nanobiotecnologia...
TRANSCRIPT
![Page 1: NANOBIOTECNOLOGIA FARMACÊUTICAcienciasfarmaceuticas.org.br/wp-content/uploads/2019/03/4-NANOBI… · Nanotecnologia aplicada às ciências da vida Combinação das ideias, ferramentas](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022050417/5f8d79270200982241758fe7/html5/thumbnails/1.jpg)
NANOBIOTECNOLOGIA
FARMACÊUTICA
Profa. Carlota Rangel Yagui
Faculdade de Ciências Farmacêuticas
![Page 2: NANOBIOTECNOLOGIA FARMACÊUTICAcienciasfarmaceuticas.org.br/wp-content/uploads/2019/03/4-NANOBI… · Nanotecnologia aplicada às ciências da vida Combinação das ideias, ferramentas](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022050417/5f8d79270200982241758fe7/html5/thumbnails/2.jpg)
Quais as principais classes de
biofármacos empregados/em
desenvolvimento?http://phrma-docs.phrma.org/sites/default/files/pdf/biologics2013.pdfAmerica's Biopharmaceutical Research companies Report, 2013
1 2 3 4 5 6 7
1- Antisenso
2- Terapia Celular
3- Terapia Gênica
4- Anticorpos Monoclonais
5- Proteínas Recombinantes
6- Vacinas
7- Outros
ANVISA - medicamentos
biológicos:
“moléculas complexas de alto
peso molecular obtidas a partir
de fluidos biológicos, tecidos
de origem animal ou
procedimentos biotecnológicos
por meio de manipulação ou
inserção de outro material
genético (tecnologia do DNA
recombinante) ou alteração
dos genes que ocorre devido à
irradiação, produtos químicos
ou seleção forçada”.
![Page 3: NANOBIOTECNOLOGIA FARMACÊUTICAcienciasfarmaceuticas.org.br/wp-content/uploads/2019/03/4-NANOBI… · Nanotecnologia aplicada às ciências da vida Combinação das ideias, ferramentas](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022050417/5f8d79270200982241758fe7/html5/thumbnails/3.jpg)
Fármacos tradicionais:
(Small Molecule Drugs - SMD)
- medicamento de referência
- similares
- genéricos
Biofármacos:
- Biossimilares: mesmo perfil
molecular que os produtos de
referência com evidências suficientes
de que não há diferenças clínicas
significativas - desenvolvimento por
comparabilidade (qualidade, eficácia e
segurança)
- O conceito de medicamento genérico
não se aplica aos biossimilares. Não
existe atualmente uma orientação da
Anvisa sobre substituição de quaisquer
medicamentos biológicos.
BIOFÁRMACOS x FÁRMACOS TRADICIONAIS
Legislação utilizada para o registro de biossimilares no Brasil - RDC 55 (16/12/2010).
![Page 4: NANOBIOTECNOLOGIA FARMACÊUTICAcienciasfarmaceuticas.org.br/wp-content/uploads/2019/03/4-NANOBI… · Nanotecnologia aplicada às ciências da vida Combinação das ideias, ferramentas](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022050417/5f8d79270200982241758fe7/html5/thumbnails/4.jpg)
BIOSSIMILARES
![Page 5: NANOBIOTECNOLOGIA FARMACÊUTICAcienciasfarmaceuticas.org.br/wp-content/uploads/2019/03/4-NANOBI… · Nanotecnologia aplicada às ciências da vida Combinação das ideias, ferramentas](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022050417/5f8d79270200982241758fe7/html5/thumbnails/5.jpg)
DESAFIOS PARA BIOFÁRMACOS
ESTRATÉGIAS
NANOBIOTECNOLÓGICAS
Rangel-Yagui et al., Biomater. Sci., 2016,4, 205-218
![Page 6: NANOBIOTECNOLOGIA FARMACÊUTICAcienciasfarmaceuticas.org.br/wp-content/uploads/2019/03/4-NANOBI… · Nanotecnologia aplicada às ciências da vida Combinação das ideias, ferramentas](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022050417/5f8d79270200982241758fe7/html5/thumbnails/6.jpg)
Nanotecnologia aplicada àsciências da vida
Combinação das ideias,
ferramentas e materiais da
nanotecnologia e da
biotecnologia
O QUE É NANOBIOTECNOLOGIA?
nanotecnologia
inspirada na biologia:
- enzimas artificiais
- nanobiosensores
- tecnologias do tipo
organ-on-chip
aplicação da nanotecnologia para tratar problemas
biológicos:
- Nanoestruturas em drug delivery
- Nanoestruturas em embalages ativas e/ou inteligentes
para alimentos
- Nanoestruturas para biodefensivos agrícolas
![Page 7: NANOBIOTECNOLOGIA FARMACÊUTICAcienciasfarmaceuticas.org.br/wp-content/uploads/2019/03/4-NANOBI… · Nanotecnologia aplicada às ciências da vida Combinação das ideias, ferramentas](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022050417/5f8d79270200982241758fe7/html5/thumbnails/7.jpg)
ÁTOMO (1Ǻ)
DNA (1nm)
PROTEÍNAS (10nm)
VÍRUS (100 nm)
CÉLULA (1 a 10 µm)
TERRABOLA DE FUTEBOL
PRODUTO NANOTECNOLÓGICO
NANOBIOTECNOLOGIA
A nanotecnologia farmacêutica
geralmente lida com estruturas
entre 5 a 300 nanômetros.
