flavonoid dalam krokot

8/16/2019 flavonoid dalam krokot

1/140

SKRIPSI

IDENTIFIKASI SENYAWA FLAVONOID PADA SAYURAN

INDIGENOUS JAWA BARAT

Oleh

RATNA BATARI

F24103120

2007

FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

BOGOR


2/140



SKRIPSI

Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN

pada Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan

Fakultas Teknologi PertanianInstitut Pertanian Bogor

Oleh :

RATNA BATARI

F24103120

2007



BOGOR


3/140





SKRIPSI

Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN

pada Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan

Fakultas Teknologi Pertanian

Institut Pertanian Bogor

Oleh :

RATNA BATARI

F24103120

Dilahirkan pada tanggal 9 Januari 1985

Di Jakarta

Tanggal lulus : Agustus 2007

Menyetujui:

Bogor, Agustus 2007

Dr. Ir. Nuri Andarwulan, MSi. Prof. Dr. Ir. C. Hanny Wijaya, MAgr.

Dosen Pembimbing I Dosen Pembimbing II

Mengetahui,

Dr. Ir. Dahrul Syah, Msc.

Ketua Departemen ITP


4/140

RIWAYAT HIDUP PENULIS

Penulis dilahirkan di Jakarta, 9 Januari 1985 dan memiliki

nama lengkap Ratna Batari. Penulis merupakan anak kedua

dari tiga bersaudara. Penulis menempuh pendidikannya di TK

Kristen 7 BPK Penabur, SD Kristen 3 BPK Penabur, SLTP

Kristen 3 BPK Penabur, dan SMU Kristen 3 BPK Penabur,

Jakarta. Melalui jalur masuk SPMB, penulis menempuh

pendidikan terakhirnya di Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan, Fakultas

Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor.

Selama melakukan studi di Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan,

penulis juga aktif dalam berbagai kegiatan dan organisasi. Penulis pernahmenjabat sebagai sekretaris di Persekutuan PMK dan KEMAKI Fakultas

Teknologi Pertanian pada masa jabatan 2004-2005, dan sebagai bendahara pada

masa jabatan 2005-2006. Penulis juga berperan serta sebagai panitia dalam

kegiatan Konferensi HMPPI (Himpunan Mahasiswa Peduli Pangan Indonesia),

BAUR 2005, dan LCTIP (Lomba Cepat Tepat Ilmu Pangan) 2005. Pada tahun

2005, penulis ikut ambil bagian dalam seminar dan pelatihan HACCP yang

diselenggarakan oleh Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan, IPB dan BPOM-

RI. Penulis pernah menjadi asisten praktikum Analisis Pangan pada periode

Januari-Juni 2007.

Penulis menyelesaikan tugas akhirnya untuk memperoleh gelar Sarjana

Teknologi Pertanian pada Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan, dengan

melakukan penelitian yang berjudul ”Identifikasi Senyawa Flavonoid pada

Sayuran Indigenous Jawa Barat”. Penelitian ini dilakukan mulai bulan Maret 2007

sampai dengan bulan Juli 2007. Penelitian ini bertempat di laboratorium ITP dan

laboratorium Seafast Center, IPB.


5/140

Ratna Batari. F24103120. Identifikasi Senyawa Flavonoid pada Sayuran

Indigenous Jawa Barat. Di bawah bimbingan Dr. Ir. Nuri Andarwulan, MSi.

dan Prof. Dr. Ir. C. Hanny Wijaya, MAgr. (2007)

RINGKASAN

Indonesia memiliki tanaman lokal yang sangat berlimpah. Tanaman lokal

di Indonesia banyak yang belum terjamah untuk dikonsumsi sebagai bahan

pangan yang kaya akan zat-zat yang bermanfaat bagi tubuh dan kesehatan. Jenis

sayuran lokal tersebutlah yang dikenal dengan sayuran indigenous. Salah satu

daerah di Indonesia yang merupakan penghasil sayuran indigenous yang cukup

berperan adalah daerah Jawa Barat. Komponen fenolik dalam bahan pangan

memiliki peran yang sangat baik, yang salah satunya adalah sebagai antioksidan.

Sayur-sayuran banyak mengandung senyawa fenolik yang berupa flavonoid.

Penelitian-penelitian terdahulu telah membuktikan bahwa flavonoid dapat

berfungsi sebagai antioksidan, antimutagenik, dan antikarsinogenik. Oleh karena

itu, pemanfaatan sayuran indigenous sebagai sumber flavonoid akan dapatmeningkatkan nilai tambah tanaman-tanaman tersebut.

Penelitian ini bertujuan mengidentifikasi senyawa flavonoid yang berupa

flavonol dan flavone pada beberapa sayuran indigenous daerah Jawa Barat.

Tanaman yang digunakan dalam penelitian ini adalah kenikir (Cosmos caudatus

H.B.K.), beluntas (Pluchea indica Less.), mangkokan (Nothopanax scutellarium),

kecombrang ( Nicolaia speciosa Horan), kemangi (Ocimum sanctum Linn.), katuk

(Sauropus androgynus), kedondong cina (Polyscias pinnata), antanan (Centella

asiatica), pohpohan (Pilea trinervia), daun ginseng (Talinum paniculatum), dan

krokot (Portulaca oleracea). Pembuatan ekstrak flavonoid dari sayuran dilakukan

dengan menggunakan campuran pelarut air dan metanol. Selain itu, dilakukan

pula pembuatan kurva standar flavonoid yang digunakan sebagai acuan dalam

penentuan komponen tersebut pada sampel. Standar yang digunakan adalah

quercetin, kaempferol, myricetin, apigenin, dan luteolin. Analisis yang dilakukan

yaitu analisis kadar air, analisis total fenol, dan deteksi flavonoid dengan

menggunakan HPLC column C-18 phase; Develosil ODS-UG-3.

Berdasarkan hasil penelitian, diperoleh data bahwa kadar air sayuran

indigenous berkisar antara 82%-93%. Total fenol (per 100 gram berat kering)

yang terbesar terdapat pada daun kenikir (1225.88 mg) dan terkecil pada krokot

(447.91 mg). Total flavonol dan flavone yang terdapat di dalam sayuran-sayuran

yang digunakan sangatlah bervariasi. Jumlah flavonoid (per 100 gram berat

kering) yang terbanyak ada pada daun katuk, yaitu sebesar 831.70 mg. Kandungan

quercetin yang terbanyak ada pada kenikir (413.57 mg). Krokot merupakan

senyawa yang paling sedikit mengandung quercetin (4.05 mg), dan hanyakomponen inilah yang terdeteksi dari krokot. Senyawa myricetin hanya terdapat

pada sayuran beluntas (11.11 mg) dan antanan (1.66 mg), sedangkan senyawa

luteolin hanya ada pada daun kemangi (20.49 mg) dan daun pohpohan (3.16 mg).

Apigenin hanya terdeteksi pada daun kemangi, yaitu sebanyak 7.12 mg. Semua

sampel, kecuali kecombrang dan krokot, mengandung senyawa kaempferol.

Jumlah kaempferol terbesar ditemukan pada daun katuk (805.48 mg), yang

jumlahnya sangat jauh lebih banyak dibandingkan sampel lainnya.


6/140

i

KATA PENGANTAR

Puji Syukur kepada Tuhan Yesus Kristus karena atas berkat-Nya lah

skripsi ini dapat saya selesaikan. Selama mengerjakan tugas akhir ini, penulis

dibantu oleh banyak pihak, oleh karena itu penulis mengucapkan terima kasih

kepada :

1. Dr. Ir. Nuri Andarwulan, MSi. selaku Dosen Pembimbing Akademik

sekaligus Dosen Pembimbing Skripsi. Terima kasih atas bimbingan,

masukan, dorongan, dan saran Ibu selama ini.

2. Prof. Dr. Ir. C. Hanny Wijaya, MAgr. selaku Dosen Pembimbing II.

Terima kasih atas bimbingan, masukan, dorongan, dan saran Ibu selama

saya menyelesaikan tugas akhir saya.3.

Dr. Ir. Endang Prangdimurti, MSi. selaku dosen penguji. Terima kasih atas

kesediaan Ibu sebagai penguji.

4. My family : Mama, Ci Indra, Brian, dan Diana. Terima kasih telah

memberikan doa, semangat, dan dukungannya.

5. Ci Ingrid, yang telah sangat banyak mengajariku banyak hal dalam

mengerjakan dan menyelesaikan penelitianku.

6. Sahabat-sahabatku : 6 Sense (Albo, CK, Mercon, Dina, Titi), JSMP (Olla,

Bebe, Nat2, Pau2, Indi, Dei, Betsy, Fani), terima kasih atas semangat dan

dukungan kalian.

7.

Teman-teman satu bimbingan Bu Nuri : Olla, Dion, dan Ade. Semangat

yah buat jeruk-jeruknya. Terima kasih atas dukungan dan kesediaan kalian

yang selalu mau mendengarkan keluh kesahku. Terima kasih juga buat

Papang, atas pemberian sampel-sampelnya. Auu, Lia, Anca, dan teman-

teman ITP 42, terima kasih atas dukungan dan semangatnya.

8.

Teman-teman satu bimbingan Bu Hanny : Bebe, Eko, Dei, Tuti, teman-

teman ITP 39, 41 dan 42. Terima kasih atas semangat dan dukungannya

selama ini. Terima kasih untuk sebuah perkumpulan bimbingan yang

menyenangkan.

9. Eko, HanSib, Nene, Prita, terima kasih karena kalian telah sangat banyak

membantuku selama waktu-waktu menjelang dan setelah ujian skripsiku.


7/140

ii

10. Teman-teman ITP 40 : Jeng2 (terima kasih atas pinjaman laptopnya), Aji,

Rika, Tya, Agnes, Anas, Meiko, Agus, Andal, Steph, Babe, Martin,

Wayan, Rina, Tathan, Arie, Adiput, Adie MR, Mardi, Hendy, Nooi,

Idham, Lasty, dan semua teman-teman yang tidak dapat disebutkan satu

persatu. Terima kasih untuk semua dukungan, semangat, dan persahabatan

selama 4 tahun ini.

11. Teman-teman ITP 39, ITP 41, dan ITP 42, serta Fajar, Yeye, dan Fiona.

Terima kasih untuk semua dukungan dan semangatnya.

12. Teman-teman di Perwira 52 : Chris, Echie, Ribka, Kezhia, Yola, Lele, dan

yang lainnya. Terima kasih atas semangat, dukungan, dan kebersamaan

yang indah.

13.

Pak Soenar, Mba Nani, Mba Desi, Mba Nia, dan Mba Irin. Terima kasihtelah membantu saya dalam mengajari tentang HPLC.

14.

Para teknisi di Laboratorium ITP : Pak Sobirin, Pak Wahid, Pak Rojak,

Mba Darsih, dan teknisi lainnya yang telah membantu saya dalam

menyelesaikan penelitian saya.

15. Para pekerja di Seafast Center : Pak Ijul, Ibu Tri Susilowati, Ibu Tri

Haryati, Pak Karna, Pak Denny, Ibu Ani, Pak Taufik, Mba Ari, dan

lainnya. Terima kasih telah membantu saya dalam menyelesaikan

penelitian saya.

