l. enrique garcía director de calidad y s. alimentaria ... · contaminantes descubrimiento...
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L Enrique Garciacutea
Director de Calidad y S Alimentaria
luisegarciapulevabioteches
1
Granada 17 Febrero 2010
iquestQueacute son
iquestCoacutemo se producen
iquestQueacute papel juegan los laboratorios
2
3
Alimentos funcionales
Son alimentos que tienen (y se puededemostrar) un efecto beneficioso sobreuna o maacutes funciones en el organismo porencima y maacutes allaacute de los efectos habitualesde dicho alimento tales como mejorar elestado de salud y bienestar o reducir elriesgo de enfermedad
Alimentos
Cualquier sustancia (soacutelida o liacutequida)normalmente ingerida por los seres vivos confines
bull nutricionales regulacioacuten del metabolismo ymantenimiento de las funciones fisioloacutegicasbull psicoloacutegicos satisfaccioacuten y obtencioacuten desensaciones gratificantes
Estos dos fines no han de cumplirsesimultaacuteneamente para que una sustancia seaconsiderada alimento
ComposicioacutenContaminantes
ComposicioacutenContaminantesDescubrimientoFuncionalidad
1 Adicioacuten o suplementacioacuten de un alimento con sustancias o ingredientes con efectos beneacuteficos ej
Antioxidantes no vitamiacutenicos prebioacuteticos (FOS) hellip
2 Sustitucioacuten de las sustancias con efectos negativos por otras con efectos beneacuteficos por ejemplo grasa
animal por grasa vegetal
3 Eliminacioacuten de componentes que pueden tener efectos negativos en la salud de los consumidores por
ejemplo proteiacutenas alergeacutenicas
4 Incrementar la concentracioacuten de un componente naturalmente presente y que tiene efectos beneacuteficos en
la salud por ejemplo fortificacioacuten con un micronutriente aumentar la concentracioacuten de fibra alimentaria
beneacutefica
5 Aumentar la biodisponibilidad o estabilidad de un componente para producir efectos funcionales-
beneacuteficos
Son cinco las posibilidades para que un alimento sea transformado enfuncional o se incremente su funcionalidad
4
Son alimentos -No son piacuteldorasLa perspectiva europea difiere de la
norteamericana(ldquonutraceuticalsrdquo-ldquopharmafoodsrdquo)
Algunos componentes funcionales de los alimentos
5
Minerales y vitaminas Suplir carencias asociadas a haacutebitos alimentarios
Carotenoides Neutralizan radicales libres
Fibra dieteacutetica Reduce el riesgo de caacutencer de colon y enfermedades CV
Flavonoides Neutraliza radicales libres y reduce riesgos de caacutencer
Fenoles Antioxidante reduce el riesgo de enfermedades degenerativas
Esteroles vegetales Disminuye el colesterol en la sangre e inhibe laabsorcioacuten del mismo
ProbioacuteticosPrebioacuteticos Mejora la calidad de la flora intestinal
LC-PUFArsquos (Omega3) Reduce el riesgo de enfermedades CV y mejora lasfunciones mentales
iquestSon nuevos
6
7
Liacutepidos
Produccioacuten de aceites de pescado refinados ricos en LC-PUFAs
Estabilizacioacuten de aceites de pescado concentrados para uso farmaceacuteutico
Produccioacuten de aceites micro-encapsulados (emulsiones y polvo)
Ingredientes funcionales en Puleva Biotech
Probioacuteticos
Produccioacuten de cultivos probioacuteticos congelados o liofilizados para aplicaciones
alimentarias y farmaceacuteuticas
Extractos Vegetales
Produccioacuten y estandarizacioacuten de extractos nebulizados en polvo
Produccioacuten y estandarizacioacuten de extractos liacutequidos y formulaciones farmaceacuteuticas
Estandarizacioacuten de principios activos de plantas medicinales
8
Etapas en la industria de ingredientes funcionales Puleva Biotech
Desarrollo tecnoloacutegico
Planta piloto EscaladoProduccioacuten y C
Calidad
Composicioacutenestabilidad y
contaminantesCribado
Ensayos ldquoin vitrordquo
High throughput screening
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
espectrometriacutea de masas y RMN
Identificacioacuten y verificacioacuten
Ensayos de bioluminiscencia citometriacutea etc
Ensayos precliacutenicos
ldquoin vivordquo
Ensayos Cliacutenicos
RegulatoryHealth Claims
Transferencia
Genoacutemica expProteoacutemica expMetaboloacutemica
