metodos de siembra para transporte y to de
TRANSCRIPT
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
1/38
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
2/38
TCNICA DE AISLAMIENTO
Las tcnicas de aislamiento, permiten la
obtencin de microorganismos a partir de
muestras complejas (suelo, agua, humanas,etc.) en las que hay una gran diversidad de
microbiana, as como para comprobar la
pureza de los cultivos obtenidos, los cuales
son indispensables para conocer bioqumica,patogenicidad, sensibilidad a antibiticos e
identificacin de especie microbianas
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
3/38
MEDIOS DE CULTIVO
Las bacterias deben ser cultivadas en mediosde cultivo de laboratorio para caracterizar sucrecimiento, hacer su identificacin ydeterminar sus actividades metablicas.
Entonces, podemos decir que un medio decultivo es una solucin acuosa de diferentes
compuestos y en diferentes estados quecontiene todos los elementos indispensablesque requieren los microorganismos paracrecer.
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
4/38
MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD En Microbiologa, todas las manipulaciones deben ser llevadas
a cabo de modo que se impida cualquier tipo decontaminacin en el rea de trabajo.
Se aconseja que la siembra de todas las muestras a los medios
de cultivos se realice bajo la luz de un mechero, una cabina deflujo de aire laminar , en un gabinete de seguridad.
Las muestras procesadas se las debe considerar comopotencialmente infecciosas y manipularlos adecuadamente.
Tambin se deben utilizar guantes de goma o latex biolgicos La mesa de trabajo debe estar equipada con todos los
materiales necesarios para efectuar las siembras, tambin sedebe contar con todos los medios de cultivos necesarios pararealizar las siembras.
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
5/38
Personal de Laboratorio de Microbiologa
Cabina de Flujo laminar
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
6/38
MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD
Las asas deben esterilizarse antes y despus de utilizarlas,deben enfriarse sobre el agar o el material de vidrio (enzonas estriles) antes de tomar la muestra de
microorganismos, con objeto de no destruirlos por calor.
Las bocas de los tubos y matraces de vidrio se flameanligeramente una vez destapadas, antes y despus de la
inoculacin.
Durante la inoculacin, los tapones se mantienen en la mano
sujetndolos por la parte que no entra en contacto con tubosy matraces.
Los tubos abiertos deben mantenerse en posicin inclinadahacia el frente para que el riesgo de contaminacin sea
mnimo.
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
7/38
Siembra de microorganismos
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
8/38
DIRECTIVAS PARA TRANSPORTE YALMACENAMIENTO DE CULTIVOS1. Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio
de cultivo artificial debe reunir una serie de condicionescomo son: temperatura, grado de humedad y presin de
oxgeno adecuado, as como un grado correcto de acidez o
alcalinidad entre otras medidas.
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
9/38
3. Seleccione el tipo anatmico correcto donde se obtendr elespcimen, y utilice la tcnica apropiada y los instrumentoso elementos adecuados para su obtencin.
Toma de muestra, adecuada
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
10/38
4. Adjunte en el formulario cualquiera informacin de inters,tales como si el paciente es inmunosuprimido o si
recibe drogas inmunosupresoras, si recibe antibiticos,diagnstico presuntivo, inters en algn germen, etc.
Ejemplo de formulario
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
11/38
5. Cuando se va a proceder a tomar un espcimen clnico, esimportante evitar la contaminacin con microorganismos
saprfitos del rea. Esta flora normal puede interferir conla interpretacin del cultivo y enmascarar la presencia delverdadero agente etiolgico de la enfermedad.
Transporte de Helicobacter Pylori
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
12/38
6. En el transporte y almacenamiento de bacterias que ejerzan
una fuerte descomposicin de la materia orgnica, la fase decrecimiento exponencial ser la de inters, ya que en estafase es en la que se produce la mayor tasa dedescomposicin y por tanto un aumento en el ndice dedisminucin de nutrientes. Para mantener el cultivo en esta
fase se tendr que vigilar los parmetros ms importantes
que influyen a las bacterias: pH, temperatura, disponibilidadde nutrientes, presencia o ausencia de oxgeno
El grfico siguiente representa la variacin de labiomasa (o nmero de clulas, etc.) de un cultivoa lo largo del tiempo. En este cultivo, se vaconsumiendo un substrato cuya concentracindecrece de forma proporcional al crecimiento de
la biomasa.
