semana acadÉmica 2013 - unam · el alacranismo, es un problema de salud pública en méxico ya que...

37
SEMANA ACADÉMICA 2013 Lunes 9 de Diciembre 9: 30 Plática Inagural Dr. Nemesio Herrera Reyes Jefe del Museo de Medicina en Palacio de Medicina de la UNAM, Dpto. de Historia y Filosofía de la Medicina-UNAM El Palacio de Medicina y sus diferentes usos10:25 Grupo Dr. Carlos Arias Entrada de rotavirus: Un viaje profundo al interior de la célulaEn el periodo 2012-2013 mi laboratorio ha continuado profundizando en el estudio del tráfico vesicular que siguen los virus que infectan a la célula. Hace dos años reportamos que las cepas de rotavirus RRV y UK usan mecanismos diferentes de endocitosis para ingresar a la célula. UK lo hace a través de endocitosis clásica mediada por clatrina, mientras que RRV entra por un mecanismo de endocitosis no bien caracterizado. Mediante el uso de virus rearreglantes demostramos también que la vía endocítica usada depende de la proteína VP4 del virus. Utilizando RNAi y la expresion de mutantes dominantes negativos de varias de las moléculas celulares involucradas en el proceso endocítico (EEA1, Rab5, Rab7, Rab9, ESCRT) encontramos que, independientemente de la vía endocítica empleada por RRV y UK, las vesículas endocíticas que internalizan a los dos diferentes virus convergen en endosomas tempranos. En esta ocasión reportamos que, a diferenca de RRV, que parece salir al citosol en endosomas en maduración para iniciar el proceso de transcripción viral, la cepa de rotairus UK requiere llegar hasta endosomas tardíos. Esta diferencia en el proceso de infección también depende de la proteína de superficie VP4. Demostramos también que para poder iniciar su ciclo replicación en el citoplasma, el rotavirus UK requiere de la actividad de receptores de manosa-6-fosfato, los cuáles se encargan de transportar enzimas hidróliticas del complejo del trans-Golgi a los endosomas tardíos, las que terminan finalmente en el lisosoma. Identificamos a las catepsinas (cisteín proteasas) como probables cargos del receptor de M6P, necesarias para la infección del virus. El transporte hasta endosomas tardíos y el requerimiento por el receptor de M6P y catepsinas es compartido por la mayoría de las cepas de rotavirus, incluyendo virus de origen humano y animal. De manera paralela, en este trabajo también encontramos que algunas proteínas de las uniones estrechas (ocludina, JAM y ZO-1) son importantes para la infección del virus.

Upload: others

Post on 10-Mar-2020

0 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

Page 1: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

SEMANA ACADÉMICA 2013

Lunes 9 de Diciembre

9: 30 Plática Inagural

Dr. Nemesio Herrera Reyes

Jefe del Museo de Medicina en Palacio de Medicina de la UNAM, Dpto. de Historia y

Filosofía de la Medicina-UNAM

“El Palacio de Medicina y sus diferentes usos”

10:25 Grupo Dr. Carlos Arias

“Entrada de rotavirus: Un viaje profundo al interior de la célula”

En el periodo 2012-2013 mi laboratorio ha continuado profundizando en el estudio del

tráfico vesicular que siguen los virus que infectan a la célula. Hace dos años reportamos

que las cepas de rotavirus RRV y UK usan mecanismos diferentes de endocitosis para

ingresar a la célula. UK lo hace a través de endocitosis clásica mediada por clatrina,

mientras que RRV entra por un mecanismo de endocitosis no bien caracterizado. Mediante

el uso de virus rearreglantes demostramos también que la vía endocítica usada depende de

la proteína VP4 del virus. Utilizando RNAi y la expresion de mutantes dominantes

negativos de varias de las moléculas celulares involucradas en el proceso endocítico

(EEA1, Rab5, Rab7, Rab9, ESCRT) encontramos que, independientemente de la vía

endocítica empleada por RRV y UK, las vesículas endocíticas que internalizan a los dos

diferentes virus convergen en endosomas tempranos. En esta ocasión reportamos que, a

diferenca de RRV, que parece salir al citosol en endosomas en maduración para iniciar el

proceso de transcripción viral, la cepa de rotairus UK requiere llegar hasta endosomas

tardíos. Esta diferencia en el proceso de infección también depende de la proteína de

superficie VP4. Demostramos también que para poder iniciar su ciclo replicación en el

citoplasma, el rotavirus UK requiere de la actividad de receptores de manosa-6-fosfato, los

cuáles se encargan de transportar enzimas hidróliticas del complejo del trans-Golgi a los

endosomas tardíos, las que terminan finalmente en el lisosoma. Identificamos a las

catepsinas (cisteín proteasas) como probables cargos del receptor de M6P, necesarias para

la infección del virus. El transporte hasta endosomas tardíos y el requerimiento por el

receptor de M6P y catepsinas es compartido por la mayoría de las cepas de rotavirus,

incluyendo virus de origen humano y animal. De manera paralela, en este trabajo también

encontramos que algunas proteínas de las uniones estrechas (ocludina, JAM y ZO-1) son

importantes para la infección del virus.

Page 2: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

En resultados que no presentaré en esta ocasión, pero que es importante mencionar, nuestro

laboratorio se ha enfocado también en los últimos dos años a la caracterización de la

evolución molecular y diversidad del virus de influenza A, a la epidemiología de las

infecciones virales respiratorias, a estudios metagenómicos para determinar los patógenos

asociados a enfernedades respiratorias severas, así como al diseño de métodos diagnósticos

de virus respiratorios y gastrointestinales utilizando una plataforma de microarreglos de

oligonucléotidos de DNA. Tambien hemos continuado con la caracterización de diversos

estadios de la replicación de los astrovirus, los cuales, al igual que los rotavirus, se asocian

a las gastroenteritis infantiles.

Carteles

1. Caracterizacion de los glicanos involucrados en la interacción con la proteína VP8

de diferentes cepas de rotavirus. Cinthia Martínez Sánchez (tutor: Pavel Isa)

2. Análisis de los cambios en el fosfoproteoma de células MA104 inducidos por la

infección con rotavirus. Luis Casorla Pérez (tutor: Tomás López)

11:00 Grupo Dr. Baltazar Becerril

“Entendiendo como evolucionan a nivel molecular los anticuerpos contra toxinas de

alacrán

En el contexto del desarrollo de un anti-veneno recombinante de origen humano

equivalente al ALACRAMYN®”

El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se

documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

Faboterápico), se obtiene a partir del plasma de caballos hiper-inmunizados con veneno de

4 de las especies más peligrosas. La generación de fragmentos de anticuerpos

recombinantes capaces de neutralizar las toxinas del veneno de alacrán, ha mostrado ser

una alternativa promisoria para obtener nuevas moléculas terapéuticas para la formulación

de anti-venenos de última generación. En este ocasión, mostramos por primera vez la

resolución de un complejo ternario de dos fragmentos variables de cadena sencilla (scFv),

uniéndose de manera simultánea a la toxina Cn2 del veneno de Centruroides noxius. El

complejo ternario scFv LR-Cn2-scFv RU1 demuestra a nivel molecular la existencia de un

segundo epítope importante para la neutralización de las toxinas bloqueadoras de canales de

Page 3: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

sodio. Nuestro objetivo principal es contar con un grupo de scFvs de origen humano que

inhiban el efecto tóxico del veneno, a través del bloqueo de diferentes epítopes

compartidos en las toxinas. En este caso, el blanco fue el veneno del alacrán Centruroides

noxius, cuyo principal componente letal es la toxina Cn2. Esta pequeña toxina (66 aa),

modifica de manera altamente específica las funciones de compuerta del canal de sodio

humano Nav1.6. Hemos generado varios scFv humanos neutralizantes de esta toxina. El

mejor anticuerpo previamente caracterizado fue el scFv LR. En esta presentación se hablará

de la obtención del scFv RU1, el cual es el segundo mejor anticuerpo neutralizante de la

toxina Cn2. De forma independiente, tanto LR como RU1 son capaces de neutralizar a la

toxina Cn2 y al veneno completo. Sin embargo, el scFv LR no logra eliminar

completamente los síntomas de intoxicación. La administración simultánea de ambos scFvs

resulta en una óptima protección ya que no se observa ningún síntoma. Adicionalmente,

hemos observado una rápida recuperación de los ratones previamente envenenados y

rescatados de dicho envenenamiento, aun empleando pequeñas dosis de ambos scFvs. Estos

resultados demuestran un efecto sinérgico de los scFvs RU1 y LR en la neutralización del

veneno. Previamente se reportó la zona de interacción entre el scFv 9004G parental de LR

y la toxina Cn2. Apoyados en la determinación precisa de las interacciones entre el scFv

RU1 y la toxina Cn2, fue posible identificar un segundo epítope importante para la

neutralización de dicha toxina. De manera similar, ha sido posible explicar cómo los

cambios ocurridos durante la maduración in vitro del scFv parental C1 dirigidos contra una

toxina homóloga (Cll1), dió como resultado a un anticuerpo neutralizante de dos toxinas de

alacranes diferentes: Cn2 y Cll1 de Centruroides noxius y Centruroides limpidus limpidus

respectivamente. Es importante mencionar que la determinación de la estructura

cristalográfica de este complejo ternario también permitió explicar cómo estos anticuerpos

evolucionaron a nivel molecular. Dada la homología de las toxinas y la reactividad cruzada

que hemos demostrado en los anticuerpos obtenidos, consideramos que una mezcla de 3-4

de estos anticuerpos podrían constituir una nueva generación de anti-venenos.

La contribución que estamos haciendo ayudaría en un futuro a contender con potenciales

problemas asociados a la producción de los anti-venenos anti-alacrán en caballos. El contar

con una fuente alternativa segura, en donde se pueda estandarizar y optimizar la

producción homogénea de anti-venenos con cultivos celulares crecidos en fermentadores,

Page 4: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

a diferencia de la dependencia de la respuesta inmune de cada caballo, es una garantía en

un futuro cercano. Adicionalmente, los anticuerpos de cadena sencilla, debido a su bajo

peso molecular, tienen una óptima efectividad terapéutica por su rápida distribución y

eliminación. Siendo la rápida bio-distribución y una adecuada eliminación de los complejos

anticuerpo-toxina, factores determinantes para neutralizar el envenenamiento agudo por

picadura de alacrán, ubica a los scFvs como elementos terapéuticos idóneos en este tipo de

inmuno-terapia.

