tipizacija hla moguĆih primatelja i darivatelja organa kod transplantacije solidnih organa
DESCRIPTION
TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA. Sanja Salamunović, dipl.ing.med.lab.diag. KLINIČKA JEDINICA ZA TIPIZACIJU TKIVA KLINIČKI ZAVOD ZA TRANSFUZIJSKU MEDICINU I TRANSPLANTACIJSKU BIOLOGIJU KBC-ZAGREB Zadar, 23.rujan 2011. TRANSPLANTACIJA?. - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
![Page 1: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/1.jpg)
TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA
ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA
Sanja Salamunović, dipl.ing.med.lab.diag.
KLINIČKA JEDINICA ZA TIPIZACIJU TKIVAKLINIČKI ZAVOD ZA TRANSFUZIJSKU MEDICINU I TRANSPLANTACIJSKU BIOLOGIJU
KBC-ZAGREB
Zadar, 23.rujan 2011.
![Page 2: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/2.jpg)
TRANSPLANTACIJA?
Unošenje stranog tkiva - organa davatelja u organizam primatelja u svrhu liječenja
Prema vrsti transplantata razlikujemo:
Transplantaciju nelimfatičnog tkiva (solidnih organa):
Bubreg, srce, jetra, gušterača, pluća, rožnica
Transplantaciju limfatičnog tkiva:
Koštana srž, krvotvorna matične stanice
![Page 3: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/3.jpg)
MALO POVIJESTI...
KBC-RIJEKA
1971. Prva transplantacija bubrega sa živog darivatelja 1972. Prva transplantacija bubrega sa umrle osobe Prof.dr.Vinko Frančišković i sur. 1971. Prva tipizacija antigena HLA Prof.dr.Ksenija Vujaklija - Stipanović
KBC-ZAGREB 1988. Prva transplantacija srca Prof.dr.Josip Sokolić i sur.
KBC – ZAGREB 1990. Prva transplantacija jetre Doc.dr.sc.Vuk Borčić i sur.
![Page 4: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/4.jpg)
....I JOŠ MALO
KB JORDANOVAC, 2002. Prva transplantacija pluća Prof.dr.sc.Zoran Slobodnjak i sur.
KBC- RIJEKA1993. Prva simultana transplantacija bubrega i gušterače Prof.dr.sc. Miomir Zelić i sur.
KB – MERKUR 2002. – Prva,simultana transplantacija jetre i bubrega Prof.dr.sc.Josip Pasini Dr.Stipe Jandrijević i sur.
![Page 5: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/5.jpg)
TRANSPLANTACIJA ORGANA U RH
26.05.2007.
RH PUNOPRAVNA ČLANICA EUROTRANSPLANTA
![Page 6: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/6.jpg)
EFI AKREDITIRANI LABORATORIJI U RH
UVJET ZA PRIHVAĆANJE LABORATORIJA U ET PROGRAM:
AKREDITACIJA EVROPSKE FEDERACIJE ZA IMUNOGENETIKU
(EFI AKREDITACIJA)
ZAGREB ( 22.05.2007.) KJ za tipizaciju tkiva, Klinički zavod za transfuzijsku medicinu i
transplantacijsku biologiju, KBC Zagreb
Referentni centar MZSS za tipizaciju tkiva
RIJEKA ( 12.09.2008.)KJ za tipizaciju tkiva, Klinički zavod za transfuzijsku medicinu, KBC Rijeka
![Page 7: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/7.jpg)
EFI AKREDITACIJA
![Page 8: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/8.jpg)
EUROTRANSPLANT ?
Najveća europska organizacija za transplantaciju organa
Obuhvaća regiju u kojoj živi 120 000 000 stanovnika
7 zemalja članica
Belgija, Njemačka, Hrvatska, Luksemburg,Nizozemska, Austrija i Slovenija
![Page 9: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/9.jpg)
EUROTRANSPLANT ?
