VALIDEZ DIAGNSTICA: EVALUACIN DE UNA PRUEBA INMUNOENZIMTICA SOBRE PAPEL DE NITROCELULOSA PARA EL SERODIAGNSTICO DE BRUCELOSIS EN HUMANOS Y BOVINOS.

Presentado por: M Antonieta Burgos Maldonado. Roco Escalona Aldana. Camila Freire Mrquez. Montserrat Gonzlez Concha. Marcy Soto Navarro. Presentado a: Veronica Bittner Schmidt. Asignatura: Biomatemticas. Fecha de presentacin: 6 de Julio de 2015.

Introduccin

Las principales pruebas de diagnstico de la brucelosis son inmunoenzimticas. La investigacin cientfica publicada se basa en la utilizacin de anticuerpos que reconozcan a los lipopolisacaridos de la membrana de Brucella melitensis (antgeno), insertas en suero, en este caso, se utiliz el suero bovino y el humano. Para comprobar la validez diagnstica de PIE (prueba inmunoenzimtica) se utiliz la prueba i-ELISA, que es ampliamente utilizada por su alta especificidad y sensibilidad; para calcular la especificidad, sensibilidad, VPP y VPN. La concordancia se evalu con la prueba Kappa. Se concluy que la prueba PIE presentaba dificultades producto de las posibles reacciones cruzadas, por lo que manifiesta un valor de diagnstico limitado.

El objetivo de este trabajo es interpretar y analizar indicadores, tales como sensibilidad, especificidad, VPP y VPN, que se obtuvieron de una investigacin cientfica sobre la validez diagnstica de una prueba.

En este trabajo se realizar un resumen a partir de una investigacin publicada el ao 2009 que entregaba la validez diagnstica de la prueba inmunoenzimtica sobre papel de nitrocelulosa para el serodiagnstico de brucelosis en humanos y bovinos, para posteriormente identificar e interpretar la sensibilidad y especificidad de acuerdo a lo aprendido en clases. Se definirn los conceptos de VPP y VPN que luego se calcularn e interpretaran a partir de la tabla obtenida de la investigacin. Finalmente, se realizar un ejercicio donde se construir una tabla de VP, VN, FP Y FN segn los valores de especifidad y sensibilidad del artculo y con los resultados obtenidos se analizar los valores de VPP y VPN segn la prevalencia indicada.

Resultados

a) Resumen.La Universidad Autnoma de Tamaulipas; Tampico, Tamaulipas, Mxico, realiz en el ao 2009 un estudio que buscaba medir la validez de la prueba inmunoenzimtica sobre papel de nitrocelulosa que utilizaba un lipopolisacrido de Brucella melitensis 16M como antgeno, recientemente desarrollada por los mismos autores, destinada al diagnstico de Brucelosis. La bsqueda de esta prueba diagnstica como reemplazo de la tcnica i-ELISA, viene de la necesidad de obtener resultados con mayor rapidez y a menor costo. Mtodo: Para la implementacin de la prueba, se obtuvieron dos muestras suero de origen caprino que fueron infectados con Brucella melitensis de modo artificial, cuya infeccin final fue determinada con un cultivo celular. De manera paralela, se obtuvieron dos muestras ms de animales sanos, determinando la condicin de estos ltimos de la misma manera anteriormente sealada. Luego, para su realizacin se tomaron 110 muestras de suero de origen humano de las cuales no se tena conocimiento de su estado, si estaban o no infectadas y si posean o no anticuerpos para el ataque a B. melitensis. Despus de un delicado procesamiento, se consider como punto de corte de la PIE (Prueba inmunoenzimtica) a las pruebas que se tornaron de un color oscuro intenso, lo cual significaba que daban positivo. Estas se compararon con un tipo test i-ELISA realizado a la par y finalmente se procedi a calcular los valores de sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo y valor predictivo negativo. Segn Acosta Gonzlez et al. (2009). los clculos se hicieron () con un 95% de confiabilidad (software Win Episcope 2.0). La concordancia entre ambas tcnicas se evalu mediante la prueba de kappa, con el mismo nivel de confianza.1Resultados: De desarrollo: Se pudo constatar que la PIE es indudablemente ms rpida que la tcnica ELISA (1 hora y 45 minutos v/s 1 noche de incubacin), sin embargo, acapara menos muestras simultneas que sta. Otra posible debilidad de la prueba estudiada, es la necesidad de su rpida lectura despus de empezada la coloracin (3 minutos exactamente), puesto que esta ocurre sin detenerse, y luego del tiempo estipulado ya no sirve su interpretacin (todas las muestras se veran de la misma tonalidad). De evaluacin: Acosta Gonzlez y col. (2009), sealan que Los valores de sensibilidad, especificidad, VPP y VPN, respectivamente, fueron de 64.86, 71.23, 53.33 y 80%. Adems, se present una concordancia baja estadsticamente significativa entre los resultados de ambas tcnicas (kappa = 0.343; p < 0.05; intervalo de confianza [IC95%] 0.158 a 0.527)2b) Identificacin e interpretacin de sensibilidad y especificidad.

