immulite/immulite 1000. toxoplasma quantitative igg (2006)

Toxoplasma Quantitative IgG

For the Quantitative Measurement of IgG Antibodies to Toxoplasma gondii in Human Serum

For use on the IMMULITE® and IMMULITE® 1000 systems

IMMULITE®/IMMULITE 1000® Toxoplasma Quantitative IgG

2 IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasma Quantitative IgG (PILKTXP-12, 2006-08-08)

English

Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE and IMMULITE 1000 Analyzers — for the quantitative measurement of IgG antibodies to Toxoplasma gondii (toxoplasma) in human serum, as an aid in the determination of serological status to Toxoplasma gondii.

This kit is not FDA-cleared for use in the testing (i.e. screening) of blood or plasma donors.

Catalog Number: LKTXP1 (100 tests), LKTXP5 (500 tests) Test Code: TXP Color: Light Gray CDC Analyte Identifier Code: 6113 CDC Test System Identifier Code: 10159 CLIA Complexity Category: Moderate

Summary and Explanation Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite capable of infecting most mammals, including humans. The organism is transmitted through ingestion of insufficiently cooked meat. Throughout the world, 1 to 90 percent of populations may be infected,7 with 25 to 30 percent of the adult population infected in the United States.3 While toxoplasmosis may be manifested in several forms, infections are usually clinically inapparent, and latent infections usually persist for life.2 Overt clinical symptoms are similar to infectious mononucleosis, with lymphadenopathy, fever, headache, malaise and sometimes pneumonia and myocarditis.6

As with other latent infections, acute toxoplasma infection can pose a serious threat to immunocompromised individuals and newborns who acquire the infection in utero. Immunosuppressed patients may develop encephalitis, myocarditis or pneumonitis.3 Congenital infections usually result as a consequence of asymptomatic acute maternal infection. This infection can cause premature delivery, spontaneous abortion or

stillbirth.4,6 Neonates may manifest chorioretinitis, hydrocephaly, microcephaly, cerebral calcification and psychomotor retardation.1 The majority of congenitally infected children will not exhibit any symptoms until later in life.4

Management of toxoplasmosis requires serological monitoring of infected individuals,3 as the organism is not readily available for culture. Quantitative testing for the presence of toxoplasma IgG can be useful to determine prior infection and indicate reactivation of the infection. Accurate diagnostic information is important, particularly during pregnancy, as treatment with spiramycin can reduce the risk to the fetus.5

Principle of the Procedure IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasma Quantitative IgG is a solid-phase, sequential chemiluminescent immunoassay. Incubation Cycles: 2 × 30 minutes.

Specimen Collection The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Samples which are cloudy or have particulate material should be clarified by low-speed centrifugation. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasma Quantitative IgG has not been tested with all possible variations of tube types. Consult the section on Alternate Sample

IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasma Quantitative IgG (PILKTXP-12, 2006-08-08) 3

Types for details on tubes that have been tested. Volume Required: 10 µL of the prediluted patient sample (1-in-21 dilution). (Sample cup must contain at least 100 µL more than the total volume required.) Storage: 3 days at 2–8°C or 6 months at –20°C.13 Patient Sample Dilution: Serum samples must be prediluted 1-in-21 in IgG/IgM Sample Diluent (LIGZ2). This dilution must be performed manually e.g. by adding 20 µL pf patient sample to 400 µL of Sample Diluent (LIGZ2, supplied in the kit). Alternatively, the IMMULITE 1000 Windows® system performs the dilution on board, automatically, using LIGW (provided in the IgG/IgM Sample Diluent Module, L1KIGW1,5). Printed results have been corrected for the 1-in-21 dilution.

Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. Reagents: Store at 2–8°C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dL, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. The bead is coated with inactivated toxoplasma antigen. However, caution is advised because of the possible presence of residual organism when working with, or disposing of, the materials supplied. The anti-toxoplasma IgG results determined for a given specimen with

assays from different manufacturers can vary due to differences in assay methods and reagent specificity. Therefore, the results reported by the laboratory to the physician should include: "The following results were obtained with the IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasma Quantitative IgG EIA. Results obtained from other manufacturers' assay methods may not be used interchangeably."

Materials Supplied Components are a matched set. The barcode labels are needed for the assay.

Toxoplasma Quantitative IgG Test Units (LTXP1) Each barcode-labeled unit contains one bead coated with inactivated, partially purified Toxoplasma gondii antigen (RH strain tachyzoites from mouse peritoneum). Stable at 2–8°C until expiration date. LKTXP1: 100 units. LKTXP5: 500 units. Allow the Test Unit bags to come to room temperature before opening. Open by cutting along the top edge, leaving the ziplock ridge intact. Reseal the bags to protect from moisture.

Toxoplasma Quantitative IgG Reagent Wedges (LTXPA, LTXPB) With barcodes. LTXPA: 7.5 mL of a protein-based buffer, with preservative. LTXPB: 7.5 mL alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to monoclonal murine anti-human IgG antibody in buffer, with preservative. Store capped and refrigerated: stable at 2–8°C until expiration date. Recommended usage is within 30 days after opening when stored as indicated. LKTXP1: 1 set. LKTXP5: 5 sets.

Toxoplasma Quantitative IgG Adjustors (LTXPL, LTXPH) Two vials (Low and High), 4 mL each, of human serum with IgG reactive to toxoplasma, in buffer, with preservative. (No predilution is required.) Stable at 2–8°C for 14 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at –20°C. LKTXP1: 1 set. LKTXP5: 2 sets.


Toxoplasma Quantitative IgG Controls (LTXPC1, LTXPC2, LTXPC3) Three vials (Negative, Low Positive and Positive), 2 mL each. LTXPC1 (Negative Control): One vial containing human serum with IgG nonreactive to toxoplasma, with preservative. LTXPC2, LTXPC3 (Low Positive Control, Positive Control): Two vials containing human serum with IgG reactive to toxoplasma, with preservative. Stable at 2–8°C for 14 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at –20°C. LKTXP1: 1 set. LKTXP5: 2 sets. IMMULITE: Toxoplasma IgG controls require the same manual 1-in-21 predilution as patient samples, with IgG/IgM Sample Diluent (LIGZ2). IMMULITE 1000: The IMMULITE 1000 software performs automatic on-board dilution of patient and control samples. Enter controls as controls. Refer to the control insert for concentration levels.

IgG/IgM Sample Diluent (LIGZ2) For the manual dilution of patient samples and controls. 100 mL nonhuman protein/buffer matrix, with preservative. Stable at 2–8°C for 30 days after opening, or 6 months (aliquotted) at –20°C. LKTXP1: 1 vial. LKTXP5: 3 vials. For on-board dilution of patient samples using IMMULITE 1000 Windows®, refer to the Kit Components Supplied Separately section.

Kit Components Supplied Separately

IgG/IgM Sample Diluent Module (L1KIGW1,5) Required for the on-board dilution of patient samples and controls using IMMULITE 1000 Windows®. Sample Diluent wedges (LIGW) containing concentrated (2.5X) non-human protein/buffer matrix, with preservative. Stable at 2–8°C until expiration date. L1KIGW1: 2 Wedges. L1KIGW5: 10 Wedges. LSUBX: Chemiluminescent Substrate LPWS2: Probe Wash Module LKPM: Probe Cleaning Kit LCHx-y: Sample Cup Holders (barcoded)

LSCP: Sample Cups (disposable) LSCC: Sample Cup Caps (optional) DCHS: Dilution Cup Holders (barcoded) for IMMULITE 1000 Windows® on-board dilutions. Also Required Sample transfer pipets, distilled or deionized water.

Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE or IMMULITE 1000 Operator's Manual. See the IMMULITE or IMMULITE 1000 Operator's Manual for: preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Visually inspect each Test Unit for the presence of a bead before loading it onto the system. Note that both Reagent Wedges A and B must be loaded on the carousel to run this assay. For IMMULITE 1000 Windows®, the Sample Diluent Wedge must also be loaded on the carousel. Recommended Adjustment Interval: 4 weeks. Quality Control Samples: The controls supplied with the kit should be used as quality control material to monitor assay performance. The negative and positive controls are intended to monitor for substantial reagent failure. The positive control provided will not ensure precision of the cut-off. In addition to the controls provided, users may wish to run additional controls to cover the upper range of the assay. Additional controls may be tested in accordance with guidelines or requirements of local, state and/or federal regulations or accrediting organizations.12

It is also recommended that known reactive and nonreactive specimens be run periodically to assure pipetting accuracy for the dilution step.

Interpretation of Results IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasma Quantitative IgG assay is standardized in terms of the World Health Organization's


Third International Standard for Anti-Toxoplasma Serum. The assay's cutoff is determined from representative positive and negative samples (confirmed by an ELISA method) using the ROC (Receiver Operating Characteristic) technique. Positive: A result greater than or equal to 8 IU/mL is indicative of a past infection. Negative: A result less than 6.5 IU/mL is considered to be negative. Results less than 6.5 IU/mL should be reported as Negative only, and no numerical concentration should be reported. Indeterminate: A result greater than or equal to 6.5 IU/mL and less than 8 IU/mL is considered indeterminate. Samples greater than 250 IU/mL should be reported as "greater than 250 IU/mL". Specimens reporting a result of greater than 250 IU/mL, when tested at the required 1-in-21 dilution, may be further diluted with the IgG/IgM Sample Diluent. The presence of IgG antibodies to Toxoplasma gondii is an indication of previous exposure to the organism. A single specimen can be used to estimate the serological status of the individual. A result of "indeterminate" indicates an intermediate level of Toxoplasma gondii antibodies in the sample: the sample should therefore be retested. Samples which still test as "indeterminate" should be examined by an alternate method, or a second sample should be collected, if possible, within a reasonable period of time (e.g. one week). Any interpretation of the results is not recommended if the positive or negative control falls outside the range specified in the Quality Control section. The magnitude of the reported IgG level cannot be correlated to an endpoint titer. Reports by the laboratory to the physician should include: "The following results were obtained with the IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasma Quantitative IgG EIA. Values obtained from other manufacturers' assay methods may not be used interchangeably."

Expected Values Individuals with the toxoplasma organism may not exhibit detectable levels of IgG antibody in the early stages of infection.

Levels of IgG antibody to Toxoplasma gondii begin to rise one or two weeks after infection. Peak levels are reached in 6 to 8 weeks, then gradually decline over a period of months or even years. Low titers are generally detectable for life. The antibody titer does not correlate with severity of illness.2,4,6 The prevalence of IgG antibody to Toxoplasma gondii will vary with age and geographical location. Studies were conducted with specimens from presumed healthy, asymptomatic subjects from the northwestern US. The subjects consisted of 69 individuals with ages ranging from 15 to 64 years. (Samples had been previously collected and stored frozen at –20°C). The prevalence of toxoplasma reactivity, based on the results from the IMMULITE Toxoplasma Quantitative IgG assay, was found to be 56% at this geographical location. Additional studies were conducted with specimens from 42 pregnant women from the same geographical location, with ages ranging from 16 to 41 years. (Samples had been previously collected and stored frozen at –20°C). The prevalence of toxoplasma reactivity for this specific population was 5%, based on the results from the IMMULITE Toxoplasma Quantitative IgG assay. (See “Expected Values” graph.) Consider these limits as guidelines only. Each laboratory should establish its own reference ranges.

Limitations The use of IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasma Quantitative IgG to diagnose recent infection by testing paired sera has not been validated. The results of the test must be taken within the context of the patient's clinical history, symptomology and other laboratory findings. The presence of IgG antibodies in a single specimen is not sufficient to distinguish between active and past infection. Patients suspected of having a primary or active toxoplasma infection should be tested for the presence of IgM antibodies to Toxoplasma gondii. For the determination of seroconversion from nonreactive to reactive, a second


serum sample should be drawn three to four weeks after the acute, nonreactive sample, during the convalescent stage of the infection. The acute phase sample should be stored and tested in parallel with the convalescent sample. Individuals with an acute toxoplasma infection may not exhibit any detectable IgG antibodies at the early stage of infection. The results in HIV patients, in patients undergoing immunosuppressive therapy, or in patients with other disorders leading to immunosuppression, should be interpreted with caution. The performance characteristics of this assay have not been established for use with specimens from neonates, cord blood, pretransplant patients, or body fluids other than serum, such as urine, saliva or amniotic fluid. Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings.

Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed in IU/mL. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Calibration Range: 5.0 to 250 IU/mL. Standardized in terms of WHO 3rd IS for Anti-Toxoplasma Serum, Human.

Analytical Sensitivity: ≤ 5.0 IU/mL. Precision: Statistics were calculated for controls and samples processed in 5

replicates each on five separate days. (See “Intraassay Precision” table and “Interassay Precision” table.) Note that the negative control and Sample 1 were consistently below 5 IU/mL (the lower limit of the assay's calibration range) for all replicates in every run. Specificity: The specificity of IMMULITE Toxoplasma Quantitative IgG assay was evaluated by testing 50 specimens positive for cytomegalovirus (CMV), varicella-zoster virus (VZV), Epstein-Barr virus (EBV), Mycoplasma pneumoniae and parvovirus B19. With these specimens, IMMULITE Toxoplasma Quantitative IgG and a commercially available enzyme immunoassay for Toxoplasma IgG (Kit D) showed 96% agreement (48/50). Alternate Sample Type: To assess the effect of alternate sample types, blood was collected from 16 volunteers into plain, heparinized and Becton Dickinson SST® vacutainer tubes. All samples were assayed by the IMMULITE Toxoplasma Quantitative IgG procedure, with the following results. (Heparin) = 1.02 (Serum) + 0.13 IU/mL r = 1.00

(SST) = 0.98 (Plain Tubes) – 0.06 IU/mL r = 1.00

Means: 4.4 IU/mL (Serum) 4.6 IU/mL (Heparin) 4.2 IU/mL (SST)

In another experiment, blood was collected from 16 laboratory volunteers into plain and EDTA and vacutainer tubes. All samples were assayed by the IMMULITE Toxoplasma Quantitative IgG procedure, with the following results. (EDTA) = 0.93 (Serum) – 0.003 IU/mL r = 1.00 Means: 5.3 IU/mL (EDTA) 5.6 IU/mL (Serum)

Clinical Performance The clinical performance of the IMMULITE Toxoplasma Quantitative IgG assay was studied using a total of 199 serum specimens, assayed at each of three sites, two of which were outside the US. Of the 199 specimens (previously collected and stored frozen at –20°C), 61 were obtained


from women who presented for obstetric and gynecological examination, 42 were obtained from pregnant women, and the remainder were obtained from patients with miscellaneous diseases and conditions (AIDS, anemia, arthritis, fatigue, headache, lymphoma, meningitis, pneumonia and others). There were 37 male and 162 female subjects, with ages ranging from 15 to 68 years. One of the retrospective studies was conducted at a university medical center in the northwestern US. The 199 specimens were evaluated nonconcurrently with the IMMULITE Toxoplasma Quantitative IgG procedure and Kit A, a commercially available Toxoplasma IgG enzyme-linked fluorescent immunoassay (ELFA).

IMMULITE Toxoplasma Quantitative IgG

Kit A

Pos

Neg

Relative Sensitivity

Relative Specificity

Positive 52 2

Negative 0 145

96.3%

100%

Agreement: 99.0% 95% Confidence Limits for Relative Sensitivity and Specificity, respectively: 87.3% – 99.5% and 97.5% – 100%. (Confidence limits by exact test.)

The two discordant specimens, negative by IMMULITE but positive by Kit A, were further evaluated by Kit B, a commercially available Toxoplasma IgG microparticle enzyme immunoassay (MEIA), and found to be positive. In the second retrospective study, conducted outside the US, 194 of the 199 specimens (insufficient sample volume for 5 specimens) were evaluated with the IMMULITE Toxoplasma Quantitative IgG assay and Kit B.


Kit B

Pos

Neg



Positive 46 5

Negative 2 141

90.2%

98.6%

Agreement: 96.4% 95% Confidence Limits for Relative Sensitivity and Specificity, respectively: 78.6% – 96.7% and 95.0% – 99.8%. (Confidence limits by exact test.)

Of the seven discordant specimens, three of the five negative by IMMULITE but

positive by Kit B were negative by Kit A. The two specimens positive by IMMULITE but negative by Kit B were positive by Kit A. In the third retrospective study, also conducted outside the US, 160 of the 199 specimens (insufficient sample volume for 39 specimens) were evaluated with the IMMULITE Toxoplasma Quantitative IgG assay and Kit C, a commercially available enzyme immunoassay.


Kit C

Pos

Neg



Positive 32 2

Equivocal 0 4

Negative 2 120

94.1%

98.4%

Agreement: 97.4% 95% Confidence Limits for Relative Sensitivity and Specificity, respectively: 80.3% – 99.3% and 94.2% – 99.8%. (Confidence limits by exact test).

The two cases positive by the IMMULITE but negative by Kit C, were positive by Kit A. Of the two cases negative by IMMULITE but positive by Kit C, one was positive by Kit A and the other negative by Kit A. The four cases negative by IMMULITE but equivocal by Kit C were all negative by Kit A. Thus, the IMMULITE results agree with Kit A in seven of the eight cases of discordance with Kit C.

References 1) Daffos F. Prenatal management of 746 pregnancies at risk for congenital toxoplasmosis. N Engl J Med 1988;318: 271-5. 2) Krick JA, Remington JS. Toxoplasmosis in the adult: an overview. N Engl J Med 1978;298: 550-3. 3) Krogstad DJ, et al. Blood and tissue protozoa. In: Lennette EH, et al, editors. Manual of clinical microbiology. 4th ed. Washington, D.C.: American Society for Microbiology, 1985: 612-30. 4) McCabe RE, Remington JS. Toxoplasma gondii. In: Mandell, Douglas, Bennett, editors. Principles and practice of infectious diseases. 2nd ed. New York: John Wiley, 1985. 5) Jeannel D, et al. What is known about the prevention of congenital toxoplasmosis? Lancet 1990;336:359-61. 6) Remington JS. McLeod R. Toxoplasmosis. In: Braude, editor. Microbiology and infectious diseases. Philadelphia: Saunders, 1981. 7) Walls KW. Toxoplasmosis. In: Balows A, et al, editors. Laboratory diagnosis of infectious diseases. New York: Springer-Verlag, 1988: 998-1017. 8) National Committee for


Clinical Laboratory Standards. Procedures for the collection of diagnostic blood specimens by venipuncture; approved standard. 4th ed. NCCLS Document H3-A4, Wayne, PA: NCCLS, 1998. 9) Baltz ML, Searcy RL. Clinical significance and advanced serologic diagnosis of ToRCH infections. Am Clin Lab 1994 (Mar/Apr): 18-23. 10) Wilson M, et al. Seroepidemiology of toxoplasmosis in the United States. Abstract presented at the American Society for Microbiology, May 1994. 11) Approved standard procedures for the handling and processing of blood specimens, NCCLS Document H18-A, 1991. 12) International Quality Control testing: principles and definitions, NCCLS Document C24-A, 1991. 13) Tietz NW, editor. Clinical guide to laboratory tests. 3rd ed. Philadelphia: WB Saunders, 1995:358.

