7/27/2019 J. Clin. Microbiol.-1990-Namdari-1796-8

1/4

1990, 28(8):1796.J. Clin. Microbiol.

H Namdari and E J BottoneAeromonas caviae.factors delineating enteropathogenicity ofCytotoxin and enterotoxin production as

http://jcm.asm.org/content/28/8/1796Updated information and services can be found at:

These include:

CONTENT ALERTS

morecite this article),Receive: RSS Feeds, eTOCs, free email alerts (when new articles

http://journals.asm.org/site/misc/reprints.xhtmlInformation about commercial reprint orders:http://journals.asm.org/site/subscriptions/To subscribe to to another ASM Journal go to:

http://jcm.asm.org/cgi/alertshttp://jcm.asm.org/cgi/alertshttp://jcm.asm.org/cgi/alerts

7/27/2019 J. Clin. Microbiol.-1990-Namdari-1796-8

2/4

J O U R N A L O F C L I N I C A L M I C R O B I O L O G Y , A u g . 1 9 9 0 , p . 1 7 9 6 - 1 7 9 80 0 9 5 - 1 1 3 7 / 9 0 / 0 8 1 7 9 6 - 0 3 $ 0 2 . 0 0 / 0C o p y r i g h t 1 9 9 0 , A m e r i c a n S o c i e t y f o r M i c r o b i o l o g y

C y t o t o x i n a n d E n t e r o t o x i n P r o d u c t i o n as F a c t o r s D e l i n e a t i n gE n t e r o p a t h o g e n i c i t y o f Aeromonas c a v i a eHASSAN NAMDARI AND EDWARD J . BOTTONE*C l i n i c a l M i c r o b i o l o g y L a b o r a t o r i e s , T h e Mount S i n ai H o s p i t a l, On e G u s t a v e L . L e v y P l a c e ,Ne w Y o r k , Ne w Y o r k 1 0 0 2 9 - 6 5 7 4

R e c e i v e d 1 0 J a n u a r y 1 9 9 0 / A c c e p t e d 1 7 May 1 9 9 0T w e n t y - o n e s t o o l a n d e n v i r o n m e n t a l A e r o m o n a s c a v i a e i s o l a t e s were s t u d i e d f o r c y t o p a t h o g e n i c i t y f o r

c u l t u r e d HEp-2 c e l l s . C y t o t o x i c a c t i v i t y was d e m o n s t r a t e d b y t h e 2 1 A . c a v i a e s t r a i n s a n d b y A . c a v i a e ATCC1 5 4 6 8 a f t e r c h a l l e n g i n g HEp-2 c e l l s w i t h f i l t r a t e s f r o m a 2 4 - h - o l d b r o t h s h a k e c u l t u r e c o m p o s e d o fd o u b l e - s t r e n g t h , g l u c o s e - f r e e T r y p t i c a s e soy b r o t h , i n c u b a t e d a t 3 5 C . H e a t - s t a b l e c y t o t o x i c i t y was o b s e r v e d 5h a f t e r t h e a d d it i o n o f 1 / 5 a n d 1 / 1 0 c o n c e n t r a t i o n s o f f i l t r a t e s a n d c o ns i s te d o f c e l l r o u n d i n g a n d c e l ld e t a c h m e n t . E n t e r o t o x i n a c t i v i t y was a l s o d e m o n s t r a t e d t h r o u g h t h e s u c k l i n g mouse assay. T h e s e d a t a a d v a n c et h e r o l e o f A . c a v i a e as a g a s t r o i n t e s t i n a l p a t h o g e n .