16. Semua pihak yang telah membantu yang tidak dapat disebutkan satu-

persatu.

Semoga skripsi ini bermanfaat bagi setiap pembacanya. Penulis memohon

maaf bila ada kata-kata dan hal-hal yang kurang berkenan.

Bogor, Agustus 2007

Penulis


8/140

iii

DAFTAR ISI

KATA PENGANTAR ............................................................................................. i

DAFTAR ISI .......................................................................................................... iii

DAFTAR TABEL ................................................................................................... v

DAFTAR GAMBAR ............................................................................................. vi

DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................ viii

I. PENDAHULUAN ............................................................................................ 1

A. LATAR BELAKANG ................................................................................ 1

B. TUJUAN ..................................................................................................... 3

C. MANFAAT ................................................................................................. 3

II. TINJAUAN PUSTAKA ................................................................................... 4A. SAYURAN INDIGENOUS ........................................................................ 4

B. FLAVONOID ........................................................................................... 26

C. IDENTIFIKASI SENYAWA FLAVONOID ........................................... 30

III. BAHAN DAN METODE ............................................................................... 33

A. BAHAN DAN ALAT ............................................................................... 33

1. Bahan .................................................................................................... 33

2. Alat ........................................................................................................ 33

B. METODE .................................................................................................. 34

1. Persiapan Sampel .................................................................................. 34

2. Analisis Kadar Air ................................................................................ 35

3. Analisis Total Fenol .............................................................................. 36

4. Ekstraksi Senyawa Flavonoid dari Sayuran Indigenous ....................... 37

5. Analisis Flavonoid dengan HPLC ........................................................ 37

IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ...................................................................... 44

A. STANDAR FLAVONOID DAN LIMIT DETEKSI ................................ 44

1. Myricetin ............................................................................................... 44

2. Luteolin ................................................................................................. 45

3. Quercetin ............................................................................................... 46

4. Apigenin ................................................................................................ 58

5. Kaempferol ........................................................................................... 50


9/140

iv

6. Standar Campuran Senyawa Flavonoid ................................................ 52

B. STANDAR ASAM GALAT ..................................................................... 55

C. SENYAWA FLAVONOID PADA SAYURAN INDIGENOUS ............. 56

1. Kenikir .................................................................................................. 62

2. Beluntas ................................................................................................. 65

3. Mangkokan ........................................................................................... 66

4. Kecombrang .......................................................................................... 69

5. Kemangi ................................................................................................ 70

6. Katuk ..................................................................................................... 72

7. Kedondong Cina ................................................................................... 78

8. Antanan ................................................................................................. 79

9. Pohpohan ............................................................................................... 8110. Daun Ginseng ...................................................................................... 85

11. Krokot ................................................................................................. 89

D. SENYAWA YANG BELUM TERIDENTIFIKASI PADA SAYURAN

INDIGENOUS ........................................................................................... 92

V. KESIMPULAN DAN SARAN ........................................................................ 97

A. KESIMPULAN ................................................................................................ 97

B. SARAN ............................................................................................................ 97

DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 98


10/140

v

DAFTAR TABEL

Tabel 1. Komposisi kimia daun kemangi per 100 gram bagian yang dapat

dimakan ................................................................................................ 15

Tabel 2. Komposisi kimia daun katuk per 100 gram bagian yang dapat

dimakan ................................................................................................ 18

Tabel 3. Spesifikasi HPLC ................................................................................... 34

Tabel 4. Limit deteksi myricetin .......................................................................... 45

Tabel 5. Limit deteksi luteolin ............................................................................. 48

Tabel 6. Limit deteksi quercetin .......................................................................... 48

Tabel 7. Limit deteksi apigenin ........................................................................... 50

Tabel 8. Limit deteksi kaempferol ....................................................................... 52

Tabel 9. Hasil perhitungan konsentrasi flavonoid pada sampel dengan

menggunakan kurva standar ................................................................. 58

Tabel 10.Hasil perhitungan konsentrasi flavonoid pada sampel dengan

menggunakan eksternal standar ............................................................ 59

Tabel 11.Rekapitulasi hasil kadar air, total flavonoid, dan total fenol pada

sampel ................................................................................................... 60

Tabel 12. Perbandingan hasil analisis flavonol dan flavone dengan perhitungan

kurva standar campuran dan eksternal standar campuran .................... 61

Tabel 13. Perbandingan luasan area kromatografi ekstrak kenikir ...................... 65

Tabel 14. Perbandingan luasan area kromatografi ekstrak beluntas .................... 66

Tabel 15. Perbandingan luasan area kromatografi ekstrak mangkokan............... 69

Tabel 16. Perbandingan luasan area kromatografi ekstrak kecombrang ............. 70

Tabel 17. Perbandingan luasan area kromatografi ekstrak kemangi ................... 71

Tabel 18. Perbandingan luasan area kromatografi ekstrak katuk ........................ 78

Tabel 19. Perbandingan luasan area kromatografi ekstrak kedondong cina ........ 79

Tabel 20. Perbandingan luasan area kromatografi ekstrak antanan ..................... 81

Tabel 21. Perbandingan luasan area kromatografi ekstrak pohpohan ................. 85

Tabel 22. Perbandingan luasan area kromatografi ekstrak daun ginseng ............ 87

Tabel 23. Perbandingan luasan area kromatografi ekstrak krokot ....................... 90

Tabel 24. Rekapitulasi komponen yang terdeteksi pada sampel dengan

menggunakan HPLC ........................................................................... 95

Tabel 25. Kuantifikasi area komponen unknown pada waktu retensi tertentu..... 96


11/140

vi

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Kenikir (Cosmos caudatus H.B.K) ...................................................... 6

Gambar 2. Beluntas (Pluchea indica Less.) ........................................................... 8

Gambar 3. Mangkokan ( Notophanax scutellarium) ............................................ 10

Gambar 4. Tanaman kecombrang ( Nicolaia speciosa Horan) ............................. 13

Gambar 5. Bunga kecombrang ............................................................................ 13

Gambar 6. Kemangi (Ocimum sanctum Linn.) .................................................... 16

Gambar 7. Katuk (Sauropus androgynus) ........................................................... 18

Gambar 8. Kedondong Cina (Polyscias pinnata) ................................................ 19

Gambar 9. Antanan (Centella asiatica) ............................................................... 21

Gambar 10. Pohpohan (Pilea trinervia) ............................................................... 22Gambar 11. Daun ginseng (Talinum paniculatum) .............................................. 24

Gambar 12. Krokot (Portulaca oleracea) ............................................................ 26

Gambar 13. Struktur kimia flavonol dan flavone yang diidentifikasi.................. 27

Gambar 14. Persiapan sampel .............................................................................. 40

Gambar 15. Prosedur analisis total fenol ............................................................. 41

Gambar 16. Proses pembuatan ekstrak flavonoid dari sayuran indigenous ......... 42

Gambar 17. Pembuatan larutan standar flavonoid ............................................... 43

Gambar 18. Kromatogram standar myricetin ...................................................... 44

Gambar 19. Kurva standar myricetin ................................................................... 45

Gambar 20. Kromatogram standar luteolin.......................................................... 46

Gambar 21. Kurva standar luteolin ...................................................................... 46

Gambar 22. Kromatogram standar quercetin ....................................................... 47

Gambar 23. Kurva standar quercetin ................................................................... 47

Gambar 24. Kromatogram standar apigenin ........................................................ 49

Gambar 25. Kurva standar apigenin .................................................................... 50

Gambar 26. Kromatogram standar kaempferol.................................................... 51

Gambar 27. Kurva standar kaempferol ................................................................ 51

Gambar 28. Kromatogram standar campuran ...................................................... 53

Gambar 29. Kurva standar campuran myricetin .................................................. 54

Gambar 30. Kurva standar campuran luteolin ..................................................... 54


12/140

vii

Gambar 31. Kurva standar campuran quercetin................................................... 54

Gambar 32. Kurva standar campuran apigenin .................................................... 54

Gambar 33. Kurva standar campuran kaempferol ............................................... 55

Gambar 34. Kurva standar asam galat (ulangan 1) .............................................. 55



Gambar 37. Kromatogram ekstrak kenikir .......................................................... 64

Gambar 38. Ko-kromatogram ekstrak kenikir dengan standar campuran ........... 64

Gambar 39. Kromatogram ekstrak beluntas ........................................................ 68

Gambar 40. Ko-kromatogram ekstrak beluntas dengan standar campuran ......... 68

Gambar 41. Kromatogram ekstrak mangkokan ................................................... 73

Gambar 42. Ko-kromatogram ekstrak mangkokan dengan standar campuran .... 73Gambar 43. Kromatogram ekstrak kecombrang .................................................. 74

Gambar 44. Ko-kromatogram ekstrak kecombrang dengan standar campuran ... 74

Gambar 45. Kromatogram ekstrak kemangi ........................................................ 75

Gambar 46. Ko-kromatogram ekstrak kemangi dengan standar campuran ......... 75

Gambar 47. Kromatogram ekstrak katuk ............................................................. 77

Gambar 48. Ko-kromatogram ekstrak katuk dengan standar campuran .............. 77

Gambar 49. Kromatogram ekstrak kedondong cina ............................................ 82

Gambar 50. Ko-kromatogram ekstrak kedondong cina dengan standarcampuran ......................................................................................... 82

Gambar 51. Kromatogram ekstrak antanan ......................................................... 83

Gambar 52. Ko-kromatogram ekstrak antanan dengan standar campuran .......... 83

Gambar 53. Kromatogram ekstrak pohpohan ...................................................... 86

Gambar 54. Ko-kromatogram ekstrak pohpohan dengan standar campuran ....... 86

Gambar 55. Kromatogram ekstrak daun ginseng................................................. 88

Gambar 56. Ko-kromatogram ekstrak daun ginseng dengan standar

campuran ......................................................................................... 88

Gambar 57. Kromatogram ekstrak krokot ........................................................... 91

Gambar 58. Ko-kromatogram ekstrak krokot dengan standar campuran ............ 91


13/140

viii

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Total fenol sayuran indigenous ...................................................... 104

Lampiran 2. Kadar air sayuran indigenous ......................................................... 105