Središte u Leidenu - Nizozemska
Povezuje transplantacijske centre, laboratorije i donorske bolnice u zemljama članicama
Povezujući donorski organ s primateljem ostvaruje se cilj - optimalno iskorištenje doniranih organa
Na središnjoj listi čekanja Eurotransplanta prijavljeno je oko 16 000 mogućih primatelja organa
Liste čekanja podijeljene su po organima (bubreg, srce, jetra, pluća)
![Page 10: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/10.jpg)
EUROTRANSPLANT - PREDNOSTI
Postojanje jedinstvenog donorskog identifikacijskog sustava
Velik broj donorskih organa (godišnje oko 7000)
Postojanje jedinstvene liste čekanja ( za svaki organ posebno )
Velik broj prijavljenih primatelja daje mogućnost odabira najpodudarnijeg donorskog organa
Povećavanje šanse hitnog dobivanja organa živitno ugroženim pacijentima
Udruženi stručnjaci svih članica izrađuju i poboljšavaju propise za raspodjelu (ALOKACIJU) donorskih organa
-
![Page 11: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/11.jpg)
RASPODJELA ORGANA U EUROTRANSPLANTU
Raspodjela organa se temelji na medicinskim i etičkim načelima vodeći računa o :
Krvnoj grupi HLA podudarnosti između darivatelja i primatelja Postotku senzibilizacije antitjelima HLA Vremenu provedenom na listi čekanja Dobi pacijenta, ako se radi o djeci Životnoj ugroženosti Nacionalnoj uravnoteženosti primatelja i darivatelja organa Svaki od navedenih parametara donosi određen broj bodova Najveći broj bodova donosi upravo HLA podudarnost
![Page 12: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/12.jpg)
CILJ DOBRE PODUDARNOSTI HLA
Imunološki predtransplantacijski cilj jespriječiti odbacivanje transplantata
Bolja podudarnost u alelima HLA – duže preživljavanje transplantata
![Page 13: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/13.jpg)
Manja nepodudarnost – duže preživljavanje transplantata
![Page 14: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/14.jpg)
ODREĐIVANJE HLA PODUDARNOSTI PRIMATELJA I DAVATELJA
Imunogenetski test
HLA TIPIZACIJA
To je određivanje polimorfizma alela HLA
laboratorijskim testovima
![Page 15: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/15.jpg)
SUSTAV HLA
Glavni sustav tkivne snošljivosti kod ljudi nazvan
Human Lekocitni Antigeni ( HLA )
Središnji dio svih imunoloških reakcija - sudjeluje u imunološkim zbivanjima prerade i predočavanja antigena limfocitima T
Sustav čine blisko vezani geni smješteni na kraćem kraku kromosoma 6
Obuhvaća ~ 0,1% ljudskog genoma (~4.000.000 pb)
To je najpolimorfniji genetski sustav u čovjeka
Poznato više od 3500 alela HLA razreda I i razreda II
![Page 16: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/16.jpg)
PODJELA GENA SUSTAVA HLA
Geni sustava HLA su podijeljeni na
RAZRED I
RAZRED II
Unutar razreda geni su podijeljeni na lokuse
RAZRED I (lokus A, B,C)
RAZRED II (lokus DR,DQ,DP)
![Page 17: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/17.jpg)
ZNAČAJ ODREĐIVANJA GENA HLA
presađivanja tkiva i organa povezanost s bolestimaantropološka istraživanjasudska medicina
![Page 18: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/18.jpg)
TIPIZACIJA TKIVA
ODREĐIVANJE GENA HLA LABORATORIJSKIM TESTOVIMA
NA SVAKOM LOKUSU TIPIZACIJOM TKIVA ODREĐUJU SE DVA ALELA
JEDAN NASLIJEĐEN JEDAN NASLIJEĐEN OD OCA OD MAJKE
A1A1B8B8DR3DR3 B7B7 A3A3DR4DR4
![Page 19: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/19.jpg)
REZULTAT HLA TIPIZACIJE
HLA - A1, A3
B7, B8
DR3, DR4
![Page 20: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/20.jpg)
TIPIZACIJA HLA PRIMATELJA ORGANA
Metoda izbora – molekularna ( DNA) tipizacija Uvjet za prijavljivanje na listu čekanja Obavezno određivanje alela HLA -A, -B, -DR Preporučljivo i određivanje HLA -C, -DQ
Primatelji bubrega se tipiziraju iz dva neovisno izvađena uzorka venske krvi ( s antikoagulansom EDTA )
Prvi uzorak se tipizira metodom PCR-SSP Drugi uzorak se tipizira metodom PCR-SSO Dvije tipizacije svakog primatelja bubrega moraju biti identične
Primatelji srca, jetre, pluća se tipiziraju jednokratno metodom PCR-SSO
Nakon uspješne tipizacije primatelji se prijavljuju na ET liste čekanja
![Page 21: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/21.jpg)
DARIVATELJI ORGANA
Svaka umrla osoba kod koje je nastupila cerebralna smrt ( trajni prestanak svih moždanih funkcija) – KADAVERIČNI DARIVATELJ
Darivatelj može biti i živa osoba ( bubreg, dio jetre itd.)
