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VALIDACIÓN DEL CONTROL HIGIÉNICO

DE PRODUCTOS FARMACÉUTICOS NO OBLIGATORIAMENTE

ESTERILES

Validación del Control Higiénico de Productos Farmacéuticos No obligatoriamente estériles

Objetivo de la validaciónObjetivo de la validaciónDocumentar, a través de estudios de laboratorio, que el Documentar, a través de estudios de laboratorio, que el método utilizado método utilizado --ensayado en condiciones claramente ensayado en condiciones claramente establecidasestablecidas-- justifica su utilización para la cual se justifica su utilización para la cual se propone. propone.

Fundamento empírico de la validaciónFundamento empírico de la validaciónConsiste básicamente en desafiar el producto objeto Consiste básicamente en desafiar el producto objeto del control con un determinado número de del control con un determinado número de microorganismos microorganismos --en condiciones de ensayo definidasen condiciones de ensayo definidas--y evaluar su comportamiento a través de la y evaluar su comportamiento a través de la recuperación microbiana que se obtenga.recuperación microbiana que se obtenga.

Validación del Control Higiénico de Productos Farmacéuticos No Obligatoriamente Estériles

Desafío principal de la validaciónDesafío principal de la validaciónDemostrar que el producto controlado en “esas Demostrar que el producto controlado en “esas determinadas condiciones de ensayo” no inhibe la determinadas condiciones de ensayo” no inhibe la viabilidad de los microorganismos que pudieran estar viabilidad de los microorganismos que pudieran estar presentes en el mismo.presentes en el mismo.

Demostrar la neutralización de las propiedades Demostrar la neutralización de las propiedades antimicrobianas de un producto cualquiera sea su antimicrobianas de un producto cualquiera sea su origen (presencia específica de conservadores o origen (presencia específica de conservadores o simplemente su formulación.)simplemente su formulación.)


Estrategias para neutralizar propiedades inhibitorias de un producto

* Utilización de Inactivantes químicos o biológicos (específicos o no específicos).

* Elección del método por filtración.* Realización de diluciones/Utilización de modificadores.

* Combinación de opciones anteriores


Factores principales a considerar en la validaciónFactores principales a considerar en la validaciónMicroorganismos desafiantesMicroorganismos desafiantes::-- Naturaleza del inóculoNaturaleza del inóculo-- Preparación y tamaño del inóculo del inóculoPreparación y tamaño del inóculo del inóculo

Condiciones específicas de ensayo estandarizadas y Condiciones específicas de ensayo estandarizadas y reproduciblesreproducibles (Tpo, temp, membranas y prefiltros, (Tpo, temp, membranas y prefiltros, buffers, etc) buffers, etc)

Condiciones de recuperaciónCondiciones de recuperación-- Medio de recuperaciónMedio de recuperación-- Condiciones de incubaciónCondiciones de incubación


Protocolo propuesto para la validaciónProtocolo propuesto para la validaciónSe define una secuencia de estapas Se define una secuencia de estapas --de ejecución de ejecución sucesivasucesiva-- en función de las recuperaciones en función de las recuperaciones obtenidas para cada etapa de ensayoobtenidas para cada etapa de ensayo

Consideraciones generales a evaluar en todos las Consideraciones generales a evaluar en todos las etapasetapas

••Propiedades de crecimiento de los mediosPropiedades de crecimiento de los medios••Control negativoControl negativo••Control Higiénico del producto (siguiendo la Control Higiénico del producto (siguiendo la técnica que se está validando)técnica que se está validando)


1. 1. Etapa inicial (Metodología directa Etapa inicial (Metodología directa -- Sin estrategia de Sin estrategia de neutralización)neutralización)Se ensaya sobe dos grupos Se ensaya sobe dos grupos a. Grupo viable (control positivo): Buffer + Inóculoa. Grupo viable (control positivo): Buffer + Inóculob. Grupo ensayo (muestra desafiada): Muestra + b. Grupo ensayo (muestra desafiada): Muestra +

Inóculo Inóculo

Criterios de aceptaciónCriterios de aceptación::-- generales para todas las etapas:generales para todas las etapas:

Control negativo sin crecimiento.Control negativo sin crecimiento.Evaluación de resultados del Control higiénico Evaluación de resultados del Control higiénico (de aceptarse la etapa)(de aceptarse la etapa)


Criterios de aceptación (continuación): Criterios de aceptación (continuación): -- Particulares de esta etapaParticulares de esta etapa::