Lampiran 3. Hasil perhitungan jumlah flavonol dan flavone pada sayuran

indigenous dengan menggunakan kurva standar campuran .......... 106

Lampiran 4. Hasil perhitungan jumlah flavonol dan flavone pada sayuran

indigenous dengan menggunakan eksternal standar campuran .... 107


14/140

1

I. PENDAHULUAN

A. LATAR BELAKANG

Indonesia merupakan negara yang kaya akan tanaman-tanaman lokal

yang memiliki potensi yang baik. Tanaman lokal di Indonesia banyak yang

belum terjamah untuk dikonsumsi sebagai bahan pangan yang kaya akan zat-

zat yang bermanfaat bagi tubuh dan kesehatan. Jenis sayuran lokal tersebut

sering disebut dan dikenal dengan sayuran indigenous. Sayuran indigenous

adalah sejenis sayuran, yang walaupun tanaman sayuran itu bukan berasal dari

Indonesia, namun tanaman tersebut sudah beradaptasi dan sudah dikultivasi

atau dimanfaatkan oleh penduduk setempat dari dahulu, sehingga sudah

dianggap sebagai tanaman turun-temurun (Anonim, 2006j).Sayuran sudah lama dikonsumsi oleh masyarakat Indonesia, terutama

masyarakat Jawa Barat. Oleh karena itulah, Jawa Barat menjadi salah satu

daerah di Indonesia penghasil sayuran yang cukup berperan. Berbagai

tanaman indigenous telah dikonsumsi dan secara tradisional ditanam oleh

nenek moyang secara turun temurun, dengan khasiat yang baik bagi tubuh

manusia (Anonim, 2006j). Jenis sayuran yang digunakan pada penelitian ini

adalah sayuran yang telah banyak dikonsumsi oleh masyarakat dan yang

banyak terdapat di daerah Jawa Barat yaitu kenikir (Cosmos caudatus

H.B.K.), beluntas (Pluchea indica Less.), mangkokan ( Nothopanax

scutellarium), kecombrang ( Nicolaia speciosa Horan), kemangi (Ocimum

sanctum Linn.), katuk (Sauropus androgynus), kedondong cina (Polyscias

pinnata), antanan (Centella asiatica), pohpohan (Pilea trinervia), daun

ginseng (Talinum paniculatum), dan krokot (Portulaca oleracea). Bagian

yang dikonsumsi dari tanaman kenikir, beluntas, mangkokan, kemangi, katuk,

kedondong cina, pohpohan, dan daun ginseng adalah bagian daunnya. Lain

halnya dengan krokot, karena selain daunnya, batang tanamannya juga biasa

dikonsumsi. Berbeda lagi dengan kecombrang, karena bagian yang

dikonsumsi dari tanaman ini adalah bunganya. Seluruh bagian tanaman dari

antanan merupakan bagian yang dikonsumsi dari tanaman ini.


15/140

2

Seperti telah diketahui, komponen fenolik dalam bahan pangan

memiliki peran yang sangat baik, yang salah satunya adalah sebagai

antioksidan. Menurut Markham (1989) yang dikutip oleh Hertog et al. (a)

(1992), sayur-sayuran memiliki potensi yang baik dalam kontribusi terhadap

kandungan flavonoidnya. Tumbuh-tumbuhan banyak mengandung senyawa

fenolik yang berupa flavonoid, yang terdistribusi secara luas pada bagian-

bagiannya. Penelitian-penelitian terdahulu telah membuktikan bahwa

flavonoid dapat berfungsi sebagai antioksidan, antimutagenik, dan

antikarsinogenik (Hertog et al. (b), 1992). Oleh karena itu, dengan

diketahuinya kandungan flavonoid pada tanaman-tanaman indigenous

tersebut, diharapkan dapat tercipta peluang untuk meningkatkan nilai tambah

dalam pemanfaatannya.Flavonoid terutama terdiri atas antosianidin, flavonol, flavone,

flavanol, flavanone, dan isoflavon (Spencer et al., 2003). Komponen flavonoid

yang dianalisis pada penelitian kali ini adalah golongan flavonol dan flavone.

Senyawa yang dianalisis dari golongan flavonol terdiri atas quercetin,

kaempferol, dan myricetin, sedangkan dari golongan flavone terdiri atas

apigenin dan luteolin. Pengidentifikasian dibatasi hanya pada kedua golongan

ini, dikarenakan kedua golongan senyawa ini merupakan komponen flavonoid

yang mayoritas (secara kualitatif) terdapat dalam sayuran (Lee, 2000). Selain

itu, kedua golongan senyawa ini merupakan flavonoid yang paling banyak

diteliti dalam studi antikarsinogenesis (Hertog et al. (b), 1992).

Analisis komponen fenolik pada bahan pangan dapat menggunakan

berbagai macam cara, mulai dari cara yang sederhana; seperti uji kolorimetri,

hingga penggunaan instrumen yang canggih dan mutakhir; untuk pemisahan,

penghitungan kuantitas, dan pengkarakterisasian masing-masing komponen.

Berbagai metode kromatografi cair (kromatografi kertas, kromatografi lapis

tipis, kromatografi kolom, dan High Performance Liquid Chromatography)

dapat digunakan untuk menganalisis komponen fenolik (Lee, 2000).

Deteksi komponen-komponen flavonol dan flavone yang terdapat pada

beberapa sayuran indigenous daerah Jawa Barat yang dilakukan pada

penelitian ini adalah dengan menggunakan metode High Performance Liquid


16/140

3

Chromatography (HPLC). Dibandingkan dengan metode kromatografi cair

lainnya, HPLC merupakan metode yang paling mendekati untuk dapat

menyediakan dan memberikan respon yang tepat, baik dalam hal sensitivitas

yang tinggi maupun dalam hal efisiensi pemisahan karena menggunakan

kolom berpartikel kecil yang terbungkus dengan ketat. Selain itu, deteksi

komponen dengan penggunaan metode kromatografi lapis tipis dan

kromatografi kertas, bila dibandingkan dengan menggunakan HPLC,

membutuhkan konsentrasi yang lebih besar. Pada analisis dengan metode

HPLC, tidak ada pembatasan dalam hal volatilitas sampel maupun

derivatisasi, seperti yang diperlukan dalam kromatografi gas (Lee, 2000).

Komponen flavonoid bukan merupakan komponen volatil, oleh karena itu,

analisis yang tepat adalah dengan menggunakan metode HPLC.

B. TUJUAN

Penelitian ini bertujuan mendeteksi kandungan komponen-komponen

flavonoid (flavonol dan flavone) pada beberapa sayuran indigenous daerah

Jawa Barat.

C. MANFAAT

Manfaat penelitian ini adalah mendapatkan data mengenai komposisi

komponen flavonoid (flavonol dan flavone) pada beberapa sayuran indigenous

daerah Jawa Barat sehingga tercipta peluang untuk pemanfaatan lebih lanjut.


17/140

4

II. TINJAUAN PUSTAKA

A. SAYURAN INDIGENOUS

Indonesia terkenal dengan keragaman hayatinya. Keragaman hayati

yang dimiliki Indonesia, seperti banyaknya jenis sayuran-sayuran lokal yang

memiliki khasiat tertentu, sangat potensial untuk pengembangan

penganekaragaman pangan yang bernilai tinggi. Sayuran lokal di Indonesia ini

memiliki potensi yang cukup baik dalam kontribusi terhadap kandungan

flavonoidnya. Jenis sayuran lokal tersebut sering disebut dan dikenal dengan

sayuran indigenous. Sayuran indigenous adalah sejenis sayuran, yang

walaupun tanaman sayuran itu bukan berasal dari Indonesia, namun tanaman

tersebut sudah beradaptasi dan sudah dikultivasi atau dimanfaatkan oleh penduduk setempat dari dahulu, sehingga sudah dianggap sebagai tanaman

turun-temurun (Anonim, 2006j). Bagian dari sayuran-sayuran indigenous yang

digunakan dalam penelitian ini adalah bagian yang biasa dikonsumsi (dapat

berupa batang, daun, bunga, atau seluruh bagian tanaman).

Jenis-jenis sayuran indigenous yang digunakan dalam penelitian ini

adalah sayur-sayuran yang banyak dikonsumsi oleh masyarakat daerah dan

banyak ditemukan tumbuh di daerah Jawa Barat. Sayuran tersebut diantaranya

adalah kenikir, beluntas, mangkokan, kecombrang, kemangi, katuk,

kedondong cina, antanan, pohpohan, daun ginseng, dan krokot.

1. Kenikir (Cosmos caudatus H.B.K)

Klasifikasi dari kenikir adalah :

Kingdom : Plantae

Division : Spermatophyta

Sub Division : Angiospermae

Class : Dicotyledone

Order : Asterales

Family : Asteraceae

Genus : Cosmos

Species : Cosmos caudatus H.B.K


18/140

5

Kenikir merupakan tumbuhan tropika asal Amerika Latin, namun

telah tumbuh menyebar dan mudah didapati di Florida, Amerika Serikat,

Malaysia, serta negara-negara di Asia Tenggara, termasuk Indonesia

(Anonim, 2007i). Kenikir merupakan tanaman perdu dengan tinggi sekitar

75-100 cm. Tanaman kenikir dapat dilihat seperti pada Gambar 1.

Ciri-ciri daunnya adalah majemuk, bersilang berhadapan, berbagi

menyirip, ujung runcing, tepi rata, panjang 15-25 cm, dan berwarna hijau.

Bagian tanaman yang biasa dikonsumsi adalah daun mudanya. Daun

sayuran kenikir memiliki kandungan saponin, flavonoid, dan polifenol.

Khasiat daunnya adalah sebagai penambah nafsu makan, obat lemah

lambung, dan untuk mengusir serangga (Anonim, 2006b). Kenikir telah

digunakan secara tradisional untuk meningkatkan sirkulasi darah(Shui et al., 2005).

Hasil penelitian Ragasa et al. (1997), menunjukkan bahwa daun

kenikir yang diekstrak dengan kloroform memiliki aktivitas antimikroba

yang baik terhadap penghambatan Staphylococcus aureus, Saccharomyces

cereviseae, dan Candida albicans. Pada penelitian yang dilakukan oleh

Shui et al. (2005), dengan menggunakan uji “ free radical spiking” (dengan

menggunakan instrumen HPLC/MS), diketahui bahwa kenikir memiliki

aktivitas antioksidan yang sangat tinggi, yaitu setara dengan sekitar 2400

mg asam askorbat per 100 gram sampel segar. Komponen antioksidan

utama yang diidentifikasikan merupakan senyawa polar, yaitu golongan

dari proantosianidin yang berbentuk sebagai dimer hingga heksamer,

quercetin glikosida, klorogenik, neo-klorogenik, dan asam kripto-

klorogenik.

Penelitian mengenai kandungan komponen-komponen quercetin

dan quercetin glikosida pada ekstrak kenikir dengan metanol, juga

dilakukan di Malaysia pada bulan Juli 2000. Hasil uji komponen-

komponen tersebut menunjukkan adanya aktivitas antioksidan setelah

dilakukan pengujian dengan uji feri tiosianat, uji asam tiobarbiturat, dan

uji DPPH (Israf et al., 2003).


19/140

6

Gambar 1. Kenikir (Cosmos caudatus H.B.K.)

2. Beluntas ( Pluchea indica Less.)

Klasifikasi dari beluntas adalah :

Kingdom : Plantae



Class : Dicotyledone

Order : Asterales

Family : Asteraceae

Genus : Pluchea

Species : Pluchea indica Less.

Beluntas merupakan tanaman perdu yang tumbuh tegak, sering

bercabang banyak, dan memiliki tinggi sekitar 1-2 meter. Tanaman ini

banyak tumbuh di daerah Jawa bagian pantai Utara. Hingga ketinggian

kurang lebih 800 meter di atas permukaan laut, tumbuhan ini dapatdigunakan sebagai pagar hidup (Heyne, 1987). Ciri-ciri daunnya adalah

berbentuk bulat telur, tepi runcing, pangkal tumpul, berbulu halus, panjang

3.8-6.4 cm, lebar 2-4 cm, pertulangan menyirip, dan memiliki warna hijau

muda atau hijau (Anonim, 2006i). Tanaman beluntas dapat dilihat seperti

pada Gambar 2.


