Centro de Estudios Tecnológico, Industrial y de

Servicios #70

Asignatura: Procesar Cultivos Bacteriológicos

Facilitador: Q.F.B. Rocío Ríos Mendoza

“Manual de Bacteriología”

Alumno: Daniel Gerardo Ramón Solís

Semestre: 4° Grupo: “K”

Especialidad: Laboratorísta Clínico

Vhsa,Tab. A 12 de marzo de 2010

Introducción

En este manual se explicaran las principales enterobacterias patógenas para el hombre, pero antes debemos saber que es una enterobacteria.

Las enterobacterias son una familia de Gram negativas que tienen morfología de coco o de bacilo, son de fácil cultivoy fermentadores de carbohidratos, se pueden identificar mediante la prueba de oxidasa la cual resulta negativa.

Nos enfocaremos principalmente al diagnostico de estas bacterias especificando los medios en los que crecen y las pruebas con las que se pueden identificar.

Espero y este trabajo sea de gran ayuda para comprender el estudio de estas bacterias y como hacer un diagnostico en el laboratorio clínico.

Indice

Escherichia coli………………………………….

Shigella sonnei………………………………….

Salmonella tiphy……………………………….

Proteus mirabilis……………………………….

Klebsiella pneumoniae………………………

Conclusión……………………………………

Escherichia coli

La Escherichia coli (o simplemente E. coli) es uno de los muchos grupos de bacterias que viven en los intestinos de los humanos sanos y en la mayoría de los animales de sangre caliente. Esta bacteria ayuda a mantener el equilibrio de la flora intestinal normal (flora bacteriana) contra las bacterias nocivas y sintetiza o produce algunas vitaminas.

Son bacilos gramnegativos poco exigentes en sus necesidades nutritivas y relativamente resistentes a los agentes externos. La bacteria se presenta como bastones, son pequeños; con unas dimensiones de 0.5 x 1.0 a 3.0 micras y se mueve por medio de flagelos peritricos, algunas cepas pueden tener cápsulas y ser inmóviles. Produce vitaminas B y K, es anaerobio facultativo y fermenta glucosa, lactosa y ácido sulfhídrico (H2S).

PatogeniaLa infección con la E. coli ocasiona a menudo diarrea aguda con sangre y calambres abdominales; a veces, la infección ocasiona diarrea sin sangre o no ocasiona síntomas. De ordinario, se halla presente poca o ninguna fiebre y la enfermedad desaparece a los 5-10 días.

En algunas personas, en particular en los niños menores de 5 años de edad y en los ancianos, la infección puede ocasionar también una complicación llamada síndrome urémico hemolítico, en el que los glóbulos rojos se destruyen y se produce insuficiencia renal. Un 2% a 7% de las infecciones conducen a esta complicación. El síndrome urémico hemolítico es la principal causa de insuficiencia renal aguda en los niños y la mayoría de los casos de síndrome urémico hemolítico son ocasionados por la E. coli.

E. coli puede causar infecciones intestinales y extra-intestinales generalmente severas, tales como infecciones del aparato excretor, cistitis, meningitis, peritonitis, mastitis, septicemia y neumonía Gram-negativa.

Escherichia coli

Escherichia Coli

Clasificación científica

Reino: Bacteria

Filo: Proteobacteria

Clase: Gammaproteobacteria

Orden: Enterobacteriales

Familia: Enterobacteriaceae

Género: Escherichia

Especie: E. coli

Nombre binomial

Escherichia coli

Migula, 1895

EpidemiologíaLa enfermedad se transmite por vía feco-oral y el vehículo de transmisión en la población humana más común es la carne de bovino, aunque la transmisión persona - persona también ha sido demostrada. Parece clara la variación estacional ya que la mayoría de las infecciones ocurren durante los meses de verano. La aparición de la enfermedad se produce claramente por falta de higiene en cl proceso de elaboración de los alimentos.