Carteles

"Protein structural hierarchies: Gathering molecular dynamics and connectivity

analyses to predict the effect of mutations within a protein structure" Presenta: Oscar

Daniel Luna Martínez.

1. Maduración de la afinidad del scFv RU2 hacia la toxina Cll2 del veneno del

alacrán Centruroides limpidus limpidus. Presenta: Jonathan Noé Arredondo López

11:35 Grupo Dr. Gerardo Corzo Burguete

“Péptidos antimicrobianos: síntesis, actividad biológica y posibles usos terapéuticos”

La constante aparición de cepas bacterianas con resistencia a antibióticos comerciales ha

conducido parte de nuestra investigación hacia la búsqueda y desarrollo de agentes

antimicrobianos, con propiedades o mecanismos de acción diferentes a los convencionales,

pero que ayuden a solucionar este problema. Los péptidos antibióticos, generalmente parte

del sistema innato de organismos multicelulares podrían ser una solución ya que su

mecanismo de acción no se limita solo a una interacción con un receptor único, sino a una

acción concertada hacia el metabolismo de células extrañas. Sin embargo, estas moléculas

peptídicas presentan algunas desventajas, como su alto costo de extracción, producción,

baja estabilidad y posibles efectos tóxicos contra células eucariotas en comparación con los

antibióticos comunes, los cuales tienen una química más sencilla. En este informe

comparamos las actividades biológicas de dos tipos estructurales de péptidos antibióticos,

aquellos que forman estructura secundaria tipo alfa, en este caso provenientes de venenos y

Page 5: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

de secreciones de animales, y del tipo de estructura secundaria alfa-beta estabilizadas por

puentes disulfuro y pertenecientes a la familia de las beta-defensinas humanas. La finalidad

de este trabajo ha sido conocer las ventajas y desventajas de la síntesis química y biológica,

así como actividades antibióticas de estos dos tipos de moléculas con el fin de profundizar

en su estudio y proponerlos como alternativas terapéuticas.

Con respecto a las moléculas antibióticas que forman estructura secundaria tipo alfa,

nuestro modelo ha seguir es un péptido antibiótico obtenido del veneno de alacrán

denominado Pin2 (Corzo et al., 2001). Esta molécula presenta un residuo de Prolina en la

regiones central, al igual que otras moléculas similares relacionadas con una gran actividad

antimicrobiana, sin embargo, estos péptidos también presentan actividades hemolíticas a

concentraciones cercanas a las de su actividad antibacteriana. Con el fin de reducir su

actividad hemolítica se analizaron cambios en su estructura primaria en el único residuo

Prolina con sustituciones por los aminoácidos G, V, GV, VG, GVG y GPG, estas variantes

fueron diseñadas con base a ejemplos de moléculas naturales y sintetizadas químicamente.

En los ensayos de inhibición del crecimiento bacteriano todas las variantes de Pin2

mantuvieron las CMI en el mismo orden de magnitud usando el método de dilución pero

fueron diferentes en el método de ensayo en sólido. La toxicidad de estos péptidos fue

ensayada contra eritrocitos humanos (EH), encontrándose que, de manera general, esta

actividad disminuyó como resultado de la sustitución de la Prolina, siendo las variantes

GV, GVG y GPG las menos hemolíticas. Las variantes GVG y GPG incrementaron sus

índices terapéuticos, sin embargo, la sustitución de la Prolina 14 por Glicina aceleró la

cinética de disrupción de EH, incrementando a su vez su actividad antimicrobiana

(Rodríguez et al., 2011). Con el objetivo de disminuir el costo de síntesis química, se

diseñaron dos variantes de Pin2 una de 14 y otra de 17 aminoácidos y, ambas variantes

cortas presentaron selectividad contra E. coli tanto en los ensayos de difusión en agar como

en los de dilución, pero en lo referente a la actividad hemolítica, la variante de 17

aminoácidos con el triplete GPG no presentó ningún efecto tóxico, mientras que la variante

de 14 aminoácidos con el residuo de Glicina en la posición central presentó solo un 25% de

hemólisis a 100 µM. El índice terapéutico de la variante corta con el residuo de Glicina fue

32 veces superior al del péptido parental Pin2.

Page 6: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

Con respecto a las moléculas del tipo de estructura secundaria alfa-beta estabilizadas por

puentes disulfuros, denominadas β-defensinas. Estas moléculas son también de naturaleza

catiónica con masas moleculares de 2 a 5 kDa y un patrón de seis cisteínas conservado, los

cuales forman tres puentes disulfuro (Corrales-Garcia et al., 2011). Debido a la complejidad

de su estructura y bajos rendimientos en la síntesis química, se optó por la expresión

heteróloga como una alternativa para generar cantidades suficientes para su evaluación.

Cinco variantes de β-defensinas humanas (HBDs), con diferente proporción de

aminoácidos básicos se expresaron en la bacteria Escherichia coli. Las HBDs obtenidas, a

partir de fracción soluble o insoluble dependiendo del sistema de expresión, generaron

diferentes rendimientos, donde los mejores fueron entre 3 y 9.5 mg/L de cultivo celular con

una pureza por encima del 90%, después de varias purificaciones. Se demostró que la

actividad antimicrobiana de las HBDs recombinantes tiene una correlación positiva con el

número de residuos de aminoácidos básicos. Así la relación de actividad antimicrobiana fue

HBD3-M-HBD2(+18)>HBD3(+12)=HBD3-M(+12)=HBD2-KLK(+10)>HBD2(+8)

(Corrales-García et al., 2013).

Paralelamente estas moléculas se evaluaron durante el crecimiento de Mycobacterium

tuberculosis (cepas H37Rv y multirresistente a antibióticos –MDR–). Los resultados

mostraron que la β-defensina HBD2-KLK presentó la mejor inhibición sobre H37Rv,

mientras la β-defensina HBD3-M-HBD2 registró la mejor actividad inhibitoria sobre la

cepa MDR. Las pruebas de citotoxicidad demostraron que las HBDs son inocuas sobre

eritrocitos humanos, por lo cual las HBDs recombinantes pueden ser consideradas como

potenciales moléculas terapéuticas de tipo antibiótico.

Aunque ambos tipos de moléculas antibióticas tienen un efecto biológico comparable a los

antibióticos de uso común. Otras formas de introducir este tipo de moléculas como posibles

antibióticos es combinarlos con antibióticos comerciales para generar una sinergia (García

et al., 2013), o bien introducir aminoácidos menos lábiles a la degradación enzimática

(Carmona et al., 2013). Finalmente, las estructuras secundarias tipo alfa son mas sencillas

de sintetizar químicamente, pero su índice terapéutico es menor al obtenido por las

moléculas alfa-beta estabilizadas por puentes disulfuros. Ante esto cada tipo estructural

podría dirigirse hacia diferentes sitios para su aplicación terapéutica.

Page 7: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

Carteles

1. Bioactive compounds collected from skin frog secretions: finding new analgesic

peptides. F. Garcia, H. Clement, G. Corzo

2. Expression and in vitro folding of two cysteine rich neurotoxins from the venom

of spider and coral snake. V. Flores-Lara, H. Clement, G. Corzo

3. Producción de variantes de la neurotoxina Ts1 para mejorar su plegamiento in

vitro. K. Hernandez-Salgado, L.D. Possani, G. Corzo

12:20 Grupo Dra. Alejandra Covarrubias Robles

“Las proteínas desordenadas y los RNAs pequeños en la respuesta de las plantas al déficit

hídrico (Entre las miniaturas, el desorden y el estrés)”

El interés de nuestro grupo ha sido identificar y tratar de entender los mecanismos de

respuesta de plantas vasculares a condiciones de limitación de agua. En estos dos últimos

años hemos avanzado principalmente en los proyectos dirigidos a:

(a) identificar y determinar la función de microRNAs en la respuesta a la limitación de agua

en frijol. En este período se obtuvieron avances relacionados con la caracterización

estructural y funcional de algunos de los microRNAs identificados como específicos de

leguminosas. Con la finalidad de acelerar la identificación de los RNAs mensajeros blanco

se construyó una biblioteca de los transcritos blanco procesados por los microRNAs de

frijol o ‘degradoma’. El análisis informático de esat biblioteca ha arrojado datos de gran

utilidad no sólo para identificar y en algunos casos corroborar los blancos de los

microRNAS de interés, sino también para identificar nuevos microRNAs o nuevos blancos

para microRNAs ya descritos. Por tanto, a la fecha ya hemos identificado los RNAs

mensajeros blancos de los microRNAs bajo estudio, lo que nos ha permitido avanzar en la

determinación de su función. Por otro lado, se ha avanzado en la implementación y

utilización del sistema de raíces pilosas transgénicas para el estudio funcional de

microRNAs de frijol. Así mismo se inició la implementación del sistema de transformación

Page 8: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

transitoria y estable en una leguminosa modelo como lo es Medicago truncatula con el fin

de contar con un sistema experimental más confiable que el de las raíces pilosas de frijol.

(b) determinar la participación y la función de las hidrofilinas vegetales durante la respuesta

a déficit hídrico. El análisis estructural de diferentes proteínas LEA demostró que estas

proteínas poseen un alto grado de desorden estructural en solución acuosa y que son

capaces de adoptar conformaciones ordenadas bajo condiciones de déficit hídrico y/o de

amontonamiento molecular. Este análisis estructural se realizó por dicroísmo circular y,

recientemente, ha sido complementado con análisis por RMN. La comparación entre

proteínas LEA de diferentes familias reveló que, aunque las proteínas comparadas son

desordenadas, su propensión a formar estructuras ordenadas ante baja disponibilidad de

agua es diferencial. Por experimentos de entrecruzamiento se detectó la interacción de una

de las proteínas LEA analizadas (AtLEA4-5) con la proteína que es capaz de proteger de

los efectos causados durante condiciones de baja disponibilidad de agua, lo cual refuerza el

modelo que hemos propuesto para el funcionamiento de estas proteínas. Adicionalmente,

demostramos que ambas proteínas son capaces de formar no sólo homo-oligómeros sino

también hetero-oligómeros entre ellas.

