micro recuento
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Recuento de bacterias en el aguaTRANSCRIPT
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TÉCNICAS PARA EL RECUENTO DE BACTERIASResultados
Muestra de agua de la red
24 horas de incubación
Presencia de bacterias mesofílicas aerobias
Medio:Caldo nutritivo
Prueba presuntiva de coliformes
Medio: caldo lactosado sin inhibidores
Positiva: hay presencia de bacterias
mesofílicas
Caja no contable: presencia de más de 250
colonias de bacterias en la muestra de
agua
Valor fuera de rango
Positiva: Hay turbidez y presencia de gas
en cada uno de los tubos, aunque la
proporción de gas es diferente en cada
uno.
En el tubo 1 marcado con SSG se presentó
muy poca cantidad de gas, solo unas
burbujas pequeñas
En el tubo 2 se presentó una cantidad de
gas casi igual a la del tubo 1
En el tubo 3 hubo una cantidad de gas
mucho mayor
Valor fuera de rango
Valores de referencia según la NOM-127-SSA1-1994
Límite máximo permisible de bacterias
mesofílicas aerobias:
Límite máximo permisible de coliformes
fecales:
CERO UFC/ mL
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Debido a que se trataba de una caja no contable se utilizó el siguiente método:Promedio de las colonias presentes en 10 cuadros de 1cm2
Sacando el número total de colonias en toda la placa
60+100+97+90+79+77+68+72+67+56=766 76610
=76.6 76.6 X 56 = 4289.6
Resultado: 4289.6 UFC/mL
Unidades formadoras de colonias, 4289.6 colonias UFC/mL, de bacterias aerobias en placa agar para cuenta estándar, incubadas 24 horas a 45 ºC.
Muestra de agua de la red
48 horas de incubación
Presencia de bacterias mesofílicas aerobias
Medio: caldo nutritivo
Prueba confirmativa de coliformes
Medio: bilis-verde brillante
Positiva: Hay presencia de bacterias
mesofílicas
Caja no contable: presencia de más
de 250 colonias de bacterias
Después de 24 horas más de
incubación se incrementó el número
Positiva para coliformes: Presencia de
gas en los tubos.
El gas difiere en cantidad de tubo a tubo.
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de colonias de bacterias mesofílicas
Valores de referencia según la NOM-127-SSA1-1994
Límite máximo permisible de bacterias
mesofílicas aerobias:
Límite máximo permisible de coliformes
fecales:
CERO UFC/ mL
Debido a que se trataba de una caja no contable se utilizó el siguiente método:Promedio de las colonias presentes en 10 cuadros de 1cm2 Sacando el número
total de colonias en toda la placa
103+96+97+100+112+120+99+132+110+94=1063 106310
=106.3106.3 X 56 = 5952.8
Resultado: 5952.8 UFC/mL
Unidades formadoras de colonias, 5952.8 colonias UFC/mL, de bacterias aerobias en placa agar para cuenta estándar, incubadas 48 horas a 45 ºC.
Número de UFC encontradas en las placas sembradas en las diferentes
diluciones:
No se hizo dilución alguna debido a que las condiciones en que se obtuvo la
muestra teóricamente indican que la cantidad de bacterias a obtener es menor de
100 bacterias mesofílicas por mililitro de agua, dicho esto se esperaría que la
placa fuera contable. Sin embargo, después de las primeras 24 horas de
incubación se encontró una cantidad de bacterias mesofílicas fuera de rango,
superando la cantidad de bacterias permitidas en la NOM
Placa representativa y número de dilución:
La placa obtenida a las 24 horas de incubación
Número de UFC/mL presente en la muestra:
Para cuantificar la cantidad de bacterias presentes en la muestra se utlizó el
método siguiente:
60+100+97+90+79+77+68+72+67+56= 766/10=76.6 X 56 = 4289.6 colonias
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Evaluación a cerca de la muestra de agua:Dado que las unidades formadoras de colonias se encuentran por encima del
rango establecido en la NOM-127-SSA1-1994 se puede ver que la calidad del
agua no es la mejor, lo cual nos puede indicar que el agua pudo contaminarse a
través de una conexión cruzada, por una rotura de las tuberías del sistema de
distribución o por conexiones y reservorios domiciliarios defectuosos, además de
ausencia o irregular mantenimiento de dichas instalaciones facilitando el ingreso y
proliferación de microorganismos. Sin embargo esto también nos indica que
existen factores secundarios que permiten el crecimiento de microorganismos en
el agua dentro de los sistemas de distribución y almacenamiento, ya que las
bacterias normalmente tenderían a morir en el agua ya que no hay una fuente de
nitrógeno ni de carbono en el agua, en pocas palabras reflejan la exposición de la
muestra a la contaminación en general.