20/140

7

Sayuran beluntas memiliki kandungan saponin, flavonoid,

polifenol, tanin, asam klorogenik, natrium, kalium, aluminium, kalsium,

magnesium, dan fosfor (Anonim, 2005a). Anonim (2003b) menambahkan

bahwa daun dan bunga beluntas mengandung alkali yang bertindak

sebagai antiseptik. Asam amino (leusin, isoleusin, triptofan, treonin),

lemak, besi, vitamin A, dan vitamin C, juga terdapat dalam tanaman ini.

Bagian tanaman beluntas yang biasa dikonsumsi adalah daun

mudanya. Daun dari tanaman ini memiliki khasiat sebagai obat penurun

panas, obat batuk, dan penghilang bau keringat (Anonim, 2006 i). Daun

beluntas juga berguna untuk menambah nafsu makan (stomakik) dan

membantu pencernaan (Anonim, 2005 b).

Selain fungsi-fungsi yang telah disebutkan di atas, daun beluntas juga memiliki kemampuan menghilangkan bau mulut, sebagai obat radang

(inflamasi), sebagai obat oles yang baik untuk mengobati rasa lemas akibat

diare, dan sebagai bahan ramuan yang berbentuk oles dan bubur. Cairan

dari daun yang ditumbuk dan dicampur dengan ramuan lain-lain (adas-

pulasari, bawang merah, kunyit, temulawak, dan kemenyan) merupakan

obat yang baik untuk penderita diare berdarah (Heyne, 1987). Khasiat

daun beluntas sebagai obat radang (inflamasi) dan obat diare disebabkan

karena kemampuannya dalam menghambat pertumbuhan bakteri

Staphylococcus aureus dan Escherichia coli (Ardiansyah, 2005).

Ardiansyah (2005), melakukan penelitian terhadap pengujian

ekstrak etanol daun beluntas sebagai zat antibakteri dan antioksidan.

Berdasarkan hasil penelitian tersebut, diperoleh hasil bahwa daun beluntas

mempunyai potensi untuk dikembangkan sebagai ekstrak yang berfungsi

sebagai pengawet makanan, karena kemampuannya untuk menghambat

pertumbuhan bakteri-bakteri penyebab keracunan makanan dan bakteri

penyebab kerusakan makanan. Disamping itu juga kemampuannya sebagai

radical scavenging dapat digunakan sebagai senyawa antioksidan.


21/140

8

Beluntas memiliki kemampuan lain, yaitu termasuk dalam salah

satu tanaman yang tergolong dalam kelompok obat kontrasepsi.

Komponen flavonoid yang terdapat di dalamnya akan menghambat enzim

aromatase, yaitu enzim yang berfungsi mengkatalisis konversi androgen

menjadi estrogen yang akan meningkatkan hormon testosteron. Tingginya

konsentrasi testosteron akan berefek umpan balik negatif ke hipofisis,

yaitu tidak melepaskan hormon FSH (Folikel Stimulating Hormone) dan

LH ( Luteinizing Hormone), sehingga akan menghambat spermatogenesis.

Selain itu, senyawa tanin yang terkandung di dalamnya akan bekerja

dalam menggumpalkan sperma (Susetyarini dan Wahyuni, 2003).

Gambar 2. Beluntas (Pluchea indica Less.)

3. Mangkokan ( Nothopanax scutellarium)

Klasifikasi dari mangkokan adalah (Anonim, 2007j) :

Kingdom : Plantae

Division : Magnoliophyta

Class : Magnoliopsida

Order : Apiales

Family : Araliaceae

Genus : Nothopanax

Species : Nothopanax scutellarium


22/140

9

Tumbuhan ini sering ditanam sebagai tanaman hias atau tanaman

pagar, walaupun dapat ditemukan tumbuh liar di ladang dan tepi sungai.

Mangkokan menyukai tempat terbuka yang terkena sinar matahari atau

sedikit terlindung, dan dapat tumbuh pada ketinggian 1 - 200 meter di atas

permukaan laut. Tanaman ini merupakan perdu tahunan yang tumbuh

tegak dengan tinggi 1- 3 m. Batang berkayu, bercabang, bentuknya bulat,

panjang, dan lurus. Bagian yang dikonsumsi dari tanaman ini adalah

bagian daunnya, yang memiliki ciri-ciri yaitu berdaun tunggal, bertangkai,

agak tebal, bentuknya bulat berlekuk seperti mangkok, pangkal berbentuk

jantung, tepi bergerigi, diameter 6-12 cm, pertulangan menyirip, dan

berwarna hijau tua (Anonim, 2005d). Gambar 3 menunjukkan gambar

daun mangkokan.Batang dan daun mangkokan mengandung kalsium-oksalat,

peroksidase, amygdalin, fosfor, besi, lemak, protein, serta vitamin A, B1,

dan C (Anonim, 2005d). Anonim (2005e) menambahkan bahwa daun

mangkokan mengandung alkaloid, saponin, flavonoid, dan polifenol. Pada

zaman dahulu, daun mangkokan digunakan sebagai tempat darurat

pengganti mangkok atau piring untuk makan bubur sagu, sehingga

dinamakan daun mangkok (Heyne, 1987). Daun muda dari tanaman ini

dapat dimakan sebagai lalap, urapan mentah, atau direbus dan dibuat sayur

(Anonim, 2005d).

Di daerah Jawa, bubur daun mangkokan digunakan untuk melumas

kulit kepala terhadap kerontokan rambut. Di daerah Ternate, daun

mudanya dimakan dengan cara direbus. Sedangkan daun tuanya oleh para

wanita Ternate digunakan untuk menyembuhkan payudara yang bernanah

(daun diremas dengan minyak kelapa dan sedikit curcuma, dipanaskan

diatas api, lalu dioleskan pada payudara yang bernanah untuk

menyusutkan pembengkakan dan mengalirkan habis air susu yang

membusuk) (Heyne, 1987).

Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Triguspita et al.

(2000), daun mangkokan mengandung tanin, polifenol, dan saponin.

Penelitian ini juga menguji efek analgetika ekstrak metanol dari daun


23/140

10

mangkokan. Hasil analisis yang diperoleh yaitu pemberian ekstrak dengan

dosis 400 dan 800 mg/kg BB mencit, menunjukkan efek yang bermakna

terhadap kontrol. Diduga bahwa senyawa tanin, polifenol, dan flavonoid

merupakan senyawa aktif analgetika.

Gambar 3. Mangkokan ( Nothopanax scutellarium)

4. Kecombrang ( Nicolaia speciosa Horan)

Klasifikasi dari kecombrang adalah :

Kingdom : Plantae



Class : Monocotyledonae

Order : Zingiberales

Family : Zingiberaceae

Genus : Nicolaia

Species : Nicolaia speciosa Horan

Kecombrang merupakan tanaman tahunan, berupa semak, dan

tinggi 1-3 meter. Batangnya semu, tegak, berpelepah, membentuk

rimpang, dan berwarna hijau. Daun tanaman ini merupakan daun tunggal,

lanset, memiliki ujung dan pangkal runcing, bertepi rata, pertulangan


24/140

11

menyirip, panjang 20-30 cm, lebar 5-15 cm, dan berwarna hijau. Bunga

kecombrang berbentuk bongkol, majemuk, mahkota bertaju, berbulu

jarang, berwarna merah jambu, dan panjang tangkai bunganya 80-220 cm.

Bunga ini sering dipakai sebagai penganti buah asam (tamarin) dan

kadang-kadang dibuat sebagai manisan (Anonim, 2006h). Gambar 4

menunjukkan tanaman kecombrang, sedangkan Gambar 5 adalah bunga

kecombrang.

Kecombrang dapat dimanfaatkan dengan memasak daun muda dan

bunganya dimakan sebagai teman makan nasi. Di daerah tertentu,

kecombrang biasa dimasak sebagai sayur lodeh (Anonim, 2003b). Di

Jawa, bunga kecombrang digunakan sebagai campuran untuk makan urap

dan pecal. Bunga kecombrang juga sering dimanfaatkan sebagai lalapandan teman sambal (Djuki, 2005). Orang-orang Sunda di daerah Bogor,

memanfaatkan rimpangnya untuk mendapatkan warna kuning (Heyne,

1987).

Bagian tanaman kecombrang yang digunakan dalam penelitian ini

adalah bagian bunganya. Bunga kecombrang memiliki kadar air sebesar

90.23%, dan nilai pH bunga kecombrang adalah 3.89 (Anggraeni, 2007).

Khasiat dari bunga kecombrang adalah sebagai obat penghilang bau badan

(sebanyak 100 gram bunga segar, dicuci dan dikukus sampai matang, lalu

dimakan sebagai sayuran), untuk memperbanyak air susu ibu, dan sebagai

pembersih darah (Anonim, 2006h). Zat aktif yang terkandung di dalamnya

yang dapat menghilangkan bau badan adalah saponin, flavonoid, dan

polifenol (Anonim, 2003b). Kecombrang juga kaya akan vitamin dan

mineral (Djuki, 2005).

Kecombrang telah terbukti memiliki aktivitas antibakteri dan

antikapang. Hal ini dapat diketahui dari hasil penelitian yang telah

dilakukan oleh Naufalin (2005). Hasil penelitian tersebut menunjukkan

bahwa ekstrak bunga kecombrang dengan etil asetat dan etanol mampu

menghambat pertumbuhan bakteri dan kapang pada makanan terutama

bakteri patogen penyebab penyakit. Sedangkan ekstraksi bunga

kecombang dari pelarut heksana tidak mampu menghambat mikroba


25/140

12

makanan. Antibakteri kedua ekstrak ini lebih kuat dibanding anti

kapangnya. Bila dibandingkan, aktivitas antibakteri ekstrak etil asetat lebih

tinggi dari ektraksi etanol. Bunga kecombang hasil ektraksi etil asetat dan

etanol mampu menekan pertumbuhan Stapyllococcus aures, Listeria

monocytogenes, Bacillus cereus, Salmonella typhimurium, Escherichia

coli, Aeromonas hydrophila, dan Pseudomonas aeruginosa. Diantara

semua bakteri itu, yang paling sensitif terhadap ekstrak etil asetat dan

etanol ialah Pseudomonas aeruginosa. Stapyllococcus aureus merupakan

bakteri yang paling resisten terhadap kedua ekstrak tersebut.

Aktivitas antibakteri ekstrak bunga kecombrang dipengaruhi oleh

faktor-faktor seperti pH, NaCl (garam), dan pemanasan. Pada pH asam

aktivitas anti bakteri ekstrak etil asetat dan etanol bunga kecombrang lebihtinggi dibanding pH basa (8-9). Penambahan NaCl hingga 4% ekstrak etil

asetat menyebabkan peningkatan aktivitas antibakteri. Namun pada

konsentrasi NaCl 5% aktivitas antibakteri cenderung menurun. Aktivitas

antibakteri ini pun masih bertahan pada pemanasan suhu 80°C dan 100°C

selama 10, 20, 30 menit, serta 121°C selama 10 menit (Naufalin, 2005).

