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IITCUP CIENCIA VOL1 No1 (2013)
UNIVERSIDAD POLICIAL “MCAL. ANTONIO JOSÉ DE SUCRE” – INSTITUTO DE INVESTIGACIONES TÉCNICO CIENTÍFICAS
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DIRECTOR IITCUP: TCNL. DEAP. IVÁN ROJAS DEL CARPIO, UNIPOL EDITOR: LIC. ESP. RUDDY LUNA BARRÓN, DIC, UNIPOL
COMITÉ REVISOR: CNL. DESP. GARY GONZALO OMONTE VERA, P. B.
PhD. DRA. MARÍA TERESA ÁLVAREZ ALIAGA, UMSA
DR. GONZÁLO TABOADA LÓPEZ, UMSA
DR. BERNARDO TORRICO ARZADY, UMSA
DRA. BEATRIZ LUNA BARRÓN, UMSA
DRA. JACQUELINE CORTEZ G., UMSA
LIC. ÁLVARO ROMERO VALENZUELA, CEDES
DERECHOS RESERVADOS IITCUP © 2013
IITCUP
CIENCIA PUBLICACIÓN CIENTÍFICA DE LA POLICÍA BOLIVIANA
VOL1 No1 DICIEMBRE 2013
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ÍNDICE
AGRADECIMIENTO .............................................................................................................................................................. 5
PRESENTACIÓN DEL COMANDO GENERAL ......................................................................................................................... 7
PRESENTACIÓN DEL VICEMINISTRO DE SEGURIDAD CIUDADANA ..................................................................................... 9
PRÓLOGO DEL RECTOR DE LA UNIVERSIDAD POLICIAL “MCAL. ANTONIO JOSÉ DE SUCRE” .......................................... 11
PRESENTACIÓN DEL IITCUP .............................................................................................................................................. 13
EDITORIAL ......................................................................................................................................................................... 15
SIMBOLOGÍA DEL EMBLEMA DEL INSTITUTO DE INVESTIGACIONES TÉCNICO CIENTÍFICAS DE LA UNIVERSIDAD
POLICIAL............................................................................................................................................................................ 17
ARTÍCULOS ORIGINALES
CARACTERIZACIÓN DEL MINI-YSTR DYS-481 EN TRES SUBPOBLACIONES DE BOLIVIA .................................................... 19
HAPLOTIPOS DE ADN MITOCONDRIAL REVELAN POSIBLE RUTA MIGRATORIA ANCESTRAL DE LOS PUEBLOS URU Y
AYOREO DE BOLIVIA ......................................................................................................................................................... 27
HAPLOTIPOS DE ND4 EN Aedes aegypti (VECTOR DEL DENGUE) DE SAN BORJA Y CARANAVI (BOLIVIA) ....................... 43
CARACTERIZACIÓN DE MICROSATÉLITES PARA PRUEBAS DE PARENTESCO EN CAMÉLIDOS DEL ALTIPLANO BOLIVIANO
.......................................................................................................................................................................................... 49
NOTAS TÉCNICAS
PRIMER ESTUDIO TAXONÓMICO MOLECULAR DEL ORDEN TRICHOPTERA EN LA REGIÓN ALTOANDINA DE BOLIVIA ... 57
TIPIFICACIÓN MOLECULAR DE MIRU-VNTR’S PARA ESTUDIOS EPIDEMIOLÓGICOS DE TUBERCULOSIS EN BOLIVIA ...... 63
DETECCIÓN DEL GEN “INTERFERÓN-GAMMA” POR PCR DE RETRO-TRANSCRIPCIÓN EN CÉLULAS MURINAS ............... 67
REVISIÓN CORTA
ESTRUCTURA Y CARACTERÍSTICAS GENERALES DE LOS INDICIOS PILOSOS ..................................................................... 71
ENFERMEDADES INFECCIOSAS EMERGENTES (EIE´S) Y SU RELACIÓN CON EL TRÁFICO DE FAUNA SILVESTRE .............. 75
ESTUDIOS DE CASO
PLANIMETRIA OPERATIVA DE CAMPO Y DE GABINETE EN UN CASO DE DESLIZAMIENTO DE TERRENO ........................ 79
ACCIDENTES DE TRÁNSITO: CASO “BOCA DE SAPO” ........................................................................................................ 89
INSTRUCCIONES PARA LOS AUTORES............................................................................................................................... 95
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AGRADECIMIENTO
A finales del año 2010 la Policía Boliviana dio inicio a uno de sus proyectos más
ambiciosos y preciados, la instalación de un Instituto de Investigaciones. El
resultado fue el actual Instituto de Investigaciones Técnico Científicas de la
Universidad Policial (IITCUP), creado sobre la cimiente del ex Dpto. Nal. de Policía
Técnica Científica (DNPTC) dependiente entonces de la Fuerza Especial de Lucha
Contra el Crimen (FELCC), con el esfuerzo de profesionales que decidieron creer
en la Institución Policial para llenar alguno de los vacíos en el campo técnico-
científico, pero especialmente con el impulso generoso de la Universidad Mayor
de San Andrés y sus autoridades.
Las primeras señales del surgimiento de este proyecto institucional ocurrieron en octubre de 2006
con la acertada disposición del Comando General para incorporar nuevos laboratorios y capacidades
en el DNPTC. Su activación en octubre de 2007 dio pie a un proceso en cascada que culminó con la
creación, tres años después, del IITCUP (diciembre de 2010). Sin embargo, un paso fundamental y
condicionante para lograr este objetivo fue dado entre diciembre de 2007 y abril de 2008 al
gestionarse y firmarse el Convenio de Cooperación Técnica y Científica entre la Universidad Mayor
de San Andrés y la Policía Boliviana, con la participación de las entonces autoridades máximas Dra.
Teresa Rescala Nemtala (Rectora) y Gral. Miguel Gemio Urrutia (Comandante General).
El abierto, sincero, honesto y generoso soporte que brindó la UMSA al naciente IITCUP desde
entonces es simplemente superlativo e invalorable, y obliga la gratitud leal y comprometida de la
Policía Boliviana y su personal. Cientos de personas desde estudiantes y administrativos hasta las
propias máximas autoridades universitarias contribuyeron con el surgimiento y desarrollo del
espíritu científico en las filas del verde olivo, todas ellas bajo la sincera y estoica guía de
personalidades como el Dr. Enrique Udaeta Velásquez (Decano FCFB 2008 – 2012) o el Dr. Tito
Estévez Martini (Decano FCFB 2012…), a la sombra de quienes hoy nos excusamos humildemente
por no presentar la extensa nómina de todos aquellos a quienes representan, pero que forman parte
esencial del plantel docente investigador, estudiantil y administrativo de la UMSA que extendieron
mano firme y dadivosa al IITCUP y sus aspiraciones.
A todos aquellos insignes participantes de esta singular aventura: la “alianza
estratégica UMSA – Policía Boliviana”: estudiantes, docentes, administrativos de
la UMSA, entregados a luchar por el progreso de nuestra amada Bolivia y que
portan en el corazón la satisfacción de haberle puesto fe sin medida a este sueño,
gracias..!
Septiembre 2013.
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PRESENTACIÓN DEL COMANDO GENERAL
a Policía Boliviana se ha colocado entre las instituciones sobresalientes del Continente Americano,
caminando a paso firme en el accionar científico. El uso de la ciencia y tecnología es considerado vital
para la investigación actual, logrando resultados altamente positivos. Los efectivos del orden de
diferentes grados y rangos tienen una formación permanente, convirtiéndose en profesionales expertos,
liderizando, ejecutando y desarrollando procesos investigativos apegados a los preceptos de la ciencia y los
conceptos descrifrables de la tecnología.
El avance de la tecnología y la modernización de los sistemas, han permitido a las Instituciones Policiales del
mundo, abrir sus puertas hacia la Investigación Científica, ingresando a una nueva era en la historia universal.
Nuestros peritos son uniformados y profesionales altamente capacitados que diariamente enfrentan los retos
más acentajados, logrando poner al descubierto, con pericia estricta, acciones delincuenciales que impactan
negativamente al desarrollo de las naciones y la tranquilidad de los pueblos.
La ciencia y tecnología nos lleva a la verdad hitórica del delito, convirtiéndose en la esencia de la investigación
y el fundamento de la existencia. La investigación científica policial debe ser fortalecida, perdurando en el
tiempo y espacio, ubicando a la Policía Boliviana como una institución hitórica con una visión basada en el
uso de la ciencia, siendo parte fundamental de la política de transformación del Estado Plurinacional de
Bolivia.
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El Instituto de Investigaciones Técnico Científicas de la Universidad Policial, IITCUP, es el ícono institucional
que refleja una policía que definitivamente está inserta en el nuevo mundo, con procesos modernos de alta
capacidad tecnológica y cánones científicos, llevando a los efectivos del orden por un camino naciente, que
brinde las armas necesarias para el descubrimiento real y probatorio de acciones criminales y delincuenciales,
cristalizándose como barrera infranqueable contra actos ilegales que destrozan y lastiman al estante y
habitante de nuestra Patria Bolivia.
La Universidad Policial “Mcal. Antonio José de Sucre” tiene como misión la capacitación constante de los
cuadros policiales, permitiendo vigorizar y fortalecer a hombres y mujeres del verde olivo, que vinculados a
los avances científicos mundiales, cumplen con un trabajo eficiente, inmersos en un mundo tecnológico que
les facilita los procesos investigativos, obteniendo resultados pertinentes que se manifiestan en directo
beneficio de la sociedad a la que nos debemos.
El accionar científico es la propia vida de la Instituticón Policial.
Gral. Cmdte. WALTER JONNY VILLARPANDO MOYA
COMANDANTE GENERAL
POLICÍA BOLIVIANA
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PRESENTACIÓN DEL VICEMINISTRO DE SEGURIDAD
CIUDADANA
La institución policial enfrenta el desafío de ingresar de manera cognoscitiva en el campo de la investigación
presentando modestamente a consideración de la sociedad a la que se debe, el primer número de la revista
de divulgación científica IITCUP CIENCIA, nombre originado en el Instituto de Investigaciones Técnico
Científicas de la Universidad Policial y que es parte fundamental e indiscutible de la Policía Boliviana, con el
objetivo específico de lograr el desarrollo, gestión y ejecución de proyectos investigativos y de desarrollo
tecnológico, que permitan abrir nuevos derroteros para mostrar la luz al final del túnel dentro de las ciencias
policiales, porque la generación de ciencia es puntal de apoyo y sustento de la labor en las Unidades Policiales
inmersas en la lucha contra el delito.
Esta publicación se hace a la luz pública con el ansia incontrolable del recién nacido que trata de dar su primer
hálito de vida para un día poder formar parte activa de los sueños y realidades del pueblo que es su cuna.
Así, el contenito de IITCUP CIENCIA se plantea como un desafío multidisciplinario y de amplio contenido
temático para explorar nuevas formas de pensar, sentir y actuar, rompiendo el miedo a lo trascendental y
generar incluso conocimiento sobre el origen y la interculturalidad de nuestras Naciones Originarias (como
cita uno de los artículos del presente número).
De esta forma, la institución policial presenta con mucho esfuerzo y humildad el primer resultado de este
singular emprendimiento investigativo científico, por el que guardo la esperanza de un soñador de fé
inclaudicable, para que sea la semilla de una nueva Policía Boliviana.
Gral. Cmdte. (r) ALBERTO JORGE ARACENA MARTÍNEZ
EX COMANDANTE GENERAL
VICEMINISTRO DE SEGURIDAD CIUDADANA
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PRÓLOGO DEL RECTOR DE LA UNIVERSIDAD POLICIAL
“MCAL. ANTONIO JOSÉ DE SUCRE”
a transcurrido casi medio siglo de experiencia policial en el
campo pericial y de laboratorio criminalístico. El fruto
esencial de este trabajo cotidiano es de interés para cada
ciudadano boliviano, pues influye significativamente en el destino y
desenvolvimiento de nuestra sociedad en el tiempo. Sin embargo, ese
valioso fruto puede ser olvidado y su fundamental enseñanza para el
futuro puede perderse si no encontramos la forma de grabar su
existencia y significado en la mente y corazón de todos quienes
conformamos el espíritu mismo de la Institución Policial y del progreso
nacional.
IITCUP CIENCIA, es la propuesta que hacemos hoy para compartir con nuestros hermanos
bolivianos el sincero deseo que tiene la Policía Boliviana de progresar con su pueblo y aportar al
progreso nacional mediante la producción científica y el desarrollo tecnológico. Muchas razones
existen para entregar a la luz pública un proyecto como éste y promover el desarrollo sistemático de
más producción intelectual, pero una sola motiva su existencia: evolucionar institucionalmente como
Universidad y como Policía, para crear nuevas herramientas científicas en la lucha eterna “contra el
mal, por el bien de todos”, y así proyectar una nueva visión de desempeño policial, sirviendo con
devoción y leal doctrina a nuestra amada Bolivia.
Gral. Sup. Guido Arroyo Arce
DIRECTOR NAL. DE INSTRUCCIÓN Y ENSEÑANZA
RECTOR DE LA UNIPOL
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PRESENTACIÓN DEL IITCUP
ar el primer paso es lo más difícil… pero no imposible, de esto
depende el éxito o fracaso de la actividad que se inicia.
La filosofía del IITCUP, que parte de la trilogía: Formación,
Servicio y Ciencia, reza en nuestro emblema institucional como un
desafío que exige una respuesta por parte de todos quienes somos parte
de nuestro instituto, que se traduce desde nuestro punto de vista en los
siguiente: el aporte en los procesos de formación que busca la
cualificación del talento humano de nuestro instituto, de la Universidad
Policial y de la Institución Policial; la prestación de servicios a la sociedad en su conjunto, no solo en
el área forense sino de manera integral multidisciplinaria; y los resultados de investigación científica
para la generación de conocimiento propio.
La validación de nuevos métodos y su aplicación de manera integral busca beneficiar no solo a
quienes la aplican en el área forense o la investigación criminal, sino a la sociedad boliviana al lograr
costos operativos acorde a la realidad nacional, prestando servicios multi e interdisciplinarios de
calidad.
La presentación de la revista IITCUP CIENCIA es la oportunidad de plasmar los resultados de este
trabajo sobre las líneas de investigación de nuestro instituto, como un aporte al desarrollo
institucional y nacional, de donde la sociedad en su conjunto resulta beneficiada con la generación
de nuevo conocimiento, fruto del trabajo llevado adelante por personal que ha trabajado de manera
silenciosa y desinteresada.
Esta publicación es parte del resultado de más de cinco años del esfuerzo de más de treinta personas
en un contexto cooperativo interinstitucional y que representa un pequeño aporte a quienes esperan
mucho de nosotros y con los que esperamos contar como autores en un futuro próximo.
Soy consciente de las limitaciones y dificultades que atravesamos para hacer realidad este primer
número, cuya sincera intención es hacer un pequeño aporte a las aspiraciones de progreso científico
y tecnológico de la “Universidad Policial Mcal. Antonio José de Sucre” y de la sociedad boliviana en
su conjunto.
Tcnl. DEAP. E. Iván Rojas del Carpio
DIRECTOR IITCUP
Enero 2014.
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EDITORIAL
a Ley Orgánica de la Policía Boliviana (Art. 8) describe a esta fundamental institución del
Estado Plurinacional de Bolivia como esencialmente “Técnico Científica”, que exhorta y
manda proyectar y desarrollar una institución de envergadura nacional, normada y
certificada por procedimientos basados en un enfoque objetivo, práctico, válido, preciso, ético, de
calidad certificada y con amplio desenvolvimiento en la comunidad policial mundial; por tanto,
como es lógico, la Institución Policial debe hacerse con las herramientas apropiadas para plasmar
esta visión.
El trabajo de laboratorio técnico-científico en la Policía Boliviana tiene más de 50 años de historia
institucional, llena de aciertos y desaciertos en un proceso evolutivo permanente de creación y
destrucción, experiencia y desafío, crítica y mérito, innovación y retroceso, emprendimiento y
abandono, frustración y fe. Parte de esta historia, rematada en diciembre de 2010 con la creación del
Instituto de Investigaciones Técnico Científicas de la Universidad Policial (IITCUP), se gestó
primicialmente con el proyecto de implementación de un laboratorio moderno para el ex DNPTC
(Dpto. Nal. de Policía Técnica Científica) en octubre de 2006, bajo iniciativa de su entonces sub-jefe
Tcnl. DEAP. Gualberto Condori Tapia, posteriormente y bajo dirección del Cnl. DESP. Jorge Toro
Álvarez, se gestionaron y adquirieron en 2007 equipos, se adecuó la infraestructura y se convocó al
plantel de profesionales. El resultado de este período inicial fue la incorporación de un nuevo
laboratorio con capacidad de servicio e investigación en genética forense.
En abril de 2008 se firmó el convenio marco de cooperación técnico-científica con la UMSA y en 2009
se establecieron nexos con instituciones académicas nacionales e internacionales, dando inicio al
proceso de validación de nuevas técnicas de laboratorio, así como a la incorporación de estudiantes
universitarios externos como tesistas de pre y post grado. Con los resultados alcanzados, en 2010 se
presenta el proyecto de creación del IITCUP y en 2011, bajo dirección del Cnl. DESP. Freddy
Machicado Villegas, se consolidan las líneas principales de investigación y servicios del nuevo
instituto policial. En 2012 se extienden los nexos interinstitucionales bajo la dirección del Cnl. DESP.
Gary Gonzalo Omonte Vera y en 2013, bajo dirección del Tcnl. DEAP. Iván Rojas del Carpio, se da
impulso al proceso de socialización del potencial de investigación, formación y de servicio pericial
del instituto, proceso que continúa a la fecha, que poco a poco demuestra la importancia de apoyar
seriamente la investigación científica y tecnológica de jerarquía policial, y ha dado origen a esta
primera publicación de divulgación científica.
El IITCUP tiene como función principal la definición y aplicación de políticas institucionales de
desarrollo científico y tecnológico con relevancia social, mediante el trabajo sinérgico de y la gestión
de cinco departamentos: Técnico y de Servicios, Académico, de Investigación Científica, de Recursos
Humanos y Administrativo, bajo los que se organizan 12 centros y Divisiones Operativas que
incluyen las áreas de Balística, Biología, Documentología, Genética, Huellografía, Informática,
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Medicina Legal, Planimetría, Psicología, Química, Seguridad
Vial, y Toxicología; así, la organización sinérgica holística del
IITCUP se dinamiza sobre las premisas de Servicio, Formación
y Ciencia.
La responsabilidad natural de la labor policial obliga a la
búsqueda incesante y precisa de conocimiento para la
comprensión de aquellos los elementos y fenómenos sociales
y naturales que producen, coadyuvan o siembran el desorden
social y la inseguridad en la población y el Estado Boliviano.
Esto solo puede enfrentarse recurriendo a un amplio espectro
temático de investigación que incluya múltiples campos del
conocimiento humano, y que genere soluciones prácticas, reales, efectivas y sobre todo sensibles a la
realidad de nuestra sociedad, tomando solo como modelo a otras sociedades o instituciones, pero
fundamentalmente mostrando sensibilidad e identidad con la nuestra.
La producción científica enfocada a la comprensión y solución de los problemas y desafíos de la vida
en sociedad, es el mecanismo que proveerá las herramientas para que nuestra institución responda
a un mundo competitivo en constante progreso y evolución, a través de la generación prioritaria de
ciencia y tecnología propias y adaptadas a la realidad nacional. Pero solamente es posible si el talento
humano gestor en las instituciones del Estado, son capaces de encontrar el valor y coraje para
establecer nexos, alianzas, convenios y pactos de cooperación científica, uniendo sus capacidades,
potencialidad y recursos en bien de la sociedad, dejando de lado el individualismo instintivo y el
egoísmo importado, para dar espacio al enorme potencial que guarda nuestra cultura, nuestra
identidad boliviana y nuestro carácter histórico.
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACIÓN CIENTÍFICA
IITCUP – UNIPOL
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SIMBOLOGÍA DEL EMBLEMA DEL INSTITUTO DE
INVESTIGACIONES TÉCNICO CIENTÍFICAS DE LA UNIVERSIDAD
POLICIAL
(28 de diciembre de 2010)
La corona de ocho puntas representa los ocho departamentos del interior del país y su vínculo dependiente
directo con la oficina central del IITCUP en La Paz, representado por la esfera verde olivo al centro, del que
nace el haz fulgurante de energía. El fondo dorado, sobre el que se inscribe Policía Boliviana, alude a la
importancia y valor que debe darse al desarrollo de la investigación técnica, científica y académica.
Los colores de la bandera tricolor a la izquierda aluden al compromiso del instituto con el progreso nacional
y la honra de la soberanía. Los colores de la whipala a la derecha aluden al compromiso con la visión de
cambio y de identidad.
Las carabinas cruzadas en madera, símbolo de orden, fuerza, la responsabilidad y compromiso que tiene la
Institución Policial con el pueblo boliviano, escoltan el disco de granito azul.
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El disco de granito azul refulgente constituye con solidez, firmeza y peso la base sobre la que descansan el
nombre de la Universidad Policial, el nombre del Instituto y, en su parte central, el triángulo de los pilares
fundamentales de la doctrina de desarrollo institucional.
Las pequeñas carabinas en negro sostienen el vínculo circular infinito indisoluble entre el Instituto con la
UNIPOL.
El triángulo azul exterior en el centro del disco contiene la trilogía doctrinaria de Servicio, Formación y
Ciencia, con el fondo azul refulgente como alusión al progreso científico, la independencia tecnológica.
Las manos talladas en vidrio esmerilado simbolizan la claridad en pensamiento y obra de la humanidad y del
pueblo boliviano (mano derecha cerca de la whipala) en busca de la claridad del conocimiento y sabiduría
(mano izquierda cerca de la bandera boliviana).
El haz fulgurante de energía entre los dedos de ambas manos sobre el haz verde refulgente, representa la
motivación, la potencia e ímpetu del pueblo boliviano (mano derecha) en busca del conocimiento y sabiduría
(mano izquierda) necesarias para el progreso nacional y el bien común.
(Extracto del proyecto de creación del emblema IITCUP, 2010).
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ARTÍCULO ORIGINAL
CARACTERIZACIÓN DEL MINI-YSTR DYS-481 EN TRES
SUBPOBLACIONES DE BOLIVIA
Sbtte. Adm. Torres, E.1,2, & Sbtte. Adm. Salazar, K.2
1 Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas. Universidad Mayor de San Andrés. La Paz, Bolivia. 2 Centro de Investigación Genética, IITCUP, Universidad Policial. La Paz, Bolivia. [email protected]
RESUMEN
Los polimorfismos en longitud de simples repeticiones en tándem o STRs del cromosoma-Y son de especial interés forense ya que
coadyuvan a la identificación de material genético masculino en evidencias biológicas principalmente vinculadas a casos de agresión
sexual. El presente estudio caracterizó el mini-YSTR DYS481 en 102 individuos de sexo masculino, no emparentados y tomados al
azar de tres subpoblaciones (ciudades) del Estado Plurinacional de Bolivia (La Paz, Sucre y Santa Cruz), infiriendo la variabilidad
genética mediante sus frecuencias alélicas. La diversidad génica obtenida fue 0.65 para las tres subpoblaciones y el análisis
comparativo de linajes con otras regiones del mundo presentó diferencias en la estructura génica de este marcador entre Caucásicos,
Afroamericanos, Alemanes, Árabes, Chinos y Bolivianos. Se ha probado estadísticamente que el marcador DYS481 es altamente
informativo ya que su poder de discriminación (0.8175) lo hace idóneo para el análisis de evidencias biológicas en casos forenses, de
genealogía y de estudios evolutivos, por lo que se recomienda su inclusión y uso en los laboratorios de Bolivia.
