laporan praktikum bioteknologi minggu ke iii kelompok 3 kelas a1
TRANSCRIPT
-
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1
1/18
LAPORAN PRAKTIKUM BIOTEKNOLOGI FARMASI
LAPORAN PRAKTIKUM MINGGU KE-III
Pembuatan Sel E.coli Kompeten dengan Perla uan !a!l " dan Ke#utan Pana$ % Heat
Shock & 'Tran$(orma$)' dan Ele tro(ore$)$ Pol)a r)lam)da S*S-Page
Kela$ B)ote nolog) A+
Kelompo ,
*ISUSUN OLE .
Brigitta Winata 1306480295
Cakra Meliala 1306480774
Dini Khoirunnisa 1306414362
Dwitta Me !a " 1306376944
#ana $osanna 1306405465
%n ah "ratiwi 1306397040
$aihan ana "utra 1306480231
&ung 'n ah 1306479886
FAKULTAS FARMASI
UNI/ERSITAS IN*ONESIA
*EPOK
"0+1
-
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1
2/18
I2 PEMBUATAN SEL KOMPETEN *ENGAN PERLAKUAN !a!l " *AN KE3UTAN
PANAS
I Penda4uluan(eknik D)* reko+,inan a alah reka!asa genetika untuk +enghasilkan si-at ,aru
engan .ara +ereko+,inasikan gen tertentu engan D)* geno+/ (eknik D)* reko+,inan
,ertu uan untuk +ereko+,inasi gen ala+ ta,ung reaksi/ (eknik D)* reko+,inan +eli uti
isolasi D)* geno+ik atau kro+oso+ !ang akan iklon e+otongan +olekul D)* +en a i
se u+lah -rag+en engan ,er,agai ukuran isolasi D)* ektor en!isi an -rag+en D)* ke
ala+ ektor untuk +enghasilkan +olekul D)* reko+,inan trans-or+asi sel inang
+enggunakan +olekul D)* reko+,inan reisolasi +olekul D)* reko+,inan ari sel inang
an analisis D)* reko+,inan/ (eknologi !ang ikenal se,agai teknologi D)* reko+,inan
atau reka!asa genetika ini +eli,atkan u a!a er,an!akan gen tertentu i ala+ suatu sel
!ang ,ukan sel ala+in!a sehingga sering ula ikatakan se,agai kloning gen $i-a % M/
2010 /(rans-or+asi a alah en!isi an +ateri genetik asing eksternal !ang ,eru a -rag+en
D)* ,aik D)* kro+oso+ +au un D)* las+i ke ala+ sel +elalui in ing sel !ang
akan +en a i inang/ (rans-or+asi D)* +eru akan salah satu +eto e untuk +e+asukkan
D)* ke ala+ sel ,akteri Cowell *ustin 1997 / Meto e ini sekarang se.ara luas i akai
untuk +entrans-er las+i ke.il ari satu galur ,akteri ke galur lainn!a #anahan 1983 /"a a asarn!a in ing sel ,er-ungsi +elin ungi sel ari +asukn!a ,en a ,en a
asing ter+asuk D)* teta i ala+ kon isi tertentu in ing sel a at +e+iliki se+a.a+
.elah atau lu,ang !ang ,isa i+asuki oleh D)*/ leh se,a, itu se,elu+ +elakukan
trans-or+asi ,akteri !ang akan igunakan erlu iu,ah terle,ih ahulu ari sel regular
+en a i sel ko+ eten sel !ang a at +en!era D)* karena telah +en a at erlakuan -isik
+au un ki+ia/ agar D)* las+i a at le,ih +u ah iintro uksikan saat trans-or+asi/&el inang !ang aling u+u+ igunakan se,agai sel ko+ eten a alah Escherichia coli
karena ia a at ,ere likasi se.ara .e at serta +e+iliki kan ungan las+i ala+ u+lah ,an!ak sehingga -rag+en D)* !ang i a atkan untuk i a ikan reko+,inan uga ,an!ak/