Por otro lado, se implementaron ensayos para el análisis funcional de proteínas LEA de

frijol en raíces pilosas transgénicas de frijol, con el objeto de determinar posibles fenotipos

en raíces en las que los niveles de estas proteínas se encuentre afectados. Así mismo, este

sistema permitió realizar experimentos de localización tisular y sub-celular.

Por otro lado, se determinó que la proteínas del grupo 6 de frijol y de Arabidopsis son

capaces de complementar la susceptibilidad a bajas temperaturas de una cepa de E. col que

carece de cuatro chaperonas de RNA que protegen a esta bacteria de los daños causados por

bajas temperaturas. Estos resultados sugieren la posible actividad de chaperona de RNA

para las proteínas LEA de esta familia, las cuales hemos demostrado no son capaces de

proteger de la desactivación causada por los efectos de la baja disponibilidad de agua a

enzimas blanco, como lo hacen las proteínas LEA e hidrofilinas de otros grupos u orígenes.

Page 9: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

(c) La selección de la regulación de la expresión genética por mecanismos epigenéticos

(que no involucran cambios en al secuencia del DNA) se ha visto favorecida en las plantas

como parte de un arreglo complejo de respuestas que implican diferentes niveles de control

ante cambios ambientales, debido posiblemente a su estilo de vida sedentario, y que les ha

permitido aclimatarse y adaptarse de forma eficaz. Muy recientemente, se descubrió la

participación de lso RNAs interferentes pequeños hetero-cromáticos (hcsiRNAs) en la

modulación del estado epigenético del genoma. Sin embargo, la participación de hcsiRNAs

en el control de la respuesta al déficit hídrico de las plantas aún no se ha dilucidado.

Nostros nos hemos enfocados en la participación de la vía de la metilación (RdDM) de

DNA mediada por RNA en esta respuesta al estrés. Esta vía controla la transcripción de

muchos elementos en el genoma – principalmente transposones – a través de la metilación

del DNA y de las histonas a través de modificaciones post-traduccionales. Por medio de un

enfoque genético encontramos que la deficiencia de diferentes proteínas que participan en

esta vía conduce a una respuesta característica de las plantas a la limitación de agua. El

fenotipo observado correlaciona con la expresión alterada de genes que participan en la

respuesta a esta condición de estrés, de acuerdo al análisis de los datos obtenidos por

secuenciación masiva de transcritos (RNAseq). Los datos fenotípicos, genéticos y

moleculares obtenidos hasta ahora indican que, al menos, algunas proteínas de la vía

RdDM participan de forma específica en la modulación de la respuesta a déficit hídrico a

través de una nueva vía de regulación.

Carteles

1. Water deficit responses regulated by microRNAs in Phaseolus vulgaris. Presenta:

José Luis Reyes

2. Elements of the RNA-directed DNA methylation pathway are involved in the

response to water deficit in Arabidopsis thaliana. Presenta: Miguel Palomar Olguín

3. Tissular localization of a stress protein induced by water deficit in Arabidopsis

thaliana: the case of a group 4 LEA protein. Presenta: Coral Martínez Martínez

Page 10: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

12:55 Grupo Dr. Alberto Darszon

“Fisiología del espermatozoide”

La regulación del nado del espermatozoide es clave para que este fecunde al óvulo, en

particular en los organismos de reproducción externa. Usando microscopía de fluorescencia

y generando gradientes fotoactivando speract enjaulado, un péptido pequeño de la capa que

rodea al óvulo, encontramos por primera vez que estos gradientes disparan incrementos en

la [Ca2+]i regulados en tiempo y espacio que desencadenan acumulación y probablemente

quimiotáxis en espermatozoides de S. purpuratus. Los cambios eléctricos de la membrana

del flagelo sincronizan la respuesta motora regulando el pHi y el [Ca2+]i. El [Ca2+]i

incrementa cuando el espermatozoide se aleja de la fuente del gradiente del

quimioatrayente desencadenando el viraje, la orientación y el nado en línea recta hacia el

centro de este. Entender los mecanismos moleculares que gobiernan la movilidad y su

relación con el [Ca2+]i permitirá comprender mejor la fisiología del espermatozoide y en

general como el Ca2+ regula a los flagelos y cilios de las células. Sabemos ahora que

muchos tipos de celulares, incluso algunas neuronas, tiene al menos un cilio o un flagelo

cuya estructura está muy conservada y que son fundamentales en el desarrollo y en diversas

funciones celulares.

La capacitación, un proceso de maduración del espermatozoide de mamífero ocurre en el

tracto genital femenino y lo prepara para fecundar exitosamente al óvulo. Durante este

proceso aumenta el [Ca2+]i y el pHi, y varias proteínas cambian su estado de fosforilación.

En el ratón y algunas otras especies la capacitación se acompaña de una hiperpolarización

del potencial de membrana. Varios canales parecen contribuir a dicha hiperpolarización y

recientemente encontramos que esta es suficiente para permitir que la zona pelucida o un

depolarización con K+ dispare la reacción acrosomal, un proceso exocitótico que prepara al

espermatozoide para fusionarse con el óvulo.

Los lípidos como el colesterol, GM1 y PS modulan importantes funciones celulares. En el

espermatozoide están involucrados en la capacitación y la reacción acrosomal (RA). Por lo

anterior durante mí sabático estudié las diferencias en las características de distribución

celular y movilidad del colesterol, GM1 y PS en el espermatozoide de ratón no-capacitado,

Page 11: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

capacitado y reaccionado. Encontré que el colesterol y GM1 tienen una distribución

heterogénea en el espermatozoide y se encuentran en mayor cantidad en la región

acrosomal. Por otra parte, tanto el colesterol como la PS exógenos tienen una mayor

movilidad (mayor coeficiente de difusión) en la cabeza, siguiendo la pieza principal. La

región en la que estos lípidos están más rígidos es la pieza media y esto se mantiene para

los tres estados del espermatozoide, no-capacitado, capacitado y reaccionado. La

capacitación no alteró significativamente la difusión del colesterol y la PS exógenos en la

cabeza. Sin embargo la movilidad del colesterol disminuyó de manera notoria y la de PS en

menor medida. La RA influyó importantemente en la movilidad en la cabeza tanto del

colesterol cómo de PS, como sería de esperarse ya que este proceso involucra un cambio

morfológico de esta región. Es interesante que la movilidad del colesterol disminuyó pero

la de PS aumentó. Estos resultados sugieren que la exposición de la membrana interna del

acrosoma durante esta reacción, así como la posible transformación de la membrana

plasmática a la cual se ha fusionado la membrana interna del acrosoma ofrecen un ambiente

distinto a los lípidos que se incorporan del exterior.

En este periodo desarrollamos un nuevo método para seguir la RA y el [Ca2+]i

simultáneamente en el tiempo en espermatozoides de humano. Utilizamos un colorante

fluorescente, el FM-64, que se ha usado para determinar exocitosis. Este colorante marca

muy bien el contorno celular reportando claramente cambios morfológicos. Utilizándolo

documentamos nuevas estructuras membranales tubulares que se generan durante la RA

que se confirmaron por microscopía electrónica de barrido. Al correlacionar los cambios

morfológicos y los del [Ca2+]i que ocurren durante la RA descubrimos que los

espermatozoides humanos que tienen fluctuaciones en el [Ca2+]i antes de agregar

progesterona, un inductor fisiológico de la RA, no son capaces de reaccionar. Por otra

parte, la progesterona induce un segundo incremento transitorio de [Ca2+]i en los

espermatozoides que sufren la RA.

Carteles

1. Speract, a peptide derived from the egg jelly that regulates sea urchin sperm

motility, increases mitochondrial NADH levels. Juan García-Rincón, Alberto

Darszon & Carmen Beltrán

Page 12: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

Martes 10 de Diciembre

9:00 Grupo Dr. Enrique Galindo

“Experiencias y retos en la comercialización del biofungicida Fungifree AB”

Nuestro país es uno de los principales productores de mango a nivel mundial, pero sólo

destina el 14 % de su producción nacional para la exportación, sobre todo debido a

limitaciones en la calidad de los frutos. En buena medida debido a una alta incidencia de

antracnosis, que es la enfermedad más común de este fruto y que se caracteriza por la

aparición de manchas negras en la superficie de los mangos, provocada por el crecimiento

de un hongo fitopatógeno (Colletotrichum gloeosporioides).

El grupo lidereado por los Dres. E. Galindo y L. Serrano, en conjunto con el Centro de

Investigación en Alimentación y Desarrollo (CIAD), Unidad Culiacán, y como fruto de

cerca de una década de investigaciones, desarrollaron tecnologías de control biológico de la

antracnosis, basadas en el uso de microorganismos antagonistas del hongo fitopatógeno. El

desarrollo tecnológico ha hecho énfasis en los aspectos más críticos para lograr el éxito de

los sistemas de control biológico con potencial de entrar al mercado: la producción

reproducible y en gran escala de los antagonistas, el desarrollo de formulaciones con

prolongada vida de anaquel y su prueba extensiva en huertos de mango a niveles semi-

comerciales y comerciales. El paquete tecnológico ha incluído una solicitud de patente

PCT, cuya fase nacional mexicana fue otorgada en 2011 y que se encuentra en trámite

también en Brasil.

El biofungicida desarrollado, ha permitido el control de la antracnosis en niveles iguales o

superiores a los que se logran usando fungicidas químicos. El uso de este producto ha

permitido a los productores cosechar frutos de alta calidad, con una vida de anaquel

prolongada, libres de residuos químicos y por lo tanto aumentando significativamente sus

posibilidades de exportación (apertura de mercados en donde se logran precios muy

superiores a los del mercado nacional).