PALABRAS CLAVE: Mini-microsatélite, DYS481, variabilidad, Y-STR, poder de discriminación.
JUCH’URIMANCHANA
Chay polimorfismos en longitud de simples repeticiones tandempi (STRs del cromosoma-Y) minku allinkasqa yachanapax
forensemanta; yanapanku. Tariyta ADN qharixpata maypachachus warmi wallikun lluqhuska warmi willakun llukhusqa karkanta.
Kay llank`ay mini YSTR DYS-481 minku ruwakurqa pachaqiskayniuk qharispi, mana ñawarmasin kaskancuchu kimsa llajtasmanta
kay Boliviamanta, kay llajtas qharkanku La Paz kawachispa machkhachus ujjinataxkanku genéticamente ruwaspa frecuencias alelicas
minku. Chay wajina alelica minku qharqa 0,65 chay kimsa llajtaspax. Chay kawakuskan uj llajtasmantapacha riqhuchrqa uj laya
kaskanta genéticamente kay marcadorpi. Yachakun yanapaywan estadística minku kay marcador YSTR DYS-481 allin kasqa
imaraycuchus atin riqhuchiyta iskay runaspi ujina kaskankuta (0,8175). Chayrayku sumaj kasqa forensespax sachas genealógicos,
estudios evolutivos minku, chayrayku siminchanku ruwanankuta kay laboratorios Boliviamanta.
RIMANAS: Mini-microsatélite, DYS481, variabilidad, Y-STR, poder de discriminación
ABSTRACT
Single tandem repeats (STRs) of human Y-chromosome are of special interest in forensic issues due to its ability to detect male genetic
material commonly found in biological evidence of sexual assault cases. This study characterized the mini Y-STR DYS481 in 102 male
suspects, non-related and randomly taken from three principal cities of the Plurinational State of Bolivia (La Paz, Sucre and Santa
Cruz), inferring its genetic variability upon allelic frequencies. Calculated genetic diversity was 0.65 for all cities and the comparative
analysis with other world lineages showed differences in structure between Caucasians, Afro-Americans, Germans, Arabs, Chinese
and Bolivians. It was proved that DYS481 is highly informative because the discrimination power (0.8175) made it appropriate for
forensic applications, genealogy and evolutive studies, and it use in Bolivian forensic laboratories is recommended.
KEYWORDS: Mini-microsatellite, DYS481, variability, Y-STR, discrimination power.
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INTRODUCCIÓN
La identificación certera en el ámbito civil y penal es
una de las mayores preocupaciones de las ciencias
forenses en nuestro país. Si bien existen diversos
métodos de identificación e individualización de
personas, uno de los que ostenta mayor certeza
estadística es el de ADN, especialmente porque no
puede alterarse o cambiarse. El análisis de ADN está
basado en marcadores específicos del genoma
humano de ADN no codificante del tipo microsatélite
autosómico (STR) y sexual (YSTR) (De Knijff et al.,
1997). Los mini-YSTRs corresponden a la categoría de
mini-microsatélites del cromosoma Y por su
reducido tamaño son de especial interés forense
criminalístico. La validación de nuevos de estos
marcadores de elevado polimorfismo y reducido
tamaño, es necesaria para incrementar la capacidad
de respuesta de los laboratorios forenses en la
resolución de casos criminales, donde están
especialmente implicadas mezclas biológicas
complejas, trazas biológicas o muestras en deficiente
estado de conservación y almacenamiento, más aún
si se toma en cuenta que el cromosoma Y permite la
caracterización específica de la fracción masculina de
ADN en una mezcla (Hanson & Ballantyne, 2007;
Roewer, 2009).
La comunidad forense ha recomendado al menos
nueve loci de Y-STRs para un haplotipo mínimo que
pueda discernir entre 76 a 95% de los linajes
masculinos en varias poblaciones del mundo (Kayser
et al., 2004). Sin embargo, el frecuente uso
criminalístico de estos marcadores ha demostrado
que es necesario incrementar la habilidad de
distinguir linajes y aumentar el poder de
discriminación entre linajes durante un cotejo
genético forense complejo (De Knijff et al, 1997;
Djelloul & Sarafian, 2008). Sistemas comerciales
como PowerPlex-Y (Promega) y Y-Filer
(AppliedBiosystems), ambos de 16 loci, llegan a ser
insuficientes al enfrentar casos que desafían las
capacidades de los laboratorios del país.
Pese a la diversidad genética encontrada en los locus
de los sistemas existentes, los resultados obtenidos
con evidencias de baja calidad (las más comunes en
criminalística) ostentan pérdida de señal en varios
marcadores (Roewer, 2009), por lo que se hace
urgente la introducción y validación de nuevos STRs
para cada población humana estructurada. La
presente investigación caracterizó los polimorfismos
del mini-YSTR DYS481 (Tabla 1 y Figura 1) en tres
subpoblaciones (ciudades) de Bolivia, para establecer
su utilidad como marcador forense de identidad de
linajes masculinos pues ha mostrado ser altamente
diverso en otras poblaciones del mundo, además que
su peso molecular (entre 109-159 pb) facilita su
detección en contraste a los YSTRs convencionales
(De Knijff et al, 1997; Geppert et al, 2009).
MATERIALES Y MÉTODOS.
Muestreo
Se estudiaron al azar 102 individuos varones
mayores de edad, no emparentados, provenientes de
tres subpoblaciones de Bolivia (31 de La Paz, 35 de
Chuquisaca y 36 de Santa Cruz), de quienes se
obtuvieron muestras de hisopado bucal por
duplicado en dependencias de la Fuerza Especial de
Lucha Contra el Crimen (FELCC) de La Paz, Sucre y
Santa Cruz.
Obtención del Material Genético
El ADN total se obtuvo por lisis química,
precipitación salina y purificación alcohólica
optimizada del sistema comercial “DNA Isolation
Kit” (MoBio).
Caracterización por PCR y electroforesis capilar
La amplificación de alelos de DYS481 (Tabla 1) se
realizó empleando los cebadores de Hanson et al.
(2007), uno de ellos marcado con el fluoróforo 6-
FAM. La mezcla de amplificación se preparó con
AmpliTaq 5 u/µL (Applied Biosystems), BSA 0.8
Tabla 1. Características del marcador
mini-YSTR DYS481.
Accesión
GDB
Motivo de
repetición
#
alelos
Tamaño
(pb)
Promedio
“Stutter”
11503780 CTT 18-31 109-159 10-15.5
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ug/mL y los cebadores combinados a 0.6 µM. La
amplificación se realizó en un “Thermocycler 9800
Fast” (Applied Biosystems) con el programa: 94 °C 5
min; 30 ciclos de 94 °C 30 s, 58 °C 35 s y 72 °C 35 s; 72
°C 10 min). Los productos amplificados fueron
caracterizados por electroforesis capilar en un
Analizador Genético AB3130 (Applied Biosystems).
Para evaluar la aplicabilidad del marcador se realizó
una simulación empleando una evidencia biológica
de un caso real, la cual se analizó con el sistema
comercial AmpFiSTR® Y-Filer y con el DYS481.
Análisis estadístico
La valoración estadística se compiló con el programa
Arlequín v.2.000 (Schneider et al., 2000). A partir de
las frecuencias alélicas se obtuvo la diversidad génica
(DG) según Nei (1973), siendo que n es el número de
individuos analizados y pi la frecuencia alélica (1).
La diversidad alélica (DAr) relativa se obtuvo
dividiendo el número parcial de alelos detectados
entre el número total de alelos de la población. Se
calculó también el poder de discriminación (PD) y la
probabilidad de coincidencia (PC) según Fisher
(1951) y Jones (1972).
RESULTADOS
La distribución de las frecuencias alélicas, la
diversidad génica y la alélica del locus DYS481 para
las 102 muestras, se detalla en la Tabla 2. En la sub-
población La Paz se encontraron 5 alelos, en la Sucre
6 y en Santa Cruz 8. En La Paz y Sucre el alelo
predominante fue el 23, mientras que en Santa Cruz
el 20. El alelo 24 es el menos frecuente en las tres
(Tabla 2 y Figura 2).
Tabla 2. Distribución alélica y frecuencias de DYS481
en La Paz, Sucre y Santa Cruz.
N = número muestral; DG = Diversidad Génica;
DAr = Diversidad Alélica Relativa.
ALELO
FRECUENCIAS
La Paz
(N=31)
Sucre
(N=35)
Santa Cruz
(N=36)
19
20
21
22
23
24
25
26
---
0.1613
0.1613
0.2903
0.3226
0.0645
---
---
0.1429
0.2000
0.1714
0.1714
0.2857
0.0286
---
---
0.0556
0.3889
0.1667
0.1667
0.0833
0.0278
0.0556
0.0556
DG 0.7807 0.8219 0.7984
DAr 0.625 0.75 1
La DG obtenida para La Paz fue de 0.7807, lo que
indica que las 5 variantes alélicas se hallan
ampliamente distribuidas en 78 de 100 individuos. La
DG para La Paz, Sucre y Santa Cruz fue de 0.7807,
0.8219 y 0.7984. La DA relativa fue de 0.625, 0.75 y 1
respectivamente (Tabla 2).
La Tabla 3 resume la distribución en las tres sub-
poblaciones, donde el alelo 20 es el más frecuente y,
25 y 26 los más dispersos. La DG grupal es de 81.5%
y la DA relativa de 66.67% en relación a la diversidad
mundial. La PC grupal fue de 19.39%, es decir que 2
de cada 19 comparten el mismo alelo. El PD fue de
81.75%, indicando que 2 individuos de cada 80 no
comparten el mismo alelo.
La Figura 3 muestra el electroferograma de la
evidencia forense empleada en la prueba y validación
de DYS841. Nótese que no son detectables los alelos
de los marcadores DYS390, DYS389 II, DYS19,
DYS385, DYS439, YGATAH4 y DYS438, solo los
marcadores de menor peso molecular fueron
detectados (Figura 3a) más DYS481 (Figura 3b).
Nueve Y-STRs se detectaron: 8 de 16 del sistema
(1)
Figura 1. Estructura primaria de DYS481.
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AmpFiSTR® Y-Filer, más DYS481 del presente
artículo.
Tabla 3. Distribución de alelos, frecuencia alélica
ascendente (f), razón de verosimilitud acumulativa (RV) y
probabilidad de correspondencia (PC) de 8 marcadores
(a) y más DYS481 (b).
(a)
LOCUS A f RV PC (%)
Y-GATAH4 10 0.0270 37 97.3684
DYS456 13 0.2703 136.900 99.2748
DYS635 23 0.3784 3.618.071 99.7244
DYS389I 13 0.4054 8.924.572 99.8881
DYS458 16 0.4054 22.013.954 99.9546
DYS391 10 0.6216 35.413.753 99.9718
DYS393 13 0.6216 56.969.995 99.9824
DYS437 14 0.6216 91.647.311 99.9891
(b)
LOCUS AL f RV PC (%)
Y-GATAH4 10 0.0270 37 97.3684
DYS481 24 0.0645 573.643 99.8260
DYS456 13 0.2703 2.122.480 99.9529
DYS635 23 0.3784 5.609.413 99.9822
DYS389I 13 0.4054 13.836.552 99.9928
DYS458 16 0.4054 34.130.162 99.9971
DYS391 10 0.6216 54.905.043 99.9982
DYS393 13 0.6216 88.325.504 99.9989
DYS437 14 0.6216 142.088.855 99.9993
DISCUSIÓN
Figura 2. Frecuencias alélicas de DYS481 en las sub-
poblaciones estudiadas.
Según trabajos previos, el marcador DYS481 ha
mostrado ser uno de los más polimórficos e
informativos para la identificación humana (De
Knijff et al., 1997; Geppert et al., 2009; D' Amato et al.,
2010). No obstante, a la fecha no se habían hecho
estudios en las poblaciones latinoamericanas.
(a)
(b)
Figura 3. Electroferograma del sistema YFiler (a) y
DYS481 (b) de la evidencia forense de ensayo.
La distribución alélica del DYS481 en las
subpoblaciones de La Paz, Sucre y Santa Cruz
evidencia que cada una de ellas posee estructura
genética distinta (Figura 2). La distribución alélica de
las subpoblaciones de La Paz y Santa Cruz podría
explicarse a través del modelo “paso a paso”, donde
la mutación influye linealmente en el número de
repeticiones del mini-microsatélite (Gómez et al.,
2008), con una pendiente única y diferente
distribución unimodal.
La subpoblación de Sucre posee distribución
bimodal, lo que sugiere migraciones combinadas
relativamente recientes o, alternativamente, el efecto
de no haber detectado aún todos los alelos de este
marcador (Gómez et al., 2008).
Calabrese et al., (2001) sugiere considerar que la
evolución de los STRs se inicia con un alelo ancestral
(Burgarella & Navascués, 2011), lo cual es más
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evidente para las subpoblaciones de La Paz y Santa
Cruz en torno al alelo 20. Tómese en cuenta que los
alelos ganan o pierden una unidad de repetición en
cada evento mutacional, en un fenómeno generado
por el deslizamiento de la ADN-polimerasa durante
la replicación (Kimura & Ohta, 1978). Los alelos
ancestrales suelen sufrir con mayor frecuencia la
adición de una unidad de repetición que la deleción
(Zhivotovsky et al., 2004).
El análisis estadístico global mostró que los linajes
masculinos de las poblaciones del mundo, incluida la
de Bolivia, presentan diferencias en la estructura
génica de DYS481, lo que sugiere un patrón evolutivo
independiente de este marcador (Tabla 4) (De Knijff
et al., 1997; Geppert et al., 2009; Cloete et al., 2010; Xu
et al., 2010).
La DG de la población Alemana es la más polimórfica
(12 alelos), seguida por las poblaciones China,
Caucásica, Africana, Arábica y Boliviana. Por tanto,
las poblaciones con más alelos tienden a presentar
mayor DG cuando éstos están desigualmente
distribuidos De Knijff et al., 1997; Geppert et al.,
2009; Cloete et al., 2010; Xu et al., 2010). Por ejemplo,
la población de Leipzig (Alemania) muestra DG de
0.8079 y la boliviana de 0.8150, pese que esta última
tiene menor número de alelos (Tabla 4).
Tanto la diversidad alélica como la génica influyen
sustancialmente en la variación genética, siendo
dependientes de la asociación no aleatoria de los
alelos del locus en las diferentes poblaciones (Jarve et
al., 2009). Asimismo la diversidad está relacionada
con los procesos de mutación y con la diversidad
alélica de una población, influenciada por el flujo
génico y/o la migración (Gómez et al., 2008).
Se ha visto también, que mientras la distribución de
las frecuencias alélicas sea amplia, el poder de
discriminación (PD) aumenta y la probabilidad de
coincidencia (PC) disminuye. En el presente caso el
DYS481 alcanza el 0.8175 de PD y 0.1825 de PC,
encontrándose dentro del rango de 0.7172 a 0.8504 y
de 0.1496 a 0.2827 respectivamente de otras
poblaciones del mundo (Tabla 4).
En el presente estudio el DYS481 fue evaluado en
combinación con 17 marcadores del sistema genético
AmpFiSTR® Y-Filer y con el haplotipo mínimo
Tabla 4. Distribución alélica, DG, DA relativa, PC, PD de las diferentes regiones del mundo
(Hanson et al., 2007; Geppertet al., 2009; Cloeteet al., 2010; Xuet al., 2010).
ALELOS
Caucásicos (n=98)
Afro- americanos
(n=100)
Alemania-Leipzig (n=244)
Arabia-muslime (n=105)
China (n=174)
Bolivia (n=102)
18 0.0100
19 0.0100 0.0080 0.0290 0.0662
20 0.0250 0.0052 0.2501
21 0.0400 0.0300 0.0780 0.0290 0.0344 0.1665
22 0.4700 0.1200 0.3160 0.2950 0.0958 0.2095
23 0.2100 0.0900 0.1840 0.2290 0.3348 0.2305
24 0.0400 0.1000 0.0900 0.1810 0.2142 0.0403
25 0.0700 0.2700 0.2090 0.1050 0.1178 0.0185
26 0.0600 0.1400 0.0530 0.0860 0.0890 0.0185
27 0.0600 0.1100 0.0120 0.0290 0.0434
28 0,0200 0.1000 0.0120 0.0190 0.0428
29 0.0400 0.0080 0.0170
# de alelos 10 9 12 9 11 8
DAr 0.8333 0.7500 1.0000 0.7500 0.9166 0.6667
DG 0.7246 0.8590 0.8079 0.8145 0.8124 0.8150
PC 0.2827 0.1496 0.1954 0.1932 0.1923 0.1825
PD 0.7172 0.8504 0.8045 0.8067 0.8077 0.8175 DA: Diversidad Alélica relativa. DG: Diversidad Génica.
PC: Probabilidad de Coincidencia. PD: Poder de Discriminación.
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constituido por 9 marcadores, observándose que, a
medida que se incrementa el número de Y-STRs, la
diversidad haplotípica y la PD se incrementan, lo que
a su vez hace que la PC entre dos individuos tomados
al azar disminuya.
Si se reduce el número de marcadores analizados,
estadísticamente se incrementará el número de
linajes que estarían emparentados. Si se utiliza solo el
haplotipo mínimo (9 marcadores) el incremento es
más notorio, lo que podría llevar a falsas
coincidencias de linaje. En síntesis, la utilización de
un número reducido de marcadores hace que la
probabilidad de coincidencia sea mayor, lo que eleva
la probabilidad de encontrar ese haplotipo en la
población y resta certeza a las conclusiones del
análisis, mucho más si el estudio no puede
complementarse con otros marcadores, como los
STRs autosómicos. Nótese que la diversidad
haplotípica de la subpoblación de La Paz obtenida
incluyendo a DYS481 fue del 99.6%, superior al
obtenido solo con el sistema AmpFiSTR® Y-Filer de
99.25% (Tabla 5).
Tabla 5.Diversidad Haplotípica (DH), Poder de
Discriminación (PD) y la Probabilidad de Coincidencia
para el Haplotipo Extendido, sistema Y-Filer y Haplotipo
mínimo (HM). Subpoblación de La Paz con un n=33.
SISTEMA DH PD PC
Haplotipo Mínimo 94.72% 70.27% 29.7%
Y-Filer® 99.25% 95.00% 5.00%
Haplotipo Extendido 99.60% 97.00% 3.10%
Por otro lado, para el análisis de polimorfismos
genéticos en muestras biológicas degradadas, se
evalúa la correspondencia de la muestra de
referencia con la evidencia en duda. Este cotejo
permite tres posibles resultados: que no coincida
ningún marcador, que coincida uno o más o que
coincidan todos. En cualquier caso, las conclusiones
se basarán en el teorema de Bayes (inferencia de la
probabilidad final de un suceso a partir de la
conjunción de las probabilidades parciales). El
resultado presentado al juez se conoce como “Razón
de Verosimilitud” (RV) o "razón bayesiana de
probabilidad”.
En el perfil genético de la muestra de ensayo se
detectaron 8 de los 16 marcadores esperados del
sistema Y-Filer (Tabla 3) y su análisis bayesiano
muestra RV de 91.647.311, que no es suficiente para
arribar a conclusiones en un contexto jurídico. Al
incluir al nuevo DYS481 la RV se incrementa a
142.088.855. Es importante notar que la RV se
interpreta como el número de veces más probable de
que la evidencia corresponda al sospechoso que a
otro individuo tomado al azar de la “misma”
población (Tabla 3 y Figura 5).
Figura 5. Incremento acumulativo exponencial de la
Razón de Verosimilitud (RV) con (rojo) y sin (azul)
DYS481.
Más aún, los 8 marcadores otorgan una probabilidad
de correspondencia del 99,9891%. La adición del
DYS481 incrementa la misma a 99,9993%, que
representa 1 en 100000 linajes masculinos de
correspondencia positiva. En el dictamen pericial la
conclusión presentada al Juez diría: “la evidencia
colectada en la escena del crimen y la muestra del
sospechoso comparten 9 marcadores Y-STR con
probabilidad de correspondencia del 99,999 por
ciento”.
Este pequeño ensayo demuestra que los sistemas
comerciales pueden ser insuficientes para arribar a
conclusiones y que la adición de un mini-STRs
suficientemente polimórfico puede incrementar la
certeza del resultado (Figura 5), especialmente si se
consideran Y-STRs de tamaño reducido y, por tanto,
detectables en muestras biológicas muy complejas.
Tómese en cuenta también que, en todos los casos, el
proceso de validación lleva implícita la tipificación
del marcador en la población en cuestión ya que el
análisis estadístico será siempre diferente entre
poblaciones.
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CONCLUSIÓN
Se ha demostrado que el mini-YSTR DYS481 es útil
para identificar linajes e incrementar el valor de los
índices estadísticos de los actuales sistemas
comerciales, ampliando la certeza de los resultados
con evidencias biológicas complejas.
La adición del mini-YSTR DYS481 incrementa de
forma acumulativa y significativa el valor de la razón
de verosimilitud y disminuye el número de
marcadores no detectados durante una prueba de
ADN, por lo tanto es especialmente útil para el
análisis estadístico de indicios forenses complejos
donde la tipificación es comúnmente incompleta.
Las tres subpoblaciones estudiadas presentan una
DG superior a 0.65 y la diversidad alélica demostró
ser independiente para cada sub-población. El PD de
este mini-YSTR es de 0.8175, por encima del
promedio mundial de 0.65, por tanto el locus
analizado es apto para su aplicación como marcador
forense de identidad humana en linajes masculinos
de las subpoblaciones de La Paz, Sucre y Santa Cruz.
AGRADECIMIENTOS
Los autores desean reconocer y agradecer al Centro
de Investigación Genética del Instituto de
Investigación Técnico Científicas de la Universidad
Policial por su apoyo a este proyecto. Especial
agradecimiento a las FELCC de La Paz, Sucre y Santa
Cruz por haber proporcionado las muestras de las
subpoblaciones en estudio y a la Facultad de Ciencias
Farmacéuticas y Bioquímicas de la Universidad
Mayor de San Andrés.
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ARTÍCULO ORIGINAL
HAPLOTIPOS DE ADN MITOCONDRIAL REVELAN POSIBLE RUTA
MIGRATORIA ANCESTRAL DE LOS PUEBLOS URU Y AYOREO DE
BOLIVIA
Villarroel, W.1, Sbtte. Adm. Arteaga, D.2 & Sosa, L.1
1 Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas. Universidad Mayor de San Andrés. La Paz-Bolivia. 2 Centro de Investigación Genética, IITCUP, Universidad Policial. La Paz, Bolivia. [email protected]
RESUMEN
El poblamiento de América producido a través de distintas rutas migratorias desde el continente africano constituye uno de los
eventos más importantes de la historia evolutiva del ser humano pues dio origen a los distintos pueblos y tribus del planeta. Diversos
estudios antropológicos, lingüísticos, sociales y religiosos se han desarrollado en el pasado. Sin embargo, la reciente inclusión del
ADN mitocondrial (ADNm) ha suministrado nuevos elementos para reconstruir y comprender mejor la historia de las migraciones
humanas. El presente trabajo estudió los pueblos indígena–originarios bolivianos “Uru” del departamento de Oruro y “Ayoreo” de
Santa Cruz, secuenciando la región hipervariable del ADNm y encontrando haplotipos únicos y diferentes para ambos pueblos. El
análisis filogeográfico sugiere que el pueblo “Uru” llegó al continente americano a través de la India y las islas de la Polinesia, mientras
que el “Ayoreo” a través de Istmo de Beringia al estar emparentado con pueblos de norte, centro y Sudamérica. El linaje ancestral de
los haplotipos “Uru” parece ser el más antiguo de ambos dada su relación con los linajes africanos nativos. La inclusión de más
pueblos indígena–originarios es fundamental para comprender mejor el origen e historia del Estado Plurinacional de Bolivia.