(i ak se+ua sel se.ara ala+i +e+iliki ke+a+ uan untuk +en!era D)* asing/ &etia sel
+e+iliki e-isiensi !ang ,er,e a ala+ +en!era +olekul D)*/ Be,era a s esies !ang a at
+en!era D)* se.ara e-isien a alah Bacillus an Streptococcus / &el !ang tergolong ti ak
e-isien ala+ +en!era D)* a alah Escherichia coli / &el ini +e+iliki ke+a+ uan ala+i
+en!era D)* asing !ang ren ah (sen et al/ 2002 /Ke+a+ uan sel ala+ +en!era D)* a at itingkatkan engan erlakuan khusus
sehingga sel terse,ut +en a i ko+ eten/ &el a at i,uat ko+ eten +elalui erlakuan -isik
-
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1
3/18
engan gara+ kalsiu+ klori a CaCl 2 atau ru,i iu+ klori a $,Cl &uharsono 2006 /
"e+,uatan sel ko+ eten engan ena+,ahan larutan CaCl 2 ,ertu uan untuk +egganggu
kesei+,angan kalsiu+ ala+ +e+,ran sel inang engan a an!a kation i alent Ca2: an
+e+,antu ter,ukan!a rotein integral +e+,ran se,agai kanal ion karena a an!a er,e aan
+uatan/ Me+,ran akan inetralkan an las+i D)* !ang ,ersi-at negati- akan a at +asuk
an iintro uksikan/
II Pr)n$)p
"rinsi ari e+,uatan sel ko+ eten a alah engan e+,erian erlakuan khusus
terha a sel ,aik se.ara -isik atau un ki+ia agar ke+a+ uan sel ala+ +en!era D)* asing
untuk roses trans-or+asi a at itingkatkan/ &alah satu +eto e -isik !ang aling sering
igunakan a alah engan ena+,ahan gara+ kalsiu+ klori a CaCl 2
IIITu#uan
Men!e iakan sel !ang sia igunakan untuk trans-or+asi D)* reko+,inan ke sel
inang E. coli untuk +e+ eroleh E. coli reko+,inan
I/Alat dan Ba4an
a Alat
i "i et +ikro 0 20;< an 20 200;< ,eserta ti n!a
ii (a,ung +ikro 1/5 +<
iii $ak ta,ung +ikro
i 'rlen+e!er 100+l
b Ba4an
i Escherichia coli D#5=
ii
-
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1
4/18
4/ Cu.i +asing +asing ellet i ala+ ta,ung engan 1 +< 0 1 +< CaCl2 ingin/
Dia+kan i atas es sela+a 15 +enit/5/ "elet sel engan sentri-usi 5000 r + 1 +enit se erti a a taha 3 ke+u ian
sus ensikan ellet ala+ 200 +ikroliter larutan CaCl2 ingin/ Dia+kan i atas es
sela+a 10 +enit/ &el ko+ eten su ah sia i akai untuk trans-or+asi/6/ (ergantung ari kon isi seln!a 1 ta,ung +ikro 200 +ikroliter sus ensi sel a at
i akai untuk 1 2 trans-or+asi/
/I Alur Ker#a
/II Ke$)mpulan
&el ko+ eten a alah sel !ang +e+iliki ke+a+ uan untuk isisi i D)* ari luar
karena telah +en a atkan erlakuan khusus/ "a a raktiku+ kali ini igunakan ,akteri
Escherichia coli untuk i,uat +en a i sel ko+ eten agar E.coli a at +enga+,il D)* ari
lingkungann!a/ "e+ilihan ,akteri E.coli ikarenakan ,akteri ini a at ite+ukan ala+
,entuk -lora nor+al ala+ tu,uh an a at +e+,elah engan .e at sehingga sel reko+,inan
-
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1
5/18