Of t h e genus A e r o m o n a s , A . s o b r i a a n d A . h y d r o p h i l a ar er e g a r d e d as g a s t r o i n t e s t i n a l t r a c t p a t h o g e n s ; A . c a v i a e ,h o w e v e r , i s c o n s i d e r e d t o b e n o n e n t e r o p a t h o g e n i c ( 2 , 9 , 1 7 ) .A l t h o u g h we ( 1 2 ) a n d o t h e r s ( 1 , 8 , 1 6 ) h a v e r e p o r t e d t h erecovery o f A . c a v i a e f r o m t h e s t o o l s o f i n d i v i d u a l s w i t hd i a r r h e a , i t s d i a r r h e a g e n i c p o t e n t i a l h a s n o t b e e n s u b s t a n t i -a t e d t h r o u g h e x p e r i m e n t a t i o n w i t h a n i m a l s o r h u m a n s .W h e r e a s s e v e r a l e x o p r o d u c t s ( e n t e r o t o x i n , c y t o t o x i n , a n dh e m o l y s i n ) p r o d u c e d b y A . h y d ro p h i l a a n d A . s o b r i a h a v eb e e n i d e n t i f i e d t o account f o r t h e i r e n t e r o p a t h o g e n i c i t y ( 5 , 7 ,1 4 , 1 5 ) , t o d a t e a n e x o e n t e r o p a t h i c component h a s n o t b e e nu n i f o r m l y d e t e c t e d i n A . c a v i a e .I n t h i s s t u d y , we d e s c r i b e c y t o t o x i n a n d e n t e r o t o x i np r o d u c t i o n among c l i n i c a l a n d e n v i r o n m e n t a l i s o l a t e s o f A .c a v i a e w h i c h f u r t h e r s u p p o r t s i t s r o l e as a n e n t e r o p a t h o g e n .

MATERIALS AND METHODSB a c t e r i a l i s o l a t e s . A . c a v i a e s t r a i n s were i s o l a t e d e i t h e rf r o m s t o o l s p e c i m e n s o f d i a r r h e i c i n d i v i d u a l s a t Th e MountS i n a i H o s p i t a l ( n = 1 7 ) o r f r o m a d r i n k i n g water s u p p l y i nI s r a e l ( n = 4 ) . A d d i t i o n a l l y , o n e r e f e r e n c e A . c a v i a e c u l t u r e(ATCC 1 5 4 6 8 ) was i n c l u d e d . Th e i s o l a t e s were i d e n t i f i e d t ot h e s p e c i e s l e v e l as p r e v i o u s l y d e s c r i b e d ( 1 1 ) .C y t o t o x i n a n d e n t e r o t o x i n a s s a y s . O v e r n i g h t c u l t u r e s o f A .c a v i a e on 5% s h e e p b l o o d agar p l a t e s (BBL M i c r o b i o l o g yS y s t e m s , C o c k e y s v i l l e , M d . ) were i n o c u l a t e d i n d i v i d u a l l y t o

5 m l e a c h o f g l u c o s e - f r e e d o u b l e - s t r e n g t h t r y p t i c so y b r o t h( T S B - 2 x ) , b r a i n h e a r t i n f u s i o n b r o t h ( D i f c o L a b o r a t o r i e s ,D e t r o i t , M i c h . ) , a n d TSB-2x c o n t a i n i n g 0.4% g l u c o s e i n2 5 - m l E r l e n m e y e r f l a s k s . I n d i v i d u a l f l a s k s were i n c u b a t e d a t3 5 C f o r 8 , 1 6 , a n d 2 4 h w i t h s h a k i n g ( 2 0 0 r p m ) on a ne n v i r o n m e n t a l - w a t e r b a t h s h a k e r (New B r u n s w i c k S c i e n t i f i cC o . , Ne w B r u n s w i c k , N . J . ) . C e l l - f r e e f i l t r a t e s were p r e p a r e db y c e n t r i f u g a t i o n ( 5 , 0 0 0 x g ) a t 4 C f o r 3 0 m i n w i t h s u b s e -q u e n t f i l t r a t i o n o f t h e s u p e r n a t a n t s t h r o u g h a 0 . 4 5 - , u m -p o r e - s i z e f i l t e r ( M i l l i p o r e C o r p . ) . Th e f i l t r a t e s were e i t h e rr e f r i g e r a t e d p r i o r t o i m m e d i a t e u se o r s t o r e d a t - 7 0 C .A . c a v i a e c y t o t o x i n a c t i v i t y i n H E p - 2 c e l l s . Th e HEp-2 c e l lm o n o l a y e r was p r e p a r e d b y c u l t u r i n g t h e c e l l s i n 1 2 - w e l lt i s s u e c u l t u r e p l a t e s ( C o s t a r , C a m b r i d g e , M a s s . ) i n m i n i m a le s s e n t i a l medium c o n t a i n i n g 10% f e t a l c a l f serum f o r 4 8 h .Th e c e l l m o n o l a y e r was m a i n t a i n e d i n m i n i m a l e s s e n t i a l

