laporan praktikum bioteknologi minggu ke iii kelompok 3 kelas a1

Upload: hana-rosanna

Post on 07-Jul-2018

217 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

  • 8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1

    1/18

    LAPORAN PRAKTIKUM BIOTEKNOLOGI FARMASI

    LAPORAN PRAKTIKUM MINGGU KE-III

    Pembuatan Sel E.coli Kompeten dengan Perla uan !a!l " dan Ke#utan Pana$ % Heat

    Shock & 'Tran$(orma$)' dan Ele tro(ore$)$ Pol)a r)lam)da S*S-Page

    Kela$ B)ote nolog) A+

    Kelompo ,

    *ISUSUN OLE .

    Brigitta Winata 1306480295

    Cakra Meliala 1306480774

    Dini Khoirunnisa 1306414362

    Dwitta Me !a " 1306376944

    #ana $osanna 1306405465

    %n ah "ratiwi 1306397040

    $aihan ana "utra 1306480231

    &ung 'n ah 1306479886

    FAKULTAS FARMASI

    UNI/ERSITAS IN*ONESIA

    *EPOK

    "0+1

  • 8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1

    2/18

    I2 PEMBUATAN SEL KOMPETEN *ENGAN PERLAKUAN !a!l " *AN KE3UTAN

    PANAS

    I Penda4uluan(eknik D)* reko+,inan a alah reka!asa genetika untuk +enghasilkan si-at ,aru

    engan .ara +ereko+,inasikan gen tertentu engan D)* geno+/ (eknik D)* reko+,inan

    ,ertu uan untuk +ereko+,inasi gen ala+ ta,ung reaksi/ (eknik D)* reko+,inan +eli uti

    isolasi D)* geno+ik atau kro+oso+ !ang akan iklon e+otongan +olekul D)* +en a i

    se u+lah -rag+en engan ,er,agai ukuran isolasi D)* ektor en!isi an -rag+en D)* ke

    ala+ ektor untuk +enghasilkan +olekul D)* reko+,inan trans-or+asi sel inang

    +enggunakan +olekul D)* reko+,inan reisolasi +olekul D)* reko+,inan ari sel inang

    an analisis D)* reko+,inan/ (eknologi !ang ikenal se,agai teknologi D)* reko+,inan

    atau reka!asa genetika ini +eli,atkan u a!a er,an!akan gen tertentu i ala+ suatu sel

    !ang ,ukan sel ala+in!a sehingga sering ula ikatakan se,agai kloning gen $i-a % M/

    2010 /(rans-or+asi a alah en!isi an +ateri genetik asing eksternal !ang ,eru a -rag+en

    D)* ,aik D)* kro+oso+ +au un D)* las+i ke ala+ sel +elalui in ing sel !ang

    akan +en a i inang/ (rans-or+asi D)* +eru akan salah satu +eto e untuk +e+asukkan

    D)* ke ala+ sel ,akteri Cowell *ustin 1997 / Meto e ini sekarang se.ara luas i akai

    untuk +entrans-er las+i ke.il ari satu galur ,akteri ke galur lainn!a #anahan 1983 /"a a asarn!a in ing sel ,er-ungsi +elin ungi sel ari +asukn!a ,en a ,en a

    asing ter+asuk D)* teta i ala+ kon isi tertentu in ing sel a at +e+iliki se+a.a+

    .elah atau lu,ang !ang ,isa i+asuki oleh D)*/ leh se,a, itu se,elu+ +elakukan

    trans-or+asi ,akteri !ang akan igunakan erlu iu,ah terle,ih ahulu ari sel regular

    +en a i sel ko+ eten sel !ang a at +en!era D)* karena telah +en a at erlakuan -isik

    +au un ki+ia/ agar D)* las+i a at le,ih +u ah iintro uksikan saat trans-or+asi/&el inang !ang aling u+u+ igunakan se,agai sel ko+ eten a alah Escherichia coli

    karena ia a at ,ere likasi se.ara .e at serta +e+iliki kan ungan las+i ala+ u+lah ,an!ak sehingga -rag+en D)* !ang i a atkan untuk i a ikan reko+,inan uga ,an!ak/