La UNAM firmó un convenio de licenciamiento de la tecnología a la empresa

Agro&Biotecnia S. de R.L. MI. Esta empresa es un spin-off del Instituto de Biotecnología

Page 13: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

de la UNAM, creada en 2008 por investigadores del IBt-UNAM y que está enfocada al

desarrollo científico y tecnológico de productos y servicios de alto valor agregado que

ayuden al control de fitopatógenos y promuevan el incremento de la productividad de los

cultivos agrícolas bajo un esquema de producción sustentable. La empresa se desarrolló en

la Incubadora de Alta Tecnología del Centro Morelense de Innovación y Transferencia de

Tecnología (CeMITT), con el apoyo del Fondo Mixto CONACyT-Morelos. Esta empresa

obtuvo el registro, tanto de la SAGARPA como de la COFREPIS, de un biofungicida

bacteriano, que ya se comercializa con la marca registrada por la empresa: Fungifree

ABMR.

Agro&Biotecnia firmó un contrato para la comercialización y distribución exclusiva del

biofungicida con una empresa líder en el mercadeo de productos agroquímicos en México y

en latinoamérica (FMC Agroquímica de México S. de R.L. de C.V.), la cual lanzó

comercialmente el producto en la Expo-Agroalimentaria Guanajuato 2012 (noviembre de

2012). El producto cuenta (a noviembre de 2013) con registro ante la COFREPIS para su

uso en el control de la antracnosis del mango, aguacate, papaya y cítricos. Se espera que en

el mediano plazo se extenderá el uso del biofungicida a otros frutales y hortalizas, así como

para el control de fitopatógenos diferentes al que causa la antracnosis.

Fungifree ABMR es el primer biofungicida desarrollado en México que llega al mercado,

cuyo principio activo fue aislado de follaje, que tiene más de dos años de vida de anaquel y

con características notables en términos de su efectividad. Se trata de un hecho de particular

relevancia en nuestro país, en donde el trabajo de investigadores de dos instituciones de

investigación mexicanas han logrado, junto con una empresa de base tecnológica y una

empresa comercializadora, llevar al mercado un producto en cuya etiqueta se incluye la

leyenda “Producto formulado con Tecnología del Instituto de Biotecnología de la UNAM y

del CIAD-Culiacán”.

El biofungicida Fungifree ABMR es el primer producto que se coloca en el mercado por

una empresa spin-off del Instituto de Biotecnología de la UNAM.

Carteles

1. Ingeniería de Biopolímeros Microbianos. Presentado por: Carlos Peña

Page 14: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

2. Estudio de la inducción y de la producción de lacasas por Pleurotus ostreatus .

Presentado por: Leobardo Serrano

3. Caracterización del molinillo tradicional utilizado en la preparación de chocolate

Presentado por: A. Holguín, D. López, G. Corkidi, E. Galindo.

9:35 Grupo Dra. Patricia León

“Como los plástidos influencian el desarrollo de las plantas”

Una de las características más notables de las plantas, es la presencia de organelos

especializados llamados plástidos. Actualmente en las plantas los plástidos tienen muchas

funciones vitales, incluyendo la más ancestral que es la fotosíntesis. Desde su adquisición

hace miles de años, los plástidos han coevolucionado con su célula “huésped” generando

una intricada comunicación. A pesar de que el núcleo regula y dirige la función y desarrollo

de los plástidos, éstos organelos también generan señales que modulan la expresión y el

desarrollo de las plantas, en lo que se conoce como señalización retrógrada. Esta

señalización resulta fundamental para coordinar de la funcionalidad, los requerimientos y el

desarrollo de los plástidos con la expresión de las proteínas plastidicas codificadas en el

núcleo. Esta señalización es fundamental para poder ajustar de manera adecuada los

cambios en el desarrollo y ambientales frecuentes a los que están sujetos las plantas con la

funcionalidad del organelo. Un interés fundamental de nuestro grupo es identificar las

señales generadas en los plastidos así como la vía de transducción de dichas señales. En los

últimos años nuestro trabajo se ha enfocado en la caracterización de una de dichas señales,

la cual se genera a partir de carotenos lineales como fitoflueno o zeta carotenos. Esta señal

modula de una manera importante el desarrollo de las hojas y la expresión genética de

genes cloroplásticos y nucleares. Nuestro análisis ha permitido demostrar que esta señal es

un nuevo apocaroteno generado a través de la enzima Digoxigenasa de carotenos 4

(CCD4).

Por otro lado uno de los factores transcripcionales involucrados en la señalización entre el

cloroplasto y el núcleo es el factr transcripcional ABI4. ABI4 es un nodo de convergencia

para múltiples señales de la célula incluyendo la señalización de azúcares y la señalización

Page 15: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

retrograda. Entender el mecanismo a través del cual ABI4 funciona y su modo de

regulación ha sido otro de los objetivos de nuestro grupo por varios años. Durante este

periodo hemos podido identificar algunos de los mecanismos de la regulación de dicho

factor que lo modulan tanto a nivel de mensajero como proteína. En esta platica se

presentará algunos de dichos avances.

Se presentarán dos carteles que se relacionan con dos líneas adicionales de nuestro grupo y

que incluyen a la señalización por azúcares y la función de las MAP cinasas en eldesarrollo

de las plantas.

Carteles

1. Estudio de los mecanismos de regulación por azúcares, el caso del gen STP1 en

Arabidopsis thaliana. Presentado por Dra. Elizabeth Cordoba

2. Identificación y caracterización de una cascada de MAP cinasas involucrada en la

regulación de os programas de desarrollo del embrión y la raíz de Arabidopsis

thaliana. Presentado por Dr. Arturo Guevara

10:10 Grupo Dra. Hilda Lomelí

“Genética reversa en el pez cebra: morfolinos versus edición del genoma”

En los últimos años hemos utilizado el modelo del pez cebra para el estudio del desarrollo

embrionario. A través del uso morfolinos hemos inactivado algunos genes de interés y

hemos avanzado en el análisis de los fenotipos que se presentan. Particularmente para el

caso del gen zimp7 tenemos ya una historia completa en relación a su participación en la

determinación del mesendodermo dorsal durante la etapa en que se definen los ejes

embrionarios del pez. La pérdida de Zimp7 mediada por la acción de morfolinos produce

defectos axiales que involucran a estructuras que derivan del mesodermo dorsal (tales como

la notocorda, la hipocorda y el floor plate), y afecta también la producción del endodermo.

Hemos demostrado de manera sólida que la pérdida y ganancia de Zimp7 tienen efectos

contrapuestos sobre las estructuras mencionadas y sobre marcadores genéticos de dichas

Page 16: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

estructuras así como del organizador dorsal en etapas mas tempranas. Nuestros datos

demuestran que Zimp7 actúa inhibiendo una vía de señalización de TGF-

la cual es determinante para la producción de mesodermo dorsal. Nuestra hipótesis es que

Zimp7 podría interaccionar con Smad4 y así influir en la fosforilación de Smad2 o en su

transporte al núcleo.

A pesar de que los morfolinos fueron una herramienta fundamental para la realización de

este y otros proyectos del laboratorio, es importante reflexionar sobre las limitaciones de

este enfoque y sobre las dificultades que surgen para demostrar la especificidad de un

morfolino. Además, esta estrategia está siendo rebasada por metodologías innovadoras de

edición del genoma en pez cebra. Recientemente incursionamos en estas nuevas

metodologías con resultados muy prometedores.

En la presentación pienso dar seguimiento al proyecto de zimp7; evaluar el modelo de pez

cebra cuatro años después de haberlo adoptado y hablar de nuestras perspectivas a la luz de

las nuevas herramientas de ingeniería genómica.

Carteles

1. Papel de la Rho-GTPasa RhoA en la segregación del plasma germinal en el pez

cebra.

2. Visualización de la dinámica de señalización por especies de oxígeno reactivas

durante el desarrollo embrionario temprano en pez cebra.

11:55 Grupo Dr. Enrique Merino

“Identificación in silico de elementos de regulación mediante genómica comparativa”

Los seres vivos interactúan con el medio de manera dinámica, formando parte de éste e

integrando un conjunto extenso de estímulos intra y extracelulares a los que responden a

través de múltiples mecanismos de regulación que les permiten su adaptación y

sobrevivencia. La complejidad y diversidad de dichos elementos de regulación es muy

amplia ya que éstos pueden actuar al inicio, durante o en el término de la replicación,

Page 17: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

transcripción y traducción. Uno de los objetivos principales de nuestro grupo es el de

desarrollar herramientas computacionales para la identificación in silico de elementos de

regulación. En nuestra presentación ejemplificaremos dos de las metodologías

computacionales que hemos desarrollado. La primera para la identificación de sitios de

unión de factores transcripcionales en organismos bacterianos, y la segunda para la

identificación de IRES celulares en organismos eucariontes.

Identificación de sitios de unión de factores transcripcionales en organismos bacterianos. El

reconocimiento específico de los Factores Transcripcionales (TFs) a sus correspondientes

sitios de unión (TFBS) tiene un papel esencial en la expresión coordinada de los genes de

un organismo. Las aproximaciones computacionales que tradicionalmente se han empleado

para predecir dichos sitios se han enfocado en la identificación de motivos de secuencias

sobre-representados que se repiten con una frecuencia estadísticamente significativa en las

regiones 5’ río arriba de genes co-regulados en un genoma, en las regiones 5’ de un

conjunto de genes ortólogos. Pese al esfuerzo realizado, con los actuales algoritmos de

predicción no es siempre posible identificar a los verdaderos sitios de unión de los TFs de

estudio, y mucho menos entender la dinámica de unión de dichos TFs que determinan el

mecanismo molecular de la regulación del sistema. En nuestra presentación mostraremos

una nueva propuesta metodológica in silico para identificar los TFBS de la familia

estructural LysR. Nuestra metodología integra tanto la identificación de secuencias sobre-

representadas utilizando el método de perfiles filogenéticos, como propiedades

bioquímicas-estructurales de los TFs en cuestión. Nuestro enfoque de análisis nos ha

permitió identificar nuevos TFBSs que son consistentes con los resultados experimentales

de la expresión de los genes regulados que no hubieran podido ser interpretadas por

esquemas clásicos que consideran exclusivamente la información contenida en la secuencia

primaria del DNA. En nuestra presentación anual se comentarán las aproximaciones

experimentales que actualmente conducimos para la verificación de nuestras predicciones

teóricas.

