NORTHERN BLOT

PLANT DE TRAVAIL

Introduction

1-Historiqu

e

2-Définitio

n

3-Utilisation

4-Principe

5-Protocol

6-Avantage

s et inconvén

ients

INTRODUCTION

Nos connaissances actuelles sur les événements

biologiques qui se produisent dans les cellules des

organismes vivants peut être attribuée à l'existence de

beaucoup techniques de laboratoire utilisées dans

l'étude de ces processus.

Parmi ces techniques est la technique

’’Northern blot’’ est très utile dans l'analyse de l'ARN .

La plupart des informations disponibles qui sont

connaissons aujourd'hui sur l'expression des gènes et

les fonctions d’ARN peuvent être attribués à ce

technique.

1-HISTORIQUE

Northern blot est une technique d'ARN blot qui a

été développé en par Alwine, Kemp, et Stark en

1977 à l'Université Stanford .

Il a été nommé d'après le Southern blot technique

qui détecte pour l'ADN, inventé par Edwin M.

Southern en 1975.

Western blot , une méthode pour des protéines est

également une pièce de théâtre sur la

dénomination Southern blot et a été nommé en

1981

2-DÉFINITION

Une méthode de laboratoire utilisée pour

détecter des molécules d'ARN spécifiques au

sein d'un mélange d'ARN.

Northern blot peut être utilisé pour analyser

un échantillon d'ARN à partir d'un tissu ou

un type particulier de cellule afin de mesurer

l'expression de gènes d'ARN spécifiques.

3-UTILISATION

la recherche en biologie moléculaire : l'étude directe de l'expression des gènes au

niveau de l'ARNm détection de la taille de transcription ARNm étudier la dégradation des ARN étudier épissage de l'ARN peut détecter des

transcrits d'épissage alternatif étude la demi-vie de ARN IRES étude (site d'entrée interne des ribosomes)

Pour supprimer la possibilité de la digestion d'ARN

souvent utilisé pour confirmer et de vérifier transgéniques

4-PRINCIPE

1. Séparation des ARN sur gel par électrophorèse

2. Transfert des ARN sur membrane (capillarité)

3. Hybridation de la membrane avec une sonde spécifique du gène d’intérêt

5-PROTOCOL

6-AVANTAGES ET INCONVINIENS

AVANTAGES : la détection de la taille d'ARN. l'observation des produits d'épissage

alternatifs d’ARN. l'utilisation de sondes ayant une

homologie partielle. la qualité et la quantité d'ARN peut être

mesurée sur le gel avant buvard, et les membranes peuvent être stockées et sondé pendant des années après buvard.

L’expression des marqueurs tumoraux spécifique par hybridation ARN –ADN

INCOVINIENTS:

La dégradation de l'échantillon par ARNases qui

peuvent être évitées par une bonne stérilisation de la

verrerie et l'utilisation des inhibiteurs de RNase comme

DEPC

( diéthylpyrocarbonate).

Les produits chimiques utilisé dans la plupart des

taches du Northern peut être un risque pour le

chercheur, comme le formaldéhyde, les matières

radioactives, le bromure d'éthidium, DEPC, et la lumière

UV sont tous nuisibles dans certaines expositions.

CONCLUSION

Northern blot, même si une technique relativement

ancienne est encore aujourd'hui utile dans l'étude et

l'analyse de l'ARN. Cette situation est attribuable à sa

flexibilité ,simplicité.

Il exige essentiellement que l'ARN extrait est soumis à un

gel électrophorèse, qui est ensuite blotter à une membrane

solide

, puis hybridé avec la sonde appropriée qui aide à la

l'identification et l'analyse de la molécule d'ARN.

La technique s'est avérée utile et indispensable dans

létude

et l'analyse de molécules d'ARN dans les cellules de la vie

organismes. L'application de cette technique dans l'ARN lié

demandes de renseignements devrait se poursuivre dans

plusieurs décennies à venir.

MERCIE POUR VOTER ATTENTION