    (i ak se+ua sel se.ara ala+i +e+iliki ke+a+ uan untuk +en!era D)* asing/ &etia sel

    +e+iliki e-isiensi !ang ,er,e a ala+ +en!era +olekul D)*/ Be,era a s esies !ang a at

    +en!era D)* se.ara e-isien a alah Bacillus an Streptococcus / &el !ang tergolong ti ak

    e-isien ala+ +en!era D)* a alah Escherichia coli / &el ini +e+iliki ke+a+ uan ala+i

    +en!era D)* asing !ang ren ah (sen et al/ 2002 /Ke+a+ uan sel ala+ +en!era D)* a at itingkatkan engan erlakuan khusus

    sehingga sel terse,ut +en a i ko+ eten/ &el a at i,uat ko+ eten +elalui erlakuan -isik

  • 8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1

    3/18

    engan gara+ kalsiu+ klori a CaCl 2 atau ru,i iu+ klori a $,Cl &uharsono 2006 /

    "e+,uatan sel ko+ eten engan ena+,ahan larutan CaCl 2 ,ertu uan untuk +egganggu

    kesei+,angan kalsiu+ ala+ +e+,ran sel inang engan a an!a kation i alent Ca2: an

    +e+,antu ter,ukan!a rotein integral +e+,ran se,agai kanal ion karena a an!a er,e aan

    +uatan/ Me+,ran akan inetralkan an las+i D)* !ang ,ersi-at negati- akan a at +asuk

    an iintro uksikan/

    II Pr)n$)p

    "rinsi ari e+,uatan sel ko+ eten a alah engan e+,erian erlakuan khusus

    terha a sel ,aik se.ara -isik atau un ki+ia agar ke+a+ uan sel ala+ +en!era D)* asing

    untuk roses trans-or+asi a at itingkatkan/ &alah satu +eto e -isik !ang aling sering

    igunakan a alah engan ena+,ahan gara+ kalsiu+ klori a CaCl 2

    IIITu#uan

    Men!e iakan sel !ang sia igunakan untuk trans-or+asi D)* reko+,inan ke sel

    inang E. coli untuk +e+ eroleh E. coli reko+,inan

    I/Alat dan Ba4an

    a Alat

    i "i et +ikro 0 20;< an 20 200;< ,eserta ti n!a

    ii (a,ung +ikro 1/5 +<

    iii $ak ta,ung +ikro

    i 'rlen+e!er 100+l

    b Ba4an

    i Escherichia coli D#5=

    ii

  • 8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1

    4/18

    4/ Cu.i +asing +asing ellet i ala+ ta,ung engan 1 +< 0 1 +< CaCl2 ingin/

    Dia+kan i atas es sela+a 15 +enit/5/ "elet sel engan sentri-usi 5000 r + 1 +enit se erti a a taha 3 ke+u ian

    sus ensikan ellet ala+ 200 +ikroliter larutan CaCl2 ingin/ Dia+kan i atas es

    sela+a 10 +enit/ &el ko+ eten su ah sia i akai untuk trans-or+asi/6/ (ergantung ari kon isi seln!a 1 ta,ung +ikro 200 +ikroliter sus ensi sel a at

    i akai untuk 1 2 trans-or+asi/

    /I Alur Ker#a

    /II Ke$)mpulan

    &el ko+ eten a alah sel !ang +e+iliki ke+a+ uan untuk isisi i D)* ari luar

    karena telah +en a atkan erlakuan khusus/ "a a raktiku+ kali ini igunakan ,akteri

    Escherichia coli untuk i,uat +en a i sel ko+ eten agar E.coli a at +enga+,il D)* ari

    lingkungann!a/ "e+ilihan ,akteri E.coli ikarenakan ,akteri ini a at ite+ukan ala+

    ,entuk -lora nor+al ala+ tu,uh an a at +e+,elah engan .e at sehingga sel reko+,inan