Ekstrak etil asetat dan etanol bunga kecombrang dapat

menghambat pertumbuhan miselia kapang Penicillium funiculosum,

Aspergillus flavus, dan Rhizopus oligosporus. Kapang Aspergillus flavus

dan Penicillium funiculosum lebih sensitif terhadap ekstrak etil asetat.

Sedangkan kapang Rhizopus oligosporus lebih resisten terhadap ekstrak

etil asetat (Naufalin, 2005).

Ekstrak bunga kecombrang dapat berpotensi sebagai pengawet

pada mie basah. Penambahan ekstrak kecombrang rebus pada mie mentah

mampu meningkatkan umur simpan secara nyata sampei 46 jam dan pada

mie matang sampai 41 jam (lebih lama dari kontrol). Penambahan ekstrak

kecombrang pada mie matang juga terbukti mampu mengurangi

pertumbuhan mikroba. Mie matang kontrol dapat memenuhi SNI sampai

jam ke-40, sedangkan mie matang ekstrak segar sampai jam ke-48, dan

mie matang ekstrak rebus sampai jam ke-52 (Anggraeni, 2007).


26/140


27/140

14

5. Kemangi (Ocimum sanctum Linn.)

Klasifikasi dari kemangi adalah :

Kingdom : Plantae



Order : Lamiales

Family : Lamiaceae

Genus : Ocimum

Species : Ocimum sanctum Linn.

Kemangi merupakan tumbuhan perdu yang bercabang banyak dan

memiliki tinggi 0.3-1.5 meter. Tanaman kemangi adalah sejenis tumbuhantropis yang terdapat di Malaysia dan Asia lainnya. Kemangi merupakan

sejenis tanaman herba dan sering ditanam di kawasan sekitar rumah

(Anonim, 2007f). Tanaman ini tersebar di seluruh Jawa dari dataran

rendah hingga kurang lebih 600 meter di atas permukaan laut, terutama di

daerah-daerah dengan musim kemarau yang kuat (Heyne, 1987).

Bagian yang dikonsumsi dari tanaman ini adalah daunnya. Daun

kemangi memiliki ciri-ciri yaitu merupakan daun tunggal, berbentuk bulat

telur, ujung runcing, pangkal tumpul, pertulangan menyirip, panjang 14-16

mm, lebar 3-6 mm, memiliki tangkai daun yang panjang (sekitar 1 cm),

dan berwarna hijau (Anonim, 2005 f). Bentuk daun kemangi dapat dilihat

seperti pada Gambar 6. Daun kemangi memiliki bau yang sangat khas.

Menurut Novary (1999) yang dikutip oleh Kharisma (2002), daun kemangi

banyak mengandung vitamin A dan C, serta mineral P, Ca, dan Fe.

Komposisi kimia daun kemangi dapat dilihat pada Tabel 1.

Biasanya tanaman ini digunakan untuk lalapan atau sayuran urap,

dan merupakan salah satu bahan dan bumbu untuk membuat pepes

(Anonim, 2007e). Daun kemangi memiliki khasiat sebagai obat penurun

panas dan memperbaiki pencernaan (Anonim, 2005f). Selain itu, daunnya

juga bermanfaat untuk melancarkan keluarnya air susu pada wanita


28/140

15

menyusui. Jika daun kemangi diremas dengan cuka dapat pula berkhasiat

sebagai obat gosok untuk mengobati encok (Heyne, 1987).

Daun Ocimum sanctum mengandung saponin, flavonoid, dan tanin.

Sedangkan bijinya mengandung saponin, flavonoid, dan polifenol

(Anonim, 2005f). Zat aktif yang terkandung dalam daun kemangi juga

berfungsi sebagai antiseptik. Selain itu, daun kemangi juga dapat

berkhasiat untuk menghilangkan bau badan dan dapat meningkatkan selera

makan (Anonim, 2003b).

Tabel 1. Komposisi kimia daun kemangi per 100 gram bagian

yang dapat dimakan

Nilai gizi Jumlah

Kalori (kal) 43

Protein (g) 3.3

Lemak (g) 1.2

Karbohidrat (g) 7.0

Kalsium (g) 320

Fosfor (g) 38

Besi (mg) 4.8

β-karoten (μg) 4500

Thiamin (mg) 0.08

Riboflavin (mg) 0.35

Niasin (mg) 0.08

Asam askorbat (mg) 27

Air (%) 86.5

Sumber : Leung et al. (1972) yang dikutip oleh Kharisma (2002)


29/140

16

Gambar 6. Kemangi (Ocimum sanctum Linn.)

6. Katuk (Sauropus androgynus)

Klasifikasi dari katuk adalah :

Kingdom : Plantae



Order : Malpighiales

Family : Phyllanthaceae

Tribe : Phyllantheae

Sub Tribe : Flueggeinae

Genus : Sauropus

Species : Sauropus androgynous

Katuk merupakan sayuran berdaun yang paling populer di daerah

Asia Selatan dan Asia Tenggara (Anonim, 2007p). Penyebaran tanaman

ini berasal dari pulau Jawa (Anonim, 2005i). Tanaman katuk merupakantanaman perdu yang tingginya dapat mencapai hingga 3.5 meter, dengan

cabang-cabang yang agak lemah dan agak terbagi. Tanaman ini tumbuh

liar di hutan-hutan dan ladang-ladang. Kondisi tumbuh terbaik untuk

tanaman katuk adalah di daerah dengan ketinggian 1300 di atas permukaan


30/140

17

laut (Anonim, 2006f). Di daerah Jawa, tanaman katuk sering ditanam dan

terdapat di sepanjang jalan pada pagar-pagar (Heyne, 1987).

Bagian tanaman yang biasa dikonsumsi adalah daunnya. Ciri-ciri

dari daun katuk adalah daunnya majemuk, bulat telut, ujung runcing,

pangkal tumpul, tepi rata, panjang 5-6 cm, pertulangan menyirip, dan

berwarna hijau tua (Anonim, 2007p). Gambar 7 menunjukkan tanaman

katuk.

Daun katuk memiliki kandungan kimia yaitu zat protein, lemak,

kalsium, fosfor, besi, serta vitamin A, B1, dan C (Anonim, 2006f). Selain

itu, Soedibyo (1998) menambahkan bahwa dalam daun katuk juga

mengandung senyawa steroid dan polifenol. Komposisi kimia daun katuk

dapat dilihat pada Tabel 2. Penelitian-penelitian terdahulu telahmembuktikan bahwa khasiat dari daun katuk salah satunya adalah dapat

meningkatkan produksi ASI (Soedibyo, 1998). Peningkatan produksi ASI

ini diduga karena adanya efek hormonal dari kandungan kimia sterol pada

daun katuk yang bersifat estrogenik (Anonim, 2004).

Anonim (2006 f) dan Soedibyo (1998) menyebutkan bahwa khasiat

daun katuk selain untuk meningkatkan produksi ASI adalah dapat

berkhasiat juga sebagai antipiretik atau obat penurun demam. Fungsi lain

dari daun katuk adalah sebagai pewarna. Bila daunnya diremas-remas

dengan tangan dapat memberikan warna hijau pada beberapa makanan

(Heyne, 1987).

Hasil analisis GC-MS pada ekstrak heksana daun katuk

menunjukkan adanya beberapa senyawa alifatik. Pada ekstrak eter terdapat

komponen utama yang meliputi : monometil suksinat, asam benzoat dan

asam 2-fenilmalonat; serta komponen minor meliputi : terbutol, 2-

propagiloksan, 4H-piran-4-on, 2-metoksi-6-metil, 3-peten-2-on,

3-(2-furanil), dan asam palmitat. Pada ekstrak etil asetat terdapat

komponen utama yang meliputi: sis-2-metil-siklopentanol asetat.

Kandungan daun katuk meliputi protein, lemak, kalsium, fosfor, besi,

vitamin A, B, dan C. Pirolidinon, dan metil piroglutamat serta


31/140

18

p-dodesilfenol sebagai komponen minor. Pada penelitian terdahulu telah

disebutkan bahwa daun katuk juga mengandung efedrin (Anonim, 2004).

Tabel 2. Komposisi kimia daun katuk per 100 gram bagian yang

dapat dimakan

Nilai gizi Jumlah

Kalori (kal) 59

Protein (g) 4.8

Lemak (g) 1.0

Karbohidrat (g) 11.0

Kalsium (g) 204

Fosfor (g) 83

Besi (mg) 2.7

β-karoten (μg) 10370

Thiamin (mg) 0.10

Asam askorbat (mg) 239

Air (%) 81.0

Sumber : Departemen Kesehatan RI (1981) yang dikutip oleh

Muchtadi (2000)

Gambar 7. Katuk (Sauropus androgynus)


32/140

19

7. Kedondong Cina ( Polyscias pinnata)

Klasifikasi dari kedondong cina adalah (Anonim, 2007l):

Kingdom : Plantae



Order : Apiales

Family : Araliaceae

Sub Family : Aralioideae

Genus : Polyscias

Species : Polyscias pinnata

Genus tanaman Polyscias merupakan tanaman semak dan pohonyang merupakan tanaman asli dari kawasan tropis Asia, Selandia Baru,

dan Kepulauan Pasifik. Tumbuhan ini banyak digunakan sebagai tanaman

hias di rumah pada daerah yang beriklim dingin, dan sebagai tanaman

pagar di daerah yang beriklim tropis, seperti Indonesia (Anonim, 2007m).

Tanaman kedondong cina merupakan tanaman yang tumbuh secara

berkelompok. Tinggi tanamannya sekitar 90 cm. Ciri-ciri daunnya (seperti

dapat dilihat pada Gambar 8) antara lain, ujung runcing, pangkal tumpul,

tepinya bergerigi, dan berwarna hijau muda. Penyebaran tanaman

kedondong cina berasal dari pulau Jawa (Anonim, 2005i).

Gambar 8. Kedondong cina (Polyscias pinnata)


33/140

20

8. Antanan (Centella asiatica)

Klasifikasi dari antanan adalah :

Kingdom : Plantae



Order : Apiales

Family : Apiaceae

Genus : Centella

Species : Centella asiatica

Antanan adalah tanaman herba tahunan yang kecil dari famili

Apiaceae. Tanaman ini merupakan tanaman asli dari Australia, kepulauanPasifik, New Guinea, Malanesia, Malesia, dan Asia. Jenis-jenis antanan

yang terdapat di Malaysia adalah antanan Cina atau antanan nyonya yang

berdaun kecil, antanan daun lebar, antanan kelantan, antanan renek,

antanan salad, antanan gajah, dan antanan Brunei. Di Indonesia, jenis-jenis

antanan yang ada adalah antanan, antanan daun kaki kuda, antanan

tikusan, dan antanan pani gowang (Anonim, 2007k).

Antanan adalah tanaman kosmopolit di negara tropis. Di Jawa,

terutama di bagian barat dari pulau ini, antanan dapat tumbuh dari dataran

rendah hingga kurang lebih 2500 meter di atas permukaan laut. Tanaman

ini seringkali tumbuh secara berkelompok dalam jumlah yang besar dan

pada tempat-tempat yang agak rindang dan lembab (Heyne, 1987).

