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PRACTICO GRAM POSITIVOS
)
Prof. Dra Mirta G. Quinteros
USAL - Htal Muñiz
Staphylococcus spp
Pruebas de Sensibilidad a los Antimicrobianos
ANTIBIOGRAMAS POR DIFUSIÓN
TABLETAS
DISCOS de
PAPEL
Tiras E-test
CLSI - EUCAST
RECOMENDACIONES INEI
CONSENSOS – AAM
Manuales de procedimentos PROPIOS
INTERPRETACIÓN E INFORME 64 –
32 –
16 –
8 –
4 –
2 –
1.0 –
0.5 –
I 6
I 10
I 15
I 20
I 25
I 30
I 35
(mm)
MIC
(µ
g/m
l)
Resistante Intermedio Susceptible
Pruebas de Sensibilidad a los
Antimicrobianos
1. Farmacológico.
2. Epidemiológico.
3. Clínico.
Criterios de Interpretación
Pruebas de Sensibilidad a los
Antimicrobianos
F. Nicola:Módulo 4- ATM2007
HISTOGRAMAS: Distribución de microorganismos Vs CIM
Pruebas de Sensibilidad a los
Antimicrobianos
ESCATEGRAMA: CIM [µg/ml] Vs Ө [mm]
F. Nicola:Módulo 4- ATM2007
Pruebas de Sensibilidad a los
Antimicrobianos
MLS
(+)
(-)
S. aureus S. epidermidis
MLS
(+)
(-)
S. aureus
S. epidermidis
Detección fenotípica de resistencias:
•MLS: D-test
Pruebas de Sensibilidad
a los Antimicrobianos
D-Test
Positivo
Fenotipo iMLSB
Negativo
Fenotipo M (Eflujo)
Pruebas de Sensibilidad
a los Antimicrobianos
Consenso grampositivoa- RAM2003
MATERIALES Y METODOSMATERIALES Y METODOS•Se analizaron los aislamientos de SAU obtenidas de materiales de piel y partes blandas (PPB) en el período enero de 2000 a enero del 2007.
•Se definió a las cepas según su resistencia a los distintos antimicrobianos como: :•Antibiótipo A: a oxacilina o cefoxitina ó oxacilina y/o cefoxitina + eritromicina y clindamicina.•Antibiotipo B: a oxacilina y/o cefoxitina, + gentamicina, eritromicina, clindamicina, ciprofloxacina.
•Se confirmaron los antibiotipos A con screening de oxacilina y PLP.
INCREMENTO EN LA INCIDENCIA DEINCREMENTO EN LA INCIDENCIA DE
StaphylococusStaphylococus aureusaureus (SAU)(SAU) COMPATIBLE CON SAMRC AISLADOS DE COMPATIBLE CON SAMRC AISLADOS DE
PUNCIONES DE PIEL Y PARTES BLANDAS ( PPB)PUNCIONES DE PIEL Y PARTES BLANDAS ( PPB)
INTRODUCCION:INTRODUCCION:
SAU es un patógeno causante de infecciones de
diversa gravedad en niños y adultos. Si bien en la
década del 70 más del 70% de los aislamientos eran
resistentes a penicilina, los SAU meticilino-
resistentes (SAMR) aparecen en el año 1968. En la
década del ’80 los datos nacionales (COBAC-
SADEBAC-AAM) muestran un 10-15% de resistencia y
desde fines de la década del ’90, los valores oscilan
entre el 50-60% según los distintos centros del país (
SIR-SADEBAC-AAM). Los primeros casos de infección
SAMR se informaron en la década del ’80 entre
adictos a drogas intravenosas, internados en
instituciones de cuidados prolongados y pacientes
con enfermedades crónicas o en contacto frecuente
con el medio hospitalario. En los últimos 10 años, sin
embargo, comenzaron a aparecer casos
verdaderamente extrahospitalarios, en personas
sanas sin factores de riesgo. La mayoría de las cepas
involucradas en estos episodios (habitualmente en
niños) se aíslan en infecciones cutáneas a las cuales
se las conoce como infecciones por SAMR de la
comunidad (SAMRc) y las ocasionan las cepas de S. aureus distintas de las observadas en los casos de
MRSAde origen hospitalario, en términos de
características genéticas, epidemiología,
manifestaciones clínicas y resistencia antibiótica.
Cada vez más se reconoce la importancia clínica de
estas cepas porque pueden ocasionar infecciones
invasivas y porque también pueden transmitirse en
los hospitales.
Se observa un significativo aumento del Se observa un significativo aumento del antibiotipoantibiotipo compatibles con compatibles con SAMRcSAMRc y si bien es importante la detección de y si bien es importante la detección de caracteres genéticos, desde el punto de vista clínico la caractecaracteres genéticos, desde el punto de vista clínico la caracterización de SAMR con rapidez, mediante la detección de rización de SAMR con rapidez, mediante la detección de
la PLP en aislamientos provenientes de PPB y la vigilancia de lala PLP en aislamientos provenientes de PPB y la vigilancia de la resistencia, contribuye en el control de estas resistencia, contribuye en el control de estas infecciones y el tratamiento de las mismasinfecciones y el tratamiento de las mismas
.