  • 8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1

    5/18

    !ang ihasilkan akan le,ih ,an!ak ala+ waktu !ang singkat/ "e+,uatan sel ko+ eten

    ilakukan karena a a kon isi nor+al in ing sel ,akteri akan +elin ungi sel ari

    +asukn!a ,en a ,en a asing ter+asuk uga D)* sehingga D)* reko+,inan !ang telah

    i+urnikan ti ak a at iintro uksikan ke ala+ sel inang/

    "e+,uatan sel ko+ eten a at ilakukan engan erlakuan -isik ena+,ahan gara+

    kalsiu+ klori a CaCl 2 / "ena+,ahan ?ara+ CaCl 2 akan +e+ engaruhi kesei+,angan

    kalsiu+ an orositas +e+,ran sel sehingga a a saat ter a i lon akan suhu +e+,ran

    +en a i ti ak selekti- terha a +olekul asing an +en a i er+ia,el terha a ro uk ligasi

    sehingga ro uk tersenut a at +asuk ke ala+ sel/ "e+,uatan sel ko+ eten engan

    +enggunakan +eto e CaCl 2 ini .uku e-isien an ti ak +e+,utuhkan eralatan khusus/

    "a a rakriku+ kali ini raktikan ,elu+ a at +elihat hasil !ang i eroleh

    ikarenakan raktiku+ ti ak ilakukan/

    @

    /III *a(tar Pu$ta a

    1/ Cowell %* *ustin C*/ 1997/ cDNA Library Protocols : Preparation of

    Competent Cells for High Efficiency Plasmi! "ransformation of Escherichia coli

    Aol 69/ #u+ana "r/2/ Malik *+arila/ 2016/ Proto#ol $er%a Biote#nologi. Laboratorium &i#robiologi

    !an Biote#nologi 'armasi / De ok @ akultas ar+asi ni ersitas %n onesia/3/ $i-a i M/ 2010 / (eneti#a )e#ombinasi !an Populasi. E!. * / Malang@ ?ala !

    &.ien.e/4/ &uharsono W/ / 2006 / Penuntun Pra#ti#um Pelatihan "e#ni# Peng#lonan (en.

    Bogor %D @ "usat "enelitian &u+,er Da!a #a!ati an Bioteknologi %"B/5/ &uharsono et all/ 2010/ +solasi !an Peng#lonan 'ragmen cDNA (en Penyan!i

    H, A"Pase &embran Plasma !ari &elastoma malabathricum

  • 8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1

    6/18

    (rans-or+asi a alah en!isi an +ateri genetik asing eksternal !ang ,eru a -rag+en

    D)* ,aik D)* kro+oso+ +au un D)* las+i ke ala+ sel +elalui in ing sel !ang

    akan +en a i inang/ (rans-or+asi D)* +eru akan salah satu +eto e untuk +e+asukkan

    D)* ke ala+ sel ,akteri Cowell *ustin 1997 / Meto e ini sekarang se.ara luas i akai

    untuk +entrans-er las+i ke.il ari satu galur ,akteri ke galur lainn!a #anahan 1983 /(rans-or+asi erta+a i erkenalkan oleh re eri.k ?ri--ith a a tahun 1982

    ,er asarkan a a enelitiann!a ,ahwa suatu ,akteri a at +ele askan -rag+en D)*n!a ke

    ala+ suatu +e iu+ !ang ke+u ian akan +asuk ke ala+ sel ,akteri lain !ang a a ala+

    kultur terse,ut/ Di ala+ -rag+en D)* terse,ut ,iasan!a ile askan oleh sel ,akteri !ang

    +ati atau +engala+i autolisis/ )a+un tern!ata a a le,ih ari 1F s esies ,akteri !ang

    +a+ u +elakukan trans-or+asi se.ara ala+i i+ana +ereka +e+ ro uksi rotein rotein

    tertentu !ang a at +e+,awa D)* +en!e,erangi in ing sel/"a a asarn!a in ing sel ,er-ungsi +elin ungi sel ari +asukn!a ,en a ,en a

    asing ter+asuk D)* teta i ala+ kon isi tertentu in ing sel a at +e+iliki se+a.a+

    .elah atau lu,ang !ang ,isa i+asuki oleh D)*/ leh se,a, itu se,elu+ +elakukan

    trans-or+asi ,akteri !ang akan igunakan erlu iu,ah terle,ih ahulu ari sel regular