Ensayos a terceros
9
Etapas en las que participa el laboratorio de anaacutelisis
Composicioacuten
Contaminantes
Funcionalidad(Toxicidad y Eficacia)
Anaacutelisis
Desarrollo de nuevos meacutetodos
10
11
Anaacutelisis Ensayos de intereacutes
Minerales (Ca K Mg Na P Zn Fe Cu)Composicioacuten de aacutecidos grasos(incluidos los trans)Aacutecidos grasos Omega-3Vitaminas liposolubles (A D y E)Vitaminas hidrosolubles (b1 b2 b3 b5 b6 b9 y C)Hidratos de carbonoTrigliceacuteridosTocoferolesIsoflavonasEsterolesAminoaacutecidosComposicioacuten nutricional(Grasa total proteiacutenas cenizas fibra hellip)
12
bull Fenoles 18 meacutetodosbull Terpenos 36 meacutetodosbull Carbohidratos 9 meacutetodosbull Liacutepidos 41 meacutetodosbull Peacuteptidos 11 meacutetodosbull Fibras 36 meacutetodosbull Extractos vegetales13 meacutetodosbull Cultivos bacterianos 4 meacutetodosbull Miscelaacutenea 55 meacutetodos
(Edulcorantes polioles alcaloideshellip)
bull Vitaminasbull Minerales
223 meacutetodos para 100 compuestos
Falta de meacutetodos analiacuteticos que cubran los compuestos (y matrices) usados en el campo
de alimentos funcionales
Anaacutelisis Composicioacuten Caracterizacioacuten de ingredientes
bull Permite detectar la adicioacuten de grasas vegetales no lacteas (B-sitosterol stigmasterol o campesterol)bull Permite evaluar la calidad nutricional a partir del contenido en colesterolbull Control de ingrediente funcional fitoesteroles
Adicioacuten de patroacuten internoy saponificacioacuten con
KOH (MeOH)
Extraccioacuten del insaponificable y concentracioacuten
Extraccioacuten de la grasa laacutectea
Desarrollo de meacutetodos Deteccioacuten de esteroles
13
J Agric Food Chem 2006 Jun 2854(13)4531-6
Simultaneous determination of eight water-soluble vitamins in supplemented foods by liquid chromatographyZafra-Goacutemez A Garballo A Morales JC Garciacutea-Ayuso LEQuality Department Analytical Division Puleva Biotech SA Camino de Purchil 66 E-18004 Granada Spain
14
Desarrollo de meacutetodos Vitaminas hidrosolubles
15
ISO 230652009-IDF 211
min10 15 20 25 30 35 40
pA
5
6
7
8
9
10
11
FID1 A (AG300106008F0701D)
Sample M0823 8379
- C
182n6
cis Linoleico
9976
- C
183n3
Linolen
ico
1063
2 - C
182 con
j CLA
1088
3 - C
184n3
2035
3 - C
205n3
EPA
2887
7 - C
230
3704
4 - C
225n3
DPA
4040
7 - C
226n3
DHA
Desarrollo de meacutetodos Omega-3 y 6 en grasa laacutectea
16
Isoflavonas en leche
Anaacutelisis Composicioacuten Extractos vegetales-APIs
Catequinas en te verde Polifenoles en Equinacea
+ 50 meacutetodos en extractos
y plantas
17
Desarrollo de meacutetodos Anaacutelisis en produccioacuten
Contaminantes reguladosAutenticidad y trazabilidad
Situaciones de alerta
18
19
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
Residuos de PesticidasResiduos de Antibioacuteticos(sulfonamidas B-lactamas tetraciclinasquinolonas y cloranfenicol)Micotoxinas(aflatoxinas B+G aflatoxina M1 y ocratoxina A)Metales pesados(plomo cadmio mercurio y arseacutenico)Hidrocarburos aromaacuteticos policiacuteclicosDisolventes residuales(MeOH EtOH hexano acetona acetato de etilo)Identificacioacuten de aleacutergenos(gluten lactosa hellip)Patoacutegenos(Salmonella Listeria E Coli B Cereus S AureusC Sakazakii)
20
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
21
S Alimentaria Micotoxinas
22
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
Black cohoshCimicifugae rhizomaMonograph Ndeg 2069HPTLC ndash Dr ReichEUROPEAN PHARMACOPOEIA
COMMISSION
Ensayo colaborativoDeteccioacuten de 5 adulteracioacuten con Cimicifuga foetida C dahurica C heracleifolia o C americana en muestras de Cimicifuga racemosa(Black Cohosh)
23
Identificacioacuten de especies botaacutenicas para suplementos de la dieta
K He et al Journal of Chromatography A 1112 (2006) 241ndash254
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
24
IRD
Perfil normal
Perfil alterado
AUTENTICIDAD Aceites concentrados
25
TRAZABILIDAD Perfil proteico en leche
Tratamientos teacutermicos
bull HCl hasta pH 46bull Reposo 30 minbull Centrifugacioacuten y dilucioacuten de sobrenadante