!ang ihasilkan akan le,ih ,an!ak ala+ waktu !ang singkat/ "e+,uatan sel ko+ eten
ilakukan karena a a kon isi nor+al in ing sel ,akteri akan +elin ungi sel ari
+asukn!a ,en a ,en a asing ter+asuk uga D)* sehingga D)* reko+,inan !ang telah
i+urnikan ti ak a at iintro uksikan ke ala+ sel inang/
"e+,uatan sel ko+ eten a at ilakukan engan erlakuan -isik ena+,ahan gara+
kalsiu+ klori a CaCl 2 / "ena+,ahan ?ara+ CaCl 2 akan +e+ engaruhi kesei+,angan
kalsiu+ an orositas +e+,ran sel sehingga a a saat ter a i lon akan suhu +e+,ran
+en a i ti ak selekti- terha a +olekul asing an +en a i er+ia,el terha a ro uk ligasi
sehingga ro uk tersenut a at +asuk ke ala+ sel/ "e+,uatan sel ko+ eten engan
+enggunakan +eto e CaCl 2 ini .uku e-isien an ti ak +e+,utuhkan eralatan khusus/
"a a rakriku+ kali ini raktikan ,elu+ a at +elihat hasil !ang i eroleh
ikarenakan raktiku+ ti ak ilakukan/
@
/III *a(tar Pu$ta a
1/ Cowell %* *ustin C*/ 1997/ cDNA Library Protocols : Preparation of
Competent Cells for High Efficiency Plasmi! "ransformation of Escherichia coli
Aol 69/ #u+ana "r/2/ Malik *+arila/ 2016/ Proto#ol $er%a Biote#nologi. Laboratorium &i#robiologi
!an Biote#nologi 'armasi / De ok @ akultas ar+asi ni ersitas %n onesia/3/ $i-a i M/ 2010 / (eneti#a )e#ombinasi !an Populasi. E!. * / Malang@ ?ala !
&.ien.e/4/ &uharsono W/ / 2006 / Penuntun Pra#ti#um Pelatihan "e#ni# Peng#lonan (en.
Bogor %D @ "usat "enelitian &u+,er Da!a #a!ati an Bioteknologi %"B/5/ &uharsono et all/ 2010/ +solasi !an Peng#lonan 'ragmen cDNA (en Penyan!i
H, A"Pase &embran Plasma !ari &elastoma malabathricum
-
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1
6/18
(rans-or+asi a alah en!isi an +ateri genetik asing eksternal !ang ,eru a -rag+en
D)* ,aik D)* kro+oso+ +au un D)* las+i ke ala+ sel +elalui in ing sel !ang
akan +en a i inang/ (rans-or+asi D)* +eru akan salah satu +eto e untuk +e+asukkan
D)* ke ala+ sel ,akteri Cowell *ustin 1997 / Meto e ini sekarang se.ara luas i akai
untuk +entrans-er las+i ke.il ari satu galur ,akteri ke galur lainn!a #anahan 1983 /(rans-or+asi erta+a i erkenalkan oleh re eri.k ?ri--ith a a tahun 1982
,er asarkan a a enelitiann!a ,ahwa suatu ,akteri a at +ele askan -rag+en D)*n!a ke
ala+ suatu +e iu+ !ang ke+u ian akan +asuk ke ala+ sel ,akteri lain !ang a a ala+
kultur terse,ut/ Di ala+ -rag+en D)* terse,ut ,iasan!a ile askan oleh sel ,akteri !ang
+ati atau +engala+i autolisis/ )a+un tern!ata a a le,ih ari 1F s esies ,akteri !ang
+a+ u +elakukan trans-or+asi se.ara ala+i i+ana +ereka +e+ ro uksi rotein rotein
tertentu !ang a at +e+,awa D)* +en!e,erangi in ing sel/"a a asarn!a in ing sel ,er-ungsi +elin ungi sel ari +asukn!a ,en a ,en a
asing ter+asuk D)* teta i ala+ kon isi tertentu in ing sel a at +e+iliki se+a.a+