PALABRAS CLAVE: Filogeografía, haplotipo, ADN mitocondrial, Uru, Ayoreo.
JUCH’URIMANCHANA
Ancha rumas chaymurqanku Americaman llajtachakuy Africamanta kay wakikux yachanpay imaynata ñawpariqhusqa runas
imaytin. Chaymanpacha miraskanku ancha runas kay jallp`achispi planeta miska. Tukuylaya yachaykuna ruwaqhorqa
ñawparumasmanta, tullusminqhuta kawarqanku yachamankupax imaynachus karkanku, mana tukuy runas jukllatachu
parlanqanku, janaxpachatatanchismanta yachaykuna ruwakullantay kay wax yachakuna hastawan suticharkuska kay ADN
mitocondrial minku chaywan yachakunanpax maymanta runas chaymurkanku kay jall`pacnshidman. Chayrayku ruwakun llankày
kay llaxtanchispi paqarisqamanta “Uru” Oruromanta, “Ayoreo” Santa Cruzmanta riqhuchispa kay yachakana yachanapay
maymantachus jamunku kay llaxtas richuchin kay llajta Urusman chaymuskankuta India nixta, Islas Polinesia tawan, chanta llajta
Ayoreo jamusqa Itsmo Beringiamanta imaxtin ñawarman kanku chncha chawpi americamanta, Ñawpaxwaskas llajta Urusmanta
kanku astawan mawkas imaray cuchus ñawarmasi kanku Africanoswan.
RIMANAS: Maymantata, haplotipo, ADN mitocondrial, Uru, Ayoreo.
ABSTRACT
El poblamiento de América producido a través de distintas rutas migratorias desde el continente africano constituye uno de los
eventos más importantes de la historia evolutiva del ser humano pues dio origen a los distintos pueblos y tribus del planeta. Diversos
estudios antropológicos, lingüísticos, sociales y religiosos se han desarrollado en el pasado. Sin embargo, la reciente inclusión del
ADN mitocondrial (ADNm) ha suministrado nuevos elementos para reconstruir y comprender mejor la historia de las migraciones
humanas. El presente trabajo estudió los pueblos indígena–originarios bolivianos “Uru” del departamento de Oruro y “Ayoreo” de
Santa Cruz, secuenciando la región hipervariable del ADNm y encontrando haplotipos únicos y diferentes para ambos pueblos. El
análisis filogeográfico sugiere que el pueblo “Uru” llegó al continente americano a través de la India y las islas de la Polinesia, mientras
que el “Ayoreo” a través de Istmo de Beringia al estar emparentado con pueblos de norte, centro y Sudamérica. El linaje ancestral de
los haplotipos “Uru” parece ser el más antiguo de ambos dada su relación con los linajes africanos nativos. La inclusión de más
pueblos indígena–originarios es fundamental para comprender mejor el origen e historia del Estado Plurinacional de Bolivia.
KEY WORDS: Filogeografía, haplotipo, ADN mitocondrial, Uru, Ayoreo.
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INTRODUCCIÓN
La antropología y otras ramas afines estudian las
poblaciones indígenas con el fin de conocer el patrón
de la migración humana (Sutcliffe, 1998), que persiste
en su religión, cultura, tradiciones y en su estructura
genética, creando gradualmente una imagen de
cuándo y dónde se movieron los humanos antiguos
en el mundo (National Geographic Society, 2010).
Se han postulado distintas rutas migratorias para el
poblamiento de América, entre ellas la del Istmo de
Beringia, la formación de un puente de hielo hace
40.000 a 50.000 años, permitiendo la migración desde
el norte de Asia. Otra ruta, postulada por Paul Rivet,
sugiere que grupos humanos partieron desde el Este
de Asia y atravesaron las islas del Pacífico,
navegando, hasta llegar al continente Americano
(Rivet, 1947).
Por su antigüedad y relevancia histórica, las
poblaciones indígenas bolivianas Uru y Ayoreo han
sido protagonistas de varias publicaciones basadas
en estudios antropo-socio-culturales (Badani, 2006;
Ministerio de Educación, 2008; Koop & Díez, 2009).
Investigaciones lingüísticas compararon el Puquina
con lenguas de las islas de la Polinesia del Pacífico,
proponiendo un vínculo entre Urus y Polinesios.
Estos vínculos deben estudiarse detalladamente y el
ADN ha demostrado ser una fuente de información
insustituible pues las secuencias genéticas han
Figura 1. Puntos de muestreo en comunidades Uru (rojo) y Ayoreo (amarillo).
ZAPOCÓ
CONCEPCIÓN
LLAPALLAPANI
CHIPAYA
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acompañado a los seres humanos a través del tiempo
y el espacio, y puede atestiguar la hazaña migratoria
de pueblos como los Uru o los Ayoreo.
La antropología genética ofrece una nueva
herramienta para estudiar las migraciones humanas,
otorgando una mejor idea de los procesos de
evolución para la reconstrucción de los patrones
migratorios que pueden rastrearse en el tiempo (Bert
et al., 2004; Dornelles et al., 2004; Costa et al., 2008),
demostrando así que cada población nativa guarda
una gran riqueza genética para las naciones del
mundo.
La región control hipervariable del ADN
mitocondrial (HV) es especialmente útil para estos
estudios, donde el análisis de haplotipos, la
identificación de haplogrupos y la filogeografía
combinada, permiten relacionar poblaciones
geográficamente separadas, rastreando y
reconstruyendo su historia evolutiva (Bailliet et al.,
1994; Fernández, 2000; Bert et al., 2004; Álvarez, et al.,
2007).
Por los antecedentes vertidos este trabajo ha tratado
de obtener información para las siguientes
cuestiones: ¿los haplotipos HV de los Uru y Ayoreo
son únicos y diferentes entre sí?, ¿cuál es la relación
filogenética de éstos con respecto al resto del mundo?
y ¿cuál es la relación filogeográfica de estas
poblaciones?
MATERIALES Y MÉTODOS
Población de Estudio
Se colectaron 53 muestras de hisopado bucal de
personas mayores de edad no emparentadas,
pertenecientes a los pueblos Uru (comunidades
Llapallapani y Santa Ana de Chipaya, Oruro) y
Ayoreo (comunidades Concepción y Zapocó, Santa
Cruz).
Amplificación por PCR
Se obtuvo ADN total con el sistema “Wizard
Genomic DNA Purification” (Promega) optimizado
(Miller et al., 1988). Las regiones Hipervariables (HV)
I y II del ADN mitocondrial fueron amplificados
usando los cebadores específicos L15997, H16391,
L48 y H408. Los productos purificados fueron
secuenciados con el sistema comercial “BigDye
Terminator v 3.1” en un Analizador Genético
AB3130 (Applied Biosystems) según
recomendaciones del fabricante.
Análisis de Datos
Las secuencias fueron verificadas por
complementariedad desde la posición 16024 a 16365
en HVI, y 73 a 340 en HVII. Se observó heteroplasmía
de longitud en HVI para la población Uru. Las
secuencias fueron alineadas y comparadas con la
Referencia Revisada Cambridge (rCRS) en el
programa Bioedit (www.mbio.ncsu.edu). Se
identificarón los haplotipos propios para cada
población y se los clasificó en haplogrupos según la
base de datos “Mitomap” (www.mitomap.org).
La construcción de los árboles filogenéticos y las
redes de haplotipos se realizó con los programas
MEGA 4.1 (Tamura et al., 2003) y TCS 1.21, ambos
basados en el método Neighbor-Joining (Bandelt et
al., 2006), con nivel de consistencia de 1000 réplicas y
utilizando como grupos externos un ancestro
africano, el homínido neandertal y el Pan troglodytes.
Adicionalmente se efectuó un análisis filogenético de
las poblaciones Uru y Ayoreo en una base de datos
separada de 13 secuencias de poblaciones indígenas
del mundo obtenidas del Genebank.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Se identificaron seis haplotipos: URU1, URU2, URU3,
URU4 en las muestras de origen Uru (Figrua 1),
identificándolas con el Haplogrupo Universal B, y
AYO1 y AYOE para las muestras de origen Ayoreo,
identificadas con el Haplogrupo Universal C
(Dornelles et al., 2004).
En el árbol filogenético resultante (Figura 2) se
observa la formación de dos clados propios para cada
pueblo. Por la topología en contraste a la secuencia
del ancestro africano, es muy posible que estas dos
poblaciones provengan de linajes remotamente
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emparentados.
Figura 1. Árbol Filogenético de secuencias Uru y Ayoreo
de la región hipervariable mitocondrial con el método
Neighbor-Joining (Bootstrap 1000) (Bandelt et al., 1995)
siguiendo el modelo de sustitución de Tamura & Nei
(1993) El grupo externo corresponde al primate Pan
troglodytes (chimpancé).
La Figura 3 muestra la relación filogenética de los
Uru y Ayoreo bolivianos estudiados con otras
poblaciones del mundo. El árbol muestra 2 clados, el
de poblaciones amerindias emparentadas con los
Ayoreo, y el segundo de otras poblaciones bolivianas
(artículo en preparación) junto la población Uru, pero
a su vez emparentado con poblaciones nativas de las
Islas de la Polinesia (Oceanía). Asimismo los Uru y
Ayoroa forman independientemente un único clado
respecto a las demás poblaciones bolivianas, lo que
podría indicar que han preservado mejor su linaje
materno ancestral.
Estos resultados llevaron a estructurar un árbol
filogenético compuesto por solamente las
poblaciones Uru, Ayoreo, Polinesia y algunas nativas
de Norteamérica. La Figura 4 muestra el resultado,
donde se aprecia el clado de los Ayoreo acompañado
por pueblos indígenas de Norte, Centro y
Sudamérica, y el clado Uru acompañado de
poblaciones indígenas de la Polinesia, Australia e
India. El subsecuente análisis de la red haplotipos
(artículo en preparación) mostró los pasos
mutacionales con respecto al ancestro africano,
sugiriendo que la población indígena Ayorea
atravesó un proceso evolutivo más largo que el Uru.
Considerando que el tiempo generacional de una
migración por tierra (de norte a sud américa) es
mucho mayor que por mar, es posible vincular la
corta evolución genética de los Uru a una migración
marítima por las islas del pacífico centro y sur.
Las investigaciones antropológicas sustentan que la
población indígena Uru posee amplios
conocimientos sobre navegación ya que incluso se
autodenominan Jas–shoni “Hombres del Agua”,
conocimiento o memoria transmitida por
generaciones. Por otro lado, a orillas del lago Titicaca
existen poblaciones Aymara que navegan el lago con
conocimientos adquiridos por de Uru, ya que estos
pueblos Aymara en principio fueron exclusivamente
agricultores (Gisbert & Gisbert, 1998; Fisher et al.,
2008; Cáceres, 2009; Kopp, & Díez, 2009).
Varios investigadores antropólogos étnicos
reconocen que el pueblo Uru es uno de los pocos que
ha mantenido su antigüedad e identidad por siglos.
Esta antigüedad está comprobada por la familia
lingüística a la pertenece el idioma Puquina, que
tiene raíces con dialectos de la Polinesia (Fisher et al.,
2008; Cáceres, 2009; Kopp, & Díez, 2009).
En contraste a los Uru no existen aún investigaciones
antropológicas profundas de los Ayoreo, quienes en
entrevista reconocen su reciente asentamiento y que
antiguamente eran nómadas. El presente estudio
provee por primera vez información genética
detallada sobre la población Ayorea, con resultados
que deben impulsar investigaciones antropológicas
serias.
Correlacionando los datos obtenidos con los del
Haplogrupo Universal C para los Ayoreo y del
Haplogrupo B para los Uru, además de los datos de
relación filogenética y la red de haplotipos, es factible
proponer que el territorio boliviano fue colonizado
antiguamente a través de distintas rutas migratorias
(Figura 5), planteando a su vez que la Población
Indígena Ayorea recorrió la ruta migratoria terrestre
desde el Istmo de Beringia, atravesando Norte,
Centro y Sudamérica.
Asimismo, la Población Indígena Uru tomó la ruta
migratoria marítima, atravesando las islas del
Océano Pacífico hasta llegar a las costas de
Sudamérica de donde migraron gradualmente al
norte, estableciéndose en los cuerpos de agua
continentales como el Lago Titicaca y el Poopó.
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Figura 2. Árbol Filogenético de algunos pueblos
indígenas de Bolivia y varios pueblos del mundo, basado
en los polimorfismos HVI y II con el método Neighbor-
Joining (Bootstrap 1000) (Bandelt et al., 1995) y el modelo
de sustitución de Tamura & Nei (1993). Quechua,
Aymara, Moseten y Chimane (Bolivia), Yanomama y
Warao (Venezuela), Mataco (Argentina), Bella Coola
(Colombia), Guaraní (Paraguay), Maya (México), Ojibwa
(USA), Evenk (Siberia), Polinesia, Australia e India
(Torroni et al., 1993a; Torroni et al., 1993b; Bert et al.,
2004; Matallana & Cruzado, 2010).
Figura 4. Filogenia de los Uru, los Ayoreo y pueblos
nativos de América y Polinesia.
Figura 5. Ruta migratoria propuesta para los pueblos
indígenas originarios Uru y Ayoreo del territorio
boliviano (crédito de Jesús Mourín, 2013).
URU
AYOREO
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CONCLUSIONES
La región HVI y II del ADN mitocondrial ha
demostrado ser altamente informativa para estudios
antropológicos de las poblaciones Uru y Ayoreo del
territorio boliviano. Ambos poseen haplotipos
mitocondriales de distinto linaje ancestral y de
evolución convergente.
Inclusión de otros grupos nativos y correlación con
otras disciplinas científicas es necesaria para evaluar
las hipótesis propuestas y para consolidar la
importancia de preservar la existencia y proteger la
historia de estas poblaciones.
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ARTÍCULO ORIGINAL
ESTRATEGIA DE FORRAJEO Y TAXONOMÍA MOLECULAR DE
CUATRO PICAFLORES EN LA CEJA DE MONTE YUNGUEÑA DE
LA PAZ
Sbtte. Adm. Serrudo, V., Abtte. Adm. Arteaga, D., Ninahuanca, A. & Sbtte. Adm. Salazar, K.
Grupo de Investigación Tantasarañani, IITCUP, Universidad Policial. [email protected]
RESUMEN
La estrategia de forrajeo es una parte importante del comportamiento relacionado con la obtención del requerimiento
energético y ha demostrado ser un carácter taxonómico apto a nivel de subfamilia, ya que la mayoría de las especies de
la subfamilia más antigua de picaflores adopta el ruterismo, mientras que la más reciente el territorialismo. Durante seis
se estudió éste carácter comportamental a nivel taxonómico en contraste al marcador mitocondrial Cyt-B (362 pb) en
cuatro especies de picaflores de ceja de monte yungueña: Heliangelus amethysticollis, Coeligena violifer, Pterophanes
cyanopterus y Metallura tyrianthina. Las dos primeras tienden al territorialismo y las últimas al ruterismo, agrupación que
no concuerda con la taxonomía molecular. El carácter estrategia de forrajeo no es adecuado para la identificación
taxonómica de estas cuatro especies en el hábitat estudiado.
PALABRAS CLAVE: Estrategia de forrajeo, citocromo-b, ceja de monte yungueña, taxonomía molecular.
JUCH’URIMANCHANA
Imayna mikhuna mask`anku q`intis anchamunayku yachayta imaynatiyanku yachanapax mayka kallapatian chantapis
sumaj carácter taxonómico chhklay suballyukama imaxtin ashqa astawan ñaxpax suballyupaxta imajtin ancha q`intis
suballyu ñaxpax tiyarqanku maynata makanakunku, maymanta mask`anku mikhunankuta qayta tinkuchirqanku
maynata makanakunku, imaynata mask`anku mikhunakuta qayta tinkuchirqanku uj yachaqanwan marcador
mitocondrial citocromo b (362 pb) nispatawa jamu q`intispi Ceja de Monte Yungueñamanta; kay tawa jamu kanku.
Heliangelus amethysticollis, Coeligena violifer, Pterophanes cyanopterus, Metallura tyrianthina. Iskay H.
amethysticollis, C. violifer mana mikhuna mask`anakuna, nixta P. cyanopterus, M. tyrianthina ari. Chaymanta kay
caracter mana allinchu taxonomía molecularpax.
RIMANAS: Imayna mikhuna mask´ay, citocromo-b, ceja de monte yungueña, taxonomía molecular.
ABSTRACT
Foraging strategy is a keystone of the hummingbird behavior related with obtaining energetic requirement and, at
subfamily level, have demonstrated been a good taxonomic character because most of the species belong to the most
antique subfamily are trapliners instead most recent are territorialists. Along six months it has been evaluated this
comportamental character at taxonomic level in four hummingbirds species from “ceja de monte yungueña” Heliangelus
amethysticollis, Coeligena violifer, Pterophanes cyanopterus and Metallura tyrianthina and contrasted the findings with the
mitochondrial molecular marker Cyt-B (362 pb) showing that the first two species tend to territorialism and two last
ones tend to behave as trapliners, cluster that doesn’t agree with taxonomic one obtained with Cyt-b. These results show
that the foraging strategy character by itself is not due for taxonomic works in this habitat and with these four species.
KEYWORDS: Foraging strategy, cytochrome b, ceja de monte yungueña, molecular taxonomy.
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INTRODUCCIÓN
La estrategia de búsqueda de alimento (estrategia de
forrajeo) está fuertemente influenciada por las
presiones selectivas que favorecen la maximización
de la eficiencia de consumo energético (Begon et al.,
2006) como lo refleja el teorema del valor marginal
aplicable a picaflores (Charnov, 1976; Pyke, 1978;
Carmel & Ben-Haim, 2005). Una estrategia implica
un grado de decisión sobre un evento para llegar a un
fin el cual, en este caso, es alimentarse, una de las dos
funciones básicas de todo organismo vivo. En el
mundo de los picaflores se presentan dos estrategias
antagónicas entre sí, la rutera y territorialista
(Feisinger & Colwell, 1978), de las cuales surgen otras
que solo son modificaciones de estas dos.
Al ser sistemas de alto consumo energético debido a
su forma de vuelo y tamaño (Pearson, 1950;
Hainsworth, 1972; Chai, 1997; Suárez, 1998; Gass &
Garrison, 1999) se esperaría que la adopción de una
estrategia de forrajeo de los picaflores influya
significativamente en su supervivencia y,
ulteriormente, en su evolución, como evidencia la
organización taxonómica a nivel de subfamilia de
estas aves, donde la mayoría de las especies dentro
de la subfamilia más antigua, Phaethornitinae,
adoptan la estrategia rutera de forrajeo, ocurriendo lo
contrario con la subfamilia más reciente, Trochilinae,
que se inclina por el territorialismo (Schuchmann,
2001).
De ahí la inquietud de evaluar la estrategia de
forrajeo como un carácter taxonómico en cuatro
especies cuyo hábitat, la ceja de monte yungueña,
representa un escenario óptimo debido a sus bajas
temperaturas y lluvias constantes, condiciones
extremas para estas aves cuyo mayor desafío es
mantenerse a 40oC, lo que haría que el
comportamiento de búsqueda de combustible para
mantener el calor resalte, poniendo de manifiesto la
importancia evolutiva de elegir entre ruterismo o la
territorialismo. Esta evaluación requiere un análisis
integral comportamental-genético (Sánchez, 2003) y
genético (Bleiweiss et al., 1997; Schuchmann, 2001;
Sánchez, 2003; Altshuler et al., 2004; McGuire et al.,
2007) dadas las implicancias de la evolución biológica
de estas aves.
Con ese enfoque, el presente trabajo ha estudiado una
región del gen citocromo-b mitocondrial, altamente
informativo, y lo ha contrastado con el carácter
comportamental de forrajeo, para determinar si la
estrategia de forrajeo puede ser empleada como
carácter taxonómico en este hábitat en estas cuatro
especies.
MATERIALES Y MÉTODOS
Área de estudio.
Los picaflores se observaron en los primeros cuatro
kilómetros de la senda “Sillutinkara” en el Parque
Nacional y Área Natural de Manejo Integrado (PN-
ANMI) Cotapata (SERNAP 2001), entre 2.980 y 3.460
metros de altitud, en cuatro parches florales
utilizados por los picaflores y separados por más de
150 m.
Estrategias de forrajeo.
Se estudió la estrategia de forrajeo considerando dos
tipos: el ruterista (vuelo a lo largo parches florales) y
el territorialista (defensa de parches), bajo las
variables de respuesta: 1) persecuciones x hora x
parche; 2) estadía en el parche x hora; y 3) presencia
o ausencia en el parche, entendiéndose la
persecución cuando un espécimen persigue a otro
(intra o interespecífico) para proteger un parche de
uno a tres puntos de percheo.
Se observaron los siguientes especímenes y
cantidades: Coeligena violifer (CBF-2450) seis,
Metallura tyrianthina (CBF-2470) ocho, Pterophanes
cyanopterus (CBF-2440) cinco y Heliangelus
amethysticollis (CBF-2405) cinco, identificados por
marcaje con pintura no tóxica (Acrilex) en la espalda
y pecho después de ser capturados con redes niebla.
Para definir matemáticamente ruterismo,
territorialismo, agresividad y movilidad, se
emplearon los índices descritos en la Tesis de Grado
de Serrudo (2012) y el artículo consecuente (Serrudo
et al., 2012). Los factores de territorialidad (T),
agresividad (A) y movilidad (M) se registraron desde
las 8:00 a 09:00 y desde 17:00 a 18:00, durante cuatro
días y 33 horas en total, de enero a mayo de 2010
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porque en estos meses se aprecia mayor floración y
estas especies no defienden territorios destinados a la
reproducción (Schuchmann, 2001).
Análisis del genético.
El ADN total fue extraído de las plumas rectrices de
cada espécimen, colectadas en sobres manila a
temperatura ambiente y procesadas con el sistema
comercial “Wizard DNA Purification Kit” (Promega)
optimizado con proteinasa K 10mg/ml y DTT 100mM
en la etapa de lisis.
Luego se amplificó y secuenció un fragmento
polimórfico de 263 pb del gen citocromo-b con los
cebadores L15302 y H15709 (Lee et al. 1996)
empleando los sistemas comerciales “GoTaq
Colorless Master Mix” (Promega) y BigDye
Terminator v3.1 (Applied Biosystems), revelando los
productos finales por electroforesis capilar en el
Analizador Genético AB3130 de la Universidad
Mayor de San Andrés. La secuencias se verificaron
con los programas “Sequencing Analysis 5.2” y
“Sequence Scanner v 1.0”, para posteriormente
editarlas con el programa BioEdit
(www.mbio.ncsu.edu) y alinearlas con el algoritmo
ClustalW del programa MEGA 4.0. (Kumar et al.
2004).
