chanon naijitra · 2018-04-20 · 2.1...

การประเมนคณภาพผลการตรวจวเคราะหระดบวตามนดจากซรมผปวย

ระหวางวธ Chemiluminescence Micropar ticle Immunoassay (CMIA) และวธ High Per formance Liquid Chromatography (HPLC)

The evaluation of vitamin D analysis from patient serum between Chemiluminescence Micropar ticle Immunoassay (CMIA)

and High Per formance Liquid Chromatography (HPLC)

ชานนท นยจตร Chanon Naijitra สลนดา ดามะอ

Sulinda Dana-U อนรกษ เชอมง

Anurak Cheoymang

โรงพยาบาลธรรมศาสตรเฉลมพระเกยรต Thammasat University Hospital หองปฏบตการเทคนคการแพทย

Medical Technology Laboratory ประจาปงบประมาณ พ.ศ. 2558

Fiscal Year 2015

โรงพยาบาลธรรมศาสตรเฉลมพระเกยรต Thammasat University Hospital

โครงการวจยเพอพฒนางานของโรงพยาบาลธรรมศาสตรเฉลมพระเกยรต Thammasat University Hospital Research Project for Per formance Development

ของ Of

ทนพ. ชานนท นยจตร Mr Chanon Naijitra

เรอง

Subject

การประเมนคณภาพผลการตรวจวเคราะหระดบวตามนดจากซรมผปวยระหวางวธ Chemiluminescence Micropar ticle Immunoassay (CMIA) และวธ High Per formance Liquid Chromatography (HPLC)

The evaluation of vitamin D analysis from patient serum between Chemiluminescence Micropar ticle Immunoassay (CMIA) and High Per formance Liquid Chromatography (HPLC)

ไดผานการตรวจสอบและอนมตทนสนบสนนจาก โรงพยาบาลธรรมศาสตรเฉลมพระเกยรต

Be ver ified and approved by the Thammasat University Hospital ปงบประมาณ 2558 Fiscal Year 2015

เมอวนท 1 มถนายน 2558 Date 1 June 2015

ประธานกรรมการโครงการ Chair Of Committee ( ) ผชวยศาสตราจารย นายแพทยฉตรชย มงมาลยรกษ

ผอานวยการ Director ( ) รองศาสตราจารย นายแพทยจตตนดด หะวานนท

ก

บทคดยอ

การขาดวตามนดไมไดเปนสาเหตของโรคกระดกเพยงอยางเดยวเทานน แตยงสมพนธกบ

โรคอน ๆ ดวย วธการวเคราะหระดบวตามนดทงายและรวดเรวจงเปนสงจาเปนสาหรบการวนจฉย

และตดตามการรกษาโรค ดงนนเครองตรวจวเคราะหอตโนมตจงถกนามาใชในการตรวจวเคราะห

ทางหองปฏบตการทางการแพทย การศกษาครงนมวตถประสงคเพอประเมนความสมพนธของวธ

วเคราะหระดบวตามนด (25 hydroxyvitamin D) ในซรมระหวาง high performance liquid

chromatography (HPLC) ซงเปนวธมาตรฐาน และเครองมอตรวจวเคราะหอตโนมตทใชหลกการ

chemiluminescence microparticle immunoassay (CMIA) โดยเปรยบเทยบผลการวเคราะหระดบ

วตามนดระวางวธ HPLC และ CMIA ในซรมของผมารบบรการในหองปฏบตการเทคนคการแพทย

โรงพยาบาลธรรมศาสตรเฉลมพระเกยรต จานวน 100 ราย ผลการศกษาพบวาผลการวเคราะหระดบ

วตามนดของทง 2 วธ มความสมพนธกนในระดบสงมคาสมประสทธสหสมพนธ (r) เทากบ 0.937

และไมแตกตางกนอยางมนยสาคญทางสถต (p>0.05) ดงนนการตรวจวเคราะหระดบวตามนดดวย

เครองมอตรวจวเคราะหอตโนมตทใชหลกการ CMIA มความถกตองและแมนยา ไมแตกตางกบวธ

HPLC ซงเปนวธมาตรฐาน ดงนนเครองมอตรวจวเคราะหอตโนมตทใชหลกการ CMIA จงสามารถ

ใชในการตรวจวเคราะหระดบวตามนดสาหรบหองปฏบตการทางการแพทยได

คาสาคญ: วตามนด, 25-hydroxyvitamin D, High-Pressure Liquid Chromatography (HPLC), Chemiluminescence Microparticle immunoassay (CMIA)

ข

ABSTRACT

Vitamin D deficiency is not only the cause of bone diseases, but also associated with

other diseases. A simple and rapid method is essential to measure vitamin D levels for diagnosis

and monitoring of disease. Therefore, an automatic analyzer has been used for clinical laboratory

analysis. This study aimed to assess the relationship of analysis method for quantification of

vitamin D levels (25 hydroxyvitamin D) in the serum between high performance liquid

chromatography (HPLC) as a standard method and automatic laboratory analyzer base on

chemiluminescence microparticle immunoassay (CMIA). The samples were obtained from 100

subjects who received medical technology laboratory service at Thammasat University Hospital.

The results showed that both method had strong correlation with correlation coefficient (r) =

0.937. In addition, there were not show and not statistically significant difference between HPLC

and CMIA method (p>0.05). It indicated that the automatic laboratory analyzer based on CMIA

for quantification of vitamin D levels is accuracy and precision similar HPLC as standard method.

Therefore, the automatic analyzer based on CMIA can be used to measure the vitamin D level for

clinical laboratories.

Keywords: Vitamin D, 25-hydroxyvitamin D, High-Pressure Liquid Chromatography (HPLC),

Chemiluminescence Microparticle immunoassay (CMIA)

ค

กตตกรรมประกาศ

ผวจยขอขอบพระคณผอานวยการโรงพยาบาลธรรมศาสตรเฉลมพระเกยรต และเจาหนาท

งานหองปฏบตการเทคนคการแพทย ทอานวยความสะดวกและอนญาตใหใชสงสงตรวจและขอมล

ตาง ๆ รวมถงใหการสนบสนนการศกษาครงนอยางดยง การวจยครงนไดรบทนสนบสนนการวจย

จากโรงพยาบาลธรรมศาสตรเฉลมพระเกยรต ปงบประมาณ 2558

ชานนท นยจตร

สลนดา ดามะอ

อนรกษ เชอมง

ง

สารบญ

หนา

บทคดยอภาษาไทย ( Abstract Thai) ก

บทคดยอภาษาองกฤษ (Abstract English) ข

กตตกรรมประกาศ (Acknowledgments) ค

สารบญ (Table of Content) ง

สารบญตาราง (List of Tables) จ

สารบญภาพ (List of Figures) ฉ

คาอธบายสญลกษณและคายอ (List of Abbreviations) ช

บทท 1 บทนา (Introduction) 1

1.1 ความเปนมาและความสาคญของปญหา 1

1.2 วตถประสงคของการวจย 3

1.3 ขอบเขตของการวจย 3

1.4 สมมตฐานงานวจย 3

1.5 ประโยชนทคาดวาจะไดรบ 3

บทท 2 เอกสารและงานวจยทเกยวของ (Literature Review) 4

2.1 กระบวนการเมตาบอลซมของวตามนด 5

2.2 ภาวะการขาดวตามนด 6

2.3 การตรวจวเคราะหความเขมขนของวตามนดทางหองปฏบตการ 7

บทท 3 วธการดาเนนงานวจย (Mater ials and Methods) 10

3.1 รปแบบการศกษา 10

3.2 ขนาดตวอยางทใชในการศกษา 10

3.3 ขนตอนการดาเนนการวจย 11

3.4 การตรวจวเคราะหระดบวตามนด 12

3.5 การวเคราะหขอมลทางสถต 12

จ

บทท 4 ผลการวจย (Results) 13

4.1 ระดบความเขมขนของวตามนด 13

4.2 ความสมพนธของระดบความเขมขนของวตามนดระหวางวธ CMIA และ HPLC 14

บทท 5 สรปผล อภปรายผล และขอเสนอแนะ (Conclusion Discussion and Suggestion) 15

บรรณานกรม (Bibliography) 16

ภาคผนวก (Appendices)