![Page 8: NANOBIOTECNOLOGIA FARMACÊUTICAcienciasfarmaceuticas.org.br/wp-content/uploads/2019/03/4-NANOBI… · Nanotecnologia aplicada às ciências da vida Combinação das ideias, ferramentas](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022050417/5f8d79270200982241758fe7/html5/thumbnails/8.jpg)
NANOTRANSPORTADORES
Chem. Soc. Rev., 2011,40, 3638-3655
![Page 9: NANOBIOTECNOLOGIA FARMACÊUTICAcienciasfarmaceuticas.org.br/wp-content/uploads/2019/03/4-NANOBI… · Nanotecnologia aplicada às ciências da vida Combinação das ideias, ferramentas](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022050417/5f8d79270200982241758fe7/html5/thumbnails/9.jpg)
NANOTRANSPORTADORES X BIOMOLÉCULAS
• sensíveis ao pH e temperatura – limitação quanto aoprocesso de manufatura de certos nanotransportadorese métodos de encapsulação;
• Geralmente são grandes e hidrofílicas, portantonanotransportadores de interior hidrofóbico não sãoadequados para encapsulação.
NANOTRANSPORTADORES PROMISSORES (para encapsulação)
Ex: Lipossomos, virossomos, polimerossomos, nanopartículas de hidrogel,
nanocápsula de proteína única.
BIOMOLÉCULAS
![Page 10: NANOBIOTECNOLOGIA FARMACÊUTICAcienciasfarmaceuticas.org.br/wp-content/uploads/2019/03/4-NANOBI… · Nanotecnologia aplicada às ciências da vida Combinação das ideias, ferramentas](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022050417/5f8d79270200982241758fe7/html5/thumbnails/10.jpg)
LIPOSSOMOS
• Facilmente reconhecidos pelo sistema fagocitário mononuclear – alternativa = lipossomos peguilados (furtivos ou stealth)
• Podem ser funcionalizados com anticorpos, glicoproteínas, aptâmeros, etc.
Rangel-Yagui et al., Biomater. Sci., 2016,4, 205-218
![Page 11: NANOBIOTECNOLOGIA FARMACÊUTICAcienciasfarmaceuticas.org.br/wp-content/uploads/2019/03/4-NANOBI… · Nanotecnologia aplicada às ciências da vida Combinação das ideias, ferramentas](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022050417/5f8d79270200982241758fe7/html5/thumbnails/11.jpg)
LIPOSSOMOS• Fosfolipídios empregados
https://slideplayer.com/slide/9254012/
Biophys. J., 2004, 87:4213-4225.
![Page 12: NANOBIOTECNOLOGIA FARMACÊUTICAcienciasfarmaceuticas.org.br/wp-content/uploads/2019/03/4-NANOBI… · Nanotecnologia aplicada às ciências da vida Combinação das ideias, ferramentas](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022050417/5f8d79270200982241758fe7/html5/thumbnails/12.jpg)
LIPOSSOMOS
• Ex. de Método de Preparo – hidratação do filme lipídico
http://www.polymermicroscopy.com/temgallery.htm
![Page 13: NANOBIOTECNOLOGIA FARMACÊUTICAcienciasfarmaceuticas.org.br/wp-content/uploads/2019/03/4-NANOBI… · Nanotecnologia aplicada às ciências da vida Combinação das ideias, ferramentas](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022050417/5f8d79270200982241758fe7/html5/thumbnails/13.jpg)
VIROSSOMOS• ~ 150 nm
• Contém proteínas do envelope viral – permitem fusão com as células alvo –ligam-se à resíduos de ác. siálico na membrana cel.
• ideal para vacinação (antígeno viral) ou delivery de DNA/siRNA.
• Biodegradáveis, biocompativeis.
