la gota gruesa es una forma de extendido usado en las coloraciones para determinar malaria
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La Gota Gruesa es una forma de extendido usado en las coloraciones para determinar malaria.
Lo ideal es tomar una gota de sangre directamente del dedo del paciente ojalá en estado febril y colocarla directamente sobre uno de los extremos del portaobjeto (nuevo y desengrasado) hacia el centro. Después con el borde de otro porta objeto se extiende (angulo 45º)desde el centro de la gota hacia arriba,luego al centro pasa hacia abajo y nuevamente al centro sin levanter y de forma rápida; quedando un frotis grueso en forma de franja.
Después se deja secar y se realiza coloración para hemoparásitos(p.e.j: Coloración de Field, )
DIAGNÓSTICO DE MALARIA
Gota gruesa y extensión de sangre teñido por Giemsa: es el más conocido y el más
utilizado y no ha podido ser igualado. En estos métodos se utilizan 100 µl de sangre
lisada y se hace
una preparación que se tiñe con Giemsa.
Tinción fluorescente DNA-RNA en estos casos se utiliza la naranja de Acridina y uno
de
estos métodos es el QBC.
De los métodos moleculares el PCR es muy sensible.
La detección de pigmento malárico se realiza a través de la microscopia de campo
oscuro.
La detección de antígeno que se usan métodos de Parasight y el método de pLDH
OptiMAL.
DIAGNÓSTICO PARASITOLOGICO
Se realiza a través de la gota gruesa y extendido Se toma una muestra por punción
capilar y
eso se tiñe por Giemsa. Esto es lo que se hace tanto en la capital como en las zonas
rurales y en las
zonas endémicas.
El extendido: se hace un extendido de la muestra de sangre y es una sola capa de
células
rojas.
Vamos a ver una sola capa de glóbulos rojos y se pueden ver tanto los eritrocitos
parasitados
como los no parasitados de tal forma que si la persona no es experta se puede
hacer una diferencia.
La gota gruesa consiste en hacer una preparación con varias gotas de sangre del
tamaño de
una moneda de 10 centavos se hacen varias capas y después que se seca se
procede a que gotas de
agua le caigan despacio para que se deshemoglobinice el glóbulo rojo con el
objetivo de que los
glóbulos rojos desaparezcan y solamente queden los parásitos, una vez que se ha
realizado eso se
deja secar y se tiñe con Giemsa.
Como hay varias capas de eritrocitos y se rompen vamos a tener un mayor número
de
parásitos, si los hay, solamente se van a ver los parásitos, los glóbulos blancos y las
plaquetas.
En el caso de falciparum podemos ver la infección múltiple que consiste en varios
parásitos
por eritrocito. Vamos a ver gametocitos, ya les explique porque no vamos a ver
trofozoitos maduros
ni esquizontes jóvenes ni esquizontes maduros en un extendido de sangre. Por lo
tanto cuando el
laboratorio hace reporte de malaria por P. falciparum solo esta reportando los
trofozoitos inmaduros
en sangre periférica, no hay reporte de los parásitos que están secuestrados en
eritrocitos en los
capilares de los órganos internos.
En el caso del P. vivax el esquizonte maduro es el estadio diagnóstico, en él pueden
observarse de 12 a 24 merozoitos, Trofozoitos jóvenes, gametocitos y trofozoitos
maduros
ameboides. Todos estos estadios se ven en sangre periférica.
En el caso de Malariae los estadios en sangre periférica son trofozoito maduro que
adquiere
la forma de banda el citoplasma del parásito y el esquizonte maduro que tiene de 6
a 12 merozoitos.
El otro reporte (además del de Genero y especie por gota gruesa y extendido) que
debe ir
obligatoriamente con un reporte de infección por malaria es la determinación de la
parasitemia. Esto
es sumamente importante porque es la guía para el médico de cómo empezó o
como está la infección
al momento que se hizo el diagnóstico. Porque cuando se va a administrar el
tratamiento es necesario
conocer la parasitemia para saber si el tratamiento está siendo efectivo o hay que
cambiarlo antes de
las 24 horas.
