transferencia de embriones en vacas raza carora

TRANSFERENCIA DE EMBRIONES EN LA RAZA CARORA

Aldemar Chávez RodríguezM.V.Z.U.T.

.

PLANEACION DE T.E.

Diseño de unprograma de t.e.

Selección de donadorasy receptoras

.

� 1954 PRIMER TERNERO NACIDO POR T.E.� 1979 PRIMERAS EXPERIENCIAS EN

VENEZUELA (ROMUALDO GONZALEZ)VENEZUELA (ROMUALDO GONZALEZ)� 1980 VIABLE COMERCIALMENTE LA T.E.� 1982 COMERCIO INTERNACIONAL DE

EMBRIONES CONGELADOS

.

1- PROPOSITOS.� COMERCIAL.� GENETICO.

ANIMALES EXPOSICION.� ANIMALES EXPOSICION.� CREAR REPRODUCTORES.� MULTIPLICAR LAS HEMBRAS ELITE.� MULTIPLICAR UNA RAZA PURA

2- USOS T.E.-COMERCIO DE GENETICA SUPERIOR.

-MULTIPLICAR ANIMALES FISICAMENTE IMPEDIDOS-PRUEBAS DE PROGENIE.

.

-PRUEBAS DE PROGENIE.-USOS PARA EL SEMEN DE ALTO COSTO.-TRANSPORTE DE MATERIAL GENETICO.-CONSERVAR MATERIAL GENETICO.

3 - LIMITACIONES T.E.-COSTOS.

-TIEMPO Y CONSTANCIA EN LOS TRATAMIENTOS.-RECEPTORAS DISPONIBLES.-RECEPTORAS DISPONIBLES.-EL 20% DE LA RECEPTORAS NO SE PREÑA T.E.-EL 20% DE LA DONADORAS NO PRODUCEN EMBRIONES.-NO TODAS LAS VACAS SON BUENAS DONADORAS.-PERSONAL CAPACITADO Y MOTIVADO.-INSTALACIONES BASICAS.- PROGRAMA NUTRICIONAL Y SANITARIO ADECUADO.

.

HISTORIA REPRODUCTIVAPROGRAMA SANITARIOCICLOS REGULARES>A 60 DIAS POST PARTO

EVALUACION REPRODUCTIVAPERMEABILIDAD CERVICALCUERNOS UTERINOS TAMAÑO OVARICO >A 60 DIAS POST PARTO

INTERVALO ENTRE PARTOSCONDICION CORPORALBALANCE ENERGETICO

POSITIVOEDAD MAX 13-14 AñOSNOVILLAS CICLANDO

TAMAÑO OVARICO VAGINA ANORMALIDADESNOVILLAS CTR > 3ULTRASONIDOCUERPO LUTEOOVARIOS (FOLICULOS>10)

.� NOVILLAS� CTR > 3 ANDERSON 88

� PESO > 320 KG� CICLANDO IDEAL� CRUCE LECHERO

� VACAS.� CERVIZ.� > 80 DIAS POST

PARTO.C.C. � CRUCE LECHERO

� BALANCE E +� PELVIS AMPLIA� TEMPERAMENTO� PROGRAMA

SANITARIO

� C.C. � CICLANDO .� BALANCE E+.� PROGRAMA SANITARIO� HABILIDAD MATERNA.

CONTROL DEL TRACTO REPRODUCTIVO NOVILLAS (CTR)

CALIFICATIVO CERVIS UTERO OVARIOS ESTRUCTURAS P4

IND.OVARICO

CTR Diámetro diámetro Tono long ancho grosor folículos Mm CL

Mm mm mm mm mm

Anderson 88.

1- Infantil <12 <10 - 12 8 6 - - - - 0.6

2- Inmaduro 12 12-15 - 15 10 8 F1 8 - - 1.2

3- En desarrollo 15-20 15 - 18 12 10 F1 8-10 - - 2.2

4 – Activo 20 18-20 + 24 14 12 F2 >10 +,- + 4.0

5- Cíclico >20 >25 ++ >25 16 12 F2 >12 + + >4.8

RECEPTORAS

Fuente :finca la tigra 2008

RECEPTORAS CEBUINAS

Finca el jobal 2000

ECOGRAFIA DEL CUERPO LUTEO

Fuente: Chávez 2008

CUERPO LUTEO

Fuente :Chávez 2000

.