Identificación de IRES celulares en organismos eucariontes. El paso crucial en la

regulación de la expresión genética durante la traducción es su inicio. En eucariontes el

proceso canónico de inicio la traducción comienza cuando el complejo ribosomal de inicio

Page 18: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

de la traducción reconoce a una estructura cap (7mGpppN) ubicada en el extremo 5´ del

mRNA. Una vez que ésto ha ocurrido, este complejo busca en la región no-traducida (UTR)

5´ hasta encontrar el codón de inicio y comienza la síntesis de la proteína. Este mecanismo

bona fide de inicio de la traducción se conoce como dependiente de cap. Existe una manera

alternativa que no requiere de la estructura cap como sitio de reclutamiento para los

factores de inicio. En este proceso independiente de cap, existen elementos dentro del UTR

5´ que permiten reclutar a la maquinaria de inicio de la traducción y son conocidos como

Sitios Internos de Entrada del Ribosoma o IRES (por sus siglas en ingles, Internal

Ribosome Entry Sites). A pesar de que los IRES fueron descritos por primera vez en

mRNAs de virus, se han descrito alrededor de 90 IRES celulares en levadura, mosca, maíz

y mamíferos. Dichos IRES corresponden a ciertos mRNAs que requieren serguir

traduciéndose durante ciertas condiciones celulares en la que alguno de los factores de

inicio de traducción canónicos han sido modificados, ya sea por cambios en su estado de

fosforilación o por proteólisis. Dichas condiciones incluyen la exposición a diferentes tipos

de estrés, proliferación celular, angiogenesis, la respuesta a hipoxia e isquemia, apoptosis,

oncogénesis y tumorogénesis, entre otros. Debido a la variabilidad de su tamaño, baja

conservación de secuencia primaria y estructura secundaria, la identificación de IRES

celulares mediante aproximaciones computacionales ha sido poco exitosa. En nuestra

presentación mostraremos una nueva estrategia computacional para la identificación de

IRES celulares en humano basada en el análisis comparativo de la estabilidad de estructuras

secundarias en las regiones 5´UTR de genes ortólogos de algunos mamíferos modelo.

Finalmente comentaremos sobre las aproximaciones experimentales que hemos iniciado en

nuestro laboratorio para la verificación funcional de los IRES identificados in silico.

Carteles

1. Análisis de la actividad de arrestina de la proteína Spo0M de Bacillus subtilis.

2. Construcción de módulos metabólicos en varios grupos de bacterias

3. Gene Context Tool III: a web application to visualize genomic context and

orthologous relationships

4. SaiOGM - Sistema Automatizado para la Identificación de OGM's

5. Use of antisense nucleotides against the multi-resistance gram-negative bacteria.

Page 19: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

12:30 Grupo Dr. Luis Covarrubias Robles

“Desarrollo, regeneración y metabolismo: una serie de eventos …. inesperados”

Actualmente se han identificado vías de señalización que controlan la renovación,

mantenimiento y diferenciación de células troncales. Redes moleculares de interacción

entre componentes de estas vías muestran que, dentro de la complejidad intrínseca de las

células en desarrollo y sus derivados terminales, es posible asociar ciertos nodos, que

frecuentemente involucran factores de transcripción, con destinos particulares. No obstante

lo anterior, aún hay un amplio desconocimiento de cuales son los blancos finales que son

críticos para mantener a las células con un fenotipo estable o promover las transiciones

necesarias para su diferenciación, mismos que pueden también participar en patologías

como la neurodegeneración y el cáncer. A lo largo de los años nuestro grupo ha

investigado diferentes aspectos asociados a la biología de las células troncales,

especialmente enfocados a determinar las propiedades intrínsecas y extrínsecas que definen

su destino en el embrión o en el organismo adulto. Una serie de acontecimientos dentro y

fuera del laboratorio han puesto en evidencia la regulación de vías metabólicas como

componente común y posiblemente esencial en la definición del destino celular. En esta

presentación destacaré algunas evidencia que muestran cómo el control del metabolismo

puede ser clave en procesos del desarrollo embrionario, y residir en el corazón de las

capacidades regenerativas de los órganos y el origen del cáncer, y cómo, sin haberlo

previsto en el origen de nuestros proyectos, nos insertamos en este campo en claro auge y

con implicaciones relevantes en la salud humana.

Carteles

1. La dinámica de la actividad y expresión de Shh durante la diferenciación

neuronal en el mesencéfalo embrionario murino. Christopher Wood

2. Influence of papillomavirus oncogenes E6/E7 and sex hormones in the

regeneration of mouse ear holes. Celina García

13:05 Grupo Dr. Federico Sánchez

“Dos sabores, Dulce y Tuti-Fruti, en la Simbiosis Phaseolus vulgaris-Rhizobium”

La charla está organizada en dos sabores:

Page 20: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

• El primer sabor es Dulce:

(Trehalose is a key carbon regulatory player in the legume-Rhizobium symbiosis) y trata de

dos estrategias para estudiar el papel de un azúcar, la trehalosa (disacárido), el cual

encontramos que tiene un papel importante como una molécula-señal en esta simbiosis.

En la primera estrategia se incrementan los niveles de trehalosa (78%) al silenciar, en los

nódulos transgénicos de frijol, por RNA interferente (RNAi) contra la región 3’ UTR del

transcrito de la trehalasa (PvTRE1), la enzima que hidroliza a la trehalosa. La pérdida de

función de PvTRE1 tiene un fenotipo donde el número de bacteroides se incrementa 10

veces, y la fijación de nitrógeno aumenta también (70%), con respecto a los nódulos

control. La parte aérea, no transformada, no tiene cambios aparentes.

En la segunda, cuando se disminuyen los niveles de trehalosa (30%) al silenciar al

transcrito de la enzima responsable de la síntesis de trehalosa (PvTPS6c2), ni el número de

bacteroides ni la fijación del nitrógeno se ven alterados (comparando con los nódulos

control). Sin embargo, el peso seco y el área folial (parte de la planta no transformada)

disminuyen en un 30%, una relación directamente proporcional al decremento de los

niveles de trehalosa del nódulo.

Ambos resultados sugieren que los niveles de trehalosa son importantes para regular los

flujos del carbono durante la simbiosis de frijol con Rhizobium. El incremento regula a la

proliferación bacteriana y la fijación de nitrógeno. Por el contrario, la disminución de los

niveles de trehalosa en el nódulo, impactan negativa y proporcionalmente al desarrollo de la

parte aérea de la planta. Este trabajo es parte de la tesis doctoral de Aarón Barraza-Celis

quien obtuvo el grado a principios de 2013.

• El segundo sabor es de Tuti-fruti:

(Nodulin 41 expression in early stages of symbiosis and cellular localization in transgenic

root nodules)

La PvNod41, una proteasa “atípica”, que pertenece a un clado de proteasas que no se

acumulan en vacuolas, que tienen una región amino-terminal 100 AAs que se procesa y en

su sitio activo dos residuos de aspártico. Estas aspartil-proteasas participan en funciones

Page 21: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

como son la muerte celular, el ciclo celular y la defensa contra patógenos. También, a este

clado pertenece la Nepensina, una proteasa que se encuentra en las plantas carnívoras del

género Nepenthes (Nepenthes attenboroughii). El ortólogo de PvNod41 es la preteasa

AtCDR1, una proteasa extracelular de Arabidopsis. La ganancia de función de AtCDR1

(Constitutive Defense Response) induce plantas enanas, moradas y resistentes a

Psudomonas syringae ya que tienen la defensa inducida constitutivamente y producen en

exceso antocianinas. Los niveles de proteína y de transcritos de esta enzima se encuentran

acumulados sólo durante la ontogenia de los nódulos (nodulina tardía) de P.vulgaris

(Olivares et al, 2011). Dado que por inmuno-localización la detectamos en el citoplasma de

las células no-infectadas (Rhizobium) del nódulo, propusimos que su función estaba

relacionada con restringir la infección de Rhizobium, permitiendo que sólo aquellas células

del nódulo donde se expresara fueran inmunes a la infección bacteriana. Lo sabroso surge

cuando estudiamos, en raíces transgénicas de frijol, el patrón de expresión de la región

regulatoria de PvNod41 fusionada a la quimera GFP-GUS (pPvNod41::GFP-GUS). El

promotor se encuentra activo en la zona apical de la raíz y en el cilindro central (haces

vasculares) sólo cuando las raíces son inoculadas con Rhizobium. También se expresa sólo

en los pelos radicales infectados por Rhizobium y en las células inmediatamente debajo de

los hilos de infección. La expresión es muy localizada por lo que previamente no pudimos

detectar la expresión por western-blot y northern-blot. Revisando la literatura encontramos

que el transcrito se encuentra acumulado tempranamente en transcriptomas de mutantes de

leguminosas super-nodulantes. Las raíces con las plantas de frijol con pérdida de función

de PvNod41 no tienen nódulos y el avance de los hilos de infección está arrestado en los

pelos radicales. Ahora, nuestras hipótesis de trabajo son que su función está relacionada

con la formación de un péptido que promueve el crecimiento y la dirección del hilo de

infección en el cortex de la raíz, independientemente de la función en las etapas tardías del

nódulo (fijación del nitrógeno) y la senescencia.

Carteles

1. Autophagy is essential for a successful Phaseolus vulgaris-Rhizobium symbiosis.

Presentado por Neftaly Cruz-Mireles.

Page 22: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

2. Bax inhibitor-1 (PvBI) has a key role during the Rhizobium etli-Phaseolus vulgaris

interaction. Presentado por Alejandrina Herández

3. Trehalose is a key carbon regulatory player in the legume-Rhizobium symbiosis.

Presentado por Federico Sánchez.

Page 23: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

Miércoles 11 de Diciembre

9:00 Grupo Dr. Joseph Dubrovsky

“Meristemo apical de la raíz: del mantenimiento a agotamiento”

Plasticidad en el desarrollo de plantas tiene importancia adaptativa. En el sistema radical

existen estrategias de mantenimiento (M) del meristemo apical o de su completo

agotamiento (A). El programa M precede el programa A, sin embargo, es poco conocido

como está regulada la transición del estado M a A. Presentaré algunos resultados obtenidos

en el grupo que permitan entender cómo funcionan programas M, A y la transición M → A.