Tanaman antanan dapat dilihat seperti pada Gambar 9.

Tanaman antanan kaya akan berbagai zat makanan, seperti protein,

zat besi, vitanim A, dan vitamin C. Antanan digunakan sebagai tanaman

obat-obatan dalam pengobatan tradisional Cina (Anonim, 2007a). Bagian

yang dikonsumsi dari tanaman antanan adalah seluruh bagiannya. Daun

Centella asiatica mengandung alkaloid, saponin, flavonoid, dan polifenol

(Anonim, 2005c). Antanan merupakan herba menjalar, dengan ciri-ciri

daun tunggal, tersusun dalam roset akar, dua sampai sepuluh, berbentuk

ginjal, tepi bergerigi, dan berwarna hijau. Batang antanan memiliki ciri-


34/140

21

ciri kecil, tipis, berupa stolon, berwarna hijau sampai hijau kemerah-

merahan, dan saling terkait antar tanaman (Soedibyo, 1998).

Antanan jika dikonsumsi sebagai salad, dapat membantu menjaga

supaya terlihat lebih awet muda. Jika antanan dibuat jus, dapat mengurangi

tekanan darah tinggi dan dapat juga digunakan sebagai minuman tonikum

untuk menjaga kesehatan agar tetap prima. Antanan juga memiliki khasiat

untuk menyembuhkan luka yang terbuka (Anonim, 2007a). Tanaman ini

juga mengandung tanin yang kemungkinan dapat membantu mengatasi

radang usus dan sakit perut. Selain itu antanan bersifat manis,

mendinginkan, membersihkan darah, dan melancarkan peredaran darah

(Anonim, 2005g).

Menurut Heyne (1987), seduhan antanan memiliki khasiat sebagaiobat pembersih darah, hermoroida, penyakit hati, batuk kering, radang

cabang tenggorok, asma, radang usus, batu ginjal, dan sebagai obat kumur

pada penyakit seperti sariawan. Antanan yang diremas-remas jika

dioleskan pada radang kulit yang basah akan memberikan pengobatan

yang cukup baik.

Gambar 9. Antanan (Centella asiatica)


35/140

22

9. Pohpohan ( Pilea trinervia)

Klasifikasi dari pohpohan adalah (Anonim, 2007h):

Kingdom : Plantae



Order : Rosales

Family : Urticaceae

Genus : Pilea

Species : Pilea trinervia

Pohpohan merupakan salah satu tumbuhan yang penyebarannya

berasal dari Jawa (Anonim, 2005i). Tanaman ini tumbuh secara umum di pegunungan dengan tinggi pohonnya sekitar dua meter. Bagian yang

dikonsumsi dari pohpohan adalah daunnya. Daun tanaman pohpohan

memiliki tekstur yang sangat lunak, berbau harum, dan dimakan sebagai

lalap (Heyne, 1987). Gambar 10 menunjukkan tanaman pohpohan.

Gambar 10. Pohpohan (Pilea trinervia)


36/140

23

10. Daun ginseng (Talinum paniculatum)

Klasifikasi dari daun ginseng adalah :

Kingdom : Plantae



Order : Caryophyllales

Family : Portulacaceae

Genus : Talinum

Species : Talinum paniculatum

Daun ginseng (Talinum paniculatum) dikenal juga dengan nama

kolesom Jawa. Daun ginseng merupakan tanaman herba menahun yangtumbuhnya semi menjalar dengan tinggi sekitar 30 - 60 cm, dengan batang

bercabang di bagian bawah dan pangkalnya mengeras. Tumbuhan ini

berasal dari Amerika tropis. Di Jawa tumbuh pada ketinggian 5 - 1250

meter di atas permukaan laut (Anonim, 2003a). Di Jawa Barat, tanaman ini

banyak dibudidayakan sebagai tanaman hias (Heyne, 1987).

Tanaman ini sangat mudah dikembangbiakan, baik dengan biji

maupun setek batang. Kolesom Jawa ditanam sebagai tanaman hias atau

tanaman obat, kadang ditemukan tumbuh liar. Akarnya berdaging tebal,

biasa digunakan sebagai pengganti kolesom. Daun dari tanaman ini

merupakan daun tunggal, letaknya berhadapan, bertangkai pendek,

berbentuk bulat telur sungsang, tepi rata, ujung dan pangkalnya runcing,

panjang 3 - 10 cm, lebar 1,5 - 5 cm, dan berwarna hijau mengkilat.

Bunganya majemuk dengan kelopak berwarna pink (Sutomo, 2006 dan

Anonim, 2003a). Daun dan bunga kolesom jawa dapat dilihat seperti pada

Gambar 11.

Semua bagian tanaman ini bisa dimakan, mulai dari akar hingga

daunnya. Biasanya akarnya yang menggembung menyerupai akar ginseng

di keringkan sebagai ramuan obat. Daunnya biasa dijual sebagai sayuran.

Daun kolesom/ginseng sangat cocok ditumis, dibuat cah (dimasak dengan

sedikit air) atau sebagai campuran sayur bening atau sup. Rasanya lezat


37/140

24

dengan tekstur lembut dan sedikit berlendir. Mengolah sayuran ini harus

menggunakan api besar dan cepat karena warnanya akan berubah menjadi

kehitaman jika terlalu lama dimasak (Sutomo, 2006).

Belum ada penelitian tentang manfaat kolesom, namun secara

turun temurun akar dan daunnya dipercaya dapat meningkatkan stamina

tubuh. Sejauh ini baru diketahui bahwa di dalam akar kolesom

mengandung zat aktif seperti saponin, flavonoid dan tanin. Bagian

daunnya mengandung vitamin A yang cukup tinggi, serat dan beragam

mineral penting lainnya (Sutomo, 2006).

Gambar 11. Daun ginseng (Talinum paniculatum)


38/140


39/140

26

mengandung vitamin (terutama vitamin C dan beberapa vitamin B, serta

karotenoid) dan mineral yang dibutuhkan tubuh, seperti magnesium,

kalsium, kalium, dan besi. Selain itu, di dalam tanaman ini juga terdapat

dua tipe pigmen betalain alkaloid, yaitu pigmen betasianin yang kemerah-

merahan (dapat terlihat pada warna batangnya) dan pigmen kuning

betasantin (terlihat jelas pada bunganya dan tersamar pada daunnya).

Kedua pigmen ini memiliki potensi sebagai antioksidan dan antimutagenik

(Anonim, 2007n). Tanaman krokot juga mengandung saponin dan

flavonoid (Anonim, 2005h).

Gambar 12. Krokot (Portulaca oleracea)

B. FLAVONOID

Flavonoid terdistribusi secara luas pada tanaman, yang memiliki

berbagai fungsi, termasuk berperan dalam memproduksi pigmen berwarna

kuning, merah, atau biru pada bunga, dan sebagai penangkal terhadap

mikroba dan insekta (Anonim, 2007b). Flavonoid memiliki kontribusi yang penting dalam kesehatan manusia. Menurut Markham (1989) yang dikutip

oleh Hertog et al. (a) (1992), disarankan agar setiap harinya manusia

mengkonsumsi beberapa gram flavonoid. Flavonoid memiliki ikatan

difenilpropana (C6-C3-C6) yang diketahui sebagai antimutagenik dan

antikarsinogenik. Selain itu, senyawa ini juga memiliki sifat sebagai


40/140

27

antioksidan, anti-peradangan, anti-alergi, dan dapat menghambat oksidasi dari

LDL ( Low Density Lipoprotein) (Anonim, 2006d).

Berdasarkan tatanama menurut IUPAC, flavonoid dapat

diklasifikasikan kedalam (Anonim, 2007b):

1.

Flavonoids, merupakan turunan dari struktur 2-phenylchromen-4-one

(2-phenyl-1,4-benzopyrone);

2.

Isoflavonoids, merupakan turunan dari struktur 3-phenylchromen-4-one

(3-phenyl-1,4-benzopyrone);

3. Neoflavonoids, merupakan turunan dari struktur 4-phenylcoumarine

(4-phenyl-1,2-benzopyrone).

Jenis utama flavonoid adalah antosianidin, flavonol, flavone,

flavanol, flavonone, dan isoflavon (Spencer et al., 2003). Flavonol dan flavonemerupakan senyawa yang paling tersebar luas dari semua pigmen tumbuhan

kuning (Robinson, 1995). Flavonol dan flavone yang terdapat dalam tanaman,

biasanya dalam bentuk O-glikosida. Perbedaan yang paling utama antara

flavonol dan flavone yaitu pada flavonol terdapat gugus hidroksi pada C3.

Kedua senyawa ini banyak terdapat pada bagian daun dan bagian luar dari

tanaman, dan hanya sedikit sekali yang ditemukan pada bagian tanaman yang

berada di bawah permukaan tanah (Hertog et al. (a), 1992). Perbedaan antara

kedua senyawa ini dapat dilihat secara lebih jelas pada Gambar 13.

Gambar 13. Struktur kimia flavonol dan flavone yang diidentifikasi

Senyawa R1 R2 R3

Flavonol yang diidentifikasi

Myricetin OH OH OH

Quercetin OH OH H

Kaempferol OH H H

Flavone yang diidentifikasi

Luteolin H OH H

Apigenin H H H


41/140

28

Dibandingkan dengan jenis flavonoid lain, jenis flavonol dan flavone

merupakan dua dari jenis flavonoid yang paling banyak terdapat dalam

tanaman sayur-sayuran (Robinson, 1995). Oleh karena itulah, pada penelitian

ini, dilakukan identifikasi pada kedua jenis flavonoid tersebut. Selain karena

alasan jumlah yang mayoritas, berdasarkan penelitian-penelitian yang telah

dilakukan, kedua jenis flavonoid ini memiliki kemampuan yang baik,antara

lain sebagai antioksidan.

Flavonol terdiri atas quercetin; yang umumnya merupakan

komponen terbanyak dalam tanaman, kaempferol, dan myricetin. Flavone;

yang terdiri atas apigenin dan luteolin, hanya ditemukan pada bahan pangan

tertentu, contohnya seledri, lada (hanya luteolin), dan peterseli (hanya

apigenin) (Lee, 2000). Dalam sayuran, quercertin glikosida merupakankomponen yang paling menonjol. Namun, terdapat pula glikosida dari

kaempferol, luteolin, dan apigenin (Hertog et al. (a), 1992).

Flavonoid memiliki efek biologis dalam sistem sel mamalia yang

berperan dalam kesehatan manusia. Beberapa flavonoid, terutama quercetin,

merupakan antioksidan yang kuat. Sifat antioksidan dari quercetin

meningkatkan kemungkinan untuk mengkonsumsi senyawa ini dan substansi

yang terkait di dalamnya dapat mengurangi risiko kanker, penyakit jantung,

dan stroke pada manusia (Anonim, 2006c). Senyawa quercetin merupakan

golongan flavonol yang paling banyak terdapat dalam tanaman dan

merupakan senyawa yang paling aktif dibandingkan senyawa lain dari

golongan flavonol (Fuhrman dan Aviram, 2002). Banyak tanaman obat

menunjukkan khasiatnya yang baik seiring dengan tingginya kandungan

quercetin. Quercetin juga telah terbukti memiliki aktivitas sebagai anti

peradangan, karena langsung menghambat penyebab utama dari proses

peradangan tersebut (Anonim, 2007o).