Deben realizarse 3 ensayos independientes. Para cada Deben realizarse 3 ensayos independientes. Para cada uno de ellos:uno de ellos:

a. Recuperaciones en placa: el porcentaje de recuperación a. Recuperaciones en placa: el porcentaje de recuperación para el Grupo ensayo no debe ser menor al 70% respecto para el Grupo ensayo no debe ser menor al 70% respecto del Grupo viable.del Grupo viable.

b. Recuperaciones en medio líquido: debe observarse b. Recuperaciones en medio líquido: debe observarse crecimiento abundante para ambos grupos dentro de los crecimiento abundante para ambos grupos dentro de los 7 días de iniciado el desafío para cada microorganismo7 días de iniciado el desafío para cada microorganismo..


2. 2. Segunda etapa (Metodología directa Segunda etapa (Metodología directa –– con con neutralización)neutralización)

Se ensaya sobre tres grupos Se ensaya sobre tres grupos a. Grupo viable (control positivo): Buffer + Inóculoa. Grupo viable (control positivo): Buffer + Inóculob. Grupo ensayo (muestra desafiada): Muestra + b. Grupo ensayo (muestra desafiada): Muestra + Neutralizante + Inóculo Neutralizante + Inóculo

c. Grupo control toxicidad: Neutralizante + Inóculoc. Grupo control toxicidad: Neutralizante + Inóculo

InterpretaciónInterpretación: : Verificar el cumplimiento de la eficacia de neutralización Verificar el cumplimiento de la eficacia de neutralización y la posible toxicidad del neutralizante a partir de la y la posible toxicidad del neutralizante a partir de la comparación entre grupos (a/b y a/c, respectivamente)comparación entre grupos (a/b y a/c, respectivamente)


Neutralizantes comunes compendiadosNeutralizantes comunes compendiados::

Tipo de agente microbiano USP XXIV EP Supp 20Tipo de agente microbiano USP XXIV EP Supp 200000

FenólicosFenólicos DiluciónDilución Lauril sulfato de sodio Lauril sulfato de sodio Tween 80 + Lecitina Tween 80 + Lecitina Yema de huevoYema de huevo

OrganoOrgano--mercuriales Tioglicolato Tiomercuriales Tioglicolato TioglicolatoglicolatoHalógenos Tiosulfato Halógenos Tiosulfato TiosulfatoTiosulfatoComp. Amonio 4rio Lecitina Comp. Amonio 4rio Lecitina Yema de huevoYema de huevoAlcoholes DiluciónAlcoholes DiluciónParabenos TweenParabenos TweenEDTA Iones Ca2+ / MgEDTA Iones Ca2+ / Mg2+2+


Criterios de aceptaciónCriterios de aceptación: : -- GeneralesGenerales: : deben cumplirsedeben cumplirse-- Particulares de esta etapaParticulares de esta etapa: : Deben realizarse 3 ensayos independientes y para cada Deben realizarse 3 ensayos independientes y para cada uno de ellos:uno de ellos:

a. Recuperaciones en placa: el porcentaje de recuperación a. Recuperaciones en placa: el porcentaje de recuperación para el Grupo ensayo no debe ser menor al 70% para el Grupo ensayo no debe ser menor al 70% respecto del Grupo viable.respecto del Grupo viable.

b. Recuperaciones en medio líquido: debe observarse b. Recuperaciones en medio líquido: debe observarse crecimiento abundante para los tres grupos dentro de crecimiento abundante para los tres grupos dentro de los 7 días de iniciado el desafío para cada los 7 días de iniciado el desafío para cada microorganismo.microorganismo.


3. 3. Tercera etapa (Metodología por filtración Tercera etapa (Metodología por filtración –– con o sin con o sin neutralización)neutralización)

Se ensaya sobre cuatro grupos (Se ensaya sobre cuatro grupos (Diseño con neutralizadorDiseño con neutralizador))a. Grupo viable (control positivo): a. Grupo viable (control positivo): Buffer x Memb + InóculoBuffer x Memb + Inóculo

b. Grupo ensayo (muestra desafiada): b. Grupo ensayo (muestra desafiada): Muestra x Memb + Muestra x Memb + Neutralizante + Inóculo Neutralizante + Inóculo

c. Grupo control toxicidad: c. Grupo control toxicidad: Neutralizante + InóculoNeutralizante + Inóculo

d. Grupo control de la técnica por filtración: d. Grupo control de la técnica por filtración: Inóculo Inóculo directamente en placadirectamente en placa

