. Sukmawati (2010) bahwa pada umumnya konsentrasi auksin
yang rendah menyebabkan inisiasi akar sedangkan konsentrasi auksin
yang tinggi dapat menyebabkan terbentuknya kalus.
Zat pengatur tumbuh NAA dapat berperan sebagai perangsang
terbentuknya enzim-enzim yang aktif dalam pembelahan sel. Tanpa
pemberian NAA, walaupun telah diberikan sitokinin, eksplan yang
ditumbuhkan secara in vitro belum mampu berakar, sedangkan pada media
MS dengan adanya penambahan NAA dapat merangsang pertumbuhan
akar (Simatupang, 1991).
Akan tetapi pada perlakuan BA 0,5 ppm dikombinasikan dengan
NAA 1,5 ppm tidak menunjukkan kemunculan akar. Variasi saat muncul
akar ini dimungkinkan karena adanya hormon endogen yang kadarnya
tidak persis sama sehingga responnya terhadap penambahan zat pengatur
tumbuh juga bervariasi.
2. Jumlah Akar
Jumlah akar yang banyak dapat mengoptimalkan penyerapan nutrisi
yang ada pada media kultur. Secara visual, akar yang terbentuk pada
eksplan berwarna putih, mempunyai percabangan dan terbentuk pada
dasar eksplan (Gambar 10).
Gambar 10. Akar yang terbentuk pada eksplan.
Akar primer
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
33
Keterangan : B1 : 0 ppm BA B2 : 0,5 ppm BA B3 : 1 ppm BA B4 : 1,5 ppm BA N1 : 0 ppm NAA N2 : 0,5 ppm NAA N3 : 1 ppm NAA N4 : 1,5 ppm NAA ppm : part per million (mg/l)
Gambar 11. Pengaruh konsentrasi BA dan NAA terhadap jumlah akar.
Dalam penelitian ini, akar yang dihitung adalah akar primer yang
terbentuk. Terbentuknya akar bukan berasal dari kalus, melainkan dari
pangkal batang yang membesar. Berdasarkan Gambar 11 dapat diketahui
bahwa jumlah akar terbanyak didapatkan pada perlakuan BA 1 ppm
dikombinasikan dengan NAA 1,5 ppm dan perlakuan BA 1,5 ppm
dikombinasikan dengan NAA 1 ppm yaitu 5.
Dari hasil sidik ragam (Lampiran 13) diketahui bahwa pemberian
NAA serta interaksi antara BA dan NAA memberikan pengaruh yang
nyata. Menurut Bhojwani dan Radzan (1983) cit. Panjaitan (2005), ZPT
NAA merupakan golongan auksin yang digunakan untuk pembesaran dan
diferensiasi akar. Ditambahkan oleh Bantawa et al. (2009) bahwa NAA
merupakan auksin yang paling baik untuk induksi akar.
Tabel 5. Pengaruh Interaksi BA dan NAA terhadap purata jumlah akar
NAA (ppm) BA (ppm)
0 0,5 1 1,5 0 0,00 a 0,00 a 0,00 a 0,33 ab
0,5 3,33 cde 3,33 cde 3,33 cde 0,33 ab 1 3,00 cde 3,67 de 1,33 abcd 5,00 e
1,5 2,67 bcde 0,00 a 5,00 e 1,33 abc Keterangan : Angka yang diikuti huruf yang sama menunjukkan
tidak berbeda nyata pada DMRT 5%
Series1, B3N4, 5
Series1, B4N3, 5
Jum
lah
akar
Perlakuan
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
34
Interaksi BA dan NAA yang sangat nyata menunjukkan bahwa
perlakuan sitokinin (BA) tidak dapat dilepaskan dari pengaruh auksin
(NAA), sehingga dalam penggunaan sitokinin, baik efek mendorong
maupun menghambat proses pembelahan sel tergantung dari adanya
fitohormon lainnya, terutama auksin (Wattimena, 1988).
Berdasarkan uji Duncan yang telah dilakukan (Tabel 5), dapat
diketahui bahwa perlakuan BA 1 ppm dan NAA 1,5 dan perlakuan BA 1,5
ppm dan NAA 1 ppm memberikan purata jumlah akar tertinggi.
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
35
V. KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
1. Rata-rata saat muncul tunas tercepat pada perlakuan BA 0,5 ppm tanpa
NAA yaitu 9,67 HST.
2. Penggunaan berbagai konsentrasi BA dan NAA tidak mampu merangsang
multiplikasi tunas.
B. Saran
Perlu dilakukan penelitian dengan menggunakan konsentrasi sitokinin
(BA) yang lebih tinggi untuk memacu multiplikasi tunas jarak pagar.