a b És t sejtek funkcionÁlis vizsgÁlata
DESCRIPTION
A B ÉS T SEJTEK FUNKCIONÁLIS VIZSGÁLATA. A humorális immunválasz szakaszai. Aktiváció: B sejt proliferáció és differenciáció. Felismerés. Antitest szekréció. Helper T sejtek, egyéb stimulusok. Klonális expanzió. Izotípus váltás. Nyugvó IgM +, IgD + érett B sejtek. - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
A B ÉS T SEJTEK FUNKCIONÁLIS VIZSGÁLATA
A humorális immunválasz szakaszai
Felismerés Aktiváció: B sejt proliferáció és differenciáció
Nyugvó IgM+, IgD+ érett B sejtek
Aktivált B sejtek
Helper T sejtek, egyéb stimulusok
Klonális expanzió
Antitest szekréció
Izotípus váltás
Affinitás érés
Memória B sejtek
A T sejt válasz szakaszaiKlonális expanzió
Antigén felismerés
DifferenciációAktiváció Effektor funkciók
Macrophagok, B sejtek,
aktiválódása
Fertőzött target sejtek ölése; macrophag aktiváció
Perifériás szövetLymphoid szövet
B sejt receptor szignálAntigén
keresztköti a membrán IgG-t
Tirozin foszforilációs események
Aktívenzimek
Biokémiai intermedierek
Transzkripciós faktorok
PLCγ aktiváció
Ras-GTPRac-GTP
Emelkedett Ca++ a citoszolban
GTP/GDP csere a Ras, Rac-on
Ca++ függő enzimek
IP3
Ser/thr kináz
T sejt receptor komplex általi szignalizáció
A TCR-mediált szignaling
kezdete
Biokémiai intermedierek
Disztális szignál enzimek
Transzkripciós faktorok
Emelkedett Ca++ a citoszolban
PLCγ aktiváció
(Protein Páz)-IL2 válasz)
szinte mindegyik lépés gátolható
A B-sejtek T-sejt függő aktivációja és a T sejtek APC általi aktivációja
A gátlás következményeiből következtethetünk az aktivációs folyamatok mikéntjére.
A sejtfunkciók gátlása a klinikai gyakorlatban - immunszuppresszió
- gyulladások (bőrgyógyászat, tüdőgyógyászat, stb.)- transzplantáció- allergiás kórképek- autoimmun betegségek
Használt hatóanyagcsoportok/technikák
- Kortikoszteroidok
- citosztatikus anyagok(alkilálószerek (CP,klorambucil), folsavantagonisták (MTX),
purin-/pirimidin-szintézis gátlói-AZA)
- Nem citosztatikus hatású immunszuppresszív szerek(cyclosporin A, tacrolimus/sirolimus, leflunomide)
- citokin-receptor elleni antitestek, blokkoló citokin-elleni antitestek
- Leukaferezis
- Nagy dózisú iv. immunglobulin (IVIg)
KortikoszteroidokGlükokortikoid R
GRE (glukokortikoid recognition
element)
(NF-κB, AP-1)
PLA2 gátlása – arachidon(sav) anyagcsere gátlás
csökken az IL-1, TNF-α, IL-4, és más citokinek szintézise
célsejtek hatás
T sejtek lympholysis, citokintermelés gátlása
B sejtek minimális hatása van az Ig termelésre
MakrofágokAz MHCII expresszió gátlása, citokin termelés gátlás, prosztaglandin termelés és felszabadulás gátlása
Neutrofil granulociták
Adhézió gátlás
Eozinofil, bazofil, és hízósejtek
Eosinopenia, a degranuláció gátlása
EndotheliumAdhéziós molekulák expressziójának gátlása, PGE termelésének és felszabadulásának gátlása
Fibroblasztok PGE termelés és felszabadulás gátlás
Glukokortikoszteroidok hatásai az immunrendszer elemeire
Kortikoszteroidokmegbízható hatás, megbízható mellékhatások
Szisztémásan adott szteroidok mellékhatásai, a teljesség igénye nélkül:- Elhízás (centrális típusú)- Növekedési visszamaradás gyermekkorban- Fogékonyság fertőzésekre- Thrombosishajlam, coronariabetegség kockázata nő- Elhúzódó sebgyógyulás, fekélyek kialakulás- Gyomorfekély- Osteoporosis, asepticus csontnecrosis, szteroidmyopathia- Hypertonia- Hirsutismus, bőr atrophia, szteroid acne- Glaucoma, cataracta- Psychés zavarok
Rendszabályok:szigorú dózishatárok, alternáló adagolás, fokozatos leépítés
Lokális alkalmazás: kevesebb (elhanyagolható) mellékhatás!
Az immunsejtek proliferációjának gátlásával is immunszuppresszió érhető el:
citosztatikumok
Tumorterápiás szerek, amik a limfociták osztódásának a gátlásához is felhasználhatóak, de némelyik igen súlyos mellékhatások árán.
- alkiláló szerek (cyclophosphamid, chlorambucil)purinbázisokhoz kötödő, DNS-replikáció gátlók; hatékonyak, de súlyos mellékhatások árán, pl. szinte biztos leuko- és lymphopaenia
- folsavantagonisták (methotrexát)nukleinsav szintézis gátló, szükség esetén folsav támogatást igényel; hepatotoxikus (májenzimek időszakosan ellenőrzendők!)
