syndromes lymphoprolifératifs et lnh de bas grade de malignité · 2014. 6. 17. · 3...
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Syndromes lymphoprolifératifs
et LNH de bas grade de malignité
DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE DES SYNDROMES LYMPHOPROLIFERATIFS
CHRONIQUES
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Les syndromeslymphoprolifératifs chroniques
Néoplasies B matures
Néoplasies T matures
Syndromes lymphoprolifératifs des immunodéprimés :
- déficits immunitaires primitifs
- lymphomes et VIH
- sd lymphoprolifératifs post-transplantation (PTLD)
- ...
Classification OMS deshémopathies lymphoïdes matures (1999)
Hémopathies lymphoïdes B•Leucémie lymphoïde chronique/ lymphome lymphocytique
•Leucémie prolymphocytaire B
•Lymphome lymphoplasmocytaire
•Lymphome splénique à ly villeux
•Leucémie à tricholeucocytes
•Lymphome de la zone marginale
nodal ou extranodal
•Lymphome du MALT
•Lymphome folliculaire
•Lymphome du manteau
•Lymphome B diffus à grandes cellules
• … Diebold J. Hématologie
Hémopathies lymphoïdes T•Leucémie prolymphocytaire T
•Leucémie à LGL (grands lymphocytes granuleux)
•Syndrome de Sezary
•Leucémie/lymphome T de l’adulte
•Lymphome T angioimmunoblastique
•Lymphome anaplasique à grandes cellules
• …
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Classifications histologiques
• Architecture du ganglion
• Origine de la cellule tumorale (cytologie+ marqueurs)
• Analyse cytogénétique ( t 11-14, t 14-18, t8-14)
• Analyse moléculaire (Bcl2, Bcl1, C myc…)
Représentation schématiqued’un follicule secondaire
Modifié d’après P. Felman & O. Gentilhomme. Atlas de cytopathologie ganglionnaire. Eds Arnette. 1997
Sinus périphérique
Zone corticale profonde
ZONE MARGINALElymphocytes B
mémoires
ZONE DUMANTEAU
petites cellules Bnaïves
CENTREGERMINATIF Zone sombre
Prolifération
Zone claire basaleSélection (apoptose)
Zone claire apicaleSurvie =>
C mémoire ou plasmocytes
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Centre germinatif
Zone du manteau
Zone interfolliculaire
Ganglion lymphatique
Correspondance entre les cellules lymphoïdes B humaines et leur contrepartie lymphomateuse
Lymphomedu manteau
LLC-B
LAL
Myélome multiple
?
Lymphome B monocytoïdeLymphome du MALTSLVLLLC-BLeucémie à tricholeucocytes ?Leucémie prolymphocytaire ?
Lymphome folliculaireLymphome de BurkittLymphome diffus à grandes cellules
Plasmo-cyte
MUTATIONS SOMATIQUES DES REGIONS VARIABLES DES IgHSANS MUTATION DES REGIONS VARIABLES DES IgH
Progé-niteur
B
CelluleB naïve
CelluleB CD5+
Cellule B mémoire
ZONE DUMANTEAU
CENTREGERMINATIF
Mutations somatiques
Commutation de classe
Prolifération
SélectionPlasmocyte
Cellule B du CG
Cellule B
du CG
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Diagnostic des syndromes lymphoprolifératifs
Un diagnostic multidisciplinaire …
– Clinique
– Radiologique
– Anatomo-pathologique
– Biologique
• Hématologie : cytologie, immunologie, cytogénétique, moléculaire
• Biochimie
–…
Les différents examens biologiquesdans le diagnostic des SLPC
1- Morphologie : - Cytologie :
-sanguine : leucémies / lymphomes leucémisés
Hyperlymphocytose > 4 000 ly/mm3 et/ou lymphocytes pathologiques
- médullaire (ponctions, empreintes de BOM)
Infiltration lymphoïde > 30% et/ou lymphocytes pathologiques
-ganglionnaire (ponctions, empreintes de biopsie)Valeur d’orientation des cytoponctions ganglionnaires, à confirmer histologiquement +++
- liquide de ponctions …
- Histologie : indispensable au diagnostic de lymphome
- ganglionnaire
- médullaire : lymphomes médullaires, bilan d’extension
- autres tissus : digestifs, cutanés, ORL, …
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Leucémie lymphoïde chronique (LLC)
Frottis sanguin
MGG
Leucémie prolymphocytaire B
(Site Tribvn)
Frottis sanguin
MGG
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Leucémie à tricholeucocytes
DU Oncologie, avril 2005
Morphologie :
(Site Tribvn)
Frottis sanguin
MGG
Lymphome folliculaire
(Site Tribvn)
Frottis sanguin
MGG
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Proliférations clonales T
Classification morphologique :
Syndrome de Sézary Lymphome T de l’adulte (HTLV1)
Leucémie prolymphocytaire TLeucémie à LGL
(Site Tribvn)
2- Immunophénotypage lymphocytaire :Permet la mise en évidence d’antigènes cellulaires (membranaires, intra-cytoplasmiques ou nucléaires). Antigènes clusterisés en « CD »
- Cytométrie de flux :Marquage des cellules par des anticorps monoclonaux fluorescents.
Analyse des caractéristiques individuelles de chaque cellule d’une suspension cellulaire, lors de son passage à travers un faisceau LASER
=> Information sur la taille, la structure et la fluorescence de la cellule, proportionnelle à l’expression de l’antigène testé
Les différents examens biologiquesdans le diagnostic des SLPC
SangMoelleparfois ganglion
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Leucémie lymphoïde chronique (LLC)
DU Oncologie, avril 2005
Immunophénotypage :
Population monotypique lambda de faible intensité CD5/CD23+, FMC7-, CD79b faible
Lambda PE
Ka
ppa
FIT
C
CD
19 P
erC
P C
y 5.