Abordamos estos problemas con dos enfoques: (1) RNA-seq de muestras de la raíz primaria

de cactáceas con el crecimiento determinado en diferentes etapas del desarrollo (ver Poster

1) y (2) identificación de genes afectados en las mutantes de Arabidopsis thaliana obtenidas

por la mutagénesis química. Encontramos que para llevar a cabo el programa M es esencial

mantener la actividad de células troncales en el meristemo apical de la raíz. Analizando las

mutantes mko1 y mko2/fgps1, demostramos por primera vez que vías metabólicas pueden

participar en el control de la transición M --> A. En estas el programa de desarrollo A se

enciende pronto después de germinación. Una mutante está afectada en el gen de

TREONINA SINTASA 1 (TS1) y la otra en el gen de FOLIL-POLIGLUTAMATO

SINTETASA1 (FPGS1). Aparentemente, estas vías de mantenimiento del meristemo apical

son independientes de los módulos conocidos de regulación de actividad de nicho de

células troncales en la raíz (SHR-SCR, PLETHORA, WOX5). También demostramos que

ARABIDOPSIS HOMOLOG OF TRITHORAX (ATX1), (ver Poster 2), TS1 y FPGS1 son

esenciales para la morfogénesis de los primordios de las raíces laterales.

Carteles

1. Explorando la persistencia, el origen evolutivo y la regulación genética del

crecimiento determinado de la raíz en Cactaceae. Presentado por Dra. Svetlana

Shishkova

2. Arabidopsis homolog of TRITHORAX (ATX1) se requiere para la morfogénesis del

primordio de la raíz lateral. Presentado por M. en C. Selene Napsucialy Mendivil

Page 24: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

9:35 Grupo Dr. Omar Pantoja

“TricOMES, estudios para entender la fisiología de las células vejiga de

Mesembryanthemum crystallinum”

Los tricomas son células diferenciadas que se encuentran en la epidermis de los órganos

aéreos de casi todas las plantas. Los tricomas varían tanto en morfología como en función.

Se ha demostrado que tienen un papel importante en la defensa de la planta a ataques por

patógenos, tolerancia al estrés en general, acumulación de agua, dispersión de las semillas y

en la estructura de las hojas. Los tricomas pueden ser uni- o multi-celulares con una

variedad de formas desde alargadas, esféricas o apéndices complejos. Se clasifican como

tricomas no secretores o glandulares secretores, estos últimos secretando una diversidad de

substancias que incluyen compuestos lipofílicos, proteínas, iones, azucares, metabolitos

secundarios, etc. Las halófitas, plantas tolerantes a la salinidad, han desarrollado diferentes

tipos de tricomas que como las glándulas bi- o multi-celulares de las plantas de la familia

Poaceae que excretan continuamente a la sal o tricomas no glandulares llamados células

vejiga de la epidermis que pueden estar conectadas a la epidermis via las células del tallo

como en las Chenopodiaceae, o diferenciarse del resto de las células epidérmicas como en

Mesembryanthemum crystallinum.

Las células vejiga de la halófita M. crystallinum están presentes durante todos los estados

de desarrollo de la planta, sin embargo, su morfología depende de la edad y del estado

metabólico de la planta, permaneciendo comprimidas en la epidermis de los órganos aéreos

de plantas no estresadas, pero aumentando de tamaño hasta ocupar cerca del 25% del

volumen de la planta cuando las plantas se exponen a la salinidad. Las células vejiga

funcionan como almacenes de agua y sodio, alcanzando concentraciones cercanas a 1 M de

Na en las células vejiga que rodean a las flores. Recientemente, hemos desarrollado una

técnica para la obtención de la savia celular de las células vejiga para entender la

especialización funcional de estas células únicas

Con el objetivo de entender el papel fisiológico de las células vejiga en M. crystallinum, se

ha realizado un análisis del perfil proteómico que ha demostrado que estas células son

importantes en el almacenamiento del Na y en la homeostasis del agua, así como en la

Page 25: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

acumulación de antioxidantes y proteínas relacionas con la protección a la luz ultravioleta

o para la defensa en contra de patógenos. Para obtener mayor información sobre la

fisiología de las células vejiga en la respuesta a sal, también se realizaron análisis

proteómico cuantitativo y metabolómico mediante LC-MS/MS y GC/MS. Además ARNseq

nos ha permitido caracterizar las respuestas dependientes de la salinidad sobre la actividad

transcripcional. La integración de la información proteómica, metabolómica y

transcriptómica nos permitirá obtener una visión más clara sobre la fisiología de estas

células especializadas.

1. Caracterización electrofisiológica de mutantes puntuales del transportador

AMT1;1 de Phaseolus vulgaris. Delia Narváez Barragán y Omar Pantoja

10:10 Grupo Gustavo Pedraza

“Diferentes hechizos para bloquear la magia de Merlín”

En el consorcio de neuroinmunobiología estamos interesados en entender los mecanismos

moleculares que regulan la comunicación entre el sistema nervioso central y el sistema

inmune en condiciones homeostáticas y como estos mecanismos de comunicación se

alteran en diferentes patologías. Hemos enfocado nuestros esfuerzos a entender como un

proceso inflamatorio crónico de baja intensidad modula las funciones del sistema nervioso

central y viceversa; como la estimulación somatosensorial modula la respuesta

inflamatoria, ya que en los últimos años se ha demostrado que la inflamación crónica es el

factor común en enfermedades aparentemente no relacionadas, como diferentes neuropatías

(Enfermedad de Alzheimer, Huntington, Esquizofrenia) diabetes y cáncer.

Específicamente, esta ocasión hablare de los procesos moleculares que regulan

negativamente al supresor de tumores Merlín durante el proceso de transformación celular.

La mayoría de los tumores derivados del sistema nervioso central se han asociado con

mutaciones en el gen NF2, el cual codifica para la proteína Merlin (Moesin Ezrin Radixin

like-Protein). Merlin es un importante supresor de tumores cuyas funciones incluyen, el

control del número y motilidad celular en diferentes tejidos. Por tanto, no es sorprendente

Page 26: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

que además de mutaciones en la línea germinal o mutaciones somáticas, existan

mecanismos adicionales de inactivación de Merlin que resulten en tumores de diferentes

orígenes. Se sabe que en respuesta a señales mitogénicas inducidas por distintos factores

de crecimiento, la cinasa de tirosinas PAK fosforila a Merlin lo que induce un cambio

conformacional que la inactiva. De igual manera, la activación de la vía de AKT como

resultado de la actividad sostenida de receptores de tirosina cinasas conlleva a la

fosforilación de Merlin en residuos específicos y a su degradación via proteosoma. Además

de mutaciones deletéreas o modificaciones postraduccionales, la actividad de los supresores

de tumores también puede ser modulada negativamente por microRNAs (miRNAs). En

este sentido se ha demostrado que la expresión de ciertos miRNAs se encuentra

desregulada en tumores derivados del sistema nervioso central sin embargo, hasta el

momento no se han descrito miRNAs que regulen la expresión de Merlin y su implicación

en el desarrollo de tumores. Nuestros datos muestran que Merlin es blanco de diferentes

miRNAs y que la regulación de Merlin por el miR-146a favorece el proceso de

transformación celular y metástasis. Proponemos que los miRNAs que regulan

negativamente a Merlin son mediadores importantes de los efectos que la inflamación

ejerce sobre el proceso de transformación celular.

Carteles

1. Inflamasomas: guardianes de la homeostasis. Lourdes Álvarez, Laura Valdez, Itzia

Jimenez, Cesar Cortéz, Carlos Pérez, Elisa Medrano, Alejandro Costets, Oswaldo

López, Martha Pedraza, Leonor Pérez y Gustavo Pedraza

2. La conversación entre el Sistema Nervioso Central y el Sistema Inmune para

restablecer la homeostasis ante un proceso inflamatorio. Sol Díaz de León, Tomas

Villaseñor, Gustavo Pedraza y Leonor Pérez

3. El gobierno de la maquinaria celular por el patógeno, para el patógeno. Tomas

Villaseñor, Rafael Maldonado, Virginia Barajas, Leonor Pérez y Gustavo Pedraza

11:55 Grupo Dr. Mario Zurita

“TFIIH: su dinámica y papel en la diferenciación celular en Drosophila”

Page 27: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

Mi grupo de investigación tiene 14 años trabajando con el factor de transcripción y

reparación del DNA TFIIH, entre otros proyectos. Sin embargo nos sigue sorprendiendo y

aportando información relevante para entender los procesos en los que esta involucrado.

TFIIH esta constituido por 10 subunidades, es un componente del complejo de pre-inicio de

la transcripción por la RNA polimerasa II y participa en el mecanismo de reparación del

DNA por escisión de nucleótidos. En esta presentación mostrare el análisis in vivo de la

dinámica de este complejo en las fases más tempranas del desarrollo embrionario en

Drosophila y las implicaciones que tiene en la activación de la transcripción en el embrión

así como la sincronización y estabilidad del aparato mitótico. También mostraré el efecto

que causa la falta de TFIIH sobre la diferenciación celular durante la espermatogénesis de

Drosophila así como el efecto que causan a nivel global sobre la expresión genética

mutaciones en algunas de las subunidades de TFIIH.