Tratamientoshormonales

Superovulaciónde donadoras

Sincronizaciónde receptoras

HORMONAS PARA SUPEROVULAR BOVINOS

� FSHP - siux- folltropin –pluset� FSHO - ovagen� FSHB - bovina recombinante súper ova� FSHE - equina recombinante� FSHE - equina recombinante� PMSG - ecg- folligon – novormón- anti pmsg� HMG - humana – pergovet.

PLUSET (2 X 500 u.i) FOLLTROPIN (400 mg)

� PLUSET FOLLTROPIN� BOS TAUROS� NOVILLAS 300 u.i-30% 200 mg -50%

VACAS 500 u.i.-50% 300 mg -75%� VACAS 500 u.i.-50% 300 mg -75%� BOS INDICUS� NOVILLAS 200u.i.-20% 120mg- 30%� VACAS 300 U.I.-30% 180mg- 45%

Chávez 1996

Superovulación FOLLTROPIN70% 31dias.

� 0 implante crestar + 2 ml inyectables� 8 retiro implante +2 ml preloban� 9-10 detectar celo + 2,5 ml de conceptal ev� 19 palpación del cuerpo lúteo� 20 6 am 3 ml de FOLLTROPIN VIA im

6 pm 3 ml de folltropin im� 21 6 am 2,5 ml de folltropin im� 21 6 am 2,5 ml de folltropin im

6 pm 2,5 ml de folltropin im� 22 6 am 1 ml folltropin + 7 ml lutalyse

6 pm 1 ml folltropin + 3 ml lutalyse� 23 6 am 0,5 ml de folltropin im

6 pm 0,5 ml de folltropin im� 24 6 am DETECTAR EL CELO

6 pm i.a. 12 HORAS� 25 6 am i.a. 24 HORAS � 31 am colecta y t.e.

RESULTADOS FOLLTROPIN 70 %

� VACAS TRATADAS 12 Pro/vaca� Estructuras colectadas 40 3.3Estructuras colectadas 40 3.3� Embriones viables 18 1,5� Receptoras preñadas 10 0,83� % Efectividad t.e. = 55,55%.

COSTOS RESULTADOS FOLLTROPIN 70 %

CONCEPTO COSTO ESTIMADOMATERIAL 12 DONADORAS Y 90 RECEPTORAS

3.600 US

Costos estimados 12 donadoras (COSTO DONADORA/ 7 RECEPORAS 300 US)

RECEPTORAS

COSTO TECNICO COLECTA(100 US/DONADORA )

1.200 US

COSTO PREÑEZ CONFIRMADA(100 US/RECEPTORA) X 10

1.000 US

COSTO TOTAL /PREÑEZ 580 US

CHAVEZ 1996

LH

Ovulación

Ondas Foliculares

FSHProg.

Celo 105 21

LH

Ovulación

Ondas Foliculares

FSHProg.

Celo 105 21

Sincronización de las ondas foliculares 1995-2003,Bó

� Progestágenos y estrógenos� P4 + 17β estradiol� 50-100mg p4 + 2,5 - 5mg 17β estradiol

Nueva onda 4,3 días después� Nueva onda 4,3 días después� P4+EB (benzoato estradiol)� 50-100mg p4 + 2,5 - 5 mg estradiol� Nueva onda 3-4 días después� Iniciar 4 días después con FSH

Sincronización de las ondas foliculares 1995-2003,Bó

� Progestágenos y estrógenos� P4+ EV (valerato de estradiol)� Crestar ( 3mg norgestomet +5mg EV)� Crestar ( 3mg norgestomet +5mg EV)� Nueva onda 4 a 6 días � Iniciar FSH 5-6 días después� P4 + ECP(cipionato de estradiol)� 50-100mg p4 + 2-4 mg ECP NO RECOMENDADO

Superovulaciòn pluset 60% -20 d.-5 2 ml de pgf2 preloban 2 cc im0 2 implantes crestar sin los 2 ml inyectables +5 mg 17β + 100 mg p4

4 6 am 2,5 ml de pluset im6 pm 2,5ml de pluset im

5 6 am 2 ml de pluset im6 pm 2 ml de pluset im6 pm 2 ml de pluset im

6 6 am 1 ml pluset + 7 ml lutalyse6 pm 1 ml pluset + 3 ml lutalyse+ retiro implantes

7 6 am 0,5 ml de pluset im6 pm 0,5 ml de pluset im

8 6 am i.a. + 3000 hcg (chorulon) ev6 pm i.a.