• Ex - virossomo de influenza:
![Page 14: NANOBIOTECNOLOGIA FARMACÊUTICAcienciasfarmaceuticas.org.br/wp-content/uploads/2019/03/4-NANOBI… · Nanotecnologia aplicada às ciências da vida Combinação das ideias, ferramentas](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022050417/5f8d79270200982241758fe7/html5/thumbnails/14.jpg)
• Vesículas constituídas por copolímeros anfifílicos
• Preparo semelhante à lipossomos
POLIMEROSSOMOS
Rangel-Yagui et al., Biomater. Sci., 2016,4, 205-218
![Page 15: NANOBIOTECNOLOGIA FARMACÊUTICAcienciasfarmaceuticas.org.br/wp-content/uploads/2019/03/4-NANOBI… · Nanotecnologia aplicada às ciências da vida Combinação das ideias, ferramentas](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022050417/5f8d79270200982241758fe7/html5/thumbnails/15.jpg)
• polimerossomos são mais estáveis, robustos
e menos permeáveis devido ao alto valor de MW
dos copolímeros sintéticos empregados em sua
constituição;
• facilidade de controle das propriedades como volume interior, espessura da
membrana polimérica e permeabilidade;
• Polimerossomos são mais resistentes - cinética de desagregação mais lenta. São
aproximadamente 10 x mais resistentes à micromanipulação do que lipossomos
(importante para liofilização);
• Desenvolvimento de PS estímulo-responsíveis para o controle de liberação da carga
(por permeabilidade da membrana) – responsíveis ao pH, temperatura, condições
redox, campo magnético, força iônica, concentração de glicose.
POLIMEROSSOMOS x LIPOSSOMOS
(3–5 nm)
(2–20 nm)
(3–5 nm)
(2–20 nm)
![Page 16: NANOBIOTECNOLOGIA FARMACÊUTICAcienciasfarmaceuticas.org.br/wp-content/uploads/2019/03/4-NANOBI… · Nanotecnologia aplicada às ciências da vida Combinação das ideias, ferramentas](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022050417/5f8d79270200982241758fe7/html5/thumbnails/16.jpg)
Poly(ethylene oxide)-poly-L-(latic acid)
![Page 17: NANOBIOTECNOLOGIA FARMACÊUTICAcienciasfarmaceuticas.org.br/wp-content/uploads/2019/03/4-NANOBI… · Nanotecnologia aplicada às ciências da vida Combinação das ideias, ferramentas](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022050417/5f8d79270200982241758fe7/html5/thumbnails/17.jpg)
Copolímeros com valores de fPEG
menores resultaram em vesículas
maiores e, portanto, maior EE%
devido ao maior volume aquoso
interno.
Rangel-Yagui et al., Nanomaterials, 2019
![Page 18: NANOBIOTECNOLOGIA FARMACÊUTICAcienciasfarmaceuticas.org.br/wp-content/uploads/2019/03/4-NANOBI… · Nanotecnologia aplicada às ciências da vida Combinação das ideias, ferramentas](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022050417/5f8d79270200982241758fe7/html5/thumbnails/18.jpg)
• Vesículas assimétricas:
• PMPC25-PDPA70 (Mw=21600 Da) (90% mol)
• PEO16-PBO22 (Mw=1910 Da) (10% mol)
POLIMEROSSOMOS PERMEÁVEIS
(NANORREATORES)
![Page 19: NANOBIOTECNOLOGIA FARMACÊUTICAcienciasfarmaceuticas.org.br/wp-content/uploads/2019/03/4-NANOBI… · Nanotecnologia aplicada às ciências da vida Combinação das ideias, ferramentas](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022050417/5f8d79270200982241758fe7/html5/thumbnails/19.jpg)
Poli(etileno glicol) - PEG
PEGUILAÇÃO
![Page 20: NANOBIOTECNOLOGIA FARMACÊUTICAcienciasfarmaceuticas.org.br/wp-content/uploads/2019/03/4-NANOBI… · Nanotecnologia aplicada às ciências da vida Combinação das ideias, ferramentas](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022050417/5f8d79270200982241758fe7/html5/thumbnails/20.jpg)
➢ Aleatória x sítio-dirigida
➢ Polidispersão x monodispersãoPEGUILAÇÃO
![Page 21: NANOBIOTECNOLOGIA FARMACÊUTICAcienciasfarmaceuticas.org.br/wp-content/uploads/2019/03/4-NANOBI… · Nanotecnologia aplicada às ciências da vida Combinação das ideias, ferramentas](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022050417/5f8d79270200982241758fe7/html5/thumbnails/21.jpg)
➢ Aleatória x sítio-dirigida
➢ Polidispersão x monodispersão
➢ Massa molar e geometria do polímero (linear ou