Interpretación:Interpretación: Verificar la inhibición que genera la Verificar la inhibición que genera la membrana y el vaso de filtración sobre el microorganismo membrana y el vaso de filtración sobre el microorganismo inoculado, a partir de la comparación entre grupos (a/d)inoculado, a partir de la comparación entre grupos (a/d)


Criterios de aceptación: Criterios de aceptación: -- GeneralesGenerales: : deben cumplirsedeben cumplirse-- Particulares de esta etapaParticulares de esta etapa::

Deben realizarse al menos 3 ensayos independientes y Deben realizarse al menos 3 ensayos independientes y para cada uno de ellos:para cada uno de ellos:

Los porcentajes de recuperación para metodología por Los porcentajes de recuperación para metodología por filtración para los diferentes grupos deben resultar filtración para los diferentes grupos deben resultar similares.similares.

AclaraciónAclaración: El método por Filtración podrá realizarse si la : El método por Filtración podrá realizarse si la muestra puede ser aceptablemente filtrada. De ser muestra puede ser aceptablemente filtrada. De ser necesario un tratamiento de muestra adicional, su acción necesario un tratamiento de muestra adicional, su acción sobre la viabilidad de los microorganismos debe ser sobre la viabilidad de los microorganismos debe ser evaluada (por ejemplo, ciertas suspensiones, cremas, evaluada (por ejemplo, ciertas suspensiones, cremas, ungüentos, etc)ungüentos, etc)


4. 4. Cuarta etapa (Metodología por Dilución/Combinaciones)Cuarta etapa (Metodología por Dilución/Combinaciones)

La Técnica de dilución puede utilizarse en forma La Técnica de dilución puede utilizarse en forma complementaria a una metodología directa o una metodología complementaria a una metodología directa o una metodología por filtración (considerándose como una preparación de por filtración (considerándose como una preparación de muestra especial). muestra especial). También podrá realizarse conjuntamente a la utilización de También podrá realizarse conjuntamente a la utilización de agentes de neutralización. agentes de neutralización. Cualquiera sea la situación los límites de aceptación dependeránCualquiera sea la situación los límites de aceptación dependerándel protocolo seguido.del protocolo seguido.

Inconveniente de la metodologíaInconveniente de la metodología: Las recuperaciones por unidad : Las recuperaciones por unidad de muestra de ciertas determinaciones no podrán satisfacer los de muestra de ciertas determinaciones no podrán satisfacer los límites establecidos por la Autoridad Sanitaria.límites establecidos por la Autoridad Sanitaria.

Validación del Ensayo de Efectividad Antimicrobiana en Productos Farmacéuticos No Obligatoriamente Estériles

Ciertos productos No Obligatoriamente Estériles deben Ciertos productos No Obligatoriamente Estériles deben asegurar asegurar --por su actividad por su actividad antimicrobiana antimicrobiana perper sese ó gracias al ó gracias al agregado de ciertos conservadoresagregado de ciertos conservadores-- condiciones protectoras condiciones protectoras frente a una contaminación microbiana ó desfavorables para frente a una contaminación microbiana ó desfavorables para su proliferación durante el almacenamiento y/o la utilización su proliferación durante el almacenamiento y/o la utilización del producto.del producto.

Así el Ensayo para determinar la efectividad Así el Ensayo para determinar la efectividad antimicrobianaantimicrobianadebe realizarse para todo aquel producto que contenga un debe realizarse para todo aquel producto que contenga un conservador, para presentaciones conservador, para presentaciones multidosismultidosis tópicas y orales, tópicas y orales, como así también para aquellas formas oftálmicas, óticas, como así también para aquellas formas oftálmicas, óticas, nasales nasales --entre otrasentre otras-- que presenten agua en su formulación.que presenten agua en su formulación.


Fundamento del Ensayo de Efectividad Fundamento del Ensayo de Efectividad antimicrobianaantimicrobianaDesafiar el producto con un inóculo determinado de diferentes Desafiar el producto con un inóculo determinado de diferentes microorganismos, almacenar las muestras inoculadas en microorganismos, almacenar las muestras inoculadas en condiciones claramente establecidas y a partir de las mismas, condiciones claramente establecidas y a partir de las mismas, recoger y procesar “en condiciones de ensayo definidas” recoger y procesar “en condiciones de ensayo definidas” muestras a diferentes tiempos. muestras a diferentes tiempos.