La determinación de parasitemia en gota gruesa se hace contando 200 glóbulos
blancos y
cuantos parásitos hay por campo donde se contaron los gb. Entonces uno asume
que hay 8000
glóbulos blancos en cada microlitro de sangre y se multiplica el número total de
parásitos por 40 y
eso nos va a dar el número de parásitos por microlitro.Si se hace el diagnostico a
través de un extendido sí tenemos eritrocitos, en ese caso se van a
contar cuantos eritrocitos hay parasitados por campo hasta que se cuentan 100
eritrocitos. Entonces
ahí el reporte se da en porcentaje.
Esto tiene una razón de ser:
* En primer lugar que el médico tiene que conocer la parasitemia cuando va a
administrar el
tratamiento para saber si el tratamiento que está dando le esta funcionando al
paciente
Segundo porque el médico puede evaluar la situación del paciente:
Parasitemia de 0.0001 a 0.0004% ó 5-20 p/ul es la mínima cantidad de
parásitos para que la gota gruesa sea positiva, por debajo de este número de
parásitos no se
va a detectar en sangre periférica.
Parasitemia de 0.002% o de 100 p/ul es el nivel en que los pacientes pueden
ser sintomáticos, aunq pueden estar sintomáticos por debajo de este nivel.
Parasitemia esta en 0.2% o 10000 p/ ul en este nivel los pacientes que ya han
tenido una exposición previa a malaria van a presentar síntomas.
Parasitemia de 2% ó 100000 p/ul es la parasitemia máxima que vamos a ver
con vivax por lo tanto si tenemos más de este numero hay una fuerte sospecha de
que sea P.
falciparum.
Parasitemia de 2-5% o de 100000 a 250000 p/ul es considerado una
hiperparasitemia, hay malaria severa y la mortalidad es aumentada.
Parasitemia de 10% o de 500000 p/ul hay que considerar una
exanguinotransfusion o la aplicación de una bolsa con glóbulos rojos empacados con
el
objeto de disminuir la parasitemia y en esos casos hay alta mortalidad.
O sea que el médico podría tener unas mejores opciones si la parasitemia llega
hasta un 2%
porque eso indica que es P. vivax. Pero cuando la parasitemia es mucho mas
elevada hay que tener
mucho cuidado. Y en el momento en que se empieza la administración de la terapia
el medico tiene
que especificar que este paciente tiene que ser evaluado por lo menos 8 a 10 horas
o 12 horas
después de haberse iniciado el tratamiento. No puede permanecer sin evaluación
porque puede
presentar resistencia a la droga y los parásitos se siguen multiplicando lo que a
veces termina con la
muerte del paciente.
Las personas en panamá que son infectadas por P. falciparum proveniente de
Colombia
tienen gran posibilidad de que este sea resistente a Cloroquina.
La prueba de QBC en una prueba muy buena que hace una medición del ADN
nuclear. Sin
embargo sale muy costosa xq requiere un microscopio de fluorescencia, un
adaptador de
fluorescencia y una microcentrifuga, si uno va al campo a evaluar pacientes esta
centrifuga puede ser
portátil y todo puede funcionar con una batería.
Lo que hace es que tiene unos tubos capilares que tienen naranja de acridina que es
un
colorante de ADN, recuerden que los eritrocitos humanos no tienen núcleo y x eso
no tienen ADN y
por ende en la tinción con naranja de acridina el ADN que se va a teñir es el ADN del
parásito. Y
eso es lo que vamos a ver con la fluorescencia. Con la microcentrifuga se hacen
varias capas: de
glóbulos blancos, de plaquetas y en la capa de glóbulos rojos se ve. También se usa
QBC para
Tripanosoma cuzi.
