práctica 6 : hidrólisis de una proteína y ensayos para proteínas y aminoácidos
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PRÁCTICA 6 : HIDRÓLISIS DE UNA PROTEÍNA Y ENSAYOS PARA PROTEÍNAS Y
AMINOÁCIDOS
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Aminoácido
El grupo R define la diferencia entre
cada aminoácido. Se consideran zwitteriones.
(ANFÓTEROS)
Se unen mediante enlaces peptídicos
para formas las PROTEINAS
Moléculas orgánicas constituidas por un grupo amino y un grupo carboxilo
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ENLACE PEPTÍDICO
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Proteína
Polímeros largos de α-
aminoácidos, unidos por enlaces
petídicos.
Primaria Secundaria Terciaria Cuaternaria
La desnaturalización es un cambio
estructural de las proteínas.
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Funciones
Estructural
Transporte
De reserva
De defensa
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OBJETIVOS1. Conocer las características de las proteínas.
2. Realizar la hidrólisis de una proteína denominada grenetina.
3. Aplicar reacciones de identificación para aminoácidos y proteínas.
4. Identificar los aminoácidos presentes en la grenetina por medio de una cromatografía en placa fina.
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REACTIVOSÁcido clorhídrico HCl
Ácido nítrico
Hidróxido de sodio
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Fenolftaleína
Ninhidrina
Nitrito de sodio
Rojo Congo
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HIDRÓLISIS DE GRENETINA (SOLUCIÓN “A”). Cantida
dReactivo
1 g Grenetina10 mL Ácido clorhídrico
concentrado
10 mL Agua destilada0.5g Carbón Activado.1 g de grenetina
10 mL de HCl10 mL de agua destilada
0.5 g de carbón activado y continuar calentado
Filtrar35 minutos
Continuar calentado por 2 minutos
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REACCIÓN DE HIDRÓLISIS
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SOLUCIÓN NEUTRALIZADA DE HIDROLIZADO DE GRENETINA (SOLUCIÓN “B”).
5 ml Solución A
Neutralizar con NaOH
Se Ocupara en la cromatografía, la prueba con Ninhidrina y Acción reguladora de Aminoacidos
CANTIDAD REACTIVO5 mL Solución A ( G.
Hidrolizada)La necesaria Hidróxido de sodioEl necesario Papel pH
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SOLUCIÓN DE GRENETINA SIN HIDROLIZAR.(SOLUCIÓN “C”).
Grenetina 0.5gAgua destilada
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SOLUCIÓN DE ALBÚMINA (SOLUCIÓN “D”)
Cantidad Reactivo1 huevo La clara100 mL Agua destiladaUn trozo Manta de cielo
Utilizar filtrado.
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•Reacciones de identificación
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REACCIÓN XANTOPROTEÍCA. • La reacción es dada por los aminoácidos que
contienen de grupos, compuestos aromáticos. • Se presentará una coloración amarilla.
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REACCIÓN XANTOPROTÉICA. CANTIDAD REACTIVO20 mL. Solución “A” (G.
hidrolizada)2.0 mL Solución “D” (Albúmina)10 mL Ácido nítrico
concentrado- Hidróxido de sodio al
10% 2mL de solución A
2mL de albúmina
Agregar a cada tubo 5 mL de ácido nítrico
Calentar suavemente a baño Maria
Observar coloración
Enfriar, y agregar NaOH al 10%
Observar cambio de coloración
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MECANISMO
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Reacción de Precipitación• 2ml
Solución A• 2ml
Solución D• 2ml H2O
5ml NAOH 10%
1.0ml Pb(C2H3O2)2
Cantidad Reactivos2 mL Solución A ( G. Hidrolizada)
2mL Solución D (Albúmina)
2 mL Agua destilada
15 mL Hidróxido de sodio al 10%
1 mL Acetato de Plomo al 10%
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MECANISMO
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Reacción de Biuret
-0.5ml agua destilada + -0.5ml de sol. de NaOH al 10%(testigo)
-0.5ml sol. C + 0.5 mL de NaOH al 10%
-A cada tubo adicionar 2ml de solución de sulfato de cobre al 2%-Agitar, observar y concluir
-0.5ml sol. D
-0.5ml sol A + 0.5 mL de NaOH al 10 %
-0.5ml sol. D + 0.5 mL de NaOH al 10%
0.5 mL de sol. A
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Reacción general
CuSO4 + NaOH +NHR
O NH
O
R R
O
HNO
RHNO
NH
R
R
H2NHN
O R
O
OH
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REACCIÓN CON NINHIDRINA
• La ninhidrina (hidrato de tricetohidrindeno) reacciona con aminoácidos que tengan el grupo amino libre.
• Una reacción positiva es en la cual se presenta un color violeta intenso.
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O
OHR
NH2
O
OOH
OH+
O
O
N
O
O
+ RCHO + CO2
Reacción general
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O
OOH
OH
O
O
OH2O
O
OO
OH
H
O
OHR
NH2
O
O
O +
O
O
O
NR
OHO
HH
O
O
OH
NR
OHO
H
NH2
RO
O
H O
O
OH2
NR
OHO
H
O
O
N
R O
OH
H
+ H2O
O
OR
NH2
O
O
N
R O
OH
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O
O
N
R O
OH
O
O
N
R
+ CO2
HO
H
O
O
NH
RO
H
H
O
O
NH
RO
HH
O
O
NR
O
H
H+
H
O
O
NR
O
H+
H
H
O
O
OO
O
N
O
O
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REACCIÓN CON ÁCIDO NITROSO CANTIDAD REACTIVO
3.0 mL Ácido clorhídrico concentrado
2.0 mL Solución A ( G. hidrolizada)
2.0 mL Solución “C” (son hidrolizar)
2.0 mL Solución “D” (Albúmina)
2.0 mL Agua destilada
4.0 mL Nitrito de sodio al 5%
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Reacción de Acido Nitroso3ml de HCl concentrado
• 2ml solución A• 2ml solución C• 2ml solución D• Tubo testigo sin
proteína
Enfriar1ml Solución acuosa de Nitrito de Sodio 5%
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MECANISMO
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ACCIÓN REGULADORA DE AMINOÁCIDOS.
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Cromatografía en Placa Fina
• Solución B• Solución patrón de
aminoácido 1• Solución patrón de
aminoácido 2
Dejamos secar
Fase-Móvil: Alcohol terbutilico-Agua 3:1
Secar en Estufa
Solución Ninhidrina