SintomatologíaLos síntomas comienzan más o menos siete días después de que usted se ha infectado con el germen. La primer seña es cólicos abdominales fuertes que comienzan súbitamente. Después de unas pocas horas comienza la diarrea con sangre. La diarrea hace que su cuerpo pierda líquidos y electrolitos lo que se conoce como deshidratación. Este le hace sentirse enfermo y cansado. La diarrea aguada dura más o menos un día. Luego la diarrea cambia a materia fecal de color rojo brillante. La infección hace úlceras en sus intestinos de modo que la materia fecal se hace sanguinolenta. La diarrea sanguinolenta dura entre dos y cinco días. Usted puede tener diez o más evacuaciones intestinales en el día. Algunas personas describen su materia fecal como "es sólo sangre y nada de excremento".

DiagnosticoEl diagnóstico se hace encontrando la E. coli en un cultivo de materia fecal (coprocultivo). Si usted tiene diarrea con sangre vaya a ver al médico tan pronto como sea posible. Su médico le hará un cultivo para determinar si usted tiene la E. coli en sus intestinos. El cultivo tiene que tomarse durante las primeras 48 horas después de que la diarrea con sangre comienza.

Medios de Cultivo Coprocultivo IMVIC = Su resultado es Indol(+), rojo metilo(+), Vogues Proskauer(-),

Citrato(-) Eosine Methylene Blue Agar = Medio diferencial donde E. coli produce un

color verde metálico por la fermentación de lactosa(ácido).

Triple Sugar Iron = Es positivo(amarillo), por lo que se fermenta lactosa(ácido), glucosa/sacarosa y produce gas. Se distingue por no producir H2S.

Prueba de Ureasa = Su resultado es negativo (color amarillo) MacConkey Sorbitol Agar = Medio diferencial que usa para identificar E. coli

(no fermentadora de sorbitol) PCR = Para detectar genes de virulencia

Shigella Sonnei

Shigella es un género bacteriano perteneciente a la familia Enterobacteriaceae, integrado por bacterias de forma bacilar, no esporuladas, inmóviles, pero animados de movimiento pendular (oscilación) in situ.

Shigella Sonnei

Shigella Sonnei

Clasificación científica

Reino: Bacteria

Filo: Proteobacteria

Clase: Gammaproteobacteria

Orden: Enterobacteriales

Familia: Enterobacteriaceae

Género: Shigella

Especie: Sonnei

Nombre binomial

Shigella sonnei

Colonia de E. coli en Agar MacConkey

Colonia de E.coli en Eosine Methylene Blue (EMB)

Pruba positiva de Triple Sugar Iron con E.coli

Son gramnegativos, aerobios-anaerobios facultativos. Citocromo-oxidasa negativos. Fermentan la glucosa sin producción de gas; no obstante, se han encontrado algunos biotipos que producen gas de la glucosa. No decarboxilan la lisina. No fermentan la lactosa. No utilizan el citrato como única fuente de carbono. No crecen en el medio cianuro potásico. Su actividad bioquímica es muy reducida.

PatogeniaLas infecciones con Shigella pueden contraerse por comer alimentos contaminados con aspecto y olor normales. Los alimentos pueden contaminarse por contacto con personas infectadas que los manipulan y se olvidan de lavarse las manos con jabón después de utilizar el baño. Las legumbres pueden contaminarse si se cosechan de un campo en el que hay aguas contaminadas. Las moscas pueden procrear en heces infectadas y luego contaminar los alimentos. Las infecciones con Shigella también pueden adquirirse al beber o bañarse en agua contaminada. El agua puede contaminarse si recibe aguas residuales o si alguien con shigelosis se baña en ella.

La shigelosis es una enfermedad infecciosa ocasionada por un grupo de bacterias llamadas Shigella. La mayoría de las personas infectadas con Shigella contraen diarrea, fiebre y calambres estomacales a partir de un día o dos después de su exposición a la bacteria. La diarrea es a menudo sanguinolenta. La shigelosis se resuelve de ordinario en 5 a 7 días. En algunas personas, especialmente en los niños de corta edad y los ancianos, la diarrea puede ser tan grave que el paciente necesite ser hospitalizado. Una infección aguda con fiebre elevada también puede ir acompañada de ataques o convulsiones en niños menores de 2 años de edad.