5
CD
19 P
erC
P C
y 5.
5
CD
19 P
erC
P C
y 5.
5
CD
19 P
erC
P C
y 5.
5
CD
19 P
erC
P C
y 5.
5
CD5 APC
FMC7 FITC
CD23 PE
CD79b PE CD38 PE
Mean de fluorescence = 103
(M. Legarff)
Leucémie lymphoïde chronique (LLC)
DU Oncologie, avril 2005
Immunophénotypage : indispensable au diagnosticprolifération CD19+, CD5+, CD23+, CD79b– ou de faible intensité, Ig Kappa ou Ig Lambda de surface de faible intensité (restriction monotypique)
Score de Matutes (1994) :
Prolifération B (CD19+),
clonale :
- scores 4 et 5 = LLC
- scores 0, 1 et 2 ≠ LLC
- score 3 : LLC atypiques ?
Autres marqueurs :
- CD10- - CD38+/-
- CD25- - ZAP-70 +/-
0 1
CD5 + -
CD23 + -
FMC7 - +
CD79b/CD22 - ou faible FORT
IgS faible FORT
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DU Oncologie, avril 2005
Immunophénotypage des hémopathies lymphoïdes chroniques B
Marqueurs LLC LPL HCL HCL-V SLVL MCL FL MZL
Intensité des Ig de surface
faible forte forte forte moyenne forte moyenne/forte
moyenne/forte
CD19 + + + + + + + +
CD22 - + + + + + + +
CD23 + - - - +/- - +/- -
FMC7 - + + + + + + +
CD5 + +/- - - +/- + - -
CD10 - +/- - - - - +/- -
CD25 +/- - + - - - +/- +/-
CD11c +/- - + + + - +/- +/-
CD103 - - + + - - - -
CD79b - + + + + + + +
+ = positif dans la majorité des cas ; +/- = positif dans la minorité des cas ; - = négatif dans la majorité des cas
LLC : Leucémie lymphoïde chronique LPL : Leucémie prolymphocytaire
HCL : Leucémie à tricholeucocytes HCL-V : Forme variante de HCL
SLVL : Lymphome splénique à lymphocytes villeux MCL : Lymphome du manteau
FL : Lymphome folliculaire MZL : Lymphome de la zone marginale
Proliférations clonales T
Classification immunologique :
Proliférations de cellules T matures CD3+ TCR+
Marqueurs communs : CD3, CD2, CD5
Autres marqueurs : CD4, CD8, CD25, CD56
DU Oncologie, avril 2005
LGL-T LGL-NK LP ATL Sézary
CD3/TCR + - + + +
CD2 + + + + +
CD5 + - + + +
CD4 - - + + +
CD8 + - - - -
CD25 - - - + -
CD56 - + - -
LGL : Large granular lymphocyte, NK : Natural Killer, LP : Leucémie prolymphocytaire,
ATL : Adult T Leukemia/Lymphoma
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2- Immunophénotypage lymphocytaire :- Techniques immuno-histochimiques :Sur coupes de tissu
Réalisées par les anatomo-pathologistes
Les différents examens biologiquesdans le diagnostic des SLPC
CD20 CD3
(Photos : F. Charlotte)
CD20
Bcl-2
CD3
Ganglion lymphatique
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Petits lymphocytes ( )
prolymphocytes ( )
Lymphome lymphocytique
CD20+
CD5+
CD23+
CD10-
Immunophénotype
Expression de Bcl-2
Hyperplasie folliculaire LNH folliculaire
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3- Cytogénétique :- Conventionnelle : caryotype
analyse tout le génome
Ex. t(14;18)
- Moléculaire : FISH « Fluorescent In-Situ Hybridization »
ne détecte que les anomalies recherchées
Les différents examens biologiquesdans le diagnostic des SLPC
http://www.infobiogen.fr/services/chromcancer/Anomalies/t1418ID2006.html
BCL2, 18q21, green
14q32.3, red,
4- Biologie moléculaire : PCR « Polymerase Chain Reaction »
•Détection moléculaire d’une population lymphoïde clonale :
=> Réarrangement des gènes des chaînes lourdes des Immunoglobulines et du TCR gamma
Les différents examens biologiquesdans le diagnostic des SLPC
VH
Gènes IgH réarrangés
RECOMBINAISON D-J
RECOMBINAISON V-D-J
1 2 3 4 5 n 1 2 3 4 n
123456
Configuration germinale des gènes IgH
JH
Leukemia (2003) 17,2257−2317.
!!! défaut possible d’informativité si hypermutations somatiques +++
=> toujours analyser un pvt tumoral
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4- Biologie moléculaire : PCR « Polymerase Chain Reaction »
•Détection de réarrangements génomiques :
Ex. : IgH-Bcl2 équivalent de la t(14;18)
IgH-Bcl1 équivalent de la t(11;14)
Tous ne sont pas analysables par PCR :
ex. réarrangements de c-Myc
•Détection de l’hyperexpression de la cycline D1 :
PCR quantitative sur cDNA (après rétro-transcription de l’ARN)
Prélèvements analysables :
sang, moelle, ganglions, tissus, liquide de ponction, ...
Les différents examens biologiquesdans le diagnostic des SLPC
Programme
• Leucémie lymphoïde chronique
• Autres syndromes lymphoprolifératifs chroniques
• Cas Cliniques