Los Los límites de aceptación del Ensayolímites de aceptación del Ensayo se establecen en función se establecen en función de las recuperaciones logradas a lo largo del tiempo de las recuperaciones logradas a lo largo del tiempo (disminución o mantenimiento de la carga microbiana (disminución o mantenimiento de la carga microbiana --según según correspondacorresponda--) y de acuerdo al grado de protección deseado ) y de acuerdo al grado de protección deseado para el tipo de producto que está siendo desafiadopara el tipo de producto que está siendo desafiado

Ensayo de Efectividad AntimicrobianaEsquema General

MICROORGANISMOS DESAFIANTESMICROORGANISMOS DESAFIANTESINOCULOINOCULO

CONCENTRACIÓNCONCENTRACIÓNTIPOTIPO

INCUBACIÓN DE LAS MUESTRAS INCUBACIÓN DE LAS MUESTRAS INOCULADASINOCULADASPERIODICIDAD DEL MUESTREOPERIODICIDAD DEL MUESTREOCRITERIOS DE ACEPTACIÓNCRITERIOS DE ACEPTACIÓN

Ensayo de Efectividad Antimicrobiana

MICROORGANISMOS DESAFIANTESMICROORGANISMOS DESAFIANTESUSP 24USP 24

Candida albicans Candida albicans ATCC 10231ATCC 10231Aspergillus niger Aspergillus niger ATCC 16404ATCC 16404Escherichia coli Escherichia coli ATCC 8739ATCC 8739Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027ATCC 9027Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus ATCC 6538ATCC 6538Opcionales: contaminantes del productoOpcionales: contaminantes del producto

BP 2000BP 2000Candida albicansCandida albicans ATCC 10231ATCC 10231Aspergillus nigerAspergillus niger ATCC 16404ATCC 16404Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa ATCC 9027ATCC 9027Staphylococcus aureusStaphylococcus aureus ATCC 6538ATCC 6538Opcionales: contaminantes del productoOpcionales: contaminantes del producto

Escherichia coliEscherichia coli ATCC 8739ATCC 8739Zigosaccharomyces rouxii Zigosaccharomyces rouxii NCYC 381NCYC 381


INOCULOINOCULOCONCENTRACIÓNCONCENTRACIÓN

USP 24: 10USP 24: 1055 –– 101066 UFC/g o mL productoUFC/g o mL productoBP 2000: 10BP 2000: 1055 –– 101066 UFC/g o mL productoUFC/g o mL producto

TIPOTIPOUso 24: únicoUso 24: únicoBP 2000: únicoBP 2000: único


INCUBACIÓN DE LAS MUESTRAS INCUBACIÓN DE LAS MUESTRAS INOCULADASINOCULADAS

20 ° C 20 ° C -- 25° C,25° C,Protegidas de la luzProtegidas de la luz

PERIODICIDAD DEL MUESTREOPERIODICIDAD DEL MUESTREOUSP 24: 0, 7, 14, 28 díasUSP 24: 0, 7, 14, 28 díasBP 2000: 0, 6h, 24h, 2 d, 7d, 14d, 28díasBP 2000: 0, 6h, 24h, 2 d, 7d, 14d, 28días


CRITERIOS DE ACEPTACIÓNCRITERIOS DE ACEPTACIÓNUSP 24:USP 24:

Todos los de categoría 1 con vehículos no Todos los de categoría 1 con vehículos no acuososacuosos

Categoría 2Categoría 2

Orales con vehículos acuososOrales con vehículos acuososCategoría 1CCategoría 1C

Tópicos con vehículos acuosos, nasales no Tópicos con vehículos acuosos, nasales no estériles y emulsiones, a aplicar sobre estériles y emulsiones, a aplicar sobre mucosasmucosas

Categoría 1BCategoría 1B

Inyectables, otros Inyectables, otros parenteralesparenterales, óticos, , óticos, estériles nasales, oftálmicos, todos con estériles nasales, oftálmicos, todos con vehículos acuososvehículos acuosos

Categoría 1ACategoría 1A


CRITERIOS DE ACEPTACIÓNCRITERIOS DE ACEPTACIÓN

Sin incremento en los días 14 y 28.Sin incremento en los días 14 y 28.Categoría 2Categoría 2

Bacterias: reducción de al menos 1 log Bacterias: reducción de al menos 1 log rn rn 14 días, sin incremento hasta el día 28.14 días, sin incremento hasta el día 28.Hongos: sin incremento hasta el día 28Hongos: sin incremento hasta el día 28

Categoría 1CCategoría 1C

Bacterias: reducción de al menos 2 log en Bacterias: reducción de al menos 2 log en 14 días y sin incremento a día 28.14 días y sin incremento a día 28.Hongos: sin incremento hasta el día 28.Hongos: sin incremento hasta el día 28.