.elah atau lu,ang !ang ,isa i+asuki oleh D)*/ leh se,a, itu se,elu+ +elakukan
trans-or+asi ,akteri !ang akan igunakan erlu iu,ah terle,ih ahulu ari sel regular
+en a i sel ko+ eten sel yang dapat menyerap DNA karena telah mendapat
perlakuan fsik maupun kimia. agar D)* las+i a at le,ih +u ah iintro uksikan
saat trans-or+asi/"e+,uatan sel ko+ eten a at ilakukan engan ena+,ahan larutan CaCl 2 untuk
+e+,uat in ing sel +en a i permeable an a at ilalui oleh D)* las+i an teknik
Heat Shoc# G +en inginkan +e+anaskan an +en inginkan ke+,ali a a gra ian suhu
e-treme H agar D)* a at +asuk ke ala+ sel an ti ak keluar ke+,ali/ (eknik ini
ite+ukan oleh trio eneliti &tanle! Cohen *nnie Chang
-
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1
7/18
5/ &egregasi an eks resi -enoti ik gen onor !ang telah terintegrasi
&eleksi ,akteri e+,awa D)* reko+,inan a at ilakukan engan resistensi
anti,iotika +isaln!a a+ isilin an seleksi warna salah satun!a teknik seleksi ,iru utih /
&eleksi ,iru utih !aitu +eto e untuk +e+isahkan sel !ang +engan ung las+i
reko+,inan engan sel !ang +engan ung las+i tan a insert Brown 1995 / Meto e ini
+enggunakan +e ia !ang +engan ung J gal an %"(? %so ro il (hiogalaktosi a / Koloni
!ang ,erwarna ,iru artin!a ti ak +engan ung D)* sisi an se angkan koloni ,erwarna
utih artin!a D)* ,akteri +engan ung D)* sisi an/
II2 Pr)n$)p
"rinsi ari trans-or+asi a alah engan ekstraksi D)* ari sel onor ke+u ian
i.a+ ur engan sel resi ien !ang telah i,uat rentan terha a +asukn!a +olekul D)*
+elalui ori atau saluran ala+ in ing an +e+,ran sel Cowell *ustin 1997 /
III2 Tu#uan
Mengintro uksikan D)* reko+,inan !ang telah i+urnikan ke sel inang '/.oli
untuk +e+ eroleh '/.oli reko+,inan/
I/2 Alat dan Ba4an
5 Alat
"i et +ikro 200;< an 1000;< ,eserta ti n!a
i Mikrosentri-us ,er en ingin
ii Bak es an es !ang telah ihan.urkan
iii (a,ung +ikro 1/5 +< ,eserta rak ta,ung +ikro
i 10 ta,ung reaksi steril
Bea s untuk +engho+ogenkan
d Ba4an
iii Escherichia coli D#5= ko+ eten
i
-
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1
8/18
/2 Pro$edur er#a
1 Ke ala+ ua ta,ung +ikro steril +asukkan +asing +asing 100 ;l 0 1 M CaCl 2
steril/ "a a salah satu ta,ung ta,ung K N kontrol +asukkan 20 ;l # 2 steril
se angkan a a ta,ung !ang lain ta,ung & N sa+ el +asukkan20 ;l larutan
100 500 ng C19/ Ke+u ian ta+,ahkan 200 ;l sel ko+ eten D#5=
2
-
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1
9/18
Pembuatan sampeldan kontrol dalam
tabung mikro steril
Peletakan pada suhu0 oC, persiapan untuk
Heat Shock
Heat shock untuksampel pada suhu
42 oC (60 detik)kemudian pada es (2
menit)
Pindahkan sampeldan kontrol ke
tabung reaksi steril,masing-masing
ditambah 1 ml LB
nkubasi keduan!adengan go!angan