* C o r r e s p o n d i n g a u t h o r .

medium c o n t a i n i n g 2 % f e t a l c a l f s e r u m , a n d c u l t u r e f i l t r a t e swe r e a d d e d t o g i v e f i n a l d i l u t i o n s o f 1 / 5 o r 1 / 1 0 i n e a c h w e l l .N e g a t i v e c on t r o l s c o ns i s t ed o f TSB-2x o r b r a i n h e a r t i n f u -s i o n b r o t h d i l u t e d t o 1 / 5 w i t h m i n i m a l e s s e n t i a l m e d i u m .P o s i t i v e c y t o t o x i n a c t i v i t y was t a k e n as 25 0% c e l l r o u n d i n ga n d d e t a c h m e n t a n d was d e t e r m i n e d m i c r o s c o p i c a l l y a f t e r 5a n d 2 4 h o f i n cu b a t i o n a t 3 7 C . C e l l d e a t h was c o n f i r m e d b yt r y p a n b l u e (GIBCO L a b o r a t o r i e s , G r a n d I s l a n d , N . Y . ) d y ee x c l u s i o n . I n t h i s t e c h n i q u e , v i a b l e c e l l s ar e s t a i n e d w h e r e a sn o n v i a b l e c e l l s e x c l u d e t h e d y e .S u c k l i n g mouse assay f o r e n t e r o t o x i n a c t i v i t y . C e l l f i l t r a t e s( 0 . 1 m l ) c o n t a i n i n g 0 . 0 2 % ( w t / v o l ) t r y p a n b l u e d e r i v e d f r o mf o u r A . c a v i a e TSB-2x c u l t u r e s were a d m i n i s t e r e d o r a l l y t ot h r e e 3 - t o 4 - d a y - o l d S w i s s a l b i n o m i c e t h r o u g h a f i n ep o l y e t h y l e n e t u b e c o n n e c t e d t o a 1 - m l t u be r c u l i n s y r i n g e .Th e s u c k l i n g m i c e we r e t h e n i n d i v i d u a l l y p l a c e d o n a l a y e r o ff i l t e r p a p e r ( W h a t m a n , I n c . , C l i f t o n , N . J . ) i n a p l a s t i c p e t r id i s h a n d l e f t a t room t e m p e r a t u r e f o r 3 h . Th e a n i m a l s weret h e n s a c r i f i c e d b y c e r v i c a l d i s l o c a t i o n , a n d t h e pr esence o fd y e i n t h e s m a l l i n t e s t i n e a n d t h e d e g r e e o f i n t e s t i n a ld i s t e n t i o n were r e c o r d e d . Th e e n t i r e i n t e s t i n a l t r a c t o f e a c hi n f a n t mouse was t h e n removed a n d w e i g h e d , as was t h er e m a i n i n g b o d y . Th e i n t e s t i n a l w e i g h t / b o d y w e i g h t r a t i o wasc a l c u l a t e d a n d s c o r e d f r o m 0 t o 4 + as p r e v i o u s l y d e s c r i b e d( 4 ) . A d d i t i o n a l l y , t h e occurrence o f d i a r r h e a i n e a c h mousewas a s s e s s e d b y t h e i n t e n s i t y o f b l u e s t a i n o n t h e f i l t e r paper.

RESULTSAs d e t e r m i n e d b y c y t o p a t h o g e n i c i t y t o c u l t u r e d HEp-2c e l l s , a l l c l i n i c a l a n d e n v i r o n m e n t a l A . c a v i a e i s o l a t e s as w e l l