9 6 am i.a.15 am colecta y t.e.

RESULTADOS pluset 60 % finca Agrotadeo, estado monagas

� VACAS TRATADAS 24 Pro/vaca

� Estructuras colectadas 104 4,3� Estructuras colectadas 104 4,3� Embriones viables 50 2,08� Receptoras preñadas 30 0,8� % Efectividad t.e.= 60%.

COSTOS RESULTADOS PLUSET 60 %

CONCEPTO COSTO ESTIMADOMATERIAL 24 DONADORAS Y 180 RECEPTORAS

7.200 US

Costos estimados 24 donadoras (COSTO DONADORA / 7 RECEPTORAS 300 US)

RECEPTORAS

COSTO TECNICO COLECTA(100 US/DONADORA )

2.400 US

COSTO PREÑEZ CONFIRMADA(100 US/RECEPTORA) X 30

3.000 US

COSTO TOTAL /PREÑEZ 420 US

CHAVEZ 1998

FINCA LA TIGRA ESTADO MONAGAS

Fuente la tigra 2007

HIPOTESIS

� LAS VACAS CARORA,ASI COMO LAS BOS INDICUS SON SENSIBLES A LA FSH-P

� TRABAJOS CON RAZAS CRIOLLAS EN COLOMBIA MOSTRARON ALTA SENSIBILIDAD A LA FSH-P. RAZAS BON Y CHINO ALTA SENSIBILIDAD A LA FSH-P. RAZAS BON Y CHINO SANTANDEREANO

� LOS ESTROGENOS NO SINCRONIZAN BIEN LAS ONDAS FOLICULARES EN RAZAS CRIOLLAS.

� REALIZAR TRABAJOS CON DOSIS BAJAS DE FSH-P� UTILIZAR PROTOCOLOS NUEVOS P24-P36. (BARROS-NOGUEIRA-

BARUSELLI 2001-2005)� USAR INDUCTORES DE OVULACION GNRH, LH, HCG. I.A. A TIEMPO

FIJO.

Superovulaciòn FOLLTROPIN 50%p24con i.a. tiempo fijo.

0 2 ml de preloban vía i.m.8 aplicar un implante de crestar y una dosis inyectable (p4 norg-valerato de e.)13 6 am 2 ml de folltropin im

6 pm 2 ml de folltropin im14 6 am 1,5 ml de folltropin im

6 pm 1 ,5ml de folltropin im15 6 am 1 ml folltropin + 7 ml lutalyse15 6 am 1 ml folltropin + 7 ml lutalyse

6 pm 1 ml folltropin + 3 ml lutalyse16 6 am 0,5 ml de folltropin im retirar implantes

6 pm 0,5 ml de folltropin im17 6 am i.a. + 5 cc de conceptal (3000 u.i. hcg)

6 pm i.a. 18 6 am i.a. 25 am colecta y t.e.

RESULTADOS T.E. FINCA LA TIGRA 2006-2008

VACAS TRATADAS 66 Pro/vaca� Vacas sin respuesta 14� Estructuras colectadas 682 10,33� Estructuras colectadas 682 10,33� Infértiles (óvulos ) 302 4,57� Embriones degenerados 82 1,24� Embriones viables 275 4,16� Receptoras preñadas 152 2,30� % DE EFECTIVIDAD t.e. 55,27%

COSTOS RESULTADOS LA TIGRA

CONCEPTO COSTO ESTIMADOMATERIAL 66 DONADORAS Y 495 RECEPTORAS( MATERIAL DESECHABLE APROBADO POR LA IETS)

19.800 US

Costos estimados 66 donadoras ( COSTO DONADORA / 7 RECEPTORAS 300US)

APROBADO POR LA IETS)

COSTO TECNICO COLECTA(100 US/DONADORA )

6.600 US

COSTO PREÑEZ CONFIRMADA(100 US/RECEPTORA) X 152

15.200 US

COSTO TOTAL /PREÑEZ 273,68 US

CHAVEZ 2008

COSTOS RESULTADOS LA TIGRA

CONCEPTO COSTO ESTIMADOMATERIAL 66 DONADORAS Y 495 RECEPTORAS (REUTILIZANDO MATERIAL

13.200US

Costos estimados 66 donadoras ( COSTO DONADORA / 7 RECEPTORAS 200US)

RECEPTORAS (REUTILIZANDO MATERIALNO APROBADO POR LA IETS)