Además, Shigella alcanza la submucosa del colon y es capaz de ulcerar esos tejidos, pero sólo produce bacteriemia en casos absolutamente excepcionales. Sin embargo, al causar afectación colónica provoca una reacción inflamatoria intensa con moco y pus, pudiendo formarse úlceras sangrantes, por lo que las deposiciones son de pequeño volumen y pueden ir acompañadas de moco y sangre dando lugar, en conjunto, al cuadro denominado disentería bacilar. S. dysenteriae es la especie que suele producir cuadros clínicos más graves.

Las shigelas tienen como único reservorio al hombre y su dosis infectante mínima es pequeña, lo que permite su transmisión no sólo a través de los alimentos, sino también a través del agua y por contacto directo entre niños en las guarderías. Algunas personas infectadas pueden no tener ningún síntoma pero aún transmitirán la bacteria Shigella a otras. Sin embargo, como todos los microorganismos de transmisión fecal-oral cuyo único reservorio es humano, pueden llegar a erradicarse con medidas de higiene personal y ambiental.

ProfilaxisLas infecciones por Shigella se mantienen como un problema de salud pública en el panorama mundial, asociándose a bajo nivel de vida en países en desarrollo y a grupos de riesgo o personas que viajan desde países industrializados a sitios de endemia.

No hay vacuna para prevenir la shigelosis. Sin embargo, la propagación de Shigella de una persona infectada a otras personas puede detenerse mediante lavado cuidadoso y frecuente de las manos con jabón. Es recomendable utilizar despues del lavado adecuado de las manos, desinfectantes como cloro casero, Lysol* o líquidos bactericidas. Las personas que tienen shigelosis no deberían preparar alimentos o servir agua a otras personas hasta que se ha demostrado que han dejado de ser portadoras de la bacteria Shigella.

Para la industria alimentaria, se pueden adoptar ciertas medidas que previenen esta enfermedad como son el escaldado de los alimentos, ya que el agua tratada o hervida, evita la propagación de la bacteria; además de utilizar frutas y verdudas sin piel para la producción de alimentos procesados. O bien, Disminuir al mínimo el contacto directo de los alimentos con las manos y cocinar los alimentos intensamente y conservar por debajo de 4 ºC.

Medios de Cultivo

Las colonias de Shigella crecen principalmente en el medio de cultivo EMB, MacConkey, ENDO, Helton y SS agar.

Salmonella tiphy

Salmonella son bacterias que, para la mayoría delos serotipos habitan el intestino del hombre y losanimales. Hay algunos serotipos que se encuentranadaptados a una sola especie animal, como por ejemploSalmonella typhi, responsable de la Fiebre Tifoideaque se encuentra solamente en el hombre.

La S. typhi produce ácido a partir de glucosa, maltosa y sorbitol, sin laproducción de gas; pero no fermenta la lactosa, sacarosa, la ramnosa y otros azúcares.Produce nitrito a partir de nitrato y también produce ácido sulfhídrico. Su temperaturaóptima de crecimiento es de 37oC.

Estos bacilos no producen esporas. La mayoría de las cepas son móviles debido

Salmonella tiphy

Salmonella tiphy

Clasificación científica

Reino: Bacteria

Filo: Proteobacteria

Clase: Gammaproteobacteria

Orden: Enterobacteriales

Familia: Enterobacteriaceae

Género: Salmonella

a que poseen flagelos peritricos, que rodean a la célula. Interesantemente, existen cepasno móviles en Indonesia, en donde la incidencia de la fiebre tifoidea es más alta.

Manifestaciones ClínicasEl período de incubación para S. typhi abarca de una semana a un mes, siendoprincipalmente de dos semanas, a partir de la ingesta de la bacteria proveniente dealimentos o agua contaminada. Se presume que S. typhi invade a través de las células Mdel intestino, las cuales forman parte del tejido linfoide o inmunológico. Sin embargo,debido a que no se han podido cultivar las células M en el laboratorio, los experimentosde invasividad de Salmonella se han realizado con células epiteliales y macrófagos, loscuales, además, constituyen otros eslabones en el proceso de invasión.