as s t r a i n ATCC 1 5 4 6 8 p r o d u c e d c y t o t o x i n , as e v i d e n c e d b yHEp-2 c e l l m o n o l a y e r d e t a c h m e n t , r o u n d i n g , a n d l o s s o fv i a b i l i t y ( F i g . 1 ) . By u s i n g a 1 / 5 d i l u t i o n o f c u l t u r e f i l t r a t e s ,c y t o t o x i c i t y f o r HEp-2 c e l l s was e v i d e n t as e a r l y as 1 hp o s t e x p o s u r e a n d m a x i m i z e d a t 5 h p o s t i n o c u l a t i o n . Twen-t y - f o u r h o u r s was r e q u i r e d b e f o r e c y t o t o x i c i t y was e v i d e n tw i t h t h e 1 / 1 0 d i l u t i o n o f t h e A . c a v i a e f i l t r a t e s . No a c t i v i t ywas p r e s e n t i n c u l t u r e f i l t r a t e s d i l u t e d 1 / 2 0 o r g r e a t e r o r a f t e rt h r e e c o n s e c u t i v e f r e e z i n g ( - 2 0 C ) a n d t h a w i n g c y c l e s .C y t o t o x i n was p r o d u c e d b y A . c a v i a e i n g l u c o s e - f r e e TSB-2 x b u t n o t i n TSB-2 x c o n t a i n i n g 0.4% g l u c o s e or b r a i n h e a r ti n f u s i o n b r o t h s u p p l e m e n t e d w i t h 0.2% g l u c o s e ( T a b l e 1 ) . Byway o f c o n t r a s t , c y t o t o x i n p r o d u c t i o n b y A . h y d r o p h i l a a n dA . s o b r i a was p r e s e n t i n a l l o f t h e m e d i a . G l u c o s e a p p a r e n t l y

1 7 9 6

V o l . 2 8 , N o . 8

7/27/2019 J. Clin. Microbiol.-1990-Namdari-1796-8

3/4

A . C A V I A E ENTEROTOXIN AND CYTOTOXIN PRODUCTION

S f ,we;.},4~~~~~g

|i'*ff e ! X~~~~~~~;cl* j e , : F '

F I G . 1 . C y t o t o x i n a c t i v i t y o f A . c a v i a e i n H E p - 2 c e l l s a s d e m o n s t r a t e d b y c e l l r o u n d i n g a n d c e l l d e a t h ( a ) , a s c o n t r a s t e d w i t h c o n t r o lc u l t u r e ( b ) c o n t a i n i n g b r o t h a l o n e . P h a s e - c o n t r a s t m a g n i f i c a t i o n , x 4 0 0 .r e p r e s s e d A . c a v i a e c y t o t o x i n p r o d u c t i o n b u t n o t t h a t o f A .h y d r o p h i l a o r A . s o b r i a .A . c a v i a e c y t o t o x i n a c t i v i t y w a s n o t d e t e c t e d a f t e r 8 h o fg r o w t h i n g l u c o s e - f r e e TSB-2x b u t w a s p r e s e n t a t 1 6 h . A .h y d r o p h i l a a n d A . s o b r i a t o x i n a c t i v i t y w a s p r e s e n t i n t h es u p e r n a t a n t f l u i d s a s e a r l y a s 8 h p o s t i n o c u l a t i o n . T h ec y t o t o x i c a c t i v i t y o f t h e A . c a v i a e i s o l a t e s w a s p r e s e r v e d i nh e a t e d ( 1 0 0 C f o r 1 0 m i n . ) c u l t u r e f i l t r a t e s .E n t e r o t o x i n a c t i v i t y o f A . c a v i a e w a s a l s o d e m o n s t r a t e dt h r o u g h t h e s u c k l i n g m o u s e a s s a y , a s e v i d e n c e d b y g a s t r i cd i s t e n t i o n a n d i n t e s t i n a l f l u i d a c c u m u l a t i o n . A l l f o u r s t r a i n so f A . c a v i a e t e s t e d ( 9 5 9 , 1 5 8 5 , 1 5 9 6 2 , a n d ATCC 1 5 4 6 8 ) a sw e l l a s a c o n t r o l A . h y d r o p h i l a s t r a i n ( 2 2 3 ) p r o d u c e d e n t e r o -t o x i n , a s d e t e r m i n e d b y t h e r a t i o o f i n t e s t i n a l w e i g h t t o b o d yw e i g h t .