Determinacioacuten de B-lactoglobulina(proteiacutena de lactosuero)
Determinacioacuten de Furosina(producto reaccioacuten Maillard)
bull Hidroacutelisis aacutecida a 110ordmCbull Filtrar y SPE (c18)bull HPLC - pares ioacutenicos (AcH y KCl)
bullEliminacioacuten de grasas y proteiacutenasbullHPLC en columna ioacutenicabullDeteccioacuten y cuantificacioacuten IR
Determinacioacuten de Lactulosa(isoacutemero de lactosa)
MV
000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
Minutes
200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 2200 2400
Lact
osa
- 11
762
Lact
ulos
a -
148
43
26
Deteccioacuten de leche en polvo en leche UHT
Lactulosafurosinage25
(en leche UHT)
Leche en polvo Lactulosa 50
Ratio lf= 0125Furosina 400
Leche UHT Lactulosa 420
Ratio lf= 3000Furosina 140
90 leche UHT +
10 leche en polvo
Lactulosa 383
Ratio lf= 2307Furosina 166
27
28
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Situaciones de alerta
bull Melamina en productos laacutecteosbull ITX en envases de alimentos infantilesbull Hidrocarburos en aceite de girasolbull Benzo (a) pireno en aceites
Respuesta del laboratorio en
48 horas
Participacioacuten del laboratorio de anaacutelisis
29
30
Aacutereas de intereacutes
Obesidad y diabetes
Nutricioacuten infantil
Metabolismo oacuteseo
Enfermedad cardiovascular
Estreacutes oxidativo
Hipertensioacuten
Salud intestinal (inflamacioacuten)
Salud oral
Cribado
HTS de actividad bioloacutegica
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
Identificacioacuten y validacioacuten
Espectrometriacutea de masas y RMN
31
1000 extractos vegetales en un ensayo colorimeacutetrico descreening en placas de 96 Varios extractos cuyo contenido enflavonoides es conocido dieron resultado positivo Mediante eluso de patrones y LC-MS confirmamos la identidad delcompuesto causante del efecto positivo
Libreriacuteas productos naturales (extractos peacuteptidos hellip)
Marcador seleccionado en funcioacuten del objetivo
HT-SCREENING DE ACTIVIDAD BIOLOacuteGICA
32
AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
Fraccioacuten de oligosacaacuteridos aisladapor
bull deslipidacioacuten
bull precipitacioacuten de proteiacutenas
bull GPC en Sephadex G-25
bull colector de fracciones
Separacioacuten y cuantificacioacuten
bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
33
Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
34
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
36
La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
MUESTRAS biopsias de tejidos liacuteneas celulares fluidos bioloacutegicos
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Proteoacutemica de expresioacuten
ESI-APCI
(Q)TOF-MSCHIPMS PMF
Spectrum Mill for MH
MassHunter BioconfirmationMassHunter Profiling
Identificacioacuten y confirmacioacuten de proteiacutenas usando la huella peptiacutedica (PMF)
37
APLICACIOacuteN DE ldquoOacuteMICASrdquo Metaboloacutemica y nutricioacuten
La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
Fluidos Bioloacutegicos
38
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Metaboloacutemica
Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
0
200
400
600
800
week 0 week 2 week 4
bu
tyra
te (
mg
L)
0
200
400
600
800
week 0 week 2 week 4
bu
tyra
te (
mg
L)
Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
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Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Bioinformaacutetica
Muchas gracias por vuestra atencioacuten
iquestQueacute son
iquestCoacutemo se producen
iquestQueacute papel juegan los laboratorios
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3
Alimentos funcionales
Son alimentos que tienen (y se puededemostrar) un efecto beneficioso sobreuna o maacutes funciones en el organismo porencima y maacutes allaacute de los efectos habitualesde dicho alimento tales como mejorar elestado de salud y bienestar o reducir elriesgo de enfermedad
Alimentos
Cualquier sustancia (soacutelida o liacutequida)normalmente ingerida por los seres vivos confines
bull nutricionales regulacioacuten del metabolismo ymantenimiento de las funciones fisioloacutegicasbull psicoloacutegicos satisfaccioacuten y obtencioacuten desensaciones gratificantes