Kemampuan quercetin sebagai zat anti tumor juga luar biasa. Selain

itu, quercetin juga memiliki pengaruh yang positif dalam membantu untuk

mencegah kanker, prostatitis, gangguan jantung, katarak, dan gangguan

pernafasan, seperti bronkitis dan asma (Anonim, 2007o). Quercetin mampu


42/140

29

menghambat oksidasi LDL dengan cara mengkelat ion tembaga, yang dapat

menginduksi oksidasi dari LDL (Aviram dan Fuhrman, 2003).

Senyawa lain dari golongan flavonol yang memiliki peran penting

pula adalah kaempferol. Senyawa kaempferol berbentuk padatan berwarna

kuning, dengan titik leleh 276-278°C. Senyawa ini hanya sedikit larut dalam

air, namun larut dalam etanol panas, metanol, dan dietil eter. Konsumsi

kaempferol dalam teh dan brokoli menunjukkan adanya hubungan dengan

penurunan risiko terhadap kanker dan gangguan jantung (Anonim, 2007d).

Selain itu, kaempferol juga mampu menghambat oksidasi LDL dengan cara

mengkelat ion tembaga, yang dapat menginduksi oksidasi dari LDL. Namun

aktivitas dari kaempferol ini tidak seefektif seperti pada luteolin dan quercetin

(Aviram dan Fuhrman, 2003).Myricetin merupakan senyawa yang paling sedikit dijumpai di

tanaman dibandingkan senyawa lain dari golongan flavonol. Namun demikian,

myricetin juga memiliki khasiat sebagai antioksidan. Menurut Knekt et al.

(2002) yang dikutip oleh Anonim (2006g), hasil studi in vitro menunjukkan

bahwa dengan konsentrasi myricetin yang tinggi dapat memodifikasi

penyerapan kolesterol LDL oleh sel darah putih menjadi lebih cepat. Selain

itu, studi dari Finlandia juga menyatakan bahwa dengan tingginya konsumsi

myricetin dapat menurunkan kemungkinan terkena kanker prostat.

Salah satu senyawa golongan flavone yang diteliti pada penelitian ini

adalah luteolin. Senyawa luteolin memiliki peran yang penting dalam tubuh

manusia sebagai antioksidan, penangkap radikal bebas, zat pencegah terhadap

peradangan, promotor dalam metabolisme karbohidrat, dan sebagai pengatur

sistem imun. Berdasarkan karakteristik-karakteristik tersebut, luteolin juga

dipercaya dapat memainkan peran yang penting dalam pencegahan terhadap

kanker. Beberapa penelitian telah menyatakan bahwa luteolin sebagai zat

biokimia dapat secara drastis menurunkan gejala infeksi dan peradangan

(Anonim, 2007g). Selain itu, luteolin juga mampu menghambat oksidasi LDL

dengan cara mengkelat ion tembaga, yang dapat menginduksi oksidasi dari

LDL (Aviram dan Fuhrman, 2003).


43/140

30

Apigenin adalah senyawa lainnya dari golongan flavone yang akan

diidentifikasi pada penelitian ini. Apigenin merupakan aglikon dari apiin,

yang diisolasi dari daun tanaman peterseli dan seledri. Senyawa ini berbentuk

padatan dan berwarna kuning, dan sering digunakan untuk pencelupan bulu

domba (Anonim, 2006a). Senyawa apigenin memiliki kemampuan antara lain

sebagai zat anti peradangan, antibakteri, dan untuk mengatasi permasalahan

lambung (Cadenas dan Packer, 2002).

C. IDENTIFIKASI SENYAWA FLAVONOID

High Performance Liquid Chromatography (HPLC) merupakan alat

yang penting dalam kimia analitik. HPLC memiliki kemampuan untuk

memisahkan, mengidentifikasi, dan menghitung jumlah komponen yangterdapat dalam sampel apapun yang dapat dilarutkan dalam air. Dengan

kemampuannya yang seperti ini, maka jumlah suatu komponen yang sangat

sedikit pun (dalam part per trillion) dapat ditentukan secara mudah. HPLC

dapat diaplikasikan untuk sampel apapun, seperti dalam bidang farmasi,

pangan, nutraceuticals, kosmetik, lingkungan, forensik, dan industri kimia

(Anonim, 2006e).

Komponen utama dari sistem HPLC adalah pompa (tekanan tetap

dan volume tetap), penginjeksi, kolom (eksternal dan internal), detektor, dan

rekorder atau sistem data yang terintegrasi (Rounds dan Gregor, 2003).

Parameter-parameter yang akan mempengaruhi sistem kerja pada HPLC

antara lain adalah diameter dalam dari kolom HPLC, ukuran partikel, ukuran

lubang pada fase diam, dan tekanan pompa (Anonim, 2007c).

Menurut (Rounds dan Gregor, 2003), terdapat lima tipe HPLC yaitu

Normal phase chromatography, reversed phase chromatography, Ion-

exchange chromatography, size-exclusion chromatography, dan affinity

chromatography. Pada penelitian ini, tipe HPLC yang digunakan adalah

reversed phase chromatography (RP-HPLC). Fase diam dari HPLC jenis ini

adalah senyawa nonpolar, sedangkan fase geraknya polar. Karena hal

tersebutlah maka komponen yang akan keluar terlebih dahulu adalah

komponen yang polar dibandingkan yang nonpolar.


44/140

31

Lebih dari 70% teknik pemisahan dengan metode HPLC

menggunakan tipe reversed phase. Beberapa contoh teknik pemisahan yang

menggunakan metode RP-HPLC adalah analisis protein dari tanaman, protein

dari biji-bijian, analisis vitamin larut air dan larut lemak, pemisahan

karbohidrat, dan penentuan unsur-unsur pokok dari minuman ringan. Reversed

phase HPLC dengan metode deteksi yang sangat bervariasi, digunakan untuk

menganalisis lemak (Rounds dan Gregor, 2003).

Antioksidan, seperti butylated hydroxyanisole (BHA) dan butylated

hydroxytoluene (BHT), dapat diekstrak dari bahan pangan kering dan

dianalisis dengan menggunakan detektor UV dan fluoresens secara

bersamaan. Bahan pangan basah, pigmen (seperti klorofil, karotenoid, dan

antosianin), dan komponen fenolik (seperti vanili), dapat pula dianalisisdengan mengunakan metode RP-HPLC (Rounds dan Gregor, 2003).

Kolom reversed phase chromatography lebih sulit untuk rusak

dibandingkan dengan kolom silika normal. Hal ini dikarenakan kolom RP-

HPLC terdiri atas alkil turunan silika dan tidak pernah digunakan dengan

larutan basa (karena larutan basa akan menghancurkan ikatan silika). Kolom

RP-HPLC dapat digunakan dengan larutan asam tetapi tidak boleh kontak

terlalu lama karena asam dapat menimbulkan korosi pada logam yang ada

dalam peralatan HPLC. Kandungan logam pada kolom HPLC harus dijaga

agar tetap rendah supaya dapat memberikan hasil terbaik pada pemisahan

komponen. Salah satu cara untuk mengetahui kandungan logam di dalam

kolom HPLC adalah dengan menginjeksikan campuran dari 2,2’- dan

4,4’-bipiridin. Bila terdapat ion logam di permukaan silika, maka senyawa

2,2’-bipiridin akan mengkelat logam tersebut dan peak dari senyawa yang

akan diidentifikasi menjadi tidak teratur sehingga dapat memberikan hasil

yang tidak sesuai (Anonim, 2007c).

Berbagai penelitian telah dilakukan untuk mendeteksi komponen

fenolik dalam bahan pangan dengan menggunakan metode HPLC. Komponen

fenolik merupakan senyawa aromatik, oleh karena itu, senyawa tersebut akan

memberikan penyerapan yang baik pada panjang gelombang sinar UV.

Flavonoid, yang merupakan bagian sari senyawa fenolik, memiliki serapan


45/140

32

pada panjang gelombang antara 240 dan 270 nm, dan antara 320 dan 380 nm.

Untuk itulah, pada deteksi komponen fenolik, detektor yang digunakan pada

komponen HPLC adalah detektor UV atau UV-Vis (Lee, 2000).

Fase gerak yang biasa digunakan dalam identifikasi senyawa fenolik

dengan HPLC adalah metanol, acetonitril, dan tetrahidrofuran. Penggunaan

tetrahidrofuran sebagai fase gerak dalam sistem HPLC, memberikan hasil

pemisahan yang terbaik; diikuti oleh acetonitril, dan yang terakhir metanol.

Namun, pada identifikasi senyawa flavonoid, fase gerak yang biasa digunakan

adalah metanol dan acetonitril. Tetrahidrofuran akan memberikan hasil yang

sangat signifikan berbeda bila digunakan untuk mengidentifikasi asam sinamat

dalam jus jeruk (Lee, 2000).

Analisis flavonoid pada buah berry (raspberry merah, blueberry,cranberry, dan blackberry) telah banyak dilakukan (Rommel dan Wrolstad,

1993 dan Tandjung et al., 1994 yang dikutip oleh Lee, 2000). Senyawa

flavonol aglikon (quercetin, myricetin, dan kaempferol) dapat dipisahkan

dengan menggunakan fase gerak campuran antara acetonitril dan 1% asam

asetat dalam air. Kolom yang digunakan adalah Partisil 5 ODS-3 column (250

x 4.6-mm ID), dengan laju aliran 1ml/menit. Deteksi flavonol dilakukan pada

panjang gelombang UV 360 nm.

Analisis flavonoid pada sayuran seperti yang dikemukakan oleh

Hertog et al. (a) (1992) banyak diadopsi oleh para peneliti-peneliti lain (Lee,

2000). Identifikasi flavonoid pada sayuran dilakukan dengan menggunakan

fase gerak 25% acetonitril dalam buffer fosfat 0.025 M. Laju alirannya adalah

0.9 ml/menit. Sampel yang akan diidentifikasi akan melewati kolom Nova-

Pak C18, yang memiliki dimensi (150 x 3.9-mm ID). Detektor yang

digunakan yaitu Linear Model 204 UV-Vis detector (Hertog et al. (a) (1992).


46/140

33

III. BAHAN DAN METODE

A. BAHAN DAN ALAT

1. Bahan

Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah bahan

untuk membuat larutan standar, bahan untuk membuat ekstrak sayuran dan

bahan untuk analisis. Bahan-bahan yang digunakan dalam pembuatan

larutan standar adalah standar myricetin, luteolin, quercetin, apigenin, dan

kaempferol; yang diperoleh dari Sigma Aldrich, melalui perantara PT.