ภาคผนวก ก (Appendix A) 20

ภาคผนวก ข (Appendix B) 26

ภาคผนวก ค (Appendix C) 29

ประวตนกวจย (Curr iculum Vitae) 37

ฉ

สารบญตาราง

หนา

ตารางท

1 แสดงผลการตรวจวเคราะหระดบวตามนดดวยเทคนค CMIA และ HPLC 21

ช

สารบญภาพ

หนา

ภาพท

1 แสดงโครงสรางของ (a) วตามนด D2 และ (b) วตามนด D3 4

2 แสดงกระบวนการเมตาบอลซมของวตามนด 6

3 กราฟแสดงความสมพนธของความเขมขนของวตามนดระหวางวธ CMIA และ HPLC 14

ซ

คาอธบายสญลกษณและคายอ

สญลกษณและคายอ

25OHD = 25-hydroxyvitamin D

CLIA = Chemiluminescence Immunoassay

CMIA = Chemiluminescence Microparticle Immunoassay

DEQAS = Vitamin D External Quality Assessment Scheme

EIA = Enzyme Immunoassay

HPLC = High Performance Liquid Chromatography

LC-MS/MS = Liquid chromatography-Tandem Mass Spectrometry

ng/ml = Nanogram/milliliter

r = Correlation coefficient

RAAS = Renin-Angiotensin Aldosterone System

RIA = Radio Immunoassay

SPSS = Statistical Package for the Social Sciences

1

บทท 1

บทนา

1.1 ความเปนมาและความสาคญของปญหา

ภาวะขาดวตามนด (Vitamin D deficiency) เปนปญหาทางสขภาพทสาคญ พบไดบอยใน

ประชากรทวไป และผปวยเรอรง ผลของภาวะขาดวตามนดไมเพยงแตจะทาใหสญเสยมวลกระดก

ลงเทานน แตยงทาใหการทางานในระบบตาง ๆ ของรางกายเสอมถอยลงดวย เนองจากภาวะขาด

วตามนดมผลตอระบบการทางานของอวยวะตาง ๆ และจะกระตนการทางานของยนทสมพนธกบ

โรคหวใจและหลอดเลอด โรคตดเชอ โรคหด เบาหวานชนดท 2 ความดนโลหตสง โรคซมเศรา

อลไซเมอร รวมถงปญหาภมคมกนตา เพมความเสยงตอโรคกระดกพรน และทสาคญในเดกเลกหาก

ขาดวตามนดจะทาใหมพฒนาการชา เชน เดนหรอคลานชา กระหมอมปดชา กระดกไมแขงแรง ฯลฯ

วตามนด (Vitamin D) เปนสารเสตยรอยดในกลมวตามนทละลายในไขมน (fat-soluble

vitamin) ทมความจาเปนตอรางกาย มหนาทสรางความแขงแรงของกระดกและฟน และมหนาท

ควบคมระดบแคลเซยมในเลอด ในกระดกและลาไส และยงชวยใหเซลลตาง ๆ ในรางกายสอสารกน

ไดอยางมประสทธภาพ นอกจากนยงมผลตอความแขงแรงของกลามเนอ หวใจและหลอดเลอด

ความแขงแรงของปอดระบบทางเดนหายใจ พฒนาการทางสมอง รวมทงความสามารถในการตอส

กบเชอโรคตาง ๆ

รางกายไดรบวตามนดจาก 2 แหลงคอ สงเคราะหไดเอง เมอผวหนงไดรบแสงแดด และ

จากการรบประทานอาหาร วตามนดและเมตาบอไลทมหลายรปแบบ แตมเพยง 2 รปแบบทสาคญ

คอ Ergocalciferol (วตามน D2) ซงไดจากอาหารประเภทพช และ Cholecalciferol (วตามน D3) ได

จากอาหารประเภทเนอสตว และจากการทผวหนงสรางขนเองเมอไดรบแสงแดด ซงวตามนดทเขา

มาในรางกายทง 2 รปแบบ จะจบตวกบโปรตนในพลาสมา และสงไปเมตาบอลซมทตบ โดย

กระบวนการ Hydroxylation ใหไดสารเมตาบอไลท คอ 25-hydroxyvitamin D (25OHD) ซงเปน

รปแบบทมคาครงชวตมากทสดคอ 15 วน จงเปนดชนทางคลนคทดทสดในการประเมนสภาวะ

วตามนดในรางกาย เพอใชประกอบการรกษาโรคกลามเนอออนแรง และกระดกพรน รวมถงโรค

อนๆ ทเกยวของกบการขาดวตามนด

2

การตรวจวเคราะห 25-hydroxyvitamin D (25-OHD ในพลาสมา แบงออกเปน 2 วธ ไดแก

หลกการ Chromatographic assay เชน HPLC, LC-MS/MS (reference method) และ Immunological

assay เชน RIA, EIA, CLIA, ECLIA เปนตน สาหรบวธอางองของการตรวจวเคราะหวตามนด คอ

Liquid chromatography–mass spectrometry (LC-MS/MS) ซงสามารถแยก 25-hydroxyvitamin D2

และ 25-hydroxyvitamin D3 ได มความถกตอง และแมนยาสง แตมขนตอนการตรวจวเคราะหท

ซบซอน ใชระยะเวลานาน ตองใชผเชยวชาญในการวเคราะห และมราคาแพง ตอมาจงไดมการ

พฒนาการตรวจวเคราะหวตามนดดวย High Performance Liquid Chromatography (HPLC) ซงม

ความไวนอยกวาวธ LC-MS/MS แตความถกตอง แมนยาอยในชวงทนาเชอถอ มขนตอนการตรวจ

วเคราะหทไมซบซอน ราคาถกกวา และใหผลการตรวจวเคราะหไมแตกตางจาก LC-MS/MS จงใช

วธ HPLC ซงเปนวธทมความถกตอง นาเชอถอในการตรวจวเคราะหวตามนดไดอกวธหนง อยางไร

กตามวธ HPLC ยงไมเหมาะสมกบการนามาใชในหองปฏบตการทวไปของโรงพยาบาล เนองจากม

ขนตอนการเตรยมตวอยางหลายขนตอน และใชระยะเวลาในการตรวจวเคราะหนาน จงไดมการ

พฒนาการตรวจวเคราะหวตามนดดวยเครองอตโนมตใหเหมาะสมกบการนามาใชในหองปฏบตการ

ทวไปของโรงพยาบาล เชน Immunological assay เชน Radio immunoassay (RIA), Enzyme

immunoassay (EIA), Chemiluminescence immunoassay (CLIA) และ Chemiluminescence

Microparticle Immunoassay (CMIA) เปนตน

ปจจบนโรงพยาบาลธรรมศาสตรเฉลมพระเกยรตไดเปดใหบรการรตรวจวเคราะหวตามน

ดจากซรม ดวยเครองตรวจวเคราะหวตามนดอตโนมต (Architect i2000sr) โดยใชหลกการ

Chemiluminescence Microparticle Immunoassay (CMIA) ซงเปนวธในการตรวจวเคราะหวตามนด

ทใชในโรงพยาบาลหลายแหงทงในประเทศและตางประเทศ แตอยางไรกตามบางครงกใหผลการ

ตรวจวเคราะหทตามาก ดงนนเพอความมนใจในคณภาพผลการตรวจวเคราะห จงไดมแนวคดใน

การศกษาประเมณคณภาพของผลการตรวจวเคราะห โดยการปรยบเทยบความแตกตางของผลการ

ตรวจวเคราะหวตามนดในซรมระหวางวธ Chemiluminescence Microparticle Immunoassay

(CMIA) ซงเปนหลกการทโรงพยาบาลใชตรวจวเคราะห และวธ High Performance Liquid

Chromatography (HPLC) ซงเปนวธมาตรฐาน และประเมนความสอดคลองระหวางผลการตรวจ

วเคราะหวตามนด ทงสองวธ

3

1.2 วตถประสงคของการวจย

เพอประเมนความสอดคลองของผลการตรวจวเคราะหระดบวตามนดในซรมระหวางวธ

Chemiluminescence Microparticle Immunoassay (CMIA) แ ล ะ ว ธ High Performance Liquid

Chromatography (HPLC) ซงเปนวธมาตรฐาน

1.3 ขอบเขตของการวจย

การศกษานใชตวอยางซ รมท เหลอจากการตรวจว เคราะหระดบวตามนดดวยวธ

Chemiluminescence Microparticle Immunoassay (CMIA) จากหองปฏบตการเทคนคการแพทย

โรงพยาบาลธรรมศาสตรเฉลมพระเกยรต มาตรวจวเคราะหระดบวตามนด อกครงดวยวธ HPLC

และประเมนความสอดคลองของผลการตรวจวเคราะหระดบวตามนด ระหวางวธ CMIA กบวธ

HPLC ซงเปนวธมาตราฐาน

1.4 สมมตฐานงานวจย

ถาการตรวจวเคราะหระดบวตามนด ดวยวธ Chemiluminescence Microparticle

Immunoassay (CMIA) มความถกตอง และความแมนยา และใหผลสอดคลองไมแตกตางจากผลการ

ตรวจวเคราะหระดบวตามนด ดวยวธ HPLC ซงเปนวธมาตราฐาน

1.5 ประโยชนทคาดวาจะไดรบ

1. มการเผยแพรขอมลความรในการประชมวชาการระดบชาตหรอนานาชาต

2. เปนการควบคมคณภาพผลการตรวจวเคราะหวตามนด และพฒนาคณภาพผลการตรวจ

วเคราะหวตามนด ใหมความถกตองและเทยงตรง

3. ผปวยไดรบการประเมนการรกษาโรค ทเกยวของกบการขาดวตามนดไดอยางถกตอง

4

บทท 2

เอกสารและงานวจยทเกยวของ

วตามนด หรอแคลซเฟอรอล (calciferol) เปนอนพนธของสเตอรอยด ซงจดอยในกลม

วตามนทละลายในมน (fat-soluble vitamin) ทาหนาทควบคมเมตาบอลซมของแคลเซยมและ

ฟอสฟอรส โดยวตามนด จะกระตนการสรางกระดก (Looker et al., 2002) และการสะสมของแรธาต

(mineralization) ทกระดก และทาหนาทรวมกบพาราไทรอยดฮอรโมน ในการกระตนการดดซม

แคลเซยม โดยชวยในการดดซมแคลเซยมและฟอสฟอรสผานผนงลาไส (DeLuca, 2004) จงม

ความสาคญในการสรางกระดกและฟนและการเจรญเตบโตตามปกตในเดก (Steenbock, 1924;

Thibodeau, 1996) วตามนดมผลตอการดดซมกลบของกรดอะมโนทไต, ชวยสงเคราะหนายอยใน

mucous membrane, และควบคมปรมาณของแคลเซยมและฟอสฟอรสในกระแสโลหตไมใหต าลง

จนถงขดอตราย (Barrett et al., 2010) วตามนดยงมสวนเกยวของกบการใชฟอสฟอรสในรางกาย

ชวยสงเคราะห Mucopolysaccharide ซงเปนสารทจาเปนในการสรางคอลลาเจน นอกจากนยง

เกยวของกบการใชเกลอซเตรทในรางกาย และจาเปนในการทางานของระบบประสาท การเตนของ

หวใจ การแขงตวของเลอด (DeLuca, 2004)