ramificado)
PEGUILAÇÃO
A
Rangel-Yagui et al., BJPS, 2018
![Page 22: NANOBIOTECNOLOGIA FARMACÊUTICAcienciasfarmaceuticas.org.br/wp-content/uploads/2019/03/4-NANOBI… · Nanotecnologia aplicada às ciências da vida Combinação das ideias, ferramentas](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022050417/5f8d79270200982241758fe7/html5/thumbnails/22.jpg)
PRINCIPAIS ESTRATÉGIAS DE PEGUILAÇÃO
Rangel-Yagui et al., BJPS, 2018
![Page 23: NANOBIOTECNOLOGIA FARMACÊUTICAcienciasfarmaceuticas.org.br/wp-content/uploads/2019/03/4-NANOBI… · Nanotecnologia aplicada às ciências da vida Combinação das ideias, ferramentas](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022050417/5f8d79270200982241758fe7/html5/thumbnails/23.jpg)
+
Roberts, Harris, 2002; Pasut e Veronese, 2012; Wu et al., 2013
+
PEGUILAÇÃO N-TERMINAL
![Page 24: NANOBIOTECNOLOGIA FARMACÊUTICAcienciasfarmaceuticas.org.br/wp-content/uploads/2019/03/4-NANOBI… · Nanotecnologia aplicada às ciências da vida Combinação das ideias, ferramentas](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022050417/5f8d79270200982241758fe7/html5/thumbnails/24.jpg)
PEGUILAÇÃO N-TERMINAL DA ASPARAGINASE
+
L-asparaginase mPEG(10kDa) mPEG-ASNase
N-terminal
random
Rangel-Yagui et al., PLOS ONE, 2019
![Page 25: NANOBIOTECNOLOGIA FARMACÊUTICAcienciasfarmaceuticas.org.br/wp-content/uploads/2019/03/4-NANOBI… · Nanotecnologia aplicada às ciências da vida Combinação das ideias, ferramentas](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022050417/5f8d79270200982241758fe7/html5/thumbnails/25.jpg)
(tampão fosfato de sódio 100 mM, razão PEG:ASNase 25:1)
pH do meio
Tempo de reação
RENDIMENTO DE 57%
EM monoPEG-ASNase
Rangel-Yagui et al., PLOS ONE, 2019
PEGUILAÇÃO N-TERMINAL DA ASPARAGINASE
![Page 26: NANOBIOTECNOLOGIA FARMACÊUTICAcienciasfarmaceuticas.org.br/wp-content/uploads/2019/03/4-NANOBI… · Nanotecnologia aplicada às ciências da vida Combinação das ideias, ferramentas](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022050417/5f8d79270200982241758fe7/html5/thumbnails/26.jpg)
A peguilação confere resistência às proteases
catepsina B (CTSB) e asparaginil endopeptidase (AEP)
Gel nativo - 4mg de ASNase/monoPEG-ASNase, 2mg de CTSB
ou 1.8mg de AEP, 37ºC, 132 h.
PEGUILAÇÃO N-TERMINAL DA ASPARAGINASE
Estabilidade por 21 dias (4 ºC)
Rangel-Yagui et al., PLOS ONE, 2019
![Page 27: NANOBIOTECNOLOGIA FARMACÊUTICAcienciasfarmaceuticas.org.br/wp-content/uploads/2019/03/4-NANOBI… · Nanotecnologia aplicada às ciências da vida Combinação das ideias, ferramentas](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022050417/5f8d79270200982241758fe7/html5/thumbnails/27.jpg)
Citotoxicidade da monoPEG-ASNasefrente a
linhagens leucêmicas. As barras de erro
representam o desvio padrão. Probabilidade de
significância menor do que 0,05 (*), menor do que
0,01 (**) e menor do que 0,001 (***) em relação
ao controle.
MonoPEG -ASNase
ASNase livre
PEGUILAÇÃO N-TERMINAL DA ASPARAGINASE
Rangel-Yagui et al., PLOS ONE, 2019
![Page 28: NANOBIOTECNOLOGIA FARMACÊUTICAcienciasfarmaceuticas.org.br/wp-content/uploads/2019/03/4-NANOBI… · Nanotecnologia aplicada às ciências da vida Combinação das ideias, ferramentas](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022050417/5f8d79270200982241758fe7/html5/thumbnails/28.jpg)
NANOCÁPSULA DE PROTEÍNA ÚNICA
Biomater. Sci., 2016,4, 205-218
▪ Do ponto de vista diagnóstico, SPN não degradáveis podem ser empregadas paradetecção de tumores.
▪ Do ponto de vista da terapia, pode-se empregar um polímero positivamentecarregado que confere penetração celular à proteína.
![Page 29: NANOBIOTECNOLOGIA FARMACÊUTICAcienciasfarmaceuticas.org.br/wp-content/uploads/2019/03/4-NANOBI… · Nanotecnologia aplicada às ciências da vida Combinação das ideias, ferramentas](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022050417/5f8d79270200982241758fe7/html5/thumbnails/29.jpg)
OBRIGADA!
https://www.facebook.com/Nanobiolabusp/