    +en a i sel ko+ eten sel yang dapat menyerap DNA karena telah mendapat

    perlakuan fsik maupun kimia. agar D)* las+i a at le,ih +u ah iintro uksikan

    saat trans-or+asi/"e+,uatan sel ko+ eten a at ilakukan engan ena+,ahan larutan CaCl 2 untuk

    +e+,uat in ing sel +en a i permeable an a at ilalui oleh D)* las+i an teknik

    Heat Shoc# G +en inginkan +e+anaskan an +en inginkan ke+,ali a a gra ian suhu

    e-treme H agar D)* a at +asuk ke ala+ sel an ti ak keluar ke+,ali/ (eknik ini

    ite+ukan oleh trio eneliti &tanle! Cohen *nnie Chang

  • 8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1

    7/18

    5/ &egregasi an eks resi -enoti ik gen onor !ang telah terintegrasi

    &eleksi ,akteri e+,awa D)* reko+,inan a at ilakukan engan resistensi

    anti,iotika +isaln!a a+ isilin an seleksi warna salah satun!a teknik seleksi ,iru utih /

    &eleksi ,iru utih !aitu +eto e untuk +e+isahkan sel !ang +engan ung las+i

    reko+,inan engan sel !ang +engan ung las+i tan a insert Brown 1995 / Meto e ini

    +enggunakan +e ia !ang +engan ung J gal an %"(? %so ro il (hiogalaktosi a / Koloni

    !ang ,erwarna ,iru artin!a ti ak +engan ung D)* sisi an se angkan koloni ,erwarna

    utih artin!a D)* ,akteri +engan ung D)* sisi an/

    II2 Pr)n$)p

    "rinsi ari trans-or+asi a alah engan ekstraksi D)* ari sel onor ke+u ian

    i.a+ ur engan sel resi ien !ang telah i,uat rentan terha a +asukn!a +olekul D)*

    +elalui ori atau saluran ala+ in ing an +e+,ran sel Cowell *ustin 1997 /

    III2 Tu#uan

    Mengintro uksikan D)* reko+,inan !ang telah i+urnikan ke sel inang '/.oli

    untuk +e+ eroleh '/.oli reko+,inan/

    I/2 Alat dan Ba4an

    5 Alat

    "i et +ikro 200;< an 1000;< ,eserta ti n!a

    i Mikrosentri-us ,er en ingin

    ii Bak es an es !ang telah ihan.urkan

    iii (a,ung +ikro 1/5 +< ,eserta rak ta,ung +ikro

    i 10 ta,ung reaksi steril

    Bea s untuk +engho+ogenkan

    d Ba4an

    iii Escherichia coli D#5= ko+ eten

    i

  • 8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1

    8/18

    /2 Pro$edur er#a

    1 Ke ala+ ua ta,ung +ikro steril +asukkan +asing +asing 100 ;l 0 1 M CaCl 2

    steril/ "a a salah satu ta,ung ta,ung K N kontrol +asukkan 20 ;l # 2 steril

    se angkan a a ta,ung !ang lain ta,ung & N sa+ el +asukkan20 ;l larutan

    100 500 ng C19/ Ke+u ian ta+,ahkan 200 ;l sel ko+ eten D#5=

    2

  • 8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1

    9/18

    Pembuatan sampeldan kontrol dalam

    tabung mikro steril

    Peletakan pada suhu0 oC, persiapan untuk

    Heat Shock

    Heat shock untuksampel pada suhu

    42 oC (60 detik)kemudian pada es (2

    menit)

    Pindahkan sampeldan kontrol ke

    tabung reaksi steril,masing-masing

    ditambah 1 ml LB

    nkubasi keduan!adengan go!angan

    kuat ("100rpm)pada suhu #$ oCselama %0menit

    Pada L&' &p (10g ml) sebarkan *0

    l suspensi tabung &+ masing-masing *0

    + 100 l suspensitabung B (masing-masing 2-# a an)