(a) (b)

รปท 1 แสดงโครงสรางของ (a) วตามนด D2 และ (b) วตามนด D3

5

วตามนดทเขารางกายจะถกนาไปเกบทตบเปนสวนใหญ นอกจากนจะเกบทผวหนง สมอง

ตบออน กระดก และลาไสได วตามนดจะเสยงายเมอถกออกซเดชน ละลายในตวทาลายไขมนและ

ไมละลายนาอาหารทมวตามนดพบไดทงในพชผก ผลไม และในเนอเยอของสตวแตดเหมอนจะเปน

วตามนชนดเดยวทมอยนอยมากในพชและผก ทพบมากไดแก นามนตบปลา ไขมน นม เนย ตบสตว

ตบปลาคอด (COD) ปลาท ไขแดง ปลาแซลมอน ปลาซาดน ปลาแมคเคอรเรล

2.1 กระบวนการเมตาบอลซมของวตามนด

วตามนดเปนอนพนธของสเตอรอยด มหลายชนดแตทสาคญ คอ วตามนด 2 ; D2 หรอ

เออรโกแคลซเฟอรอล (ergocalciferol) : ซงเกดจากการเปลยนแปลงของสเตอรอลในพช คอ

เออรโกสเตอรอล (ergosterol) เมอถกแสงแดด ซงรางกายไดนอยมาก จากอาหารประเภทพช และ

วตามนด 3 ; D3 หรอโคเลแคลซเฟอรอล (cholecalciferol) พบมากในนามนตบปลา และเนอสตว

โครงสรางแสดงในรปท 1 นอกจากนผวหนงสามารถสรางขนเองเมอไดรบแสงแดดโดยทมรงสอล

ตราไวโอเลตชนดบ (UVB) ไปเปลยนสาร 7-dehydrocholesterol ซงเปนโคเลสเตอรอลใตผวหนง

ไปเปนวตามน D3 และ ไดจากอาหารจาพวกสตว ทงวตามน D2 และวตามน D3 จบตวกบโปรตน

ในซรม และถกนาไปทตบ เพอใหเกดการเมตาบอลซม ดวยกระบวนการ Hydroxylation โดยอาศย

เอนไซม CYP27A1 ไดสารเมตาบอไลทซงเปนรปแบบ active form ของวตามนด คอ 25-

hydroxyvitamin D (25OHD) (Holick et al., 2008) ซงจะมครงชวต (half-life) ประมาณ 15 วน

หลงจากนนจะเกดการเมตาบอลซมทไต ดวยเอนไซม CYP27A1 ไดสาร 1,25-dihydroxyvitamin D

หรอ calcitriol ซงเปนสารออกกฤทธของวตามนด แตสลายตวไดอยางรวดเรวมคาครงชวตเพยง 15

ชวโมง (Masuda, 1999) ดงแสดงในรปท ดงนน 25-hydroxyvitamin D ซงเปนรปแบบทมคาครงชวต

นานกวารปแบบอน จงเปนดชนทางคลนกทดทสดในการประเมนสภาวะวตามนดในรางกาย เพอใช

ประกอบการรกษาโรคกลามเนอออนแรง และกระดกพรน รวมถงโรคอน ๆ ทเกยวของกบการขาด

วตามนด

6

ภาพท 2 แสดงกระบวนการเมตาบอลซมของวตามนด

2.2 ภาวะการขาดวตามนด

การทรางกายเกดภาวะขาดวตามนด ซงจะพบในประชากรบางกลม เชน ผทอยแตในบาน

คนทปวยไขตองนอนอยตลอดเวลา ผทมปญหาในการดดซมไขมน เชนผทเปนโรคตบ ตบออน และ

ผทมปญหาเกยวกบระบบทอนาด เปนตน การขาดวตามนดทาใหเกดโรคกระดกออนในเดกเรยก

Rickets ทาใหการเจรญเตบโตของกระดกและฟนผดปกตหรอหยดชะงก รปรางจะไมสมประกอบ

เตบโตชา กระดกสนหลงโกง สวนในผใหญเรยกวา Osteocalcin จะมปญหาเกยวกบการดดซม

แคลเซยมเขารางกาย ทาใหกระดกหกงาย เนองจากขาดแคลเซยม และฟอสเฟต ทเปนสวนประกอบ

ของกระดก นาหนกลด ฟนผ ขอมอ เขา และกระดกขอเทาโต ความตานทานตอโรคตาง ๆ

7

ลดนอยลง เชนหวด ปอดบวม วณโรค กลามเนอออนกาลงขาดความคลองแคลว ไมกระฉบกระเฉง

ไมมความกระปรกระเปรา กลามเนอกระตก (Skaria et al., 1975) นอกจากนยงพบวาวตามนด มสวน

เกยวของตอการเพมความเสยงในการเกดโรคเบาหวาน ชนด 1 ความดนโลหตสง โรคหลอดเลอด

หวใจ (vascular disease) และการเกดมะเรงหลายชนด เนองจากวตามนดมผลตอการควบคมการ

ทางานระบบของ renin-angiotensin aldosterone system (RAAS) การยบย งการแบงตวของเซลล

กลามเนอของผนงหลอดเลอด (vascular smooth muscle) การขยายตวของหลอดเลอด และการ

ควบคมการทางานของเซลล macrophage และลดการสราง cytokine ชนดตาง ๆ (Brandenburg et

al., 2012; Hayes et al., 2003; Li, 2003; Reid and Bolland, 2012)

ภาวะวตามนดเปนพษ (vitamin D intoxication) คอการทมระดบวตามนดในรางกายสง

สงผลใหระดบแคลเซยม และฟอสเฟตในพลาสมาสงเกนไป มแคลเซยมไปจบทเนอเยอตาง ๆ จะทา

ใหมอาการกระสบกระสาย นาหนกลด

ตามมาตรฐานของสถาบนการแพทยอเมรกน ผทเปนโรคกระดกออนจะระดบวตามนด

ตากวา 10 - 11 ng/mL ซงจาเปนตองรกษาระดบวตามนดมากกวา 15 ng/mL จงจะถอวาพอเพยง

(Bischoff-Ferrari et al., 2006) อยางไรกตาม การทบทวนงานวจยอน ๆ พบวาในคนปกตการปองกน

โรคทเกดจากการขาดวตามนดตาง ๆ รวมถงโรคกระดกออนนน ควรใหม 25-hydroxyvitamin D

มากกวา 30 mg/mL ขนไป (Vieth et al., 2007)

2.3 การตรวจวเคราะหความเขมขนของวตามนดทางหองปฏบตการ

การตรวจวเคราะหระดบความเขมขนของ 25-hydroxyvitamin D (25-OHD) ในซรมแบง

ออกเปน 2 วธหลก คอ chromatographic assay เชน HPLC, HPLC-MS/MS เปนตน และ

Immunological Assay เชน RIA, EIA, CLIA, ECLIA เปนตน

2.3.1 Immunological Assay วธนอาศยหลกการ antigen จบกบ antibody ไดแกวธ

Radioimmunoassay (RIA)

วธ RIA มาใชในการตรวจวเคราะห 25(OH)D (Hollis and Napoli, 1985) วธนเปนการ

ตรวจวเคราะหระดบ total vitamin D (25(OH)D2 และ 25(OH)D3) การตรวจวเคราะหตองอาศยการ

ตดฉลากสารกมมนตรงส เมอแรกเรมสารกมมนตรงสทใชคอ 3H ตอมาในปค.ศ. 1993 ไดเปลยนมา

8

เปน 125I (Hollis et al., 1993) วธนมขนตอนการตกตะกอน protein ดวย acetonitrile กอนทาการ

วเคราะห แตวธนไมเหมาะกบหองปฏบตการทไมมพนทสาหรบการตรวจวเคราะหสารทมการ

ปนเปอนสารกมมนตรงส วธนใหผลใกลเคยงกบวธ HPLC (Turpeinen et al., 2003) และวธ LC-

MS/MS (Maunsell et al., 2005) ผลจากการศกษาททาการเทยบกบวธ LC-MS/MS พบวาทความ

เขมขนตา วธ RIA จะใหผลทตากวา และทความเขมขนสง วธ RIA จะใหผลทสงกวา แตโดยเฉลย

แลวจะใหผลสงกวาวธ LC-MS/MS ถงรอยละ13 (Chen et al., 2008)

Enzyme-linked immunosorbent assay

วธนมผใชนอย จากขอมลขององคกรททาการประเมนการคณภาพหองปฏบตการในการ

ตรวจวเคราะหวตามนด (DEQAS) พบวาวธม recovery ตา (25(OH)D2 อยทรอยละ 56 และ

25(OH)D3 อยทรอยละ 79) (Carter et al., 2007) นอกจากนนวธนยงใหคาทตากวาวธ RIA และ

LC-MS/MS ประมาณรอยละ 21 (Hypponen et al., 2007; Roth et al., 2008)