kuat ("100rpm)pada suhu #$ oCselama %0menit
Pada L&' &p (10g ml) sebarkan *0
l suspensi tabung &+ masing-masing *0
+ 100 l suspensitabung B (masing-masing 2-# a an)
.entri/ugasi dansebar bagian pelet
(supernatandibuang, kelebihansupernatan dipakai
untuk meresuspensipelet sel)
asil trans/ormasidisebar
menggunakan beads steril
Pada L&, sebarkan100 l suspensi
tabung B denganpengen eran 10 -6
dan 10 -$
nkubasikan semuakultur di a an
pada #$ C selamasatu malam (13-24
am)
/II2 Pemba4a$an
"a a raktiku+ trans-or+asi kali ini igunakan ,akteri Escherichia coli !ang su ah
i,uat terle,ih ahulu +en a i sel ko+ eten E.coli D#5= agar E.coli a at +enga+,il D)*
ari lingkungann!a/ "e+ilihan ,akteri E.coli ikarenakan ,akteri ini a at ite+ukan ala+
,entuk -lora nor+al ala+ tu,uh an a at +e+,elah engan .e at sehingga sel reko+,inan
!ang ihasilkan akan le,ih ,an!ak ala+ waktu !ang singkat/&e+entara itu e+,uatan sel
ko+ eten ilakukan karena a a kon isi nor+al in ing sel ,akteri akan +elin ungi sel ari
+asukn!a ,en a ,en a asing ter+asuk uga D)* sehingga D)* reko+,inan !ang telah
i+urnikan ti ak a at iintro uksikan ke ala+ sel inang/
"e+,uatan sel ko+ eten a at ilakukan engan +enggunakan larutan CaCl 2 an
+eto e heat sho.k ike ut anaskan / ungsi ena+,ahan larutan CaCl 2 a alah +egganggu
kesei+,angan kalsiu+ ala+ +e+,ran sel inang engan a an!a kation i alent Ca 2: an
+e+,antu ter,ukan!a rotein integral +e+,ran se,agai kanal ion karena a an!a er,e aan
+uatan/ Me+,ran akan inetralkan an las+i D)* !ang ,ersi-at negati- akan a at +asuk
an iintro uksikan/ "roses selan utn!a !aitu ike ut anaskan heat sho.k a a suhu 42OC
sela+a 60 etik engan +aksu +e+,uat +e+,ran sel tertutu ke+,ali karena ter a i
-
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1
10/18
-
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1
11/18
/III2 *a(tar Pu$ta a
1/ Ca+ ,ell et all/ 2002/ Biologi Eili 1/ Eakarta @ 'rlangga
7/ Cowell %* *ustin C*/ 1997/ cDNA Library Protocols : Preparation of
Competent Cells for High Efficiency Plasmi! "ransformation of Escherichia coli
Aol 69/ #u+ana "r/8/ Malik *+arila/ 2016/ Proto#ol $er%a Biote#nologi. Laboratorium &i#robiologi
!an Biote#nologi 'armasi / De ok @ akultas ar+asi ni ersitas %n onesia/9/ Mula no/ 2002/ Seputar "e#nologi )e#ayasa (eneti#a / "ustaka Wirausaha Mu a
an &'&' oun ation Bogor/ 123 hala+an/10/ $ussel "E/ 1992/ (enetics "hir! E!ition / )ew Qork )Q @ #ar er Collins
"u,lisher/11/ &uharsono et all/ 2010/ +solasi !an Peng#lonan 'ragmen cDNA (en Penyan!i
H, A"Pase &embran Plasma !ari &elastoma malabathricum
-
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1
12/18
'lektro-oresis +eru akan suatu teknik e+isahan !ang +e+isahkan analit ,er asarkan