El ParaSightF es una prueba especifica y exclusiva para P. falciparum porque utiliza
un
anticuerpo monoclonal hacia Ag esta especie. La proteína que se utiliza es la
proteína de los knobs la
Proteína de falciparum rica en histidina II (PfHRII) y los resultados son visibles en 11
minutos en
una tirita que no necesita refrigeración, se puede llevar al campo y su sensibilidad
estimada es que
deben haber por lo menos 10 p/ul. Se requieren 50 ul de sangre. El resultado de la
prueba negativa es
una raya fraccionada.
La detección de especies por PCR es muy específica ya que cada plasmodium tiene
una
banda específica y se utiliza más que nada para fines de investigación. Es una
técnica un poco
elaborada y no se utiliza para diagnostico rutinario xq saldría muy caro y tomaría
mucho tiempo. 3. PALUDISMO POR P.malariae Fiebre cuartana Sintomatologia mas
benigna, mas cronica. Recrudescencias despues de muchos años. P. De incubacion mas
prolongado. Malaria cronica.
24. DIAGNOSTICO Se basa en la observación e identificación de parásitos plasmodium
en muestras de sangre. Puede confundirse con otras enfermedades febriles: fiebre
amarilla, tifoide, paratifoidea, acceso hepatico, hepatitis, fiebre recurrente, pielonefritis,
brucelosis, tuberculosis, dengue, leishmaniasis visceral y procesos septicos. Confirmacion:
hallazgo de los parásitos .
25. METODOS UTILIZADOS Gota gruesa Extendido de sangre periférica Pruebas de DX
rapido PCR RX inmunologicas Examenes complementarios
26. INDICACIONES DE LA TOMA DE MUESTRA A todo paciente febril sospechoso por
demanda de atención. A todo paciente remitido para confirmación del DX. A todo paciente
con recaida.
27. TOMA DE MUESTRA Toma de datos completos del paciente Tomar muestra. Marcar
3 laminas, dos para gota gruesa y una para el extendido para sangre periférica.
28. GOTA GRUESA Con el borde de un cubreobjetos se extiende la gota de sangre con
movimientos en N, para formar un cuadrado de 1 x 1 cm. Luego se coloca otra gota de
sangre a una distancia de 0.5-1 cm de la otra. Se repite el procedimiento en otra lamina.
Dejar secar a temp ambiente .
29. Importante : Se realiza gota gruesa seriada a todo paciente con fuerte evidencia
epidemiologica de padecer malaria y con gota gruesa negativa inicial. A todo paciente que
se ha automedicado. En casos complicados o con parasitemias altas (<50000
parasitos/uL), se realiza control de parasitemia cada 8 a 12 horas.
30. COLORACIÓN precoloración coloración Preservar células sanguíneas. inicio de
deshemoglobinización Diferenciar estructuras parasitarias completación de la
deshemoglobinización
31. Valoracion de la coloración de gota gruesa Macroscópica Se observa como un
cuadrado continuo de color azul claro. Microscópica deshemoglobinización completa
Plaquetas: rosadas Leucocitos: intensamente coloreados Granulaciones de schuffner y
maurer Citoplasma y cromatina del parasito: intensamente coloreados.
32.
33. RECUENTO PARASITARIO Recuento parasitario en gota gruesa: # de parásitos x
8000 leucocitos / ul = 100 leucocitos Parasitemias altas: 500 parásitos x 8000 leucocitos /
ul = # de leucocitos contados # de parasitos/ul de sangre # de parasitos/ul de sangre
34. EXTENDIDO DE SANGRE PERIFERICA Con el borde de un cubreobjetos se extiende
la gota de sangre con movimientos en N, para formar un cuadrado de 1 x 1 cm. Dejar
secar a temp ambiente. Coloración.
35. Valoracion de la coloración de un extendido de sangre periférica Macroscópica pelicula
fina y uniforme. No debe llegar a los bordes. Disminucion progresiva y tenue Microscópica
Eritrocitos: neutra o violeta. Leucocitos: núcleo azul oscuro o violeta. Citoplasma: azul
claro (linfocitos), gris (monocitos), rosado tenue (neutrofilos). Granulaciones: azul o rosado
(neutrofilos), naranja (eosinofilos). Plaquetas: rosadas a violeta. Parasitos: citoplasma
azul, cromatina roja intensa o violeta, granulaciones rosado o rojo.