Carteles

1. The ATRX gene is separated in Drosophila: description of the xnp2 gene. Brenda

López-Falcón, Silvia Meyer-Nava, Daniel Montero, Benjamín Hernández, Mario

Zurita and Viviana Valadez-Graham

12:30 Grupo Dr. José Luis Puente

“Regulación y función de factores de virulencia en bacterias enteropatógenas”

En el laboratorio estamos interesados en el estudio de patógenos bacterianos entéricos

causantes de enfermedades gastrointestinales y sistémicas. Salmonella enterica es el agente

causal de la salmonelosis o de infecciones sistémicas como la fiebre tifoidea. Escherichia

coli enteropatógena (EPEC) es uno de los principales agentes causales de diarrea en niños

menores de 6 meses, mientras que E. coli enterohemorrágica (EHEC) puede causar colitis

hemorrágica que con frecuencia deriva en el síndrome urémico hemolítico, el cual puede

ser fatal. Estas bacterias inducen una lesión denominada de adherencia y destrucción

(Attaching and Effacing Lesions, A/E), caracterizada por la unión íntima de las bacterias a

las membranas de los enterocitos. En los últimos años hemos explorado la virulencia de

Page 28: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

estos organismos desde diferentes ángulos, con un particular enfoque en el estudio de los

mecanismos que regulan la expresión de genes contenidos en islas de patogenicidad y en la

descripción de las redes reguladoras que se integraron para regular genes que fueron

adquiridos por transferencia genética horizontal (HGT). Las bacterias A/E son un ejemplo

de dicha integración, donde la expresión de los genes del LEE es regulada por una compleja

cascada que involucra diversos reguladores transcripcionales positivos y negativos, tanto

específicos de estos patógenos (Ler, GrlA, GrlR y PerC), como globales (H-NS e IHF, entre

otros). Estamos también explorando si los paradigmas establecidos mediante el estudio de

estos mecanismos en cepas prototipo son confirmados estudiando los mismos procesos en

aislados clínicos, los que interesantemente no necesariamente tienen el mismo

comportamiento revelando mecanismos alternos. Así mismo, estamos explorando el papel

que juega para un patógeno intestinal contar con un repertorio amplio de operones

fimbriales y la diversidad de mecanismos que controlan su expresión. A su vez, estamos

descifrando una intricada y novedosa red de regulación que modula y conecta la expresión

de las dos islas más importantes de patogenicidad que son responsables de la capacidad que

tiene Salmonella de invadir y replicarse en células tanto fagocíticas como no fagocíticas.

Carteles

1. Diversidad del plásmido de virulencia pEAF de Escherichia coli enteropatógena

(EPEC). Presenta Claudia Silva (coautores Crispín Zavala-Alvarado, Carmen

Contreras, Carolina Yáñez-Domínguez and José Luis Puente).

2. Regulación y análisis funcional del operón cfbABCD de Citrobacter rodentium.

Presenta Gustavo Caballero (coautores Verónica I. Martínez, Víctor H. Bustamante

y José Luis Puente)

3. Papel de IHF en la regulación transcripcional del operón ecp de Escherichia coli

enteropatógena y enterohemorrágica. Presenta Verónica I. Martínez (coautores

Abraham Medrano-López and José L. Puente)

Page 29: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

Jueves 12 de Diciembre

9:00 Grupo Enrique Reynaud

“Crónicas mutantes, nicotina y monstruos”

En mi laboratorio estamos interesados en entender las bases genéticas del desarrollo y el

funcionamiento del sistema nervioso de los animales superiores. Nuestro modelo de estudio

es la mosca de la fruta, Drosophila melanogaster ya que desde el punto de vista ontológico,

genético y celular recapitula la mayoría de los procesos relevantes del desarrollo de del

sistema nervioso de todos los animales. Además, este pequeño insecto presenta un

repertorio conductual estereotípico muy diverso y sofisticado lo que permite explorar las

bases genéticas del comportamiento.

En humanos, tener una sensibilidad mayor o menor a la de la población normal a una droga

determinada correlaciona positivamente con un mayor riesgo de adicción. La mosca de la

fruta se ha utilizado para identificar genes y vías metabólicas asociadas a cambios de

sensibilidad a drogas tales como la cocaína, el alcohol y la nicotina. Nosotros decidimos

buscar líneas de Drosophila que presenten hipersensibilidad a concentraciones sub-letales

de nicotina. Con esta estrategia logramos aislar dos líneas mutantes que son hipersensibles

a esta droga. Una de estas mutaciones causa la sobre-expresión ectópica del “cluster

mir310” de miRNAS. La otra causa la perdida de función del gen escargot que codifica

para un factor transcripcional indispensable para el desarrollo del ectodermo y la

diferenciación neuronal. Interesantemente escargot es uno de los genes blanco de los

miRNAs. En este trabajo caracterizamos el fenotipo las mutaciones asociadas a escargot y

su interacción con los miRNAs. Así mismo, exploramos los mecanismos que causan la

hipersensibilidad a la nicotina.

Carteles

1. Efectos del estrés oxidativo en la interacción dinámica de α-sinucleína y Sinfilina

en modelos de la Enfermedad de Parkinson.

2. Identificación y caracterización de genes involucrados en la percepción y

procesamiento de señales nociceptivas en Drosophila melanogaster.

Page 30: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

9:35 Grupo Dr. Enrique Rudiño

“Describiendo el movimiento electrónico en una oxidasa: cuando la difracción no genera

solo estructuras estáticas”

Las oxidasas multicobre (MCOs por sus siglas en ingles) son enzimas que contienen iones

cobre, los cuales tienen un papel central en la catálisis de estas enzimas, interviniendo en la

oxidación de diversos sustratos y generando una transferencia de electrones a un átomo de

oxígeno para su conversión en agua con la adición de protones, todo esto bajo un

mecanismo de reacción catalítica, que si bien ha sido profusamente estudiado en diversos

sistemas, aun no se encuentra caracterizado en su totalidad. Adicionalmente, es muy común

que las estructuras cristalográficas de las MCOs resulten en la pérdida, parcial o total, de

ocupación en uno o varios de los iones cobre. En nuestro grupo de trabajo se ha

determinado la estructura cristalográfica de la oxidasa multicobre de Thermus thermophilus

(MCO-Tth) (código PDB 2XU9). Sin embargo, la exposición a los rayos X produce

modificaciones específicas en la estructura: la ocupación de uno de los cuatro cobres

catalíticos en esta metaloenzima, el CuT2, está particularmente afectada, inclusive en dosis

de radiación absorbida muy bajas (0.7 MGy). Por lo tanto hemos explorado distintas

condiciones como el uso de moléculas radioprotectoras, el uso de líneas de alta energía en

fuentes sincrotrónicas, así como la atenuación en líneas estándar del flujo de rayos X. Todo

lo anterior con el fin último de preservar la ocupación de los cobres en estudios

cristalográficos en MCOs, particularmente del CuT2 en los cristales de la MCO-Tth.

La catálisis en metaloenzimas depende de la preservación de los metales, y al escindirlos

durante los experimentos de difracción de rayos X, pueden producirse cambios grandes o

sutiles en la estructura que pueden conducir a conclusiones biológicas equivocadas. Los

datos estructurales generados nos han permitido comprender de una manera más amplia el

mecanismo catalítico de este grupo de enzimas. Hemos logrado describir parcialmente el

mecanismo catalítico de la MCO-Tth, lo anterior utilizando solamente datos

cristalográficos y controlando la dosis depositada en los cristales. Sin embargo, la temprana

escisión del CuT2, debida a la susceptibilidad diferencial de los iones cobre en la MCO-Tth

ante la dosis de radiación depositada y a los flujos electrónicos concomitantes limitó el

análisis del mecanismo. Los resultados de nuestro trabajo muestran la complejidad del

Page 31: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

sistema, sin embargo se puede señalar que el proceso de daño a los CuT2 y T3´ es un

proceso multifactorial, el cual puede ser evitado mediante distintas estrategias; al reducir la

dosis de radiación depositada a valores inferiores a 0.3 MGy, mediante colectas de datos

con tiempos cortos, para así evitar el aumento en la probabilidad de daño secundario y

mediante la pre-reducción del sistema de cobres con agentes reductores. También se

plantea el hecho de que el sistema cristalino de la MCO-Tth pueda encontrarse protegido

del daño por radiación mediante el efecto de scavenger del MPD.

Carteles

1. Crystallographic and biochemical studies evidencing the dimeric formation in

solution of thioredoxin 1 from white leg shrimp Litopenaeus vannamei. Adam A.

Campos-Acevedo and Enrique Rudiño-Piñera.

2. Zo-peroxidase: crystal structure and sequence of a highly glycosylated peroxidase

resistant to hydrogen peroxide from japanese radish. Nizaá Jiménez-Arroyo,

Paloma Gil-Rodríguez, Sonia P. Rojas-Trejo, Brenda Valderrama and Enrique

Rudiño-Piñera.

3. Structural studies of the influenza virus neuraminidase: searching for a second

binding site to sialic acid. Ariadna Juárez Martínez and Enrique Rudiño Piñera.

10:10 Grupo Dr. Lorenzo Segovia

“Rediseño de dominios de proteínas”

La biotecnología ofrece diferentes alternativas para generar procesos “verdes”, es decir,

ambientalmente amigables. Una de las metas de la biotecnología moderna es diseñar

enzimas adecuadas para funcionar en condiciones particulares. La ingeniería de proteínas es

una de las herramientas modernas utilizadas para modificar sus propiedades cinéticas y

fisicoquímicas para procesos industrialmente interesantes. Sin embargo, se necesita de

mucha información a priori para poder diseñar o rediseñar a nivel molecular a una proteína.

En el laboratorio seguimos varios enfoques para conseguir modular las propiedades y

función de proteínas de interés. Además, desde el punto de vista científico, podemos

Page 32: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

aprender cómo es que la información contenida en la secuencia determina las propiedades

de las proteínas. Las modelos principales que estamos desarrollando actualmente en el

grupo son: la caracterización de proteínas para el aprovechamiento de residuos celulósicos

para la generación de biocombustibles, la biocatálisis con enzimas oxidoreductasas, la

evolución de la regulación genética en procariotes y la obtención de enzimas y proteínas

con nuevas propiedades a través de herramientas bioinformáticas. Todas estas lineas se

alimentan las unas de las otras a través de análisis cruzados.