Technical Assistance In the United States, contact DPC's Technical Services department. Tel: 800.372.1782 or 973.927.2828 Fax: 973.927.4101. Outside the United States, contact your National Distributor. The Quality System of Diagnostic Products Corporation is registered to ISO 13485:2003.

Tables and Graphs

Intraassay Precision (IU/mL)

Mean1 SD2 CV3

Pos. Control4 18 0.95 5.3%

Neg. Control5 <5 — —

1 <5 — —

2 8.3 0.81 9.8%

3 45 3.9 8.7%

4 83 5.1 6.1%

5 122 14 11%

Interassay Precision (IU/mL)

Mean1 SD2 CV3

Pos. Control4 18 1.3 7.2%

Neg. Control5 <5 — —

1 <5 — —

2 8.3 0.85 10.2%

3 45 6.9 15%

4 83 7.5 9.0%

5 122 16 13%

Expected Values

Reactivity: IML Toxoplasma Quantitative IgG

Asymptomatic Pregnant0%

20%

40%

60%

80%

100%ReactiveNon-Reactive

n = 69 n = 42

Deutsch. Intraassay Precision: 1Mittelwert, 2S (Standardabweichung), 3CV (Variationskoeffizient), 4Positiv-Kontrolle, 5Negativ-Kontrolle. Interassay Precision: 1Mittelwert, 2S (Standardabweichung), 3CV (Variationskoeffizient), 4Positiv-Kontrolle 5Negativ-Kontrolle. Reactivity: IML Toxoplasma Quantitative IgG: IML Toxoplasma Quantitativ IgG, Reactive: reaktiv, Non-Reactive: nicht-reaktiv, Asymptomatic: Asymptomatic, Pregnant: Schwanger.

Español. Intraassay Precision: 1Media, 2DS, 3CV, 4Pos. Control, 5Neg. Control. Interassay Precision: 1Media, 2DS, 3CV, 4Pos. Control, 5Neg. Control. Reactivity: IML Toxoplasma Quantitative IgG: IML Toxoplasma Quantitative IgG, Reactive: Reactive, Non-Reactive: Non-Reactive, Asymptomatic: Asymptomatic, Pregnant: Pregnant.

Français. Intrraassay Precision: 1Moyenne, 2SD, 3CV, 4Pos. Control, 5Neg. Control. Interassay Precision: 1Moyenne, 2SD, 3CV, 4Pos. Control, 5Neg. Control. Reactivity: IML Toxoplasma Quantitative IgG: IML Toxoplasma Quantitative IgG, Reactive: Reactive, Non-Reactive: Non-Reactive, Asymptomatic: Asymptomatic, Pregnant: Pregnant.


Italiano. intraassay Precision: 1Media, 2SD (Deviazione Standard), 3CV (Coefficiente di Variazione), 4Pos. Control, 5Neg. Control. Interassay Precision: 1Media, 2SD (Deviazione Standard), 3CV (Coefficiente di Variazione), 4Pos. Control, 5Neg. Control. Reactivity: IML Toxoplasma Quantitative IgG: IML Toxoplasma Quantitative IgG, Reactive: Reactive, Non-Reactive: Non-Reactive, Asymptomatic: Asymptomatic, Pregnant: Pregnant.

Português. Intraassay Precision: 1Média, 2Desvio padrão, 3Coeficiente de variação, 4Pos. Control, 5Neg. Control. Interassay Precision: 1Média, 2Desvio padrão, 3Coeficiente de variação, 4Pos. Control, 5Neg. Control. Reactivity: IML Toxoplasma Quantitative IgG: IML Toxoplasma Quantitative IgG, Reactive: Reactive, Non-Reactive: Non-Reactive, Asymptomatic: Asymptomatic, Pregnant: Pregnant.

Deutsch

Toxoplasma IgG quantitativ Anwendung: Für in-vitro-diagnostische Tests mit dem Analysegerät IMMULITE und IMMULITE 1000 zum quantitativen Nachweis von IgG-Antikörpern gegen Toxoplasma gondii (Toxoplasma) in Serum als Hilfestellung zur Bestimmung des serologischen Status gegen Toxoplasma gondii.

Dieses Testsystem ist von der US-amerikanischen Lebensmittel- und Medikamentenbehörde FDA nicht für Screening-Tests mit Blut- oder Plasmaspendern freigegeben.

Artikelnummern: Catalog Number: LKTXP1 (100 Tests), LKTXP5 (500 Tests) Testcode: TXP Farbe: hellgrau

Klinische Relevanz Toxoplasma gondii ist ein obligater intrazellulärer Parasit, der die meisten Säugetiere – einschließlich Menschen – befällt und zu Infektionen führt. Der Erreger wird durch den Verzehr von ungenügend gekochtem Fleisch übertragen. Weltweit sind möglicherweise zwischen 1 und 90 Prozent aller Populationen infiziert 7, in den USA sind es 25–30 % der erwachsenen Bevölkerung.3 Toxoplasmosen können sich in

verschiedenen Formen manifestieren, normalerweise sind die Infektionen jedoch klinisch unauffällig und in ihrer latenten Form lebenslang präsent.2 Zu den offenen klinischen Symptomen zählen infektiöse Mononukleosen mit Lymphadenopathien, Fieber, Kopfschmerzen, Unwohlsein und gelegentlich auch Lungenentzündungen und Myokarditiden.6

So wie andere latente Infektionen können auch akute Toxoplasmosen bei immungeschwächten Patienten und in utero infizierten Neugeborenen eine ernsthafte Bedrohung darstellen. Bei immunsupprimierten Patienten können Enzephalitis, Myokarditis oder Pneumonitis entstehen.3 Kongenitale Infektionen sind normalerweise das Resultat einer asymptomatischen akuten Infektion der Mutter. Diese Infektionen könen zu Frühgeburten, Spontanaborten oder Totgeburten führen.4,6 Bei Neugeborenen können Chorioretinitiden, Hydrozephalie, Mikrozephalie, zerebrale Kalkablagerungen sowie psychomotorische Behinderungen auftreten.1 Die Mehrzahl der kongenital infizierten Kinder zeigt erst im späteren Leben Symptome.4

Da der Erreger von Toxoplasmosen nicht ohne weiteres kultiviert werden kann, müssen die infizierten Patienten serologisch überwacht werden.3 Quantitative Bestimmungen von Toxoplasma-IgG können nützlich sein, um frühere und reaktivierte Infektionen anzuzeigen. Genaue diagnostische Daten sind vor allem bei Schwangerschaften wichtig, da eine Behandlung mit Spiramycin das Risiko für den Fetus herabsetzen kann.5

Methodik Der IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasma IgG quantitativ ist ein Festphasen-, sequenzieller Chemilumineszens-Immunoassay. Inkubationszyklen: 2 × 30 minuten.

Probengewinnung Der Einsatz einer Ultrazentrifuge wird zur Klärung von lipämischen Proben empfohlen.


Trübe oder partikelhaltige Proben sollten bei niedriger Geschwindigkeit zentrifugiert werden, bis sie klar sind Die Zentrifugation der Serumproben vor dem völligen Abschluss der Gerinnung kann zu Fibringerinnseln führen. Um fehlerhaften Analysenergebnissen infolge von Gerinnseln vorzubeugen, ist sicherzustellen, dass die Gerinnung vor der Zentrifugation der Proben vollständig abgeschlossen ist. Insbesondere Proben von Patienten unter Antikoagulantien-therapie können eine verlängerte Gerinnungszeit aufweisen. Blutentnahmeröhrchen von verschiedenen Herstellern können differierende Werte verursachen. Dies hängt von den verwendeten Materialien und Additiven (Gel oder physische Trennbarrieren, Gerinnungsaktivatoren und /oder Antikoagulantien) ab. IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasma IgG quantitativ sind nicht mit allen möglichen Röhrchenvariationen ausgetestet worden. Details der getesteten Röhrchenarten sind dem Kapitel "Alternative Probenarten" zu entnehmen. Erforderliche Menge: 10 µl der vorverdünnten Patientenprobe (1:21 Verdünnen). (Inhalt der Probenschale muss mindestens 100 µl über der erforderlichen Gesamtmenge liegen.) Lagerung: 3 Tage bei 2–8°C oder 6 Monate bei –20°C.13 Verdünnung der Patientenproben: Serumproben müssen 1:21 im IgG/IgM Probenverdünnungsreagenz (LIGZ2) vorverdünnt werden. Diese Verdünnung ist manuell durchzuführen, z.B. durch Zugabe von 20 µl der Patientenprobe in 400 µl Probenverdünnungsreagenz (LIGZ2, im Kit enthalten). Alternativ, bei Verwendung des IMMULITE 1000 Windows, erfolgt die Verdünnung automatisch on-board. Das System verwendet LIGW, Inhalt des IgG/IgM Probenverdünnungsreagenz-Moduls (L1KIGW1,5). Die ausgedruckten Resultate entsprechend der 1:21 Verdünnung korrigiert sind.

Hinweise und Vorsichtsmaßnahmen Zur In-vitro-Diagnostik. Reagenzien: Bei 2–8°C lagern. Unter Einhaltung der geltenden gesetzlichen Vorschriften entsorgen. Die generell geltenden Vorsichtsmaßnahmen sind einzuhalten und alle Komponenten als potenziell infektiös zu behandeln. Alle aus menschlichem Blut gewonnenen Materialien wurden auf Syphilis, Antikörper gegen HIV-1 und HIV-2, Hepatitis-B-Oberflächenantigen und Hepatitis-C-Antikörper untersucht und negativ befundet. Bestimmten Komponenten wurde Natriumazid (<0,1 g/dl) hinzugefügt. Um die Bildung von explosiven Metallaziden in Blei- und Kupferrohren zu vermeiden, sollten die Reagenzien nur zusammen mit großen Wassermengen in die Kanalisation gespült werden. Chemilumineszenz-Substrat: Kontamination und direkte Sonneneinstrahlung vermeiden. Siehe Packungsbeilage. Wasser: Destilliertes oder deionisiertes Wasser verwenden. Die Phase ist mit inaktiviertem Toxoplasma-Antigen beschichtet. Wegen des potenziellen Vorhandenseins überlebender Mikroorganismen ist jedoch beim Arbeiten mit und beim Entsorgen von den im Lieferumfang enthaltenen Materialien Vorsicht geboten. Unterschiede in der jeweiligen Methodik oder der Spezifität der Reagenzien könnten jedoch dazu führen, das die mit Testsystemen von verschiedenen Herstellern ermittelten Anti-Toxoplasmose-IgG-Ergebnisse für dieselben Proben nicht einheitlich sind. Die vom Labor an den Arzt weitergegebenen Ergebnisse sollten daher den folgenden Passus enthalten: „Die folgenden Ergebnisse wurden mit dem IMMULITE/IMMULITE 1000-Testsystem zur quantitativen Bestimmung von Toxoplasmose-IgG erzielt." Sie sind nicht mit den Ergebnissen der Testsysteme anderer Hersteller austauschbar.


Im Lieferumfang enthalten Die Komponenten sind aufeinander abgestimmt. Die Barcode-Etiketten werden für den Assay benötigt.

Toxoplasma quantitativ IgG Testeinheiten (LTXP1) Jede mit Barcode-Etikette versehene Einheit enthält eine mit beschichtet mit inaktiviertem, teilweise gereinigtem Toxoplasma-gondii-Antigen (Tachyzoiten, Stamm RH, aus Mausperitoneum). beschichtete Kugel. Bei 2–8°C bis zum Ablaufdatum haltbar. LKTXP1: 100 Testeinheiten. LKTXP5: 500 Testeinheiten. Verpackte Testeinheiten vor dem Öffnen stehen lassen, bis sie Zimmertemperatur erreicht haben. Oben entlang der Kante aufschneiden, ohne den Plastikverschluss zu beschädigen. Verpackungen wieder dicht verschließen, damit der Inhalt trocken bleibt.

Toxoplasma quantitativ IgG – Reagenzbehälter (LTXPA, LTXPB) Mit Barcodes. LTXPA: 7,5 ml einer proteinbasierten Pufferlösung (mit Konservierungsmittel). LTXPB: 7,5 ml mit alkalischer Phosphatase (Rinderkalbsdarm) konjugierter monoklonaler antihumaner IgG Mausantikörper in Pufferlösung (mit Konservierungsmittel). Verschlossen und gekühlt aufbewahren: Bei 2–8°C bis zum Ablaufdatum haltbar. Bei entsprechender Lagerung beträgt die empfohlene Aufbrauchsfrist nach dem Öffnen 30 Tage. LKTXP1: 1 Set. LKTXP5: 5 Sets.

Toxoplasma quantitativ IgG - Kalibratoren (LTXPL, LTXPH) Zwei Fläschchen (niedrig und hoch) mit 4 ml Tosoplasma-reaktivem IgG in einer Pufferlösung (mit Konservierungsmittel) (Muss nicht vorverdünnt werden.) 14 Tage nach dem Öffnen bei 2–8°C haltbar oder 6 Monate bei –20°C (aliquotiert). LKTXP1: 1 Set. LKTXP5: 2 Sets.

Toxoplasma quantitativ IgG Kontrollen (LTXPC1, LTXPC2, LTXPC3) Drei Fläschchen (Negative, Schwachpositiv und Positiv) jeweils mit 2 ml Kontrollen. LTXPC1 (Negativkontrolle): Ein Fläschchen Humanserum mit Toxoplasma-nichtreaktivem IgG (mit

Konservierungsmittel). LTXPC2, LTXPC3 (Schwachpositivkontrolle, Positiv-kontrolle): Zwei Fläschchen Humanserum mit Toxoplasma-reaktivem IgG (mit Konservierungsmittel). 14 Tage nach dem Öffnen bei 2–8°C haltbar oder 6 Monate bei –20°C (aliquotiert). LKTXP1: 1 Set. LKTXP5: 2 Sets. IMMULITE: Für die Toxoplasma IgG -Kontrollen ist die gleiche manuelle 1- in-21- Vorverdünnung mit der IgG/IgM-Probenverdünner wie für die Patientenproben erforderlich (LIGZ2). IMMULITE 1000: Die IMMULITE 1000 Software führt eine automatische on-board-Verdünnung der Patienproben und der Kontrollen durch. Kontrollen als Kontrollen eingeben. Kontrollen als Kontrollen eingeben. Die Konzentrationen entnehmen Sie bitte der Beilage zu den Kontrollen.

IgG/IgM–Verdünnungspuffer (LIGZ2) Zum manuellen Verdünnen der Patientenproben und Kontrollen. 100 ml Nichthumane Protein/Puffermatrix mit Konservierungsmittel. 30 Tage nach dem Öffnen bei 2–8°C oder 6 Monate bei –20 °C haltbar (aliquotiert). LKTXP1: 1 Fläschchen. LKTXP5: 3 Fläschchen. Für On-board-Verdünnungen mit IMMULITE 1000 Windows® von Patientenproben ist die Liste der separat erhältlichen Testsystem-Komponenten heranzuziehen.

Separat erhältliche Testsystem-Komponenten

IgG/IgM Probenverdünnungsreagenz-Modul (L1KIGW1,5) Erforderlich für die on-board Verdünnung der Patientenproben und Kontrollen bei Verwendung des Immulite 1000 Windows. Probenverdünnungsreagenz-Behälter (LIGW) enthalten konzentrierte (2,5fach) nicht-humane Protein/Puffer Matrix mit Konservierungsmittel. Haltbar bei 2-8°C bis zum Verfallsdatum. L1KIGW1: 2 Behälter. L1KIGW5: 10 Behälter. LSUBX: Chemilumineszenz-Substratmodul LPWS2: Waschmodul


LKPM: Reinigungsmodul LCHx-y: Barcodierte Probenträger LSCP: Einmal-Probenröhrchen LSCC: Deckel für Probenröhrchen DCHS: Verdünnungsgefäßträger (barcodiert) für die IMMULITE 1000 Windows on-board-Verdünnung. Ebenfalls benötigt: Transferpipetten für die Proben; destilliertes bzw. deionisiertes Wasser.

Testdurchführung Für eine optimale Funktion des Gerätes ist unbedingt zu beachten, dass die Wartungen, wie im IMMULITE oder IMMULITE 1000-Handbuch beschrieben, regelmäßig durchgeführt werden. Das Handbuch für das IMMULITE bzw. IMMULITE 1000 enthält die Anweisungen für: Vorbereitung, Geräteeinstellungen, Verdünnungen, Kalibrierung, Testdurchführung und Qualitätskontrollen. Überprüfen Sie jedes Testeinheit auf das Vorhandensein der Polystyrol-Kugel vor dem Einsetzen in das Gerät. Beachten Sie, dass zur Durchführung dieses Tests beide Reagenzbehälter (A und B) auf das Karussell geladen werden müssen. Beim IMMULITE 1000 Windows muss der Probenverdünnungsreagenz-Behälter ebenfalls auf dem Reagenzienkarussell platziert sein. Empfohlenes Kalibrationsintervall: 4 Wochen. Proben zur Qualitätskontrolle: Die im Lieferumfang enthaltenen Kontrolle(n) verwenden. Die Negativ- und Positivkontrollen dienen zur Überwachung der Reagenzien auf wesentliche Mängel. Die gelieferte Positivkontrolle eignet sich nicht dazu, die Präzision des Cutoff sicherzustellen. Zusätzlich zu den gelieferten Kontrollen können zur Abdeckung des höheren Messbereiches weitere Kontrollen eingesetzt werden. Entsprechend den Richtlinien bzw. Vorschriften von regionalen bzw. staatlichen Behörden oder zertifizierenden Stellen können weitere Kontrollen getestet werden.12 Ferner empfiehlt es sich, regelmäßig Testansätze mit bekannten reaktiven und nichtreaktiven Proben durchzuführen, um

die Pipettiergenauigkeit für den Verdünnungsschritt zu gewährleisten.

Interpretation der Ergebnisse Das quantitative IMMULITE/IMMULITE 1000-Testsystem zur quantitativen Bestimmung von Toxoplasma-IgG ist entsprechend der Dritten Internationalen WHO-Norm für Anti-Toxoplasma-Serum standardisiert. Der Cutoff des Testsystems wird mit Hilfe der ROC-Technik (Receiver Operating Characteristic) aus repräsentativen positiven und negativen Proben (verifiziert mittels ELISA) ermittelt.

