técnicas de citogenética

7/21/2019 Técnicas de Citogenética

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TÉCNICAS DE

CITOGENÉTICA

Herramientas Moleculares de la Genética M(Té



La citogenética es la parte de la genética que estuapariencia microscópica de los cromosomas y

anomalías en la enfermedad.

Citogenética Convencional

definir distintas entidades

comprender los mecanismos

implicados en su patogenia



Baja sensibilidad

Requiere células en

neoplásico

Interpretación dific

obtener cromosoma

Permite el análisis d

células

VENTAJAS LIMITACIONES

Aporta información de todos los

cromosomas

Bajo coste económico



• Obtencin de Muestra

• Estimulacin con !ITOHEMAG"#TININA

• Adicin de CO"CHICINA$ a%& blo'& ol& HusoAcromtico*lo'& Mitosis en +ro,ase-Meta,ase

• Administracin de una Solucin Hiotnica(.Cl)

• !i/acin en Sol& de Alco0ol Metilico-1cd&Acético (234)

• "a5ado 0asta un botn blanco$ 5olumen

• 9 usada GTG$ con Trisina : coGiemsa

• "aminilla limia& Sol& Alco0licaMetanol <= a TA• Goteo (2) a ?7-?8 cm sobre el

• @eoso or 2 mn$ en ael absoA%ua 27 C

• Obser5acin a seco ,uerte$ Bdiscromosmica

• Maduracin 2 C or ? 0rs o



Indicaciones Clínicas pAnálisis Cromosómico

Problemas precoces en el crecimiento y desarrollo

Nacidos Muertos y Muerte Neonatal

Problemas de Fertilidad

Nacidos Muertos y Muerte Neonatal

Problemas de Fertilidad

Historia Familiar

Neoplasia

mbara!o de una mu"er de edad a#an!ada



Metodología (Bandeo) ÚtiDiagnóstico de la MayoríaAlteraciones Cromos

Numéricas y structurales



"

!an"a# $

M$s %tili!adas

"os cromosomas se tratan rimero con Trisina aroteFnas$ : desués con Giemsa& Cada ar de crtie de una ,orma caracterFstica de bandas clar

(*ANDAS G)&

Se identi6can totalmente todos los cromosomas$ asnaturalea de las anomalFas numéricas : estructura

l colorante interact&a con las proteínas de cromosoma'

en grupos disulfuro en las bandas positi#as (oscuras)

sulf*idrilo en las negati#as (claras)' las bandas + oscura

con las cromómeras del paquiteno' que se presentan en,N- de replicación tardía' con alto contenido de -denina

relati#amente pocos genes acti#os



"

!an"a# $

M$s %tili!adas

"os cromosomas se tratan rimero con Trisina aroteFnas$ : desués con Giemsa& Cada ar de crtie de una ,orma caracterFstica de bandas clar(*ANDAS G)&

Se identi6can totalmente todos los cromosomas$ as

naturalea de las anomalFas numéricas : estructura



B!an"a# C

Hidrido de *ario teido con Giemsa

Se basa en la desnaturaliacin : renaturaliacin dcromosmico

Tie de ,orma selecti5a la #eterocromatina consde los centrmeros3 4'$ ;' : 4<'$ arte distal de J'

Ktil ara in5esti%ar rearre%los cromosmicos cre%iones ericentroméricas$ olimor6smos marcadores&



C

Intercam%io "e Crom&ti"e# 'ermana#

Obser5acin de un cromtide clara : otra oscura (C

en ciertas re%iones cromosmicas$ 0a: 'ue estanda

9 ICH uede indicar >S de *loom o esosicin a ael DNA

A los culti5os de lin,ocitos u otras células durrelicacin se le a%re%a un anlo%o de base la desoiuridina)$ durante dos ciclos ms

Se cosec0a de la ,orma 0abitual : se de/a acuorescente de Hoec0st se tratan con una solucineonen a lu ultra5ioleta (#) -lmara %ermici(?8 nanmetros)-

Tincin con Giemsa&



C

Intercam%io "e Crom&ti"e# 'ermana#

Obser5acin de un cromtide clara : otra oscura (C

en ciertas re%iones cromosmicas$ 0a: 'ue estanda9 ICH uede indicar >S de *loom o esosicin a ael DNA

A los culti5os de lin,ocitos u otras células durrelicacin se le a%re%a un anlo%o de base la desoiuridina)$ durante dos ciclos ms

Se cosec0a de la ,orma 0abitual : se de/a acuorescente de Hoec0st se tratan con una solucineonen a lu ultra5ioleta (#) -lmara %ermici(?8 nanmetros)-

Tincin con Giemsa&



&

(egione# Organi)a"ore# Nucleolare#

Genes ara @NA de tio ribosomal (r@NA) el nitraselecti5amente estas re%iones 'ue ,ueron transc

acti5a durante la inter,ase : resentes econdensados en la subsecuente meta,ase (acrocéntricos)

Estudio de los olimor6smos arentales : demostrar el ori%en de cromosomas marcasatelitados&



!an"a# *

Primera desarrollada para cromosomas *umanos' 4aspers

Ktiles ara detectar 5ariantes ocasionales de mor,olo%Fa o la tincin de los cromosomas$0eteromor6smo&

Di0idrocloruro de 'uinacrina o mostaa de 'uinacr

min$ se en/ua%a a la bre5edad en a%ua destilada&"a 'uinacrina se une al DNA : roduce un atruorescencia brillante : menos brillante (bandeo Gre%iones ericentroméricas de los cromosomas 4débilmente teidas& "os satélites de los acrocéntricodel cromosoma JP estn brillantemente teidas



!an"a# *

Primera desarrollada para cromosomas *umanos' 4aspers

Ktiles ara detectar 5ariantes ocasionales de mor,olo%Fa o la tincin de los cromosomas$0eteromor6smo&

Di0idrocloruro de 'uinacrina o mostaa de 'uinacr

min$ se en/ua%a a la bre5edad en a%ua destilada&"a 'uinacrina se une al DNA : roduce un atruorescencia brillante : menos brillante (bandeo Gre%iones ericentroméricas de los cromosomas 4débilmente teidas& "os satélites de los acrocéntricodel cromosoma JP estn brillantemente teidas

( li i, "- " l /0 ! " (



y

(e+licaci,n tar"-a "el /0 !an"a (

@e%iones claras en esas técnicas son 5istas oscuras o

Obtencin incubando las laminillas en soluciones desués teidas con Giemsa

(colorante uorescente naran/a de acridina) 'ue alDNA : ecitada or la lu # de una lmara dmicroscoio con uorescencia$ roduce un atrn 5erde

st$ndar en caso de mal procedimiento en + o 6' ,utrillau

rearre%los 'ue in5olucren lostelmeros

( li i, t "- " l /0 ! " (



y

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@e%iones claras en esas técnicas son 5istas os

bandeo @PObtencin incubando las laminillas en solucicalientes : desués teidas con Giemsa

(colorante uorescente naran/a de acridiintercalarse en el DNA : ecitada or la lulmara de mercurio en un microscoio con

roduce un atrn de bandeo ro/o : 5erde

st$ndar en caso de mal procedimiento en + o 6' ,utrillau

rearre%los 'ue in5olucren lostelmeros

técnicas de citogenética

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