Bacteriologa de camaronesDr. Bruno Gmez-GilLaboratorio de Bacteriologa02/09/2005 1

Contenido Vibriosis Toma de muestras Anlisis bacteriolgico de organismos Determinacin de susceptibilidad a antibiticos Tratamiento / antibiticos

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Bacteria Organismo unicelular Procarionte Capz de replicarse autnomamente Varios tipos de alimentacin Se puede matar o al menos controlar con antibiticos02/09/2005 3

VibriosisDefinicin general:

Infeccin causada por bacterias del gnero VibrioLas infecciones por vibrios son quiz las enfermedades mas comunes en la camaronicultura, debido a que estas bacterias son habitantes naturales del ambiente estuarino-marino.02/09/2005 4

Tipos de infecciones bacterianasLightner (1993) Puntos localizados en la cutcula, black-spot. Infecciones localizdas en el tracto digestivo, hepatopncreas o heridas Septicemia generalizadas (vibriosis, Syndrome Gaviota) Turnbull, et al. 1995 Vibriosis aguda localizada o sistmica. Vibriosis crnica localizada o sistmica.

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Vibriosis en la larvicultura Vibrios luminiscentes: V. harveyi y V. splendidus. Larvas con colonizacin masiva en apndices y, al principio en el tracto digestivo anterior, posteriormente avanza hacia el resto del tracto. Bolitas blancas. Es comn encontrar las mismas especies en las tomas de agua de mar. Rpida resistencia a antibiticos.

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Necrosis en larvas y postlarvas

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Fotos: Lightner D.V. 1996 y Chanratchakool et al. 1995.Health management in shrimp ponds. 7

Bacteriosis en la regin oral de una postlarva

Fotos: SEMARNAP 1999. Atlas de enfermedades de peneidos. 02/09/2005 8

Enfermedad de las Bolitas

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Fotos: Marisol Morales, CIAD y SEMARNAP 1999. Atlas de enfermedades de peneidos. 9

Vibriosis en la engorda Vibrios verdes en TCBS: V. parahaemolyticus, V. vulnificus y V. harveyi. Adems V. penaeicida. Nado errtico, en las orillas; letargia; anorexia; coloracin del HP alterada, colonizado por epibiontes; cromatforos expandidos (apndices rojos); melanizaciones. Altos niveles de bacterias en HL (>1000 cel/ml) y en HP (>1 milln/g); alto porcentaje de colonias verdes y/o verdes luminiscentes en agar TCBS. Necrosis multifocal, inflamacin hemoctica, formacin de ndulos en el rgano linfoide, corazn y branquias, etc. Ndulos con bacterias en su interior.02/09/2005 10

Camarn manchado (black spot)

Foto: Lightner D.V. 1996. 02/09/2005 11

Astilla negra (black splinter)

Fotos: SEMARNAP 1999. Atlas de enfermedades de peneidos. 02/09/2005 12

Bacterias en el tejido

Fotos: Chanratchakool et al. 1995.Health management in shrimp ponds.. 02/09/2005 13

Ndulos hemocticos

Fotos: Marisol Morales, CIAD. 02/09/2005 14

VibriosisIngestin Astilla negra Manchas en exoesqueleto

Vibrios en tejido interno

Muda (recuperacin) Muerte02/09/2005

Septicemia15

Vibriosis NO es presencia de bacterias en la hemolinfa y/o rganos internos del camarn.

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Tipos y especies de Vibrio potencialmente patgenas en agar TCBS

La forma y el color de las colonias NO sirve para identificacin Color de la colonia en TCBSVerdes Verdes luminiscentes Amarillas Sin crecimiento en TCBS

Especie de VibrioV. vulnificus, V. parahaemolyticus V. harveyi (larvas), V. parahaemolyticus V. alginolyticus, V. parahaemolyticus (10%) V. peneicida.

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Especies de Vibrio60

6050 40

47 39 43 34

30 20

2010 0

198302/09/2005

1991

1996

1998

2002

200318

Patogenicidad de Vibrioun grupo de bacterias (aislados) que tienen caractersticas en comn y diferentes a otras cepas, pero pertenecientes a la misma especie por compartir caracteres en comn

NO hay especies patgenas! SI hay cepas patgenas Esta mediada por factores ambientales (salinidad, temperatura) Oportunistas y probablemente patgenos primarios (V. penaeicida)02/09/2005 19

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Toma de Muestras para Anlisis Bacteriolgico de Camarones

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MuestreoDefinicin: Proceso de seleccionar un grupo de una poblacin. Los individuos de este grupo se examinan y los resultados son usados para estimar las caracteristicas de la poblacin que queremos trabajar.

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Tipos de muestreoMONITOREOMuestreo al azar Unica manera de obtener una muestra representativa de una poblacin. Tabla de Muestreo al Azar o bien, un Generador Automtico de Nmeros al Azar.

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Tipos de muestreo (cont.)MUESTREO CON PROPOSITODiagnosticar a los animales. Se seleccionan animales que presenten sntomas de enfermedad, ya sea por comportamiento (no se mueven, no comen, estn en la superficie) o por su aspecto fsico (mala coloracin, apndices ausentes o incompletos, manchas etc).

Es importante llevar algunos animales considerados como sanos.02/09/2005 24

Muestreo de organismosSe deben enviar muestras de al menos 10 animales juveniles o adultos con seales claras de enfermedad y de preferencia igual nmero de animales sanos. Estos deben estar vivos al momento de tomar la muestra. Los animales deben ser enviados en una hielera con agua del estanque enfriada con hielo por afuera de la bolsa. En el caso de larvas y postlarvas, enviar al menos 50 organismos.

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Metodologa para el Anlisis Bacteriolgico de camarones penidos.

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ObjetivoTomar e interpretar resultados de muestras de camarones para anlisis bacteriolgico.

Cuantificar la cantidad y el tipo de bacterias que se encuentran en la hemolinfa y en el hepatopncreas del camarn; o bin en las larvas y postlarvas.2 1

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Toma de decisinObservaciones en granja Vibriosis ? Anlisis bacteriolgico No Si

Anlisis de susceptibilidad a antibiticos

Tratamiento

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Opciones de anlisiscamarones juveniles y adultos

Monitoreo: pool de hemolinfa Diagnstico: analizar cinco camarones, hepatopncreas y hemolinfa de cada uno

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diferencias entre los mtodos POOL HEMOLINFA cualitativo valores enmascarados rpido menos costoso monitoreo de la poblacin CONTEO INDIVIDUAL cuantitativo (UFC/ml o gr) valores reales lento ms costoso diagnstico

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Anlisis de larvas y postlarvas Analizar individual o por lotes Se usan dos medio de cultivo, TCBS para vibrios y agar marino para hetertrofas totales. Cuantitativo(UFC/larva o gr)

Rpido y no muy costoso

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ReportarReportar Unidades Formadoras de Colonias (UFC) por ml, gr o larva. Anotar porcentaje de colonias verdes en agar TCBS. Indicar presencia de colonias luminiscentes (verdes luminiscentes, potencialmente patgenas). Anotar porcentaje de vibrios (slo si se sembr en agar marino y TCBS). Tiempo de coagulacin de la hemolinfa.

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Interpretacin de resultados de crecimiento bacteriano en agar TCBS (vibrios)Juveniles y adultosTipos de UFCs Vib. Lum 100% Ver. >50% Ver. 103 grave serio elevadoserio elevado 105 grave serio 50% Ver. 103 grave serio elevado / grave elevado 105 severo 104-103: elevado