Para poder identificar e interpretar la sensibilidad y especificidad es necesario su definicin. Segn Fernandez Pita & Prtegas Diaz, (2010). Sensibilidad corresponde a La probabilidad de que un individuo enfermo sea diagnosticado correctamente, significa la capacidad que tiene el test para detectar la enfermedad. 3 La sensibilidad se puede calcular de la siguiente forma:

Segn Fernandez Pita & Prtegas Diaz, (2010). La especificidad es La probabilidad de que un individuo sano sea catalogado correctamente como tal, es decir, la probabilidad que un sujeto sano obtenga un resultado negativo en el test.4 La especificidad se calcula:

La sensibilidad y especificidad de la prueba realizada en humanos fue de 64.86%, y 71.23% respectivamente. Esto significa que, de los pacientes que podran tener Brucelosis, al 64,86% se les diagnostic correctamente y entre los pacientes sanos se detectaron como tal al 71,23%. Concluyendo, se puede decir que la prueba PIE presenta una medianamente buena sensibilidad y especificidad, pero que no es recomendable usarla para diagnosticar la enfermedad.

c) Definicin de valor predictivo positivo y valor predictivo negativo.

El Valor Predictivo Positivo (VPP o VP+) corresponde a la probabilidad que tiene una persona con la prueba diagnstica positiva de tener la enfermedad.5 Se calcula de la siguiente forma:

En cambio, el Valor Predictivo Negativo (VPN o VP-) equivale a la probabilidad que tiene una persona que ha resultado negativa en la prueba diagnstica de no tener la enfermedad.6 Su clculo es:

d) Clculo de VPP y VPN

Tabla 1. Resultados de la i- Elisa y la tcnica inmunoenzimtica desarrollada sobre papel de nitrocelulosa (PIE) para el serodiagnstico de brucelosis en muestras de suero de origen humano.7Segn la tabla 1, se obtendra VPP y VPN de la siguiente forma:=

=0,8= 80%

El Valor predictivo positivo o VPP de esta investigacin fue de 53.33, lo que quiere decir que para los individuos que fueron estudiados en para el serodiagnstico de brucelosis en muestras de suero de origen humano y dieron resultado positivo, el 53.33% de ellos estn realmente enfermos.El Valor predictivo negativo o VPN del serodiagnstico de brucelosis en muestras de suero de origen humano dio como resultado un 80%, lo que se interpretara como que de todos los individuos estudiados que dieron un resultado negativo a la prueba, el 80% realmente no posea brucelosis.

e) Suponer una poblacin 3.000.000 de personas y construir la tabla de VP, VN, FP y FN segn los valores de sensibilidad y especificidad mostrados por el artculo, para los siguientes casos: Sensibilidad: 0,6486 Especificidad: 0,7123 e.1) 5.000 personas presentan la patologa o condicin que se desea diagnosticar. InfectadoNo Infectado

Positivo3.243861.661864.904

Negativo1.7572.133.3392.135.096

5.0002.995.0003.000.000

VPP= VPN=

e.2) 950.000 personas presentan la patologa o condicin que se desea diagnosticar.