36. Forma: Trofozoitos Forma: Schizonte Forma: Gametocito Plasmodium falciparum
37. Forma: Trofozoitos Forma: Schizonte Forma: Gametocito Plasmodium vivax
38. Forma: Trofozoitos Forma: Gametocito Forma: Schizonte Plasmodium ovale
39. Forma: Trofozoitos Forma: Schizonte Forma: Gametocito Plasmodium malariae
40. Recuento parásitario en extendido de sangre periferica. sangre # de parasitos x # de
eritrocitos/uL de = 10000 eritrocitos # de parásitos x hematocrito x 100000 = 10000
eritrocitos # de parasitos/ul de sangre # de parasitos/ul de sangre
41. Cálculo de la parasitemia en porcentaje 10000 glóbulos rojos 20 trofozoitos 100
glóbulos rojos X Recuento semicuantitativo Informar especie de plasmodium que ocasiona
la infección. Informar el numero aprox. de formas parasitarias encontrados en la gota
gruesa. Rango de parásitos encontrados Equivalencia en cruces 1 – 10 en 100 campos
microscópicos .....................................+ 11 – 100 en 100 campos
microscópicos..................................++ 1 – 10 por campo
microscópico...............................................+++ > 10 por campo
microscópico................................................++++
42. PRUEBAS DE DX RAPIDO Inmunocromatografia
43. RX INMUNOLÓGICAS IFD ELISA FAST-ELISA HEMAGLUTINACIÓN INDIRECTA.
EXAMENES COMPLEMENTARIOS HB ANEMIA HTO
44. COMPARACIÓN DE LOS MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO MÉTO-DOS TIPOS DE
TÉCNICA VENTAJAS INCONVENIEN-TES Extensión Fina Tinción de Giemsa
Fácil realización Bajo coste Diferencia especies Cuantitativa No detecta parasitemias
bajas Gota Gruesa Tinción de Giemsa Fácil realización Bajo costo Solo indica (+)
Detecta parasitemias bajas No puede detectar la especie Kit Reacción antigeno-
anticuerpo Fácil realización Rápida Alto costo No detecta la especie
45. INFORME DE RESULTADO Especie presente. Recuento parasitario. asexuadas P.
falciparum recuento sexuadas En infecciones mixtas: Recuento de cada especie de
manera independiente. Reportar especie predominante en 1° lugar y subordinada en 2°
lugar Gota gruesa: termino hemopárasito o gota gruesa. Extendido: solo termino
hemopárasito.
46. PREVENCION Y CONTROL Tratamiento y aislamiento del enfermo. Uso de
mosquitero. Construcción, modificación y protección de las viviendas. Ordenamiento del
medio ambiente. Control quimico. Control biológico. Cambio en el comportamiento
humano .
47. TRATAMIENTO 1. ESQUIZONTICIDAS ERITROCITICOS: 4-aminoquinoleinas
Hidroximetilquinoleinas Diaminopirimidinas Sulfonamidas 2. ESQUIZONTICIDAS
TISULARES: 8-aminoquinoleinas
48. ¡¡¡ GRACIAS!!!
49. Nombre del paciente. Numero consecutivo. Fecha. Periodo epidemiológico.
Identificación. En casos complicados o con parasitemias altas (<50000 parásitos/uL).
Coger la hora de la toma de la muestra.
50. Se limpia el dedo índice o el del medio del paciente. Tomar la muestra de un área
limpia . En niños se puede tomar del talón ó del lóbulo de la oreja Secar la zona Se
punciona con una lanceta estéril desechable, en el borde lateral del dedo entre la yema y
la uña.