    .entri/ugasi dansebar bagian pelet

    (supernatandibuang, kelebihansupernatan dipakai

    untuk meresuspensipelet sel)

    asil trans/ormasidisebar

    menggunakan beads steril

    Pada L&, sebarkan100 l suspensi

    tabung B denganpengen eran 10 -6

    dan 10 -$

    nkubasikan semuakultur di a an

    pada #$ C selamasatu malam (13-24

    am)

    /II2 Pemba4a$an

    "a a raktiku+ trans-or+asi kali ini igunakan ,akteri Escherichia coli !ang su ah

    i,uat terle,ih ahulu +en a i sel ko+ eten E.coli D#5= agar E.coli a at +enga+,il D)*

    ari lingkungann!a/ "e+ilihan ,akteri E.coli ikarenakan ,akteri ini a at ite+ukan ala+

    ,entuk -lora nor+al ala+ tu,uh an a at +e+,elah engan .e at sehingga sel reko+,inan

    !ang ihasilkan akan le,ih ,an!ak ala+ waktu !ang singkat/&e+entara itu e+,uatan sel

    ko+ eten ilakukan karena a a kon isi nor+al in ing sel ,akteri akan +elin ungi sel ari

    +asukn!a ,en a ,en a asing ter+asuk uga D)* sehingga D)* reko+,inan !ang telah

    i+urnikan ti ak a at iintro uksikan ke ala+ sel inang/

    "e+,uatan sel ko+ eten a at ilakukan engan +enggunakan larutan CaCl 2 an

    +eto e heat sho.k ike ut anaskan / ungsi ena+,ahan larutan CaCl 2 a alah +egganggu

    kesei+,angan kalsiu+ ala+ +e+,ran sel inang engan a an!a kation i alent Ca 2: an

    +e+,antu ter,ukan!a rotein integral +e+,ran se,agai kanal ion karena a an!a er,e aan

    +uatan/ Me+,ran akan inetralkan an las+i D)* !ang ,ersi-at negati- akan a at +asuk

    an iintro uksikan/ "roses selan utn!a !aitu ike ut anaskan heat sho.k a a suhu 42OC

    sela+a 60 etik engan +aksu +e+,uat +e+,ran sel tertutu ke+,ali karena ter a i

  • 8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1

    10/18

  • 8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1

    11/18

    /III2 *a(tar Pu$ta a

    1/ Ca+ ,ell et all/ 2002/ Biologi Eili 1/ Eakarta @ 'rlangga

    7/ Cowell %* *ustin C*/ 1997/ cDNA Library Protocols : Preparation of

    Competent Cells for High Efficiency Plasmi! "ransformation of Escherichia coli

    Aol 69/ #u+ana "r/8/ Malik *+arila/ 2016/ Proto#ol $er%a Biote#nologi. Laboratorium &i#robiologi

    !an Biote#nologi 'armasi / De ok @ akultas ar+asi ni ersitas %n onesia/9/ Mula no/ 2002/ Seputar "e#nologi )e#ayasa (eneti#a / "ustaka Wirausaha Mu a

    an &'&' oun ation Bogor/ 123 hala+an/10/ $ussel "E/ 1992/ (enetics "hir! E!ition / )ew Qork )Q @ #ar er Collins

    "u,lisher/11/ &uharsono et all/ 2010/ +solasi !an Peng#lonan 'ragmen cDNA (en Penyan!i

    H, A"Pase &embran Plasma !ari &elastoma malabathricum

  • 8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1

    12/18

    'lektro-oresis +eru akan suatu teknik e+isahan !ang +e+isahkan analit ,er asarkan

    ke+a+ uann!a untuk ,er+igrasi i ala+ +e iu+ kon uksi an akan +e+,erikan

    res ons setelah i,erikan +e an listrik #ar e! 2000 / "a a saat arus listrik i,erikan

    +olekul ,er+igrasi +elalui +e ia ,iasan!a ,eru a gel +olekul !ang le,ih ke.il akan