Chemiluminescent immunoassay

ป 2004 ไดมการพฒนาการตรวจวเคราะหโดยใชวธ chemiluminescence (Ersfeld et al.,

2004) วธนเปนเทคโนโลยใหมทสามารถทาการตรวจวเคราะหโดยใชเครองอตโนมต ทาให

ประหยดเวลาในการตรวจ สงผลใหการตรวจวเคราะหนมความสะดวกและรวดเรว เหมาะสาหรบ

หองปฏบตการทวไป แตมขอเสยคอ antibody ทใชตรวจอาจจะตรวจจบกบ metabolites อน ๆ ของ

วตามนด ซงอาจทาใหการวดดวยวธนมคาสงกวาปกต

2.3.2 Chromatographic assay

วธนอาศยหลกการแยกตามคณสมบตทางเคมของสาร ไดแกวธ High Performance Liquid

Chromatography (HPLC) (Jones, 1978) และ Liquid Chromatography-Tandem Mass

Spectrometry (LC-MS/MS) ทงสองวธนสามารถแยกวเคราะห 25(OH)D2 และ 25(OH)D3 ไดอยาง

แมนยา แตวธ LC-MS/MS มความไว (sensitivity) มากกวา HPLC (Wallace et al., 2010) ปจจบน

เปนทยอมรบกนวาวธ LC-MS/MS เปน reference method (Roth et al., 2008; Vogeser et al., 2004)

และกาหนดใหวธ HPLC เปนวธมาตรฐาน (Wootton, 2005) อกวธหนงในการประเมนสภาวะ

วตามนดในรางกาย แตขอจากดของทง 2 วธ คอเครองมอทมราคาแพง และการวเคราะหตองอาศย

ผเชยวชาญในการควบคมเครอง และใชเวลาในการตรวจวเคราะหนานกวาวธ immunoassay

9

ปจจบนโรงพยาบาลธรรมศาสตรเฉลมพระเกยรตเปดใหบรการรตรวจวเคราะหวตามนด

จากซรม โดยใชวธ Chemiluminescence Microparticle Immunoassay ดงน นเพอเปนการประเมน

คณภาพของผลการตรวจวเคราะหจงไดทาการศกษาเปรยบเทยบผลการตรวจวเคราะหระดบของ

วตามนด ในซรมระหวางวธ Chemiluminescence Microparticle Immunoassay และวธ HPLC โดยม

วตถประสงคเพอประเมนความสอดคลองของความถกตอง และความแมนยา ของผลการตรวจ

วเคราะห วตามนด ระหวางวธ Chemiluminescence Microparticle Immunoassay (CMIA) กบวธ

HPLC ซงเปนวธมาตรฐาน

10

บทท 3

วธการดาเนนงานวจย

5.1 รปแบบการศกษา

การศกษาวจยแบบทดลอง (Experimental research) เพอประเมนความสอดคลองของ

ความถกตอง และความแมนยา ของผลการตรวจวเคราะหระดบวตามนด ระหวางวธ CMIA กบวธ

HPLC ซงเปนวธมาตรฐาน

5.2 ขนาดตวอยางทใชในการศกษา

กลมตวอยางทใชในการศกษานคอ ซรมทเหลอจากการตรวจวเคราะหวตามนดของผปวย

ทเขารบบรการตรวจวเคราะหวตามนดดวยวธ CMIA โดยใชเครอง Architech i2000sr ของ

หองปฏบตการเทคนคการแพทย โรงพยาบาลธรรมศาสตรเฉลมพระเกยรต ระหวางเดอน

พฤศจกายน 2558 - มถนายน 2559 จานวน 100 ตวอยาง ซงจะแบงเปน 3 กลมตามชวงความเขมขน

ของวตามนด คอ สง; >80 ng/ml (30 ตวอยาง), กลาง; 30-80 ng/ml (40 ตวอยาง) และตา; <30 ng/ml

(30 ตวอยาง)

ความชกของภาวะพรองวตามนดในประชากรภาคกลาง (Chailurkit et al., 2011) คอ 6.9%

คานวณขนาดตวอยาง โดยนาความชกแทนคาสมการคานวณขนาดตวอยาง (Yamane, 1967)

n =

2

2

)05.0(

)93.0)(07.0()96.1(

n = 100.03

จากการคานวณพบวา ขนาดตวอยางตาสด ทระดบความเชอมน 95% และระดบนยสาคญ

(α) 5% คอ100.03 ขนาดตวอยาง ดงนนซรมทใชในการศกษาครงนคอ 100 ตวอยาง

Where; p = ความชก q = 1- p α = Probability of type I error =1.96

11

เกณฑการคดเลอก (Inclusion criteria)

- ซรมทเหลอจากกการตรวจวเคราะหระดบวตามนดในงานประจาของหองปฏบตการ

เทคนคการแพทย ร.พ. ธรรมศาสตรเฉลมพระเกยรตมปรมาณมากกวา 500 µl

เกณฑการคดออก (Exclusion criteria)

- - ซรมทมการแตกของเมดเลอดแดง (Hemolysis serum)

-

5.3 ขนตอนการดาเนนการวจย

หลงจากไดรบอนมตการพจารณาจรยธรรมการวจยจากคณะอนกรรมการจรยธรรมการ

วจยในคน มธ. ชดท 2 เรยบรอยแลว ผวจยมขนตอนการดาเนนการดงน

1. ทาหนงสอขออนญาตใชซรมทเหลอจากการตรวจวเคราะหวตามนดของผปวย จาก

ผอานวยการโรงพยาบาลธรรมศาสตรเฉลมพระเกยรต และหวหนาหองปฏบตการเทคนคการแพทย

2. นาซ รมไปตรวจว เคราะหระดบวตามน ดดวยเค รอง High Performance Liquid

Chromatography (HPLC)

3. นาผลการตรวจวเคราะหระดบวตามนด ดวยวธ Chemiluminescence Microparticle

Immunoassay (CMIA) และวธ HPLC มาเปรยบเทยบและวเคราะหทางสถต

4. นาขอมลทไดมาวเคราะหและสรปผลการวจย

5.4 การตรวจวเคราะหระดบวตามนดรวม (Total vitamin D)

3.4.1 วธ Chemiluminescence Micropar ticle Immunoassay (CMIA)

การตรวจวเคราะหวตามนดจากซรมดวยเครอง Architech i2000sr ดวยหลกการ

Chemiluminescence Microparticle Immunoassay (CMIA) โดยวตามนดทงหมดในซรมจะจบกบ

anti-vitamin D ซงเคลอบบน paramagnetic microparticle หลงจากนนเตม biotinylated vitamin D

anti-Biotin ทตดฉลากดวย acridinium ซง biotinylated vitamin D anti-Biotin จะไปจบกบ anti-

vitamin D ทวางอย จากนนลางดวย wash buffer และเตมนายา pre-trigger ตามดวยนายา trigger

solution แลวอานผลดวยเครอง Architech i2000sr โดยมหนวยเปน Relative Light Units (RLUs)

ความสมพนธระหวางความเขมขนของวตามนดจะแปรผกผนกบคา RLUs ทวดไดจากเครอง

12

เครอง Architech i2000sr จะคานวณความเขมขนของวตามนด โดยการใชคาเฉลยของ

RLUs คานวณจากการทา Calibrator แลวรายงานออกมาเปนคาความเขมขนของวตามนด นอกจากน

ยงไดทาการวเคราะห control serum ทความเขมขนของวตามนด สง กลาง และตา ซงผลการ

วเคราะหวตามนดของ control serum ตองอยในชวงทยอมรบได จงจะเรมทาการวเคราะหตวอยาง

3.4.2 วธ High Per formance Liquid Chromatrography (HPLC)

ซรมทเหลอจากการตรวจวเคราะหวตามนด จะถกนามาตรวจวเคราะหวตามนดอกครง

ดวยวธ High Performance Liquid Chromatrography (HPLC) ซรมจะทาปฎกรยาสปอนนฟเคชน

(saponification) กบ KOH ทอณหภม 80 ˚C นาน 40 นาท และสกดดวย Hexane หลงจากนน

25-hydroxyvitamin D จะถกแยกผานคอลมน Nucleosil C18 (100 x 4.6 mm i.d., 0.5 μm) โดยใช

Methanol และ Acetonitrile อตราสวน 85 : 15 โดยปรมาตร เปนวฏภาคเคลอนทมอตราการไหล 1

มลลลตรตอนาท วดคาการดดกลนแสงความยาวคลน 256 นาโนเมตร และคานวณความเขมขนของ

วตามนดจาก Calibration curve ของสารมาตรฐาน 25-hydroxyvitamin D ทความเขมขนตาง ๆ และ

ทาการวเคราะห control serum ทความเขมขนของวตามนด สง กลาง และตา ซงผลการวเคราะห

วตามนดของ control serum ตองอยในชวงทยอมรบได จงจะเรมทาการวเคราะหตวอยาง

5.5 การวเคราะหขอมลทางสถต

การบนทกขอมล และการตรวจวเคราะหและคานวณคาทางสถตในการศกษาครงน ใช

โปรแกรม SPSS ในการวเคราะหคาสมประสทธความแปรปรวน คาสมประสทธสหสมพนธ และ

paired t-test ในการเปรยบเทยบความแตกตางของระดบวตามนดทไดจากการตรวจวเคราะหทง 2 วธ

โดยกาหนดใหขอมลมความแตกตางกนอยางมนยสาคญทางสถตเมอ p < 0.05

13

บทท 4

ผลการวจย

การศกษาครงนมวตถประสงคเพอประเมนความสอดคลองของผลการตรวจวเคราะห

วตามนดในซรมระหวางวธ Chemiluminescence Microparticle Immunoassay (CMIA) และวธ High