51. Se limpia la 1° gota de sangre, se presiona el dedo y se coloca la siguiente gota a 1
cm de la
1. EXAMEN DE EXTENDIDOS DE SANGRE PERIFÉRICA
2. Obtención de la muestra y preparación del extendido de sangre periférica Casi
todas las muestras para hematología se recolectan en tubos de tapa lila que
contienen EDTA ( que anticoagula la sangre por quelación de calcio) Los
extendidos deben realizarse dentro de 2 a 3 horas de la toma de muestra El
EDTA impide la aglutinación de las plaquetas en el portaobjetos.
3. PREPARACIÓN DEL EXTENDIDO DE SANGRE PERIFÉRICA La sangre de
ciertos pacientes sufre satelitosis plaquetaria cuando se aglutina con EDTA ( las
plaquetas rodean al neutrófilo). Debe tomarse la muestra en tubos con citrato de
sodio al 3,8% Los leucocitos y plaquetas se multiplican por 1.1 para obtener
resultados exactos. Punción talón, dedo – extendidos inmediatos.
4. TIPOS DE EXTENDIDOS Manual con dos portaobjetos en ángulo 2
portaobjetos de vidrio de 75 x 25 mm limpios, bordes biselados y esquinas romas
También puede hacerse con un cubreobjetos de hemocitómetro
5. TÉCNICA DE EXTENDIDOS Se coloca una gota de sangre de 2 a 3 mm de
diámetro en el extremo del portaobjeto. El tamaño de la gota es importante.
Demasiado grueso ,extendido muy largo o muy grueso. Demasiado pequeña
extendido corto o delgado.
6. TÉCNICAS DE EXTENDIDO El portaobjeto extensor se sostiene con firmeza
con la mano dominante a un ángulo de 30 a 45 grados , se lleva hacia atrás hasta
tocar la gota de sangre, dejando que se esparza en todo lo ancho del
portaobjetos. Entonces se empuja con rapidez y suavidad hacia delante, hasta el
final del portaobjetos
7. TÉCNICAS DE EXTENDIDO Toda la gota debe incluirse en el extendido .
Movimiento lento produce mala distribución de los leucocitos, porque desplza las
cél más grandes hacia el final y los lados del extendido. En Hto altos ángulo de
25 grados. En Hto bajos aumentar el ángulo
8. CARACTERÍSTICAS DE UN EXTENDIDO BIEN PEPARADO Debe cubrir de
dos tercios a tres cuartas partes de la longitud del extendido. Tiene forma de
dedo, ligeramente redondeado en el borde más fino Los bordes laterales deben
ser visibles. Extendido parejo, sin agujeros ni estrías. Toda la gota debe ser
incluída y extendida Al colocar contra la luz la porción delgada debe tener
aspecto en arco iris
9. PREPARACIÓN Y TINCIÓN AUTOMATIZADA DE EXTENDIDOS Después
que el equipo analizó una muestra, el portador desplaza el tubo y lee el código de
barras. De acuerdo con el Hto el sistema ajusta el tamaño de la gota a usar, y el
ángulo y la velocidad del portaobjetos extensor Luego de preparar el extendido ,
el portaobjetos extensor se limpia en forma automática
10. TINCIÓN AUTOMÁTICA DE EXTENDIDOS El nombre, número y fecha de la
muestra se imprime en el portaobjetos Luego se seca , se carga un cassette y se
va al sitio de tinción, cuando la tinción está terminada, el portaobjetos se
desplaza a un sitio de secado, luego a una zona de almacenamiento, para ser
leido. Deben secarse tan rápido como sea posible.
11. TINCIÓN DE LOS EXTENDIDOS DE SANGRE PERIFÉRICA Wright o Wright
– Giemsa (Romanowsky) Estas coloraciones son policromáticas pues tienen
eosina y azul de metileno . El metanol fija las células al portaobjetos El azul de
metileno oxidado y la eosina, tiñe los componentes neutros. El buffer que se
agrega a la tinción debe ser fosfato de sodio 0,05 o agua destilada
12. TINCIÓN DE LOS EXTENDIDOS DE SANGRE PERIFÉRICA El azul de
metileno tiñe los componentes célulares ácidos ( Basófilos) como el RNA. La
eosina libre es ácida y tiñe y tiñe los componentes básicos ( eosinófilos) la Hb, los
gránulos eosinófilos Los neutrofilos se denominan así porque tienen gránulos
citoplasmáticos con pH neutro y toman algunas características de tinción de
ambas coloraciones. Los portaobjetos deben secarse antes de teñirlos.