    ,er+igrasi le,ih .e at ari a a !ang ,esar sehingga akan ter a i e+isahan/

    'lektro-oresis &D& "*?' +eru akan elektro-oresis !ang +enggunakan gel ,uatan

    se,agai +e iu+/ ?el ,uatan ini i,entuk ari oli+erisasi akrila+i a ,is akrila+i a

    a++oniu+ ersul-at an ('M'D ) ) ) ) tetra+etilen ia+in sehingga ter,entuk

    ikatan silang !ang +e+,entuk gel kaku ?irin ra 1993 / "e+ilihan enggunaan

    oliakrila+i a i asarkan a a oliakrila+i a ti ak ,ereaksi engan sa+ el an ti ak

    +e+,entuk +atriks engan sa+ el sehingga ti ak +engha+,at ergerakan sa+ el !ang+e+ungkinkan e+isahan rotein se.ara se+ urna/ *krila+i a +eru akan sen!awa

    karsinogenik/ *++oniu+ ersul-ate ,er-ungsi se,agai inisiator !ang +engakti-kan

    akrila+i a agar ,ereaksi engan +olekul akrila+i a lainn!a +e+,entuk oli+er !ang

    an ang / &e angkan &D& &o iu+

  • 8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1

    13/18

    &ta.king gel ,er-ungsi untuk +enggu+ alkan rotein !ang telah iloa +en a i ita atau

    ,an !ang ta a+ se,elu+ gel ter isah a a resol ing gel/

    $esol ing gel ,er-ungsi untuk +e+isahkan rotein ,er asarka ukuran +olekul an

    ko+ osisi resol2ing gel ,iasan!a iu,ah saat ilakukan o ti+asi gel untuk e+isahan

    gel/

    I/2 Alat dan Ba4an

    +2+ Sta5 )ng Gel

    Ko+ osisi Aolu+e# 2 3 05 +l

    4J 0 5 M (ris#Cl # 6 8 1 25 +l*krila+i 30F 0 67 +l*"& 10F 25 ;l('M'D 5 ;l

    RAolu+e !ang igunakan ,isa ,er,e a ,e a na+un ,ahan en!usun gel teta sa+a

    +2" Re$ol7)ng Gel

    Ko+ osisi +enggunakan 10F Aolu+e# 2 4 15 +l

    4J 0 5 M (ris#Cl # 8 8 2 5 +l*krila+i 30F 3 3 +l*"& 10F 50 ;l

    ('M'D 5 ;lRAolu+e !ang igunakan ,isa ,er,e a ,e a na+un ,ahan en!usun gel teta sa+a

    +2, Larutan A r)lam)d ,08

    30 gra+ a.r!la+i e@ ,is a.r!la+i e 29@1

    Dilarutkan ala+ 100 +l aSua,i est

    &i+ an i ala+ ,otol .oklat te+ at gela a a suhu 4>C

    +29 +': M Tr)$- !l %9;& p

  • 8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1

    14/18

    12 gra+ (ris ,ase

    57 6 gra+ ?l!.ine

    Dilarutkan ala+ 100 +l *Sua,i est

    &i+ an a a suhu 4>C

    +2> := Sample Bu((er

    3 9 +l *Sua,i est

    1 0 +l 0 5 M (ris #Cl # 6 8

    0 8 +l ?l!.erol

    1 6 +l 10F &D&

    0 4 +l 2 +er.a toethanol

    0 4 +l 1F ,ro+o henol,lue

    Disi+ an ala+ -reeIer

    +2< +08 S*S

    50 gra+ &D& a engan aSua,i est hingga 500 +l a uk hingga ho+ogen/

    &i+ an a a suhu ruangan an selalu i,uat -resh/

    +2? +08 APS

  • 8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1

    15/18

    lat ka.a isusun an i asangkan s a.er en e it ka.a / ntuk +en!ia kan gel

    oliakrili+i e &D& 10F ikutilah ta,el i ,awah ini/ )esol2ing gel isia kan terle,ih

    ahulu/

    Tabel +2 Kompo$)$) ba4an resolving gel dan stacking gel.

