ELISA LABORATORIO CLÍNICOMEDICINA HUMANA

Recognise and bind to molecules (antigens) on foreign particles, marking them for destruction by T-lymphocytes.

Each antigen may generate several antibodies for different sites (epitopes) on antigen.

Antibodies Proteins secreted by B-lymphocytes (type of white blood cell), in vertebrates.

IgG molecule

Fab fragments

Fc fragments

21/03/2011 2Felix Apac Villanueva

What is ELISA? Technique used to detect (assay) specific molecules

(e.g. proteins & carbohydrates) in samples.

Immunological technique: uses antibodies/antigens.

Quantitative/Qualitative.

Very sensitive.

Commonly used in medicine and scientific research.

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What is it used for?

• Measure antibody levels (allergies, vaccines)• Detect viruses (hepatitis, HIV, venereal

diseases)• Detect hormonal changes (pregnancy)• Detect circulatory inflammatory markers

(cytokines)

21/03/2011 4Felix Apac Villanueva

Basic steps of ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay

1. Antigen of interest is absorbed on to plastic surface (‘sorbent’).2. Antigen is recognised by specific antibody (‘immuno’).3. This antibody is recognised by second antibody (‘immuno’)

which has enzyme attached (‘enzyme-linked’).4. Substrate reacts with enzyme to produce product, usually

coloured.

Coloured product = measure (assay) of antigen present

Espectrofotómetro o un colorímetro

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ELISA• Los métodos de ELISA dependiendo de la

actividad enzimática se dividen en dos tipos:

Competitivos

No competitivos 21/03/2011 6Felix Apac Villanueva

ELISA• ELISA COMPETITIVO:

En este método, el anticuerpo de la muestra va a competir con el conjugado por un número limitado de sitios de unión del antígeno. Habrá ausencia de color en una muestra positiva debido a que el sustrato no encontrará a la enzima porque el conjugado ha sido desplazado por el anticuerpo presente en la muestra.

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ELISA• ELISA NO COMPETITIVO: Consiste en enfrentar la muestra con el

antígeno o anticuerpo que está en la fase sólida. Si una muestra es positiva se formará el complejo antígeno-anticuerpo y al agregar el conjugado reaccionará con el respectivo sustrato desarrollando color.

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ELISA• Dentro de los no competitivos tenemos:

Directos •que detectan antígenos .

Indirectos •que detectan anticuerpos.

Sandwich •Doble (DAS).•Heterólogo (HADAS).

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ELISA Kits for AIV Ab Detection

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PASOS GENERALES DE UN ELISA

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PASOS GENERALES DE UN ELISA

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Gracias ... VOLVERA.

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