Positiv: Ein Ergebnis von ≥ 8 IU/ml weist auf eine vergangene Infektion hin. Negativ: Ein Ergebnis von unter 6,5 IU/ml gilt als negativ. Ergebnisse von unter 6,5 IU/ml sollten lediglich als negativ ausgewiesen werden, ohne dabei die gemessene Konzentration numerisch darzustellen. Grenzwertig: Ein Ergebnis von ≥ 6,5 IU/ml und < 8 IU/ml gilt als grenzwertig. Proben mit mehr als 250 IU/ml sollten dementsprechend (d.h. „höher als 250 IU/ml“) ausgewiesen werden. Proben, die bei der erforderlichen Autoverdünnung von 1:21 mehr als 250 IU/ml aufweisen, können mit dem IgG/IgM-Probenverdünner weiterverdünnt werden. Sind IgG-Antikörper gegen Toxoplasma gondii vorhanden, so deutet dies auf eine frühere Exposition gegen den Erreger hin. Einzelproben eignen sich ausschließlich zur Bewertung des serologischen Status der betreffenden Person. Ein „indeterminate“ // „unentschiedenes“ Ergebnis weist auf einen Zwischenwert bei den Antikörpern gegen Toxoplasma gondii in der Probe hin: Die Probe sollte daher erneut getestet werden. Ergebnis bringen, sind entweder mit einer alternativen Methode zu testen, oder, sofern dies möglich ist, innerhalb eines vernünftigen Zeitraums (z.B. eine Woche) mit einer neu entnommenen zweiten Probe zu ergänzen. Von einer Interpretation der Ergebnisse wird abgeraten, wenn die Positiv- oder Negativkontrollen außerhalb des im Abschnitt „Quality Control“ //


„Qualitätskontrolle“ angegebenen Bereichs liegen. Die Größenordnung der ausgewiesenen IgG-Konzentration kann nicht mit einem Endtiter korreliert werden. Die vom Labor an den Arzt weitergegebenen Ergebnisse sollten daher den folgenden Passus enthalten: „Die folgenden Ergebnisse wurden mit dem IMMULITE/IMMULITE 1000-Testsystem zur quantitativen Bestimmung von Toxoplasmose-IgG erzielt." Sie sind nicht mit den Ergebnissen der Testsysteme anderer Hersteller austauschbar.

Referenzwerte Im Frühstadium einer Infektion mit dem Toxoplasma-Erreger sind möglicherweise keine nachweisbaren Konzentrationen an IgG-Antikörpern vorhanden. Die Konzentrationen an IgG-Antikörpern gegen Toxoplasma gondii steigen erstmals ein bis zwei Wochen nach der Primärinfektion an. Die Spitzenwerte werden innerhalb von 6–8 Wochen erreicht und fallen dann über Monate oder sogar Jahre hinaus allmählich wieder ab. Niedrige Titer bleiben generell für den Rest des Lebens nachweisbar. Es besteht keine Korrelation zwischen Antikörpertiter und dem Schweregrad der Erkrankung.2,4,6 Die Prävalenz von IgG-Antikörpern für Toxoplasma gondii kann abhängig vom Alter und der geographischen Lage variieren. Es wurden mit gesunden, asymptomatischen Patienten aus dem Nordwesten der USA Studien durchgeführt. Die Patienten setzten sich aus 69 Personen im Alter zwischen 15 und 64 Jahren zusammen. (Die Proben wurden vorher gesammelt und bei –20°C eingefroren gelagert). In dieser geographischen Gegend wurde eine Prävalenz der Toxoplasmosereaktivität von 56% gefunden. Weiterhin wurden Studien mit Patientenseren von schwangeren Frauen im Alter zwischen 16 und 41 Jahren aus der gleichen geographischen Region durchgeführt. (Die Proben wurden vorher gesammelt und bei –20°C eingefroren gelagert). Die Prävalenz der Toxoplasmosereaktivität dieser speziellen Bevölkerungsgruppe lag bei 5%, basierend auf den Resultaten des

IMMULITE Toxoplasma quantitativem IgG Test. (siehe grafik „Grenzen der Methode“) Betrachten Sie diese Grenzwerte nur als Richtlinien. Jedes Labor sollte eigene Referenzbereiche ermitteln.

Grenzen der Methode Der Einsatz des IMMULITE/IMMULITE 1000 Testsystems zur quantitativen Bestimmung von Toxoplasma-IgG ist nicht validiert, was die Diagnose kürzlicher Infektionen mittels gepaarten Seren betrifft. Die Testergebnisse sind vor dem Hintergrund der klinischen Anamnese, der Beschwerden des Patienten sowie weiterer Laborbefunde zu bewerten. Das Vorhandensein von IgG-Antikörpern in Einzelproben reicht nicht aus, um zwischen einer aktiven und einer vergangenen Infektion zu unterscheiden. Patienten mit Verdacht auf eine Primär- bzw. aktive Infektion sollten auf das Vorhandensein von IgM-Antikörpern gegen das Toxoplasma gondii untersucht werden. Zur Bestimmung einer Serokonversion von nichtreaktiv zu reaktiv sollte während der Rekonvaleszenzphase drei bis vier Wochen nach der akuten nichtreaktiven Probe eine zweite Serumprobe genommen werden. Die Probe aus der Akutphase sollte gelagert und parallel zur Rekonvaleszenzprobe getestet werden. Die Ergebnisse bei HIV-Patienten sowie behandlungs- oder krankheitsbedingt immunsupprimierten Patienten sollten zurückhaltend interpretiert werden. Im Frühstadium einer akuten Toxoplasmose sind möglicherweise keine nachweisbaren IgG-Antikörper vorhanden. Die Eckdaten dieses Testsystems wurden nicht für den Gebrauch mit Proben von Neugeborenen, Nabelschnurblut, Patienten mit bevorstehender Organverpflanzung und nicht für andere Körperflüssigkeiten als Serum wie etwa Harn, Speichel oder Fruchtwasser etabliert. Heterophile Antikörper in Humanseren können mit Immunglobulinen aus den Assaykomponenten reagieren und Interferenzerscheinungen innerhalb des in


vitro Immunoassays verursachen. (Clin. Chem. 1988:34:27-33) Proben von Patienten, die häufig mit Tier- bzw. Tierserumprodukten zu tun haben, können die erwähnten Interferenzen verursachen und zu anomalen Resultaten führen. Die verwendeten Reagenzien sind so konzipiert, dass das Risiko einer Interferenz mit den zu messenden Proben minimiert ist. Dennoch können potentiell Interaktionen zwischen seltenen Seren und den Testkomponenten auftreten. Zu diagnostischen Zwecken sollten die mit dem Assay erhaltenen Ergebnisse immer in Kombination mit der klinischen Untersuchung, der Patientenanamnese und anderen Befunden gesehen werden

Leistungsdaten Repräsentative Daten zum Test entnehmen Sie bitte den Tabellen und graphischen Darstellungen im englischen Teil dieser Anleitung. Die Ergebnisse sind in IU/ml angegeben. (Sofern nicht anders angegeben, wurden hierfür Serumproben in Röhrchen ohne Geltrennung und Gerinnungshilfen eingesetzt.) Messbereich: 5,0 – 250 IU/ml. Standardisiert nach der Dritten Internationalen WHO-Norm für humane Anti-Toxoplasma-Seren.

Analytische Sensitivität: ≤ 5,0 IU/ml Präzision: Statisik aus einem einzelnen Testansatz mit 5 Proben verschiedener IgG-Konzentrationen in 5-facher Bestimmung am gleichen Tag. (Siehe Tabelle „Intraassay / Interassay - Precision“). Die Negativ-Kontrolle sowie Probe 1 zeigt durchgehend Werte unter 5 IU/ml. Spezifität: Die Spezifität des IMMULITE Toxoplasma Quantitativ IgG Tests wurde mit 50 Proben, die positiv für Cytomegalie (CMV), Varizelle zoster (VZV), Epstein-Barr-Virus (EBV), Mycoplasma pneumoniae und Parvovirus B19 waren, evaluiert. Diese Proben zeigten mit dem IMMULITE Toxoplasma Quantitativ IgG Test eine 96%ige Übereinstimmung (48/50) mit einem kommerziell erhältlichen Toxoplasma IgG Enzymimmunotest. Alternativer Probentyp: Um die Auswirkungen von verschiedenen Probenarten zu untersuchen, wurde Blut von 16 Freiwilligen in Röhrchen ohne

Additiva, in Heparin- und Becton Dickinson SST® Vacutainer-Rörchen gesammelt. Alle Proben wurden mit dem Toxoplasma IgG Verfahren für den IMMULITE getestet, mit der folgenden Ergebnisse. (Heparin) = 1,02 (Serum) + 0,13 IU/ml r = 1,00

(SST) = 0,98 (einfachen Röhrchen) – 0,06 IU/ml r = 1,00

Mittelwerte: 4,4 IU/ml (Serum) 4,6 IU/ml (Heparin) 4,2 IU/ml (SST)

In einer weiteren Studie wurde 16 Freiwilligen Blut entnommen. Als Abnahmegefäße wurden Serumröhrchen ohne Zusätze, Heparin-, und EDTA Vakutainer röhrchen verwendet. Alle Proben wurden mit dem Toxoplasma IgG Verfahren für den IMMULITE getestet, mit der folgenden Ergebnisse. (EDTA) = 0,93 (Serum) – 0,003 IU/ml r = 1,00

Mittelwerte: 5,3 IU/ml (EDTA) 5,6 IU/ml (Serum)

Klinische Studien Die klinischen Leistungsdaten des IMMULITE Toxoplasma Quantitativ IgG Test wurdem mit 199 Serumproben aus drei verschiedenen Regionen, von denen zwei außerhalb der USA stammten, geprüft. Die 199 Patientenproben (die Proben wurden vorher gesammelt und bei –20°C eingefroren gelagert) wurden von Frauen erhalten, die aus derzeitigen Entbindungs- und gynäkologischen Untersuchungen stammten. 42 Proben wurden von schwangeren Frauen erhalten, und die restlichen Proben stammten von Patienten mit unterschiedlichen Krankheiten und Gegebenheiten (AIDS, Anämie, Arthritis, Müdigkeitssyndrom, Kopfschmerzen, Lymphom, Meningitis, Lungenentzündung und andere Krankheiten). Es handelte sich um 37 männliche und 162 weibliche Patienten im Alter von 15 bis 68 Jahren. Eine der retrospektiven Studien wurde an einer Medizinischen Universität im Nordwesten der USA durchgeführt. Die 199 Blutproben wurden mit dem IMMULITE Toxoplasma Quantitativ IgG Test und einem kommerziell erhältlichen


Toxoplasma IgG Enzymfluoresz Enzimmunoassay (ELFA) evaluiert.

IMMULITE Toxoplasma Quantitativ IgG

Kit A

Positiv

Negativ

Relative Sensitivität

Relative Spezifität

Positiv 52 2

Negativ 0 145

96,3%

100%

Übereinstimmung: 99,0% 95% Vertrauensbereich für die relative Sensitivität und Spezifität (resp.: 87,3% - 99,5% und 97,5% - 100%).

Die zwei diskrepanten Blutproben, negativ im IMMULITE, aber positiv im Kit A, wurde desweiteren mit einem kommerziell erhältlichen Toxoplasma IgG Mikropartikelenzymimmunotest (MEIA) evaluiert und als positiv gemessen. In der zweiten retrospektiven Studie, die außerhalb der USA durchgeführt wurde, wurden von 199 Proben 194 (5 Proben mit nicht ausreichendem Probenvolumen) mit dem IMMULITE Toxoplasma Quantitativ IgG-Test und Kit B evaluiert.


Kit B

Positiv

Negativ



Positiv 46 5

Negativ 2 141

90,2%

98,6%

Übereinstimmung: 96,4% 95% Vertrauensbereich für die relative Sensititvät und Spezifität, resp.: 78,6% - 96,7% und 95% - 99,8%.

Von den 7 diskrepanten Blutproben waren 3 der 5 negativ gefundenen Proben im IMMULITE und im Kit B positiv, negativ im Kit A. Zwei der positiv gemessenen Blutproben im IMMULITE, aber negativ gemessenen im Kit B, waren positiv im Kit A. In der dritten retrospektiven Studie, die ebenfalls außerhalb der USA durchgeführt wurde, wurden von 199 Proben 160 (39 Blutproben mit nicht ausreichendem Probenvolumen) mit dem IMMULITE Toxoplasma IgG-Test und einem kommerziell erhältlichen Enzymimmunoassay Kit C, evaluiert.


Kit C

Positiv

Negativ



Positiv 32 2

grenzwertig 0 4

Negativ 2 120

94,1%

98,4%

Übereinstimmung: 97,4% 95% Vertrauensbereich für die relative Sensitivität und Spezifität, resp.: 80,3% – 99,3% und 94,2% – 99,8%.

In zwei Fällen mit positivem IMMULITE und negativem Kit C Ergebnis, waren ebenfalls positiv in Kit A. In den zwei Fällen, die negativ im IMMULITE und positiv in Kit C waren, war eine Probe positiv und eine negativ im Kit A. In vier Fällen mit negativem IMMULITE und grenzwertigen Ergebnis in Kit C, waren alle Proben negativ in Kit A. Demnach stimmen die IMMULITE Ergebnisse in sieben von acht Fällen mit Kit A überein, die diskrepant im Kit C liefen.

Anwendungsberatung Bei Rückfragen wenden Sie sich bitte an Ihre DPC Niederlassung. Das Qualitätssystem der Diagnostic Products Corporation ist nach ISO 13485:2003 registriert.

Español

Toxoplasma Cuantitativo IgG Utilidad del análisis: Para su uso en el diagnóstico in vitro con los analizadores IMMULITE e IMMULITE 1000 — para la medición cuantitativa de anticuerpos IgG contra Toxoplasma gondii (toxoplasma), como una ayuda en la determinación del estado serológico para Toxoplasma gondii.

Este kit no tiene autorización de la FDA para su uso en pruebas (detección precoz) de donantes de sangre o plasma.

Números de Catálogo: LKTXP1 (100 tests), LKTXP5 (500 tests) Código del Test: TXP Color: Gris claro


Resumen y Explicación del Test Toxoplasma gondii es un parásito intracelular obligado, capaz de infectar a la mayoría de los mamíferos, incluyendo al humano. El organismo se transmite por ingestión de carne poco cocinada. Por todo el mundo, del 1 al 90% de la población puede ser infectada,7 con un 25 – 30 por ciento de la población adulta de Estados Unidos infectada.3 Mientras que la toxoplasmosis puede manifestarse de diversas formas, las infecciones son normalmente clínicamente inaparentes, y las infecciones latentes persisten normalmente durante toda la vida.2 Los síntomas clínicos son similares a los de una infección por mononucleosis, con linfadenopatía, fiebre, dolor de cabeza, malestar general y algunas veces neumomía y miocarditis. 6

Al igual que otras infecciones latentes, la infección aguda por toxoplasma puede presentar una serie amenaza para los individuos inmunocomprometidos y los recién nacidos, quienes adquieren la infección en el utero. Los individuos inmunosuprimidos pueden desarrollar encefalitis, miocarditis o neumonitis.3 Las infecciones congénitas normalmente resultan como consecuencia de una infección aguda asintomática en la madre. Esta infección puede causar: parto prematuro, aborto espontáneo o el nacimiento sin vida del feto.4,6 Los neonatos pueden presentar coriorretinitis, hidrocefalia, microcefalía, calcificación cerebral y retraso psicomotor.1 La mayoría de los niños infectados congénitamente no mostrarán ningún síntoma hasta más tarde.4

El seguimiento de la toxoplasmosis requiere el control serológico de los individuos infectados,3 ya que el cultivo de este organismo no es posible. Un análisis cuantitativo para estudiar la presencia de IgG contra toxoplasma puede ser útil para determinar una infección anterior e indicar la reactivación de la infección. Una información precisa del diagnóstico es importante, especialmente durante el embarazo, puesto que el tratamiento con espiramicina puede reducir los riesgos para el feto.5

Principio del análisis IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasma Cuantitativa IgG es un inmunoanálisis quimioluminiscente en fase sólida secuencial. Ciclos de incubación: 2 × 30 minutos.

Recogida de la muestra Se recomienda el uso de una ultracentrífuga para aclarar las muestras lipémicas. Las muestras que estén turbias o tengan un material particular deben aclararse mediante una centrifugación a baja velocidad. La centrifugacion de las muestras de suero antes de que se forme el coagulo puede ocasionar la presencia de fibrina. Para evitar resultados erroneos debidos a la presencia de fibrina, asegurarse que se ha formado el coagulo completamente antes de centrifugar las muestras. Algunas muestras, particularmente aquellas de pacientes sometidos a terapia anticoagulante, pueden requerir mayor tiempo de coagulacion. Los tubos para recoger sangre de distintos fabricantes pueden producir valores diferentes, dependiendo del material del tubo y de los aditivos, incluyendo barreras de gel o barreras físicas, activadores de la coagulación y/o anticoagulantes. El IgG Cuantitativo para Toxoplasma IMMULITE/IMMULITE 1000 no ha sido analizado con todos los distintos tipos de tubos. Para obtener detalles sobre los tipos tubos que se han analizado, consulte la sección de Tipos de Muestras Alternativos. Volumen requerido: 10 µl de la muestra de paciente prediluida (1 por 21 dilución). (El recipiente de la muestre debe contener, como mínimo, 100 µl más que el volumen total requerido). Conservación: 3 días a 2–8°C, o 6 meses a –20°C.13 Dilución de Muestras de Pacientes: Las muestras de suero deben ser prediluídas 1-en-21 con Diluyente de Muestra IgG/IgM (LIGZ2). Esta dilución debe ser realizada manualmente, p.e. añadiendo 20 µl de muestra del paciente con 400 µl de Diluyente de Muestra (LIGZ2, suministrados en el kit).


Como alternativa, utilizando IMMULITE 1000 Windows®, la dilución la realiza el sistema automaticamente en el equipo usando LIGW, incluido en el Modulo de Diluyente de Muestra IgG/IgM (L1KIGW 1,5). Los resultados imprimidos han sido corregidos para una dilución de 1-en-21.