    Bahan $esol ing gel &ta.king gel# 2 4 15 +< 3 05 +<

    4 1 5 M (ris #Cl

    # 8 8

    2 5 +<

    4 0 5 M (ris #Cl

    # 6 8

    1 25 +<

    *krila+i a

    &olutio 30F

    3 3 +< 0 67 +<

    *"& 10F 50 ;< 25 ;<('M'D 5 ;< 5 ;<

    Ke+u ian .a+ uran resol2ing gel ituangkan ke ala+ ruang antara le+ eng ka.a

    &isakan kira kira 2 5 .+ ari te i atas le+ eng ka.a untuk gel enu+ uk/ (a+,ahkan

    iso ro anol untuk +en!ingkirkan u ara a a ,agian atas gel serta +eratakan ,agian sel

    !ang terletak i ,awah an agar ,atas antar gel a at ter,entuk engan ,aik/ Biarkan

    resol2ing gel ,er oli+erisasi sela+a kurang le,ih 30 +enit/ &etelah resol2ing gel

    ,er oli+erisasi tuangkan .a+ uran stac#ing gel !ang su ah i ersia kan se,elu+n!a

    ke atas reso2ing gel !ang telah ,er oli+erisasi/ &isir lastik e+,entuk su+ur sa+ el

    isisi kan an i,iarkan hingga gel +e+,eku/ &etelah stac#ing gel ,er oli+erisasi

    le askan sisir ari ,agian atas an kle+ serta s a.er ,agian ,awah/

  • 8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1

    16/18

  • 8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1

    17/18

    PersiapanGel

    PersiapanSampel

    Elektroforesis

    DestainingGel

    StainingGel

    /II2 Pemba4a$an

    "a a raktiku+ kali ini ti ak a a hasil er.o,aan karena ti ak se+ua langkah ker a

    ilakukan aki,at ter,atasn!a waktu raktiku+/

    &D& +eru akan teknik etergent anioni. !ang a at +elarutkan +olekul

    hi ro-o,ik !ang +e+,erikan +uatan negati e a a struktur rotein/ Cara ker a &D&

    "*?' a alah engan +engha+,at interaksi hi ro-o,ik an +erusak ikatan hi rogen/

    &D& &o iu+ Do e.!l &ul hate a a er.o,aan ini igunakan untuk +en enaturasi

    rotein/

    &e u+lah &D& a at +engikat suatu rantai oli e ti a sesuai engan ukuran

    +olekul/ Bila ite+ atkan a a suatu +e an listrik +uatan negati- &D& a at

    +enghan.urkan se,agian struktur ko+ leks rotein an se.ara kuat tertarik kearah ano a

    ositi el! .harge ele.tro e /&ta.king gel igunakan untuk +engu+ ulkan rotein !ang telah iloa +en a i

    ita atau ,an !ang ta a+ se,elu+ gel ter isah a a resol ing gel !ang ,er-ungsi se,agai

    gel e+isah !ang +e+isahkan rotein ,er asarkan ukuran +olekul

    /III2 *a(tar Pu$ta a

  • 8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1

    18/18

    • Da i son/ 2001/ &D& "*?'/

    htt @ www/,io/ a i son/e uC $&'& ?') M%C& +etho &D&"*?' &D&"*?'/ht

    +l/ Diakses tanggal 19 Maret 2016/• D/E #ar e! D/$ Wing B KUster %/B/# Wilson Co+ osition o- ) linke .ar,oh! rates

    -ro+ o al,u+in an .o uri-ie gl!.o roteins Eournal o- the *+eri.an &o.iet! -or Mass

    & e.tro+etr! Aolu+e 11 %ssue 6 Eune 2000 "ages 564 571 %&&) 1044 0305

    htt @ / oi/org 10/1016 &1044 0305 00 00122 7/

    htt @ www/s.ien.e ire.t/.o+ s.ien.e arti.le ii &1044030500001227

    • Malik *+arila/ 2015 / Penuntun $er%a : PC)4 Purifi#asi PC)4 !an SDS PA(E / De ok@