Categoría 1BCategoría 1B

Bacterias: reducción de al menos 1 log en 7 Bacterias: reducción de al menos 1 log en 7 días, 2 log en 14 días y sin incremento a 28 días, 2 log en 14 días y sin incremento a 28 días. Hongos sin incremento hasta el día 28.días. Hongos sin incremento hasta el día 28.

Categoría 1ACategoría 1A


CRITERIOS DE ACEPTACIÓNCRITERIOS DE ACEPTACIÓNBP 2000: Preparaciones oftálmicas y BP 2000: Preparaciones oftálmicas y parenteralesparenterales

SISI11------BB

SISI--22----AAHongos y Hongos y levaduraslevaduras

SISI--3311--BB

NRNR----3322AABacteriasBacterias

28 d28 d14 d14 d7 d7 d24 h24 h6 h6 h

Reducción en logReducción en log

NR: sin crecimiento; SI: sin incremento


CRITERIOS DE ACEPTACIÓNCRITERIOS DE ACEPTACIÓNBP 2000: Preparaciones oralesBP 2000: Preparaciones orales


SISI11Hongos y levadurasHongos y levaduras

SiSi33BacteriasBacterias

28 d28 d14 d14 d


CRITERIOS DE ACEPTACIÓNCRITERIOS DE ACEPTACIÓNBP 2000: Preparaciones tópicasBP 2000: Preparaciones tópicas

SISI11----BB

SISI22----AAHongos y Hongos y levaduraslevaduras

SISI33----BB

SISI--3322AABacteriasBacterias

28 d28 d14 d14 d7 d7 d2 d2 d



CRITERIOS DE ACEPTACIÓNCRITERIOS DE ACEPTACIÓNBP 2000: Preparaciones óticasBP 2000: Preparaciones óticas

SISI--22----Hongos y Hongos y levaduraslevaduras

NRNR----3322BacteriasBacterias

28 d28 d14 d14 d7 d7 d24 h24 h6 h6 h



Validación del Ensayo de Efectividad Validación del Ensayo de Efectividad AntimicrobianaAntimicrobiana

Evidenciar y documentar la Evidenciar y documentar la adecuabilidadadecuabilidad del procedimiento del procedimiento para demostrar la reducción (ó mantenimiento) deseada en las para demostrar la reducción (ó mantenimiento) deseada en las recuperaciones obtenidas a través del tiempo para cada recuperaciones obtenidas a través del tiempo para cada microorganismo.microorganismo.

Nuevamente identificar las condiciones de ensayo establecidas Nuevamente identificar las condiciones de ensayo establecidas para neutralizar la actividad para neutralizar la actividad antimicrobianaantimicrobiana del producto (de del producto (de manera de lograr que no interfieran en la interpretación de losmanera de lograr que no interfieran en la interpretación de losrecuentos reducidos hallados) será el desafío principal de las recuentos reducidos hallados) será el desafío principal de las tareas de validación para esta metodología. tareas de validación para esta metodología.

SI ATRIBUTOS DE CALIDAD MICROBIOLOGICA DE LOSPRODUCTOS NO OBLIGATORIAMENTE ESTÉRILES

Contiene el producto conservadores antimicrobianos?

El producto, inherentemente, puede soportar el crecimiento de microorganismos de prueba, ó superar los límites de aceptabilidad (criterios de farmacopeas)durante su desarrollo?

Establecer criterios de aceptabilidad para el conservadory llevar a cabo la validación de la efectividad del mismosobre el producto, usando una concentración del conservadormenor ó igual a la mínima especificada.

NO SI

ARBOL DE DECISION

Es el producto una forma farmacéutica sólida, seca, por ejemplo: oral ó en polvo?

Establecer criterios microbianosde aceptabilidad

NO SI

NO

SI

Proveer evidencia científica que demuestre las propiedades inhibitorias del producto

Los límites y criterios de aceptabilidad microbiológica y su prueba pueden no ser necesarios.

Efectuar el control higiénico lote a lote

Todos los lotes cumplen en forma consistente con los límites microbianos de aceptación?

NO

SI

Realizar pruebas de los límites microbianos en lotes noconsecutivos ó proveer información científica para norealizar el control higiénico en forma rutinaria.

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