Estos dos fines no han de cumplirsesimultaacuteneamente para que una sustancia seaconsiderada alimento
ComposicioacutenContaminantes
ComposicioacutenContaminantesDescubrimientoFuncionalidad
1 Adicioacuten o suplementacioacuten de un alimento con sustancias o ingredientes con efectos beneacuteficos ej
Antioxidantes no vitamiacutenicos prebioacuteticos (FOS) hellip
2 Sustitucioacuten de las sustancias con efectos negativos por otras con efectos beneacuteficos por ejemplo grasa
animal por grasa vegetal
3 Eliminacioacuten de componentes que pueden tener efectos negativos en la salud de los consumidores por
ejemplo proteiacutenas alergeacutenicas
4 Incrementar la concentracioacuten de un componente naturalmente presente y que tiene efectos beneacuteficos en
la salud por ejemplo fortificacioacuten con un micronutriente aumentar la concentracioacuten de fibra alimentaria
beneacutefica
5 Aumentar la biodisponibilidad o estabilidad de un componente para producir efectos funcionales-
beneacuteficos
Son cinco las posibilidades para que un alimento sea transformado enfuncional o se incremente su funcionalidad
4
Son alimentos -No son piacuteldorasLa perspectiva europea difiere de la
norteamericana(ldquonutraceuticalsrdquo-ldquopharmafoodsrdquo)
Algunos componentes funcionales de los alimentos
5
Minerales y vitaminas Suplir carencias asociadas a haacutebitos alimentarios
Carotenoides Neutralizan radicales libres
Fibra dieteacutetica Reduce el riesgo de caacutencer de colon y enfermedades CV
Flavonoides Neutraliza radicales libres y reduce riesgos de caacutencer
Fenoles Antioxidante reduce el riesgo de enfermedades degenerativas
Esteroles vegetales Disminuye el colesterol en la sangre e inhibe laabsorcioacuten del mismo
ProbioacuteticosPrebioacuteticos Mejora la calidad de la flora intestinal
LC-PUFArsquos (Omega3) Reduce el riesgo de enfermedades CV y mejora lasfunciones mentales
iquestSon nuevos
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7
Liacutepidos
Produccioacuten de aceites de pescado refinados ricos en LC-PUFAs
Estabilizacioacuten de aceites de pescado concentrados para uso farmaceacuteutico
Produccioacuten de aceites micro-encapsulados (emulsiones y polvo)
Ingredientes funcionales en Puleva Biotech
Probioacuteticos
Produccioacuten de cultivos probioacuteticos congelados o liofilizados para aplicaciones
alimentarias y farmaceacuteuticas
Extractos Vegetales
Produccioacuten y estandarizacioacuten de extractos nebulizados en polvo
Produccioacuten y estandarizacioacuten de extractos liacutequidos y formulaciones farmaceacuteuticas
Estandarizacioacuten de principios activos de plantas medicinales
8
Etapas en la industria de ingredientes funcionales Puleva Biotech
Desarrollo tecnoloacutegico
Planta piloto EscaladoProduccioacuten y C
Calidad
Composicioacutenestabilidad y
contaminantesCribado
Ensayos ldquoin vitrordquo
High throughput screening
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
espectrometriacutea de masas y RMN
Identificacioacuten y verificacioacuten
Ensayos de bioluminiscencia citometriacutea etc
Ensayos precliacutenicos
ldquoin vivordquo
Ensayos Cliacutenicos
RegulatoryHealth Claims
Transferencia
Genoacutemica expProteoacutemica expMetaboloacutemica
Ensayos a terceros
9
Etapas en las que participa el laboratorio de anaacutelisis
Composicioacuten
Contaminantes
Funcionalidad(Toxicidad y Eficacia)
Anaacutelisis
Desarrollo de nuevos meacutetodos
10
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Anaacutelisis Ensayos de intereacutes
Minerales (Ca K Mg Na P Zn Fe Cu)Composicioacuten de aacutecidos grasos(incluidos los trans)Aacutecidos grasos Omega-3Vitaminas liposolubles (A D y E)Vitaminas hidrosolubles (b1 b2 b3 b5 b6 b9 y C)Hidratos de carbonoTrigliceacuteridosTocoferolesIsoflavonasEsterolesAminoaacutecidosComposicioacuten nutricional(Grasa total proteiacutenas cenizas fibra hellip)
12