Performance Liquid Chromatography (HPLC) ซงเปนวธมาตรฐาน โดยใชตวอยางเปนซรมทเหลอ

จากการตรวจวเคราะหระดบวตามนดของผปวยทเขารบบรการทหองปฏบตการเทคนคการแพทย

โรงพยาบาลธรรมศาสตรเฉลมพระเกยรต จานวน 100 ตวอยาง ระหวางเดอนพฤศจกายน 2558-

มถนายน 2559 จานวน 100 ตวอยาง โดยตวอยางทเลอกมาทาการศกษาไมมลกษณะ hemolysis และ

lipemia

5.6 ระดบความเขมขนของวตามนด

ผลการวเคราะหระดบความเขมขนของวตามนดในซรมทตรวจวเคราะหไดจากวธ

Chemiluminescence Microparticle Immunoassay (CMIA) ม ค าอ ย ร ะห ว าง 6.4 – 51.6 ng/ml ม

คาเฉลย 27.66 (±9.51) ng/ml และวธ High Performance Liquid Chromatography (HPLC) มคาอย

ระหวาง 7.7 – 46.1 ng/ml มคาเฉลย 27.50 (±7.81) ng/ml

5.7 ความสมพนธของระดบความเขมขนของวตามนดระหวางวธ CMIA และ HPLC

ผลการศกษาความสมพนธของระดบความเขมขนของวตามนด (25 hydroxyvitamin D)

ในซรมทตรวจวเคราะหระหวางวธ CMIA และ HPLC โดยการสรางแผนภาพการกระจาย (Scatter

Diagram) พบวามความสมพนธเชงเสนตรงในทศทางเดยวกนระดบสง โดยมคาสมประสทธ

สหสมพนธ (r) เทากบ 0.937 แสดงในภาพท 3 และระดบความเขมขนของวตามนดของวธ CMIA

และ HPLC พบวาไมแตกตางกนอยางมนยสาคญทางสถตท (p>0.05)

14

ภาพท 3 แผนภาพการกระจาย (Scatter Diagram ) แสดงความสมพนธของความเขมขน

ของวตามนดระหวางวธ CMIA และ HPLC

ระดบวตามนดในซรมตรวจวเคราะหดวยวธ HPLC (ng/ml)

ระดบ

วตามนด

ในซร

มตรวจวเคร

าะหด

วยวธ

CM

IA (n

g/ml)

15

บทท 5

สรปผลและอภปรายผลการวจย

5.1 สรปและอภปรายผลการวจย

การวเคราะหระดบวตามนดในรางกาย ใชประกอบการวนจฉย และตดตามการรกษาโรค

ทเกยวของกบการขาดวตามนด เชน กลามเนอออนแรง และกระดกพรน การวเคราะหระดบวตามนด

ในซรมดวยวธ High Performance Liquid Chromatography (HPLC) เปนวธมาตรฐาน ทมความถก

และตองแมนยาสง อยางไรกตามกมขนตอนทซบซอน ใชเวลานาน และมคาใชจายสง ดวยเหตน

เครองตรวจวเคราะหอตโนมตใชหลกการ Chemiluminescence Microparticle Immunoassay

(CMIA) ซงมขนตอนทไมซบซอน รวดเรว และมราคาถกกวา จงถกนามาใชในการวเคราะหระดบ

วตามนดในหองปฏบตการทางการแพทย ผลการศกษาความสมพนธของระดบวตามนดในซรม

ระหวางวธ CMIA และวธ HPLC มความสอดคลองกนใหสมพนธเชงเสนตรงในทศทางเดยวกนใน

ระดบสง และระดบความเขมขนของวตามนดทตรวจวเคราะหดวยวธ CMIA และ HPLC ไมมความ

แตกตางกนอยางมนยสาคญทางสถตท (p>0.05) ซงผลการศกษาแสดงใหเหนวาการวเคราะหระดบ

วตามนดดวยวธ CMIA ใหผลสอดคลองกบวธ HPLC แสดงวาการตรวจวเคราะหระดบวตามนดดวย

เครองมอตรวจวเคราะหอตโนมตทใชหลกการ CMIA มความถกตองและแมนยา ไมแตกตางกนกบ

วธ HPLC ซงเปนวธมาตรฐาน ดงนนการตรวจวเคราะหอตโนมตทใชหลกการ CMIA มความถก

ตองแมนยาสามารถใชในการตรวจวเคราะหระดบวตามนดในงานประจาวนสาหรบหองปฏบตการ

ทางการแพทยไดไมแตกตางจากวธมาตราฐาน

16

บรรณานกรม

Barrett, K. E., Brooks, H. L., Boitano, S.,Barman, S. M. (2010). Ganong's Review of Medical Physiology (23nd ed.). Boston: McGraw Hill.

Bischoff-Ferrari, H. A., Giovannucci, E., Willett, W. C., Dietrich, T.,Dawson-Hughes, B. (2006). Estimation of optimal serum concentrations of 25-hydroxyvitamin D for multiple health outcomes. Am J Clin Nutr, 84(1), 18-28.

Brandenburg, V. M., Vervloet, M. G.,Marx, N. (2012). The role of vitamin D in cardiovascular disease: from present evidence to future perspectives. Atherosclerosis, 225(2), 253-263.

Carter, G. D., Jones, J. C.,Berry, J. L. (2007). The anomalous behaviour of exogenous 25-hydroxyvitamin D in competitive binding assays. J Steroid Biochem Mol Biol, 103(3-5), 480-482.

Chailurkit, L. O., Aekplakorn, W.,Ongphiphadhanakul, B. (2011). Regional variation and determinants of vitamin D status in sunshine-abundant Thailand. BMC Public Health, 11, 853.

Chen, H., McCoy, L. F., Schleicher, R. L.,Pfeiffer, C. M. (2008). Measurement of 25-hydroxyvitamin D3 (25OHD3) and 25-hydroxyvitamin D2 (25OHD2) in human serum using liquid chromatography-tandem mass spectrometry and its comparison to a radioimmunoassay method. Clin Chim Acta, 391(1-2), 6-12.

DeLuca, H. F. (2004). Overview of general physiologic features and functions of vitamin D. Am J Clin Nutr, 80(6 Suppl), 1689S-1696S.

Ersfeld, D. L., Rao, D. S., Body, J. J., Sackrison, J. L., Jr., Miller, A. B., Parikh, N., et al. (2004). Analytical and clinical validation of the 25 OH vitamin D assay for the LIAISON automated analyzer. Clin Biochem, 37(10), 867-874.

Hayes, C. E., Nashold, F. E., Spach, K. M.,Pedersen, L. B. (2003). The immunological functions of the vitamin D endocrine system. Cell Mol Biol (Noisy-le-grand), 49(2), 277-300.

Holick, M. F., Biancuzzo, R. M., Chen, T. C., Klein, E. K., Young, A., Bibuld, D., et al. (2008). Vitamin D2 is as effective as vitamin D3 in maintaining circulating concentrations of 25-hydroxyvitamin D. J Clin Endocrinol Metab, 93(3), 677-681.

17

Hollis, B. W., Kamerud, J. Q., Selvaag, S. R., Lorenz, J. D.,Napoli, J. L. (1993). Determination of vitamin D status by radioimmunoassay with an 125I-labeled tracer. Clin Chem, 39(3), 529-533.

Hollis, B. W.,Napoli, J. L. (1985). Improved radioimmunoassay for vitamin D and its use in assessing vitamin D status. Clin Chem, 31(11), 1815-1819.

Hypponen, E., Turner, S., Cumberland, P., Power, C.,Gibb, I. (2007). Serum 25-hydroxyvitamin D measurement in a large population survey with statistical harmonization of assay variation to an international standard. J Clin Endocrinol Metab, 92(12), 4615-4622.

Jones, G. (1978). Assay of vitamins D2 and D3, and 25-hydroxyvitamins D2 and D3 in human plasma by high-performance liquid chromatography. Clin Chem, 24(2), 287-298.

Li, Y. C. (2003). Vitamin D regulation of the renin-angiotensin system. J Cell Biochem, 88(2), 327-331.

Looker, A. C., Dawson-Hughes, B., Calvo, M. S., Gunter, E. W.,Sahyoun, N. R. (2002). Serum 25-hydroxyvitamin D status of adolescents and adults in two seasonal subpopulations from NHANES III. Bone, 30(5), 771-777.

Masuda, S. (1999). [Vitamin D: its chemistry, metabolism and biological functions]. Nihon Rinsho, 57(10), 2230-2235.

Maunsell, Z., Wright, D. J.,Rainbow, S. J. (2005). Routine isotope-dilution liquid chromatography-tandem mass spectrometry assay for simultaneous measurement of the 25-hydroxy metabolites of vitamins D2 and D3. Clin Chem, 51(9), 1683-1690.

Reid, I. R.,Bolland, M. J. (2012). Role of vitamin D deficiency in cardiovascular disease. Heart, 98(8), 609-614.

Roth, H. J., Schmidt-Gayk, H., Weber, H.,Niederau, C. (2008). Accuracy and clinical implications of seven 25-hydroxyvitamin D methods compared with liquid chromatography-tandem mass spectrometry as a reference. Ann Clin Biochem, 45(Pt 2), 153-159.

Skaria, J., Katiyar, B. C., Srivastava, T. P.,Dube, B. (1975). Myopathy and neuropathy associated with osteomalacia. Acta Neurol Scand, 51(1), 37-58.

Steenbock, H. (1924). The Induction of Growth Promoting and Calcifying Properties in a Ration by Exposure to Light. Science, 60(1549), 224-225.

Thibodeau, P. (1996). Anatomy and Physiology (3rd ed.). St.Louis: Mosby.

18

Turpeinen, U., Hohenthal, U.,Stenman, U. H. (2003). Determination of 25-hydroxyvitamin D in serum by HPLC and immunoassay. Clin Chem, 49(9), 1521-1524.