Quinteros, M.Quinteros, M.; Costa, N.; Callejo, R.;; Costa, N.; Callejo, R.;LehmannLehmann, E.; , E.; Lossa,MLossa,M., ., Couto,ECouto,E
Unidad bacteriología Unidad bacteriología –– Hospital MuñizHospital Muñiz--
OBJETIVOOBJETIVOConocer la incidencia de cepas SAMR con fenotipo compatible con los llamados SAMRc
p<0,001100144
SAMSSAMS
NS6176
SAMRSAMR--
ANTIBIOTIPO B ANTIBIOTIPO B
p<0,001598
SAMRSAMR--
ANTIBIOTIPO A ANTIBIOTIPO A
20042004--20072007
(N: 220)(N: 220)20002000--20032003
(N: 228)(N: 228)
PROBABILIDAD PROBABILIDAD
>99%>99%
PERIODOSPERIODOS
SENSIBILIDAD A SENSIBILIDAD A
OXACILINAOXACILINA
Estreptococos del grupo viridans
Frecuente cepas con sensibilidad disminuida a PEN
No Disco de PEN (CLSI)
Aislamientos de sitios estériles: CIM / Curvas de
letalidad PEN
Endocarditis: Estudios de Sinergia PEN/GEN
Grupo Mitis: SD// PEN 40 - 50%
Grupo Anginosus: S// PEN / TOLER
Grupo Mutans: S// PEN
Grupo Bovis: I // PEN 20 %
Streptococcus pneumoniae
Resistencia a los Beta-Lactámicos
Alteración PLPs (1a, 1b, 2a, 2b, 2x y 3)
PLP
2x, 1a, 2b
R-PEN
PLP
2x y 1a
R- C3G
PLP
2x
R-OXA
Adquisición genes en mosaico de S. mitis
PLP
2x y 2b
R-IMI
Streptococcus pneumoniae
Resistentes a Penicilina
(Poblacional)
Sensible
0.06
Intermedio
0.125 - 1
Resistente
2
Penicilina CIM (µg/ml)
Streptococcus pneumoniae
Criterios de puntos de corte
Penicilina
CIM (µg/ml)
Sensible Interm. Resist.
0.063 0.125 (IV)
2 4 8 (IV)
0.063 0.125 - 1 2 (VO)
MENINGITIS
NO
MENINGITIS
CLSI: M100-S18 /2008
Streptococcus pneumoniae
Emergencia de R. eri-tet- tms- CIMpen 0,125
Enterococcus spp Resistencia intrínseca
Betalactámicos
Afinidad disminuída a las PLPs
- Resistencia a cefalosporinas e isoxazolilpenicilinas y
carboxipenicilinas
- CIM Peni: 10 - 100 veces mayor que en Streptococcus
- Resistencia a Carbapenemes
IMI / MER / ERT (E. faecium)
ERT (E. faecalis)
Lincosamidas (bajo nivel)
Excepciones: algunas cepas de E. faecium y E. durans
Aminoglucósidos (bajo nivel)
- Por impermeabilidad
- E. faecium: AAC-6’ R// AK- KA NET- TOB y SISO
GEN y STP no son sustratos
PRODUCCIÓN DE B-
LACTAMASAS GRAM (+)
ENTEROCOCCUS FAECALIS ß-LACTAMASA POSITIVO AISLADO DE UROCULTIVO.
VIGILANCIA DE LA RESISTENCIA A DISTINTOS ANTIMICROBIANOS.
1Quinteros, M.; 2Di Conza, J.; 2Pino, M.; 1Buscemi, L.; 1Costa, N.; 1Deodato, B.; 1Walker, L.; 1Passicot, G.; 2Gutkind, G.
1Hospital de Infecciosas “Francisco J. Muñiz – 2Fac. de Farmacia y Bioquímica (UBA)
CONCLUSIONES
La disminución en la medida del halo a AMP con respecto a la media poblacional y la diferencia de halo mayor a 5 mm para AMS hizo sospechar la
presencia de una ß-lactamasa como mecanismos de resistencia.
Si bien éste mecanismo no tiene implicancia en el tratamiento de la infección urinaria, su importancia es epidemiológica debida a su baja incidencia.
La vigilancia de la resistencia es una herramienta útil para monitorear la emergencia o re-emergencia de mecanismos de resistencia, para poder alertar
sobe medidas de control de infecciones y evitar su diseminación.
% d
e R
esis
ten
cia
Los porcentajes de resistencia observados a los distintos antibióticos ensayados se resumen a continuación:
ampicilina (AMP), ampicilina/sulbactama (AMS), vancomicina, teicoplanina: 0%
nitrofurantoína: 1%
gentamicina de alta carga: 56%
estreptomicina de alta carga: 49%
La media observada para los halos de AMP y AMS es de 25,7 mm y 27,3 mm respectivamente.
Un aislamiento recuperado en junio de 2010, en un
paciente internado (orina), mostró un halo de 18 mm
para AMP y de 26 mm para AMS.
Las CIMs observadas fueron:
PG: benzilpenicilina = 6 µg/ml
PP: piperacilina = 6 µg/ml
PTc: piperacilina/tazobactam <0,16 µ/ml
En el mismo se observó la
presencia de ß-lactamasas
mediante ambos métodos
fenotípicos. Foto: Ensayo
microbiológico
Sobre este aislamiento se amplificó por PCR un fragmento
compatible con el esperado para blaZ (848 bp). Mediante
restricción con la combinación de ezimas EcoRV- NdeI o EcoRV-
XbaI se observó el mismo perfil que la cepa control (E. faecalis
HH22)
El fragmento de PCR fue secuenciado. Al comparar con base de datos (NCBI Blast) se observó 100% de identidad con blaZ presente en S. aureus (Nº acceso:
CP002120) y en E. faecalis HH22 (Nº acceso: M60253)
CAM-2010