Las distancias genéticas se obtuvieron con el modelo
de sustitución de Tamura & Nei (1993). El árbol se
construyó con el método Neighbor-Joining (1987) de
500 réplicas “bootstraping”, empleando todas las
posiciones codónicas.
Dendogramas de comportamiento.
Con el Índice de Territorialismo (T) por especie se
construyó un dendrograma calculando el índice de
similitud por suma de cuadrados en base al índice de
Morisita–Horn (Moreno, 2000).
22
*2
ba
bad
(5)
Donde:
d = Distancia entre Ts
a = Valor de T para la primera especie.
b = Valor de T para la segunda especie.
Con la matriz de distancias de este índice se hizo un
análisis multivariado jerárquico en SYSTAT v.11.
Finalmente se compararon las topologías del
dendrograma derivado de las secuencias del gen
citocromo-b y del elaborado en base a la estrategia de
forrajeo observada.
RESULTADOS
Comportamiento.
Evaluando el comportamiento separadamente (Tabla
1) se observa la tendencia al ruterismo de Metallura
tyrianthina y Pterophanes cyanopterus, por la ausencia
de persecuciones en ambas especies. Más aún, el
tiempo de vigilancia de estas dos especies se asemeja,
diferenciándose de Heliangelus amethysticollis y
Coeligena violifer, de entre las cuales la primera
muestra mayor tendencia al percheo y la segunda es
más agresiva (Tabla 1). Los índices calculados
posteriormente mostraron la misma tendencia que
los datos crudos (Tabla 2).
Tabla 1. Comportamiento observado.
N = No. de especímenes observados;
H = sumatoria de horas de observación;
P = promedio de persecuciones x hora x parche;
E = promedio de estadía en parche por horas parche.
(± = error estándar)
Picaflor N H P E
Metallura
tyrianthina 8 4,17
0,00 ±
0,24
0,78 ±
1,30
Heliangelus
amethysticollis 5 4,4
1,10 ±
0,52
8,95 ±
7,38
Coeligena
violifer 6 4,16
1,72 ±
3,17
7,22 ±
11,36
Pterophanes
cyanopterus 5 4,25
0,00 ±
0,00
0,28 ±
0,55
En el caso de H. amethysticollis se observó a dos
especímenes en un mismo territorio con promedio de
permanencia de 19,3 min x hr y 0,27 min x hr, lo que
demuestra la variabilidad del comportamiento entre
individuos.
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38
Tabla 2. Índices de agresividad (A), movilidad (M) y
territorialismo (T). (Serrudo et al., 2012).
Picaflor (A)
0…∞
(M)
0…∞
(T)
0…1
M. tyrianthina
(METY) 0,5 7,8 0.1
H.
amethysticollis
(HEAM)
0,5 0,6 0.8
C. violifer
(COVI) 2,0 2,8 0.7
P. cyanopterus
(PTCY) 0,0 8,1 0.0
Análisis del Citocromo-b.
La distancia genética obtenida con el modelo de
sustitución de Tamura & Nei (1993) dio como
resultado la topología de la Figura 1, que es
concordante con otros trabajos (McGuire et al. 2007).
Metallura tyrianthina y Heliangelus amethysticollis (el
primero rutero y el segundo propenso al
territorialismo según los índices), ocupan un mismo
clado, mientras que Pterophanes cyanopterus y
Coeligena violifer (el primero rutero y el segundo el
más agresivo), ocupan otro, más emparentado al
grupo control externo Aerodramus fuciphagus, una
salangana asiática insectívora Apódida, empleada
como grupo externo por pertenecer a otra familia, lo
cual ofrece mayor definición y precisión en la
comparación de las distancias genéticas al momento
de hacer un análisis taxonómico.
La estrategia de forrajeo como carácter taxonómico.
El dendograma construido con el índice de
territorialismo (T) confirma la similitud entre C.
violifer y H. amethysticollis y posiciona a Metallura
tyrianthina en un clado intermedio, siendo
Pterophanes cyanopterus (rutero) el más distante y
sugestivamente más primitivo. La topología genética
y la del comportamiento estudiado (estrategia de
forrajeo) son discordantes.
DISCUSIÓN
Una probable explicación del porqué M. tyrianthina,
la especie más pequeña de las cuatro evaluadas
demostró la mayor tendencia al ruterismo puede
estar relacionada a las condiciones desfavorables
para la termorregulación de esta especie, ya que en
ceja de monte yungueña la humedad relativa es alta
y, por tanto, las temperaturas bajas (Ribera, 1995;
Navarro & Maldonado, 2002; Armonía, 2010).
López-Calleja & Bozinovic (2003), en su trabajo con
Sephanoides sephanoides, observaron que a bajas
temperaturas se reducen las tasas de movimiento y
se gasta mayor energía calentando el néctar frío (Lotz
et al. 2003), por cuanto es muy probable que los
picaflores reduzcan actividades como la persecución,
las que según Ewald & Carpenter (1978) en Calypte
Figura 2. Árbol de similitud Neighbor-Joinig con el modelo de Morisita–Horn (Moreno, 2000) modificado y el índice
de territorialismo de las cuatro especies observadas de picaflor.
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39
anna representan casi el 30% de la energía
consumida.
La tendencia de H. amethysticollis al territorialismo
coincide con los resultados hallados por Altshuler
(2006) con picaflores peruanos en la localidad de
Pillahuata (2650 m). El autor determinó que las
especies ruteras son aquellas que realizan de dos a
ninguna persecución y se encuentran en el parche un
tiempo menor a diez minutos, mientras que las
territorialistas un tiempo mayor o igual y llevan a
cabo persecuciones, lo cual demuestra que a pesar de
utilizar diferentes métodos de análisis, los resultados
son los mismos.
Las diferencias del tiempo de estadía por parche
entre especímenes de H. amethysticollis podrían
deberse a diferencias de edad y por tanto de
experiencia, como el caso de Calypte anna (Ewald &
Rohwer, 1980) donde los adultos producen mayor
número de encuentros agresivos que los juveniles.
Podría influir también la diferencia en el estatus de
dominancia, demostrado a nivel interespecífico por
Ewald & Bransfield (1987), donde Archilocus alexandri
está subordinado a Calypte anna.
Por otro lado, los resultados moleculares del
citocromo-b son corroborados por los trabajos de
Sánchez (2003), Altshuler et al. (2004) y McGuire et
al. (2007 y 2008), tanto para el sesgo de la tercera
posición codónica, característico de los marcadores
mitocondriales, como para la mayor cantidad de
citosina (Stanley & Harrison, 1999) contra guanina,
como indica Krajewski & King (1996). Los resultados
obtenidos con el producto de PCR utilizado
demuestran características comunes en relación a
otras familias de aves.
Finalmente, respecto a las diferencias halladas entre
el dendograma obtenido con la información genética
y la información comportamental; según el trabajo de
Serrudo 2011, las estrategias de forrajeo de cada
especie pueden cambiar en función de la disposición
espacial del alimento, por cuanto mientras más
disperso el mismo, mayor éxito adoptando la
estrategia de forrajeo rutera. Por el contrario,
mientras más concentrado el alimento, los adoptarán
la estrategia territorialista; esto fue observado en C.
violifer. Se esperaba que esta especie se agrupara con
P. cyanopterus, pero por el contrario se agrupo con H.
amethysticollis, ya que los recursos alimenticios de
Coeligena se hallaban concentrados en el primer,
segundo y tercer parche, por lo que para los
individuos de esta especie el adoptar esta estrategia
era conveniente ya que no tenían que gastar energía
en establecer rutas, sino en cuidar sus territorios.
CONCLUSIONES.
La topología caldística derivada del estudio genético
del cutocromo-b y la derivada del comportamiento
“estrategia de forrajeo” son independientes y por
tanto esta última no es apta como carácter
taxonómico para éstas cuatro especies de picaflor.
Heliangelus amethysticollis
Metallura tyrianthina
Pterophanes cyanopterus
Coeligena violifer
Aerodramus fuciphagus (HM626165.1)
91
48
0.02
Figura 1. Árbol de similitud Neighbor-Joinig con el modelo de Tamura & Nei (1983) y las secuencias del gen
mitocondrial citocromo-b (263 pb) de las cuatro especies observadas de picaflor.
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40
AGRADECIMIENTOS.
Al Instituto de Ecología de la Universidad Mayor de
San Andrés bajo el Convenio UMSA-Policía
Boliviana por el apoyo financiero, Colección
Boliviana de Fauna y Herbario Nacional de Bolivia
por préstamo de muestras y equipo, Facultad de
Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas por el
préstamo de instalaciones y equipo, Peter Feinsinger
& Sandra Rojas por su colaboración en las revisiones
del documento, equipo de trabajo Tantasarañani por
su apoyo en el trabajo de campo.
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ARTÍCULO ORIGINAL
HAPLOTIPOS DE ND4 EN Aedes aegypti (VECTOR DEL DENGUE)
DE SAN BORJA Y CARANAVI (BOLIVIA)
Heredia, C.1 & Sbtte. Adm. Arteaga, D. 3
1Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas, Universidad Mayor de San Andrés. La Paz, Bolivia, 2Centro de Investigación Genética, IITCUP, Universidad Policial. La Paz, Bolivia. [email protected]
RESUMEN
El dengue es una de las enfermedades con mayor incidencia de morbilidad y mortalidad en las regiones tropicales y subtropicales del
mundo, siendo su principal transmisor el mosquito Aedes aegypti. El uso de marcadores moleculares permite describir su estructura
genética y aportar información para la elaboración de planes de control acorde a las características de cada población. El presente
trabajo caracterizó haplotipos del gen mitocondrial ND4 en poblaciones de A. aegypti de dos comunidades endémicas de dengue en
Bolivia: Caranavi (CAR) y San Borja (SB), hallándose seis haplotipos a partir de una muestra de diez individuos: CAR1, CAR2, CAR3,
SB1, SB2 y SB3. El análisis mostró una diversidad nucleotídica de 0,0265, mostrando que el fragmento estudiado de ND4 es apto para
estudiar A. aegypti a nivel poblacional y filogenético en la región. Se identificaron dos clados (incluyendo a CAR1 en SB1) proponiendo
la hipótesis de migración pasiva a nivel continental (Asia, África, América). Los tres haplotipos SB pertenecen a un clado
independiente, constituyéndose en una población diferente y única. Mayor número de muestras deben ser analizadas.
PALABRAS CLAVE: Aedes aegypti, dengue, ND4, ADN mitocondrial.
JIS’KA-ARSUÑANAKA
Dengueta, uj jatun unquy sinchiutiñay q`uñillaxtaspi, pisiq`uñupi tukuy pachapi kay unquyta churawsunchis uj ch`uspisitu sutin
Aedes aegypti, kay marcadores moleculares sutiyuymiuj chay kunawan atinchis rixsiyta ukhunta, chaymanta willanchin ruwanapax
allinta kawanapax kay ruwasqanchista kanan tiyan imayrachus kaskanta sapa llajtapax kay llank`ay samasayqa haplotipos DN4
mitocondrial genmanta minku llajtasminkupi kay Aedes aegyptimanta iskay aylluspi Boliviamanta qankuna kanku 1. Caranavi, 2.
San Borja tarispa suxta haplotipos minku chunka Aedes aegyptipi CAR1, CAR2, CAR3, SB1, SB2, SB3. Kay k`uski riqhuchin uj
diversidad nucleotídica 0,0265 minku, kawachispa kay ND4 allin kanka yachanapax llaxtasminkuta chaymantapis maymanta
jamunku kay Aedes aegypti. Rixsikun iskay clados minku, kimsa haplotipos kanku uj clado kacharisqamanta uj llajtachama uj jina
chaymantapis sapalla. Kay llank`anapi siminchanku astawan yapakumantian kay Aedes aegypti minku yachaqanapax.
RIMANAS: Aedes aegypti, dengue, DN4, ADN mitocondrial.
ABSTRACT
Dengue is one of the diseases with high morbidity and mortality in tropical and subtropical regions of the world, being Aedes aegypti
the most important mosquito vector. The use of molecular markers for genetic structure studies bring information to support strategies
of control and monitoring of the disease according each human and vector populations. The present study used sequences of the
mitochondrial ND4 gene of A. aegypti populations in two endemic human communities of Bolivian yungas: Caranavi (CAR) y San
Borja SB), finding sex haplotypes: CAR1, CAR2, CAR3, SB1, SB2 and SB3. Subsequent analysis showed 0.0265 of nucleotide diversity,
establishing the ND4 marker as useful for characterizing this mosquito vector at phylogenetic level in the region. The CAR1 and SB1
identified clades suggest a possible passive migration of continental spectra (Asia, Africa and Americas). The three SB haplotypes
conform an independent clade, suggesting a unique population. More samples must be analyzed.
PALABRAS CLAVE: Aedes aegypti, dengue, ND4, mitochondrial DNA.
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INTRODUCCIÓN
El dengue es una de las enfermedades virales con
mayor incidencia de morbilidad y mortalidad en las
regiones tropicales y subtropicales del mundo
(Martínez, 2005) y ha ido incrementándose a nivel
mundial y nacional a partir de 1980 (OMS, 2009). En
Bolivia, entre Enero a Julio del 2012, se reportaron
7373 casos confirmados de dengue (Ministerio de
Salud y Deportes, 2012) y no existen vacunas o
tratamiento específico para combatir esta
enfermedad, por lo que su mitigación se concentra en
el control del vector transmisor del virus: Aedes
aegypti (Gubler, 1998).
La metodología tradicional empleada para el control
del dengue se basa en insecticidas y la eliminación de
criaderos potenciales. Sin embargo, estudios basados
en marcadores moleculares que describen la
estructura genética de este mosquito vector, han
aportado información muy útil para la elaboración de
planes de control acorde a las características de cada
población (Hu, 2009). Uno de los más empleados es
el ADN mitocondrial, fácilmente caracterizable, sin
intrones, con regiones intergénicas cortas, altamente
variable y no sufre recombinación, lo que hace de esta
molécula un marcador apto para estudios de
filogenia, taxonomía y genética poblacional (Rai,
1991; Galtier, 2009; Guedes, 2006).
La subunidad 4 del gen de la “Nicotin-Adenin-
Deshidrogenasa (ND4)”, ha demostrado ser de gran
utilidad para estudios poblacionales (Nuñez, 2004;
Grisales, 2010) coadyuvando a la identificación de la
estructura y diversidad genética en varias especies de
insectos, incluido el Aedes aegypti (Gorrochotegui,
2000; Bossio, 2005; Bracco, 2007).
El uso de marcadores como ND4 es importantes para
la prevención del dengue ya que permite la
caracterización inter e intrapoblacional, la inferencia
de posibles rutas de colonización y los patrones de
distribución de estas poblaciones. El presente trabajo
describe de forma preliminar las características
genéticas de los haplotipos del gen mitocondrial ND4
de poblaciones de Aedes aegypti en dos comunidades
endémicas afectadas por el dengue del país: Caranavi
(La Paz) y San Borja (Beni).
MATERIALES Y MÉTODOS
Colecta de muestras
Se colectaron 10 larvas y mosquitos adultos de Aedes
aegypti en las comunidades de San Borja y Caranavi.
Las larvas se colectaron en criaderos que se
encontraron en cercanías de las casas, en llanterías,
cementerios, cucharones de plástico y goteros, en
etanol al 70%. Los mosquitos adultos se capturaron
con la técnica de colecta en reposo (Lardeux, 2011;
Gualdron, 2007).
Extracción de material genético
El material genético se obtuvo de la cabeza de las
larvas y las patas de los adultos empleando el sistema
comercial “Wizard” (Promega) modificado,
agregando DTT (0,5 M) y Proteinasa K (100 mg/l) en
la lisis e incrementando el tiempo de precipitación
con isopropanol.
Amplificación del gen mitocondrial ND4
Se amplifico un fragmento de 376 pb del gen ND4 con
los cebadores: ND4F (5'–TCGTCTTCCTATTCGT
TCAT-3') y ND4R (5'-ACTACCAAAGGCTCATG
TAG-3') de Bossio (2005), en volumen final de 20ul
con el sistema comercial “Colorless Master Mix”
(Promega) y el siguiente programa: 94 °C 5 min, 35x
94°C 1 min, 50 °C 1 min y 72 °C 1 min, extensión final
de 72°C 5 min.
Secuenciación
Los productos de PCR se purificaron con la técnica
alcohólica. La secuenciación se realizó con el kit “Big
Dye Terminator 3.1” (Applied Biosystems) y los
productos finales se revelaron en un el Analizador
Genético ABI 3130. Los datos se analizaron con el
programa Sequencing Analysis v.5.2 y se editaron
con BioEdit (www.mbio.ncsu.edu), empleando la
secuencia ND4 de Aedes aegypti 5848251 del GenBank
como referencia. La alineación se hizo con la
aplicación ClustalW (www.clustal.org).
Análisis estadístico
IITCUP CIENCIA VOL1 No 1 (2013)
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45
El análisis de secuencias se realizó en las tres
posiciones de cada codón con el programa DnaSP
(www.ub.edu), con el modelo de distancias de
Tamura-3-parámetros y la topología Neighbor-
Joining (Saitou & Nei, 1987) del programa MEGA5.
Anopheles darlingi fue el grupos externo.
RESULTADOS
Se obtuvieron y analizaron 10 secuencias de 5
individuos de Caranavi y 5 individuos de San Borja.
La composición de nucleótidos (Tabla 1) fue de alto
contenido AT (72,7%), observándose 259 sitios
conservados y 17 sitios variables, de los cuáles 16
fueron sitios parsimónicos informativos y uno fue de
sustitución única.
Tabla 1. Composición nucleotídica en las poblaciones de
estudio expresada en porcentaje
C
(%)
G
(%)
A
(%)
T
(%)
AT
(%)
GC
(%)
Promedio 7,4 19,9 30,3 42,4 72,7 27,3
Caranavi 7,6 19,9 29,9 42,5 72,4 27,5
San Borja 7,4 20,1 30,1 42,5 72,5 27,5
Tabla 2. Valores de diversidad nucleotídica hallada en ambas
comunidades y por comunidad.
Corrección
Jukes&
Cantor
Ќ
Ambas
comunidades
0,0265 0,02736 6,4222
San Borja 0,0166 0,01685 5,4000
Caranavi 0,0224 0,02295 4,0000
La diversidad nucleotídica para ambas comunidades
fue de 0,0265. Aplicando la corrección de “Jukes y
Cantor” se obtiene 0,02736. La media de la diferencia
nucleotídica fue de 6,4222 (Tabla 2).
Se hallaron seis haplotipos para la construcción del
árbol filogenético en el que se observan dos clados:
uno exclusivo de Caranavi (CAR2 y CAR3) y el otro
que incluye individuos de Caranavi (CAR1) y San
Borja (SB1, SB2 Y SB3) (Figura 1).
El segundo árbol muestra la relación existente entre
estos haplotipos y los reportados para México, Brasil
y Perú (Figura 2). Nótese que el haplotipo CAR1 de
Caranavi es el mismo que el de México y Brasil,
aunque los CAR2 y CAR3 están asimismo
emparentados con los de México. El haplotipo CAR2
constituye la rama más reciente del árbol y los
hallados en San Borja (SB1, SB2 y SB3) forman una
rama separada, sugiriendo secuencias propias de
poblaciones bolivianas del mosquito.
DISCUSIÓN
El presente trabajo se basó en un fragmento del gen
mitocondrial ND4, el cuál ha sido ampliamente
utilizado alrededor del mundo en poblaciones de
Aedes aegypti (Gorrochotegui-Escalante, 2002; Bosio,
2005; Bracco, 2004; Lima, 2007; Herrera, 2006; Paupy,
2012). Los resultados encontrados por diferentes
autores, y corroborados en el presente trabajo, han
mostrado que ND$ es apto para estudios
poblacionales y filogenéticos para esta especie de
insecto. Hu (2009) determinó que el contenido total
de Adenina – Timina (AT) del genoma mitocondrial
en insectos oscila entre el 63 al 88%, los resultados
obtenidos en este estudio se muestran dentro de este
rango (72,7%) (Bracco, 2004; Ribeiro, 2006; Trinidade,
2008; Lima, 2009).
El comportamiento del fragmento ND4 analizado
podría estar influenciado por varios factores, entre
los que figura la naturaleza misma de la comunidad
humana de comercio para la región (que es de gran
densidad demográfica) y, por ende, del flujo de
Figura 1. Árbol filogenético de los haplotipos del gen
mitocondrial ND4 de Aedes aegypti basado en el modelo
Neighbor-Joining (Satiou & Nei, 1987), con distancias de
Tamura-3-parametros (Tamura, 1987) y un valor
bootstrap de 500 réplicas.
AEA-SB1
AEA-SB2
AEA-SB3
AEA-CAR1
AEA-CAR2
AEA-CAR3
Anopheles darlingi
78
47
41
43
0.02
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transporte constante que sugiere una interesante
fuente de contribución a la tasa de migración pasiva.
Por otro lado, la aplicación de insecticidas en esta
población aumentó a partir del año 2009 debido a la
epidemia de dengue registrada, lo que podría haber
favorecido el incremento polimórfico de Aedes aegypti
a nivel genético (Santibañez, 2007; PLAGBOL).
El haplotipo CAR1 presente en el clado de San Borja
(Figura 1) refuerza la hipótesis de la migración pasiva
más que la inducida por cambio climático o
migración natural del mosquito. Más aún, la
presencia de un haplotipo compartido con México y
Brasil (Figura 2) es indicador de un fenómeno similar
a mayor escala, aunque para México esta afirmación
para menos probable por la distancia. Sin embargo el
estudio de Ayres (2003) en la Amazonia del Brasil
demostró también que algunos haplotipos hallados
en este país tienen sus ancestros en México.
Los resultados muestran la existencia de dos linajes
mitocondriales para ND4 de la misma forma que
reporta Paupy (2012), quien describió un linaje al sur
del país y otro en las regiones del norte. Algo muy
particular observado es que los haplotipos de San
Figura 2. Árbol filogenético de los haplotipos del gen mitocondrial ND4 de Aedes aegypti entre las comunidades Caranaci
(CAR) y San Borja (SB) basado en el modelo Neighbor Joining (Satiou & Nei, 1987), con el método de distancia de Tamura-
3-parametros (Tamura, 1987) y un valor de bootstrap de 500 réplicas.
AEA-AMZ BRAZIL-H11
AEA-AMZ BRAZIL-H12
AEA - CAR1
AEA-BRAZIL-11
AEA-MEX-46b
AEA-AMZ BRAZIL-H08
AEA-MEX-25
AEA - CAR2
AEA - CAR3
AEA-MEX-24
AEA-MEX-18
AEA-MEX-26
AEA-MEX-21
AEA-PERU-01
AEA-BRAZIL-10
AEA-AMZ BRAZIL-H10
AEA-16-BRAZIL
AEA-MEX-20
AEA-MEX-22
AEA - SB3
AEA - SB1
AEA - SB2
AEA-AMZ BRAZIL-H04
AEA-MEX-14
AEA-MEX-07
AEA-MEX-15
AEA-AMZ BRAZIL-H03
AEA-BRAZIL-013
AEA-AMZ BRAZIL-H01
AEA-BRAZIL-07
AEA-PERU-02
AEA-BRAZIL-12
AEA-MEX-05
Anopheles darlingi
64
23
37
49
74
72
46
44
38
37
30
11
15
18
34
0.02
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Borja forman un clado único, lo que podría indicar
que son propios de esta región.