Vieth, R., Bischoff-Ferrari, H., Boucher, B. J., Dawson-Hughes, B., Garland, C. F., Heaney, R. P., et al. (2007). The urgent need to recommend an intake of vitamin D that is effective. Am J Clin Nutr, 85(3), 649-650.

Vogeser, M., Kyriatsoulis, A., Huber, E.,Kobold, U. (2004). Candidate reference method for the quantification of circulating 25-hydroxyvitamin D3 by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Clin Chem, 50(8), 1415-1417.

Wallace, A. M., Gibson, S., de la Hunty, A., Lamberg-Allardt, C.,Ashwell, M. (2010). Measurement of 25-hydroxyvitamin D in the clinical laboratory: current procedures, performance characteristics and limitations. Steroids, 75(7), 477-488.

Wootton, A. M. (2005). Improving the measurement of 25-hydroxyvitamin D. Clin Biochem Rev, 26(1), 33-36.

Yamane, T. (1967). Statistics: An Introductory Analysis (2nd ed.). New York: Harper and Row.

19

ภาคผนวก

20

ภาคผนวก ก

ผลการวเคราะหปรมาณของวตามนด (25 hydroxyvitamin D) ดวยเทคนค CDMA และ HPLC

21

ตารางท 1 แสดงผลการวเคราะหระดบของวตามนด (25 hydroxyvitamin D) ดวยเทคนค CDMA

และ HPLC

หมายเลขตวอยาง ความเขมขนของของวตามนด (ng/ml)

หมายเหต CDMA HPLC

001 24.42 29.70

002 33.81 36.50

003 22.04 23.40

004 29.76 34.10

005 18.52 16.10

006 30.38 33.00

007 24.68 24.20

008 27.81 27.00

009 23.92 26.00

010 22.26 21.00

011 21.92 19.40

012 21.15 19.40

013 28.22 29.40

014 21.90 24.80

015 29.93 26.40

016 31.58 31.90

017 21.39 19.10

018 25.03 24.30

019 35.98 42.20

020 19.28 22.60

22



021 21.94 21.40

022 22.04 19.50

023 27.38 25.00

024 38.98 43.80

025 39.01 33.00

026 7.74 6.40

027 23.48 22.60

028 43.71 47.00

029 33.76 34.10

030 38.79 43.10

031 24.25 22.90

032 38.32 39.50

033 43.47 51.60

034 30.32 37.70

035 14.45 12.90

036 23.94 25.70

037 24.43 27.60

038 14.15 12.20

039 16.24 19.50

040 46.01 51.70

041 35.77 30.50

042 19.01 23.60

23



043 27.60 26.80

044 38.02 39.60

045 18.51 23.30

046 26.01 25.50

047 27.56 26.50

048 30.27 27.00

049 28.91 29.50

050 31.26 32.90

051 34.85 35.20

052 23.28 22.60

053 37.48 44.00

054 7.74 7.30

055 39.63 33.70

056 28.58 33.30

057 33.90 34.00

058 12.09 10.70

059 26.14 24.00

060 25.62 23.40

061 21.13 18.70

062 28.34 19.40

063 23.65 27.10

064 26.94 25.90

24



065 31.30 31.30

066 27.72 30.80

067 28.68 29.00

068 31.31 26.70

069 40.54 49.50

070 18.75 18.20

071 27.84 28.70

072 35.47 35.40

073 22.25 21.60

074 22.68 21.40

075 25.97 24.50

076 26.96 22.20

077 29.99 34.60

078 20.52 15.50

079 34.53 34.60

080 17.93 16.60

081 30.03 28.60

082 26.24 24.30

083 46.11 53.00

084 23.96 22.60

085 36.87 37.70

086 18.92 17.20

25



087 42.34 44.10

088 28.89 28.60

089 20.13 17.10

090 29.78 20.90

091 23.76 22.00

092 26.96 26.10

093 28.18 27.90

094 36.81 40.90

095 29.99 30.60

096 30.15 35.50

097 20.06 18.40

098 23.42 20.80

099 16.43 15.50

100 29.68 21.40

26

ภาคผนวก ข

ผลการวเคราะหทางสถต

27

1. ผลการวเคราะหความสมพนธของระดบความเขมขนของวตามนดในซรมทตรวจวเคราะห

ระหวางวธ CMIA และ HPLC จากโปรแกรม SPSS

Correlations

HPLC CDMA

HPLC Pearson Correlation 1 .937**

Sig. (2-tailed) .000

N 100 100

Bootstrapb Bias 0 -.001

Std. Error 0 .014

95% Confidence Interval Lower 1 .903

Upper 1 .960

CDMA Pearson Correlation .937**1

Sig. (2-tailed) .000

N 100 100

Bootstrapb Bias -.001 0

Std. Error .014 0

95% Confidence Interval Lower .903 1

Upper .960 1

**. Correlation is significant at the 0.01 level (2-tailed).

b. Unless otherwise noted, bootstrap results are based on 1000 bootstrap samples

28

2. ผลการเปรยบระดบความเขมขนของวตามนดในซรมทตรวจวเคราะหระหวางวธ CMIA และ

HPLC ดวย paired t-test จากโปรแกรม SPSS

Paired Samples Statistics

Statistic

Bootstrapa

Bias

Std.

Error

95% Confidence Interval

Lower Upper

Pair 1 HPLC Mean 27.4983 .0414 .7723 26.0314 29.1237

N 100

Std. Deviation 7.81366 -.06956 .54351 6.60370 8.75658

Std. Error Mean .78137

CDMA Mean 27.6600 .0555 .9464 25.9464 29.6513

N 100

Std. Deviation 9.50771 -.09395 .70296 7.99837 10.74519

Std. Error Mean .95077

a. Unless otherwise noted, bootstrap results are based on 1000 bootstrap samples

Paired Samples Test

Paired Differences

t df Sig.

(2-tailed)

Mean

Std.

Deviation

Std. Error

Mean

95% Confidence Interval

of the Difference

Lower Upper

Pair 1 HPLC - CDMA -.16170 3.50603 .35060 -.85737 .53397 -.461 99 .646

29

ภาคผนวก ค

หนงสอแสดงเจตนายนยอมเขารวมการวจย (Consent Form)

30

แบบเอกสารท EF 10_1

เอกสารชแจงขอมลแกผเขารวมโครงการวจย

(Information Sheet)

ชอโครงการ การประเมนคณภาพผลการตรวจวเคราะหระดบวตามนดจากซรมผปวยระหวางวธ

Chemiluminescence Microparticle Immunoassay (CMIA) และวธ High Performance Liquid Chromatography (HPLC)

ชอผรบผดชอบโครงการ

ชอ ทนพ. ชานนท นยจตร

ทอย หองปฎบตการเทคนคการแพทย รพ.ธรรมศาสตรเฉลมพระเกยรต

เบอรโทรศพท (ททางาน) 0-2926-9115 (มอถอ) 08-9925-9210

ไปรษณยอเลกโทรนกส e-mail: [email protected]

ผรวมในโครงการวจย

ชอ ทน.พญ. สลนดา ดามะอ

ทอย หองปฎบตการเทคนคการแพทย รพ.ธรรมศาสตรเฉลมพระเกยรต

เบอรโทรศพท (ททางาน) 0-2926-9115 (มอถอ) 09-8832-0868


ชอ ทนพ. อนรกษ เชอมง

ทอย คณะสหเวชศาสตร มหาวทยาลยธรรมศาสตร

เบอรโทรศพท (ททางาน) 0-2986-9213 ตอ 7262 (มอถอ) 08-0932-4510


31


เรยน ผเขารวมโครงการวจยทกทาน

ทานไดรบเชญใหเขารวมในโครงการวจยนเนองจากทานเปนผเขารบบรการตรวจวเคราะหระดบวตามนด กอนททานจะตดสนใจเขารวมในการศกษาวจยดงกลาว ขอใหทานอานเอกสารฉบบนอยางถถวน เพอใหทานไดทราบถงเหตผลและรายละเอยดของการศกษาวจยในครงน

ทานสามารถขอคาแนะนาในการเขารวมโครงการวจยนจากครอบครว เพอน หรอแพทยประจาตวของทานได ทานมเวลาอยางเพยงพอในการตดสนใจโดยอสระ ถาทานตดสนใจแลววาจะเขารวมในโครงการวจยนขอใหทานลงนามในเอกสารแสดงความยนยอมของโครงการวจยน

เหตทตองทาวจยและเหตผลทตองการศกษาในคน

การตรวจวเคราะหระดบวตามนดจากซรมผปวยเปนการประเมนสภาวะวตามนดในรางกายเพอใชประกอบ การรกษาโรคกลามเนอออนแรง และกระดกพรน รวมถงโรคอนๆ ทเกยวของกบการขาดวตามนด ดงนนการตรวจวเคราะหระดบวตามนดจากซรมผปวยมประสทธภาพสง สงผลตอการประสทธภาพการรกษาโรคเกยวของกบการขาดวตามนดได การวจยครงนเปนการประเมนคณภาพผลการตรวจวเคราะหระดบวตามนดจากซรมผปวยระหวางวธ Chemiluminescence Microparticle Immunoassay (CMIA) ซงเปนวธทโรงพยาบาลธรรมศาสตรใชในการตรวจวเคราะหระดบวตามนด และวธ High Performance Liquid Chromatography (HPLC) ซงเปนวธมาตรฐาน