COSTO TECNICO COLECTA(100 US/DONADORA )

6.600 US

COSTO PREÑEZ CONFIRMADA(100 US/RECEPTORA) X 152

15.200 US

COSTO TOTAL /PREÑEZCosto material desechable 273,68

230 USDiferencia 43,65/preñez CHAVEZ 2008

RESULTADOS FINCA LA TIGRA 2006-2008

VACA emb transferidos recep/preñadas� Vaca corona 31 18 (58,06%)� Vaca luz maría 25 15 (60%)� Vaca énfasis 19 13 (68,42%)� Vaca énfasis 19 13 (68,42%)� Vaca Chepina 16 10 (62,5%)� Vaca joya 33 15 (45,45%)

RESULTADOS FINCA LA TIGRA 2006-2008

emb transferidos recep/preñadasTORO (LAVADOS)

� SANTA CRUZ (6) 27 17 (62,96%)� REY FEDERICO (7) 27 18 (66,67%)� REY FEDERICO (7) 27 18 (66,67%)� MORICHAL (9) 26 18 (69,23%)� EL BERGON (8) 20 13 (65%)� COMACATE (7) 24 12 (50%)� CHAMBOTE (2) 14 10 (71,43%)

Sincronización receptoras

PGF2∞- Una dosis un día antes PGF2 donadora-dos dosis una cada 14 días.

GnRhGnRhDía 0 100µg dia7 PGF2 dia8 día 9 100µg

2 ml conceptal 2ml preloban 2 ml conceptal2ml conceptal 2 ml preloban 1mg EB celo

2ml conceptal+ CIDR-B 2ml preloban 1 mg EB celo

retiro CIDR-B

Sincronización receptoras

� Progestágenos � CRESTAR- CIDR-B-PRID-DIB-TRIUB-CUE-MATE-MGA ETC.� LOS IMPLANTES SE PUEDEN USAR A 7-8-9-10-11- DIAS-� INICIO 2mg EB+ 50 mg P4

AL RETIRAR PGF2 + ECG (PMSG)� AL RETIRAR PGF2 + ECG (PMSG)� DETECTAR CELO.� 0-CRESTAR + 2 ML INYECTABLES� 9-RETIRO +PGF2 (2 ml PRELOBAN)+ 300 U.I. ECG (1,5mlFOLLIGON)� 10-11 DETECTAR CELO� 18 T.E.

SINCRONIZACIÓN RECEPTORAS� TRANSFERENCIA DE EMBRIONES A TIEMPO FIJO� DIA O CRESTAR+ 2 ml INYECTABLES� DIA 8 RETIRAR IMPLANTE PM+300 UI eCG

+2cc preloban+0,5cc de ecp� DIA 10 CELO� DIA 17 T.E.� DIA 17 T.E.� NO REQUIERE DETECTAR CELO.

Tasa de utilizacion de receptoras > al 70 % n : 1000 animales tratados.

Material de colecta de embriones

Fuente :Chávez 2004

Medios de colecta y mantenimiento

Fuente Chávez 2004

Cajas de petri

Fuente Chávez 2004

Filtros de colecta

Fuente Chávez 2004

Sitio de trabajo de laboratorio

Finca el jobal 2000

Sitio ideal de trabajo de laboratorio

Central genética madrigal 2008

SITIO DE TRABAJO

Finca la tigra 2007

Laboratorio móvil

Fuente Chávez , midates Francia 2003

Sitio de colecta ideal

Fuente Chávez , midates Francia 2003

Sitio de colecta Finca La Tigra

Fuente la tigra 2008

Ovarios superovulados día 7

Fuente Chávez 2000

Búsqueda de embriones

Fuente ganadería manzanares 2004

Grupo de embriones viables

Fuente Chávez 2007

Grupo de estructuras no viables

Fuente Chávez 2007

Selección de embriones

Fuente Chávez 2006

Clasificación de embriones IETS

� Estado calidad� 1-UFO óvulos no fecundados 1- excelente� 2-2-12 células 2-regular� 3-mórula temprana 3-malo

4-mórula 4-muerto o degenerado� 4-mórula 4-muerto o degenerado� 5-blastocisto temprano� 6-blastocisto� 7-blastocisto expandido� 8-blastocisto eclosionado� 9-blastocisto elongado (eclosionado expandido)