No siempre ocurre la diarrea, pero generalmente hay ulceración. S. typhi semultiplica en el epitelio de la submucosa, después de lo cual entra el torrente circulatorio y se disemina por el cuerpo. La multiplicación ocurre otra vez en el bazo y en el hígado, para que después la bacteria sea liberada en grandes cantidades al torrente sanguíneo.

Esta septicemia o invasión generalizada puede confirmarse por el cultivo de la bacteriade la sangre, lo cual refleja una bacteremia. Este estadio de la infección, que puede durar 2 a 3 semanas, se caracteriza por una tos seca, fiebre alta, e intenso dolor de cabeza. La fiebre puede ser cíclica, es decir, la temperatura puede incrementarse por las tardes, acompañada de escalofríos, convulsiones y delirio. De hecho, el nombre de la enfermedad proviene del griego typhus, o “neblina o humo”, que probablemente se usó para describir enfermedades febriles que causan alteraciones mentales.

Diagnóstico, tratamiento y prevenciónEl diagnóstico de una infección por S. typhi se realiza a través del aislamientode la bacteria de sangre, heces, orina, aspirado de médula ósea y bilis. Estas pruebastardan dos a tres días en aportar los resultados, pues la muestra se diluye en un medio de cultivo y, dado que se estima que un paciente con fiebre tifoidea presenta, por ejemplo, 20 bacterias o menos por ml de sangre, se requiere esperar a que se multiplique lo suficiente para ser observada por turbidez del medio.

El cultivo de la sangre es el método más frecuentemente usado para un diagnóstico preciso, aunque su sensibilidad no es más del 90%, incluso cuando se toman tres muestras consecutivas. El cultivo de aspirado de médula ósea es más sensible, pero el procedimiento de extracción del aspirado es delicado y doloroso.

Medios de Cultivo

Proteus Mirabilis

Proteus mirabilis es una bacteria Gram-negativa, facultativamente anaeróbico. Muestra aglutinación, motilidad, y actividad ureasa. P. mirabilis causa el 90% de todas las infecciones por 'Proteus'. Viene de la Tribu Proteae.

DiagnósticoUna muestra de orina alcalina es un posible signo de P. mirabilis.

P. mirabilis puede diagnosticarse en el laboratorio debido a su característica motilidad agrupada, e inhabilidad para metabolizar lactosa en el medio agar McConkey , por ejemplo. Y P. mirabilis produce un muy distintivo olor.

Proteus mirabilis

P. mirabilis

Clasificación científica

Reino: Bacteria

Filo: Proteobacteria

Clase: Gamma Proteobacteria

Orden: Enterobacteriales

Familia: Enterobacteriaceae

Género: Proteus

Especie: P. mirabilis

Nombre binomial

Proteus mirabilis

Hauser 1885

Colonia de Salmonella en SS agar

Crecimiento de Salmonella en Hektonen agar

PatogeniaEsta bacteria de colonias redondeadas tiene la habilidad de producir grandes niveles de ureasa. La ureasa hidroliza urea a amoníaco, (NH3) y eso hace a la orina más alcalina. Y al subir la alcalinidad puede liderar la formación de cristales de estruvita, carbonato de calcio, y/o apatita. Esta bacteria puede encontrarse en cálculos, y esas bacterias escondidas allí, pueden reiniciar una infección post tratamientos antibióticos. Al desarrollarse los cálculos, después de un tiempo pueden seguir creciendo más y causar obstrucción dando fallas renales.

Proteus también puede producir infecciones de heridas, septicemia y neumonías, sobre todo en pacientes hospitalizados.

CaracterísticasP. mirabilis puede usar urea y citrato. Puede producir gas de sulfuro de hidrógeno, y formar filmes claros en medios de crecimiento. Es mótil, posee flagelo peritricoso, y es conocido por su habilidad para aglutinarse. Está comúnmente en el tracto intestinal de humanos.

