8/14/2019 Placas 3M Para Hongos y Levaduras Instrucciones de Uso

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3 Placas PetrifilmMR Recomendaciones de usopara el Recuento de Mohos y Levaduras

10Sosteniendo la barra cruzada del dispersor oesparcidor para Hongos y Levaduras colquelosobre la pelcula superior, como atrapando elinculo.

11 Presione suavemente el dispersor oesparcidor para distribuir el inculo sobre el reacircular. No gire, ni deslice el dispersor. Recuerdedistribuir el inoculo antes de inocular una siguienteplaca.

12Levante el dispersor o esparcidor. Espere por lomenos 1 minuto a que se solidifique el gel y proceda ala incubacin.

INCUBACIN INTERPRETACIN

13 Incube las placas cara arriba en grupos dehasta 20 unidades de altura.Puede ser necesario humectar el ambiente de laincubadora con un pequeo recipiente con aguaestril, para minimizar la perdida de humedad.Los Hongos grandes o de crecimiento rpidopueden ocultar los resultados al da 5. Observe lasplacas al da 3 y registre los resultados de lasplacas con altos conteos. Si las Placas estn con

demasiado crecimiento al da 5, registre elresultado obtenido al da 3 como estimado.

14Las placas PetrifilmMR pueden ser contadas enun contador de colonias estndar u otro tipo lupacon luz. Referirse a la Gua de interpretacin paraleer los resultados.

REACCION DE FOSFATASA

Para reducir la reaccin de fosfatasa, siga una de las siguientes tcnicas:

Inocule solo el sobrenadante, mezcle la muestra y djela reposar por 3 a 5 minutos, tome la muestra de la parte superior delcontenedor, para evitar inocular partculas muy grandes.

Revise y registre, la reaccin de color a la fosfatasa puede ocurrir entre las primeras 24 horas de incubacin, lea las placasantes de 24 horas y registre si encontr algn cambio en el color, utilice esta informacin como ayuda en el momento de lainterpretacin.

Diluya la muestra, cuando sea posible, realice una serie de diluciones seguidas lo que va a eliminar el color azul del fondo yresiduos grandes de la muestra y por lo tanto facilitar la enumeracin.

Comentarios Adicionales:

Si tiene preguntas llame al 1-651-733-7562 o alRepresentante de Ventas 3M ms cercano a usted

El tiempo de incubacin y la temperaturavaran segn el mtodo. Los mtodoscomnmente aprobados son:

AOAC mtodo oficial 997.02(en alimentos)Incubar 5 das entre 21C 25C

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3 Placas PetrifilmMR Diferenciacin Microscpicapara el Recuento de Mohos y Levaduras

Los Hongos y Levaduras sonorganismos diversos y muchas vecesno se pueden distinguir de entre ellossin la identificacin microscpica.

Para aislar colonias para posterior su

identificacin, levante el film superior yrepique una colonia del gel.

Transfiera la colonia a una gota de

agua estril colocada en un portaobjetos para microscopio y coloqueencima el cubre objetos; Obsrvelobajo aceite de inmersin.

Observe valos que identificanLevaduras

Estructuras filamentosas o conramificaciones son identificadoras deMohos

Tambin se pueden encontrar Mohosen diferentes etapas de germinacin

3M Microbiology3M center, Bldg. 275-5W-05St. Paul, MN 55144-1000USA1800-228-3957microbiology@mmm.comwww.3M.com/microbiology

Petrifilm es una marca registrada de 3MImpreso en:Revisin: 2003-04Referencia: 70-2008-8104-6

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3 Placas PetrifilmMR Gua de interpretacinpara el Recuento de Mohos y Levaduras

Esta gua lo familiarizar con las Placas PetrifilmMR para el Recuento de Mohos y Levaduras. Paramayor informacin contctese con el representante autorizado de productos microbiolgicos de3M ms cercano.

La Placa PetrifilmMR

para Recuento de Mohos y Levaduras (Yeast & Molds YM) es un sistema de medio decultivo listo para ser empleado, contiene nutrientes de Sabhi, dos antibiticos, indicador de fosfatos(BCIP), un agente gelificante soluble en agua fra y un tinte indicador que facilita la enumeracin de lascolonias. Las Placas Petrifilm

MRMY se utilizan en la enumeracin de la poblacin total existente de Mohos y

Levaduras en productos, ambientes, superficies, etc.

Conteo de Levaduras = 44

Las colonias en la Figura 1 son ejemplos deLevaduras y tienen las siguientes caractersticas:

Colonias pequeas

Colonias con filos definidos Colonias con un rango de color desde

beige o crema hasta azul verdoso, puedentambin tener tonos rosas

Colonias tienen apariencia abultada, esdecir con una tercera dimensin:convexas.

Color uniforme, no difusas.

Conteo de Hongos = 27

Las colonias de la Figura 2 son ejemplos de Mohos ytienen las siguientes caractersticas:

Colonias grandes

Colonias con bordes difusos Colonias de colores variables, por ejemplo:

caf, beige, naranja, azul verdoso, etc.

Colonias tienen apariencia plana

Tienen un centro oscuro y se expandendifusamente alrededor del mismo.

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3 Placas PetrifilmMR Gua de interpretacinpara el Recuento de Mohos y Levaduras

Conteo de Mohos y Levaduras = 0

En la Figura 3 se muestra una Placa PetrifilmMR

para Recuentode Mohos y Levaduras sin crecimiento de Hongos ni Levaduras.