การตรวจวเคราะหระดบวตามนดในตวอยางทแตกตางกน เชน เมธานอล นานม เปนตน จะใหผลการตรวจวเคราะหทแตกตางกน จงไมสามารถนาตวอยางชนดอนมาใชการประเมนคณภาพผลการตรวจวเคราะหระดบวตามนดจากซรมได ดงนนจงตองใชซรมของผปวยในการศกษาครงน

วตถประสงคของโครงการ

1. เพอศกษาเปรยบเทยบความแตกตางของผลการตรวจวเคราะหวตามนดในซรมระหวางว ธ Chemiluminescence Microparticle Immunoassay (CMIA) แ ล ะ ว ธ High Performance Liquid Chromatography (HPLC) ซงเปนวธมาตรฐาน

2. ประเมนความสอดคลองระหวางผลการตรวจวเคราะห วตามนด ทงสองวธ จานวนผเขารวมในโครงการวจย คอ 100 คน

32


ประโยชนทอาจไดรบ

ทานจะไมไดรบประโยชนโดยตรงจากการเขารวมในการวจยครงน แตผลการศกษาทไดจะทาใหผลการตรวจวเคราะหวตามนดมคณภาพมากขน ซงทาใหสามารถประเมนภาวะของโรคทเกดจากวตามนดไดอยางมประสทธภาพมากยงขน การเขารวมในโครงการวจยนไมทาใหทานมสขภาพทดขน หรอลดความรนแรงของโรคได และไมไดรบรองวาสขภาพของทานจะตองดขนหรอความรนแรงของโรคจะลดลง

ขอปฏบตของทานขณะทรวมในโครงการวจย

โครงการวจยนเปนการประเมนคณภาพผลการตรวจวเคราะหระดบวตามนดจากซรมผปวยระหวางวธ Chemiluminescence Microparticle Immunoassay (CMIA) ซงเปนวธท ใชในการตรวจวเคราะหระดบวตามนดในโรงพยาบาลธรรมศาสตร ไมไดกระทาตอทาน ไมมการสมภาษณทานหรอนดหมายใดๆ นอกเหนอไปจากวนเวลาทอาสาสมครเขามารบบรการตรวจวเคราะหระดบวตามนด ในการขอคายนยอมเขารวมโครงการวจย เพอขออนญาตใชซรมทเหลอจากการตรวจวเคราะหวตามนดแลว และขออนญาตใชผลการตรวจวเคราะหระดบวตามนดของอาสาสมคร ซงเปนชวงทอาสาสมครวางหลงจากการเจาะเลอด และนงรอเขาพบแพทย

ความเสยงหรอความไมสะดวกสบายของอาสาสมครทอาจไดรบ

ผทาการวจยขอชแจงถงความเสยงและความไมสบายทอาจเกดขนดงน คอ ความเสยงตอการเปดเผยขอมลอนนาไปสการเปดเผยตวของทาน เนองจากการใชขอมลผลการตรวจวเคราะหวตามนด และขอมลจากตวอยางซรม อยางไรกตามผวจยไดมมาตราการการปกปองรกษาขอมลความลบของอาสาสมคร การเขารวมและการสนสดการเขารวมโครงการวจย

การเขารวมในโครงการวจยครงนเปนไปโดยความสมครใจ หากทานไมสมครใจจะเขารวมการวจยแลวทานจะไดรบการดแลรกษาตามปกต หากทานสมครใจเขารวมการศกษา ทานสามารถถอนตวไดตลอดเวลา ซงจะไมมผลตอสทธใดๆ ในการรบการรกษาพยาบาลทจะเกดขนตามมาในโอกาสตอไปทงในปจจบนและอนาคต ณ สถานพยาบาลใด ๆ ของทานแตอยางใด หลงจากถอนตวออกจากโครงการวจย ผวจยจะทาลายเอกสารและ/หรอ ตวอยางทใชตรวจสอบทงหมดทสามารถสบคนถงตวขาพเจาได

33


คาตอบแทน

การวจยครงน เปนการศกษาประเมนคณภาพผลตรวจวเคราะหวตามนดของหองปฏบตการเทคนคการแพทย โดยใชซรมของผปวยทเหลอจากการตรวจวเคราะหวตามนดแลว ไมไดกระทาตออาสาสมคร ไมมการสมภาษณ หรอนดพบเจออาสาสมคร ดงนนในการศกษาครงนจงไมมการจายคาชดเชยเปนคาเดนทางหรอคาเสยเวลาใหกบอาสาสมครทเขารวมโครงการ

การปกปองรกษาขอมลความลบของอาสาสมคร

ผวจยจะนาซรมมาเปลยนหลอดทดลองใหม และกาหนดตวเลข 3 หลก เปนตวแทนชอของทาน ไมมการระบชอ หรอ HN หรอขอมลอนใดทแสดงถงตวของทาน ผวจยจะเกบขอมลของทานทไดเขารวมในการศกษาครงนลงในแบบบนทกขอมล โดยใชตวเลข 3 หลกทกาหนดขนใหมแทน และจะไมมการระบชอ หรอ HN หรอขอมลอนใดทแสดงถงตวทานลงในแบบบนทกขอมล

ขอมลทรวบรวมไดทงหมด จะถกบนทกในระบบคอมพวเตอร และขอมลทถกบนทกเรยบรอยแลวจะถกจากดสทธแกบคคลในการเขาถงขอมล โดยจะตองมรหสในการเขาถงขอมล ทสามารถระบบคคลทเขาถงขอมลนนได

แบบบนทกขอมลของอาสาสมครจะไดรบการเกบรกษาอยางระมดระวง โดยจะถกบรรจไวในซองเอกสารปดผนก และเกบไวในตเกบเอกสารทมการปดและใสกญแจอยางแนนหนา

ขอมลทอาจนาไปสการเปดเผยตวทาน จะไดรบการปกปดและจะไมเปดเผยแกสาธารณชน ในกรณทผลการวจยไดรบการตพมพ ชอและทอยของทานจะตองไดรบการปกปดอยเสมอ โดยจะใชเฉพาะรหสตวอยางของทาน อยางไรกดจะมบคคลบางกลมเชน ผกากบดแลการวจย ผตรวจสอบ คณะกรรมการจรยธรรมการวจยในคน จะไดรบอนญาตใหเขาถงขอมลโดยตรงจากเวชระเบยนหรอเอกสารอน ๆ ทเกยวของเพอการตรวจสอบขนตอนการวจยและ/หรอขอมลในการวจยโดยไมละเมดการรกษาความลบของทาน ภายใตขอบเขตทกฎหมายบญญตและกฏระเบยบ ตามททานหรอตวแทน (ทไดรบการยอมรบตามกฎหมาย) ไดลงนามในใบยนยอมทเปนลายลกษณอกษร หากทานตองการยกเลกการใหสทธดงกลาว ทานสามารถแจง หรอเขยนบนทกขอยกเลกการใหคายนยอม โดยสงไปท ทนพ. ชานนท นยจตร ทอย หองปฏบตการเทคนคการแพทย รพ.ธรรมศาสตรเฉลมพระเกยรต เลขท 99 ตาบลคลองหนง อาเภอคลองสอง จงหวดปทมธาน 12121

จากการลงนามยนยอมของทานแพทยผทาวจยสามารถบอกรายละเอยดของทานทเกยวกบการเขารวมโครงการวจยนใหแกแพทยผรกษาทานได

34


การจดการกบตวอยางชวภาพทเหลอ

ซรมทไดจากอาสาสมครจะถกทาลายตามวธมาตรฐานทนททเสรจสนการวจย

สทธของผเขารวมในโครงการวจย

ในฐานะททานเปนผเขารวมในโครงการวจย ทานจะมสทธดงตอไปน

1. ทานจะไดรบทราบถงลกษณะและวตถประสงคของการวจยในครงน 2. ทานจะไดรบการอธบายเกยวกบระเบยบวธการของการวจยทใชในการวจยครงน 3. ทานจะไดรบการอธบายถงความเสยงทจะไดรบจากการวจย 4. ทานจะไดรบการอธบายถงประโยชนททานอาจจะไดรบจากการวจย 5. ทานจะมโอกาสไดซกถามเกยวกบงานวจยหรอขนตอนทเกยวของกบงานวจย 6. ทานจะไดรบทราบวาการยนยอมเขารวมในโครงการวจยน ทานสามารถขอถอนตวจาก

โครงการเมอไรกได โดยผเขารวมในโครงการวจยสามารถขอถอนตวจากโครงการโดยไมไดรบผลกระทบใด ๆ ทงสน

7. ทานจะไดรบสาเนาเอกสารขอมลคาอธบายสาหรบผเขารวมในโครงการวจยและเอกสารใบยนยอมทมทงลายเซนและวนท

8. ทานมสทธในการตดสนใจวาจะเขารวมในโครงการวจยหรอไมกได โดยปราศจากการใชอทธพลบงคบขมข หรอการหลอกลวง

โครงการวจยนไดรบความเหนชอบจากคณะอนกรรมการจรยธรรมการวจยในคนมหาวทยาลย ธรรมศาสตรชดท 2 หากทานไมไดรบการรกษาพยาบาลหรอการชดเชยอนควรตอ การบาดเจบหรอเจบปวยทเกดขนโดยตรงจากการวจย หรอทานไมไดรบการปฏบตตามทปรากฏในเอกสารขอมลคา อธบายสาหรบผเขารวมในการวจย ทานสามารถรองเรยนไดทสานกงานคณะอน กรรมการ จรยธรรมการวจยในคน มหาวทยาลยธรรมศาสตร ชดท 2 งานวางแผนและบรหารงานวจย กองบรหารการวจย อาคารสานกงานอธการบด ชน 3 โทรศพท 0-2564-4440-79 ตอ 1804 โทรสาร 0-2564-3151