13. MÉTODOS DE COLORACIÓN DE WRIGHT Se realiza sobre un soporte para
coloraciones Puede filtrarse antes de usarlo en forma directa desde la botella Es
importante cubrir el portaobjetos por completo. El colorante debe permanecer
sobre el portaobjetos de 1 a 3 minutos
14. MÉTODO DE COLORACIÓN DE WRIGHT Luego se pone una cantidad igual
de buffer al portaobjetos. Si la mezcla es correcta debe aparecer en el
portaobjetos un brillo metálico. Cuando termina la coloración , se lava el
portaobjetos con un chorro de agua continuo, pero suave. La parte de atrás se
limpia para eliminar residuo del colorante. El portaobjetos se deja secar al aire en
posición vertical.
15. TINCIÓN DE WRIGHT Se realiza con balanza de precisión bien calibrada y
en gramos. Para 500 ml: 1.6 gr Wright 16 ml glicerina 485 milímetros de metanol
En el mortero se coloca el glicerol más el Wright, se diluye y lava con el metileno;
se filtra por 24 horas.
16. DISPOSITIVOS DE TINCIÓN AUTOMATIZADOS Utiles en laboratorios con
alto volumen de muestras. Se necesita 5 a 10 min. Para teñir un lote de
portaobjetos. Los portaobjetos se sumergen automáticamente en el
colorante ,luego en el buffer y en una serie de lavados.
17. DISPOSITIVOS DE TINCIÓN AUTOMÁTIZADOS Una vez que el proceso de
tinción inicio no pueden agregarse portaobjetos al lote. Las soluciones de tinción
son estables de 3 a 6 horas.
18. CARACTERÍSTICAS DE UN EXTENDIDO BIEN TEÑIDO Debe ser de color
rosa o púrpura. Los eritrocitos deben tener un color anaranjado a rosa salmón.
Los núcleos de los leucocitos color púrpura a azules. El citoplasma de los
neutrófilos de color rosa a bronceado, con gránulos de color anaranjado brillante.
Los mejores resultados se obtienen de una extensión bien realizada
19. EXAMEN DE LOS EXTENDIDOS DE SANGRE PERIFÉRICA EXAMEN
MACROSCÓPICO Coloración más azul - proteinas sanguíneas Vacuolas
dispersas - aumento de los lípidos Aspecto grumoso - aglutinaciones de
eritrocitos
20. EXTENDIDOS DE SANGRE PERIFÉRICA EXAMEN MICROSCOPICO El
microscopio debe calibrase La luz debe centrarse de manera adecuada El
condensador debe estar elevado casi por completo Calibrar correctamente el
aumento Diafragma abrir una cantidad de luz cómoda para el ojo. Uso de filtro.
21. EXAMEN CON EL OBJETIVO DE 10x Puede evaluarse la calidad del
extendido, el color y la distribución de las células. Cantidad desproporcionada de
monocitos en el borde indica mala extensión. Presencia de filamentos de fibrina,
distribución de los eritrocitos, formación de rodillos o aglutinación.
22. EXAMEN CON EL OBJETIVO DE 40x Luego usar el objetivo seco fuerte 40x
El número de leucocitos por campo se multiplica por 2000 para obtener una
aproximación adecuada del recuento de leucocitos.
23. EXAMEN CON LENTE DE 100x Se utiliza aceite de inmersión Se cuenta 100
leucocitos y se informa con porcentaje de leucocitos. Un área demasiado
delgada, no es aceptable. Un área demasiado espesa distorsiona los eritrocitos al
amontonarlos uno encima de otro. Portaobjetos al revés. Debe quitarse el aceite.