Advertencias y Precauciones Para uso diagnóstico in vitro. Reactivos: Mantener a 2–8°C. Desechar de acuerdo con las normas aplicables. Siga las precauciones universales y manipule todos los componentes como si fueran capaces de transmitir agentes infecciosos. Los materiales derivados de sangre humana han sido analizados y son negativos para sífilis; para anticuerpos frente al HIV 1 y 2; para el antígeno de superficie de hepatitis B y para los anticuerpos de hepatitis C. Se ha usado Azida sodica, en concentraciones menores de 0,1 g/dl, como conservante. Para su eliminacion, lavar con grandes cantidades de agua para evitar la constitucion de residuos de azidas metalicas, potencialmente explosivas, en las cañerías de cobre y plomo. Sustrato quimioluminiscente: evite la contaminación y exposición a la luz directa del sol. (Ver el prospecto.) Agua: Usar agua destilada o desionizada. La bola está recubierta con antígeno inactivado de toxoplasma. Sin embargo, se recomienda precaución ante la posible presencia de organismo residual cuando trabajamos o deshechamos los materiales suministrados. La concentración de IgG contra Toxoplasma en una muestra dada, determinada mediante ensayos de distintos fabricantes, puede variar debido a diferencias en los métodos de los ensayos y a la especificidad del reactivo. Por lo tanto, en el informe de resultados del laboratorio para el médico debe incluirse: "Los siguientes resultados se obtuvieron con EIA IgG Cuantitativo contra Toxoplasma IMMULITE/IMMULITE 1000. No es posible intercambiar los resultados obtenidos por métodos de ensayo de otros fabricantes".

Materiales Suministrados Los componentes representan un juego completo. Las etiquetas incluidas en la caja son necesarias para el ensayo.

Unidades de análisis de Toxoplasma Cuantitativo IgG (LTXP1) Cada unidad etiquetada con código de barras contiene una bola recubierta de antígeno inactivado, parcialmente purificado de Toxoplasma gondii (taquizoitos de cepa RH de peritoneo de ratón). Estable a 2–8°C hasta la fecha de caducidad. LKTXP1: 100 unidades. LKTXP5: 500 unidades. Espere a que las bolsas de las unidades de análisis alcancen la temperatura ambiente antes de abrirlas. Ábralas cortando por el extremo superior, dejando el borde del cierre de cremallera intacto. Vuelva a cerrar las bolsas herméticamente para protegerlas de la humedad.

Viales de reactivo de Toxoplasma Cuantitativo IgG (LTXPA, LTXPB) Con códigos de barras. LTXPA: 7,5 ml de una matriz de proteína en solución tampón, con conservante. LTXPB: 7,5 ml de fosfatasa alcalina (de intestino de ternera) conjugada a anticuerpo monoclonal murino anti-IgG humana, en una solución tampón, con conservante. Guardar tapado y refrigerado: estable a 2–8°C hasta la fecha de caducidad. Se recomienda utilizarlo antes de que pasen 30 días después de abrirlo cuando se guarda según lo indicado. LKTXP1: 1 juego. LKTXP5: 5 juegos.

Ajustadores de Toxoplasma Cuantitativo IgG (LTXPL, LTXPH) Dos viales (bajo y alto) de cada uno con 4 ml de suero humano con IgG reactivo para Toxoplasma, en solución tampón, con conservante. (No es necesaria ninguna dilución previa.) Estable a 2–8°C durante 14 días después de abrise, o hasta 6 meses (alicuotados) a –20°C. LKTXP1: 1 juego. LKTXP5: 2 juegos.

Controles de Toxoplasma Cuantitativo IgG (LTXPC1, LTXPC2, LTXPC3) Tres viales (Negativo, Bajo Positivo y Positivo) de cada uno con 2 ml. LTXPC1 (Control negativo): Un vial que contiene


suero humano con IgG no reactivo para toxoplasma, con conservante. LTXPC2, LTXPC3 (Control bajo positivo, Control Positivo): contienen suero humano con IgG reactivo para toxoplasma, con conservante. Estable a 2–8°C durante 14 días después de abrise, o hasta 6 meses (alicuotados) a –20°C. LKTXP1: 1 juego. LKTXP5: 2 juegos. IMMULITE: Los controles de Toxoplasma IgG requieren la misma predilución manual 1-en-21 que las muestras de pacientes, con la diluyente de muestra para IgG e IgM (LIGZ2). IMMULITE 1000: El software del IMMULITE 1000 realiza una dilución automática en el instrumento de las muestras de pacientes y de los controles. Introduzca los controles como controles. Consulte los niveles de concentración en el prospecto del control.

Diluyente de IgG/IgM (LIGZ2) Para la dilución manual de muestras de pacientes y controles. 100 ml matriz proteica no humana en solución tampón, con conservante. Estable a 2–8°C durante 30 días después de abrise o estable a –20°C durante 6 meses (alicuotados). LKTXP1: 1 vial. LKTXP5: 3 viales. Para diluciones de muestras de pacientes dentro del equipo usando IMMULITE 1000 Windows®, remitirse a la sección del Kit de Componentes Suministrados Aparte.

Componentes del kit que se suministran por separado

Módulo de Diluyente de Muestra IgG/IgM (L1KIGW1,5) Requerido para la dilución de muestras de pacientes y controles en el equipo utilizando IMMULITE 1000 Windows®. Los Viales (LIGW) de Diluyente de Muestras contienen una matriz concentrada de proteína/buffer (2.5X) no-humana, con conservante. Estable a 2-8°C hasta la fecha de caducidad. L1KIGW1: 2 Viales. L1KIGW5: 10 Viales. LSUBX: Substrato quimioluminiscente LPWS2: Lavado de sonda LKPM: Kit de limpieza de sonda LCHx-y: Soportes de recipientes de muestras (con códigos de barras)

LSCP: Recipientes de muestras (desechables) LSCC: Tapas para los recipientes de muestras (opcionales) DCHS: Cubetas de dilución (con código de barras) para diluciones en el equipo (IMMULITE 1000 Windows®). También necesario Pipetas de transferencia de muestras; agua destilada o desionizada.

Ensayo Aviso: para obtener el funcionamiento óptimo, es importante realizar todos los procedimientos del mantenimiento general según lo definido en el manual del operador de IMMULITE o IMMULITE 1000. Ver el Manual del Operador del IMMULITE o IMMULITE 1000 para: preparación, procesamiento, diluciones, ajuste, procedimientos de ensayo y control de calidad. Inspeccionar visulamente cada unidad de rección para asegurarse de que hay una bola antes de introducirla en el Sistema. Tenga en cuenta que hay que cargar los viales de reactivos A y B en el carrusel para ejecutar este ensayo. Para el IMMULITE 1000 Windows®, el Vial del Diluyente de la Muestra también debe estar cargado en el carrusel. Intervalo de ajuste recomendado: 4 semanas. Muestras de Control de Calidad: Los controles provistos con el kit deberán usarse como control de calidad para monitorear el rendimiento del ensayo. Los controles positivo y negativo están diseñados para controlar un fallo importante del reactivo. El control positivo proporcionado no asegurará la precísión del valor de corte. Además de los controles provistos, los usuarios pueden desear correr controles adicionales para cubrir el intervalo superior del ensayo. Pueden analizarse otros controles según las directrices o requisitos de las normas locales, estatales o federales o de las organizaciones acreditadas.12 También se recomienda analizar periódicamente muestras conocidas, reactivas o no reactivas, para asegurar la


precisión del pipeteado para el paso de dilución.

Interpretación de los Resultados El ensayo IgG Cuantitativo para Toxoplasma IMMULITE/IMMULITE 1000 está estandarizado en términos del Tercer Estándar Internacional para Suero de Anti-Toxoplasma de la Organización Mundial de la Salud. El valor de corte del ensayo se determinó utilizando muestras positivas y negativas representativas (confirmadas por el método ELISA) utilizando la técnica ROC (Curva de rendimiento diagnóstico). Positivo: Un resultado superior o igual a 8 IU/ml es indicativo de una infección pasada. Negativo: Un resultado inferior a 6,5 IU/ml es considerado negativo. Resultados inferiores a 6,5 IU/ml deben comunicarse solamente como Negativos, y no debe comunicarse la concentración. Indeterminado: Un resultado superior o igual a 6,5 IU/ml e inferior a 8 IU/ml se considera indeterminado. Las muestras con valores superiores a 250 IU/ml deben comunicarse como “superiores a 250 IU/ml". Las muestras que dieron resultados superiores a 250 IU/ml, cuando se examinan con la autodilución necesaria 1-en-21, pueden necesitar diluciones adicionales con el diluyente para muestras IgG/IgM. La presencia de anticuerpos IgG contra Toxoplasma gondii es indicativo de una exposición previa al organismo. Puede utilizarse sólo una única muestra para estimar el estado serológico del individuo. Un resultado “indeterminado” indica un nivel intermedio de anticuerpos contra Toxoplasma gondii en la muestra: la muestra debe volverse a analizarse. Las muestras que vuelvan a dar un resultado “indeterminado” deben examinarse por un método alternativo, o debe recogerse una segunda muestra, si es posible, en un plazo de tiempo razonable (p.e. una semana). No se recomienda interpretar los resultados si el control positivo o negativo cae fuera del margen especificado en la Sección Control de Calidad.

La magnitud del nivel de IgG comunicado no puede relacionarse con un título final. Por lo tanto, en el informe de resultados del laboratorio para el médico debe incluirse: "Los siguientes resultados se obtuvieron con EIA IgG Cuantitativo contra Toxoplasma IMMULITE/IMMULITE 1000." No es posible intercambiar los resultados obtenidos por métodos de ensayo de otros fabricantes.

Valores Esperados Individuos con el organismo toxoplasma pueden no mostrar niveles de anticuerpo IgG detectables en las fases tempranas de la infección. Los niveles de IgG para Toxoplasma gondii empiezan a elevarse 1 o 2 semanas después de la infección. Los niveles máximos se alcanzan en 6 – 8 semanas, después descienden gradualmente en los meses y años posteriores. Se detectan títulos bajos generalmente durante toda la vida. El título de anticuerpo no guarda relación con la severidad de la enfermedad.2,4,6 La preponderancia de anticuerpos IgG anti-Toxoplasma gondii variará con la edad y la zona geográfica. Se condujeron estudios con muestras tomadas de sujetos presumiblemente sanos y asintomáticos del noroeste de los EE.UU. Este grupo de personas se compuso de 69 individuos de 15 a 64 años de edad. (Las muestras fueron previamente recolectadas y guardadas congeladas a –20ºC). Se encontró que la preponderancia de reactividad al toxoplasma, basada en los resultados del ensayo cuantitativo IgG anti -Toxoplasma IMMULITE, fue de 56% en esta zona geográfica. Se realizaron estudios adicionales con muestras provenientes de 42 mujeres embarazadas de 16 a 41 años de edad de la misma zona geográfica. (Las muestras fueron previamente recolectadas y guardadas congeladas a –20º C). La preponderancia de reactividad al toxoplasma para esta población específica fue del 5%, basándose en los resultados del ensayo cuantitativo IgG anti -Toxoplasma IMMULITE. (Ver el gráfico de “Expected Values”), Estos límites han de considerarse sólo como una guía. Cada Laboratorio deberá establecer sus propios rangos de referencia.


Limitaciones El uso de IgG Cuantitativo Toxoplasma IMMULITE/IMMULITE 1000 para diagnosticar una infección reciente analizando parejas de sueros no se ha validado. Los resultados del análisis deben contemplarse en el contexto del historial clínico de los pacientes, de su sintomatología y de los demás hallazgos del laboratorio. La presencia de anticuerpos IgG en una sola muestra no es suficiente para distinguir entre una infección activa y una antigua. Los pacientes de los que se sospeche que padecen una infección primaria o activa deben analizarse para detectar la presencia de anticuerpos IgM para Toxoplasma gondii. Para determinar la seroconversión de no reactivo a reactivo, debe recogerse una segunda muestra de suero tres o cuatro semanas después de la infección, muestra no reactiva, durante la etapa de convalecencia de la infección. La muestra de la fase aguda debe almacenarse y analizarse paralelamente a la muestra de la fase de convalecencia. Los individuos con infección aguda por toxoplasma puede que no presenten niveles detectables de anticuerpos IgG en la fase temprana de la infección. Los resultados en pacientes infectados con el virus VIH, pacientes bajo una terapia inmunosupresiva, o en pacientes con otros desórdenes que causen inmunosupresión, deben interpretarse con precaución. No se han establecido las características de funcionamiento del ensayo para utilizarlo con muestras de neonatos, sangre del cordón umbilical, pacientes pretrasplante, u otros fluidos distintos del suero, tales como orina, saliva o líquido amniótico. Los anticuerpos heterofílicos en el suero humano pueden reaccionar con las inmunoglobulinas de los componentes del ensayo provocando interferencias con los inmunoanálisis in vitro. [Ver Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Las muestras de los pacientes que frecuentemente están expuestos a animales o a productos

séricos animales pueden presentar este tipo de interferencia que potencialmente ocasione un resultado anómalo. Estos reactivos han sido formulados para minimizar el riesgo de interferencia, no obstante, pueden darse interacciones anómalas entre sueros conflictivos y los componentes del ensayo. Con fines de diagnóstico, los resultados obtenidos con este ensayo siempre deben ser usados en combinación con el examen clínico, la historia médica del paciente y cualquier otro dato clínico relevante.

Características Analíticas Para ver resultados representativos de las cualidades del ensayo ver las tablas y los gráficos. Los resultados se expresan en IU/ml. (A no ser que se indique lo contrario, todos los resultados fueron generados en muestras de suero recogidas en tubos sin geles o activadores de la coagulación). Intervalo de calibración: 5,0 – 250 IU/ml. Normalizado en términos del tercer estándar WHO IS para Suero Humano Anti-Toxoplasma.

Sensibilidad: ≤ 5,0 IU/ml Precisión: Se han calculado datos estadísticos para las muestras a partir de los resultados de 5 replicados, cada uno en cinco días separados. (Ver las tablas de "Intraassay Precision" y “Interassay Precision”). Note que los controles negativos de la Muestra 1 siempre se encontraron por debajo de 5 IU/ml (el límite inferior del intervalo de calibración del ensayo) para todos los replicados de cada corrida. Especificidad: Se evaluó la especificidad del ensayo cuantitativo IgG anti-Toxoplasma IMMULITE analizando 50 muestras positivas para citomegalovirus (CMV), virus de varicella-zoster (VZV), virus Epstein-Barr (EBV), Mycoplasma penumoniae y parvovirus B19. En estas muestras, el ensayo cuantitativo IgG anti-toxoplasma IMMULITE y un inmunoensayo enzimático para IgG anti-Toxoplasma comercialmente disponible (Kit D) mostraron 96% de concordancia (48/50). Tipo de Muestra Alternativa: para evaluar el efecto de los diferentes tipos de muestras alternativos, se recogió sangre


de 16 voluntarios en tubos normales, tubos con Heparina y tubos vacutainer SST® de Becton Dickinson. Todas las muestras se ensayo de IgG Cuantitativo para Toxoplasma de IMMULITE, obteniendo los siguientes resultados. (Heparina) = 1,02 (Suero) + 0,13 IU/ml r = 1,00

(SST) = 0,98 (tubos simples) – 0,06 IU/ml r = 1,00

Medias: 4,4 IU/ml (Suero) 4,6 IU/ml (Heparina) 4,2 IU/ml (SST)

En otro estudio, la sangre de 16 voluntarios se recogió en tubos normales, y EDTA vacutainer. Todas las muestras se ensayo de IgG Cuantitativo para Toxoplasma de IMMULITE, obteniendo los siguientes resultados. (EDTA) = 0,93 (Suero) – 0,003 IU/ml r = 1,00

Medias: 5,3 IU/ml (EDTA) 5,6 IU/ml (Suero)

Rendimiento Clínico Se estudió el rendimiento clínico del ensayo cuantitativo IgG anti-Toxoplasma IMMULITE, usando un total de 199 muestras de suero. Cada una de estas muestras fue analizada en tres sitios, dos de los cuales se encuentran fuera de los EE.UU. De las 199 muestras (previamente recolectadas y guardadas congeladas a –20°C ), 61 se obtuvieron de mujeres que se presentaron para un examen obstétrico y ginecológico, 42 se obtuvieron de mujeres embarazadas y el resto se obtuvo de pacientes con distintas enfermedades y afecciones (SIDA, anemia, arteritis, fatiga, dolor de cabeza, linfoma, meningitis, neumonía y otros). El grupo consistió de 37 hombres y 162 mujeres de 15 a 68 años de edad. Uno de los estudios retrospectivos fue conducido en el centro médico de una universidad en el noroeste de los EE.UU. Las 199 muestras fueron evaluadas en forma no simultánea con el procedimiento cuantitativo IgG anti-Toxoplasma IMMULITE y el Kit A, un ensayo de inmunofluorescencia ligado a una enzima para IgG anti -Toxoplasma (ELFA) comercialmente disponible.

Ensayo Cuantitativo para IgG anti-

Toxoplasma IMMULITE

Kit A Pos Neg Sensibilidad

relativa Especificidad

relativaa

Positivo 52 2

Negativo 0 145 96,3% 100%

Concordancia: 99,0% 95% de límites de confianza para la sensibilidad y la especificidad relativas: 87,3% – 99,5% y 97,5% – 100%. (Límites de confianza mediante análisis exacto.)

Las dos muestras discordantes, negativas para IMMULITE pero positivas para el Kit A, fueron evaluadas con el Kit B, un inmunoensayo de micropartículas para IgG anti-Toxoplasma (MEIA) comercialmente disponible, el cual dio un resultado positivo. En el segundo estudio retrospectivo que se realizó fuera de los EE.UU., se evaluaron194 de las 199 muestras (5 muestras tuvieron insuficiente volumen de muestra) con el ensayo cuantitativo IgG anti -Toxoplasma IMMULITE y el Kit B.

Ensayo Cuantitativo IgG anti- Toxoplasma IMMULITE

Kit B Pos Neg Sensibilidad

relativa Especificidad

relativaa

Positivo 46 5

Negativo 2 141 90,2% 98,6%

Concordancia: 96,4% 95% de límites de confianza para la sensibilidad y la especificidad relativas: 78,6% – 96,7% y 95,0% – 99,8%. (Límites de confianza mediante análisis exacto.)

De las siete muestras discordantes, tres de las cinco que dieron negativas con IMMULITE pero positivas con el Kit B dieron negativas con el Kit A. Las dos muestras que dieron positivas con IMMULITE pero negativas con el Kit B dieron positivas con el Kit A. En el tercer estudio retrospectivo, también realizado fuera de los EE.UU., 160 de las 199 muestras (39 muestras tuvieron insuficiente volumen de muestra) fueron analizadas con el ensayo cuantitativo IgG anti-Toxoplasma IMMULITE y el Kit C, un inmunoensayo enzimático comercialmente disponible.


Ensayo Cuantitativo IgG anti- Toxoplasma IMMULITE

Kit C Pos Neg Relative

Sensitivity Relative

Specificity

Positivo 32 2

Ambiguo 0 4

Negativo 2 120

94,1% 98,4%

Concordancia: 97,4% 95% de límites de confianza para la sensibilidad y la especificidad relativas: 80,3% – 99,3% y 94,2% – 99,8%. (Límites de confianza mediante análisis exacto).