bull Fenoles 18 meacutetodosbull Terpenos 36 meacutetodosbull Carbohidratos 9 meacutetodosbull Liacutepidos 41 meacutetodosbull Peacuteptidos 11 meacutetodosbull Fibras 36 meacutetodosbull Extractos vegetales13 meacutetodosbull Cultivos bacterianos 4 meacutetodosbull Miscelaacutenea 55 meacutetodos
(Edulcorantes polioles alcaloideshellip)
bull Vitaminasbull Minerales
223 meacutetodos para 100 compuestos
Falta de meacutetodos analiacuteticos que cubran los compuestos (y matrices) usados en el campo
de alimentos funcionales
Anaacutelisis Composicioacuten Caracterizacioacuten de ingredientes
bull Permite detectar la adicioacuten de grasas vegetales no lacteas (B-sitosterol stigmasterol o campesterol)bull Permite evaluar la calidad nutricional a partir del contenido en colesterolbull Control de ingrediente funcional fitoesteroles
Adicioacuten de patroacuten internoy saponificacioacuten con
KOH (MeOH)
Extraccioacuten del insaponificable y concentracioacuten
Extraccioacuten de la grasa laacutectea
Desarrollo de meacutetodos Deteccioacuten de esteroles
13
J Agric Food Chem 2006 Jun 2854(13)4531-6
Simultaneous determination of eight water-soluble vitamins in supplemented foods by liquid chromatographyZafra-Goacutemez A Garballo A Morales JC Garciacutea-Ayuso LEQuality Department Analytical Division Puleva Biotech SA Camino de Purchil 66 E-18004 Granada Spain
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Desarrollo de meacutetodos Vitaminas hidrosolubles
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ISO 230652009-IDF 211
min10 15 20 25 30 35 40
pA
5
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FID1 A (AG300106008F0701D)
Sample M0823 8379
- C
182n6
cis Linoleico
9976
- C
183n3
Linolen
ico
1063
2 - C
182 con
j CLA
1088
3 - C
184n3
2035
3 - C
205n3
EPA
2887
7 - C
230
3704
4 - C
225n3
DPA
4040
7 - C
226n3
DHA
Desarrollo de meacutetodos Omega-3 y 6 en grasa laacutectea
16
Isoflavonas en leche
Anaacutelisis Composicioacuten Extractos vegetales-APIs
Catequinas en te verde Polifenoles en Equinacea
+ 50 meacutetodos en extractos
y plantas
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Desarrollo de meacutetodos Anaacutelisis en produccioacuten
Contaminantes reguladosAutenticidad y trazabilidad
Situaciones de alerta
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Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
Residuos de PesticidasResiduos de Antibioacuteticos(sulfonamidas B-lactamas tetraciclinasquinolonas y cloranfenicol)Micotoxinas(aflatoxinas B+G aflatoxina M1 y ocratoxina A)Metales pesados(plomo cadmio mercurio y arseacutenico)Hidrocarburos aromaacuteticos policiacuteclicosDisolventes residuales(MeOH EtOH hexano acetona acetato de etilo)Identificacioacuten de aleacutergenos(gluten lactosa hellip)Patoacutegenos(Salmonella Listeria E Coli B Cereus S AureusC Sakazakii)
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Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
21
S Alimentaria Micotoxinas
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AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
Black cohoshCimicifugae rhizomaMonograph Ndeg 2069HPTLC ndash Dr ReichEUROPEAN PHARMACOPOEIA
COMMISSION
Ensayo colaborativoDeteccioacuten de 5 adulteracioacuten con Cimicifuga foetida C dahurica C heracleifolia o C americana en muestras de Cimicifuga racemosa(Black Cohosh)
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Identificacioacuten de especies botaacutenicas para suplementos de la dieta
K He et al Journal of Chromatography A 1112 (2006) 241ndash254
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
24
IRD
Perfil normal
Perfil alterado
AUTENTICIDAD Aceites concentrados
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TRAZABILIDAD Perfil proteico en leche
Tratamientos teacutermicos
bull HCl hasta pH 46bull Reposo 30 minbull Centrifugacioacuten y dilucioacuten de sobrenadante
Determinacioacuten de B-lactoglobulina(proteiacutena de lactosuero)
Determinacioacuten de Furosina(producto reaccioacuten Maillard)
bull Hidroacutelisis aacutecida a 110ordmCbull Filtrar y SPE (c18)bull HPLC - pares ioacutenicos (AcH y KCl)
bullEliminacioacuten de grasas y proteiacutenasbullHPLC en columna ioacutenicabullDeteccioacuten y cuantificacioacuten IR