U RH je zakonom propisan protokol utvrđivanja moždane smrti
Zakon o pretpostavljenom pristanku
Pristanak obitelji
![Page 22: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/22.jpg)
Tipizacija HLA darivatelja organa
Transplantacijski koordinatori (zemalja članica ET) prijavljuju ET-u postojanje darivatelja organa u svojoj zemlji
Transplantacijski koordinatori Ministarstva zdravstva i socijalne skrbi RH kontaktiraju pripravnog djelatnika za tipizaciju tkiva ( Zagreb, Rijeka )
Pristupa se tipizaciji darivatelja - po hitnom postupku
Molekularna tipizacija gena HLA izvodi se metodom PCR-SSP
Iz uzorka venske krvi uzete sa antiloagulansom EDTA
Koriste se dva paralelna testa ( različitih proizvođača) za lokuse HLA -A, -B, -C ,-DR i – DQ (Olerup, Innvitrogen)
Vrijeme izvođenja tipizacije gena HLA je 5 – 6 sati
Izvješće sa tipizacijom donora se šalje u dežurni centar ET
![Page 23: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/23.jpg)
IZOLACIJA DNA
Venska krv sa EDTA kao antikoagulansom
Izolacija DNA - komercijalni set za brzu izolaciju DNA pomoću kolumni (Nucleospin@Blood)
Enzim proteinaza K, uz pomoć pufera, razara proteinske strukture staničnih membrana
DNA izlazi iz jezgre i veže se za silikonsku membranu kolumne
Metoda brza, jednostavna
![Page 24: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/24.jpg)
PCR- SSP
PCR (engl. polymerase chein reaktion)
SSP (engl. sequence specific primers )
Enzimatsko umnažanje dijela DNA
molekule uz pomoć specifičnih primera za alel ili grupu alela
Mala količina materijala
Velika količina umnožene DNA
Kratko vrijeme izvođenja testa
![Page 25: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/25.jpg)
PCR - SSP
Molekularna tipizacija lokusa na komercijalnim testovima
HLA-A* 24 reakcije
HLA-B* 48 reakcija
HLA-C* 24 reakcije
HLA-DRB1* 24 reakcije
HLA-DQB1* 8 reakcija
Za darivatelje organa izvodi se paralelno na dva testa različitog proizvođača ( Olerup, Innvitrogen )
Za primatelje organa ova metoda se primjenjuje za tipizaciju prvog uzorka MPB
![Page 26: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/26.jpg)
SET ZA MOLEKULARNU TIPIZACIJU HLA – SSP( Olerup )
![Page 27: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/27.jpg)
VIZUALIZACIJA REZULTATA
Elektroforeza
Uzorci se nanose na 1,5% agarozni gel, kroz koji protiče istosmjerna struja
Nukleinske kiseline su negativno nabijene te u električnom polju putuju
prema pozitivnom polu
Dolazi do razdvajanja fragmenata jer manji fragmenti putuju brže od većih
DNK se boji etidium bromidom koji se umeće između parova baza DNK
Razdvojeni fragmenti pobuđeni UV svjetlom narančasto fluoresciraju
![Page 28: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/28.jpg)
DETEKCIJA REZULTATA
Test se očitava kao niz pozitivnih i negativnih reakcija
Svaki gel je fotografiran kamerom (G:Box Synergine)
Analiza uz pomoć kompjuterskog programa
Run Score (Olerup) UniMatsch 4,0 (Innvitrogen)
Pozitivna reakcija – vidljive su dvije vrpce: jedna kontrolnih početnica, a druga alel specifičnog produkta –
na nekim reakcijama uz produkt kontrolnih početnica su prisutni i alel specifični
produkti
Negativna reakcija – vidljiva je jedna vrpca koja je produkt kontrolnih početnica
prisutan je samo produkt kontrolnih početnica
![Page 29: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/29.jpg)
KOMPJUTERSKA ANALIZA ( RUN SCORE – Olerup )
•
![Page 30: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/30.jpg)
NALAZ HLA TIPIZACIJE
![Page 31: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/31.jpg)
PRIJAVA TIPIZACIJE PRIMATELJA U ET
![Page 32: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/32.jpg)
![Page 33: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/33.jpg)
PRIJAVA TIPIZACIJE DAVATELJA - ET OBRAZAC
![Page 34: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/34.jpg)
Alokacijska lista
Lista čekanja
![Page 35: TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081416/568134a5550346895d9bac55/html5/thumbnails/35.jpg)
HVALA NA PAŽNJI !