35


หนงสอแสดงเจตนายนยอมเขารวมการวจย ( Consent Form )

โครงการวจยเรอง การประเมนคณภาพผลการตรวจวเคราะหระดบวตามนดจากซรมผปวยระหวางวธ Chemiluminescence Microparticle Immunoassay ( CMIA) แ ล ะ ว ธ High Performance Liquid Chromatography (HPLC) วนทใหคายนยอม วนท………………เดอน…………………พ.ศ……………… ขาพเจา (นาย/นาง/นางสาว)...................................................................................ขอทาหนงสอนไวตอหนาหวหนาโครงการเพอเปนหลกฐานแสดงวา ขอ 1. กอนลงนามในหนงสอแสดงเจตนายนยอมเขารวมการวจยน ขาพเจาไดรบการอธบายจากผวจยใหทราบถงวตถประสงคของการวจย กจกรรมการวจย ความเสยง รวมทงประโยชนทอาจเกดขนจากการวจยอยางละเอยด และมความเขาใจดแลว ขอ 2 ผวจยรบรองวาจะตอบคาถามตาง ๆ ดวยความเตมใจ ไมปดบง ซอนเรน จนขาพเจาพอใจ ขอ 3 ขาพเจาเขารวมโครงการวจยนโดยสมครใจ และขาพเจามสทธทจะบอกเลกการเขารวมในโครงการวจยนเมอใดกได และการบอกเลกการเขารวมวจยนจะไมมผลกระทบตอสทธใด ๆ ในการรบการรกษาพยาบาล ณ สถานพยาบาลใด ๆ ทขาพเจาจะพงไดรบตอไป ขอ 4 ผวจยรบรองวา จะเกบขอมลของตวขาพเจาเปนความลบ และจะเปดเผยไดเฉพาะในรปทเปนสรปผลการวจย การเปดเผยขอมลเกยวกบตวขาพเจาตอหนวยงานตาง ๆ ทเกยวของ กระทาไดเฉพาะกรณจาเปนดวยเหตผลทางวชาการเทานน ขอ 5 ผวจยรบรองวา หากมขอมลเพมเตมทสงผลกระทบตอการวจย จะแจงใหขาพเจาทราบทนทโดยไมปดบง ซอนเรน ขาพเจาอานขอความขางตนแลวมความเขาใจดทกประการ และลงนามในใบยนยอมนดวยความเตมใจ

ลงนาม……………………………..……………ความยนยอม (...................................................) …..………./………..……../…………..

ลงนาม……………………..……………………หวหนาโครงการวจย (....................................................) …..………./………..……../…………..

ลงนาม………………..……………………พยาน ลงนาม………………..……………………พยาน (..........................................) (............................................) …………./……………../………….. …………./……………../…………..

36


ในกรณทผทยนยอมตนใหทาการวจยไมสามารถอานและเขยนหนงสอได จะตองไดรบการยนยอมในขณะทยงมสตสมปชญญะ และระบขอความไวตามน

ขาพเจาไมสามารอานหนงสอได แตผวจยไดอานขอความในเอกสารชแจงการวจยใหแกขาพเจาฟงจนเขาใจดแลว ขาพเจาจงลงนาม หรอประทบลายนวหวแมมอของขาพเจาในใบยนยอมนดวยความเตมใจ

ลงนาม / ประทบลายนวหวแมมอ…………………..………………………ผยนยอม (....................................................) …..………./………..……../………….. ลงนาม……………………..……………………หวหนาโครงการวจย (....................................................) …..………./………..……../…………..

ลงนาม………………..……………………พยาน ลงนาม………………..……………………พยาน (..........................................) (............................................) …………./……………../………….. …………./……………../…………..

37

ประวตนกวจย

โรงพยาบาลธรรมศาสตรเฉลมพระเกยรต

ชานนท นยจตร และ อนรกษ เชอมง. การประเมนฤทธตานอนมลอสระ สารประกอบรวมฟนอลและนโคตนของสมนไพรไทย 15 ชนด. วารสารวทยาศาสตรและเทคโนโลย 2559; 24(2): 351-361

1. ชอ - นามสกล

1.1 ภาษาไทย นายชานนท นยจตร

1.2 ภาษาองกฤษ MR. Chanon Naijitra

2. ตาแหนง นกเทคนคการแพทย

3. สงกดหนวยงาน หองปฎบตการเทคนคการแพทย


4. ทอยทตดตอได

หองปฏบตการเทคนคการแพทย โรงพยาบาลธรรมศาสตรเฉลมพระเกยรต

บานเลขท 95 หมท 8 ถนน พหลโยธน

แขวง/ตาบล คลองหนง เขต/อาเภอ คลองหลวง

จงหวด ปทมธาน รหสไปรษณย 12120

โทรศพท 0-2926-9115 โทรสาร -

โทรศพทมอถอ 08-9925-9210 อเมล [email protected]

5. วฒการศกษา

พ.ศ. 2547

วท.บ. (เทคนคการแพทย) จากมหาวทยาลยธรรมศาสตร

6. สาขาวชาทเชยวชาญ เคมคลนก, ภมคมกนวทยาคลนก

7. ผลงานวจยทผานมา

38




ชานนท นยจตร และอนรกษ เชอมง. การประเมนฤทธตานอนมลอสระ สารประกอบรวมฟนอลและ

นโคตนของสมนไพรไทย 15 ชนด. วารสารวทยาศาสตรและเทคโนโลย 2559; 24(2): 351-361

Phompradit P, Muhamad P, Cheoymang A and Na-Bangchang K. Preliminary investigation of

the contribution of CYP2A6, CYP2B6, and UGT1A9 polymorphisms on artesunate-

mefloquine treatment response in Burmese patients with Plasmodium falciparum malaria.

Am J Trop Med Hyg. 2014 Aug;91(2):361-6.


1.1 ภาษาไทย นายอนรกษ เชอมง

1.2 ภาษาองกฤษ Mr Anurak Cheoymang

2. ตาแหนง นกวทยาศาสตร

3. สงกดหนวยงาน คณะสหเวชศาสตร มหาวทยาลยธรรมศาสตร


บานเลขท 979 ถนน มาเจรญ

แขวง/ตาบล หนองแขม เขต/อาเภอ หนองแขม

จงหวด กรงเทพมหานคร รหสไปรษณย 10160

โทรศพท 028149168 โทรสาร -

โทรศพทมอถอ 0809324501 อเมล [email protected]


พ.ศ. 2547

พ.ศ. 2558

วท.บ. (เทคนคการแพทย) จากมหาวทยาลยธรรมศาสตร

ส.ม. (สาธารณสข) จากมหาวทยาลยจฬาลงกรณ

6. สาขาวชาทเชยวชาญ เภสชวทยา ชววทยาโมเลกล Bio-Analysis

39

Choemunng A and Na-Bangchang K. An alternative liquid chromatography-mass spectrometric

method for the determination of azithromycin in human plasma and its application to

pharmacokinetic study. Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies 2010;

33:1516–1528.

Anurak Cheomung and Kesara Na-Bangchang. HPLC with ultraviolet detection for the

determination of chloroquine and desethylchloroquine in whole blood and finger-prick

capillary blood dried on filter paper. J Pharm Biomed Anal. 2011 15;55 (5):1031-40

Roongnapa Apinan, Anurak Choemung and Kesara Na-Bangchang. A Sensitive HPLC-ESI-

MS-MS Method for the Determination of Cotinine in Urine. Journal of Chromatographic

Science. 48 (2010)

Anurak Cheoymang and Kesara Na-Bangchang. A high-throughput colorimetric-based bioassay

method for determination of fosmidomycin in plasma and urine and application for

pharmacokinetic study. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 61 (2010)

346–3

8. การไดรบรางวลทางดานวชาการ

1. รางวลผลงานวจยดมาก สาขาวทยาศาสตรเทคโนโลย ประจาป 2550

เรอง “Bioassay for determination of fosmidomycin in plasma and urine: Application for

pharmacokinetic dose optimization”

จากฝายวจย มหาวทยาลยธรรมศาสตร

2. รางวลชมเชย การนาเสนอผลงานประเภทโปสเตอร

เรอง “Antimalarial activity and cytotoxicity of Thai medicinal plants and herbal formulations”

จากงานประชมวชาการ Joint International Tropical Medicine Meeting 2011

3. นกวจยดเดนระดบคณะ ประเภทนกวจย หรอผปฏบตงานทเกยวของกบการวจย ประจาป 2555

จาก มหาวทยาลยธรรมศาสตร

40




-


1.1 ภาษาไทย นางสาวสลนดา ดามะอ

1.2 ภาษาองกฤษ Miss. Sulinda Dana-U

2. ตาแหนง นกเทคนคการแพทย

3. สงกดหนวยงาน หองปฎบตการเทคนคการแพทย



หองปฏบตการเทคนคการแพทย โรงพยาบาลธรรมศาสตรเฉลมพระเกยรต

บานเลขท 95 หมท 8 ถนน พหลโยธน

แขวง/ตาบล คลองหนง เขต/อาเภอ คลองหลวง

จงหวด ปทมธาน รหสไปรษณย 12120

โทรศพท 0-2926-9115 โทรสาร -

โทรศพทมอถอ 09-8832-0868 อเมล [email protected]


พ.ศ. 2555

วท.บ (เทคนคการแพทย) จากมหาวทยาลยธรรมศาสตร

6. สาขาวชาทเชยวชาญ เคมคลนก, ภมคมกนวทยาคลนก

chanon naijitra · 2018-04-20 · 2.1...

Documents