Sin embargo, la presencia de coliformes fecales, nos dice que hay una fuente de
contaminación reciente y que la eficacia del tratamiento del agua no es bueno.
Cabe destacar que algunas coliformes se encuentran en grandes cantidades en el
ambiente y no están asociadas necesariamente con la contaminación fecal y no
plantean ni representan un riesgo evidente para la salud. La presencia de
coliformes fecales nos dice que tenemos un agua orgánicamente enriquecida por
ejemplo debido a un entrecruzamiento con efluentes industriales o de materias
vegetales y suelos en descoposicición.
Debido a esto se puede pensar que debido a la forma en la que fue tomada la
muestra (directamente de donde cae el agua para llenar la cisterna) las tuberías
que abastecen el agua se encuentran en condiciones ideales para la entrada y
proliferación de microorganismos y que probablemente la fuente de
contamionación de coliformes se encuentre en el sistema de tuberías pudiendo
provenir del entrecruzamiento con efluentes industriales o de un agujero que
permita la entrada de microorganimos y que toda la colonia o toda la sección que
es abastecida tenga agua de poca calidad que realmente no se puede considerar
potable.
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Observaciones Para tomar la muestra es necesario tomarla directamente de donde se
abastece y no hablar para evitar la contaminación de la muestra, así mismo
es importante que la bolsa o recipiente en el que se guarde la muestra se
encuentre libre de contaminantes.
Antes de hacer el vaciado en placa se debe agitar 25 veces en un ángulo
de 30 cm aproximadamente
Se desinfectó la mesa antes de trabajar con la muestra para evitar en lo
posible la contaminación de la placa debido al polvo u otros factores
externos.
Se aplicó en método de trabajo establecido en la NMX-F-286 haciendo girar
la placa 6 veces a la izquierda, 6 veces a la derecha, 6 veces hacia arriba y
6 veces hacia los lados sobre una superficie lisa y horizontal hasta lograr
una completa incorporación del inoculo en el medio, cuidando que el medio
no mojara la cubierta de las cajas. Dejándolo solidificar posteriormente.
Para llevar a cabo el procedimiento para verificar la presencia de coliformes
se llevan a cabo tres pruebas.
La presuntiva
La confirmativa
La completa
Aunque se pensó que se obtendría una caja contable debido a los limites
de coliformes y bacterias mesofílicas presentes en el agua que establece la
NOM-127-SSA1-1994, la calidad del agua era poca por lo que la placa se
volvió no contable
Cuestionario1.- Investiga las técnicas que existen para el conteo total de microorganismos e
indica su fundamento.
Contaje en placa Consiste en el plaqueo de una muestra de volumen conocido del
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alimento que se analiza. El resultado es función de una serie de factores
como son el método de muestreo, el tipo de microorganismo, el tipo de
alimento y las características del medio de cultivo. Los cultivos pueden
hacerse tanto en masa como en superficie, aunque hay que considerar
que los cultivos en masa son letales para la flora psicotrofa. Cada
bacteria viable formará una colonia, el plaqueo puede hacerse en una
placa normal o por medio de un plaqueador en espiral que va
depositando concentraciones progresivamente más diluídas de la
muestra
Filtros de
membrana
utilizados cuando el número de bacterias es bajo. Son filtros con un poro
de 0,45 mm que retienen las bacterias. Se filtra un volumen dado y se
coloca el filtro sobre una placa del medio de cultivo apropiado. La
muestra puede haber sido procesada para epifluorescencia
previamente, lo que facilita el recuento (la epifluorescencia se puede
provocar con naranja de acridina que tiñe específicamente los ácidos
nucleicos).