DISCUSSIONT h e r o l e o f A . c a v i a e a s a g a s t r o i n t e s t i n a l t r a c t p a t h o g e n i sw i d e l y d e b a t e d b ec a u s e n o c l e a r - c u t e v i d e n c e h a s b e e np r e s e n t e d t o s u p p o r t i t s d i a r r h e a g e n i c p o t e n t i a l . W h i l e weTABLE 1 . C y t o t o x i n p r o d u c t i o n b y A e r o m o n a s s p e c i e s i n

d i f f e r e n t c u l t u r e m e d i a aC y t o t o x i n p r o d u c t i o n i n :S p e c i e s N o . o f TSB-2xi s o l a t e s G l u c o s e + 0 . 4 % B H I B bf r e e g l u c o s e

A . c a v i a e c 2 1 + - -A . h y d r o p h i l a 3 + + +A . s o b r i a 2 + + +a As a s s e s s e d i n H E p - 2 c e l l s . + , P r o d u c e d c y t o t o x i n ; - , d i d n o t p r o d u c ec y t o t o x i n .b B H I B , B r a i n h e a r t i n f u s i o n b r o t h .C I n c l u d i n g ATCC 1 5 4 6 8 .

( 1 2 ) a n d o t h e r s ( 6 ) h a v e d o c u m e n t e d e n t e r o a d h e r e n c o f t h i sm e s o p h i l i c a e r o m o n a d , r e p o r t s d o c u m e n t i n g e n t e r o t o x i np r o d u c t i o n a r e i n c o n s i s t e n t . B u r k e e t a l . ( 3 ) r e p o r t e d t h a t 2o f 2 8 6 s t r a i n s o f A . c a v i a e d e r i v e d f r o m d i v e r s e g e o g r a p h i cl o c a l e s were e n t e r o t o x i g e n i c i n t h e s u c k l i n g mouse a s s a y ,a n d T u r n b u l l e t a l . ( 1 7 ) f o u n d 2 o f 1 8 A . c a v i a e s t r a i n s t o b ee n t e r o t o x i g e n i c . B a r e r a n d c o l l e a g u e s ( 2 ) , o n t h e o t h e r h a n d ,c o n c l u d e d t h a t c y t o t o x i n p r o d u c t i o n was a b s e n t i n 4 6 A .c a v i a e s t r a i n s t e s t e d b y c u l t u r e d V e r o c e l l a s s a y .T h e p r e s e n t s t u d y d e l i n e a t e s c y t o t o x i n a n d e n t e r o t o x i np r o d u c t i o n t o b e a c o n s t a n t c h a r a c t e r i s t i c o f A . c a v i a e .C u l t u r e f i l t r a t e s o f A . c a v i a e g r o w n i n g l u c o s e - f r e e T S B - 2 xw e r e c y t o t o x i c t o H E p - 2 c e l l s , a n d a s s h o w n , c y t o t o x i c i t ywas h e a t - s t a b l e . E n t e r o t o x i g e n i c i t y was a l s o o b s e r v e d i n t h es u c k l i n g mouse a s s a y , a s e v i d e n c e d b y d i a r r h e a a n d i n t e s t i -n a l f l u i d a c c u m u l a t i o n .To a c c o u n t , h o w e v e r , f o r t h e a p p a r e n t d i s c r e p a n t r e s u l t sr e p o r t e d p r e v i o u s l y , we p r o p o s e t h a t t h e d e m o n s t r a t i o n o ft o x i n p r o d u c t i o n i s t i m e a n d medium d e p e n d e n t a n d , morei m p o r t a n t l y , i n t r i n s i c a l l y a s s o c i a t e d w i t h t h e r e p r e s s e d a c -t i v i t y o n t o x i n p r o d u c t i o n b y g l u c o s e when p r e s e n t i n t h eg r o w t h m e d i u m . I n o u r h a n d s , A . c a v i a e t o x i n p r o d u c t i o nwas d e t e c t e d i n f i l t r a t e s o n l y a f t e r 1 6 h o f g r o w t h , i n c o n t r a s tt o A . h y d r o p h i l a a n d A . s o b r i a , w h i c h p r o d u c e d c y t o t o x i n a se a r l y a s 8 h a f t e r c u l t u r e i n o c u l a t i o n . T h i s d e l a y i n c y t o t o x i np r o d u c t i o n c o u l d h a v e c o n t r i b u t e d t o n e g a t i v e r e s u l t s r e -p o r t e d b y a u t h o r s wh o t e s t e d f i l t r a t e s f r o m y o u n g e r c u l t u r e s( 1 7 ) .A . c a v i a e u n i f o r m l y p r o d u c e d t o x i n s i n g l u c o s e - f r e e T S B -2 x . I n i t i a l l y , w e , l i k e o t h e r i n v e s t i g a t o r s , u s e d f i l t r a t e s o f A .c a v i a e g r o w n i n s i n g l e - s t r e n g t h TSB t o d e m o n s t r a t e t o x i np r o d u c t i o n a n d w e r e u n s u c c e s s f u l . T h e u t i l i z a t i o n o f d o u b l e -s t r e n g t h TSB was s e r e n d i p i t o u s a n d r e s u l t e d a s a c o n s e -q u e n c e o f t r y i n g v a r i o u s b r o t h m e d i a a n d f o r m u l a t i o n s t od e m o n s t r a t e t o x i n p r o d u c t i o n b y A . c a v i a e . I n t e r e s t i n g l y , a sn o t e d b y o t h e r s ( 2 , 9 , 1 7 ) , s i n g l e - s t r e n g t h TSB a n d b r a i nh e a r t i n f u s i o n b r o t h w e r e a d e q u a t e f o r d e m o n s t r a t i n g t o x i n

