Brzov Petra

Prtokov cytometrie (flow cytometry)Prtokov cytometrie je modern laboratorn metodamen a analza fyziklnch -chemickch vlastnost buky bhem prchodu laserovm paprskemIdentifikace rznch bunnch typ uvnit smen populace, analza jednotlivch subpopulac v rmci jedn populaceRychl, pesn a reprodukovateln metoda, umouje souasn men nkolika parametr a na 100 000 bunk za 1 sekundu

Zkladn komponenty prtokovho cytometru:1. Fluidn systmFlow cell (prtokov komrka)Sheat fluid(nosn kapalina )Hydrodynamick fokusace

2. Optick systmLaserov paprsekForward scatter (FSC)Side scatter (SSC)emitovan fluorescenn signly

Imunofenotypizacetypizace jednotlivch bunnch populac za vyuit reakce antigen-protiltka.reakce je vizualizovna oznaenm protiltky fluorochromem (FITC,PE,PC5)

Zkladn komponenty prtokovho cytometru3. Potaov systm (workstation)Vstupem men jsou pak vsledky v grafick a seln form:jednoparametrov histogramydvouparametrov histogramyzastoupen bunk nesouc dan antigen v procentech

Klinick vyuit prtokov cytometrieImunofenotypizace leukemi a lymfomDNA analzaFunkn vyeten leukocytStanoven intracelulrnho vpnkuDiagnostika defekt imunityCytometrick vyeten solidnch ndorDiagnostika a monitorovn autoimunnch chorobTransplantan imunologie

Monosti vyuit FCM na naem pracovitiVyeten perifern krve:Lymfocytza (odlien reaktivn a monoklonln lymfocytzy)Pancytopenie (vylouen HCL, PNH)Monoklonln gamapathie Akutn leukmie (odlien AML od ALL)Zkladn imunologick vyeten (stanoven poetnho a procentulnho zastoupen B-ly, T-ly subpopulac, NK-bunk, hodnocen imunoregulanho indexu)

Monosti vyuit FCM na naem pracovitiVyeten kostn den:Podobn indikace jako vyeten perifern krveVyeten lymfatick uzliny:Ve vtin ppadu umouje rychlou diagnostiku ppadnho postien lymfomem, odlien od reaktivn lymfatick uzliny i postien metastatickm karcinomem, vyetujeme vdy v kombinaci s cytologickm vyetenm otisku LUVyeten vpotk a likvoru:K vylouen postien lymfoproliferativnm onemocnnm

Zkladn panely vyeten na naem pracovitiZkladn panel vyeten zkladnch lymfocytrnch subpopulac:B-lymfocytyT-lymfocyty helper T-ly a supresorov T-lyNK- bukyStanoven imunoregulanho indexu (CD4/CD8)Uren zastoupen povrchovch imunoglobulinovch etzc kappa/lambda na B-lymfocytech = vylouen klonlnch B-lymfocyt

Zkladn panely vyeten na naem pracovitiPanel B-lymfoproliferacPi potvrzen monoklonln B-ly populace nebo vysokm podezen na B-lymfoproliferaciBle charakterizuje imunofenotyp klonlnch B-lymfocyt Umouje bli zaazen B-lymfoproliferacePanel T-lymfoproliferacPi vznamn T-lymfocytze s podezenm na T-lymfoproliferativn onemocnn

Zkladn panely vyeten na naem pracovitiPanel akutnch leukmiU pacient s podezenm na ALRozlen zkladnch subtyp AL (ALL, AML)Bli charakteristika subtyp AL a zaazen dle FAB klasifikaceDal panely specilnch vyetenMnohoetn myelomB-CLL PNH

Zpsob odbru a pepravy materilu k FCM vyetenVyeten se provd denn (mimo So, Ne)Perifern krev odbr jako KOKostn de speciln zkumavka s antikoagulanm roztokem LU odebrna do gzy navlhen ve FRVzorky doruit do laboratoe nejpozdj do 10:00 z dvodu nslednho zpracovnDostupnost vsledku vyeten je do 2 hodinVsledek mono zjistit telefonicky na kl. 428

Pracovn postup pi imunofenotypizaci prtokovou cytometriStanoven bunnosti vyetovan suspenzePipetovn vzorkuZnaen monoklonln protiltkouInkubaceLza erytrocytPromytResuspenze v pufru PBSAnalza (men)