- purin antagonisták (6-merkaptopurin, azathioprin, mikofenolát mofetil)
purin szintézis gátlás – a T- és B-sejtek nem rendelkeznek megkerülő, „salvage” purinhasznosító útvonallal, csak de novo szintézisre képesek
- pirimidin antagonisták
Immunfunkció gátlás
Cyclosporin A – 11 aminosavas ciklopeptid (Tolypocladium inflatum talajlakó gomba termeli)
ciklofilinekhez kötődik, amelyek így nem tudják aktiválni a calcineurint, nincs NF-AT aktiváció gátolt az interleukin szintézis (főleg T-sejt eredetű IL-2)
Immunofilin gátlószerek („kalcineurin inhibitorok”)
Tacrolimus (FK506) – ciklosporin hatású, nagyméretű gyűrűs vegyület, makrolid antibiotikum(Streptomyces tsukubaensis – baktérium termeli, 'Tsukuba macrolide immunosuppressant‘)
A tacrolimus előnye, hogy a bőrön át is felszívódik, így atópiás dermatitisben lokálisan használják.
Sirolimus (rapamycin)Streptomyces hygroscopicus – (Rapa Nui avagy Easter Island - Húsvét szigetekről származó mikroba termeli)
Citotoxikus és blokkoló antitestek:CD3(OKT-3), CD4, CD2, CD7, CD25, HLA-DROtelixizumab/visilizumab, alefacept (aCD2), Rövid távú tapasztalatok vannak ezzel a technikával, a korai xenogén (ált. egér) antitesteket felváltották a kiméra, majd a humanizált antitestek. Utóbbiak <5% egér eredetű komponenst tartalmaznak, így a hatásukat semlegesítő antitestválasz ritkább.További lehetőség: toxinokkal/izotóppal konjugált antitestek célzott sejtpusztításra (pl. Zevalin - ittrium-90)
FTY720 (fingolimod)Isaria sinclairii gomba termeli, a limfocita adhéziót befolyásolja az α4/β7 integrinen keresztül. Hatására a limfociták száma lecsökken a keringésben és a nyirokcsomókban akkumulálódnak. (phase III clinical trials)
Anti-citokin antitestek: Anti-TNFα-antitestek RA infliximab, adalimumabszolubilis TNFα-rec. (etanercept - Enbrel) RA, JCA (2006 óta törzsk.)anti-IL2 transzplantáció
LeflunomidHatása a rapamycinhez hasonló, DMARD („disease modifying antirheumatic drug”)-ként 2005 óta törzskönyvezett RA-ban és arthritis psoriaticaban
dihydroorotate dehydrogenase gátlás
Az antigén-specifikus T és B sejtek gyakorisága kicsi.
A poliklonális T/B-sejt aktivációt kiváltó anyagok, és módszerek hasznosak lehetnek a sejtek
funkcionális vizsgálatában.
Poliklonális T-/B-sejt aktivációt kiváltó anyagokkal, és módszerekkel végezhető el a sejtek funkcionális vizsgálata.
Az immundeficienciák nagy része különböző funkcionális vizsgálatokkal mutathatók ki.
Az antigénnel való aktiválás technikailag nehezen lenne kivitelezhető, mert az antigén-specifikus T- és B-sejtek gyakorisága kicsi.
A T- ÉS B-LIMFOCITÁK FUNKCIONÁLIS AKTIVITÁSÁNAK MÉRÉSE
1) A T- és B-sejtek poliklonális aktivációja a TCR vagy a BCR nem antigén-specifikus aktivációjával
lektinek (PHA, ConA) által indukált aktiváció anti-IgM, anti-CD3 vagy anti-TCR ellenanyaggal, allogén T-sejt aktiváció
2) Az aktivációt követő T- és B-sejt válasz jellemzése
aktivációs markerek intracelluláris események vizsgálata proliferatív válasz ellenanyag és/vagy citokin termelés (ELISA, CBA)
3) Az aktivált T- és B-sejtek számának meghatározása az antigén hatás után
ELISPOT intracelluláris citokin jelölés pentamer (vagy tetramer) technika
A LIMFOCITÁK POLIKLONÁLIS AKTIVÁCIÓJA LPS, LEKTINEK, PMA+IONOMYCIN JELENLÉTÉBEN
B-sejt (egér) T-sejt T-sejt
BCR vagy TCR-specifikus ellenanyagok is a megfelelő sejtek poliklonális aktivációját okozzák
LPS a TLR4-en keresztül aktiválja a
sejteket
A lektinek (pl. Con A, PHA) szénhidrát kötő fehérjék.
A sejtfelszíni glikozilált receptorok keresztkötésével
aktiválják a sejteket.
Az Ionomycin a külső Ca2+ ionok beengedésével aktiválja
a sejteket, szinergizálva a protein kináz C-hez kötődő
PMA-val
TLR4
Poliklonális B sejt aktivátorok hatásaiAktivátor T-sejt függés Ig szekréció
Humán B sejt
PWM (pokeweed mitogen) nincs van
SpA (szuperantigén, staphylococcus protein A)
nincs van
EBV (transzformáló hatású is) van van
Anti-Ig van citokinek jelenlétében
Egér B sejt
LPS nincs van
PWM van van
PPD (purified protein derivate, mikobakteriumból)
nincs van
Anti-Ig nincs citokinek jelenlétében
Poliklonális T sejt aktivátorokPhytohaemagglutinin (PHA) lektin Canavalia
ensiformis
Concanavalin A (ConA) lektin Phaseolus vulgaris
anti-CD3 Monoklonális ellenanyag
Pokeweed (PWM)(Phytolacca americana) – formerly used for coloring red wine(toxic: triterpene saponin)ChenopodialesPhytolaccaceae
Phytohaemagglutinin (PHA) Canavalia ensiformis – Jackbean, Sword bean
Concanavalin A (ConA) Phaseolus vulgaris – bean