Determinacioacuten de Lactulosa(isoacutemero de lactosa)
MV
000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
Minutes
200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 2200 2400
Lact
osa
- 11
762
Lact
ulos
a -
148
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Deteccioacuten de leche en polvo en leche UHT
Lactulosafurosinage25
(en leche UHT)
Leche en polvo Lactulosa 50
Ratio lf= 0125Furosina 400
Leche UHT Lactulosa 420
Ratio lf= 3000Furosina 140
90 leche UHT +
10 leche en polvo
Lactulosa 383
Ratio lf= 2307Furosina 166
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28
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Situaciones de alerta
bull Melamina en productos laacutecteosbull ITX en envases de alimentos infantilesbull Hidrocarburos en aceite de girasolbull Benzo (a) pireno en aceites
Respuesta del laboratorio en
48 horas
Participacioacuten del laboratorio de anaacutelisis
29
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Aacutereas de intereacutes
Obesidad y diabetes
Nutricioacuten infantil
Metabolismo oacuteseo
Enfermedad cardiovascular
Estreacutes oxidativo
Hipertensioacuten
Salud intestinal (inflamacioacuten)
Salud oral
Cribado
HTS de actividad bioloacutegica
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
Identificacioacuten y validacioacuten
Espectrometriacutea de masas y RMN
31
1000 extractos vegetales en un ensayo colorimeacutetrico descreening en placas de 96 Varios extractos cuyo contenido enflavonoides es conocido dieron resultado positivo Mediante eluso de patrones y LC-MS confirmamos la identidad delcompuesto causante del efecto positivo
Libreriacuteas productos naturales (extractos peacuteptidos hellip)
Marcador seleccionado en funcioacuten del objetivo
HT-SCREENING DE ACTIVIDAD BIOLOacuteGICA
32
AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
Fraccioacuten de oligosacaacuteridos aisladapor
bull deslipidacioacuten
bull precipitacioacuten de proteiacutenas
bull GPC en Sephadex G-25
bull colector de fracciones
Separacioacuten y cuantificacioacuten
bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
33
Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
34
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
36
La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
MUESTRAS biopsias de tejidos liacuteneas celulares fluidos bioloacutegicos
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Proteoacutemica de expresioacuten
ESI-APCI
(Q)TOF-MSCHIPMS PMF
Spectrum Mill for MH
MassHunter BioconfirmationMassHunter Profiling
Identificacioacuten y confirmacioacuten de proteiacutenas usando la huella peptiacutedica (PMF)
37
APLICACIOacuteN DE ldquoOacuteMICASrdquo Metaboloacutemica y nutricioacuten
La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
Fluidos Bioloacutegicos
38
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Metaboloacutemica
Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
0
200
400
600
800
week 0 week 2 week 4
bu
tyra
te (
mg
L)
0
200
400
600
800
week 0 week 2 week 4
bu
tyra
te (
mg
L)
Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
39
Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Bioinformaacutetica
Muchas gracias por vuestra atencioacuten
3
Alimentos funcionales
Son alimentos que tienen (y se puededemostrar) un efecto beneficioso sobreuna o maacutes funciones en el organismo porencima y maacutes allaacute de los efectos habitualesde dicho alimento tales como mejorar elestado de salud y bienestar o reducir elriesgo de enfermedad
Alimentos
Cualquier sustancia (soacutelida o liacutequida)normalmente ingerida por los seres vivos confines
bull nutricionales regulacioacuten del metabolismo ymantenimiento de las funciones fisioloacutegicasbull psicoloacutegicos satisfaccioacuten y obtencioacuten desensaciones gratificantes
Estos dos fines no han de cumplirsesimultaacuteneamente para que una sustancia seaconsiderada alimento
ComposicioacutenContaminantes
ComposicioacutenContaminantesDescubrimientoFuncionalidad
1 Adicioacuten o suplementacioacuten de un alimento con sustancias o ingredientes con efectos beneacuteficos ej