Los dos casos positivos para el ensayo IMMULITE pero negativos para el Kit C dieron positivos para el Kit A. De los dos casos negativos para el ensayo IMMULITE pero positivos para el Kit C, uno dio positivo y el otro dio negativo con el Kit A. Los cuatro casos negativos para el ensayo IMMULITE, pero ambiguos para el Kit C, dieron todos negativos con el Kit A. Por lo tanto, los resultados de IMMULITE concuerdan con los del Kit A en siete de los ocho casos en que no hay concordancia con el Kit C.

Asistencia técnica Contáctese con su Distribuidor Nacional. El Sistema de Calidad de Diagnostic Products Corporation está registrado para la ISO 13485:2003.

Français

IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasmose quantitative IgG Domaine d'utilisation : Dosage quantitatif des IgG spécifiques dirigées contre Toxoplasma gondii dans le sérum. Réservé à un usage diagnostique in vitro avec l'Analyseur IMMULITE et de IMMULITE 1000, ce test constitue une aide à la détermination du statut sérologique vis-à-vis de Toxoplasma gondii.

Ce coffret n'est pas habilité auprès de la Food and Drug Administration américaine pour le dépistage des donneurs de sang ou de plasma.

Ce réactif est enregistré auprès de l'AFSSAPS. Référence catalogue : LKTXP1 (100 tests), LKTXP5 (500 tests) Code produit : TXP Code couleur : gris clair

Introduction Toxoplasma gondii est un parasite intracellulaire capable d'infecter la plupart des mammifères, y compris l'homme. Le parasite se transmet par l'ingestion de viande insuffisamment cuite. Dans le monde, 1 à 90 % des populations est susceptible d'être infecté,7 25 à 30 % de la population adulte étant infecté au Etats-Unis.3 Pour la France, 30 à 60 % de la population est infectée. Même si la toxoplasmose peut se manifester sous plusieurs formes, les individus infectés restent généralement asymptomatiques et une infection latente persiste habituellement toute la vie.2 Les symptômes cliniques visibles sont similaires à ceux de la mononucléose infectieuse, avec une lymphadénopathie, de la fièvre, des céphalées, une sensation de malaise et, parfois, une pneumonie et une myocardite.6

Comme toute infection latente, une infection aiguë par Toxoplasma gondii peut représenter un risque sérieux pour un individu immunodéprimé ou pour un nouveau-né infecté in utero. Les patients immunodéprimés infectés sont susceptibles de développer une encéphalite, une myocardite ou une pneumopathie inflammatoire.3 Les infections congénitales proviennent habituellement d'une infection maternelle aiguë asymptomatique. Cette infection peut se traduire par une naissance prématurée, un avortement spontané ou la naissance d'un enfant mort-né.4,6 Le nouveau-né peut présenter une choriorétinite, une hydrocéphalie, une microcéphalie, des calcifications intra-cérébrales et un retard psychomoteur.1 La plupart des enfants infectés in utero sont asymptomatiques dans les premiers temps de vie.4

Dans la mesure où le parasite n'est pas facile à mettre en culture, la prise en charge de la toxoplasmose demande un contrôle sérologique régulier des individus infectés.3 Un dosage quantitatif d'IgG


spécifiques dirigées contre Toxoplasma gondii peut être utile pour mettre en évidence une infection antérieure et révéler une réactivation de l'infection. Un diagnostic précis est important, en particulier au cours de la grossesse, puisqu'un traitement par la spiramycine pourra réduire les risques encourus par le fœtus.5

Principe du test IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasmose IgG quantitatif est un immunodosage chimiluminescent séquentiel, en phase solide. Cycles d'incubation : 2 × 30 minutes.

Recueil des échantillons Il est recommandé de clarifier les échantillons hyperlipémiques par ultracentrifugation. Les échantillons troubles ou présentant des particules en suspension devront être clarifiés par centrifugation à vitesse réduite. La centrifugation des échantillons sériques avant la formation complète du caillot peut entraîner la présence de fibrine. Pour éviter les résultats erronés dûs à la présence de fibrine, s'assurer de la formation complète du caillot avant de centrifuger les échantillons. Certains échantillons, en particulier ceux provenant de patients sous anti-coagulants, peuvent nécessiter un temps plus long pour la formation du caillot. Des tubes pour prélèvements sanguins provenant de fabricants différents peuvent donner des résultats différents, selon les matériaux et additifs utilisés, y compris gels ou barrières physiques, activateurs de la coagulation et/ou anticoagulants. Le coffret Toxoplasmose IgG quantitatif IMMULITE/IMMULITE 1000 n'a pas été testé sur tous les types de tubes possibles. Veuillez consulter le chapitre intitulé Autres Types d'Échantillons pour plus de renseignements sur les tubes qui ont été évalués. Volume nécessaire : 10 µl d 'échantillon pré-dilué (dilution au 1:21). (L'unité-échantillon doit contenir au moins 100 µl de plus que le volume total nécessaire.)

Conservation : 3 jours à +2°C/+8°C ou 6 mois à –20°C.13 Dilution des échantillons de patients : Les échantillons doivent être dilués au 1/21ème avec du diluant échantillon IgG/IgM (LIGZ2). Cette dilution doit être faite manuellement. Exemple : ajouter 20 µl d'échantillon à 400 µl de diluant échantillon (LIGZ2) fournis avec le coffret. Le système IMMULITE 1000 Windows®

réalise également les dilutions automatiquement, en utilisant le diluant échantillon IgG/IgM (LIGW) fourni dans le coffret (L1KIGW1,5). Les résultats imprimés ont été corrigés en tenant compte d'une dilution au 1/21ème.

Précautions d'emploi Réservé à un usage diagnostique in vitro. Réactifs : conserver les réactifs à +2/ +8 °C. Eliminer les déchets conformément à la réglementation en vigueur. Respecter les précautions d'emploi et manipuler tous les composants du coffret comme des produits potentiellement infectieux. Les réactifs dérivés de produits humains et utilisés dans ce coffret ont subi un test sérologique pour la Syphilis et des tests de dépistage pour les anticorps anti-VIH1 et 2, anti-HCV et pour l'antigène de surface de l'hépatite B, qui se sont tous avérés négatifs. De l'azide de sodium à des concentrations inférieures à 0,1 g/dl a été ajouté comme conservateur ; lors de l'élimination, l'évacuer avec de grandes quantités d'eau pour éviter une accumulation d'azides métalliques explosifs dans les canalisations. Substrat chimiluminescent : éviter la contamination et l'exposition directe au soleil. (Voir notice). Eau : utiliser de l'eau distillée ou désionisée. La bille est revêtue d'antigène de Toxoplasma gondii inactivé. Cependant, des parasites ayant pu subsister, la prudence est recommandée lors de l'utilisation ou de l'élimination des produits fournis. Les résultats d'IgG dirigées contre Toxoplasma gondii obtenus sur un échantillon donné, avec les tests de


différents fabricants, pourront présenter une disparité en raison de différences de méthodologie et de spécificité des réactifs. Par conséquent, les résultats communiqués au médecin par le laboratoire devront comporter la mention suivante : « Les résultats suivant ont été obtenus avec le dosage IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasmose IgG quantitatif. Les résultats obtenus avec des procédés de dosage d'autres fabricants ne doivent pas y être substitués. »

Matériel fourni Les composants de la trousse ne peuvent être utilisés que conjointement. Les étiquettes à l'intérieur du coffret sont nécessaires au dosage.

Tests unitaires Toxoplasmose quantitative IgG (LTXP1) Avec code-barre. Chaque unité-test contient une bille revêtue d'un antigène de Toxoplasma gondii inactivé, partiellement purifié (tachyzoïtes de souche RH, issus de péritoine de souris). Stable à +2°C/+8°C jusqu'à la date de péremption. LKTXP1 : 100 unités. LKTXP5 : 500 unités. Porter les sachets à température ambiante avant d'ouvrir. Ouvrir le sachet avec des ciseaux en préservant le dispositif de fermeture. Refermer les sachets pour les protéger de l'humidité.

Cartouches de réactif Toxoplasmose quantitative IgG (LTXPA, LTXPB) Avec code-barres. LTXPA : 7,5 ml de tampon à base de protéines, avec conservateur. LTXPB : 7,5 ml d'anticorps monoclonal murin anti-IgG humaines marqué à la phosphatase alcaline dans un tampon avec conservateur. Conserver bouchés et réfrigérés : stables à +2°C/+8°C jusqu'à la date de péremption. A utiliser de préférence dans les 30 jours qui suivent l'ouverture, si les recommandations de stockage sont respectées. LKTXP1 : 1 jeu. LKTXP5 : 5 jeux.

Ajusteurs Toxoplasmose quantitative IgG (LTXPL, LTXPH) 2 flacons (haut et bas), 4 ml chacun, contenant des IgG anti-Toxoplasma gondii dans du sérum humain avec tampon avec

conservateur. (Il n’est pas nécessaire de prédiluer.) Stable à +2°C/+8 °C pendant 14 jours après ouverture ou 6 mois (aliquoté) à –20 °C. LKTXP1 : 1 jeu. LKTXP5 : 2 jeux.

Contrôles Toxoplasmose quantitative IgG (LTXPC1, LTXPC2, LTXPC3) Trois flacons (Négatif, Positif Faible et Positif), 2 ml chacun. LTXPC1 (Contrôle négatif) : un flacon de sérum humain ne contenant pas d'IgG dirigées contre Toxoplasma gondii, avec conservateur. LTXPC2, LTXPC3 (Contrôle positif faible, Contrôle positif) : deux flacons contenant des IgG dirigées contre Toxoplasma gondii dans du sérum humain avec conservateur. Stable à +2°C/+8°C pendant 14 jours après ouverture ou 6 mois (aliquoté) à –20°C. LKTXP1 : 1 jeu. LKTXP5 : 2 jeux. IMMULITE : Les contrôles Toxoplasmose IgG nécessite la même prédilution manuelle 1-dans-21 que les échantillons de patients, avec diluant échantillon IgG/ IgM (LIGZ2). IMMULITE 1000 : Le logiciel de l'IMMULITE 1000 réalise automatiquement les dilutions à bord des échantillons de patients et de contrôles. Saisir les contrôles comme des contrôles. Se reporter à la fiche technique du contrôle pour les concentrations.

Diluant échantillon IgG/IgM (LIGZ2) Pour la dilution manuelle des échantillons de patients et des contrôles. 100 ml matrice tampon/protéines non-humaines avec conservateur. Stable à +2°C/+8°C pendant 30 jours après ouverture ou à –20°C pendant 6 mois (aliquoté). LKTXP1 : 1 flacon. LKTXP5 : 3 flacons. Pour la dilution à bord automatique des échantillons de patients, avec IMMULITE 1000 Windows®, se référer au châpitre « Composants du Coffret fournis séparément ».

Composants du coffret fournis séparément

Diluant échantillon IgG/IgM (L1KIGW1,5) Requis pour la dilution à bord des échantillons de patients et des contrôles


avec IMMULITE 1000 Windows®. Les flacons de diluant échantillon (LIGW) contiennent une matrice protéïque non-humaine dans un tampon concentré (2.5X) avec un conservateur. Stable à 2–8°C jusqu'à la date d'expiration. L1KIGW1 : 2 flacons. L1KIGW5 : 10 flacons. LSUBX : Substrat chimiluminescent LPWSM : Solution de lavage LKPM : Coffret de décontamination de l'aiguille de prélèvement LCHx-y : portoirs à cupules réactionnelles (avec code-barre) LSCP : cupules réactionnelles (à usage unique) LSCC : bouchons pour cupules réactionnelles (optionnel) DCHS : Support pour unités de dilution automatisée par l'IMMULITE 1000 Windows®. Egalement requis Pipettes pour le transfert des échantillons ; eau distillée ou désionisée.

Protocole de dosage Noter que pour des performances optimales, il est important de réaliser toutes les procédures de maintenance de routine selon les instructions du Manuel d'Utilisation de l'IMMULITE ou de l'IMMULITE 1000. Voir le manuel d'utilisation de l'IMMULITE ou de l'IMMULITE 1000 pour la préparation, le démarrage du système, les ajustements, le dosage et les procédures de contrôle de qualité. Vérifier visuellement que chaque Unité-Test contient bien une bille avant de la charger dans l'automate. Noter que les deux flacons de réactif A et B doivent être placés sur le carrousel pour réaliser ce dosage. Pour l'IMMULITE 1000 Windows®, le flacon contenant le diluant échantillon doit également être chargé sur le carrousel. Intervalle d'ajustement recommandé : 4 semaines. Echantillons pour le contrôle de qualité : Les contrôles fournis dans le coffret doivent utilisés pour le contrôle de qualité des performances du dosage. Les témoins positifs et négatif sont conçus pour détecter un défaut majeur du réactif.

Le témoin positif fourni ne pourra pas garantir la précision du seuil. En plus des contrôles fournis, les utilisateurs peuvent souhaiter utiliser des contrôles supplémentaires pour les valeurs élevées du domaine de mesure du dosages. Ces contrôle supplémentaires pourront être testés, conformément aux recommandations ou aux directives des autorités locales ou nationales. 12 Il est également recommandé de tester périodiquement des échantillons positifs ou négatifs connus, pour contrôler l'exactitude du pipetage lors de l'étape de dilution.

Interprétations des résultats Le dosage IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasmose IgG quantitatif est standardisé par rapport au Troisième Standard International de l'OMS pour les anticorps sériques anti-toxoplasmose. Le seuil du dosage est déterminé par courbe ROC à partir d'échantillons positifs et négatifs représentatifs (confirmé par dosage ELISA). Positif : un résultat supérieur ou égal à 8 UI/ml indique une infection passée. Négatif : un résultat inférieur à 6,5 UI/ml est considéré comme négatif. (Les résultats inférieurs à 6,5 UI/ml doivent être rendus comme Négatif sans mentionner de concentration numérique).

Indéterminé : un résultat supérieur ou égal à 6,5 UI/ml et inférieur à 8 UI/ml est considéré comme indéterminé. Une concentration supérieure à 250 UI/ml devra être rapportée comme « supérieure à 250 UI/ml ». Un échantillon dont la concentration, obtenue sur une dilution au 1:21 par l'appareil, est supérieure à 250 UI/ml, devra être dilué d'un facteur supplémentaire avec le diluant échantillon IgG/IgM. La présence d'anticorps IgG anti-Toxoplasma gondii est révélatrice d'un contact antérieur avec le parasite. Un seul échantillon peut uniquement servir à évaluer le statut sérologique de l'individu. Un résultat « indéterminé » indique des taux d'anticorps anti-Toxoplasma gondii intermédiaires : l'échantillon devra donc être dosé de nouveau. Les échantillons qui restent alors « indéterminés » devront


être testés par une autre méthode, ou un autre prélèvement devra être obtenu – si possible – dans un délai raisonnable (une semaine, par exemple). Toute interprétation de résultats est déconseillée si les contrôles positif ou négatif donne un résultat situé en dehors de l'intervalle de référence défini à la section « Contrôle de qualité ». L'importance du taux d'IgG rapporté n'est pas corrélée à un titrage en point final. Les résultats communiqués au médecin par le laboratoire devront comporter la mention suivante : « Les résultats suivant ont été obtenus avec le dosage IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasmose IgG quantitatif. Les résultats obtenus avec des procédés de dosage d'autres fabricants ne doivent pas y être substitués. »

Valeurs de référence Il est possible que les IgG spécifiques ne soient pas détectables dans les phases précoces de l'infection par Toxoplasma gondii. En cas de suspicion d'infection au stade précoce, il faudra impérativement effectuer un dosage IgM anti-Toxoplasma gondii. Les taux d'IgG anti-Toxoplasma gondii commencent à augmenter une à deux semaines après la contamination. La réponse anticorps atteint son maximum en 6 à 8 semaines, puis diminue progressivement sur plusieurs mois, voire plusieurs années. Le titre d'anticorps n'est pas corrélé à la gravité de la maladie.2,4,6 La prévalence des anticorps anti-Toxoplasma gondii varie avec l'âge et la localisation géographique. Des études ont été menées sur des échantillons provenant de sujets asymptomatiques en bonne santé apparente, du nord-ouest des Etats-Unis. Les sujets, au nombre de 69, étaient âgés de 15 à 64 ans. (Les échantillons avaient été recueillis et congelés à –20 °C avant d'être dosés). La prévalence de la séropositivité pour Toxoplasma gondii, sur la base des résultats obtenus par le dosage IMMULITE Toxoplasmose IgG quantitatif, est de 56 % dans cette population. Des études complémentaires ont été menées sur des échantillons prélevés chez 42 femmes enceintes, âgées de 16 à 41 ans, habitant la même région. (Les

échantillons avaient été recueillis et congelés à –20 °C avant d'être dosés). La prévalence de la séropositivité pour Toxoplasma gondii, sur la base des résultats obtenus par le dosage IMMULITE Toxoplasmose IgG quantitatif, est de 5 % pour cette population. (Voir le graphique “Expected Values”.) Utiliser ces valeurs à titre indicatif uniquement. Chaque laboratoire devrait établir ses propres valeurs de référence.

Limites L'utilisation du dosage IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasmose IgG quantitatif pour le diagnostic d'une infection récente en dosant des paires de sérums n'a pas été validée. Les résultats doivent impérativement être interprétés dans le contexte clinique du patient, de la symptomatologie et d'autres résultats de laboratoire. La mise en évidence d'IgG spécifiques dans un échantillon unique ne permet pas de distinguer une infection active d'une infection passée. Les patients suspects de primo-infection ou d'infection active doivent faire l'objet d'une recherche d'IgM anti-Toxoplasma gondii. Pour mettre en évidence une séroconversion, un second échantillon sérique devra être prélevé trois ou quatre semaines après le prélèvement négatif de la phase aiguë, au cours de la phase de convalescence de l'infection. L'échantillon de phase aiguë doit être conservé et testé en parallèle avec l'échantillon de la phase de convalescence. Il est possible que les IgG spécifiques ne soient pas détectables dans la phase précoce d'une infection aiguë par Toxoplasma gondii. Les résultats obtenus chez des patients séropositifs pour le VIH, des patients suivant un traitement immunosuppresseur ou des patients ayant d'autres troubles conduisant à une immunosuppression, devront être interprétés avec prudence. Les performances de ce dosage n'ont pas été évaluées pour l'utilisation d'échantillons provenant de sang de cordon, de nouveau-nés, de patients allant recevoir une transplantation ou pour des liquides biologiques autres que le


sérum, comme l'urine, la salive ou le liquide amniotique. Les anticorps hétérophiles du sérum humain peuvent réagir avec les immunoglobulines faisant partie des composants du coffret et interférer avec les immunodosages in vitro. [Voir Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Les échantillons provenant de patients fréquemment exposés aux animaux ou aux produits sériques d'origine animale peuvent présenter ce type d'interférence pouvant potentiellement donner un résultat anormal. Ces réactifs ont été mis au point afin de minimiser le risque d'interférence, cependant des interactions potentielles entre des sérums rares et les composants du test peuvent se produire. Dans un but diagnostique, les résultats obtenus avec ce dosage doivent toujours être utilisés en association avec un examen clinique, l'histoire médicale du patient et d'autres résultats.

