metode klasične i molekularne citogenetike
TRANSCRIPT
![Page 1: metode klasične i molekularne citogenetike](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022052203/588f0b011a28ab835b8bccee/html5/thumbnails/1.jpg)
LABORATORIJ ZA CITOGENETIKU
ZAVOD ZA BIOLOGIJU I MEDICINSKU GENETIKUMEDICINSKI FAKULTETSVEUČILIŠTE U RIJECI
Prof.dr.sc.Bojana Brajenović-Milić
![Page 2: metode klasične i molekularne citogenetike](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022052203/588f0b011a28ab835b8bccee/html5/thumbnails/2.jpg)
DIJAGNOSTIKA NASLJEDNIH BOLESTI NA RAZINI KROMOSOMA
KARIOTIP ČOVJEKA
•46 kromosoma
•22 para autosoma
•1 par gonosoma
žene XX
muškarci XY
![Page 3: metode klasične i molekularne citogenetike](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022052203/588f0b011a28ab835b8bccee/html5/thumbnails/3.jpg)
METODE IZRADE KROMOSOMSKIH PREPARATA
DIREKTNA METODA:KOŠTANA SRŽ
KORION FRONDOZUM
INDIREKTNA METODA:
KRATKOTRAJNA STANIČNA KULTURA (KRV)
DUGOTRAJNA STANIČNA KULTURA (STANICE PLODOVE VODE, STANICE KOŽE)
![Page 4: metode klasične i molekularne citogenetike](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022052203/588f0b011a28ab835b8bccee/html5/thumbnails/4.jpg)
KRATKOTRAJNA STANIČNA KULTURA
1. UZIMANJE KRVI (KRV + HEPARIN)2. DODAVANJE FITOHEMAGLUTININA I KULTIVIRANJE (72h /37°C)3. PREKIDANJE KULTURE CITOSTATIKOM KOLHICINOM 4. OBRADA KULTURE:-HIPOTONIJA (KCl)-FIKSACIJA (OCTENA KIS.+METANOL)-ISKAPAVANJE
5. BOJANJE KROMOSOMA:-RUTINSKO (GIMZA BOJOM)-OPRUGAVANJE KROMOSOMA (G, R, C, Q-PRUGE)
![Page 5: metode klasične i molekularne citogenetike](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022052203/588f0b011a28ab835b8bccee/html5/thumbnails/5.jpg)
METODE KLASIČNE CITOGENETIKE
G-pruge R-pruge
![Page 6: metode klasične i molekularne citogenetike](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022052203/588f0b011a28ab835b8bccee/html5/thumbnails/6.jpg)
IDEOGRAM
Primjer opisa pruge: p22.1
• centromera
• p kratki krak
• q dugi krak
• pruge
![Page 7: metode klasične i molekularne citogenetike](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022052203/588f0b011a28ab835b8bccee/html5/thumbnails/7.jpg)
METODE MOLEKULARNE CITOGENETIKEFLUORESCENTNA IN SITU HIBRIDIZACIJA
(engl. Fluorescence in situ Hybridization)
In situ hibridizacija (ISH) objedinjuje citogenetičke i molekularno genetičke tehnike• princip: interakcija obilježene DNA ili RNA probe s komplementarnom jednolančanom
(ciljnom) DNA sekvencom• ciljna DNA : metafazni kromosomi ili interfazna jezgra• svrha: identifikacija numeričkih i strukturnih aberacija kromosoma• područje: klinička citogenetika, citogenetika tumora (mikrodelecije i mikroduplikacije),
mapiranje gena i evolucija kariotipa
DNA probe mogu biti za:• cijeli kromosom ili krak kromosoma (whole chromosomal paint probes -WCP)• centromere (centromere specific probes) visoko repetitivna DNA, npr. Alfa satelitne probe• mala područja eukromatina (single copy ili unique sequence probes) detekcija
mikrodelecijskih sindroma• telomerne (subtelomerne ) probe: detekcija skriveneih delecija i translokacija telomera
(subtelomerne probe)
![Page 8: metode klasične i molekularne citogenetike](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022052203/588f0b011a28ab835b8bccee/html5/thumbnails/8.jpg)
INTERFAZNI FISH
Probe za kromosome 13, 18, 21, X i Y
13 – zeleno 21 – crveno 18 – plavo X – zeleno Y - crveno
![Page 9: metode klasične i molekularne citogenetike](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022052203/588f0b011a28ab835b8bccee/html5/thumbnails/9.jpg)
Mikrodelecija u području elastin gena na kromosomu broj 7 (sindrom Wiliams)
Kontrolna proba za kromosom 7 (zeleno); proba za mikrodeleciju (crveno)
Kariotip: 46,XX.ish.del(7)(q11.23q11.23)(D7S486-,D7S522+)
METAFAZNI FISH
![Page 10: metode klasične i molekularne citogenetike](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022052203/588f0b011a28ab835b8bccee/html5/thumbnails/10.jpg)
METAFAZNI FISH
Telomerna proba za 19q
![Page 11: metode klasične i molekularne citogenetike](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022052203/588f0b011a28ab835b8bccee/html5/thumbnails/11.jpg)
VIŠEBOJNA KARIOTIPIZACIJAMULTIPLEX-FISH (m-FISH)
• istovremena vizualizacija svih metafaznih kromosoma u različitim bojama
• temelji se na simultanoj hibridizaciji 24 kromosom specifičnih proba obilježenim različitim fluorokromima ili kombinacijama fluorokroma
• omogućava identifikaciju:marker kromosomajednostavnih i složenih krom. Preuređenja
• nedostatak: mikrodelecije i duplikacije se ne detektiraju
![Page 12: metode klasične i molekularne citogenetike](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022052203/588f0b011a28ab835b8bccee/html5/thumbnails/12.jpg)
Primjer balansirane translokacije između 19q;21p
m-FISH
![Page 13: metode klasične i molekularne citogenetike](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022052203/588f0b011a28ab835b8bccee/html5/thumbnails/13.jpg)
Primjer dokazivanja kromosomskog podrijetla marker kromosoma višebojnom FISH metodom