Antioxidantes no vitamiacutenicos prebioacuteticos (FOS) hellip
2 Sustitucioacuten de las sustancias con efectos negativos por otras con efectos beneacuteficos por ejemplo grasa
animal por grasa vegetal
3 Eliminacioacuten de componentes que pueden tener efectos negativos en la salud de los consumidores por
ejemplo proteiacutenas alergeacutenicas
4 Incrementar la concentracioacuten de un componente naturalmente presente y que tiene efectos beneacuteficos en
la salud por ejemplo fortificacioacuten con un micronutriente aumentar la concentracioacuten de fibra alimentaria
beneacutefica
5 Aumentar la biodisponibilidad o estabilidad de un componente para producir efectos funcionales-
beneacuteficos
Son cinco las posibilidades para que un alimento sea transformado enfuncional o se incremente su funcionalidad
4
Son alimentos -No son piacuteldorasLa perspectiva europea difiere de la
norteamericana(ldquonutraceuticalsrdquo-ldquopharmafoodsrdquo)
Algunos componentes funcionales de los alimentos
5
Minerales y vitaminas Suplir carencias asociadas a haacutebitos alimentarios
Carotenoides Neutralizan radicales libres
Fibra dieteacutetica Reduce el riesgo de caacutencer de colon y enfermedades CV
Flavonoides Neutraliza radicales libres y reduce riesgos de caacutencer
Fenoles Antioxidante reduce el riesgo de enfermedades degenerativas
Esteroles vegetales Disminuye el colesterol en la sangre e inhibe laabsorcioacuten del mismo
ProbioacuteticosPrebioacuteticos Mejora la calidad de la flora intestinal
LC-PUFArsquos (Omega3) Reduce el riesgo de enfermedades CV y mejora lasfunciones mentales
iquestSon nuevos
6
7
Liacutepidos
Produccioacuten de aceites de pescado refinados ricos en LC-PUFAs
Estabilizacioacuten de aceites de pescado concentrados para uso farmaceacuteutico
Produccioacuten de aceites micro-encapsulados (emulsiones y polvo)
Ingredientes funcionales en Puleva Biotech
Probioacuteticos
Produccioacuten de cultivos probioacuteticos congelados o liofilizados para aplicaciones
alimentarias y farmaceacuteuticas
Extractos Vegetales
Produccioacuten y estandarizacioacuten de extractos nebulizados en polvo
Produccioacuten y estandarizacioacuten de extractos liacutequidos y formulaciones farmaceacuteuticas
Estandarizacioacuten de principios activos de plantas medicinales
8
Etapas en la industria de ingredientes funcionales Puleva Biotech
Desarrollo tecnoloacutegico
Planta piloto EscaladoProduccioacuten y C
Calidad
Composicioacutenestabilidad y
contaminantesCribado
Ensayos ldquoin vitrordquo
High throughput screening
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
espectrometriacutea de masas y RMN
Identificacioacuten y verificacioacuten
Ensayos de bioluminiscencia citometriacutea etc
Ensayos precliacutenicos
ldquoin vivordquo
Ensayos Cliacutenicos
RegulatoryHealth Claims
Transferencia
Genoacutemica expProteoacutemica expMetaboloacutemica
Ensayos a terceros
9
Etapas en las que participa el laboratorio de anaacutelisis
Composicioacuten
Contaminantes
Funcionalidad(Toxicidad y Eficacia)
Anaacutelisis
Desarrollo de nuevos meacutetodos
10
11
Anaacutelisis Ensayos de intereacutes
Minerales (Ca K Mg Na P Zn Fe Cu)Composicioacuten de aacutecidos grasos(incluidos los trans)Aacutecidos grasos Omega-3Vitaminas liposolubles (A D y E)Vitaminas hidrosolubles (b1 b2 b3 b5 b6 b9 y C)Hidratos de carbonoTrigliceacuteridosTocoferolesIsoflavonasEsterolesAminoaacutecidosComposicioacuten nutricional(Grasa total proteiacutenas cenizas fibra hellip)
12
bull Fenoles 18 meacutetodosbull Terpenos 36 meacutetodosbull Carbohidratos 9 meacutetodosbull Liacutepidos 41 meacutetodosbull Peacuteptidos 11 meacutetodosbull Fibras 36 meacutetodosbull Extractos vegetales13 meacutetodosbull Cultivos bacterianos 4 meacutetodosbull Miscelaacutenea 55 meacutetodos
(Edulcorantes polioles alcaloideshellip)
bull Vitaminasbull Minerales
223 meacutetodos para 100 compuestos
Falta de meacutetodos analiacuteticos que cubran los compuestos (y matrices) usados en el campo
de alimentos funcionales
Anaacutelisis Composicioacuten Caracterizacioacuten de ingredientes