Performances du test Consulter les tableaux et graphiques pour obtenir les données représentatives des performances du test. Les résultats sont donnés en UI/ml. (En l'absence de précision supplémentaire, tous les résultats ont été obtenus sur des échantillons sériques prélevés sur tubes sans gel, ni activateur de la coagulation). Domaine de mesure : 5,0 – 250 UI/ml. Standardisé par rapport au Troisième Standard International de l'OMS pour les anticorps sériques anti-toxoplasmose chez l'homme.

Sensibilité analytique : ≤ 5,0 UI/ml. Précision : les statistiques ont été réalisées sur les résultats de 5 doublets testés chacun pendant 5 jours. (Voir le tableau « Intraassay Precision » et «Interassay Precision».) N.B. : le contrôle négatif et l'échantillon n° 1 étaient toujours inférieurs à 5 UI/ml (la limite inférieure du domaine de mesure pour tous les doublets de chaque série). Spécificité : La spécificité du test IMMULITE Toxoplasmose IgG quantitatif a été évaluée sur 50 échantillons positifs pour le cytomégalovirus (CMV), le virus de la varicelle et du zona (VZV), le virus

Epstein-Barr (EBV), pour Mycoplasma pneumoniae et le parvovirus B19. Avec ces échantillons, le dosage IMMULITE Toxoplasmose IgG quantitatif et un immunodosage pour le dosage des IgG anti-Toxoplasmose (coffret D) avaint une concordance de 96% (48/50). Autres types d'échantillons : pour estimer l'effet de l'utilisation de différents type d'échantillons, 16 volontaires ont été prélevés sur tubes secs, héparinés et sur tubes vacutainer SST® Becton Dickinson. Tous les échantillons puis dosés selon le protocole Toxoplasmose IgG quantitatif IMMULITE, avec les résultats suivants. (Hépariné) = 1,02 (Sérum) + 0,13 UI/ml r = 1,00

(SST) = 0,98 (tubes ordinaires) – 0,06 UI/ml r = 1,00

Moyennes : 4,4 UI/ml (Sérum) 4,6 UI/ml (Hépariné) 4,2 UI/ml (SST)

Dans une autre étude, le sang de 16 volontaires a été prélevé sur tubes vacutainer en ordinaire et EDTA. Tous les échantillons puis dosés selon le protocole Toxoplasmose IgG quantitatif IMMULITE, avec les résultats suivants. (EDTA) = 0,93 (Sérum) – 0,003 UI/ml r = 1,00

Moyennes : 5,3 UI/ml (EDTA) 5,6 UI/ml (Sérum)

Performance clinique La performance clinique du dosage IMMULITE Toxoplasmose IgG quantitatif a été étudiée sur un total de 199 échantillons sériques, dosés chacun par trois centres investigateurs, dont deux situés en dehors des Etats-Unis. Sur les 199 échantillons (recueillis et congelés à -20 °C avant d'être dosés), 61 avaient été prélevés chez des femmes venues consulter pour un examen obstétrique ou gynécologique, 42 avaient été prélevés chez des femmes enceintes et le reste provenait de patients présentant divers états cliniques (SIDA, anémie, artérite, fatigue, céphalées, lymphome, méningite, pneumonie, etc.). On comptait 37 hommes et 162 femmes, âgés de 15 à 68 ans. Une des études rétrospectives a été menée dans un centre hospitalo-universitaire du Nord-ouest des Etats-


Unis. Les 199 échantillons ont été analysés avec le dosage IMMULITE Toxoplasmose IgG quantitatif et avec le coffret A, un dosage immunofluorescent (ELFA) du commerce.

IMMULITE Toxoplasmose IgG Quantitatif

Coffret A

Pos

Nég

Sensibilité relative

Spécificité relative

Positif 52 2

Négatif 0 145

96,3%

100%

Concordance : 99,0% Limites de confiance à 95% pour la sensibilité relative et la spécificité relative, respectivement: 87,3% – 99,5% et 97,5% – 100%. (Limites de confiance par test exact.)

Les deux échantillons discordants, négatifs selon IMMULITE, mais positifs selon le coffret A, ont retestés avec le coffret B, un dosage immuno-enzymatique à microparticules (MEIA) disponible dans le commerce, et trouvés positifs. Dans une seconde étude rétrospective, menée en dehors des Etats-Unis, 194 échantillons sur 199 (5 échantillons avaient un volume insuffisant) ont été dosé avec le test IMMULITE Toxoplasmose IgG quantitatif et avec le coffret B.

IMMULITE Toxoplasmose IgG quantitatif

Coffret B

Pos

Nég



Positif 46 5

Négatif 2 141

90,2%

98,6%

Concordance : 96,4% Limites de confiance à 95% pour la sensibilité relative et la spécificité relative, respectivement: 78,6% – 96,7% et 95,0% – 99,8%. (Limites de confiance par test exact.)

Parmi les sept échantillons discordants, trois sur cinq, qui étaient négatifs selon IMMULITE mais positifs selon le coffret B, étaient négatifs avec le coffret A. Les deux échantillons positifs selon IMMULITE, mais négatifs selon le coffret B étaient positifs avec le coffret A. Dans la troisième étude rétrospective, également menée en dehors des Etats-Unis, 160 échantillons sur 199 (39 échantillons étaient d'un volume insuffisant) ont été analysés avec le dosage IMMULITE Toxoplasmose IgG

quantitatif et avec le coffret C, un dosage immuno-enzymatique du commerce.

IMMULITE Toxoplasmose IgG quantitatif

Coffret C

Pos

Nég



Positif 32 2

Douteux 0 4

Négatif 2 120

94,1%

98,4%

Concordance : 97,4% Limites de confiance à 95% pour la sensibilité relative et la spécificité relative, respectivement: 80,3% – 99,3% et 94,2% – 99,8%. (Limites de confiance par test exact).

Les deux échantillons positifs selon IMMULITE, mais négatifs selon le coffret C, étaient positifs avec le coffret A. Parmi les échantillons négatifs selon IMMULITE, mais positifs selon le coffret C, l'un était positif avec le coffret A et l'autre négatif avec le coffret A. Les quatre échantillons négatifs selon IMMULITE, mais douteux selon le coffret C, étaient tous négatifs avec le coffret A. Ainsi, les mesures IMMULITE sont concordantes avec celles du coffret A pour sept des huit cas de divergence avec le coffret C.

Assistance technique En France distribué par DPC France 90 bd National 92257 La Garenne-Colombes. Le système d’assurance qualité de DPC est certifié ISO 13485 (2003).

Italiano

IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasma Quantitativo IgG Uso: Ad uso diagnostico in vitro con gli Analizzatori IMMULITE ed IMMULITE 1000 — per la misurazione quantitativa della anticorpi Anti-Toxoplasma gondii nel siero, quale ausilio nella determinazione dello stato sierologico vs.Toxoplasma gondii.

Il kit non è stato approvato dall'FDA per lo screening dei donatori di sangue o di plasma.


Codice: LKTXP1 (100 test), LKTXP5 (500 test) Codice del Test: TXP Colore: grigio chiaro

Riassunto e spiegazione del Test Il Toxoplasma gondii è un parassita intracellulare obbligato in grado di infettare la maggior parte dei mammiferi, inclusi gli esseri umani. L'organismo viene trasmesso attraverso ingestione di carne mal cotta. In tutto il mondo, dall'1 al 90% della popolazione può essere infettata;7 negli Stati Uniti tra il 25 ed il 30% della popolazione adulta risulta infettata.3

Mentre la toxoplasmosi si può manifestare in diverse forme, generalmente le infezioni non sono clinicamente evidenti, e le infezioni latenti possono persistere per tutta la vita.2 I sintomi clinici conclamati sono simili alla mononucleosi infettiva, con linfoadenopatia, febbre, mal di testa, affaticamento ed a volte polmonite e miocardite.6

Come nel caso di altre infezioni latenti, l'infezione da toxoplasma acuta può rappresentare una minaccia grave per individui immunodepressi e per i neonati che contraggono l'infezione in utero. I pazienti immunodepressi possono sviluppare l'encefalite, la miocardite o la polmonite.3 Le infezioni congenite generalmente insorgono come consequenza dell'infezione materna asintomatica acuta. Questa infezione può dar luogo a nascita prematura, aborto spontaneo, o parto di feto morto.4,6 I neonati possono manifestare corioretinite, idrocefalia, microcefalia, calcificazione cerebrale e ritardo psicomotorio.1 La maggior parte dei bambini che hanno contratto l'infezione in utero non mostreranno sintomi sino all'età adulta.4

La gestione della toxoplasmosi richiede il controllo sierologico degli individui infettati,3 poiché l'organismo non può essere isolato in coltura diretta. I test quantitativi per la presenza degli anticorpi IgG anti-Toxoplasma possono essere utili per determinare un infezione precedente ed indicare la riattivazione dell'infezione. E' importante avere informazioni diagnostiche accurate, particolarmente durante la gravidanza, poiché il

trattamento con spiramicina può ridurre i rischi per il feto.5

Principio del procedimento Il dosage IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasma Quantitativo IgG è un immunodosaggio sequenziale in chemiluminescenza ed in fase solida. Cicli d'incubazione: 2 × 30 minuti.

Prelievo dei Campioni Si consiglia l'utilizzo di un'ultracentrifuga per schiarire i campioni lipemici. I campioni che sono opaci o che hanno materiali particolati devono essere chiarificati da centrifuga a bassa velocità. La centrifugazione dei campioni di siero prima che la coagulazione sia completa può produrre fibrina. Per evitare risultati errati dovuti alla presenza di fibrina, assicurarsi che il processo di coagulazione sia completo prima di centrifugare i campioni. Alcuni campioni, in modo particolare quelli di pazienti sottoposti a terapia con anticoagulanti, possono richiedere tempi di coagulazione più lunghi. Provette per il prelievo di sangue di produttori diversi possono dare valori differenti, a seconda dei materiali e degli additivi usati, incluso gel o barriere fisiche, attivatori di coaguli e/o anticoagulanti. L'IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasma Quantitativo IgG non é stato verificato con tutte le possibili variazioni di tipi di provette. Consultare la sezione riguardante Campioni Alternativi per dettagli sulle provette testate. Volume richiesto: 10 µL di campione prediluito 1:21. (Il porta campioni deve contenere almeno 100 µL più del volume totale richiesto). Conservazione: 3 giorni a 2–8°C o 6 mesi a –20°C.13 Diluizione del Campione del Paziente: I campioni di siero devono essere prediluiti 1:21 con il Diluente del Campione IgG/IgM (LIGZ2). Questa diluizione deve essere effettuata manualmente ad es.: aggiungendo 20 µL del campione del paziente a 400 µL di Diluente del Campione (LIGZ2, forniti con il kit). In alternativa, quando viene utilizzato l' IMMULITE 1000 Windows®, la diluizione


interna viene effettuata automaticamente utilizzando l'LIGW, a patto che venga fornito il Modulo Diluente del Campione IgG/IgM. (L1KIGW1,5). I risultati stampati siano stati corretti con una diluizione di 1:21.

Avvertenze e Precauzioni Ad uso diagnostico in vitro. Reagenti: Conservare i reagenti a 2–8°C. Eliminare in conformità alle leggi vigenti. Seguire le precauzioni generali e manipolare tutti i componenti come se fossero potenzialmente infetti. I materiali derivati da sangue umano sono stati testati con esito negativo per la Sifilide, gli Anticorpi anti-HIV 1 e 2, l'Antigene di Superficie dell'Epatite B e gli Anticorpi Anti-Epatite C. E' stata aggiunta Sodio Azide a concentrazioni inferiori a 0,1 g/dL come conservante. Al momento dell'eliminazione, irrorare con molta acqua per evitare la formazione di azidi metalliche potenzialmente esplosive nelle tubature di piombo e di rame. Substrato Chemiluminescente: Evitare la contaminazione e l'esposizione alla luce solare diretta. (Vedi metodica.) Acqua: Utilizzare solo acqua distillata o deionizzata. La sferetta è coattata con un antigene toxoplasma inattivato. Comunque, è consigliabile essere prudenti durante la calibrazione e l'eliminazione dei materiali a causa della possibile presenza di un virus residuo. I risultati anti-Toxoplasma IgG per un dato campione utilizzando dosaggi di produttori diversi possono variare a causa delle diverse metodologie utilizzate e della specificità dei reagenti. I risultati forniti dal laboratorio al medico devono includere quanto segue: “I seguenti risultati sono stati ottenuti con il kit IMMULITE/ IMMULITE 1000 Toxoplasma Quantitativo IgG EIA. I valori ottenuti con dosaggi di diversi produttori non sono interscambiabili".

Materiali Forniti I componenti costituiscono un unico set. Le etichette all'interno della confezione sono necessarie per eseguire i dosaggi.

Test Unit Toxoplasma IgG Quantitativo (LTXP1) Ogni Test Unit con codice a barre contiene una biglie coattata con antigene Toxoplasma gondii inattivato e parzialmente purificato (tachizoiti di tipo RH da peritoneo di topo). Stabile a 2–8°C fino alla data di scadenza. LKTXP1: 100 unit. LKTXP5: 500 unit. Le buste delle test unit devono essere a temperatura ambientale prima di aprire. Aprire tagliando lungo il bordo superiore, lasciando intatto la chiusura ermetica. Risigillare le buste per proteggere contro umidità.

Porta Reagenti Toxoplasma IgG Quantitativo (LTXPA, LTXPB) Con codice a barre. LTXPA: 7,5 mL di un tampone a base proteica, con conservanti. LTXPB: 7,5 mL di fosfatasi alcalina (intestino di vitello) coniugata con anticorpo monoclonale murino anti-IgG umane in un tampone con conservanti. Conservare chiuso in frigorifero: stabile a 2–8°C fino alla data di scadenza. Si consiglia di utilizzare il prodotto entro 30 giorni dall'apertura se conservato nella maniera indicata. LKTXP1: 1 Porta Reagente. LKTXP5: 5 Porta Reagenti.

Calibratori Toxoplasma IgG Quantitativo (LTXPL, LTXPH) Due flaconi (Basso ed Alto), ciascuno con 4 mL di siero umano con IgG reattive anti-Toxoplasma, in un tampone con conservanti. (Non è necessaria la prediluzione.) Stabile a 2–8°C per 14 giorni dopo l'apertura, o per 6 mesi (aliquotato) a –20°C. LKTXP1: 1 set. LKTXP5: 2 set.

Controlli Toxoplasma IgG Quantitativo (LTXPC1, LTXPC2, LTXPC3) Tre flaconi (Negativo, Basso Positivo e Positivo) ciascuno con 2 mL. LTXPC1 (Controllo negativo): Un flacone contenente siero umano con IgG non reattive al toxoplasma, con conservanti. LTXPC2, LTXPC3 (Controllo basso positivo, Controllo positivo): Due flaconi contenenti siero umano con IgG reattive al toxoplasma, con conservanti. Stabile a 2–8°C per 14 giorni dopo l'apertura, o per 6 mesi (aliquotato) a –20°C. LKTXP1: 1 set. LKTXP5: 2 set.


IMMULITE: I controlli Toxoplasma IgG richiedono la stessa prediluizione manuale 1:21 dei campioni, nel Diluente del Campione IgG/IgM (LIGZ2). IMMULITE 1000: il software IMMULITE 1000 effettua diluizioni automatiche interne dei campioni e dei controlli. Inserire i controlli (come controlli). Fare riferimento alla metodica relativa ai controlli per i livelli di concentrazione.

Diluente IgG/IgM (LIGZ2) Per la diluizione manuale dei campioni dei pazienti e dei controlli. Una 100 mL matrice proteina non umana/tampone con conservanti. Stabile a 2–8°C per 30 giorni dopo l'apertura. o a –20°C per 6 mesi (aliquotato). LKTXP1: 1 flacone. LKTXP5: 3 flaconi. Per la diluzione interna dei campioni dei pazienti utilizzando IMMULITE 1000 Windows®, fare riferimento alla Sezione “Componenti del Kit Forniti Separatamente”.

Componenti del kit forniti separatamente

Modulo Diluente del Campione IgG/IgM (L1KIGW1,5) Richiesto per la diluizione interna dei campioni dei pazienti e dei controlli utilizzando l'IMMULITE 1000 Windows®. I porta (LIGW) Diluente del Campione contengono una tampone proteico non umano concentrata (2.5X) con conservanti. Stabile a 2-8°C fino alla data di scadenza. L1KIGW1: 2 Porta Campioni L1KIGW5: 10 Porta Campioni. LSUBX: Substrato Chemiluminescente LPWS2: Tampone di lavaggio dell'Ago LKPM: Kit di Pulizia dell'Ago LCHx-y: Tubi porta campioni (con codice a barre) LSCP: Porta Campioni (monouso) LSCC: Coperchi per Porta Campioni (Opzionali) DCHS: Vassoi Porta Campioni per la Diluizione (con codice a barre) per le diluizioni interne sull'IMMULITE 1000 Windows®.

Materiali richiesti Pipette per la dispensazione dei campioni; acqua distillata o deionizzata.

Procedura del Dosaggio Attenzione: per avere prestazioni ottimali, è importante effettuare le procedure di manutenzione di routine cosiccome definito nel Manuale dell'Operatore dell'IMMULITE o IMMULITE 1000. Vedi il Manuale dell'Operatore IMMULITE o IMMULITE 1000 per: preparazione, setup, diluizioni, calibrazione, dosaggio e controllo di qualità. Controllate ogni test unit verificando la presenza della sferetta prima di caricarla sullo strumento. I due porta reagenti A e B devono essere caricati sul carosello per eseguire questo dosaggio. Per l'IMMULITE 1000 Windows®, occorre che il Porta Diluente del Campione sia caricato sul carosello. Intervallo di Calibrazione Consigliato: 4 settimane. Controllo di Qualità: i controlli forniti con questo kit devono essere utilizzati come materiale di controllo di qualità per monitorare le prestazioni del dosaggio. I controlli negativo e positivo servono a monitorare il mal funzionamento del reagente. Il controllo positivo fornito non assicura la precisione del cutoff. Oltre ai controlli forniti, gli utilizzatori possono richiedere ulteriori controlli a coprire il range più elevato del dosaggio. Si possono testare altri controlli secondo le linee guida o secondo quanto previsto dagli enti locali, statali e/o federali o dalle organizzazioni accreditanti.12 Si consiglia di dosare periodicamente i campioni reattivi e non reattivi per assicurare l'accuratezza della dispensazione nella fase di diluizione.