V O L . 2 8 , 1 9 9 0 1 7 9 7

A". w4 4 e f e >

e l . . 1 Nq a : Q %, e . % . t

7/27/2019 J. Clin. Microbiol.-1990-Namdari-1796-8

4/4

1 7 9 8 NA M D ARI AND BOTTONEp r o d u c t i o n b y A . h y d r o p h i l a a n d A . s o b r i a b u t n o t A . c a v i a e .P e r h a p s d o u b l e - s t r e n g t h TSB s t a b i l i z e s t h e t o x i n m o l e c u l eb y i n c r e a s i n g p h o s p h a t e c o n t e n t o r s u p p o r t s p r o d u c t i o n o ft h e t o x i n ( s ) b y t h e p r o v i s i o n o f o t h e r n u t r i t i o n a l f a c t o r s ,t h e r eb y a l lo w in g i t s d e t e c t i o n .We h a v e l o n g b e e n aware o f t h e d e l e t e r i o u s e f f e c t ( s u i c i d ep h e n o m e n o n ) o f g l u c o s e i n t h e c e s s a t i o n o f g r o w t h o f A .c a v i a e a n d ( v a r i a b l y ) A . s o b r i a a n d A . h y d r o p h i l a ( 1 0 ) . T h i ss u i c i d e e f f e c t h a s b e e n a t t r i b u t e d t o g l u c o s e c a t a b o l i t e r e -p r e s s i o n o f t h e t r i c a r b o x y l i c a c i d c y c l e enzymes a n d s t i m u -l a t i o n o f p y r u v a t e d e h y d r o g e n a s e o f t h e s u i c i d a l s t r a i n s ( H .N a m d a r i a n d V . J . C a b e l l i , J . B a c t e r i o l . , i n p r e s s ) . S u c h ar e g u l a t o r y m e c h a n i s m r e s u l t s i n t h e a c t i v a t i o n o f t h e f e r m e n -t a t i o n p a t h w a y f o r a c e t i c a c i d p r o d u c t i o n ( w i t h a l o w e r i n g o fp H ) , w h i c h h a s b e e n s h o w n t o b e d e t r i m e n t a l t o A . c a v i a e( 1 3 ) . We p o s t u l a t e t h a t t h e p r e s e n c e o f g l u c o s e i n b r o t hm e d i a u s e d f o r t h e c u l t i v a t i o n o f A . c a v i a e may s u p p r e s st o x i n p r o d u c t i o n v i a a n i d e n t i c a l m e c h a n i s m o r as a conse-quence o f s l o wi n g c e l l g r o w t h a n d t o x i n p r o d u c t i o n b e l o w ad e t e c t a b l e t h r e s h o l d . T h e s e l a t t e r p a r a m e t e r s are i n n e e d o ff u r t h e r c l a r i f i c a t i o n .I n summary, a s u b s t a n t i a l amount o f e v i d e n c e h a sm o u n t e d i n c r i m i n a t i n g A . c a v i a e as a b o n a f i d e e n t e r i cp a t h o g e n . A . c a v i a e i s t h e most common m e s o p h i l i c aero-monad r e c o v e r e d f r o m t h e s t o o l s o f s y m p t o m a t i c f o r m u l a -f e d c h i l d r e n ( u s u a l l y l e s s t h a n 1 ye ar o f a g e ) i n t h e a b s e n c eo f an y o t h e r , b e t t e r - k n o w n e n t e r o p a t h o g en ( 1 2 ) . T h i s spe-c i e s h a s b e e n s h o w n t o a d h e r e t o a v a r i e t y o f c ul t ur ed c e l ll i n e s , a n d now we h a v e i d e n t i f i e d e n t e r o t o x i n a n d c y t o t o x i np r o d u c t i o n as a d d i t i o n a l v i r u l e n c e f a c t o r s . T a k e n t o g e t h e r ,t h i s c o n s t e l l a t i o n o f c l i n i c a l a n d b i o l o g i c c h a r a c t e r i s t i c se v i d e n c e d a n d p o s s e s s e d b y A . c a v i a e u n d e r s c o r e s i t s en-t e r o p a t h o g e n i c p o t e n t i a l .