CONCLUSIÓN
Las características descritas suministran una pauta
sobre la diversidad de ND4 de Aedes aegypti en
Caranavi y San Borja. La presencia de dos linajes
mitocondriales del gen ND4 conformados por seis
haplotipos emparentados con poblaciones de México
y Brasil, además de los haplotipos SB1, SB2 y SB3 que
parecen propios de San Borja, instan a continuar este
trabajo investigativo por lo que se hace necesario
extender el estudio con mayor número de
especímenes y en diferentes regiones del territorio
boliviano con este marcador molecular.
AGRADECIMIENTOS
Al grupo de investigación Tanta Sariñani del Centro
de Investigación Genética – IITCUP de la
Universidad Policial. A los responsables y
coordinadores de proyecto “Relación Filogenética de
Culícidos” del Instituto de Ecología - UMSA: Lic.
Rubén Marín Pantoja, Ph.D. Carlos Molina, Ing.
Jaime Chincheros. Al Laboratorio de Entomología
del Instituto de Laboratorios en Salud – INLASA:
Dra. Tamara Chávez, Dr. Frederique Lardeux.
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ARTÍCULO ORIGINAL
CARACTERIZACIÓN DE MICROSATÉLITES PARA PRUEBAS DE
PARENTESCO EN CAMÉLIDOS DEL ALTIPLANO BOLIVIANO
Huanca M., P.1, & Sbtte. Adm. Arteaga V., D.2
1 Universidad Católica Boliviana San Pablo, Unidad Académica Campesina Tiahuanaco,
Carrera de Ingeniería Zootécnica. La Paz, Bolivia. 2 Centro de Investigación Genética, IITCUP, Universidad Policial. La Paz, Bolivia. [email protected]
RESUMEN
Las vicuñas (Vicugna vicugna) habitan en los altos Andes del sur de Perú, oeste de Bolivia, noreste de Chile y noreste de Argentina y
son explotadas por su apreciada fibra. Recientes legislaciones para su protección y uso sostenible permitieron la recuperación de sus
grupos familiares. A pesar de la importancia de este camélido en la economía de las comunidades locales y en el ámbito ecológico, no
existen registros o evaluaciones sobre el estado genético de sus poblaciones, del que depende su éxito reproductivo y la calidad de su
fibra. El empleo de microsatélites (STR) permite establecer las relaciones de parentesco, el grado de consanguinidad y la variabilidad
genética de una población. La presente investigación ha caracterizado tres STR: LCA19, LCA5 y YLLW08 en dos grupos familiares de
vicuñas de la provincia Pacajes (La Paz). Los resultados sugieren baja variabilidad y diversidad genética. El índice de parentesco
calculado permitió identificar una familia (99,0662%) entre los 27 especímenes. Los estadísticos F mostraron diferenciación poco
significativa entre los dos grupos y alto grado de consanguinidad (FIS). Se recomienda extender la base de datos de frecuencias
alélicas.
PALABRAS CLAVE: Camélidos, Vicugna vicugna, microsatélites, parentesco.
JIS’KA-ARSUÑANAKA
Waris kawsanku janaxpata Andes kulla Perú suyupi, intiyaykuna Bolivia suyupi, intilluxsina Chile suyupi, intiyuxsina Argentina
suyupi. Willasmanta urukunku sumaj kawsarqayku kunan qan kamachis mana wañuchimankupax, sumaj qanrayku waris ancha
qulqita jap`inchu, ancha munasqa kawsana; mana yachakunchu imaynachus kashan chay genes minku llajtasminkupi. Chay
microsatelites STRs nin yapan riqhuchiyta pichus kanku tatas, turas, ñañas sapa warimanta, allyullajtachus nin mamachus kanku
chay genespi. Kay llank`ay yachanchis imaynachus kanku kay kimsa STRs LCA19, LCA5, YLLW08 iskay ñawarmasispi llajtayllu
Pacajespi (La Paz). Kay llank`aypi riqhukun pisi wakchana qan genespi, kay llank`aywan rixsukun uj ñañarmasi kaskankuta kay
iskay chunka kanchis mikhuy warismanta. Chay estadìsticos F mana riqhuchinkuchu ancha ujina kaskankuta aylluspi warismanta,
chantapis ancha ñawarasmasi. Astawan yapakumantyan chay base de datos de frecuencias alélicas minku wax llank`anapax.
RIMANAS: wari, Vicugna vicugna, microsatélites, ñawarman.
INTRODUCCIÓN
Los camélidos sudamericanos se encuentran en
diferentes pisos ecológicos, desde los 150 a los 5000
metros de altura, con una población mundial de 7900
millones, de los cuales 90% son llamas y alpacas, 7%
son guanacos y 3% son vicuñas (Rivera, 1992). Estas
últimas (Vicugna vicugna) habitan en los altos Andes
del sur de Perú, oeste de Bolivia, noreste de Chile y
noreste de Argentina (San Martín, 1999).
En Bolivia se distribuyen en la región altiplánica alto
andina de los departamentos de La Paz, Oruro,
Potosí, Cochabamba, y Tarija (Alzerreca, 1982). Se
distribuyen en grupos familiares cuya organización
social está basada en el patriarcado, un macho posee
de 5 a 8 hembras, de las que el 80% llegan a ser
gestantes y solo 50% llegan a concebir. Cuando el
macho envejece o enferma, uno más joven y sano se
apodera del grupo familiar, lo que induce a
consanguinidad que, con el tiempo, puede producir
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bajo porcentaje de natalidad y afecta características
genéticas de interés industrial.
Este camélido, protegido por las normas de la Unión
Internacional para la Conservación de la Naturaleza
(UICN) en 1968, constituye hoy en día una fuente de
ingresos adicionales importante a los pobladores de
las regiones en que habitan, generalmente pobres en
flora y fauna, por lo que es necesario aportar con
herramientas que coadyuven a su mejor manejo y
aprovechamiento sostenible, lo que sólo puede
lograrse generando conocimiento profundo sobre el
estado actual de sus poblaciones.
Existe una cantidad importante de información sobre
la vicuña y sus poblaciones (ISA-Bolivia, 2009),
generada principalmente cuando las poblaciones
comenzaron a reducirse. Sin embargo, existe muy
poco acerca del estado genético de las poblaciones, al
menos en nuestro país.
Figura 1. Puntos de muestreo de los 27 camélidos analizados.
CHOCOROSI
ACHIRA
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51
El análisis genético de las poblaciones está basado en
el estudio de marcadores moleculares. Los datos
moleculares, constituyen una aproximación
adecuada para determinar los procesos que
configuran la estructura genética de una especie, ya
que proporcionan información tanto sobre la
distribución actual de la diversidad genética y los
procesos que actúan sobre el flujo génico, la deriva y
la endogamia, además de las tendencias evolutivas a
largo plazo, a diferencia de los parámetros
demográficos que señalan evolución a corto plazo.
De este modo, es posible comparar las tendencias
actuales con las históricas y comprobar si se están
produciendo desviaciones que puedan comprometer
la supervivencia de la población o la especie (Moritz,
1994).
En los camélidos sudamericanos se han aislado,
identificado y caracterizado más de 50 marcadores
genéticos, la mayoría de ellos del tipo microsatélite.
Existen 101 microsatélites publicados, cuyos loci
presentan una gran diversidad en cuanto al número
de alelos en los distintos taxa de camélidos
sudamericanos (Bustamante, 2002). Estos
marcadores son comúnmente empleados para
estudios de parentesco y consanguineidad.
El parentesco es el vínculo o relación de
consanguinidad dentro de las especies o de un
individuo con un ascendente en común, unidas por
comunidad de sangre. Por muchos años, los métodos
convencionales como la tipificación de grupos
sanguíneos y polimorfismos bioquímicos han sido las
únicas herramientas utilizadas para la determinación
de parentesco. Sin embargo, durante la pasada
década se han desarrollado técnicas basadas en ADN
como la reacción en cadena de la polimerasa (PCR),
que nos permite la detección de marcadores
específicos como los microsatélites o STR (Rodríguez,
2004).
Los STR son fragmentos de ADN constituidos por
secuencias cortas (6 pb máx.) que se repiten en serie
y cuyos alelos pueden ser observados por medio de
electroforesis en gel o electroforesis capilar (Hancock,
1991). Su distribución al azar y su alto nivel de
polimorfismo facilita la construcción de mapas
genéticos en estudios de parentesco (Dib, 1996). Han
sido ampliamente usados para la identificación de
individuos en pruebas de paternidad, para establecer
la compatibilidad en trasplante de órganos, para el
estudio de poblaciones silvestres o de las migraciones
de humanas en la prehistoria, y otros similares,
principalmente porque muestran mayor variabilidad
génica en su estructura primaria de repetición y
diferente grado de recombinación debido a la
inestabilidad del locus (Shlotterer, 1998).
Entre los primeros trabajos para camélidos, Lang et
al. (1996) evaluó 15 loci microsatélite YWLL en una
población de 50 camélidos sudamericanos
domésticos no relacionados (llamas y alpacas) y
encontró un número promedio de alelos por locus de
6.87, con promedio de heterocigosidad entre 0.42 y
0.86. Penedo et al. (1998), analizó 12 microsatélites
LCA en una población de 102 camélidos
sudamericanos (en dos especies domésticas y en
guanaco), observando 9.16 alelos por locus y con
heterocigosidad de 0.23 a 0.85.
Lang (1996) describió diez loci microsatélite (LCA19,
LCA22, LCA5, LCA23, YWLL08, YWLL29, YWLL36,
YWLL40, YWLL43, YWLL46) para Lama glama y
alpaca, mismos que fueron utilizados por Penedo et
al. (1998) y otro autores. Rodríguez et al. (2004)
demostraron su utilidad para estudiar índices de
parentesco en poblaciones de camélidos (alpacas) en
Perú y establecieron que tres STR son suficientes para
establecer el parentesco en grupos familiares:
YWLL43, LCA5 y YWLL08. Asimismo Sasse (1999)
demostró la factibilidad de realizar pruebas de
paternidad en camellos (Camelus dromedarius) y
Kadwell (2001), en base a estudios realizados con
ADN mitocondrial (citocromo b) y cuatro
microsatélites (YWLL 38, 43, 46 y LCA 19), identificó
los ancestros salvajes de la llama y la alpaca.
En los Camélidos Sudamericanos, los microsatelites
han sido una herramienta útil para la tipificación
poblacional, la identificación de individuos y la
detección de diferencias tanto intra como inter
poblacional (Romero, 2007). Andrade (2009)
determinó la variabilidad genética en vicuñas
(Apolobamba – Bolivia), con 10 Loci microsatelites
entre LCA y YWLL, mostrando alto polimorfismo en
los microsatélites YWLL 08 y YWLL 36.
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El presente trabajo evaluó la aplicabilidad de tres
STRs (LCA05, LCA09 y YWLL08) en un grupo de
vicuñas para establecer parámetros útiles en pruebas
de parentesco genético.
MATERIALES Y MÉTODOS
El presente trabajo se realizó en las comunidades de
"Achiri y Villa Chocorosi" de la provincia Pacajes, a
120 km de la ciudad de La Paz. La identificación de
los sitios de captura de las vicuñas fue realizada con
la ayuda de los comunarios quienes viven y conocen
la región (Figura 1).
Los especímenes se capturaron con mallas o redes
instaladas uno o dos días antes de la captura con 180
callapos de 3 a 4 metros de altura y 1500 metros de
largo. La forma del sistema de redes en “V” con un
coral en la arista se emplea normalmente para
capturar y esquilar a las vicuñas.
Muestras de cartílago de oreja se obtuvieron al
momento identificar a los animales con hojas de
bisturí estériles para cada animal y se almacenaron
en frascos de etanol 70%. Los hisopados de sangre se
obtuvieron en el momento de la esquila del tejido
muscular de las extremidades posteriores del animal
empleando una lanceta. Se colectaron 27 muestras
pertenecientes a 2 grupos familiares de vicuñas.
El ADN se obtuvo con el sistema comercial “Wizard
Genomic DNA Purification” (Promega) optimizado
para las muestras. Los STRs (Tabla 1) (Rodríguez,
2004; Andrade, 2009 y Romero, 2007) fueron
amplificados con el sistema comercial “GoTaq
Master Mix” de Promega con BSA y se revelaron por
electroforesis capilar en un Analizador Genético
AB3130 (Applied Biosystems), caracterizando los
alelos con el programa “GeneMapper 3.7”.
Tabla 1. STRs y cebadores utilizados
(Lang et al., 1996 y Penedo et al., 1998).
STR pb Secuencia 5’-3’
LCA19 84 - 125 TAAGTCCAGCCCCACACTCA GGTGAAGGGGCTTGATCTTC
LCA05 180 - 243 GTGGTTTTGCCCAAGCTC
ACCTCCAGTCTTGGGGATTTC
YWLL08 127 - 195 ATCAAGTTTGAGGTGCTTTCC CAATGGCATTGTGTTGAAGAC
Finalmente con las frecuencias alélicas se calculó: las
“frecuencias genotípicas”, la “probabilidad de
coincidencia (PC)” y el “poder de discriminación
(PD)”, indicadores de la capacidad de un sistema de
STRs para realizar pruebas de parentesco genético.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
El presente constituye un estudio preliminar para la
determinación del parentesco en grupos familiares
de vicuñas en la provincia Pacajes y el primero que
utiliza electroforesis capilar para la detección de
alelos de STRs.
Figura 2. Electroforesis en gel de agarosa (1%) de los
microsatélites LCA 19, LCA 05 y YWLL 08, obtenidos con
ADN de Vicugna vicugna (aprox. 200 pb).
Los tres microsatélites analizados fueron
amplificados y verificados en gel de agarosa previo a
la electroforesis capilar (Figura 2), observándose la
alta calidad del producto, indicio de que los extractos
Figura 1. Captura de especímenes con redes.
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de ADN de cartílago auricular e hisopo de sangre
tuvieron la cantidad y calidad suficientes.
En la caracterización de STRs, los loci LCA19 y
LCA05 presentaron de uno a cinco alelos, el locus
YWLL08 presentó de uno a ocho, resultados
comparables a los descritos por Lang et al. (1996) y
Penedo et al. (1998). Un ejemplo del resultado de la
electroforesis capilar puede verse en la Figura 3.
Los extractos obtenidos permitieron la identificación
de alelos entre 90 a 167 bp para LCA19, 187 a 202 bp
para LCA5 y 133 a 164 bp para YWLL08. En relación
a la estructura genética (Tabla 2), LCA5 presentó la
mayor frecuencia alélica (0,692) y los alelos 3 y 4 de
YLLW08 comparten la menor (0,021). La población 1
presenta mayores frecuencias alélicas que la
población 2 (Tabla 2), esto puede explicarse por la
fijación de alelos a través de varias generaciones,
mostrando menor diversidad debido a una
disminución de individuos en este grupo familiar,
razón por la que esta baja frecuencia no podría
deberse a una mayor diversidad alélica enmascarada.
Se encontraron dos individuos heterocigotos para el
locus LCA19, tres para LCA5 y nueve para YWLL08,
lo que lo hace el más polimórfico. Las frecuencias
genotípicas de los alelos no superan el 50%, excepto
para el alelo 4 de LCA19 y LCA5. El poder de
discriminación calculado de cada uno de los tres
STRs es supera el 0,6 (Tabla 3), que es el valor mínimo
de un STR para pruebas de parentesco.
Como es natural, la prueba de parentesco se realizó
solamente con aquéllos especímenes que compartían
alelos en los tres STRs. El índice de parentesco (W)
muestra que todas las crías están emparentadas. Sin
embargo, la familia caracterizada más probable para
los tres loci fue la del espécimen macho P1 (VIC-119),
con una relación de parentesco de 99.0662 % para la
cría C4 (VIC-423) de la madre M4 (VIC-125) (Tabla 5).
Tabla 2. Caracterización y frecuencias alélicas de los STR
utilizados para las dos poblaciones estudiadas.
LCA19
Alelo Pobl.1 Pobl.2
1 0,067 0,069
2 0,033 0,034
3 0,033 0,034
4 0,567 0,480
5 0,300 0,315
LCA05
Alelo Pobl.1 Pobl.2
1 0,115 0,058
2 0,077 0,029
3 0,077 0,029
4 0,692 0,340
5 0,039 0,029
YWLL08
Alelo Pobl.1 Pobl.2
1 0,225 0,159
2 0,150 0,088
3 0,025 0,021
4 0,050 0,021
5 0,300 0,135
6 0,075 0,043
7 0,125 0,088
8 0,050 0,042
(a) (b) (c)
Figura 3. Electroforesis capilar de los STRs LCA 19 (a, heterocigoto), LCA 05 (b, homocigoto) y YWLL 08 (c, homocigoto) del
espécimen VIC-122. Los alelos son caracterizados por peso molecular mediante la detección precisa de los cebadores
etiquetados con los fluoróforos según la siguiente relación: LCA19 = TET, LCA05 = FAM; YWLL08 = HEX.
sz = peso molecular (pb), ht = intensidad de la señal (cantidad relativa de ADNc).
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Finalmente, en cuanto a la estructura poblacional de
ambos grupos familiares evaluada a través de los
estadísticos F de Wright 1965 (datos no mostrados),
las subpoblaciones tienen un grado de diferenciación
poco significativo. FIT muestra una reducción
significativa de la heterocigosidad sugiriendo una
elevada consanguinidad, algo esperado dada la
biología reproductiva por clanes y patriarcal de estos
animales.
CONCLUSIONES
La extracción de ADN a partir de cartílago auricular
e hisopado de sangre es efectiva para la obtención de
material genético para la amplificación de los STRs
estudiados.
Tabla 3. Frecuencias genotípicas, probabilidad de coincidencia
(PC) y poder de discriminación (PD) de los tres STRs
estudiados.
STR Al 1 Al 2 Frec.
Genot. PC PD
LCA19 1 1 0,1333
0,3511
0,6489
LCA19 1 4 0,0667
LCA19 3 5 0,0667
LCA19 4 4 0,5333
LCA19 5 5 0,2000
LCA05 1 1 0,1667
0,3889
0,6111
LCA05 1 4 0,0833
LCA05 2 2 0,0833
LCA05 4 4 0,5833
LCA05 4 5 0,0833
YWLL08 1 1 0,1000
0,1500
0,8500
YWLL08 1 3 0,0500
YWLL08 1 6 0,0500
YWLL08 1 7 0,1500
YWLL08 1 8 0,0500
YWLL08 2 2 0,1000
YWLL08 2 7 0,0500
YWLL08 4 4 0,0500
YWLL08 5 5 0,3000
YWLL08 6 6 0,0500
YWLL08 7 7 0,0500
Los STRs estudiados LCA05, LCA19 y YWLL08) han
mostrado polimorfismo y poder de discriminación
suficiente para la realización de pruebas de
parentesco en las poblaciones seleccionadas de
Vicugna vicugna de la provincia Pacajes de La Paz,
pese que los estadísticos F de Wright mostraron alto
grado de consanguinidad entre ambas poblaciones.
Tabla 5. Índice de Parentesco (W) de los especímenes con los
tres STRs. P = padre; M = madre.
Progenitor Cría W W%
P1 (VIC-119) C4 (VIC-423) 0,9240 92,3993
C6 (VIC-430) 0,9240 92,3993
M3 (VIC-110) C6 (VIC-430) 0,9753 97,5346
M4 (VIC-125)
C4 (VIC-423) 0,9907 99,0662
C5 (VIC-428) 0,9564 95,6363
C6 (VIC-430) 0,9240 92,3993
Es necesario ampliar el número de STRs, el número
poblacional y los grupos familiares para estructurar
una tabla de frecuencias alélicas para calcular los
índices de parentesco con mayor significancia
estadística.
Se recomienda incluir en los libros de registro de las
poblaciones de vicuña y de otros camélidos,
caracteres genéticos que permitan realizar un
seguimiento del estado y viabilidad biológica de las
poblaciones.
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57
NOTA TÉCNICA
PRIMER ESTUDIO TAXONÓMICO MOLECULAR DEL ORDEN
TRICHOPTERA EN LA REGIÓN ALTOANDINA DE BOLIVIA
Ninahuanca, A.1 & Sbtte. Adm. Arteaga, D.2
1 Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas, Universidad Mayor de San Andrés. La Paz, Bolivia.
[email protected] 2 Centro de Investigación Genética, IITCUP, Universidad Policial. La Paz, Bolivia. [email protected]
INTRODUCCIÓN Y MÉTODOS.
En las pasadas décadas los estudios morfo-
anatómicos de identificación y clasificación
taxonómica de insectos se han beneficiado
ampliamente con la genética (Giribet et al., 1999;
Manuel, et al., 2006; Budd & Telford, 2009). Puesto
que muchos grupos aún no tienen claves disponibles
para su identificación desde huevos, la identificación
morfo-anatómica no resulta clara. La genética resulta
ser una efectiva herramienta para resolver
ambigüedades, no obstante también ha sido motivo
de revisiones taxonómicas (Álvarez et al., 2005;
Edgecombe & Giribet, 2007).
Aunque la medición de la tasa de evolución en
insectos es compleja a causa de sus diversas
estrategias reproductivas (Crozier et al., 1989), el gen
mitocondrial de la citocromo-oxidasa-I (CO-I), que
junto a CO-II y CO-III participa en la obtención de
energía celular en organismos aerobios (Nelson &
Cox, 2000), ha sido extensamente empleado para
estudios taxonómicos, poblacionales y
filogeográficos de artrópodos, pues contiene sitios
que han permanecido inalterados durante más de
1.500 millones de años (Saraste, 1990). De acuerdo a
Muraji et al. (2000), al ser específico en su función,
CO-I presenta estrictas diferencias de secuencia entre
taxones y, en comparación con otros marcadores
como ITS1 y 16S, posee asimismo mayor evolución y
variabilidad debido a su tasa media de mutación
(Álvarez et al., 2005).
Para su uso a nivel genético Lunt et al. (1996)
proponen la división del gen CO-I en 25 regiones
(Figura 1) de las que diez son poco variables al formar
parte de la bomba de protones y unir grupos Hemo
al metal Cu++ (Holm et al.,1987; Gennis, 1992; Farrel,
2001). Si bien las restantes tienen diversa aplicación
en estudios taxonómicos y filogenéticos, debe
tomarse en cuenta la importancia de investigar las
propiedades de sustitución nucleotídica del grupo
taxonómico investigado, determinando la utilidad de
la secuencia nucleotídica en filogenia y otro tipo de
estudios antes de utilizar un rango de taxa (Muraji et
al. 2000).
En el presente trabajo el gen CO-I (DNA-barcode) fue
empleado para estudiar especímenes del orden
Trichoptera del altiplano boliviano de las familias
Limnephilidae e Hydrobiosidae y los géneros
Anomalocosmoecus, Antarctoecia y Cailloma.
El ADN fue obtenido de las extremidades y cabezas
de larvas optimizando el sistema comercial Wizard
Genomic DNA Purification Kit (Promega), de lisis
química y precipitación salina. Para amplificar el
fragmento de interés del gen CO-I se emplearon los
cebadores universales LCO1490 (5’GGTCAACAAA
TCATAAAGATATTGG-3’) y HCO2198 (5’-TAAAC
TTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3’) descritos por
Hebert et al. (2003) a concentración final de 0.355 uM
y amplificados con el sistema GoTaq Colorless de
Promega. Se amplificó un fragmento de 709 pb
previamente caracterizado in silico con otras
secuencias CO-I de artrópodos disponibles en NCBI-
GenBank. El programa empleado fue: 5 min 94°C; 30x
1 min 94°C, 110 seg 51°C; 110 seg 72°C y extensión de
10 min 72°C. Luego de una purificación alcohólica se
realizó la PCR de secuenciación con el cebador
LCO1490 y el sistema BigDye Terminator v3.1
(Applied Biosystems), con las siguientes condiciones:
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1 min 96°C; 24x 10 seg 96°C, 5 seg 56°C, 4 min 60°C,
sin extensión final. Tras una segunda purificación
alcohólica se secuenció el producto final en el AB3130
de la Universidad Mayor de San Andrés.