ke+a+ uann!a untuk ,er+igrasi i ala+ +e iu+ kon uksi an akan +e+,erikan
res ons setelah i,erikan +e an listrik #ar e! 2000 / "a a saat arus listrik i,erikan
+olekul ,er+igrasi +elalui +e ia ,iasan!a ,eru a gel +olekul !ang le,ih ke.il akan
,er+igrasi le,ih .e at ari a a !ang ,esar sehingga akan ter a i e+isahan/
'lektro-oresis &D& "*?' +eru akan elektro-oresis !ang +enggunakan gel ,uatan
se,agai +e iu+/ ?el ,uatan ini i,entuk ari oli+erisasi akrila+i a ,is akrila+i a
a++oniu+ ersul-at an ('M'D ) ) ) ) tetra+etilen ia+in sehingga ter,entuk
ikatan silang !ang +e+,entuk gel kaku ?irin ra 1993 / "e+ilihan enggunaan
oliakrila+i a i asarkan a a oliakrila+i a ti ak ,ereaksi engan sa+ el an ti ak
+e+,entuk +atriks engan sa+ el sehingga ti ak +engha+,at ergerakan sa+ el !ang+e+ungkinkan e+isahan rotein se.ara se+ urna/ *krila+i a +eru akan sen!awa
karsinogenik/ *++oniu+ ersul-ate ,er-ungsi se,agai inisiator !ang +engakti-kan
akrila+i a agar ,ereaksi engan +olekul akrila+i a lainn!a +e+,entuk oli+er !ang
an ang / &e angkan &D& &o iu+
-
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1
13/18
&ta.king gel ,er-ungsi untuk +enggu+ alkan rotein !ang telah iloa +en a i ita atau
,an !ang ta a+ se,elu+ gel ter isah a a resol ing gel/
$esol ing gel ,er-ungsi untuk +e+isahkan rotein ,er asarka ukuran +olekul an
ko+ osisi resol2ing gel ,iasan!a iu,ah saat ilakukan o ti+asi gel untuk e+isahan
gel/
I/2 Alat dan Ba4an
+2+ Sta5 )ng Gel
Ko+ osisi Aolu+e# 2 3 05 +l
4J 0 5 M (ris#Cl # 6 8 1 25 +l*krila+i 30F 0 67 +l*"& 10F 25 ;l('M'D 5 ;l
RAolu+e !ang igunakan ,isa ,er,e a ,e a na+un ,ahan en!usun gel teta sa+a
+2" Re$ol7)ng Gel
Ko+ osisi +enggunakan 10F Aolu+e# 2 4 15 +l
4J 0 5 M (ris#Cl # 8 8 2 5 +l*krila+i 30F 3 3 +l*"& 10F 50 ;l
('M'D 5 ;lRAolu+e !ang igunakan ,isa ,er,e a ,e a na+un ,ahan en!usun gel teta sa+a
+2, Larutan A r)lam)d ,08
30 gra+ a.r!la+i e@ ,is a.r!la+i e 29@1
Dilarutkan ala+ 100 +l aSua,i est
&i+ an i ala+ ,otol .oklat te+ at gela a a suhu 4>C
+29 +': M Tr)$- !l %9;& p
-
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1
14/18
12 gra+ (ris ,ase
57 6 gra+ ?l!.ine
Dilarutkan ala+ 100 +l *Sua,i est
&i+ an a a suhu 4>C
+2> := Sample Bu((er
3 9 +l *Sua,i est
1 0 +l 0 5 M (ris #Cl # 6 8
0 8 +l ?l!.erol
1 6 +l 10F &D&
0 4 +l 2 +er.a toethanol
0 4 +l 1F ,ro+o henol,lue
Disi+ an ala+ -reeIer
+2< +08 S*S
50 gra+ &D& a engan aSua,i est hingga 500 +l a uk hingga ho+ogen/
&i+ an a a suhu ruangan an selalu i,uat -resh/
+2? +08 APS
-
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1
15/18
lat ka.a isusun an i asangkan s a.er en e it ka.a / ntuk +en!ia kan gel
oliakrili+i e &D& 10F ikutilah ta,el i ,awah ini/ )esol2ing gel isia kan terle,ih
ahulu/
Tabel +2 Kompo$)$) ba4an resolving gel dan stacking gel.