Presentaremos los resultados obtenidos al momento sobre el análisis y rediseño de un

dominio Rossmann, uno de los dominios más abundantes en la naturaleza y en las bases de

datos. Estos se encuentran en proteínas con una amplia gama de actividades catalíticas,

tales como oxidoreductasas, hidrolasas, liasas e isomerasas fusionados a una gran variedad

de dominios de unión a sustrato (también conocidos como dominios catalíticos). Se han

encontrado dominios Rossmann en deshidrogenasas (NAD(P) Rossmann) en combinación

con dominios de 7 superfamilias distintas. Cada superfamilia de dominios catalíticos

conserva su posición, ya sea en el extremo amino o carboxilo de la proteína, embebido en el

dominio Rossmann o éste embebido en los catalíticos. Hemos hecho un análisis

comparativo de estos dominios con una herramienta bioinformática de análisis de

covariación la cual permite identificar residuos que coevolucionan. Estos pueden estar

involucrados tanto en la catálisis como en el plegamiento y en particular permite identificar

que residuos pueden estar involucrados en la especificidad por el cofactor. Estamos

utilizando esta información para rediseñar una Shikimato deshidrogenasa de modo a que

utilice NAD como cofactor en lugar de NADP. Otro de los intereses de nuestro grupo es

utilizar la modularidad tanto estructural como catalítica de los dominios para diseñar

nuevas combinaciones las cuales tuvieran nuevas propiedades enzimáticas. Para este fin

hemos diseñado un dominio Rossmann mas estable por ingeniería de consensos. Estamos

comparando sus propiedades tanto con un dominio natural como con proteínas quiméricas a

las cuales les hemos intercambiado dominios Rossmann.

Carteles

Page 33: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

1. Structure-Functional Analysis of Bacterial Expansins from Pectobacterium

carotovorum and Bacillus subtilis. Mendoza-Nuñez M., Olarte-Lozano M., Segovia

L., Martinez-Anaya C.

2. Inactivación suicida de una lacasa fúngica: el rol de los radicales fenólicos.

Ramírez J., Avelar M., Ayala M

10:55 Grupo Dr. Mario Soberón

“Dos pre-poros están involucrados en la toxicidad de la toxina Cry1Ab de Bacillus

thuringiensis”

Las toxinas Cry de Bacillus thuringiensis ejercen su actividad toxica a través de la

formación de poros líticos en la superficie de las células intestinales. En nuestro grupo

de investigación hemos propuesto un modelo del modo de acción que involucra la

activación proteolítica de la protoxina de Cry1Ab a una forma activa con una estructura

de tres dominios la cual interacciona en primer termino con proteínas membranales

ancladas por glicosil-fosfatidil-inositol (GPI) como fosfatasa alcalina y aminopeptidasa.

Proponemos que esta interacción aproxima a la toxina activa a la membrana de las

células intestinales donde interacciona posteriormente con una proteína tipo caderina la

cual facilita la eliminación de la hélice alpha-1 del amino terminal y la oligomerización

de la toxina. El oligomero o pre-poro gana afinidad por las moléculas ancladas por GPI

que facilitan su inserción a la membrana y la formación del poro lítico. En esta ocasión

presentare datos que muestran que la tanto la protoxina como la toxina de Cry1Ab

(activada con tripsina) unen con alta afinidad a la caderina y que dos pre-poros se

forman en solución dependiendo si la toxina activada o la protoxina interaccionan con

caderina. Estos pre-poros se distinguen por su sensibilidad a temperatura, su capacidad

de inserción a membranas sintéticas y en las características del poro que forman, donde

la probabilidad de apertura es muy diferente. Finalmente, el análisis de toxina

modificada Cry1AbMod, que es capaz de matar insectos resistentes, mostró que esta

mutante es capaz de formar oligomeros en ausencia de receptores a partir de protoxina,

pero es incapaz de oligomerizar a partir de toxina activada. Esta mutante pierde

Page 34: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

potencia en su actividad hacia algunos insectos sensibles lo que apoya que las dos

estructuras de pre-poro están involucradas en la toxicidad de Cry1Ab.

Carteles

1. Identificación de los receptores de la toxina Cry2Ab de Bacillus thuringiensis en

Manduca sexta. Meztlli Gaytán, Claudia-rodriguez Almazan, Alejandra Bravo y

Mario Soberón.

2. Producción eficiente de la toxinas Cry1Amod bajo el promotor de cry3A y

mutaciones puntuales de cisteina en la region de protoxina. Blanca Ines García,

Jorge Sanchez, Diana Escalante, Jorge Ibarra, Alejandra Bravo y Mario Soberón.

11:30 Grupo Dr. Xavier Soberón

“Ingeniería de proteínas del Sistema PTS y avances en diagnóstico molecular por

secuenciación masiva”

Hemos avanzado en la obtención de proteínas quiméricas a partir de enzimas involucradas

en la transferencia de fosfatos (Enzima 1, PEP sintasa) y obtuvimos evidencia preliminar de

algunas variantes funcionales. Esta investigación se centra en la exploración de las

superficies de contacto de las proteínas que transfieren el fosfato y sus efectos en la

especificidad. En una primera vertiente, obtuvimos evidencia, a través de “exploración

mutacional profunda” (mediante secuencia masiva) de los determinantes de especificiad en

14 residuos de la interfase de HPr (proteína transferidora de fosfato). En otra vertiente, se

sustituyó el dominio catalítico que une a fosfoenol piruvato (PEP) por otro que une ATP

para crear una Enzima 1 quimérica que sea capaz de auto-fosforilarse y transferir el fosfato

a HPr utilizando ATP en vez de PEP. Los primeros resultados se basan en las propiedades

de crecimiento en medio mínimo suplementado con manitol, en una cepa carente de

Enzima 1 silvestre. Ahí observamos construcciones que permiten el crecimiento, y cuyas

propiedades dependen de la secuencia del péptido conector inter-dominios así como de la

modificación de la interfase de la proteína cercana a la histidina funcional que transfiere el

fosfato.

Page 35: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

Se hará referencia también a los primeros proyectos de desarrollo de plataformas de

diagnóstico molecular por medio de secuenciación masiva, específicamente la exploración

de genes de resistencia a antibióticos en Mycobacterium tuberculosis en un sistema para

múltiples genes y múltiples pacientes, basado en secuenciación masiva y el empleo de “bar

coding”.

Carteles

12:05 Grupo Dr. Lourival Possani

“Péptidos y genes del veneno de alacranes y productos de investigaciones relacionadas”

En los últimos 39 años mi laboratorio ha trabajado de forma preponderante varios aspectos

que se refieren a los componentes del veneno de alacranes. Existen dos razones principales

que motivan este estudio: la importancia médica y el interés científico. La primera se debe

al elevado número de accidentes que ocurren anualmente (más de 280,000 de personas

picadas en México) necesitando atención, y el segundo porque durante los 400 millones de

la historia evolutiva de estos arácnidos ellos han tenido tiempo suficiente para desarrollar y

perfeccionar ligandos moleculares que reconocen receptores específicos y blancos

importantes de organismos pluricelulares. Estos ligandos interfieren con la comunicación

celular y son usados por el alacrán para subyugar sus presas o para defenderse de atacantes.

Algunos de estos componentes pueden eventualmente funcionar como modelos en el

desarrollo de posibles drogas con aplicación en medicina y farmacia. Las especies de

alacranes Mexicanos estudiadas fueron Centruroides tecomanus, Centruroides noxius,

Centruroides suffusus suffusus, Hadrurus gertschi y Vaejovis mexicanus. Las especies de

alacranes estudiadas de otros países fueron: Rhopalurus junceus y Rhopalurus garridoi de

Cuba, Tityus pachyurus, Tityus obscurus y Opisthacanthus cayaporum de Brasil, Urodacus

yaschenkoi de Australia, Androctonus crassicauda y Buthacus macrocentrus de Turquia y

Scorpio Maurus palmatus de Egipto. Otros animales venenosos de los cuales se purificaron

y estudiaron componentes fueron los gasterópodos marinos mexicanos: Conus delssertii y

Conus regularis, las arañas Brachypelma vagans de México y Acanthoscurria paulensis de

Brasil, y la serpiente Bothrops (Rhinocerophis) ammodytoides de Argentina. Entre los

Page 36: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

componentes más estudiados están péptidos que reconocen a canales iónicos, pero también

algunos péptidos con actividad microbicida. Estos estudios fueron realizados gracias al

establecimiento de una vasta red de colaboraciones, empezando con el trabajo de los

colegas Mexicanos enlistados en mi relación de personal adjunto, y de colegas del

consorcio con los Drs. Baltazar Becerril, Gerardo Corzo y Alejandro Alagón. El personal

académico y estudiantes de estos colegas jugaron un papel importante en este trabajo.

También la participación de investigadores extranjeros como la Dra. Elisabeth Schwartz de

Brasil, Drs. Gyorgy Panyi y Zoltan Varga de Hungría, Dra. Figen Caliskan de Turquia, Dr.

Mohamed Abdel-Rahman de Egipto, M.Sc. Karen Luna-Ramírez de Australia, para citar

solamente los más participativos, fue fundamental para la realización de este trabajo.

Muchos otros colegas de nuestro Instituto y de otras instituciones nacionales y extranjeras

participaron en este trabajo y sus nombres pueden ser encontrados en los artículos y

capítulos de libro publicados, así como en el enlistado de las patentes de invención del

laboratorio.

En los dos últimos años (2012-2013) mi grupo y colaboradores publicamos 33 artículos en

revistas indizadas, 3 capítulos de libro internacionales, seis patentes de invención

concedidas, dos sometidas y 4 tesis de estudiantes terminadas, así como la transferencia de

un desarrollo tecnológico a una compañía farmacéutica mexicana. Otro trabajo importante

relacionado fue el desarrollo de anticuerpos monoclonales utilizados como vectores para

fines de aplicaciones como vacuna, que será objeto principal de mi presentación oral este

año.

Carteles

1. Proteomic analysis of the secondary molecular response associated to the scorpion

toxin Cn2 on dorsal root ganglion. Autores: María Martha Pedraza Escalona, Rita

Restano Cassulini, Cesar F.V. Batista, Marisol Sandoval Rios, Lourival D. Possani.

El cartel será presentado por la Dra. Martha Pedraza, actualmente investigadora

asociada del grupo de la Dra. Leonor Pérez.

2. Mass fingerprinting of the venom and transcriptome of venom gland of scorpion

Centruroides tecomanus. Valdez-Velázquez, L.L., Quintero-Hernández, V.,

Page 37: SEMANA ACADÉMICA 2013 - UNAM · El alacranismo, es un problema de salud pública en México ya que anualmente se documentan más de 250,000 picaduras. El anti-veneno comercial (ALACRAMYN®,

Romero-Gutiérrez, M.T., Coronas, F.I.V., Possani, L.D. Será presentado por la

alumna de doctorado Teresa Romero Gutiérrez