Nuevas Tendencias en Análisis Microbiológico

de Cosméticos

Q.F. Rosina Odino

Uruguay

Introducción

Definición Cosmético:

«Dicho de un producto: Que se utiliza para la higiene o belleza del cuerpo, especialmente del rostro.»(RAE 22da Edición)

Análisis Microbiológico:

1) Recuento en placa (bacterias, hongos y levaduras)

2) Búsqueda de microorganismos específicos

3) Challenge Test o Preservative Efficacy Test

¿Por qué controlar la presencia de microorganismos presentes en estos productos?- Olor- Color- Desestabilización de emulsiones- Etc

Pero más importante, puede tener efectos en la salud del consumidor:- Comezón en la piel- Infecciones - Ceguera

Método Tradicional

1. Método de Recuento en Placa - Cuantitativo

Se cuenta el número de bacterias aeróbicas y hongos y levaduras, utilizando técnicas de dilución y siembra en placa

2. Técnicas de Enriquecimiento - Cualitativas

Enriquecimiento en caldo seguido de medio no selectivo. Niveles bajos y/o células estresadas

¿ Por qué surgen alternativas?

Métodos Tradicionales

Tiempo (mínimo 4 d)

Días de producto sin poder venderse

Métodos Alternativos

Reducción del tiempo

Métodos Alternativos

Principales requisitos:

• Exactitud en la obtención de resultados (considerando: sensibilidad, limites de detección mínimos, especificidad del sistema de análisis, comparación con métodos de referencia).

• Rapidez: tiempo mínimo requerido para la obtención de resultados.

• Costo mínimo: inicial, por análisis, reactivos, mano de obra.

• Aceptabilidad: por parte de la comunidad científica y de las agencias reguladoras.

Métodos Alternativos

Principales requisitos:

• Sencillez de manejo: preparación de la muestra, funcionamiento del equipo analítico y procesamiento informático de los datos

• Calificación y formación del personal adecuada para la técnica a realizar.

• Reactivos: facilidad de preparación, estabilidad, disponibilidad.

• Soporte técnico adecuado: rapidez, disponibilidad y coste.

• Mínimo espacio util requerido.

Métodos Alternativos

Métodos Alternativos

IMPORTANTE

- Etapa previa de enriquecimiento

- Confirmación de resultados positivos

Test Negativo = PasaTest Positivo = Confirmación

Métodos Alternativos

Al igual que en el caso de los métodos tradicionales, es vital una adecuada toma y preparación de las MUESTRAS a analizar

• Para muestras solidas se han desarrollado instrumentos gravimétricos que realizan automáticamente las diluciones programadas de las muestras. Ej: Dilumat, AES Chemunex; Dilumacher, PBI; Labpro Gravimetric Diluter, Spiral Biotech.

También se han diseñado homogeneizadores que funcionan mediante ondas de choque y una intensa agitaciÓn que permite una mejor transferencia de los microorganismos del producto al diluyente, produciendo una mínima destrucción de la muestra. Ej: Pulsifier de Microgen.

• Para muestras líquidas se han desarrollado equipos que permiten realizar de forma automatizada diluciones seriadas de una muestra problema. Ej: sistema Rapid Plate 96 Pipettting Workstation de Zymark Corpo.; Dilucup, LabRobots Products AB.

1) Siembra en espiral

Ventajas

- Costos bajos- Sencillez- Ahorro de tiempo- Automatización

Desventajas

- Obstrucción de la aguja- Placas uniformes, sin burbujas ni humedad

2) Sistema Iso-Grid

Ventajas

- Exactitud

Desventajas

- Preparación de placas- Esterilización de equipo de filtración

3) Petrifilm

Ventajas

- No requiere preparación previa de medios de cultivo (reduce costos y tiempo de preparación)

- Poco espacio

Desventajas

- Pérdida de muestra líquida al esparcir

4) Bioluminiscencia o medida del ATP

Ventajas

- Reducción del tiempo

Desventajas

- Interferencias con ATP residual

5) Impedimetría

Tiempo de Detección Umbral = Tiempo entre inicio de la medición hasta cambio en el

parámetro eléctrico seleccionado

Tiempo de detección debe ser calibrado frente a una población de microorganismos determinada mediante métodos convencionales para que la electrometría permita estimar el recuento de microorganismos presentes

Ventajas

- Tiempo (6-24 h RTMA, 24–48 h RTCHL)- Puede emplearse en medios ópticamente

opacos

Desventajas

- «Calibración»

6) Citometría de flujo

Ventajas

- Rapidez- Cuantitativa y Cualitativa- Sensibilidad

Desventajas

- Equipos costosos

Ejemplo de implementación de un Método Alternativo

¿Preguntas?

Referencias

1) Métodos rápidos y automatizados aplicados al análisis microbiológico de los alimentos – Rosario Martin De Santos.

2) Food Microbiology and Analytical Methods: New Technologies - Mary Lou Tortorello, Steven M. Gendel.

3) Comparison of Redigel, Petrifilm, Spiral Plate System, Isogrid and Standard Plate Count for the Aerobic Plate Count on Selected Food – Vicky S. Chain

Muchas gracias

rosinaodino@yahoo.com