Intralab Ekatama, Bogor; metanol 62.5%, HCl 6M, dan TBHQ (Tertiary

Butyl Hydroquinone). Bahan-bahan yang digunakan dalam pembuatan

ekstrak sayuran adalah daun kenikir (Cosmos caudatus H.B.K.), daun beluntas (Pluchea indica Less.), daun mangkokan ( Nothopanax

scutellarium), bunga kecombrang ( Nicolaia speciosa Horan), daun

kemangi (Ocimum sanctum), daun katuk (Sauropus androgynus), daun

kedondong Cina (Polyscias pinnata), seluruh bagian antanan (Centella

asiatica), daun pohpohan (Pilea trinervia), daun dari tanaman daun

ginseng (Talinum paniculatum) , dan daun dan batang krokot (Portulaca

oleracea); yang diperoleh dari pasar lokal yang berada di daerah Bogor;

metanol 62.5%, HCl 6M, dan TBHQ. Bahan-bahan yang digunakan untuk

analisis adalah acetonitril, KH2PO4, water chromatography, Folin

Ciocalteu, Na2CO3, dan etanol 95%.

2. Alat

Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah alat untuk

membuat larutan standar, alat untuk membuat ekstrak sayuran, dan alat

untuk analisis. Alat-alat yang digunakan dalam pembuatan larutan standar

adalah labu takar, gelas ukur, pipet mohr, pipet tetes, dan spatula. Alat-alat

yang digunakan dalam pembuatan ekstrak sayuran adalah freezer, freeze

dryer , alat refluks, neraca analitik, blender kering, labu takar, gelas piala,

gelas ukur, pipet mohr, pipet tetes, spatula, baskom, dan pisau. Alat-alat

yang digunakan untuk analisis adalah High Performance Liquid


47/140


48/140

35

diindikasikan dari warna daun yang lebih hijau muda bila dibandingkan

dengan daun pada bagian yang lainnya. Bagian tanaman krokot yang

digunakan adalah daun dan batangnya, sedangkan bagian tanaman antanan

yang digunakan dalam penelitian ini adalah seluruh bagiannya. Bunga

kecombrang yang digunakan adalah bunga kecombrang yang telah mekar.

Pemilihan bagian-bagian tanaman tersebut didasarkan pada bagian-bagian

yang biasa dikonsumsi oleh masyarakat.

Sayuran-sayuran indigenous tersebut yang diperoleh dari pasar

lokal yang berada di daerah Bogor, pertama-tama dicuci sampai bersih,

kemudian ditiriskan. Setelah itu sayuran dibekukan di dalam freezer

selama satu malam untuk memudahkan proses pengeringan vakum. Waktu

pengeringan dengan freeze dryer dapat berlangsung selama satu sampaidua hari tergantung dari banyaknya sampel. Setelah sampel kering,

dilakukan penghancuran menggunakan blender kering untuk mendapatkan

bubuk sampel berukuran kurang lebih 30 mesh. Sampel yang telah

diblender kemudian disimpan dalam freezer dan siap untuk digunakan

dalam ekstraksi. Tahap persiapan sampel secara ringkas dapat dilihat pada

Gambar 14.

2. Analisis Kadar Air (AOAC, 1984)

Penetapan kadar air merupakan cara untuk mengukur banyaknya

air yang terdapat di dalam suatu bahan pangan. Analisis kadar air

dilakukan pada sampel sayuran segar (awal) dan pada sampel sayuran

setelah freeze drying. Penentuan kadar air ini dilakukan dengan

menggunakan metode pengeringan dengan oven biasa. Prinsip dari metode

ini adalah air dikeluarkan dari sampel dengan cara menguapkan air yang

terdapat dalam bahan pangan.

Persiapan yang perlu dilakukan adalah cawan aluminium yang

akan digunakan terlebih dahulu dikeringkan dalam oven pada suhu 100°C

selama 15 menit kemudian didinginkan dalam desikator selama 10 menit.

Lalu cawan ditimbang dengan menggunakan neraca analitik. Sampel

ditimbang sebanyak kurang lebih 5 gram kemudian dikeringkan dalam


49/140

36

oven selama kurang lebih 6 jam. Setelah itu, didinginkan dalam desikator

kemudian ditimbang. Contoh kembali dikeringkan dalam oven selama 30

menit lalu ditimbang kembali. Perlakuan terakhir ini diulangi terus hingga

diperoleh berat sampel kering yang relatif konstan (berat dianggap konstan

jika selisih berat sampel kering yang ditimbang ≤0,0003 gram).

W – ( W1 – W2 )

Kadar air (%) = x 100 %

W

W = bobot contoh sebelum dikeringkan (g)

W1 = bobot (contoh + cawan) sesudah dikeringkan (g)

W2 = bobot cawan kosong (g)

3. Analisis Total Fenol (Shetty et al., 1995 yang dikutip oleh Ishartani,

2004)

Penentuan total fenol bertujuan mengetahui kandungan senyawa

fenol pada sampel. Sampel kering beku bubuk mula-mula diambil

sebanyak 50.0 mg dan dilarutkan dalam 2.5 ml etanol 95%, kemudian

divorteks. Setelah itu dilakukan sentrifuse terhadap campuran tersebut

selama 5 menit dengan kecepatan putaran 4000 rpm. Supernatan diambil

sebanyak 0.5 ml dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi. Kemudian

ditambahkan 0.50 ml etanol 95%, 2.5 ml aquadest, dan 2.5 ml reagen

Folin Ciocalteu 50%. Campuran tersebut didiamkan dahulu selama

5 menit, lalu ditambahkan 0.5 ml Na2CO3 5% dan divorteks. Setelah itu,

sampel disimpan dalam ruang gelap selama satu jam, lalu dilakukan

pengukuran dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 725 nm.

Prosedur penetuan total fenol dapat dilihat secara ringkas pada Gambar 15.

Standar yang digunakan dalam penentuan total fenol adalah asam

galat. Standar asam galat dibuat dengan variasi konsentrasi antara

50-250 mg/L.


50/140

37

4. Ekstraksi Senyawa Flavonoid dari Sayuran Indigenous (Hertog et al.

(a), 1992)

Tahap ekstraksi sampel diawali dengan pelarutan sebanyak 0.500

atau 1.000 gram sampel kering beku ke dalam 40 ml metanol 62,5% dan

2 g/L TBHQ sebagai antioksidan. Kemudian ditambahkan 10 ml HCl 6M

lalu direfluks selama satu jam pada suhu 50°C. Tujuan penambahan asam

ini adalah untuk menjaga komponen agar tidak terdegradasi dan

perefluksan untuk hidrolisis asam guna memotong gula. Gula yang

menempel pada flavonoid dapat mengganggu pemisahan komponen,

sehingga ikatan tersebut perlu dipotong. Setelah didinginkan ditambahkan

kembali metanol sampai volume larutan menjadi 100 ml. Sebanyak dua

mililiter larutan disaring dengan filter syringe berdiameter 0.45 µm, dansampel tersebut telah siap untuk diinjeksikan ke kolom HPLC. Gambar 16

menunjukkan secara ringkas proses pembuatan ekstrak sampel.

5. Analisis Flavonoid dengan HPLC

a.

Pembuatan larutan standar (Hertog et al. (a), 1992)

Sebanyak 1.5 mg standar yang tersedia dilarutkan dalam 3 ml

metanol 62.5%, sehingga diperoleh standar stock dengan konsentrasi

500 µg/ml. Setelah itu, 2.5 ml dari standar stock dilarutkan dalam 20

ml metanol 62.5% dan 2 g/L TBHQ. Kemudian dicampurkan dengan 5

ml HCl 6M untuk menjaga kondisi asamnya supaya komponen

flavonoid tersebut tidak terdegradasi. Penambahan metanol dilakukan

hingga volume mencapai 50 ml, sehingga konsentrasi yang diperoleh

adalah 25 µg/ml. Larutan standar yang digunakan dalam penelitian ini

terdiri atas lima konsentrasi, yaitu 0.5, 2.5, 10, 20, dan 25 µg/ml.

Pembuatan larutan standar dengan konsentrasi 0.5, 2.5, 10, dan 20

µg/ml dilakukan dengan melakukan pengenceran dari larutan standar

yang memiliki konsentrasi 25µg/ml. Proses pembuatan larutan standar

yang dibutuhkan pada penelitian ini dapat dilihat secara ringkas pada

Gambar 17. Larutan standar campuran dibuat dengan mencampur


51/140

38

kelima standar yang ada, dimana konsentrasi apigenin dibuat menjadi

dua kali konsentrasi standar lainnya.

b. Injeksi larutan standar ke kolom HPLC (Hertog et al. (a), 1992)

Larutan standar dengan berbagai konsentrasi tersebut

diinjeksikan ke kolom HPLC C-18 phase; Develosil ODS-UG-3 yang

memiliki dimensi panjang 75 mm dan diameter dalam 4.6 mm. Fase

gerak yang digunakan adalah 25 % acetonitril di dalam KH2PO4

0.025 M, dengan laju aliran 0,9 ml/menit. Diinjeksikan pula larutan

standar campuran pada berbagai konsentrasi.

c. Pembuatan kurva standar

Hasil dari kromatogram standar pada berbagai konsentrasi

tersebut kemudian dimasukkan ke dalam satu grafik. Dari data-datamasing-masing, dibuat persamaan garis yang akan digunakan pada

perhitungan Limit of Detection masing-masing standar. Dari data-data

kromatogram standar campuran, dibuat persamaan garis yang

digunakan pada perhitungan kandungan komponen flavonoid pada

sampel.

d.

Perhitungan limit deteksi (Rounds dan Nielsen, 2000)

Limit of Detection (LOD) atau limit deteksi diperoleh

dengan cara menginjeksikan masing-masing standar sebanyak sepuluh

kali. Konsentrasi yang digunakan untuk menentukan LOD adalah

konsentrasi yang terndah. Setelah diperoleh kesepuluh area tersebut,

dimasukkan ke dalam persamaan kurva standar masing-masing,

sehingga diperoleh konsentrasi dan standar deviasinya. Besarnya LOD

adalah tiga kali dari nilai standar deviasi.

e.

Injeksi ekstrak sampel ke kolom HPLC (Hertog et al. (a), 1992)

Ekstrak sampel yang telah disaring dengan syringe filter

0.45µm, diinjeksikan ke kolom HPLC C-18 phase; Develosil

ODS-UG-3 yang memiliki dimensi panjang 75 mm dan diameter

dalam 4.6 mm. Fase gerak yang digunakan adalah 25 % acetonitril di

dalam KH2PO4 0.025 M, dengan laju aliran 0,9 ml/menit.


52/140

39

f. Identifikasi flavonoid pada sampel

Hasil dari kromatogram sampel kemudian dibandingkan

dengan kromatogram standar. Penentuan komponen yang terdapat

pada sampel dilihat berdasarkan waktu retensi masing-masing standar.

Dari area yang diperoleh, dihitung konsentrasinya dengan

menggunakan persamaan garis dari kurva standar campuran yang

sudah diperoleh. Selain itu dilakukan pula perhitungan dengan

menggunakan eksternal standar, yaitu dengan membandingkan luas

area komponen pada sampel dengan luas area pada standar campuran.

Standar campuran yang digunakan sebagai eksternal standar adalah

standar campuran dengan konsentrasi yang tertinggi.


53/140

40

Gambar 14. Persiapan sampel

Sampel

Pe

flavonoid dalam krokot

Documents