Infectado No Infectado

Positivo 616.170 589.785 1.205.955

Negativo 333.830 1.460.215 1.794.045

950.000 2.050.000 3.000.000

VPP= VPN=

Calcular los valores de VPP y VPN para cada tabla y analizar: qu sucede con los valores de VPP y VPN segn la prevalencia utilizada? , En qu caso el test es ms seguro?Prevalencia5.000950.000

VPP0,37%51,09%

VPN99,92%81,39%

Tal como se puede apreciar en la tabla anterior, los valores de VPP Y VPN cambian, en el primer caso (prevalencia de 5000 personas), se observa que la probabilidad de acertar en el diagnstico de brucelosis es del 0,37% esto significa que de 100 pruebas positivas, ni siquiera 1 persona tendra la enfermedad y el 99% sera diagnosticado errneamente como enfermos. Por el contrario, en el segundo caso (prevalencia de 950.000), el VPP aumenta a 51,09%, es decir, de 100 pacientes que dan la prueba positiva, 51 personas tendran la enfermedad y el 48,91% restante correspondera a pacientes con diagnstico incorrecto.En cambio, los valores de VPN en el primer y segundo caso varan de 99,92 a 81,39 respectivamente evidencindose un descenso medianamente significativo, puesto que, el 99,92% indica que de 100 pruebas negativas, 99 corresponderan a personas sanas y el 1% restante equivaldra a persona enfermas diagnosticadas como sanas. En el segundo caso, el 81,39% significara que de 100 pruebas negativas, 81 resultados corresponderan a personas sin la enfermedad y el 18,61% son realmente pacientes enfermos con diagnostico errado.Segn lo analizado anteriormente y respondiendo a la pregunta: En qu caso el test es ms seguro? Los resultados evidencian que es el segundo caso, ya que presenta un diagnstico ms certero.

Conclusin

Al hacer este trabajo nos hemos podido dar cuenta de la importancia real, que tienen las biomatemticas y especficamente la validez diagnstica en la prctica mdica ya que pueden ser de mucha ayuda a la hora decidir si una determinada prueba, como PIE, es confiable o no a la para diagnosticar una enfermedad.Este trabajo en especifico, nos ha permitido interpretar y analizar diversos factores como sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo y valor predictivo negativo que se obtuvieron de una evaluacin de prueba inmunoenzimatica sobre papel de nitrocelulosa para el serodiagnstico de brucelosis en humanos.Luego de revisar dichos resultados podemos concluir que la prueba PIE es poco sensible y poco especifica en humanos, ya que solo existe un 64,86% de probabilidad de diagnosticar la enfermedad a alguien que la tenga y un 71, 23% de probabilidad de diagnosticar como sano a un paciente que realmente lo sea.En cuanto al valor predictivo positivo, tambin se obtuvo un porcentaje bajo ya que, solo el 53,33% de las personas que obtuvieron positivo en test, realmente tenan brucelosis, a diferencia de lo que ocurri con el valor predictivo negativo donde se obtuvo un 80% de probabilidades de que las personas que obtenan negativo en el test no tenan realmente brucelosis.Estos parmetros son sumamente importantes y pueden ser de mucha ayuda en nuestra futura vida laboral, ya que si nos basamos en estos resultados podemos descartar pruebas como PIE que al ser poco sensibles y poco especificas, son tambin poco confiables a la hora de diagnosticar a un paciente. S nos basamos estos parmetros y somos capaces de calcularlos de manera adecuada, podremos tambin ser ms asertivos y precisos a la hora de diagnosticar y tratar a un paciente, favoreciendo no solo la calidad de vida de este, sino tambin la labor mdica.