Los datos se almacenaron en el programa Sequence
Analysis (Applied Biosystems) y los
electroferogramas fueron editados manualmente con
los programas BioEdit y SeqA 5.2. Empleando un
tricóptero asiático como grupo externo, se alinearon
las secuencias con ClustalW del programa Mega 4 y
los filogramas se construyeron bajo las distancias de
Tamura & Nei (1993) y el modelo Neighbor-Joining
(NJ) de Saitou & Nei (1987), con consistencia de 1.000
réplicas. El análisis subsecuente se realizó
observando el comportamiento del marcador por
posición de codón y por regiones proteicas en
especímenes de los glaciares Mururata, Illimani y
Larancagua del altiplano boliviano (disponibles a
solicitud o en www.iitcup.org). Las propiedades
intrínsecas del CO-I mostraron relación T+A global
de 63.04% y por sitios de codones de 20.38%, 6.16% y
73.46% respectivamente.
Aunque se detectaron 211 sitios variables en 636 pb
de los especímenes bolivianos, la composición
aminoacídica de la traducción in silico no sufrió
cambios, salvo el caso del haplotipo HI03 de
Antarctoecia sp. del glaciar Illimani, que mostró dos
aminoácidos distintos (Figura 2). La relación
transiciones y transversiones fue de 1.26. El marcador
mostró un comportamiento monofilético para los
géneros de la familia Limnephilidae.
En los 45 especímenes colectados en el altiplano
boliviano se identificaron ocho haplotipos de CO-I:
seis emparentados con el género Antarctoecia, uno
con Anomalocosmoecus y uno con Cailloma. La
diversidad nucleotídica, diversidad génica y
Figura 2. Filograma taxonómico molecular basado en CO-I (439 pb) del orden Trichoptera según el
modelo de Tamura & Nei (1993). HM01, HM02 = Mururata; HI03, HI04, HI05, HI06 = Illimani; HL07,
HL08 = Larancagua. HP09 = Altiplano peruano.
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distancia genética fueron de 0.027, 0.775 y 0.138,
respectivamente.
El filograma taxonómico molecular muestra un clado
del género de tricópteros Cailloma acompañado de
otros órdenes de insectos, otro conformado por los
géneros Antarctoecia y Anomalocosmoecus y un
tercero con tricópteros Limnephilidae, este a su vez
presenta tres subclados: 1) Limnephilus, Goerita,
Neophylax, Asynarchus y Pycnopsyche, 2)
Antarctoecia y 3) Anomalocosmoecus. El
posicionamiento del haplotipo Antarctoecia HI03 es
claramente distinta a los haplotipos HL07, HL08,
HM01, HM02 y HM04, especialmente si se considera
comparativamente la posición de
Anomalocosmoecus y se toma en cuenta el cambio de
dos aminoácidos en las posiciones 92 y 161 del
haplotipo HI03 y los restantes de Antarctoecia, donde
se observan mutaciones de serina a arginina y alanina
a treonina, de forma análoga a los trabajos de Pauls
(2004) y Smith (2005).
Un análisis más detallado (artículo en preparación)
demuestra que el marcador mitocondrial CO-I, en los
especímenes estudiados, es diferencialmente
informativo según la región y sitio de secuencia, tal
como resume la Tabla 1. Sin embargo, CO-I no solo
es útil para la taxonomía molecular sino también para
estudios filogeográficos, por lo que se recomienda
extender la investigación con este grupo de
artrópodos. Los estudios moleculares de la
entomofauna glaciar, más allá de otorgar datos sobre
clasificación, dispersión o historia evolutiva de los
ecosistemas acuáticos, puede proveer información
acerca de la amenaza para su supervivencia tras la
pérdida gradual de su hábitat y fragmentación
geológica, lo que induce a una fragmentación
genética y, a la larga, la extinción, perdiéndose con
ello la historia evolutiva que albergan estos
organismos en su código genético.
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63
NOTA TÉCNICA
TIPIFICACIÓN MOLECULAR DE MIRU-VNTR’S PARA ESTUDIOS
EPIDEMIOLÓGICOS DE TUBERCULOSIS EN BOLIVIA
Vásquez, A.1,2 & Sbtte. Adm. Torres, E.2
1 Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas, I-SELADIS, Universidad Mayor de San Andrés. 2 Centro de Investigación Genética, IITCUP, Universidad Policial. La Paz, Bolivia. [email protected]
PALABRAS CLAVE: Mycobacterium tuberculosis, MIRU-VNTR, epidemiología molecular.
INTRODUCCION
La tuberculosis (TB) es una enfermedad infecto-
contagiosa causada por diversas especies del género
Mycobacterium, la mayoría del complejo
Mycobacterium tuberculosis. La Organización Mundial
de la Salud (OMS) estima que un tercio de la
población mundial está infectada por este agente.
Bolivia es el tercer país más afectado por la
tuberculosis en el continente americano después de
Haití y el Perú. Según datos de la gestión 2004, la
incidencia de tuberculosis clasifica a Bolivia entre los
países con alta carga de 100 o más por cada 100.000
habitantes, compartiendo esta situación con países
del continente africano (W.H.O., 2009).
Por su importancia la tuberculosis requiere
constantemente nuevos y optimizados métodos para
la detección y tipificación de la bacteria que la causa
(Van Embden et al., 1993; Cohn, 1998). Este estudio
propone incluir el uso de marcadores moleculares del
tipo MIRU-VNTR (Mycobacterial Interspersed
Repetitive Units of Variable Number of Tandem
Repeats: Unidades Repetitivas Mycobacteriales
Intrínsecas con Número Variable de Repeticiones en
Tándem) por electroforesis capilar (Supply, 2001) en
nuestro medio. Los genotipos de MIRU-VNTRs
proveerán información no solo de la presencia
específica de la bacteria sino también, y más
importante aún, de la diversidad de las cepas
circulantes, su tendencia evolutiva y su relación con
la virulencia de esta bacteria en el territorio boliviano.
MATERIALES Y MÉTODOS
Selección de Cepas
El estudio se realizó en 85 cepas aisladas en medio de
Lowenstein-Jensen de muestras clínicas enviadas por
la Red Nacional de Laboratorios de Tuberculosis-
INLASA desde de ocho departamentos de Bolivia.
Purificación de ADN genómico
Alícuotas de los cultivos de M. tuberculosis se
sometieron a ebullición y posterior purificaron con el
sistema comercial “Wizard Genomic DNA
Purification” (Promega) optimizado para las
muestras.
Se amplificaron 6 MIRU-VNTRs en multiplex de los
sistemas A (loci 4, 26, 40) y B (loci 10, 16, 31) de
acuerdo al protocolo y cebadores descritos por
Supply et al. (2006), pero etiquetando a 4 y 10 con el
fluoróforo 6-FAM, 26 y 16 con 5-TET y a 40 y 31 con
5-TIE.
Electroforesis capilar y análisis filogenético
Los productos de MIRU-VNTRs obtenidos fueron
sometidos a electroforesis capilar en un Analizador
Genético AB3130 (FCFB, UMSA). Y analizados con el
programa informático GeneMapper (Applied
Biosystems), caracterizando y tipificando los alelos
respectivos para cada marcador en cada cepa. Los
filogramas fueron ensamblados con el programa
PowerMarker v3.25 (www.statgen.ncsu.edu),
empleando el modelo Neighbor-Joinig (Saitou y Nei,
1987), las distancias de Slatkin (1989) y la cepa H37Rv
como control externo.
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64
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Tipificación de MIRU-VNTRs
Se amplificaron los complejos A y B propuestos por
Supply (2001) con tamaños diferentes entre cepas
(Fig. 1).
En los 4 MIRU-VNTRs se detectaron 18 alelos con al
menos 2 en cada uno (Tabla 1). La menor frecuencia
corresponde al alelo 3 y la mayor al 1 del locus 4.
Los seis loci estudiados son informativos para la
identificación filogenética de linajes de M.
tuberculosis, aunque en 4 y 31 parece existir una tasa
evolutiva baja o reciente. El estudio combinado de al
menos estos seis loci parece, por tanto, condicionante
al momento de arribar a conclusiones sobre
diversidad, tendencia evolutiva o filogenia.
Análisis de la estructura genética de los MIRU-VNTRs
La estructura de alelos muestra que los seis loci
presentan suficiente variabilidad para tipificar y
distinguir cepas no emparentadas. El filograma
muestra que las cepas provenientes de Oruro están
emparentadas con la cepa control (Figura 2), que es
sensible al espectro de antibióticos para el
tratamiento de la tuberculosis.
La estructura genética de la cepa “Oruro” es única y
no muestra relación con otras cepas del país, lo que
sugiere que esta población de M. tuberculosis no está
influenciada por flujo génico. Por otro lado, las cepas
La Paz, Santa Cruz, Potosí, Chuquisaca, Beni,
Cochabamba y Tarija, se posicionan en un clado
independiente más diverso, siendo Tarija la más
distante. Las de Beni y Cochabamba se muestran
estrechamente relacionadas, lo que sugiere un fuerte
proceso migratorio entre estos departamentos.
Asimismo es posible identificar a las cepas de La Paz
en un clado distinto al de los restantes
departamentos. Finalmente se ha visto que los
resultados son coherentes con la creencia de que los
MIRU tienen una evolución convergente
(Frothingham y Meeker-O’Connell, 1998; Mazars et
al., 2001; Supply et al., 2006).
Figura 1. Corrida electroforética de los 6 fragmentos de MIRU
VNTRs obtenidos a partir del protocolo desarrollado por
Supply y colaboradores (2001).
Tabla 1. Frecuencias alélicas de los
MIRU-VNTR´S caracterizados.
MIRU ALELO FREC.
LOCUS10 1 0,305085
LOCUS10 2 0,694915
LOCUS16 1 0,237288
LOCUS16 2 0,762712
LOCUS31 1 0,152542
LOCUS31 2 0,847458
LOCUS4 1 0,949152
LOCUS4 2 0,033898
LOCUS4 3 0,016949
LOCUS26 1 0,245614
LOCUS26 2 0,175438
LOCUS26 3 0,508772
LOCUS26 4 0,052632
LOCUS26 5 0,017544
LOCUS40 1 0,258621
LOCUS40 2 0,482759
LOCUS40 3 0,155172
LOCUS40 4 0,103448
CONCLUSION
El estudio molecular de MIRU-VNTRs con cepas de
Mycobacterium tuberculosis provenientes de ocho
departamentos del país ha permitido su
identificación y tipificación inicial, estableciendo
linajes que podrían ser útiles para estudiar las
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65
tendencias evolutivas de estas bacterias que, para su
diversificación, dependen en gran medida de sus
hospederos humanos. Los resultados demuestran
que la técnica desarrollada por Supply y
colaboradores en 2006 puede proveer útil
información para el estudio integral de la
tuberculosis en Bolivia, coadyuvando al
establecimiento de políticas de control y lucha contra
esta enfermedad (Wright et al., 2007). Se recomienda
la continuación de la estandarización de los demás
MIRU del sistema multiplex y la inclusión
permanente de nuevas muestras y cultivos.
AGRADECIMIENTOS
Agradecemos la colaboración del Dr. Antonio Flores
Serna, coordinador administrativo del proyecto; a
Silvana Limache Valderrama, Julia Molina Orihuela,
Dina Quispe Mamani y Daniela Arteaga Voigt,
quienes coadyuvaron al desarrollo del trabajo de
laboratorio y al análisis y revisión de esta
investigación.
Asimismo expresamos nuestra gratitud a las
autoridades de la Facultad de Cs. Farmacéuticas y
Bioquímicas (UMSA) y del Convenio UMSA – Policía
Boliviana por el apoyo prestado.
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P., Kurepina, N., Kreiswirth, B., Sola, C.,
Rastogi, N., Vatin, V., Gutierrez, M., Fauville,
M., Niemann, S., Skuce, R., Kremer, K., Locht,
C. & van Soolingen, D. 2006. Proposal for
0.1
TARIJA
ND
CBBA
BENI
CHUQUISACA
POTOSI
SANTA CRUZ
LA PAZ
ORURO
H37RV
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67
NOTA TÉCNICA
DETECCIÓN DEL GEN “INTERFERÓN-GAMMA” POR PCR DE
RETRO-TRANSCRIPCIÓN EN CÉLULAS MURINAS
Limache, S. & Calla, J.1
1Instituto SELADIS, FCFB, UMSA. La Paz, Bolivia.
PALABRAS CLAVE: RT-PCR, interferón-gamma.
INTRODUCCIÓN
La biología molecular para el estudio de la expresión
génica en biomedicina se ha convertido en una
poderosa herramienta para comprender muchas
enfermedades humanas en modelos animales, lo que
requiere extensa experimentación para dilucidar los
mecanismos involucrados. A mediados del 2002 se
pudo observar que el genoma completo de Mus
musculus, tenía una similitud del 90% con el humano,
lo explica en parte porqué el ratón es el animal de
experimentación más utilizado en los laboratorios.
Este animal ha sido especialmente empleado en la
relación salud, enfermedad y tratamiento,
especialmente porque bioquímica e
inmunológicamente la similitud con el ser humano es
del 75%. Los genes del ratón tienen sus homólogos en
el hombre y esto facilita la identificación de genes que
predisponen a diferentes tipos de enfermedades
inmunológicas, virales y oncológicas por aislamiento
celular y células in vitro (Waterston et al., 2002;
Karlin et al., 1985).
En las enfermedades infecciosas producidas por
parásitos intracelulares como Leishmania sp., la
producción de algunas citoquinas de líneas celulares
de Linfocitos-T-Cooperadores-1, que son activadas
en respuesta a infecciones parasitarias, produciendo
citoquinas como el Interferón-gamma (INFg), la
Interleucina-2 (IL-2) y el Factor de Necrosis Tumoral
Beta (FNT-B). La detección de estas citoquinas en
sangre o tejido son ampliamente utilizadas para el
diagnóstico (Pérez et al 2011).
La leishmaniosis es una enfermedad infecciosa
endémica en muchas regiones tropicales y
subtropicales del mundo. En total la prevalencia
mundial estimada es de 12 millones de casos y 38
países endémicos entre los cuales se encuentra
Bolivia (Lydyard et al 2010).
Por estas razones la mayoría de los estudios se
enfocan en la evaluación de nuevas alternativas de
tratamiento que permitan su administración oral y
dérmica para mayor facilidad de los pacientes.
Extractos de diversas plantas actúan como agentes
leishmanicidas y al mismo tiempo sobre los
componentes del sistema inmune. Entre las plantas
más estudiadas en la actualidad tenemos: Wedelia
trilobata, Clivadium remotiflorum “huaca”, Lepidium
peruvianum, Galipea longiflora “evanta”, Clivadium
remotiflorum “huaca”, Lepidium peruvianum (Giménez
et al 2005).
Estudios in vivo han mostrado que los alcaloides
encontrados en la Evanta exhiben un efecto
leishmanicida, mostrado por una reducción en el
tamaño de las lesiones cuando alcaloides purificados
son administrados a ratones infectados con L.
donovani, L. braziliensis, L. amazonensis y L.
venezuelensis, pero a su vez parece ejercer un efecto a
nivel del INFg (Giménez et al 2005).
La expresión génica puede estudiarse a nivel de pre
y post transcripcional, mediante retro-transcripción,
para la semicuantificación de los ARNm, este tipo de
estudio es muy utilizado para la evaluación
toxicológica de medicamentos y químicos en general.
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El presente trabajo estudió la expresión del gen INFg
mediante RT-PCR en cultivos de células esplénicas
de ratón tratadas con extractos de alcaloides totales
de Galipea longiflora (Evanta).
MATERIALES Y MÉTODOS
Cultivo celular
Las células de Mus musculus se cultivaron en medio
RPMI a 37 °C.
La Tabla 1 muestra el diseño de los ensayos
administrados in vivo a los ratones de
experimentación.
Tabla 1. Tratamiento de Mus musculus
Concanavalina A (CONA), Extracto de alcaloides totales de
Evanta (EAE), Antígeno purificado de Leishmania sp (Ag).
RT-PCR
El ARN total de los cultivos celulares fue obtenido
empleando el sistema comercial RNA Maxwell cell
extraction kit y el equipo Maxwell 16 (Promega). La
purificación de ARNm se realizó a partir del ARNt
por el método de captura magnética del sistema
comercial Poly-A-Tract (Promega) según
recomendaciones del fabricante.
Los extractos de ARNm se emplearon para la retro-
transcripción (RT-PCR) de ADNc total y
simultáneamente la amplificación del INFg y del gen
beta-2-microglobulina, empleado posteriormente
como control de normalización. La retro-
transcripción se realizó con el siguiente protocolo: 35
°C 45 min; 94 °C 2 min; 40x 94° C 30 seg, 57 °C 1min,
68 °C 2 min y extensión final de 68 °C 7min.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
En la Grafica 1 y 2 se pueden observar los
histogramas de la semicuantificación elaborada con
el empleo del programa LabImage, donde se puede
observar claramente el efecto estimulador de EAE
sobre la expresión del ARN m del INF-g. Sin embargo
la posible estimulación no es significativa, siendo
necesaria una cuantificación con valores absolutos,
que permitan corroborar los datos obtenido en este
trabajo, mediante el PCR en tiempo real. Sin
embargo, la técnica ha mostrado ser útil para una
caracterización previa de la expresión génica en
cultivos celulares.
Gráfica 1. Semicuantificación de la expresión de INFg en
cultivos celulares (C-) estimulados (CONA) con extractos de
evanta (EAE) y antígeno purificado de Leishmania sp. (AG).
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40,5 38
30 3023,523
40,4 42,3 45,349,2
0
10
20
30
40
50
60
Exp
resi
ón
(n
g)BETA IFNg
VARIABLE
IN VITRO CONA
CONA
+ EAE Ag Ag + EAE
ug/ml 5 5 10 20 20 10
horas 48 48 24 48 48 24
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REVISIÓN CORTA
ESTRUCTURA Y CARACTERÍSTICAS GENERALES DE LOS
INDICIOS PILOSOS
Sbtte. Adm. Vanesa Serrudo Gonzáles1
1Instituto de Investigaciones Técnico Científicas de la Universidad Policial (IITCUP), División Biología, La Paz, Bolivia.
ANTECEDENTES
El pelo es una estructura derivada de la epidermis y
característico de los mamíferos. Su estructura básica
consta de un tallo externo y una raíz (Figura 1). El
tallo contiene tres capas: 1) la médula, en la parte
central del pelo, consiste de células queratinizadas
laxamente unidas, está presente solo en pelos gruesos
y puede contener espacios de aire; 2) la corteza,
componente principal del tallo que rodea la médula,
sus células están compactadas, queratinizadas,
fuertemente adheridas entre sí y concentran la
mayoría de los gránulos de pigmento, y 3) la
superficie o cutícula, parte externa del tallo
conformada por escamas cuticulares (Harada 2009,
Baca & Sánchez-Cordero 2004).
La cutícula de los pelos está formada por un conjunto
ininterrumpido de células planas con diferentes
formas que, a medida que van siendo empujadas
hacia la superficie, conforman una serie de patrones
que pueden variar dependiendo de la raza o la
especie. Por lo general, el patrón cuticular es de dos
tipos: imbricado, donde las escamas se hallan
sobrepuestas y es típico de humanos; y coronal, en el
que las escamas tienen forma de corona envolvente
sobrepuesta. Los demás patrones encontrados en los
diferentes grupos de mamíferos son variaciones de
estos dos tipos principales (Vázquez et al. 2000).
Aplicación en Criminalística
Puesto que los apéndices pilosos representan uno de
los indicios más comunes encontrados en la escena
del hecho y que se preservan durante largos períodos
de tiempo, son un indicio útil al momento de
desarrollar investigaciones. Han demostrado su
utilidad en hechos de tránsito, generando
información acerca de la posición de los pasajeros y
su presencia en los parachoques establece una
conexión entre los atropellados y el vehículo,
también se los ha empleado en resolución de delitos
sexuales, donde la presencia de vellos púbicos de la
víctima en la ropa interior del sospechoso
constituyen potenciales pruebas de implicancia
(Molina 2004).
Figura 1. Corte transversal (arriba) y longitudinal (abajo) de las
partes de un apéndice piloso humano (Hausman, 1924).
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La ciencia que estudia estos indicios con fines legales
es la tricología forense, definiéndose como indicios
tricológicos “Todos aquellos elementos pilosos que
sean encontrados en el lugar donde ocurrió el hecho
punible o recolectados de las prendas u objetos, tanto
como de ofendidos como de imputados y revisados
en el laboratorio forense” (Molina 2004). Dicha
revisión se debe realizar con procedimientos
validados que demuestren ser idóneos para el
procesamiento de evidencias y su posterior uso en
casos legales.
Aunque en una escena criminal se pueden identificar
fibras sintéticas y pelo animal utilizado en la
fabricación de ropa (lanas, pieles, etc.), la
identificación de los apéndices pilosos presentes
puede guiar a la identificación de un sospechoso.
Hausman (1925) citado en Juáres-Sanches et al. 2007,
encontró que al analizar pelos provenientes de todas
las razas humanas, no existen diferencias en la forma
de las escamas ni la médula y la variación está
únicamente relacionada con el grosor del pelo, que
puede variar dentro del mismo individuo e incluso
dentro del mismo pelo.
Características electroestáticas
La fricción entre dos superficies induce la formación
de energía electrostática. El pelo presenta alta
electronegatividad, ya que está químicamente
constituido por largas cadenas de queratina y esta a
su vez de aminoácidos, donde predomina la cisteína
con un átomo de azufre. Las cadenas de queratina se
acomodan de forma paralela, como los hilos de un
cable, y se mantienen unidas por medio de tres tipos
de enlaces químicos:
- Puentes de hidrógeno, que se dan entre un
átomo de hidrógeno y otro átomo muy
electronegativo como el oxígeno.
- Puentes salinos entre un ácido y una base, que se
dan por la atracción de dos sustancias con cargas
eléctricas opuestas.
- Puentes di-sulfuro: enlaces covalentes entre los
átomos de azufre de las cadenas vecinas.
La Figura 2 muestra los puentes de hidrógeno como
enlaces químicos más externos y por lo tanto los
responsables de la alta electronegatividad de los
pelos.
Figura 2. Puentes de hidrógeno causantes de la
electronegatividad del pelo (Federación de Enseñanza de
CCOO, 2010).
La consecuencia de generar electrostática durante el
almacenamiento y transporte de los indicios pilosos
incluye la descamación y eliminación de los patrones
cuticulares típicos (imbricado cuticular en humanos).
Características higroscópicas
Según Guzmán (2011), al sumergir un pelo en agua
durante 24 h este incrementa su peso en 30 %, lo que
significa que se incrementa también su diámetro,
pudiendo generar un serio factor de error.