P. mirabilis no es patogénico en cobayos Cavia porcellus o en gallinas.

El microorganismo testea:

Indol negativo y Nitrógeno Reductasa positivo (no produce burbujas de gas) Rojo Metilo positivo y Vogues-Proskauer negativo Catalasa positiva y Citocromo Oxidasa negativa Fenilalanina Deaminasa positiva Ureasa Positiva

TratamientoP. mirabilis es generalmente susceptible a muchos antibióticos

como tetraciclinas, aunque el 10%–20% de las cepas de P. mirabilis son resistentes a las cefalosporinas y ampicilinas de 1ª generación.

Klebsiella pneumoniae

Klebsella pneumoniae es la especie de mayor relevancia clínica dentro del género bacteriano Klebsiella, compuesto por bacterias

Klebsiella pneumoniae

K. pneumoniae en medio Agar

MacConkey en una placa de

Petri.

Clasificación científica

Dominio: Bacteria

Filo: Proteobacteria

Clase: Gammaproteobacteria

Orden: Enterobacteriales

Familia: Enterobacteriaceae

Género: Klebsiella

Especie: K. pneumoniae

Nombre binomial

Klebsiella pneumoniae

(Schroeter 1886)

Trevisan 1887

P.mirabilis en agar macConkey

gramnegativas de la familia Enterobacteriaceae, que desempeñan un importante papel como causa de las enfermedades infecciosas oportunistas. El género fue llamado así en honor a Edwin Klebs, un microbiólogo alemán de finales del siglo XIX.

El bacilo ahora conocido como Klebsiella pneumoniae también fue descrito por Karl Friedländer, y durante muchos años se conoció como el «bacilo de Friedländer».

En la tinción de Gram son negativos; la asimilación y la fermentación de la lactosa se puede observar en el medio Kligler, donde son positivos y desprenden gas; y en la fermentación acetónica o prueba de Voges Proskauer son positivos. Por último, sus condiciones óptimas de cultivo son en agar nutritivo a 37 ºC, ph de 7.0, presión osmótica de 1 atm.

Cuadro Clínico

La Klebsiella pneumoniae, dentro de este género bacteriano, está implicada principalmente en infecciones nosocomiales. Es el agente causal de infecciones del tracto urinario, neumonías, sepsis, infecciones de tejidos blandos, e infecciones de herida quirúrgica. Son especialmente susceptibles los pacientes ingresados en unidades de cuidados intensivos, neonatos, y pacientes con EPOC, diabetes mellitus o alcohólicos. A día de hoy también existe una fuerte teoría que la relaciona con la espondilitis anquilosante1

Causa alrededor del 1% de las neumonías bacterianas y puede causar condensación hemorrágica extensa del pulmón.

Además, en ocasiones provoca infección del aparato urinario y bacteriemia a partir de lesiones focales en pacientes debilitados que puede terminar con la vida del paciente. Algunas de las complicaciones más frecuentes son el absceso pulmonar y el empiema.

También suele encontrarse en las infecciones de la toracotomía para realización de by pass o revascularización coronaria. Suele responder en estos casos al imipenem, 1 g EV cada 6 horas por 21 días + ciprofloxacina, 400 mg EV cada 12 h por 21 días, acompañado todo esto de enérgica cura diaria realizada por el cirujano cardiovascular y colocación de Intrasite Gel (hidrogel de

carboximetilcelulosa) cada 2 o 3 días dentro del lecho de la herida cuando ya no hay más secreción.

Diagnóstico y TratamientoEl diagnóstico comienza a partir de la clínica; en los casos de neumonía, es especialmente útil el estudio radiográfico.

El diagnóstico definitivo lo obtenemos a partir del cultivo de muestras obtenidas de las mucosas del tracto respiratorio superior.

El tratamiento de elección consiste en la asociación de una cefalosporina de tercera generación (cefotaxima, ceftriaxona) y un aminoglucósido (gentamicina).

Klebsiella pneumoniae en agar macConkey