Microcolonias en
DEFT
DEFT son las iniciales en ingñlés de Direct Epifluorescence Filter
Technique (técnica deepifluorescencia directa en filtro). En esta técnica
las bacterias se filtran para retenerlas en una membrana apropiada que
posteriormente se trata con un agente fluorescente (como la naranja de
acridina) para teñir las células bacterianas (se somete el filtrado a un
tratamiento previo con detergentes para destruir las células somáticas).
La detección de los microorganismos ha de hacerse mediante
microscopía de fluorescencia o por cualquier otro método de medida de
la epifluorescencia. En ciertos casos, las membranas se incuban para
producir colonias que son más fácilmente dtectables.
Contaje de
microcolonias al
microscopio
Se añade un pequeño volumen de agar-cultivo a un porta y se incuba
para seguir la formación de microcolonias al microscopio.
Gotitas de agar
Se hacen diluciones de la muestra (solución madre) y se depositan
gotitas de 10 ml en una placa Petri (gotitas de cultivo + agar). Se
examina el crecimiento de las colonias en las gotitas tras la incubación
Films secos
(petrifilm)
Son películas deshidratadas de medios de cultivos generales o
selectivos en las que se deposita 1 ml de la muestra que rehidrata el
medio. Tras la incubación se hace el recuento
Método del número Basado en series de diluciones y cálculo estadístico del número de
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más probablebacterias presentes en las diluciones más altas. Se puede hacer con 3 ó
5 tubos. El método es popular aunque poco exácto.
Métodos basados
en la reducción de
colorante
Usando azul de metileno o resazurina. Colorantes reducidos por las
bacterias; al reducirse cambian de color y esto es medible. Usado en
medios líquidos (lácteos).
Tubos rodantesson tubos herméticamente cerrados en los que haciéndolos girar se
forma una fina capa de agua. Útiles para recuento de anaerobios
Contaje
microscopio directo
Usando cámaras de cuenta, se coloca un volumen determinado y se
recuentan las bacterias.
2.- ¿Qué ventajas e inconvenientes presenta el método utilizado en la práctica?
Ventajas Desventajas
La técnica es rápida
Es una técnica barata
Mide el número de células viables
Microorganismos sensibles al calor
pueden reasultar dañados por el agar
fundido
Se requiere de poco material
Se requiere de poca cantidad de
muestra
Requiere bastante tiempo (24 horas o
más)
Las bacterias crecen unidas en
cadenas o grumos
En medios diferenciales las colonias
que se forman debajo de la superficie
no son adecuadas (solo las de la
superficie)
Uniformidad en la extensión de los
microorganismos
Estos métodos se basan en poner en
evidencia la presencia de los
microorganismos vivos.
•Se emplean medios de cultivo
generales, enriquecidos selectivos y
diferenciales dependiendo de los
microorganismos a cuantificar.
No pretende poner en evidencia
todos los microorganismos presentes
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3.- Escribe 3 ejemplos donde se aplique este procedimiento.
En el conteo de la comunidad microbiana en suelos la cual es
importante por su relación con la fertilidad del suelo y con los ciclos
biogeoquímicos de los elementos
Tiene una posibilidad de uso potencial de los miembros específicos para
aplicaciones ambientales e industriales.
Esta técnica puede aplicarse para la estimación de microorganismos
viables en una amplia variedad de alimentos.
4.- ¿Por qué es necesario hacer diluciones en esta técnica?
Se emplean soluciones diluidas o diluciones de una muestra concentrada para
que cada colonia formada provenga de un solo microorganismo aunque
algunas agrupaciones no pueden ser separadas por las diluciones. Se utilizan
principalmente para la cuantificación de bacterias, levaduras y hongos
filamentosos. Se sigue ésta técnica cuando la muestra contiene tantos
microorganismos que la dilución no se puede realizar en una sola etapa.
5.- ¿Cuál es el criterio para seleccionar la placa representativa?
Se consideran “representativas“ las cajas que tienen un número de colonias
dentro del rango de sensibilidad del método, en este caso, entre 25 y 250 UFC.
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P.L.F. Sandra Sánchez Gómez