El Instituto de Investigaciones Forenses (IDIF) del
Ministerio Público ha preparado una eficiente “Guía
de Recomendaciones para la Colección, Envío de
Muestras, Evidencias y Exámenes Forenses”, en la
que recomienda utilizar sobres de papel libres de
humedad. Sin embargo, el proceso de validación de
estas recomendaciones ha quedado pendiente, por lo
que surge el objetivo de verificar científicamente los
aspectos relevantes para la selección del “medio
apropiado” de transporte y almacenamiento de
muestras pilosas, bajo la hipótesis de que este medio
puede influir sensiblemente la morfología de las
muestras pilosas remitidas a un estudio pericial.
REFERENCIAS
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pelos de guardia dorsal en mamíferos del
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REVISIÓN CORTA
ENFERMEDADES INFECCIOSAS EMERGENTES (EIE´S) Y SU
RELACIÓN CON EL TRÁFICO DE FAUNA SILVESTRE
Fabiola Suarez Guzmán1,2
1 Programa de Veterinarios para la Conservación, Wildlife Conservation Society (WCS). La Paz, Bolivia.
2 Centro de Investigación Genética, IITCUP, Universidad Policial. La Paz, Bolivia. [email protected]
RESUMEN
El tráfico y comercio de fauna silvestre constituye una importante ruta para la introducción de patógenos zoonóticos y el surgimiento
de Enfermedades Infecciosas Emergentes (EIE´s), que son un riesgo para la salud de poblaciones humanas y animales domésticos, y
puede poner en riesgo de extinción a poblaciones naturales de animales silvestres. La psitacosis o enfermedad del loro es una
enfermedad zoonótica que puede ser transmitida a partir de loros decomisados al tráfico y comercio de fauna, actividad que debe ser
monitoreada y controlada como un sistema de alerta temprana para la detección de esta enfermedad y otras enfermedades emergentes
con posible incidencia pandémica.
PALABRAS CLAVE: Tráfico de fauna silvestre, enfermedades zoonóticas, psitacosis, enfermedad del loro.
Uywaqaxpata apaktinku ranqhay sallqa uj allin ñan yaykunanpax unquykunas, mana allinkananpax uywaspata runaswasi, atin
churayta chhikipi chinka manpax llajtas uywasmanta sallqasmanta. Psitacicosis uj unquy k’allamanta, atin chimpachiyta chay k`allas
jap`inku ranqhanamanta chay uyutakax sallqa. Mana chimpachinankupax kay unquyta ñawpaxta jark`ana chay ranqhana uywaqax
sallqa. Mana kay unquykuman ni uj unquykunapiwan chimpananpax wax kunaman.
RIMANAS: Uywaqaxpata apaktinku ranqhay sallqa, uywa unquy, psitacosis.
Resulta evidente que para el surgimiento de la crisis
ambiental de nuestro siglo, varias son las causas que
han coadyuvado a poner en riesgo de extinción a
numerosas especies de animales y plantas. Entre
estas figuran la destrucción y fragmentación del
hábitat, la cacería indiscriminada, la introducción de
especies exóticas y el tráfico y comercio insostenible
de fauna silvestre. A esto se suma el surgimiento de
patógenos zoonóticos a causa de un aumento en el
contacto entre poblaciones naturales de animales
silvestres, animales domésticos y personas, que es un
factor más para la desaparición de poblaciones de
fauna silvestre, altas pérdidas económicas en
producciones pecuarias y brote de epidemias que
han cobrado la vida de muchas personas en varias
partes del mundo.
Ninguno de estos factores causales es tan fácilmente
controlable como el tráfico y comercio de fauna
silvestre (Karesh 2005), y esta es sin duda una de las
más importantes rutas para la introducción de
patógenos zoonóticos, debido al estrecho contacto de
la fauna con las personas durante la captura,
transporte y comercialización, en particular aquel
realizado de forma ilegal donde los controles
sanitarios son casi inexistentes. Además de este
riesgo, la fauna silvestre comercializada entra en
contacto con diversidad de animales domésticos.
Cook (2005) describe los mercados donde se venden
Figura 1. Tráfico de especies animales.
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76
animales vivos como “una mezcla de animales
domésticos, animales silvestres y personas donde no
existen medidas higiénico-sanitarias apropiadas y
donde la manipulación de los animales se realiza sin
equipos de protección personal adecuados”. Este
hecho, junto con el estrés de cautiverio que
disminuye las defensas inmunológicas de los
animales, hace del tráfico y comercio de fauna
silvestre una causa importante para la emergencia de
enfermedades infecciosas.
Por definición, se entiende a las Enfermedades
Infecciosas Emergentes (EIE´s) como aquellas que
aparecen en una población por primera vez o que ya
existían pero que rápidamente han incrementado su
prevalencia en un área geográfica determinada
(Williams 2002). Tal como lo muestra la Figura 2, la
relación entre la salud de la fauna silvestre, los
animales domésticos y la salud humana, confluye en
un conjunto actualmente entendido como el “nuevo
concepto de salud” (Arrivillaga & Caraballo 2009),
que estudiado bajo el nuevo enfoque de la Medicina
de la Conservación, que busca analizar y entender la
emergencia de nuevos patógenos desde un enfoque
ecosistémico.
La Organización Mundial de Epizootias (OIE)
considera a las EIE´s como uno de los más grandes
enemigos que amenaza la humanidad en la
actualidad (Brown 2004). Esta visión apocalíptica
nace del concepto de las más recientes epidemias
acontecidas en los últimos años, las cuales
aparecieron repentinamente, tuvieron la capacidad
de transmitirse de persona a persona y no pudieron
ser tratadas o prevenidas.
Los animales silvestres constituyen un reservorio de
patógenos, muchos de los cuales pueden permanecer
“escondidos” en el hospedero silvestre (Williams et
al. 2002) pero afectar a otras especies. Un análisis
sobre los agentes infecciosos que afectan a los
humanos, a los animales domésticos y los de
compañía ha revelado que de los 1415 agentes
patógenos conocidos, 62% tienen su origen en
animales silvestres (Dehesa-Santisteban 2007), a esto
se sume que el 75% de las enfermedades emergentes
acontecidas los últimos años tiene características
zoonóticas (Brown 2004).
El comercio interno y externo de fauna se ha
triplicado los últimos años (Brown 2004), originando
un movimiento global de patógenos y una
interacción de poblaciones domésticas, silvestres y
humanas sin precedentes. Como se ha demostrado a
lo largo de la historia, este contacto puede generar
serias epidemias, siendo el más reciente ejemplo la
emergencia de la primera infección respiratoria
identificada en el siglo XXI en China: el Síndrome
Respiratorio Agudo Severo (SARS) (Bell et al. 2004),
cuyo agente causal fue un coronavirus mutado
(SARS-CoV) de origen animal. Estudios posteriores
confirmaron que muchos de los pacientes infectados
con SARS tenían directa relación con vendedores o
cocineros en un mercado de fauna silvestre. El virus
fue aislado en seis civetas de palmera (Paguma
larvata) y un mapache (Nyctereutes procyonides),
evidenciando que el comercio y tráfico de fauna
silvestre es un factor importante no para la
diseminación de enfermedades en humanos y que el
grado de virulencia puede verse acentuada por este
fenómeno.
Otros patógenos asociados con el tráfico de fauna
silvestre en mamíferos incluyen la “encefalitis equina
venezolana”, la rabia, la cryptosporidiosis, la
leishmania, la fiebre amarilla, tuberculosis y hepatitis
B, entre otras. En reptiles, la zoonosis más importante
la constituye la salmonelosis, causada por bacterias
del género Salmonella, habitante normal de la flora
gastrointestinal de estos animales. En aves, la
“encefalitis equina del este y del oeste”, la
Figura 2. Relación entre la salud de los animales
domésticos, silvestres y poblaciones humanas y su
confluencia en la salud del medio ambiente
(Daszak 2008).
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77
colibacilosis, la candidiosis, la toxoplasmosis,
salmonelosis y, de especial importancia, la psitacosis
(Varela 2002).
La psitacosis o enfermedad del loro, merece atención
debido al marcado interés por las aves psitácidas
para ser adquiridas como mascotas en nuestro medio
(Suarez & Alandia 2011). Es transmitida por
Chlamydophila pssitaci, una bacteria intracelular de las
aves que puede infectar al hombre de forma
accidental por vía aerógena (Acha & Szyfres, 2003) y
se considera una enfermedad ocupacional de
criadores de aves, trabajadores de granjas avícolas,
trabajadores de laboratorio, comerciantes de aves y
veterinarios.
Aunque la psitacosis es esporádica en humanos,
varios brotes se han registrado en África, Argentina,
Estados Unidos y gran parte de Europa (1000 casos
reportados y entre 200 a 300 fallecimientos),
originados por la importación de psitácidos desde
varios países de América del Sur. Psitacosis se ha
reportado también en Brasil (Raso et al., 2008),
Argentina (Acha y Szyfres, 2001.) y Chile (Jara et al.
2001). En Bolivia esta enfermedad no ha sido descrita
en aves o humanos, probablemente debido al
parecido de sus síntomas con un resfriado común,
confundiendo el diagnóstico.
Limitados esfuerzos se hacen actualmente para
explorar científicamente este fenómeno a nivel
nacional. Como se puso en evidencia, existen varios
activadores y varias consecuencias para el actual
problema de las enfermedades emergentes y por lo
mismo se plantean también diversas soluciones. Es
esencial conocer la intrínseca relación que existe entre
la salud de las poblaciones humanas, la salud de los
animales, tanto domésticos como silvestres, y la
salud del ecosistema. Entre las acciones propuestas
para lograr estos objetivos, se plantea focalizar los
esfuerzos en los mercados de comercio de animales
vivos y de esta forma reducir el contacto entre
especies. Proponer reglamentos estrictos que
permitan llenar los vacíos operativos que tiene
actualmente la Ley del Medio Ambiente (1333) para
el control en el tráfico y comercio de fauna silvestre
en el país. Desarrollar no sólo un método que
identifique a los microorganismos involucrados en el
manejo con fauna silvestre, tanto los conocidos como
los desconocidos, sino además, junto con la
capacitación de profesionales en la temática,
desarrollar a futuro un sistema de alerta temprana,
mejorándose la vigilancia a nivel mundial para poder
detectar enfermedades y de este modo optimizar el
tiempo de respuesta y reducir los costos que puedan
generar nuevas epidemias.
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transmisibles comunes al hombre y a los
animales. Publicación Científica y Técnica No.
580. Organización Panamericana de la Salud.
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Arrivillaga J, V. Caraballo. 2009. Medicina de la
Conservación. Rev. Biomed 2009; 20:55-67
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with the international trade in small
carnivores. Philosophical Transactions of the
Royal Society Biological Sciences 359:1104-
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Brown C. 2004. Emerging zoonoses and pathogens of
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Cook R. 2005. Emerging Diseases at the Interface of
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Daszak P., A.A. Cunningham and A.D. Hyatt. 2008.
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Figura 3. Tráfico de fauna silvestre.
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de Julio” de la ciudad de El Alto. (Informe
técnico no publicado). WCS-Bolivia. 21 pp.
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Wildlife. Rev. sci. tech. Off. Int. Epiz 21(1):139-
157.
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ESTUDIO DE CASO
PLANIMETRIA OPERATIVA DE CAMPO Y DE GABINETE EN UN
CASO DE DESLIZAMIENTO DE TERRENO
Cbo. Adm. Arq. Wilton Omar Huayta Alcón
División Planimetría, IITCUP, Universidad Policial. La Paz, Bolivia.
RESUMEN
Este es un artículo que indaga la labor del planimetrista forense en caso de deslizamientos de terreno en la ciudad de La Paz durante
la actuación de los organismos investigativos de la Policía Boliviana, en este caso la Fuerza Especial de Lucha Contra el Crimen
(FELCC) y otras, dentro de un proceso penal a denuncia de parte, pudiendo existir victimas trágicas o pérdidas materiales y daños
simples o daños calificados. Más allá del análisis arquitectónico, topográfico y urbanístico, se presenta como ejemplo un caso suscitado
en la gestión 2012 en la ciudad de La Paz.
PALABRAS CLAVE: Deslizamientos, planimetría demostrativa, planimetría reconstructiva.
Kay qilqarak`ina tapun llank`ana forense siq`xpata wasismanta lluqlla La Paz llajtapi llank`asanku yachaymask`ana Policía
Bolivianamanta, chay Fuerza Especial de Lucha Contra el Crimen minku yuxkuna taripay chatanapi runamanta, atispa arpaskanku
was imayra chinkachispa chirqa. Astawan jaqaymanta pirqayachaqana, jallpa yachaqana, llajtayachaqana, ñuqa manani rikhuchiyta
uj llank`ana ñawpax 2012 nispha La Paz llajtapi.
RIMANAS: Lluqlla, siq´ita.
ABSTRACT
This document inquire and outline a soil and ground glide case in La Paz city during the intervention of the special police units like
the “Fuerza Especial de Lucha Contra el Crimen (FELCC)” and others, inside a penal process by part demand, allowing the possibility
for tragic victims, material loss, and simple or classified damages. Beyond architectural, topographic or urbanistic analysis, the case
is presented as a description of a real one dated in 2012 in La Paz city.
KEY WORDS: Ground glide, forensic topography.
INTRODUCCION
Figura 1. Esquema de deslizamiento de terreno.
El deslizamiento, es el movimiento hacia abajo de
una ladera, un desplazamiento de una masa de suelo
o roca el cual ocurre principalmente sobre una
superficie de ruptura o falla (debilidad del terreno) o
por una pendiente en forma súbita o lenta. Los
deslizamientos o derrumbes de tierra, también
conocidos como deslaves de lodo y aludes, y pueden
ser causados por una variedad de factores que
incluyen los terremotos, tormentas e incendios. Si
bien la gravedad que actúa sobre las laderas es la
principal causa de un deslizamiento, su ocurrencia
también depende de las siguientes variables:
•Clase de rocas y suelos.
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•Topografía (lugares montañosos con pendientes
fuertes).
•Orientación de las fracturas o grietas en la tierra.
•Cantidad de lluvia en el área.
•Actividad sísmica.
•Actividad humana (cortes en ladera, falta de
canalización de aguas, etc.).
•Erosión (por actividad humana y de la naturaleza).
Existen dos tipos de deslizamientos o derrumbes:
Deslizamientos lentos.- Son aquellos donde la
velocidad del movimiento es tan lento que no se
percibe. Este tipo de deslizamiento genera unos
pocos centímetros de material al año. Se identifican
por medio de una serie de características marcadas
en el terreno.
Deslizamientos rápidos.- Son aquellos donde la
velocidad del movimiento es tal que la caída de todo
el material puede darse en pocos minutos o
segundos. Son frecuentes durante las épocas de
lluvias o actividades sísmicas intensas. Como son
difíciles de identificar, ocasionan importantes
pérdidas materiales y personales.
Los deslizamientos o movimientos de masa no son
iguales en todos los casos, y para poder evitarlos o
mitigarlos es indispensable saber las causas y la
forma como se originan.
Estas son algunas de las formas más frecuentes:
CAIDA: Una caída se inicia con el desprendimiento
de suelo o roca en una ladera muy inclinada. El
material desciende principalmente a través del aire
por caída, rebotando o rolando. Ocurre en forma
rápida sin dar tiempo a eludirlas.
VOLCAMIENTO: Consiste en el giro hacia delante
de una masa de suelo o roca respecto a un punto o eje
debajo del centro de gravedad del material
desplazado, ya sea por acción de la gravedad o
presiones ejercidas por el agua.
Estos fenómenos geológicos, que se repiten
anualmente en la ciudad de La Paz, debido a los
fenómenos naturales y provocados que sufre la
topografía de las laderas de la ciudad que hacen que
un mayor porcentaje del área urbana sea zona
riesgosa, a pesar de que existen normas
notificándonos de los riesgos naturales, tal como lo
muestra el USPA en el art. 30 “Son las Áreas en las
que la edificación está prohibida por riesgos
naturales tales como malas características geológicas
del suelo, la pendiente excesiva y la exposición a
derrumbes e inundaciones. El plano del USPA las
delimita el Plano de Riesgos de los suelos del área de
La Paz. Se definen terrenos de pendiente excesiva los
que tengan más de 45º de pendiente. El objetivo que
se persigue en estas áreas es de no comprometer los
Figura 2. Zonas y áreas de una superficie de terreno que sufrió deslizamiento.
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suelos de mala calidad y no alterar su proceso natural
de transformación y su equilibrio precario con obras
de edificación de cualquier tipo”. Muchos
ciudadanos siguen construyendo y edificando,
poniendo en riesgo la pérdida de vidas humanas que
pudieran ser calificadas e investigadas dentro la
división de homicidios y otros divisiones
investigativas de la FELCC.
METODOLOGÍA
El propósito del método que se desarrollará en este
procedimiento de la planimetría forense relativo a los
deslizamientos de tierra. Es mostrar el Estado
Anterior al Hecho y el estado Posterior al Hecho, en
infografías, planos que muestran superficies,
volúmenes y lugares exactos; para poder de alguna
manera manifestar las causas, los factores que
podrían haber ocasionado tal fenómeno topográfico.
En tal método es imprescindible un trabajo operativo
de campo que pueda reflejar un relevamiento y una
mensura adecuada del terreno y la fijación
planimétrica y fotográfica lo más desarrollada
posible.
Figura 3. Zonas de la ciudad de La Paz con riesgo muy alto.
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Los resultados de este método puede ser utilizado
tanto para los investigadores, fiscales y peritos como
por los técnicos especialistas en deslizamientos. El
planimetrista logrará un conocimiento operativo de
los conceptos y consideraciones para incorporar la
evaluación de los daños y el peligro de
deslizamientos al proceso de investigación criminal,
usando un nivel adecuado de evaluación para cada
etapa del proceso y preparar los términos de
referencia que aseguren que se ha de obtener la
información necesaria que estará expresada en la
planimetría. El planimetrista encontrará una revisión
de los temas sobre el peligro y sus consecuencias
funestas de deslizamientos y lineamientos para
realizar la planimetría e infografía forense.
El método presentado de fijación planimétrica, uno
de varios que están disponibles, tiene las siguientes
características de desarrollo:
Se hace uso de diversos mapas temáticos e
información de percepción remota, generalmente
disponible para un estudio de desarrollo.
Se medirá todo cuanto esté dentro el área del
deslizamiento, desde las pendientes, el volumen
de masa deslizada, el área afectada, los diferentes
volúmenes desde la posición inicial hasta la
posición final.
Se utilizará diferentes equipos de medición
topográfica, geológica, además de realizar la
memoria fotográfica y de video.
Técnicas e instrumentos: planimetría de campo.
ESTACION TOTAL
GPS Garmin.
Odómetro digital.
Telémetro Laser.
Brújula
Huincha de 50 Mts.
Cámara fotográfica.
Mapas Cartográficos.
Flexómetro.
Tablero de dibujo.
Lápices y bolígrafos de colores.
Figura 4. Vista panorámica del lugar del hecho.
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Gabinete planimétrico.
La utilización de Software como:
AutoCAD.
Poser 9.
Google SketchUp 8.
Google Earth.
Adobe Photoshop CS 5.
Exposición del caso.
El presente trabajo se llevó a cabo en el inmueble
ubicado en la calle Tte. Delgadillo Nº 1332, entre calle
Antonio de Calancha y calle José Ortíz, de la zona
Achachicala (lugar del hecho), cuyo acto se inició a
horas 16:00, del día Jueves 12 de Abril de 2012,
concluyendo a horas 18:00 del mismo día, en el
mismo utilizando las herramientas idóneos para este
tipo de pericias se ha procedido a:
Localización.
El lugar del hecho (inmueble) se encuentra ubicado
en la calle Tte. Delgadillo acera oeste, asignado con el
Nº 1332 de la zona de Achachicala, tomando como
hito de referencia a 200 m. aproximados de distancia
al noreste de la Universidad Salesiana. Cuyas
colindancias son: al este con la Calle Tte. Delgadillo,
al oeste con Vecino del fondo del inmueble en un
nivel de piso inferior, al sur con Vecino y norte
colinda con Vecino. La Calle Teniente Delgadillo
presentaba una plataforma vehicular con una acera
en voladizo todo esto soportado por muros de
contención, el ingreso principal del inmueble se
encuentra por debajo de esa plataforma en un nivel
inferior de 5.70 m. acera oeste, por un Callejón de un
ancho de 2.18 m.
Características topográficas del terreno.
Según fijación planimétrica se tiene referencia que es
un terreno regular de aproximadamente 210 m2. Con
un frente menor a 12 m., en un terreno accidentado
por la pendiente elevada que presenta, se observa en
el domicilio un deslizamiento de terreno y del muro
de contención de hormigón ciclópeo que habría
afectado dos habitaciones: una pequeña cocina y el
dormitorio donde perdieron la vida las tres víctimas
por este hecho. Se pudo determinar que hay una gran
diferencia del nivel de piso, +/- 0.00 en el frente del
terreno (callejón); -7.20 m. en la parte de la habitación
Dormitorio (Lugar del hecho) y el nivel -12.20 m. en
el fondo del terreno (Vecino Oeste). El ingreso
principal al domicilio estaba dado por un pasillo
callejón con un espacio de 2.18 m de ancho; limitado
esto por un muro de contención con una altura por
encima del callejón de 3.20 m., asimismo un segundo
muro de contención a una distancia horizontal de
2.93 m. y situado a un nivel superior donde en su
parte más alta presentaba una acera en voladizo de
hormigón armado y con barandas metálicas que
resistía el peso de la calzada empedrada en un nivel
superior de +5.70 m.
Características arquitectónicas del inmueble.
En la inspección se observa un inmueble afectado por
el deslizamiento de terreno que ha sido afectado a las
habitaciones que se encuentran construidos en una
plataforma en un nivel de piso menor a -7.20 m.
donde se observa lo siguiente: La habitación del
dormitorio (lugar del hecho) de aproximadamente 9
Figura 5. Medición del frente del domicilio.
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m2, solo 2 paredes y sin la cubierta de calamina, un
piso de vaciado de cemento, en cuyo interior se
advierte la masa deslizada del terreno invadiendo
gran parte del área de la habitación; no se advierte el
área de la cocina pequeña que estaría contigua al
dormitorio; tampoco se observa las gradas de ingreso
principal al domicilio. Además de estos ambientes
mencionado al oeste del dormitorio del lugar del
hecho se tiene una habitación denominado
“Dormitorio 2” de aproximadamente 15.10 m2 con
piso de machihembrado; contigua a esta una cocina
improvisada con muros de madera en un área de
menor a 5m2.; un patio central con piso de vaciado
de cemento menor a 20 m2., y el sector sur una
habitación denominada “Dormitorio 3” de
aproximadamente 21.50 m2.; todos las habitaciones
mencionadas tienen cubierta de calamina y muros de
adobe.
Así también, en la inspección se observa la presencia
de la masa del terreno deslizado, volúmenes del
muro de contención colapsado, algunos escombros
como calaminas, maderas y otros en el domicilio y
sobre las cubiertas en las otras habitaciones.
En el exterior del domicilio, un cerco de obra de
puntales de madera y malla de alambre, además de
obras civiles por varios obreros realizando trabajos
de excavaciones, apuntalamientos de madera,
demoliciones de muros para la estabilización y
Figura 6. Uno de los croquis planimétricos levantados en el lugar.
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reconstrucción de la plataforma de la calle Tcnl.
Delgadillo.
Figura 7. Bosquejo realizado por el denunciante.
Elaboración de la planimetría del estado anterior al hecho
suscitado del inmueble.