Bahan $esol ing gel &ta.king gel# 2 4 15 +< 3 05 +<
4 1 5 M (ris #Cl
# 8 8
2 5 +<
4 0 5 M (ris #Cl
# 6 8
1 25 +<
*krila+i a
&olutio 30F
3 3 +< 0 67 +<
*"& 10F 50 ;< 25 ;<('M'D 5 ;< 5 ;<
Ke+u ian .a+ uran resol2ing gel ituangkan ke ala+ ruang antara le+ eng ka.a
&isakan kira kira 2 5 .+ ari te i atas le+ eng ka.a untuk gel enu+ uk/ (a+,ahkan
iso ro anol untuk +en!ingkirkan u ara a a ,agian atas gel serta +eratakan ,agian sel
!ang terletak i ,awah an agar ,atas antar gel a at ter,entuk engan ,aik/ Biarkan
resol2ing gel ,er oli+erisasi sela+a kurang le,ih 30 +enit/ &etelah resol2ing gel
,er oli+erisasi tuangkan .a+ uran stac#ing gel !ang su ah i ersia kan se,elu+n!a
ke atas reso2ing gel !ang telah ,er oli+erisasi/ &isir lastik e+,entuk su+ur sa+ el
isisi kan an i,iarkan hingga gel +e+,eku/ &etelah stac#ing gel ,er oli+erisasi
le askan sisir ari ,agian atas an kle+ serta s a.er ,agian ,awah/
-
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1
16/18
-
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1
17/18
PersiapanGel
PersiapanSampel
Elektroforesis
DestainingGel
StainingGel
/II2 Pemba4a$an
"a a raktiku+ kali ini ti ak a a hasil er.o,aan karena ti ak se+ua langkah ker a
ilakukan aki,at ter,atasn!a waktu raktiku+/
&D& +eru akan teknik etergent anioni. !ang a at +elarutkan +olekul
hi ro-o,ik !ang +e+,erikan +uatan negati e a a struktur rotein/ Cara ker a &D&
"*?' a alah engan +engha+,at interaksi hi ro-o,ik an +erusak ikatan hi rogen/
&D& &o iu+ Do e.!l &ul hate a a er.o,aan ini igunakan untuk +en enaturasi
rotein/
&e u+lah &D& a at +engikat suatu rantai oli e ti a sesuai engan ukuran
+olekul/ Bila ite+ atkan a a suatu +e an listrik +uatan negati- &D& a at
+enghan.urkan se,agian struktur ko+ leks rotein an se.ara kuat tertarik kearah ano a
ositi el! .harge ele.tro e /&ta.king gel igunakan untuk +engu+ ulkan rotein !ang telah iloa +en a i
ita atau ,an !ang ta a+ se,elu+ gel ter isah a a resol ing gel !ang ,er-ungsi se,agai
gel e+isah !ang +e+isahkan rotein ,er asarkan ukuran +olekul
/III2 *a(tar Pu$ta a
-
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Minggu Ke III Kelompok 3 Kelas A1
18/18
• Da i son/ 2001/ &D& "*?'/
htt @ www/,io/ a i son/e uC $&'& ?') M%C& +etho &D&"*?' &D&"*?'/ht
+l/ Diakses tanggal 19 Maret 2016/• D/E #ar e! D/$ Wing B KUster %/B/# Wilson Co+ osition o- ) linke .ar,oh! rates
-ro+ o al,u+in an .o uri-ie gl!.o roteins Eournal o- the *+eri.an &o.iet! -or Mass
& e.tro+etr! Aolu+e 11 %ssue 6 Eune 2000 "ages 564 571 %&&) 1044 0305
htt @ / oi/org 10/1016 &1044 0305 00 00122 7/
htt @ www/s.ien.e ire.t/.o+ s.ien.e arti.le ii &1044030500001227
• Malik *+arila/ 2015 / Penuntun $er%a : PC)4 Purifi#asi PC)4 !an SDS PA(E / De ok@