LITERATURE CITED1 . A l t w e g g , M. 1 9 8 5 . Aeromonas c a v i a e : an e n t e r i c p a t h o g e n ?I n f e c t i o n 1 3 : 2 2 8 - 2 3 0 .2 . B a r e r , M. R. , S . E . M i l l e r s h i p , a n d S . T a b a q c h a l i . 1 9 8 6 . R e l a -t i o n s h i p o f t o x i n p r o d u c t i o n t o s p e c i e s i n t h e genus A e r o m o n a s .J . M e d . M i c r o b i o l . 2 2 : 3 0 3 - 3 0 9 .3 . B u r k e , V . , J . R o b i n s o n , J . B e a m a n , M. G r a c e y , M . L e s m a n a , R .R o c k h i l l , P . E c h e v e r r i a , a n d J . M. J a n d a . 1 9 8 3 . C o r r e l a t i o n o fe n t e r o t o x i c i t y w i t h b i o t y p e i n Aeromonas s p p . J . C l i n . M i c r o -b i o l . 1 8 : 1 1 9 6 - 1 2 0 0 .

4 . B u r k e , V . , J . R o b i n s o n , N . J . B e r r y , a n d M. G r a c e y . 1 9 8 1 .D e t e c t i o n o f e n t e r o t o x i n s o f A e r o m o n a s h y d r o p h i l a b y a s uc k -l i n g - m o u s e t e s t . J . M e d . M i c r o b i o l . 1 4 : 4 0 1 - 4 0 8 .5 . C a m p b e l l , J . D . , a n d C . W. H o u s t o n . 1 9 8 5 . E f f e c t o f c u l t u r a lc o n d i t i o n s o n t h e p r e s e n c e o f a c h o l e r a - t o x i n c r o s s - r e a c t i v ef a c t o r i n c u l t u r e f i l t r a t e s o f A e r o m o n a s h y d r o p h i l a . C u r r . M i -c r o b i o l . 1 2 : 1 0 1 - 1 0 6 .6 . C a r r e l l o , A . , K . A . S i l b u r n , J . R . B u d d e n , a n d J . B . C h a n g .1 9 8 8 . A d h e s i o n o f c l i n i c a l a n d e n v i r o n m e n t a l A e r o m o n a s i s o -l a t e s t o H E p - 2 c e l l s . J . M e d . M i c r o b i o l . 2 6 : 1 9 - 2 7 .7 . C h a k r a b o r t y , T . , M. A . M o n t e n e g r o , S . C . S a n y a l , R . H e l m u t h ,E . B u l l i n g , a n d K . N . T i m m i s . 1 9 8 4 . C l o n i n g o f e n t e r o t o x i n g e n ef r o m A e r o m o n a s h y d r o p h i l a p r o v i d e s c o n c l u s i v e e vi d e nc e o fp r o d u c t i o n o f a c y t o t o n i c e n t e r o t o x i n . I n f e c t . I m m u n . 4 6 :4 3 5 - 4 4 1 .8 . C h a l l a p a l l i , M . , B . R . T e s s , D . G . C u n n i n g h a m , A . K . C h o p r a ,a n d C . W. H o u s t o n . 1 9 8 8 . A e r o m o n a s - a s s o c i a t e d d i a r r h e a i nc h i l d r e n . P e d i a t r . I n f e c t . D i s . J . 7 : 6 9 3 - 6 9 8 .9 . M i l l e r s h i p , S . E . , M. R . B a r e r , a n d S . T a b a q c h a l i . 1 9 8 6 . T o x i np r o d u c t i o n b y A e r o m o n a s s p p . f r o m d i f f e r e n t s o u r c e s . J . M e d .M i c r o b i o l . 