Interpretazione dei risultati Il dosaggio IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasma IgG è standardizzato in conformità al Terzo Standard Internazionale per il siero anti-toxoplasma dell'Organizzazione Mondiale della Sanità. Il valore del cutoff del dosaggio è stato determinato da campioni rappresentativi negativi e positivi (confermato mediante il


metodo ELISA) utilizzando la tecnica ROC (Receiver Operating Characteristic). Positivo: Un risultato maggiore o uguale a 8 IU/mL è indicativo di un'infezione passata. Negativo: Un risultato inferiore a 6,5 IU/mL è considerato negativo. I risultati inferiori a 6,5 IU/mL devono essere registrati solo come Negativi, e nessuna concentrazione numerica deve essere registrata. Indeterminato: Un risultato maggiore o uguale a 6,5 IU/mL e minore di 8 IU/mL viene considerato indeterminato. Campioni superiori a 250 IU/mL devono essere registrati "superiori a 250 IU/mL". Campioni con un risultato superiore a 250 IU/mL quando vengono dosati con una diluizione 1:21 richiesta, possono essere diluiti ulteriormente con il diluente IgG/IgM per campioni. La presenza di anticorpi IgG anti-Toxoplasma gondii è indicativa di un'esposizione precedente all'organismo. Un singolo campione può essere utilizzato soltanto per stimare lo stato sierologico dell'individuo. Un risultato “indeterminato" indica un livello intermedio di anticorpi anti-Toxoplasma gondii nel campione; per questo motivo, il campione deve essere analizzato di nuovo. I campioni che presentano risultati “indeterminati” devono essere analizzati mediante un metodo alternativo, o, se possibile, occorre prelevare un secondo campione entro un periodo ragionevole (p.e. una settimana). Non si consiglia l'interpretazione dei risultati se il controllo positivo o negativo non rientra nel range specificato nella sezione “Controllo di Qualità”. L'ordine di grandezza del livello IgG registrato non presenta correlazioni con il titolo finale. I risultati comunicati dal laboratorio al medico devono includere quanto segue: "I seguenti risultati sono stati ottenuti con il kit IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasma Quantitativo IgG EIA. I valori ottenuti con dosaggi di diversi produttori non sono interscambiabili".

Valori Attesi E' possibile che individui infettati dal toxoplasma non mostrino livelli rilevabili di anticorpi IgG nelle prime fasi dell'infezione. I livelli di anticorpi IgG anti-toxoplasma gondii cominciano ad aumentare uno – due settimane dopo l'infezione. I livelli raggiungono il punto massimo in 6 – 8 settimane, poi diminuiscono gradualmente durante un periodo di mesi o anche anni. Generalmente, i titoli bassi sono rilevabili per tutta la vita. Il titolo anticorpale non ha correlazioni con la gravità della malattia.2,4,6 La prevalenza di anticorpi IgG anti- Toxoplasma gondii varia a seconda dell'età e della zona geografica. Sono stati condotti studi con campioni di individui asintomatici presumibilmente sani provenienti dal nordovest degli Stati Uniti. I 69 soggetti avevano tra 15 e 64 anni (I campioni sono stati prelevati in precedenza e conservati congelati a –20°C). La prevalenza della reattività al toxoplasma, in base ai risultati del dosaggio IMMULITE Toxoplasma IgG Quantitativo, era il 56% in questa zona geografica. Sono stati condotti altri studi con campioni di 42 donne gravide provenienti dalla stessa zona geografica, tra 16 e 41 anni (I campioni sono stati prelevati in precedenza e conservati congelati a –20°C). La prevalenza della reattività al toxoplasma, in base ai risultati del dosaggio IMMULITE Toxoplasma IgG Quantitativo, era 5% per questa popolazione specifica, per tutti i replicati di ogni seduta. (Vedi il grafico “Expected Values” Detti valori dovrebbero essere considerati solo come suggerimento. Ogni laboratorio dovrebbe stabilire i propri range di riferimento.

Limiti L'utilizzo del dosaggio IMMULITE/IMMULITE 1000 Toxoplasma IgG Quantitativo per diagnosticare un'infezione recente mediante il dosaggio di coppie di campioni di siero non è stato ancora validato. I risultati del dosaggio devono essere considerati nel contesto della storia clinica


e della sintomatologia del paziente e di altre informazioni fornite dal laboratorio. La presenza di anticorpi IgG in un singolo campione non è sufficiente per distinguere tra un'infezione attiva ed un'infezione precedente. I pazienti che eventualmente presentano un'infezione iniziale o un'infezione attiva devono essere testati per la presenza degli anticorpi IgM anti- Toxoplasma gondii. Per la determinazione della sieroconversione da non reattivo a reattivo, è consigliabile prelevare un secondo campione di siero tre o quattro settimane dopo il campione acuto e non reattivo, durante la fase di convalescenza dall'infezione. Il campione della fase acuta deve essere conservato ed analizzato in parallelo con il campione della fase di convalescenza. E' possibile che individui con un'infezione acuta da toxoplasma non mostrino anticorpi IgG rilevabili durante la prima fase dell'infezione. I risultati per pazienti affetti da HIV, per pazienti sottoposti ad una terapia immunosoppressiva, o in pazienti con malattie che portano alla immunosoppressione devono essere interpretati con prudenza. Le caratteristiche di questo dosaggio non ne consentono l'utilizzo con campioni di neonati, sangue del cordone ombelicale, pazienti pretrapianto, o fluidi corporei diversi dal siero, come urina, saliva o liquido amniotico. Gli anticorpi eterofili presenti nel siero umano possono reagire con le immunoglobuline presenti nelle componenti del dosaggio provocando un'interferenza con i dosaggi in vitro. [Vedi Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Campioni di pazienti routinariamente esposti agli animali o a prodotti derivati da siero di animali possono presentare questo tipo di interferenza causa potenziale di risultati anomali. Questi reagenti sono stati formulati per minimizzare il rischio di interferenze, tuttavia, possono verificarsi interazioni potenziali tra sieri rari e componenti del test. A scopo diagnostico, i risultati ottenuti da questo dosaggio devono sempre essere utilizzati unitamente all'esame

clinico, all'anamnesi del paziente e ad altre indagini di laboratorio.

Prestazioni del Dosaggio Vedi tavole e grafici per dati rappresentativi. I risultati sono indicati in IU/mL. (Laddove non diversamente specificato, tutti i dati sono stati generati su campioni di siero raccolti in provette senza gel separatore o additivi che favoriscano la formazione di coaguli.) Range di calibrazione: 5,0 – 250 IU/mL. Standardizzata in conformità al WHO 3rd IS per il siero umano anti-toxoplasma.

Sensibilità analitica: ≤ 5,0 IU/mL. Precisione intra-dosaggio (All'interno della stessa seduta): Sono state calcolate statistiche per campioni dai risultati di 5 replicati ciascuno in 5 giorni separati. (Vedi las Tabellas “Intraassay Precision” e “Interassay Precision”). Fare attenzione che il controllo negativo ed il Campione 1 siano ben al di sotto di 5 IU/mL ( il limite inferiore del range di calibrazione del dosaggio) per tutti i replicati in ogni seduta. Specificità: La specificità del dosaggio IMMULITE Toxoplasma IgG Quantitativo è stata valutata testando 50 campioni positivi per il citomegalovirus (CMV), per il virus della varicella-zoster (VZV), per il virus dell'Epstein-Barr (EBV), per il Mycoplasma pneumoniae ed il parvovirus B19. Con questi campioni, il dosaggio IMMULITE Toxoplasma IgG Quantitativo ed un kit in immunoenzimatica disponibile in commercio per il Toxoplasma IgG (Kit D) hanno presentato una correlazione del 96% (48/50). Tipo di Campione Alternativo: Per determinare l'effetto di campioni alternativi, è stato prelevato del sangue da 16 volontari in provette semplici, eparinizzate e Becton Dickinson vacutainer SST®. Tutti i campioni si sono analizzati mediante il procedimento di Toxoplasma IgG dell'IMMULITE, con i risultati seguenti. (Eparina) = 1,02 (Siero) + 0,13 IU/mL r = 1,00

(SST) = 0,98 (tubi semplici) – 0,06 IU/mL r = 1,00

Valore medio: 4,4 IU/mL (Siero)


4,6 IU/mL (Eparina) 4,2 IU/mL (SST)

In un altro studio, il sangue è stato prelevato a 16 volontari in tubi di vetro normali, EDTA e vacutainer. Tutti i campioni si sono analizzati mediante il procedimento di Toxoplasma Quantitativo IgG dell'IMMULITE, con i risultati seguenti. (EDTA) = 0,93 (Siero) – 0,003 IU/mL r = 1,00

Valore medio: 5,3 IU/mL (EDTA) 5,6 IU/mL (Siero)

Prestazioni cliniche Sono state analizzate le prestazioni cliniche del dosaggio IMMULITE Toxoplasma IgG Quantitativo utilizzando un totale di 199 campioni di siero, dosati in tre aree geografiche, due delle quali fuori degli Stati Uniti. Dei 199 campioni (prelevati in precedenza e conservati congelati a –20°C) 61 sono stati ottenuti da donne presentatesi per esami ostetrici e ginecologici; 42 sono stati ottenuti da donne gravide, ed i campioni restanti sono stati ottenuti da pazienti con diverse malattie e condizioni cliniche (AIDS, anemia, artrite, affaticamento, mal di testa, linfoma, meningite, polmonite ed altri). Si trattava di 37 maschi e 162 femmine, tra i 15 ed i 68 anni). Uno degli studi retrospettivi è stato condotto presso un centro medico universitario nel nordovest degli Stati Uniti. I 199 campioni sono stati analizzati in maniera non concomitante con il dosaggio IMMULITE Toxoplasma IgG Quantitativo e con il Kit A, un'immunodosaggio disponibile in commercio in fluorescenza enzima legato per il Toxoplasma IgG (ELFA).

IMMULITE Toxoplasma IgG Quantitativo

Kit A

Pos

Neg

Sensitività Relativa

Specificit Relative

Positivo 52 2

Negativo 0 145

96,3%

100%

Correlazione: 99,0% 95% Limiti di Confidenza rispettivamente per la Sensitività e la Specificità relativa: 87,3% – 99,5% e 97,5% – 100%. (Limiti di Confidenza per test preciso.)

I due campioni discordanti, negativi con il kit IMMULITE ma positivi con il Kit A, sono stati dosati ulteriormente con risultato positivo con il Kit B un dosaggio in immunoenzimatica con microparticelle Toxoplasma IgG (MEIA),. Nel secondo studio clinico condotto presso un centro fuori dagli Stati Uniti, 194 dei 199 campioni (volume di campione insufficiente per 5 campioni) sono stati dosati con il dosaggio IMMULITE IgG toxoplasma quantitativo e con il Kit B.


Kit B

Pos

Neg


Specificit Relative

Positivo 46 5

Negativo 2 141

90,2%

98,6%

Correlazione: 96,4% 95% Limiti di Confidenza rispettivamente per la Sensibilità e la Specificità relative: 78,6% – 96,7% e 95,0% – 99,8%. (Limiti di Confidenza per test esatto.)

Dei sette campioni discordanti, tre dei cinque negativi con il kit IMMULITE ma positivi con il Kit B erano negativi con il Kit A. I due campioni positivi con il kit IMMULITE ma negativi con il Kit B erano positivi con il Kit A. Nel terzo studio retrospettivo, condotto fuori dagli Stati Uniti, 160 dei 199 campioni (volume di campione insufficiente per 39 campioni) sono stati analizzati con il dosaggio IMMULITE Toxoplasma IgG quantitativo e con il Kit C, un dosaggio in immunoenzimatica disponibile sul mercato.


Kit C

Pos

Neg


Specificit Relative

Positivo 32 2

Equivoci 0 4

Negativo 2 120

94,1%

98,4%

Correlazione: 97,4% 95% Limiti di Confidenza rispettivamente per la Sensitività e la Specificità relativa: 80,3% – 99,3% e 94,2% – 99,8%. (Limiti di Confidenza per test preciso).

I due casi positivi con il kit IMMULITE ma negativi con il Kit C erano positivi con il Kit A. Dei due casi negativi con IMMULITE


ma positivi con il Kit C, uno era positivo con il Kit A e l'altro era negativo con il Kit A. I quattro casi negativi con IMMULITE ma indeterminati con il Kit C erano tutti negativi con il Kit A. Dunque, i risultati dell'IMMULITE sono concordi con quelli del Kit A in sette degli otto casi di discordanza con il Kit C.

Assistenza Tecnica All'estero: Si prega di contattare il proprio Distributore DPC Nazionale. Il sistema di qualità della Diagnostic Products Corporation è registrato all’ ISO 13485:2003.

Português

Toxoplasma Quantitativa IgG Utilização: Para uso diagnóstico in vitro nos analisadores IMMULITE e IMMULITE 1000 – para a detecção quantitativa de anticorpos IgG para o Toxoplasma gondii (toxoplasma) no soro, como auxíliar na determinação do estado serológico da infecção pelo Toxoplasma gondii.

Este dispositivo não é aprovado pela FDA (Food and Drugs Administration) para testar (i.e. rastreio) de dadores de sangue ou plasma.

Números de catálogo: LKTXP1 (100 testes), LKTXP5 (500 testes) Código do teste: TXP Cor: Cinzento claro

Sumário e explicação do teste O Toxoplasma gondii é um parasita intracelular sem via alternativa capaz de infectar a maioria dos mamíferos, incluindo humanos. O organismo é transmitido através de ingestão de carne insuficientemente cozida. Em todo o mundo, de 1 a 90 porcento da população pode estar infectada,7 com 25 a 30 por cento da população adulta infectada nos EUA.3 A toxoplasmose pode manifestar-se de várias formas, as infecções são em geral clinicamente inaparentes, e infecções latentes normalmente persistem por toda a vida.2 Os sintomas clínicos evidentes são similares á mononucleose infecciosa, com linfoadenopatia, febre, dor

de cabeça, mal estar e por vezes pneumonia e miocardite.6

Como em outras infecções latentes, a infecção de toxoplasmose aguda pode apresentar uma séria ameaça a indivíduos imunocomprometidos e recém-nascidos que adquirem a infecção no útero. Doentes imunosuprimidos podem desenvolver encefalite, miocardite ou pneumonia.3 Infecções congénitas normalmente resultam como consequência da infecção materna aguda assintomática. Esta infecção pode causar parto prematuro, aborto espontâneo ou nascimento de feto morto.4,6 Recém-nascidos podem manifestar corioretinite, hidrocefalia, microcefalia, calcificação cerebral e atraso psicomotor.1 A maioria das crianças infectadas congénitamente não exibem nenhum sintoma até à idade mais adulta.4

O controlo da toxoplasmose requer monitorização serológica dos indivíduos infectados,3 já que o organismo não se predispõe a cultura. Testes quantitativos para indicar a presença de IgG para o toxoplasma podem ser úteis para determinar infecção anterior e indicar a reactivação da infecção. É importante uma informação diagnóstica precisa, especialmente durante a gestação, já que o tratamento com espiramicina pode reduzir o risco para o feto.5

Princípio do procedimento A Toxoplasma Quantitativo IgG IMMULITE/IMMULITE 1000 é um imunoensaio seqüencial em fase sólida, poor quimioluminescência. Ciclos de incubação: 2 × 30 minutos.

Colheita Recomenda-se o uso de uma ultra centrífuga para clarear amostras lipémicas. Amostras que estiverem turvas ou possuírem material em partículas devem ser clarificadas através de centrifugação de baixa velocidade. A centrifugação de amostras de soro antes da formação completa do coágulo pode resultar na presença de fibrina. Para prevenir resultados errados devido à presença de fibrina, certifique-se que a formação do coágulo foi completa antes


da centrifugação das amostras. Algumas amostras, em especial as de doentes que recebem terapia anticoagulante podem requerer um maior tempo de formação do coágulo. Os tubos para colheita sanguínea de diferentes fabricantes, podem originar diferentes valores, dependendo dos materiais e aditivos, incluíndo gel ou barreiras fisicas, activadores do coágulo e/ou anti coagulantes. IMMULITE / IMMULITE 1000 Toxoplasma Quantitativo IgG não foram ainda testados com todas as possiveis variações originadas pelos tipos de tubos. Consultar a secção Tipos de Amostras Alternativas para obter detalhes sobre os tubos que foram testados. Volume de amostra: 10 µL de amostra de doente prediluída (diluição 1 para 21). (A cuvete de amostra deve conter um mínimo de 100 µL a mais que o volume total exigido.) Estabilidade: 3 dias a 2–8°C, ou 6 meses a –20°C.13 Diluição da amostra do paciente: As amostras devem ser pré-diluídas 1 em 21 com o diluente de amostra IgG/IgM (LIGZ2). Esta diluição deve ser realizada manualmente, ex.: pela adição de 20 μL de amostra à 400 μL de diluente de amostra, (LIGZ2) fornecidos com o kit. Alternativamente, o sistema do IMMULITE 1000 Windows® realiza a diluição on-board, automaticamente, usando-se LIGW (fornecido no módulo diluente de amostra IgG/IgM, L1KIGW1,5). Os resultados impressos, foram corrigidos para a diluição 1 – para – 21.

Precauções Para uso de diagnóstico in vitro. Reagentes: Manter a 2–8°C. Elimine de acordo com as normas aplicadas. Manipule com as devidas precauções todos os materiais capazes de transmitir doenças infecciosas. As matérias primas obtidas de soro humano foram testadas, dando resultados negativos para a sífilis, para os anticorpos do vírus da imunodeficiência humana (HIV) 1 e 2; para o antigénio de superfície da hepatite B (HBsAg) e para os anticorpos do vírus da hepatite C.

Azida de sódio foi adicionada como conservante; para evitar acumulações de azidas metálicas explosivas em canalizações de cobre e alumínio, os reagentes devem ser rejeitados no esgoto apenas se estiverem diluídos e forem lavados com grandes volumes de água. Substrato quimioluminescente: Evite contaminação e exposição directa à luz (ver bula). Água: Utilize água destilada ou desionizada. A esfera é revestida com antigénio de toxoplasma inactivado. Porém, recomenda-se cuidado ao trabalhar ou ao eliminar os materiais fornecidos devido à possível presença de organismo residual. Os resultados anti-Toxoplasma IgG determinados para uma dada amostra com doseamentos de diferentes fabricantes podem variar devido a diferenças nos métodos de análise e especificidade de reagente. Contudo, os resultados enviados pelo laboratório ao médico devem incluir: “Os seguintes resultados foram obtidos com IMMULITE/IMMULITE 1000 EIA IgG Quantitativo de Toxoplasma." Os resultados obtidos por métodos de doseamento de outros fabricantes não podem ser comparados.