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
13/38
7. El desarrollo de la biomasa est estrechamente ligado alintervalo de temperaturas para el que un organismo
desarrolle sus funciones metablicas. Dentro de esteintervalo existe una temperatura ptima a la que la actividadmetablica, y por tanto, el consumo de sustrato y el
desarrollo de biomasa ser mximo. Si se considera queestamos por debajo de la temperatura ptima (a la
temperatura de referencia u operacin), el aumento detemperatura provocar un aumento en la velocidad decrecimiento bacteriano definido por la ecuacin
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
14/38
Bacterias mnima ptima mxima
Listeria monocytogenes 1 30-37 45
Pseudomonas maltophila 4 35 41
Escherichia coli 10 37 45
Clostridium kluyveri 19 35 37
Bacillus flavothermus 30 60 72
Thermus a uaticus 40 70-72 79
Sulfolobus acidocaldarius 70 75-85 90
Pyrobacterium brockii 80 102-105 115
Temperaturas optimas para el desarrollo de determinadas bacterias
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
15/38
8. La presencia de oxigeno ser determinante para
lograr un crecimiento de una colonia bacteriana,la cual esta en funcin al tipo de metabolismoque realice dicha bacteria y podemos distinguir 3
tipos: anaerobia, aerobia, microaerfilas.
Micobacterium tuberculosis Clostridium perfringens
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
16/38
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
17/38
MTODOS DE SIEMBRA
Son una forma de aislar poblaciones
microbianas, pueden realizarse por mtodos dedilucin, en medios slidos por estra y
dispersin (cesped) en placa o en medios
lquidos.
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
18/38
Recordar:
Antes de sembrar en un medio, debemos
asegurarnos que la superficie permanezca seca,lo cual se logra con un reposo de por lo menos 2
horas o colocndolo con la tapa entre abierta enla estufa por 15 min a 35C.
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
19/38
METODO DE PLACA INVERTIDA
(DILUSIN)
Objetivo: Este mtodo se emplea para aislar
poblaciones bacterianas lo cual dar origen auna colonia caracterstica visible a simple vista,
se realiza a partir muestras puras y permiten
obtener datos cualitativos y cuantitativos.
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
20/38
Procedimiento:
Se siembran 1ml de dilucin en placas petri conunos 20ml de agar nutritivo como medio de
cultivo, como a continuacin se indica:
1- Aadir a cada placa petri 1ml de la dilucincorrespondiente.
2- Aadir despus unos 20ml de agar nutritivo.
3- Agitar suavemente la placa para repartir ladilucin y dejar reposar para que el agar
nutritivo solidifique.
4- Invertir la placa y llevar a incubacin.
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
21/38
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
22/38
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
23/38
MTODO DE ESTRIADO
Objetivo: El objetivo de este tipo de siembra
es aislar colonias de bacterias y observar
caracteristicas externas (color, forma,apariencia, etc) de las colonias bacterianas.
Consiste en diseminar la muestra en forma de
zig-zag sobre la superficie del agar, es un
mtodo comn y se puede realizar endistintas formas.
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
24/38
Procedimiento:
1. Preparar los medios de cultivos solidos en placaso tubos y dejarlos enfriar.
2. Esterilizar el asa de siembra y tomar una
pequea muestra e inocularla en la superficie
del medio de cultivo
3. Realizar un movimiento horizontal de un lado a
otro en zig-zag cuidando de no tocar las orillas.
4. Se puede realizar de distintas formas y en lasproporciones deseadas.
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
25/38
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
26/38
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
27/38
MTODO TIPO CESPED
Objetivos:
Determinar la sensibilidad a diversos antibiticos
de un determinado microorganismo Comprender el concepto de antibitico y su
especificidad de accin sobre determinadasbacterias.
Conocer el concepto de cepa sensible yresistente.
Entender el concepto de halo de inhibicin
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
28/38
Procedimiento:1. Tomamos con una jeringa una pequea cantidad de suero fisiolgico
estril (2-5 ml) y lo vertemos en un tubo de ensayo.
2. A partir de la placa problema, que contiene colonias delmicroorganismo cuya sensibilidad a los antibiticos queremosdeterminar, tomamos una muestra SUPERFICIAL de UNA SOLACOLONIA con un asa de siembra.
3. Introducimos el asa de siembra con la muestra en el tubo y agitamosel asa para realizar una suspensin de las bacterias en el suerofisiolgico. Al acabar echamos al contenedor de residuos el asa desiembra.
4. Introducimos una torunda estril en el tubo y se pasa muy
suavemente por la superficie de una placa agar-sangre nueva. Enesta ocasin realizaremos una siembra en csped, es decir, por toda lasuperficie de la placa, para conseguir que crezca bacterias de modomasivo (no interesa aislar bacterias). Es importante que la siembra seaSUPERFICIAL, sin profundizar en el medio de cultivo.
5. Se tapa la placa y se rotula indicando en el nombre, grupo y fecha ymarcando con una A la ta a (antibio rama)
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
29/38
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
30/38
Colocacin de los discos de antibitico
1. Tomamos ahora con las pinzas NUNCA CON LAS MANOS-
un disco de cada uno de los antibiticos que se facilitan (cadadisco es un papel de filtro que contiene una suspensin de unoo varios antibiticos a la concentracin teraputica).