24. REALIZACIÓN DE FÓRMULA LEUCOCITARIA Debe leerse en serpentina
hacia delante y hacia atrás, para disminuir los errores de distribución. Se cuenta
100 leucocitos y se clasifican con contadores o pianos ( 200) Los resultados se
informan como porcentajes – 100% Es importante incluir los bordes laterales por
los monocitos, linfocitos inmaduros y células reactivas
25. RECUENTO DE PLAQUETAS Se hace con el objetivo de aceite de 100x En
una zona del extendido, donde los eritrocitos apenas se topen entre sí se cuenta
el # de plaquetas en 10 CIA. El # aproximado de plaquetas X C. X 20.000 es
aproximadamente el recuento de plaquetas.
26. RECUENTO DE PLAQUETAS Una estimación grosera es si hay de 3 a 25
plaquetas por C. el recuento es adecuado siempre y cuando haya unos 200
leucocitos por C. Cuando el pcte, está anémico o tiene eritrocitosis las
proporciones plaqueta- eritrocitos se altera, puede usarse la siguiente fòrmula. #
promedio de plaquetas x recuento de eritrocitos 200
(En el contexto nacional no se acepta la utilizacion del recuento semicuantitativo). 2.8 Extendido de sangre periférica Para un correcto diagnostico de especie de plasmodium de malaria es necesario realizar, ademas de la gota gruesa, el extendido de sangre periférica en casos en los cuales existan dudas sobre la especie del plasmodium, como tambien en los casos de parasitemias altas, cuando la cuantificacion exacta en gota gruesa se hace dificil. Al igual que la gota gruesa, el examen del frotis es sencillo, rapido, confiable y economico. 2.8.1 Procedimiento • Marcar la lamina de la misma manera descrita para gota gruesa • Despues de tomar la gota gruesa, presionar el dedo del paciente y colocar una nueva gota de sangre en el extremo de una lamina portaobjetos. Poner en contacto la lámina con la gota, de manera delicada, evitando que la lamina toque el dedo del paciente, guardando el espacio designado para la marca de la lamina
• Para realizar el extendido se debe ayudar de otro portaobjetos: colocar en contacto uno de los extremos de este segundo portaobjetos con la gota de sangre que se acaba de tomar; dejar extender por capilaridad la sangre a lo largo del borde del portaobjetos, y con una inclinacion de 30 a 40 grados realizar el frotis a lo largo de la lamina • Presionar nuevamente y tomar un microhematocrito. En los casos de confirmacion de especie no es necesario • Limpiar el dedo del paciente • Dejar secar la muestra de sangre a la temperatura ambiente, sobre una superficie plana y libre de polvo • Limpiar bien la lamina que utilizo para realizar el extendido, para evitar la transferencia de parasitos de una muestra a otra. • Fijar con metanol
• Colorear con Field, Giemsa o Wright, teniendo en cuenta que el procedimiento para la coloracion es igual que para la gota gruesa, solo que el tiempo de coloracion es aproximadamente el doble (segun estandarización de cada laboratorio o puesto de microscopia) • Observar al microscopio con objetivo de 10X y 40X; buscar los campos donde los globulos rojos se encuentren separados. Proceder a observar con objetivo de 100 x las formas parasitarias caracteristicas de plasmodium.
PRINCIPIO
S GEN
ERALES
´
GOTA GRUESA
: es la extensión
de una
gota de sangreen
forma cuadrangular de
un diámetro aproximado de1 a
1.5
cm. Con la gota gruesa
se puede detectar
lapresenc
ia de plasmodi
um.
´
EL PROTIS SANGUINEO: Es
la extensión
de una
gotade
sangre de
tal manera que
se puede
observar a
lmicroscopio tanto
los
eritrocitos como0
los parásitosen un
solo plano. Y con el
protissanguineose
puedediferenc
iar claramen
te la
especie de plasmodium.
