western blot o inmunoblot

8/18/2019 Western Blot o Inmunoblot

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WESTERN BLOT O INMUNOBLOT

ALUMNOS : ROJAS MORENO, Lebi R. TORRES IBAÑEZ, Marvin M.

FRETEL YALICO, Gabriea. RI!ERA GARCIA, Wiian F. JORGE "AN#URO, A$%$&'( B. )UANCA GUZMAN, Evi&

!AL#ERRAMA CALERO, L$i& F.

"ROFESOR : Bi(%. C)IA WONG, JULIO

CURSO : MICROBIOLOGIA GENERAL

CICLO : *+- II.

TINGO MAR/A "ER0

UNI!ERSI#A# NACIONAL AGRARIA #E LA SEL!AFACULTA# #E AGRONOMIA

DEPARTAMENTO ACADEMICO DE CIENCIAS AGRARIAS



INTRO#UCCI1N

El Western Blot, o inmunoblot, es una

técnica analtica usa!a "ara !etectar"rotenas es"eci#cas en una muestra!etermina!a$ Me!iante unaelectro%oresis en &el se se"aran las"rotenas$

'as "rotenas son trans%eri!as !es!e el

&el a la membranaelectro%oréticamente$

Detecta la uni(n ant&eno)anticuer"o"or acti*i!a! en+imtica,-uorescencia$



CARACTERISTICAS #E LAT2CNICAEs una "rueba in!e"en!iente con alta es"eci#c

Western Blot, las "ruebas ra!ioinmuno"reci"itensa.os !e inmuno-orescenncia in!irecta$ El WBlot es la mas com/n !e estas "ruebas usa!asEsta!os uni!os$ Cuan!o se e%ect/a !e acuer!oestn!ares ace"ta!os !e reali+aci(n, las "ruebsucesi*as !e E'ISA, se&ui!as !el test Western

'a e0actitu! !e esta "rueba !e"en!e &ran!emelecci(n !e los reacti*os 1umicos, la "ericia !técnicos . la inter"retaci(n sub2eti*a$



ELECTROFORESIS

Para enten!er la técnica !e Western Blot es necesaricom"ren!er 1ue es una electro%oresis . en 1ue se ba

'as "rotenas suelen tener car&a neta3 "or lo tanto, sun cam"o eléctrico a una soluci(n 1ue conten&a una"rotenas, estas mi&raran a una *eloci!a! 1ue !e"en

car&a neta, %orma . "eso molecular$ Esta técnica es ccomo electro%oresis$

'as se"araciones electro%oréticas se reali+an casi sieso"orte soli!os, &eneralmente "ara se"arar una me+"rotenas, el so"orte !e elecci(n son los &eles !e "o



!ENTAJAS4$) SENSIBILI#A#$) !ebi!o a suca"aci!a! "ara !etectar un mnimo !e

5$4 nano&ramos !e "rotena en unamuestra$

6$) ES"ECIFICI#A#$) la técnica !eWestern Blot se !ebe a su es"eci#ci!a!!e !os %actores "rinci"ales7

A8 'a electro%oresis en &el, es !e &ran

"aso a la !etecci(n, como ban!as en&el %orma!o .a !an "istas sobre eltama9o !e la "rotena o "oli"é"ti!o$

B8 'a es"eci#ci!a!ant&eno:anticuer"o$ Es un %actorim"ortante !a!o 1ue los anticuer"oses"ec#cos muestran a#ni!a! "or"rotenas es"eci#cas, el "roceso"ue!e !etectar una "rotena !iana$

#ES!ENTS

4$) "ROCESO O RESUL

ERRONEO O SUBJETI!su sensibili!a! . es"ec;estern Blot "ue!e "roresulta!os err(neos, unreacciona con una "rotes"eraba$

6$) ALTO costo . cuesti

Debi!o a 1ue es un "roel Western Blot necesit"recisi(n$

Muc<os laboratorios noestan!ari+a!os o "ro!uautori+a!os !el Wester



A"LICACIONES EN MICROORGANISIM"ORTANTES EN LA AGRICUCLTU

"RO#UCCION #E "LANTAS TRANSGENICAS ME#IANTA%r(ba3'eri$4 '$4e5a3ien& EN EL LABORATORIO.

A&robacterium tume%aciens ) sin(nimo !e R<i+obium ra!iouna bacteria 1ue causa en las "lantas !icotile!(neas unosconoci!os como =a&allas= o =tumores !el cuello=, 1ue crec!on!e se unen la ra+ . el tallo$

>no !e los "asos mas im"ortantes en la "ro!ucci(n !e "latrans&énicas es la elecci(n !el &en o los &enes 1ue *an a intro!uci!os en la "lanta a trans%ormar$ 'a Nicotiana tabaccon*erti!o en el mo!elo mas am"liamente !i%un!i!o "ara &enes en "lantas trans&énicas$

'os &enes i!enti#ca!os como bené#cos "ara la caracterst!eben ser clona!os en un *ector ?"lsmi!o8 "ara el anlissecuencia . "osteriormente subciona!os en otro "lsmi!o*ector !e e0"resi(n, el cual "ermite e0"resar la "rotena !

la "lanta trans%orma!a$



En el caso !e trans%ormaci(n con a&robacterium, elcontener las secuencias !e los bor!es !erec<o e i+1uieDNA !e a&robacterium$ 'a "resencia !el &en !e interés

a&robacterium se con#rma "or PCR o anlisis con en+im

Des"ues !e @ !as !e la in%ecci(n con A. tumefacie

cortes !e te2i!o son trans%eri!os a un nue*o me!io !e ccontiene un antibi(tico$ El te2i!o trans%orma!o &eneralm!esarrolla <asta %ormar "lantas in vitro en "resencia !e

'as "lantas resistentes al antibi(tico son trans"orin*erna!ero !on!e se "ractica un anlisis "ara !etermi"resencia !e la secuencia !el &en intro!uci!o en las "laPCR, la transcri"ci(n !el &en "or Nort<en blot . la e0"rmismo "or Western blot$



BIBLOGRAFIA: Alberto Mi2an !e la Torre)TECNICAS METODOS DE

INESTIGACION EN N>TRICION>MANA)e!itorial G'OSA$

G>IA DE PRACTICAS PREENTIASEN 'A PRACTICA MEDICA)

e!iciones DIA DE SANTOS$

MEMORIAS) I C>RSOINTERNACIONA' DE RIESGOS

FITOSANITARIOS PARA 'AAGRIC>'T>RA CO'OMBIANA)

Santa%é !e Bo&ot, Colombia3 al@ !e no*iembre !e 4HHH$



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