La elaboración del croquis del Escenario del Hecho
mediante dibujo a mano alzada nos permitirá
representar la escena donde se produjo la muerte de
tres personas, en cuyo trabajo se realizó toda la
planimetría de campo que permitirán tener la escena
escala e infografía forense. Asimismo se practicó la
fijación planimétrica conforme a las referencias
obtenidas del investigador asignado al caso y del
denunciante, los mismo que se plasmó con las
mediciones reales en un bosquejo con referencias y
orientado con leyendas explicativas necesarias en la
planimetría de campo; como un suplemento de otros
métodos de registro proveyendo información precisa
de la distancia de las longitudes, ángulos, superficies
y volúmenes en el lugar del hecho, además teniendo
presente la posición de las víctimas en el
levantamiento legal del cadáver el 15 de febrero de
2012 y la revisión de las fotografías presentes en el
cuaderno de investigaciones.
Figura 8. Medición de la distancia diagonal y la
pendiente del terreno.
Confección de la pendiente del terreno y el plano de la
sección.
En la inspección del lugar del hecho, el denunciante
(familiar de las victimas del hecho), realizó un
bosquejo dando referencia de la ubicación de los
ambientes sepultados y del ingreso de la puerta
principal y el acceso mediante unas gradas, y la
posición probable donde estaban las víctimas y la
ubicación de los muebles en el interior de la
habitación del lugar del hecho.
Tomando en cuenta los datos obtenidos durante la
inspección se determinó la altura obtenida desde la
calzada, el ángulo respecto al derrumbe y
deslizamiento del terreno y de un volumen del muro
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de contención hacia el inmueble, además del lugar
específico donde se verifico el hecho (dormitorio),
asimismo; tomando en cuenta la distancia
longitudinal diagonal que hay entre los muros de
contención, la pared del inmueble a la altura del piso
de la habitación y los restos del mismo, tenemos:
La distancia diagonal desde la base del dormitorio
afectado del inmueble hacia la línea del límite
municipal es de 10.35 m.; el ángulo de inclinación de
dicha distancia con respecto al horizonte del
inmueble es de 44°.
La confección del triángulo rectángulo, para el
cálculo de la altura y la distancia entre el dormitorio
y el callejón de entrada, desde el dormitorio (DLH) a
la puerta principal (PP) es DO equivalente a
10.32mts., de la puerta principal (PP) al horizonte del
inmueble(B) con 90º es la altura DV, del horizonte del
inmueble (B) a el dormitorio (DLH) es la distancia
entre el muro de la casa y el dormitorio DH, el ángulo
de inclinación(αI) es equivalente a 44º,de PP a DLH
es la hipotenusa, de PP a B es el cateto opuesto, de B
a DLH es el cateo adyacente. Por medio de la Ley de
Senos de Triángulos rectángulos determinaremos la
altura y el nivel de piso del dormitorio al callejón y la
distancia del dormitorio hacia el muro del domicilio
en el horizonte.
DATOS.
DLH = DORMITORIO
PP = PUERTA PRINCIPAL
B = BASE DEL INMUEBLE
α = ÁNGULO DE INCLINACION
D1, D2 Y D3 = DISTANCIAS
Sen αI = Cat. Op. => Cat. Op. = Sen αI x Hip.
Figura 9. Confección de la pendiente del
terreno.
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D2 = 0.69 X 10.35 = 7.20 m => D2 = 7.20 m =>
ALTURA
a²+b²=c² => b²=a²c² => b²= 51.84 X 107.122 =>
b=√55.2825
b= 7.45 => D3 = 7.45mts.
DE DONDE PODEMOS DEMOSTRAR LA
DISTANCIA DEL DORMITORIO DEL LUGAR DEL
HECHO HACIA EL MURO DE LA VIVIENDA Y LA
ALTURA DESDE EL BORDE INTERIOR DEL
DORMITORIO DEL LUGAR DEL HECHO HACIA
LA BASE DE LA PUERTA PRINCIPAL (Figuras 9 y
10).
El volumen aproximado de terreno deslizado es de
43.21 m3.
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Figura 10. Infografía del estado final del lugar del hecho (volumen deslizado en magenta).
Figura 9. Infografía del estado inicial del lugar del hecho (volumen deslizado en magenta).
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ESTUDIO DE CASO
ACCIDENTES DE TRÁNSITO: CASO “BOCA DE SAPO”
Cap. Ramón F. Salazar E. & Cap. Huáscar Coca 1
1 Centro de Investigación y Capacitación en Seguridad Vial, IITCUP. La Paz, Bolivia.
INTRODUCIÓN.
El Accidente de Tránsito es todo: “SUCESO
EVENTUAL PRODUCIDO COMO
CONSECUENCIA O CON OCASIÓN DEL
TRÁNSITO, EN EL QUE INTERVIENEN AL
MENOS UN VEHÍCULO GOBERNADO O NO, Y
COMO RESULTADO DEL MISMO SE PRODUCEN
MUERTES, LESIONES EN LAS PERSONAS Y/O
DAÑOS EN LAS COSAS”
Entonces, para que exista un accidente en el tránsito,
necesariamente tiene que darse:
- Un suceso eventual.
- Debe intervenir una unidad de transito
dinámica.
- El evento debe ser producido como
consecuencia o con ocasión del movimiento.
- Como resultado debe haber muerte o lesiones
en las personas y/o daño en las cosas.
Desde un punto de vista simple y limitado se puede
indicar que dentro del sistema vial, toda falla en él, se
denomina accidente, en el que necesariamente deben
interactuar:
- Humano (conductor, pasajero, peatón)
- Circundantes o entorno (Vehículo y vía)
Por lo que, el accidente sobreviene cuando las
demandas del entorno presentan ante el conductor
una situación que excede su capacidad de reacción.
Según Baker J. Stannard un accidente se define como
un suceso, acontecimiento u ocurrencia inesperada o
impremeditada, que tiene un elemento de azar o
probabilidad y cuyos resultados son indeseables o
infortunados. Por lo general, todo evento que vaya a
ocurrir en nuestras vías, merece una investigación, en
el cual se puede desnudar cual es la verdadera
anatomía de ese accidente, pese que haya pasado
hace mucho tiempo, todo esto en función a las
investigaciones que vaya a realizar el servidor
policial; se debe considerar, que a veces no se dispone
de testigos o participantes porque estos resultaron
muertos o fueron trasladados a centros hospitalarios
y no están en condiciones de entrevistarlos o el
escenario ha sido alterado al retirarse uno o más
vehículos involucrados o algún tipo de evidencia
material ha sido destruido.
Cuando el servidor policial, reunió todas las causas
posibles de un accidente y llega a la conclusión de
que esto no se habría producido de no haber existido
alguna de ellas, es probable que el investigador haya
identificado la combinación de factores que causaron
el accidente.
Cuando dos o más unidades de transito intervienen
en un accidente, los hechos concerniente a cada uno
de ellos se estudian por separado ya que cada uno de
ellos presenta e identifica su propia “evolución” que
contribuyo y genero a crear la situación en el cómo
ocurrió el accidente.
Se debe considerar, que todo esto inicia con una
conducta inicial del elemento humano (conductor,
pasajero, peatón) donde se identifica el movimiento,
posición o todo lo que crea una situación susceptible
de causar un accidente y que se caracteriza por un
comportamiento anormal, ilegal, indebido o
peligroso. La peligrosidad de este tipo de actos, es de
importancia primordial, por ejemplo, un conductor
realiza un giro sin señal previa o en sitio autorizado
o cuando está en carril indebido; o cuando un
vehículo supera la velocidad critica en una curva,
puede saltar fuera del camino o provocar un vuelco
de tonel; un vehículo que se aproxima a un tramo de
carretera en construcción por la superficie irregular y
áspera puede provocar una pérdida de control; en
resumen, cualquier velocidad que sea demasiada alta
para las condiciones relacionadas con las
características físicas del camino, no dan tiempo
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suficiente para tomar decisiones respecto a una
acción evasiva, por lo cual resulta peligrosa.
Las acciones de un conductor que conduce a un
accidente, en situaciones optimas es observada por
testigos o participantes; o caso contrario se pueden
reconstruir partiendo de evidencias materiales
descubiertas en el lugar de los hechos, lógicamente,
considerando que este es un proceso físico
matemático, que pese al paso de los años,
inclemencias del tiempo, existe un gran porcentaje
para que se lo recree no exactamente igual sino con
cierto grado de confiabilidad y certeza. Por lo
general, el descuido del conductor es el término que
define la causa del accidente que se origina en la
conducta de este y está relacionada con el
acercamiento al lugar de los hechos, la percepción del
peligro, las decisiones y la acción del conductor
instantes que precedieron al evento en sí.
Finalmente para investigar plenamente el descuido
del conductor como circunstancia coadyuvante en un
accidente, es necesario socavar primeramente la
confianza que tiene en si todo conductor. La mayoría
de los conductores no se reconocen culpables, ya que
que generalmente indican “soy conductor viejo y en
20 años no tuve accidentes”. “si, manejo a gran
velocidad, pero no tengo accidentes”. “yo, hago el
tramo La Paz - Oruro en 2 horas y 30 minutos…”
Cuando se investiga un accidente, el investigador
debe tener en cuenta que este convencimiento
profundo les impide a los conductores involucrados
hacer el relato honrado del accidente. La mayoría de
los individuos se resisten a reconocer que ellos han
sido los causantes del accidente, pero cuando
finalmente se convence a uno de ellos, el investigador
disfruta de una excelente oportunidad de
comprender más a fondo el comportamiento humano
y apreciar su importancia como causa de accidente.
Entonces los conductores “se resignan, abriendo su
corazón y contestan sus preguntas” pero, demás
encontramos un grupo de conductores en los que se
identifica ciertos comportamientos que merecen una
adecuada valoración clínica psicológica: “no me
importaba matarme, estoy harto de mi vida, no
encuentro sentido a mi vida”. Otro dijo “si, he estado
bebiendo y mucho; bebo todo el tiempo. Beber y
manejar rápido, eso hago yo, y me siento feliz y
completo cuando corro.”
Sufrir un accidente grave provoca un fuerte trastorno
emocional; los individuos involucrados se
comportan de un modo extraño, sombrío; porque
repentinamente su convencimiento de que saben
manejar y que a otros les ocurran accidentes pero a
ellos no, se ha visto destruido. No saben que decir,
pero dirán la verdad desnuda y si se les interroga
adecuadamente. Tal vez declaraciones, pueden
señalar directamente el porqué de los accidentes.
En función a ello se les presenta un caso denominado
Boca de Sapo:
En fecha 31 de diciembre del 2011 un grupo de
amigos (Marcelo Rollano Soraide, Luisa Rojas
Morales, Danilo Choquevillca Conde, Álvaro Molina
Cardozo y Víctor Quispe Alanoca) circulaban por la
carreta La Paz Yungas en la vagoneta Nissan Murano
con placa de control 2250 HAD, de debe considerar
que de acuerdo a las investigaciones y pesquisas
realizadas se llegó a establecer que el conductor era
M. Rollano S. y que los mismos se encontraban en
estado de ebriedad ya que noche antes se habrían
reunido junto a otras personas y hubieron consumido
bebidas alcohólicas en locales públicos de la ciudad
de La Paz.
Después de casi 8 días de búsqueda e intensos
trabajos de rastrillaje efectuados por la Policía,
movilizando alrededor de un centenar de efectivos
de diferentes áreas como la policía caminera,
bomberos, tránsito, inteligencia entre otros, es que se
los llega a encontrar a los fallecidos en fecha 8 de
enero del 2012.
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Los cuerpos fueron encontrados a D. Choquevillaca a
120 mts., L. Rojas a 130 mts., V. Quispe 150 mts, A.
Molina a 155 mts. y M. Rollano 160 mts. de
profundidad, mientras que el vehículo fue a
descansar al fondo del precipicio de 300 metros,
completamente destruido.
En cumplimiento al rol constitucional de la Policía
Boliviana a través de sus organismos especializados
y bajo requerimiento fiscal se dispone que se realice
la correspondiente pericia accidentológica del
presente accidente de tránsito donde se establece, la
evolución del accidente a través de sus diferentes
fases (percepción, decisión y conflictos) y puntos,
para así determinar la velocidad del vehículo y
realizar la planimetría e infografía forense.
Por lo anteriormente expuesto y en atención los
puntos de pericia establecidos por el Representante
del Ministerio Publico, se llegó a las siguientes
conclusiones:
• De acuerdo a la evolución del accidente, la
causa más probable es que el conductor
hubiera quedado Inerte por la condición
Psicosomática en el que se encontraba de
acuerdo a antecedentes, pericias que se
realizaron en otras áreas. De acuerdo al
análisis accidentológico, abandona la calzada
de la Vía, para posteriormente
embarrancarse. En su trayectoria solo se
encuentra la Huella de Sueño (Huella de
Trayectoria de acuerdo al terreno), y no existe
ningún tipo de elemento o indicio que el
conductor hubiera realizado alguna
maniobra de evasión simple o compleja para
volver a la calzada, y maniobrar para lograr la
estabilidad del vehículo o para detener la
marcha.
• Se establece la velocidad del vehículo
protagonista en 40 Km/h al momento que
abandona la plataforma embarrancándose y
de 121 Km/h con que llega a impactar en el
primer punto.
• Teniendo en cuenta que los resultados tienen
precisión y no exactitud debido a un hecho
que sucede no se repite dos veces, los datos
son aproximados con un porcentaje de
variación de 10 % de acuerdo a fundamentos
físicos.
En lo que refiere al cálculo de la velocidad del
vehículo Vagoneta Nissan Murano con placa de
control 2250 HAD, se lo establece a través de
cálculos físicos matemáticos de acuerdo a la Figura
5.
Figura 1: Trayectoria de la Vagoneta Nissan Murano con
placa de control 2250 HAD antes de abandonar la
plataforma vial.
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Figura 2: Esquema aéreo de la trayectoria de la Vagoneta Murano al abandonar la plataforma vial.
Figura 3: Esquema lateral de la trayectoria de la Vagoneta Murano al abandonar la plataforma vial.
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Figura 4: Esquema aéreo de la trayectoria de la Vagoneta Murano y posición de los cuerpos.
Figura 5: Cálculos para la velocidad de impacto.
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INSTRUCCIONES PARA LOS AUTORES
Desarrollar herramientas para generar políticas y estrategias
institucionales que permitan mejorar la seguridad ciudadana y
prever o apoyar la lucha contra el crimen, el narcotráfico y el
contrabando, requiere con urgencia de investigación científica
básica, pura y/o aplicada de nuestra realidad, para construir con
solidez la base que permita la toma de decisiones y la creación
u optimización de tecnología diseñada específicamente para
alcanzar estos objetivos, que son de eminente interés nacional.
La responsabilidad de la Institución Policial abarca y requiere de la participación de todas las áreas del
conocimiento humano, pues los retos y desafíos que enfrenta surgen de un amplio y denso espectro de presión
social, cultural, ética y humana que se alimenta de las aspiraciones, la historia y el tiempo vividos, inexorables
e impertérritos en su avance y evolución. He aquí la razón de condensar en un solo título el abanico de temas,
líneas de investigación y ramas del conocimiento al que puede y debe llegar la sociedad para superarse a sí
misma.
IITCUP CIENCIA está dedicada a la publicación y divulgación de trabajos de investigación científica y
tecnológica principalmente proyectados, desarrollados o realizados en el territorio boliviano, con énfasis en
aquellos trabajos cuyo objetivo sea proporcionar conocimiento para el desarrollo de tecnología propia
adaptada a la realidad nacional, que persigan mejorar la calidad de vida de nuestra sociedad, que conciban
proyectar un futuro visionario y ambicioso de desarrollo técnico científico boliviano y provean soluciones a
los problemas y desafíos que enfrenta la institución policial y la sociedad en su conjunto.
Áreas temáticas sugeridas:
- ARQUITECTURA - ECOLOGÍA Y MEDIO AMBIENTE
- ARTES - ELECTRÓNICA
- BALÍSTICA - ENTOMOLOGÍA
- BIOLOGÍA - GENÉTICA
- BIOQUÍMICA - HUELLOGRAFÍA
- BOTÁNICA - MECÁNICA
- CIENCIAS DE LA SALUD - MEDICINA FORENSE
- CIENCIAS POLICIALES - QUÍMICA
- DERECHO - TOXICOLOGÍA
- DOCUMENTOLOGÍA - OTRAS CIENCIAS Y DISCIPLINAS CTF.
IITCUP CIENCIA recibe y publica artículos de divulgación o investigación científica y tecnológica, revisiones
(monografías), estudios de caso, sinopsis de tesis y notas técnicas. El formato y contenido de los textos se
describe a continuación según tipo:
A) ARTÍCULOS DE DIVULGACIÓN O INVESTIGACIÓN CIENTÍFICA Y TECNOLÓGICA: Dos copias
en papel bond tamaño carta (21,59 x 27,94 cm) de una plana, tipo de letra “Arial 12”, márgenes de 1
cm y contenido estándar siguiente: TÍTULO, AUTORES, RESUMEN (español), ABSTRACT (inglés),
JUCH’URIMANCHANA (aymara), PALABRAS CLAVE, INTRODUCCIÓN, MATERIALES Y
IITCUP
CIENCIA PUBLICACIÓN CIENTÍFICA DE LA POLICÍA BOLIVIANA
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MÉTODOS, RESULTADOS, DISCUSIÓN, CONCLUSIONES, AGRADECIMIENTOS Y
BIBLIOGRAFÍA.
B) REVISIONES O MONOGRAFÍAS: Dos copias en papel bond tamaño carta (21,59 x 27,94 cm) de una
plana, tipo de letra “Arial 12”, márgenes de 1 cm y el contenido a discreción del autor, aunque se
sugiere el siguiente: TÍTULO, AUTORES, RESUMEN (español), ABSTRACT (inglés),
JUCH’URIMANCHANA (aymara), INTRODUCCIÓN, DESARROLLO (a discreción),
CONCLUSIONES, RECOMENDACIONES, AGRADECIMIENTOS Y BIBLIOGRAFÍA.
C) ESTUDIO DE CASO: Dos copias en papel bond tamaño carta (21,59 x 27,94 cm) de una plana, tipo de
letra “Arial 12”, márgenes de 1 cm y el contenido a discreción del autor, aunque se sugiere el siguiente:
TÍTULO, AUTORES, RESUMEN (español), ABSTRACT (inglés), JUCH’URIMANCHANA (aymara),
INTRODUCCIÓN, DESARROLLO (a discreción), CONCLUSIONES, RECOMENDACIONES,
AGRADECIMIENTOS Y BIBLIOGRAFÍA.
D) SINOPSIS DE TESIS: Dos copias en papel bond tamaño carta (21,59 x 27,94 cm) de una plana, tipo de
letra “Arial 12”, márgenes de 1 cm y el contenido a discreción del autor, aunque se sugiere el siguiente:
TÍTULO, AUTOR, RESUMEN (español), ABSTRACT (inglés), JUCH’URIMANCHANA (aymara),
DESARROLLO (a discreción), CONCLUSIONES, RECOMENDACIONES, AGRADECIMIENTOS Y
BIBLIOGRAFÍA.
E) NOTAS TÉCNICAS: Dos copias en papel bond tamaño carta (21,59 x 27,94 cm) de una plana, tipo de
letra “Arial 12”, márgenes de 1 cm y contenido estándar siguiente: TÍTULO, AUTORES, RESUMEN
(español), ABSTRACT (inglés), JUCH’URIMANCHANA (aymara), PALABRAS CLAVE,
INTRODUCCIÓN, MATERIALES Y MÉTODOS, RESULTADOS, AGRADECIMIENTOS Y
BIBLIOGRAFÍA.
Las figuras, gráficas, esquemas, citas y bibliografía serán presentadas en el formato de la American
Psychological Association (APA), insertos dentro del documento principal.
Para aplicar tres impresos originales deberán ser enviados por correo en sobre manila a la siguiente
dirección:
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Bajo Seguencoma
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Tel: 2-2786977
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permite al investigador visualizar la
trayectoria de una bala .
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como sangre, semen, cabello, saliva,
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CONTENIDO
AGRADECIMIENTO .............................................................................................................................................. 5
PRESENTACIÓN DEL COMANDO GENERAL ......................................................................................................... 7
PRESENTACIÓN DEL VICEMINISTRO DE SEGURIDAD CIUDADANA ..................................................................... 9
PRÓLOGO DEL RECTOR DE LA UNIVERSIDAD POLICIAL “MCAL. ANTONIO JOSÉ DE SUCRE” .......................... 11
PRESENTACIÓN DEL IITCUP .............................................................................................................................. 13
EDITORIAL ......................................................................................................................................................... 15
SIMBOLOGÍA DEL EMBLEMA DEL INSTITUTO DE INVESTIGACIONES TÉCNICO CIENTÍFICAS DE LA UNIVERSIDAD POLICIAL .................................................................................................................................... 17
ARTÍCULOS ORIGINALES
CARACTERIZACIÓN DEL MINI-YSTR DYS-481 EN TRES SUBPOBLACIONES DE BOLIVIA .................................... 19
HAPLOTIPOS DE ADN MITOCONDRIAL REVELAN POSIBLE RUTA MIGRATORIA ANCESTRAL DE LOS PUEBLOS URU Y AYOREO DE BOLIVIA .............................................................................................................................. 27
HAPLOTIPOS DE ND4 EN Aedes aegypti (VECTOR DEL DENGUE) DE SAN BORJA Y CARANAVI (BOLIVIA) ....... 43
CARACTERIZACIÓN DE MICROSATÉLITES PARA PRUEBAS DE PARENTESCO EN CAMÉLIDOS DEL ALTIPLANO BOLIVIANO ........................................................................................................................................................ 49
NOTAS TÉCNICAS
PRIMER ESTUDIO TAXONÓMICO MOLECULAR DEL ORDEN TRICHOPTERA EN LA REGIÓN ALTOANDINA DE BOLIVIA ............................................................................................................................................................. 57
TIPIFICACIÓN MOLECULAR DE MIRU-VNTR’S PARA ESTUDIOS EPIDEMIOLÓGICOS DE TUBERCULOSIS EN BOLIVIA ............................................................................................................................................................. 63
DETECCIÓN DEL GEN “INTERFERÓN-GAMMA” POR PCR DE RETRO-TRANSCRIPCIÓN EN CÉLULAS MURINAS .......................................................................................................................................................... 67
REVISIÓN CORTA
ESTRUCTURA Y CARACTERÍSTICAS GENERALES DE LOS INDICIOS PILOSOS ..................................................... 71
ENFERMEDADES INFECCIOSAS EMERGENTES (EIE´S) Y SU RELACIÓN CON EL TRÁFICO DE FAUNA SILVESTRE ......................................................................................................................................................... 75
ESTUDIOS DE CASO
PLANIMETRIA OPERATIVA DE CAMPO Y DE GABINETE EN UN CASO DE DESLIZAMIENTO DE TERRENO ........ 79
ACCIDENTES DE TRÁNSITO: CASO “BOCA DE SAPO” ........................................................................................ 89
INSTRUCCIONES PARA LOS AUTORES............................................................................................................... 95
POLICÍA BOLIVIANA
UNIVERSIDAD POLICIAL “MCAL. ANTONIO JOSE´DE SUCRE”
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES TÉCNICO CIENTÍFICAS
Bajo Seguencoma, Av. Hugo Ernst 7404 ANAPOL
La Paz – Bolivia
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