Referencias bibliogrficas

(1) Acosta Gonzlez, R., Bocanegra Alonso, A., Daz Aparicio, E., Echegollen Guzmn, A., Flores Gutirrez, G., y Torres Puebla, M. (2009). Evaluacin de una prueba inmunoenzimtica sobre papel de nitrocelulosa para el serodiagnstico de brucelosis en humanos y bovinos. Revista de la Asociacin Mexicana de Bioqumica Clnica, A.C., 34(4), 197-201. Recuperado de: http://www.medigraphic.com/pdfs/bioquimia/bq-2009/bq094f.pdf(2) Acosta Gonzlez, R., Bocanegra Alonso, A., Daz Aparicio, E., Echegollen Guzmn, A., Flores Gutirrez, G., y Torres Puebla, M. (2009). Evaluacin de una prueba inmunoenzimtica sobre papel de nitrocelulosa para el serodiagnstico de brucelosis en humanos y bovinos. Revista de la Asociacin Mexicana de Bioqumica Clnica, A.C., 34(4), 197-201. Recuperado de: http://www.medigraphic.com/pdfs/bioquimia/bq-2009/bq094f.pdf(3) Pita Fernndez, S. & Prtegas Daz, S. (2010). Pruebas diagnsticas: Sensibilidad y especificidad. Cad Aten Primaria, 10, 120-124. Recuperado de: https://www.fisterra.com/mbe/investiga/pruebas_diagnosticas/pruebas_diagnosticas.asp#sensibilidad(4) Pita Fernndez, S. & Prtegas Daz, S. (2010). Pruebas diagnsticas: Sensibilidad y especificidad. Cad Aten Primaria, 10, 120-124. Recuperado de: https://www.fisterra.com/mbe/investiga/pruebas_diagnosticas/pruebas_diagnosticas.asp#sensibilidad(5) Ruiz de Adana Perez, R. (2009). Eficacia de una prueba diagnstica: parmetros utilizados en el estudio de un test. Jano: Medicina y humanidades, 2009(1736) ,30-32. Recuperado de: http://www.jano.es/ficheros/sumarios/1/0/1736/30/00300032_LR.pdf (6) Ruiz de Adana Perez, R. (2009). Eficacia de una prueba diagnstica: parmetros utilizados en el estudio de un test. Jano: Medicina y humanidades, 2009(1736) ,30-32. Recuperado de: http://www.jano.es/ficheros/sumarios/1/0/1736/30/00300032_LR.pdf (7) Acosta Gonzlez, R., Bocanegra Alonso, A., Daz Aparicio, E., Echegollen Guzmn, A., Flores Gutirrez, G., y Torres Puebla, M. (2009). Evaluacin de una prueba inmunoenzimtica sobre papel de nitrocelulosa para el serodiagnstico de brucelosis en humanos y bovinos. Revista de la Asociacin Mexicana de Bioqumica Clnica, A.C., 34(4), 197-201. Recuperado de: http://www.medigraphic.com/pdfs/bioquimia/bq-2009/bq094f.pdf

Informe de trabajo

IntegranteNombreTrabajo que realiz

1M Antonieta Burgos Maldonado Redaccin del resumen. Definicin VPP y VPN. Bsqueda Bibliogrfica. Clculo e2

2Camila Freire Mrquez Clculo e interpretacin VPP y VPN.

3Roco Escalona Aldana Conclusin. Coordinacin del Grupo. Revisin y organizacin del trabajo.

4Montserrat Gonzlez Concha Introduccin. Clculo del punto e1 y anlisis segn prevalencia indicada. Revisin de trabajo.

5Marcy Soto Navarro Identificacin e interpretacin de sensibilidad y especificidad