2 2 : 3 1 1 - 3 1 4 .1 0 . N a m d a r i , H . , a n d E . J . B o t t o n e . 1 9 8 8 . C o r r e l a t i o n o f t h e s u i c i d ep h e n o m e n o n i n A e r o m o n a s s p e c i e s w i t h v i r u l e n c e a n d e n t e r o -p a t h o g e n i c i t y . J . C l i n . M i c r o b i o l . 2 6 : 2 6 1 5 - 2 6 1 9 .1 1 . N a m d a r i , H . , a n d E . J . B o t t o n e . 1 9 8 9 . S u i c i d e p h e n o m e n o n i nm e s o p h i l i c a e r o m o n a d s a s a b a s i s f o r s p e c i e s i d e n t i f i c a t i o n . J .C l i n . M i c r o b i o l . 2 7 : 7 8 8 - 7 8 9 .1 2 . N a m d a r i , H . , a n d E . J . B o t t o n e . 1 9 9 0 . M i c r o b i o l o g i c a n d c l i n i c a le v i d e n c e s u p p o r t i n g t h e r o l e o f A e r o m o n a s c a v i a e a s a p e d i a t r i ce n t e r i c p a t h o g e n . J . C l i n . M i c r o b i o l . 2 8 : 8 3 7 - 8 4 0 .1 3 . N a m d a r i , H . , a n d V . J . C a b e l l i . 1 9 8 9 . T h e s u i c i d e p h e n o m e n o ni n m o t i l e a e r o m o n a d s . A p p l . E n v i r o n . M i c r o b i o l . 5 5 : 5 4 3 - 5 4 7 .1 4 . N o t e r m a n s , S . , A . H a v e l a a r , W. J a n s e n , S . K o z a k i , a n d P .G u i n e . 1 9 8 6 . P r o d u c t i o n o f " A s a o t o x i n " b y Aeromonass t r a i n s i s o l a t e d f r o m f e c e s a n d d r i n k i n g w a t e r . J . C l i n . M i c r o -b i o l . 2 3 : 1 1 4 0 - 1 1 4 2 .1 5 . P i t a r a n g s i , C . , P . E c h e v e r r i a , R . W h i t m i r e , C . T i r a p a t , S .F o r m a l , G . J . D a m m i n , a n d M. T i n g t a l a p o n g . 1 9 8 2 . E n t e r o -p a t h o g e n i c i t y o f Aeromonas h y d r o p h i l a a n d P l e s i o m o n a ss h i g e l l o i d e s : p r e v a l e n c e a m o n g i n d i v i d u a l s w i t h a n d w i t h o u td i a r r h e a i n T h a i l a n d . I n f e c t . I m m u n . 3 5 : 6 6 6 - 6 7 3 .1 6 . S a n J o a q u i n , V . H . , a n d D . A . P i c k e t t . 1 9 8 8 . Aeromonasa s s o c i a t e d g a s t r o e n t e r i t i s i n c h i l d r e n . P e d i a t r . I n f e c t . D i s . 7 :5 3 - 5 7 .1 7 . T u r n b u l l , P . C . B . , J . V . L e e , M. D . M i l i o t i s , S . Van De W a l l e ,H . J . K o o r n h o f , L . J e f f e r y , a n d T . N . B r y a n t . 1 9 8 4 . E n t e r o t o x i np r o d u c t i o n i n r e l a t i o n t o t a x o n o m i c g r o u p i n g a n d s o u r c e o fi s o l a t i o n o f Aeromonas s p e c i e s . J . C l i n . M i c r o b i o l . 1 9 : 1 7 5 - 1 8 0 .

J . C L I N . M I C R O B I O L .