Conteo de Levaduras = 12Conteo de Mohos = 4La Placa Petrifilm

MRpara Recuento de Mohos y Levaduras de la

Figura 4 muestra crecimiento bajo de colonias de Mohos yLevaduras.

Conteo de Levaduras = 480 estimadoConteo de Mohos = 21Cuando l nmero de colonias es mayor a 150, como se puedeobservar en la figura 5 por su excesivo crecimiento, los conteosdeben ser estimados. Determine el promedio de colonias en 1cuadrado (cm

2) y multiplquelo por 30 para obtener el conteo total

por placa. El rea de inoculacin de PetrifilmMR

YM es 30 cm2.

Conteo de Levaduras = MNPCConteo estimado: >10

4

La Figura 6 corresponde a una Placa PetrifilmMR

YM quecontiene demasiadas colonias de Levaduras para contar(MNPC). Las colonias azules pequeas resaltadas en elrecuadro del borde del rea de crecimiento se encuentranpresentes a travs de toda la placa, pero menos visibles.

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Conteo de Mohos = 59

Las colonias de Mohos de la Figura 7 estn empezando a unirsey sobreponerse una encima de otra en la placa. Cuente cadacentro como una colonia. La placa se puede dividir en seccionespara facilitar el conteo. La seccin remarcada en la Figura 7 tiene15 Mohos.

Conteo de Mohos = 12 (Figura 8A)Conteo de Mohos = 4 (Figura 8B)Las Placas que se muestran en las Figuras 8A y 8B son de lamisma muestra. La Figura 8A corresponde a una dilucin 1:10 ytiene colonias que son muy pequeas, tenues y numerosas,haciendo muy difcil su conteo. La Figura 8B corresponde a ladilucin 1:100 y muestra como diluyendo las muestras se puedeobtener placas con conteos deseables (15 150) lo que facilitala enumeracin.

REACCION DE FOSFATASA

Conteo de Mohos y Levaduras = 0 Conteo de Mohos y Levaduras = 0

La Placa PetrifilmMR

YM tiene un tinte indicador de fosfatasa. Por es algunos productos procesados que contienen fosfatasa puedencausar un cambio de color del gel. Se pueden observar dos tipos de reacciones: un color uniforme azul (Figura 9) o cabezas de alfilero puntos de color intenso azul (crculos en figura 10) que suelen presentarse en placas de especies y productos granulados.

8A 8B

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Para detallar informacin sobre PRECAUCIONES, COMPENSACIONES POR GARANTIA / GARANTIA LIMITADA, LIMITACIONES POR RESPONSABILIDAD DE3M, ALMACENAMIENTO Y ELIMINACION, e INSTRUCCIONES DE USO, remtase al inserto de producto en el paquete.

ALMACENAMIENTO

1 Almacene los paquetes cerrados a unatemperatura a 8C (46F). Las placas debenusarse antes de su fecha de expiracin. En reasde alta humedad, donde la condensacin puedeser un inconveniente, es recomendable que los

paquetes se temperen a la temperatura del lugarde trabajo antes de abrirlos. Las Placas PetrifilmMR

tienen un tiempo de vida til de 18 meses desdesu fecha de elaboracin, observe la fecha decaducidad en la parte superior de la placa.

2 Para cerrar un paquete abierto, doble elenvoltorio y colquele una cinta adhesiva paraevitar el ingreso de humedad y por lo tantoalteracin de las placas.

3Mantenga los paquetes cerrados (segn se indicaen el punto 2) a temperaturas a 25C (77F) y una

humedad relativa 50%. No refrigere los paquetes queya han sido abiertos. Utilice las placas PetrifilmMRmximo 1 mes despus de abierto el paquete. Paraalmacenamiento prolongado de paquetes abiertos, unavez cerrados (segn punto 2) colquelo en uncontenedor sellable (tipo funda con cierre) yalmacnelo en congelacin, para usar las placas saqueel paquete del congelador, retire el numero de placasnecesarias y guarde en las mismas condiciones antes

descritas.

PREPARACIN DE LA MUESTRA

6 Mezcle u homogenice la muestra mediante losmtodos usuales.

4Prepare al menos una dilucin de 1:10 de lamuestra. Pese o pipitee la muestra en una funda obolsa de Stomacher, botella de dilucin o cualquierotro contenedor estril usual.

5 Adicione la cantidad apropiada de uno de lossiguientes diluentes estriles: tampn Butterfield(tampn IDF fosfato, 0.0425 g/L de KH2 PO4 y conpH ajustado a 7.2), agua de peptona al 0.1%,diluente de sal peptonada (mtodo ISO 6887),Buffer de agua de peptona ( mtodo ISO 6579),solucin salina (0.85 a 0.90%), caldo letheen librede bisulfato o agua destilada.

No utilice buffer que contengan citrato, bisulfito otiosulfato de sodio, por que pueden inhibir el

crecimiento.

Las muestras o diluciones no requiere ajustar su pH,sin embargo si este proceso ya ha sido realizadopuede igual usarlo en la Placa PetrifilmMR YM

INOCULACIN

7Coloque la Placa PetrifilmMR en una superficieplana y nivelada. Levante la laminasemitransparente superior.

8 Con la pipeta perpendicular a la PlacaPetrifilmMR coloque 1 ml de la muestra en el centrode la pelcula cuadriculada inferior.

9Libere la pelcula superior dejando que caiga sobrela dilucin. No deslizarla hacia abajo.