Identificao de enzimas respiratrias PRINCPIO O teste de oxidase baseado na produo intracelular da enzima oxidase pela bactria. UTILIDADE Ajuda a distinguir no fermentadores (oxidase positiva) de enterobactrias (oxidase negativa). FRMULA/ PRODUTO Reagente para teste de oxidase preparado no laboratrio: - N,N,N,N-tetrametil-p-fenileno diamina mono-hidrocloridrato 1g - gua destilada 100 ml PROCEDIMENTOS Para preparao do reagente para teste de oxidase: Pesar 1g. de N,N,N,N-tetrametil-p-fenileno diamina mono-hidrocloridrato em um copo de precipitao e adicionar 100 ml gua destilada, lentamente para no oxidar a soluo; 1) Colocar um papel de filtro em uma caixa de Petri e adicionar algumas gotas do reagente ao papel; 2) Deixar o papel de filtro absorver o reagente INOCULAO 3) Com auxlio de uma ana de plstico, espalhar a colnia a ser testada sobre o papel de filtro 4) Observar se h formao de cor roxa de imediato.

INTERPRETAO Cor original: branca ou levemente azulada Oxidase positiva: produo de cor roxa imediatamente no local da inoculao da bactria. Oxidase negativa: no h mudana da cor do papel no local da inoculao da bactria. No considerar alterao de cor tardia.

RECOMENDAES No fazer o teste de colnias de crescimento de meios que contenham glicose, a fermentao inibe a actividade da oxidase, podendo resultar em falso negativo. No fazer teste de oxidase de colnias de crescimento de meios selectivos. No usar ana inox ou agulha porque pode conter traos de ferro, podendo oxidar o papel de filtro e resultar em falso positivo. Os reagentes para o teste de oxidade, autooxidam-se rapidamente com o ar, perdendo a sensibilidade. No cortar o papel de filtro com tesoura, pois podem conter vestgios de ferro.