Materiais fornecidos Os componentes formam um conjunto uno e indivisível. Os códigos de barras no interior das caixas são necessários para o ensaio.

Unidades de Teste de Toxoplasma Quantitativa IgG (LTXP1) Cada unidade identificada com código de barras contém uma pérola revestida com antigénios de toxoplasma gondii inactivados, parcialmente purificados (cadeia RH taquizoite inactivada de peritoneu de rato). Estável até a data de validade a 2–8°C. LKTXP1: 100 unidades. LKTXP5: 500 unidades. Deixe que as saquetas de Unidades de Teste fiquem à temperatura ambiente antes de as abrir. Abra cortando pela ranhura superior, mantendo o fecho intacto. Sele novamente as saquetas para proteger contra a humidade.


Embalagens de reagentes de Toxoplasma Quantitativa IgG (LTXPA, LTXPB) Com código de barras. LTXPA: Contém 7,5 mL de tampão de base proteíca, com conservante. LTXPB: Contém 7,5 mL de fosfatase alcalina(de intestino de vitela) conjugada com anticorpo monoclonal anti-IgG humana de murino em tampão com conservante. Manter tapado e refrigerado: Estável até à data de validade a 2–8 °C. Recomenda-se a utilização até 30 dias após ser aberto quando armazenado de acordo com as indicações. LKTXP1: 1 conjunto. LKTXP5: 5 conjuntos.

Ajustes de Toxoplasma Quantitativa IgG (LTXPL, LTXPH) Contém dois frascos (nível alto e baixo) cada um contendo 4 mL de soro humano com IgG reactivo ao toxoplasma, tamponizado, com conservante. (Não é necessária prediluição.) Estável, após a abertura, durante 14 dias a 2–8°C, ou por 6 meses (aliquotado) a –20°C. LKTXP1: 1 conjunto. LKTXP5: 2 conjuntos.

Controlos de Toxoplasma Quantitativa IgG (LTXPC1, LTXPC2, LTXPC3) Três frascos (Negativo, Positivo Baixo e Positivo) cada um contendo 2 mL. LTXPC1 (Controlo Negativo): Dois frascos com soro humano com IgG não reactivo ao toxoplasma, com conservante. LTXPC2, LTXPC3 (Controlo Positivo Baixo, Controlo Positivo): Dois frascos com soro humano com IgG reactivo ao toxoplasma, com conservante. Estável, após a abertura, durante 14 dias a 2–8°C, ou por 6 meses (aliquotado) a –20°C. LKTXP1: 1 conjunto. LKTXP5: 2 conjuntos. IMMULITE: controlos de Toxoplasma IgG requerem a mesma pré-diluição manual 1 para 21 em amostras de doentes, com Diluente de Amostras de IgG/IgM (LIGZ2). IMMULITE 1000: O programa do IMMULITE 1000 realiza a auto-diluição amostras de paciente e controle. Dar entrada dos controlos como controlos. Ter em atenção a literatura inserida para os níveis de concentração.

Diluente de amostra para IgG/IgM (LIGZ2) Para a diluição manual de amostras de doentes e controles. 100 mL matriz protéica tamponizada de origem não humana, com conservante. Estável, após a abertura, durante 30 dias a 2–8°C, ou por 6 meses (aliquotado) a –20°C. LKTXP1: 1 frasco. LKTXP5: 3 frascos. Para diluições de amostras de doentes no aparelho usando o IMMULITE 1000 Windows® ver secção “Componentes do kit fornecidos separadamente”.

Componentes do kit fornecidos separadamente

Módulo de diluente de amostra IgG/IgM (L1KIGW1,5) Requerido para diluição on-board das amostras dos pacientes e controles usando IMMULITE 1000 Windows®. Embalagens de diluente de amostra (LIGW) contendo matriz concentrada (2,5X) de proteína não humana/tampão, com conservante. Estável de 2 à 8 ºC até a data de expiração. L1KIGW1: 2 embalagens. L1KIGW5: 10 embalagens. LSUBX: Substrato quiomioluminescente LPWS2: Solução de lavagem LKPM: Kit de limpeza do pipetador LCHx-y: Suportes das cuvetes de amostra (com código de barras) LSCP: Cuvetes de amostra (descartáveis) LSCC: Tampa de cuvetes de amostra (opcional) DCHS: Suportes das Cuvetes de Diluição (com códigos de barras) para diluições dentro do IMMULITE 1000 Windows® Também necessário : Pipetas de transferência de amostra; água destilada ou desionizada.

Procedimento do doseamento Têr em atenção que para obter um desempenho óptimo, é importante efectuar todos os procedimentos de manutenção de rotina conforme definido no Manual de Operador do IMMULITE ou IMMULITE 1000. Ver o Manual do Operador do IMMULITE ou IMMULITE 1000 para: preparação,


setup, diluições, ajustes, procedimento do ensaio e controlo de qualidade. Confirme a presença da esfera em cada Unidade de Teste antes de a colocar no sistema. Repare que as Embalagens de Reagente A e B devem ser colocadas no carrossel dos reagentes para executar este doseamento. Para o IMMULITE 1000 Windows®, a embalagem de Diluente da Amostra também tem de ser colocada no carrossel. Intervalo entre ajustes aconselhável: 4 semanas. Amostras de controlo de qualidade: Os controlos fornecidos com o Dispositivo devem ser usados para monitorizar a sua perfomance. Os controlos positivo e negativo servem para monitorizar falhas substanciais do reagente. O controlo positivo fornecido não assegura a precisão do cut-off. Para além dos controlos fornecidos, os utilizadores podem usar outros controlos para monitorizar as “zonas altas” do ensaio. Controlos adicionais podem ser testados de acordo com as directrizes ou requisitos das regulamentações locais, estaduais e/ou federais, ou das organizações acreditadas.12 Recomenda-se também que amostras, reactivas e não reactivas, conhecidas sejam testadas periódicamente para assegurar a exactidão da pipetagem e pré- diluição.

Interpretação dos Resultados O doseamento IgG Quantitativo de Toxoplasma IMMULITE/IMMULITE 1000 é padronizado em termos do Terceiro Padrão Internacional da Organização Mundial de Saúde para soro humano anti-toxoplasma. O “cutt-off” do doseamento foi determinado por amostras representativas positiva e negativas. (confirmado por um método ELISA) usando a técnica ROC (Receiver Operating Characteristics). Positivo: Um resultado superior ou igual a 8 IU/mL indica uma infecção anterior. Negativo: Um resultado inferior a 6,5 IU/mL é considerado como "negativo." Resultados inferiores a 6,5 IU/mL devem ser referidos apenas como Negativo, e

nenhuma concentração numérica deve ser referida.

Indeterminado: Um resultado superior ou igual a 6,5 IU/mL e inferior a 8 IU/mL é considerado indeterminado. Amostras com resultados superiores a 250 IU/mL devem ser referidas como "superior a 250 IU/mL". Amostras apresentando um resultado superior a 250 IU/mL, quando testados na auto-diluição requerida de 1-para-21, podem ser ainda mais diluídos com o Diluente de Amostras IgG/IgM. A presença de anticorpos IgG para Toxoplasma gondii é uma indicação de exposição anterior ao organismo. Uma única amostra pode ser usada para avaliar o estado serológico do indivíduo. Um resultado "indeterminado" indica um nível intermédio de anticorpos para o Toxoplasma gondii na amostra: portanto, a amostra deve ser testada novamente. Amostras que apresentem novamente um resultado "indeterminado" devem ser examinadas por um método alternativo, ou uma segunda amostra deve ser colhida, se possível, dentro de um período razoável de tempo (por exemplo, uma semana). Qualquer interpretação dos resultados não é recomendada se o controlo positivo ou negativo estiver fora dos valores especificados na secção de Controlo de Qualidade. A magnitude dos niveis de IgG encontrados não pode ser correlacionada com um titulo de ponto final. Contudo, os resultados enviados pelo laboratório ao médico devem incluir: “Os seguintes resultados foram obtidos com IMMULITE/IMMULITE 1000 EIA IgG Quantitativo de Toxoplasma." Os resultados obtidos de métodos de doseamento de outros fabricantes não podem ser comparados.

Valores de Referência Indivíduos com toxoplasmose podem não exibir níveis detectáveis do anticorpo IgG na fase precoce da infecção. Níveis do anticorpo IgG para o Toxoplasma gondii começam a elevar-se uma ou duas semanas após a infecção. Níveis máximos são alcançados em 6 a 8 semanas, e em seguida decrescem


gradualmente no decorrer dos meses ou até anos. Niveis baixos são geralmente detectáveis pela vida toda. O nivel de anticorpo não é correlacionavel com a severidade da doença.2,4,6 A prevalência do anticorpo IgG para o Toxoplasma gondii varia de acordo com a idade e localização geográfica. Foram realizados estudos com amostras de indivíduos assintomáticos, aparentemente saudáveis, da região noroeste dos EUA. Os 69 indivíduos possuíam idades compreendidas entre 15 a 64 anos.(Amostras foram colhidas previamente e armazenadas congeladas a –20°C). A prevalência de reactividade ao toxoplasma, baseado nos resultados do doseamento IgG quantitativo para Toxoplasma IMMULITE, foi avaliado em 56% nesta zona geográfica. Foram realizados estudos adicionais com amostras de 42 gestantes da mesma zona geográfica, com idades entre 16 e 41 anos. (Amostras foram colhidas previamente e armazenadas congeladas a –20°C). A prevalência de reactividade ao toxoplasma para esta população específica, baseado nos resultados do doseamento IgG Quantitativo para Toxoplasma IMMULITE, foi avaliado em 5%. (Ver gráfico de “Valores esperados”.) Estes valores devem ser considerados apenas como directrizes. Cada laboratório deve estabelecer os seus próprios valores.

Limitações O uso de IgG Quantitativo para Toxoplasma IMMULITE/IMMULITE 1000 para diagnosticar uma infecção recente pelo” teste de soros duplos” ainda não foi validado. Os resultados do teste devem ser observados dentro do contexto da história clínica do doente, sintomatologia e outros valores laboratóriais. A presença dos anticorpos IgG numa única amostra não é suficiente para distinguir entre a infecção activa ou prévia. Os doentes suspeitos de ter infecção primária ou activa devem ser testados para a presença do anticorpos IgM para Toxoplasma gondii. Para a determinação da seroconversão de não reactivo a reactivo, deve ser

colhida uma segunda amostra de soro 3 ou 4 semanas após a amostra aguda, não reactiva, durante o estágio de convalescença da infecção. A amostra da fase aguda deve ser armazenada e testada em paralelo com a amostra de convalescença. Indivíduos com infecção aguda por toxoplasma podem não exibir quaisquer anticorpos IgG detectáveis na fase precoce da infecção. Os resultados em doentes de HIV, em doentes em terapia imunosupressora, ou em doentes com outras doenças que levam à imunosupressão, devem ser interpretados com cuidado. As características de desempenho do doseamento não foram estabelecidas para o uso com amostras neonatais, de sangue de cordão umbilical, de doentes pré-transplante ou outros fluidos corporais além de soro, tal como urina, saliva ou líquido amniótico. Os anticorpos heterófilicos no soro humano podem reagir com as imunoglobulinas presentes no ensaio, causando interferência com os imunoensaios in vitro. [Ver Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Amostras de doentes expostas em rotina a produtos ou soros de animais podem demonstrar este tipo de interferência, potencialmente causadora de resultados anómalos. Estes reagentes foram formulados para minimizar o risco de interferência, contudo podem ocorrer potenciais interacções entre soros (raros) e componentes do teste. Para fins de diagnóstico, os resultados obtidos neste ensaio devem ser sempre analisados em combinação com o exame clínico, história de medicação do doente e outros dados que se possam correlacionar.

Características do ensaio Ver tabelas e gráficos para dados representativos do desempenho do doseamento. Os resultados são apresentados em IU/mL. Salvo referência em contrário, todos os dados provêm de amostras de soro colhidas em tubos sem anticoagulantes, barreiras de gel ou aditivos promotores da coagulação.


Zona de trabalho: 5,0 – 250 IU/mL. padronizado de acordo com o Terceiro IS da OMS para Soro Anti-Toxoplasma, Humano.

Sensibilidade Analítica: ≤ 5,0 IU/mL Precisão: Foram efectuados cálculos estatísticos para controlos e amostras com 5 réplicas cada testadas em cinco dias separados. ( Ver tabela de “Intraassay Precision” e tabela de “Interassay Precision” ) Repare que o controlo negativo e amostra 1 foram consistentemente abaixo de 5 IU/mL (o limite inferior da zona de trabalho do doseamento) para todas as réplicas em cada ensaio. Especificidade: A especificidade do ensaio de IMMULITE Toxoplasma Quantitative IgG foi avaliada testando 50 amostras positivas para o citomegalovirus (CMV), varicella-zoster virus (VZV), Epstein-Barr virus (EBV), Mycoplasma pneumoniae and parvovirus B19. Com estas amostras,o IMMULITE Toxoplasma Quantitativo IgG e um imunoensaio enzimático comercial para Toxoplasma IgG (Kit D) mostraram uma correlacção de 96% (48/50). Tipo de amostra alternativa: Para determinar o efeito de amostras alternatives, foi colhido sangue de 16 voluntários em tubos secos, heparinizados e tubos de vacum SST® da Becton Dickinson. Todas as amostras doseadas pelo Procedimento de Toxoplasma Quantitativo IgG IMMULITE, com os seguintes resultados. (Heparina) = 1,02 (Soro) + 0,13 IU/mL r = 1,00

(SST) = 0.98 (tubos simples) – 0,06 IU/mL r = 1,00

Médias: 4,4 IU/mL (Soro) 4,6 IU/mL (Heparina) 4,2 IU/mL (SST)

Em outro estudo, foi colhido sangue de 16 voluntários em tubos lisos heparinizados, com EDTA e em tubos de vácuo de vidro com da Becton Dickinson. Todas as amostras doseadas pelo Procedimento de Toxoplasma Quantitativo IgG IMMULITE, com os seguintes resultados. (EDTA) = 0,93 (Soro) – 0,003 IU/mL r = 1,00

Médias: 5,3 IU/mL (EDTA) 5,6 IU/mL (Soro)

Estudos Clínicos O desempenho clínico do doseamento IgG Quantitativo para Toxoplasma IMMULITE foi estudado usando-se um total de 119 espécimes de soro, doseados em cada um dos três locais, dois dos quais fora dos EUA. Dos 199 espécimes (previamente colhidos e armazenados congelados a –20°C), 61 foram obtidos de mulheres que se apresentaram para exame ginecológico e obstétrico, 42 foram obtidos de gestantes, e o restante foi obtido de doentes com doenças e condições variadas (SIDA, anemia, artrite, fadiga, dor de cabeça, linfoma, meningite, pneumonia e outras). 37 homens e 162 mulheres, com idades compreendidas entre 15 e 68 anos. Um dos estudos retrospectivos foi realizado num centro médico universitário na região noroeste dos EUA. Os 199 espécimes foram avaliados não simultâneamente com o procedimento IgG Quantitativo para Toxoplasma IMMULITE e o Kit A, um imunoensaio fluorescente ligado por enzima de IgG para Toxoplasma, disponível comercialmente, (ELFA).


Kit A

Pos

Neg



Positivo 52 2

Negativo 0 145

96,3%

100%

correlacção: 99,0% 95% Limites de confidênciapara a sensibilidade e especificidade relativa, respectivamente: 87,3% – 99,5% e 97,5% – 100%. (limites de confidência por teste exato.)

Os dois espécimes discordantes, negativo pelo IMMULITE mas positivo pelo Kit A, foram avaliados adicionalmente pelo Kit B, um imunoensaio enzimático de micropartículas IgG para Toxoplasma, comercialmente disponível (MEIA), e o resultado foi confirmado positivo. No segundo estudo retrospectivo, realizado fora dos EUA, 194 dos 199 espécimes (volume de amostras insuficiente para 5 espécimes) foram avaliados com o doseamento IgG


Quantitativo para Toxoplasma IMMULITE e o Kit B.

IMMULITE Toxoplasma Quantitativo IgG

Kit B

Pos

Neg



Positivo 46 5

Negativo 2 141

90,2%

98,6%

correlação: 96,4% 95% limites de confidência para a sensibilidade e especificidade relativa, respectivamente: 78,6% – 96,7% e 95,0% – 99,8%. (limites de confidência por teste exato.)

Dos 7 espécimes discordantes, 3 dos 5 negativos por IMMULITE mas positivos pelo Kit B mostraram-se positivos pelo Kit A. Os dois espécimes positivos por IMMULITE mas negativos pelo Kit B mostraram-se positivos pelo Kit A. No terceiro estudo retrospectivo, também realizado fora dos EUA, 160 dos 199 espécimes (volume de amostras insuficiente para 39 espécimes) foram avaliados com o doseamento IgG Quantitativo para Toxoplasma IMMULITE e o Kit C, um imunoensaio enzimático comercialmente disponível.

IMMULITE Toxoplasma Quantitativo IgG

Kit C

Pos

Neg



Positivo 32 2

Equivocal 0 4

Negativo 2 120

94,1%

98,4%

correlação: 97,4% 95% limites de confidência para a sensibilidade e especificidade relativa respectivamente: 80,3% – 99,3% e 94,2% – 99,8%. (limites de confidência por teste exato).

Os dois espécimes positivos por IMMULITE mas negativos pelo Kit C mostraram-se positivos pelo Kit A. Dos dois casos negativos por IMMULITE mas positivos pelo Kit C, um mostrou-se positivo pelo Kit A e o outro negativo pelo Kit A. Os quatro casos negativos por IMMULITE mas equívocos pelo Kit C foram todos negativos pelo Kit A. Logo, os resultados de IMMULITE concordam com o Kit A em 7 dos 8 casos de discordância com o Kit C.

Assistência Técnica: Por favor contacte o seu Distribuidor Nacional. O Sistema de Qualidade da Diagnostic Products Corporation está registado sob ISO 13485:2003.

Diagnostic Products Corporation Corporate Offices 5210 Pacific Concourse Drive Los Angeles, CA 90045-6900 USA 2006-08-08 PILKTXP – 12

immulite/immulite 1000. toxoplasma quantitative igg (2006)

Health & Medicine