Desarrollo embrionario� Ovocito 150-190µm� Día 1 ovulación fimbrias infundíbulo� Día 2 2 células oviducto� Día 3 4 células oviducto� Día 4 8 células oviducto� Día 4 8 células oviducto� Día 5 16 células cuerno uterino� Día 6 32-64 células mórula compacta� Día 7 100-200 células blastocisto temprano� Día 8 100-200 células blastocisto� Día 8 100-200 células blastocisto expandido mayor diámetro� Día 9 200-800 células blastocisto protruido

Grados de calidad embrionaria� Calidad tipo 1 excelente� Desarrollo acorde a la colecta. blastómeros visibles, color y estructura uniformes

esferoide buena compactación y zona pelucida intacta

� calidad tipo 2 bueno� Pocos blastomeros desprendidos de la masa celular, detritus celulares� Pocos blastomeros desprendidos de la masa celular, detritus celulares� Forma irregular, poca compactación

� Calidad tipo 3 regular� Color oscuro o muy claro, forma irregular, detritus celulares desarrollo retardado.

Zona pelucida agrietada.

� Calidad tipo 4 malo� Degenerado, vacuolización de blastomeros, aspecto granuloso estados de 8 celulas

Clasificación de embriones

Fuente manual iets 2003

Empaque de embriones en pajuelas

Fuente Chávez 2007

Montaje en pistolas de t.e.

Fuente Chávez 2006

Resultados de colecta de embriones finca la tigrade acuerdo al desarrollo y calidad del embrión

Clasificación embri ón

Nro embriones transferidos

Receptoraspreñadas

Receptorasvacías

% efectividad

4-1 138 76 62 55,07

4-2 42 25 17 59,524-2 42 25 17 59,52

4-3 9 5 4 55,56

5-1 60 31 29 51,67

5-2 25 15 10 60

totales 274 152 122 55,47

Chávez 2008

Cuerpo lúteo receptoras

Fuente Chávez 2000

Cuerpo lúteo ultrasonido

Fuente Chávez 2008

RECEPTORAS APTAS T.E.

Fuente finca la tigra 2008

REQUISITOS DE RECEPTORAS APTAS PARA T.E.

� 1- haber presentado celo 6-8 días antes� 2- palpación de un c.l. claro y definido� 3- ultrasonido c.l. mayor a 15 mm� 4- aplicar 5 cc lidocaina al 2% epidural� 4- aplicar 5 cc lidocaina al 2% epidural� 4- limpieza y desinfección de vulva� 5- transferir embrión de acuerdo a su desarrollo� 6- opcional aplicar 500 mg de flunixin meglumine� 7- progesterona 150 mg- o GnRh 2,5 ml(conceptal)� 8- llenar formato de lavado y transferencia de embrión

EMBRIONES FINCA LA TIGRA

Fuente finca la tigra 2007

EMBRIONES FINCA LA TIGRA

Fuente la tigra 2008

EMBRIONES FINCA LA TIGRA

Fuente la tigra 2008

Conclusiones y Recomendaciones

� 1- SELECCIONAR LAS DONADORAS DE ACUERDO AL TAMAÑO OVÁRICO� 2- PALPACION DE UN C.L. CLARO Y DEFINIDO PREVIO A TRATAMIENTOS

HORMONALES. UTILIZAR ULTRASONIDO.� 3- EVALUCION PREVIA DEL SEMEN A UTILIZAR� 4- PROGRAMA SANITARIO PREVIO A TRATAMIENTOS HORMONALES� 5-UTILIZAR ANIMAES CON EDADES NO SUPERIOR A 12 AÑOS.� 6-LLEVAR REGISTRO DE RESPUESTAS A LA SUPEROVULACION CON FSH-P

DE CADA DONADORA PARA AJUSTAR DOSIS .� 7-PROBAR PROTOCOLOS MIXTOS FOLLTROIPN –PLUSET, FOLLTROPIN -

ECG . PLUSET –ECG.� 8-UTILIZAR LH y la hcg COMO INDUCTOR DE OVULACION, PARA MEJORAR

OVULACION. Y EVALUARLA.� DEJAR EN DESCANSO LA DONADORA MÍNIMO 100 DÍAS DESPUÉS DEL

PARTO ANTES DE INICIAR LA SUPEROVULACIÓN� EVALUAR LOS PROGRAMAS DE TE EN NUMERO DE PREñECES SOBRE

VACAS TRATADAS Y NO SOBRE PORCENTAJES DE PREñEZ

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cultivo celular , fertilización in vitro, transferencia de embriones ,congelación de semen 2008

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