2. Se deposita el disco suavemente sobre la placa, sin tocar conla superficie con las pinzas. Es muy importante que el discocontacte con el medio de cultivo en un nico sitio.
3. Realizamos la misma operacin con los otros cincoantibiticos, colocando los nuevos discos separados de losanteriores, formando un hexgono.
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
31/38
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
32/38
Incubacin y observacinSe llevan las placas a incubar a 37C (temperaturacorporal), durante 24 horas. Tras este perodo serecogen las placas y SIN ABRIR se observa el
crecimiento bacteriano. Medicin del halo de inhibicin
Por la parte trasera de la placa incubada mediremosel dimetro de los halos de inhibicin que se han
formado alrededor de los discos de antibitico a losque la bacteria problema es sensible.
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
33/38
Qu son los halos de inhibicin?
Alrededor de cada disco de antibitico, las bacterias sensibles aese antibitico no habrn podido reproducirse y, por lo tanto,no forman colonias, dejando un hueco alrededor del disco.
Por qu se miden los halos?
No basta con ver si las bacterias han crecido o no alrededor delantibitico para saber si son o no sensibles. Hay que sabercunto no han crecido. Solo si el halo de inhibicin essuficientemente grande, usando el antibitico a laconcentracin teraputica la que el antibitico puede alcanzaren el lugar de la infeccin sin que se produzcan efectos txicoso secundarios- se dice que la bacteria es sensible al antibitico.Por eso se mide el efecto y se consultan las tablas.
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
34/38
Patrones estndar del halo de inhibicin para Pseudomonas aeruginosa y Acinetobacter spp.a ,puntos de corte equivalentes a la CMI y dimetro del halo de inhibicin para la cepa Pseudomonas
aeruginosa ATCC 27853 empleada como control de calidad
GRUPO AntimicrobianoCarga
deldisco(g)
Dimetro del halo deinhibicin (mm)
Punto de corte
Equivalente a laCMI(g/ml)
Resistente
Intermedia
Sensible Resistente Sensible
A Mezlocilina b Pseusomonasspp
75 21 >128 128 128 128 128 8 32/16 128/2
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
35/38
BACTERIAS AEROBIASSe denominan bacterias aerobios o aerbicos a los organismos quenecesitan del oxgeno diatmico para vivir o poder desarrollarse. El adjetivo"aerobio" se aplica no slo a organismos sino tambin a los procesosimplicados ("metabolismo aerobio") y a los ambientes donde se realizan. Un"ambiente aerobio" es aquel rico en oxgeno, a diferencia de uno anaerobio,donde el oxgeno est ausente, o uno microaeroflico, donde el oxgeno seencuentra a muy baja concentracin.
El metabolismo aerobio (respiracin) surgi en la evolucin despus de quela fotosntesis oxignica, la forma ms comn de fotosntesis, liber ala atmsfera oxgeno, el cual haba sido muy escaso hasta entonces.Inicialmente represent una forma de contrarrestar la toxicidad del oxgeno,ms que una manera de aprovecharlo. Como la oxidacin de la glucosa yotras sustancias libera mucha ms energa que su utilizacin anaerobia porejemplo, la fermentacin, los seres aerobios pronto se convirtieron en losorganismos dominantes en laTierra.
Un buen ejemplo podra ser la oxidacin de la glucosa (un monosacridos) enla respiracin aerbica
C6H12O6 + 6 O2 -> 6 CO2 + 6 H2O + 38 ATP
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
36/38
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
37/38
Bacterias
GENEROS GRUPOSMEDIOS DE
CULTIVODESCRIPCION ENFERMEDAD
A
NAE
R
O
B
IA
CLOSTRIDIUM C. BOTULINUM
caldo peptona-
levaduraagar yema de
huev35oCdurante 48
horas
G (+), familia Bacillaceae,
esporulados, anaerobiosbotulismo
Calymmatobacte
riumC. granulomatis Bacilos cortos, pleomrficos
produce
donovanosis ogranuloma
inguinal venreo.
Salmonella S. typhyAgarDesoxicolato
yCitrato
Patgenos del hombre y
animalesfiebre tifoidea
AE
R
O
B
I
A
Brucella B. abortus
Agar sangre
Agar triptosa
suero
cocobacilos, Gram negativos,
aerobios
Brucelosis
infeccin
placentaria y
abortos
Neisseriaceae N. meningitidis Agar sangreCocos individuales o en
pares, aerobiosmeningitis
PSEUDOMONA Ps. aeruginosaagar eosina-azul
de metileno (EMB)
Mviles por uno o varios
flagelos polares, aerobios
puede ocasionar
infecciones
urinarias, otitis,
septicemia.
-
8/8/2019 Metodos de Siembra Para Transporte y to De
38/38