bull Permite detectar la adicioacuten de grasas vegetales no lacteas (B-sitosterol stigmasterol o campesterol)bull Permite evaluar la calidad nutricional a partir del contenido en colesterolbull Control de ingrediente funcional fitoesteroles
Adicioacuten de patroacuten internoy saponificacioacuten con
KOH (MeOH)
Extraccioacuten del insaponificable y concentracioacuten
Extraccioacuten de la grasa laacutectea
Desarrollo de meacutetodos Deteccioacuten de esteroles
13
J Agric Food Chem 2006 Jun 2854(13)4531-6
Simultaneous determination of eight water-soluble vitamins in supplemented foods by liquid chromatographyZafra-Goacutemez A Garballo A Morales JC Garciacutea-Ayuso LEQuality Department Analytical Division Puleva Biotech SA Camino de Purchil 66 E-18004 Granada Spain
14
Desarrollo de meacutetodos Vitaminas hidrosolubles
15
ISO 230652009-IDF 211
min10 15 20 25 30 35 40
pA
5
6
7
8
9
10
11
FID1 A (AG300106008F0701D)
Sample M0823 8379
- C
182n6
cis Linoleico
9976
- C
183n3
Linolen
ico
1063
2 - C
182 con
j CLA
1088
3 - C
184n3
2035
3 - C
205n3
EPA
2887
7 - C
230
3704
4 - C
225n3
DPA
4040
7 - C
226n3
DHA
Desarrollo de meacutetodos Omega-3 y 6 en grasa laacutectea
16
Isoflavonas en leche
Anaacutelisis Composicioacuten Extractos vegetales-APIs
Catequinas en te verde Polifenoles en Equinacea
+ 50 meacutetodos en extractos
y plantas
17
Desarrollo de meacutetodos Anaacutelisis en produccioacuten
Contaminantes reguladosAutenticidad y trazabilidad
Situaciones de alerta
18
19
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
Residuos de PesticidasResiduos de Antibioacuteticos(sulfonamidas B-lactamas tetraciclinasquinolonas y cloranfenicol)Micotoxinas(aflatoxinas B+G aflatoxina M1 y ocratoxina A)Metales pesados(plomo cadmio mercurio y arseacutenico)Hidrocarburos aromaacuteticos policiacuteclicosDisolventes residuales(MeOH EtOH hexano acetona acetato de etilo)Identificacioacuten de aleacutergenos(gluten lactosa hellip)Patoacutegenos(Salmonella Listeria E Coli B Cereus S AureusC Sakazakii)
20
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
21
S Alimentaria Micotoxinas
22
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
Black cohoshCimicifugae rhizomaMonograph Ndeg 2069HPTLC ndash Dr ReichEUROPEAN PHARMACOPOEIA
COMMISSION
Ensayo colaborativoDeteccioacuten de 5 adulteracioacuten con Cimicifuga foetida C dahurica C heracleifolia o C americana en muestras de Cimicifuga racemosa(Black Cohosh)
23
Identificacioacuten de especies botaacutenicas para suplementos de la dieta
K He et al Journal of Chromatography A 1112 (2006) 241ndash254
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
24
IRD
Perfil normal
Perfil alterado
AUTENTICIDAD Aceites concentrados
25
TRAZABILIDAD Perfil proteico en leche
Tratamientos teacutermicos
bull HCl hasta pH 46bull Reposo 30 minbull Centrifugacioacuten y dilucioacuten de sobrenadante
Determinacioacuten de B-lactoglobulina(proteiacutena de lactosuero)
Determinacioacuten de Furosina(producto reaccioacuten Maillard)
bull Hidroacutelisis aacutecida a 110ordmCbull Filtrar y SPE (c18)bull HPLC - pares ioacutenicos (AcH y KCl)
bullEliminacioacuten de grasas y proteiacutenasbullHPLC en columna ioacutenicabullDeteccioacuten y cuantificacioacuten IR
Determinacioacuten de Lactulosa(isoacutemero de lactosa)
MV
000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
Minutes
200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 2200 2400
Lact
osa
- 11
762
Lact
ulos
a -
148
43
26
Deteccioacuten de leche en polvo en leche UHT
Lactulosafurosinage25
(en leche UHT)
Leche en polvo Lactulosa 50
Ratio lf= 0125Furosina 400
Leche UHT Lactulosa 420
Ratio lf= 3000Furosina 140
90 leche UHT +
10 leche en polvo
Lactulosa 383
Ratio lf= 2307Furosina 166
27
28
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Situaciones de alerta
bull Melamina en productos laacutecteosbull ITX en envases de alimentos infantilesbull Hidrocarburos en aceite de girasolbull Benzo (a) pireno en aceites
Respuesta del laboratorio en
48 horas
Participacioacuten del laboratorio de anaacutelisis
29
30
Aacutereas de intereacutes
Obesidad y diabetes
Nutricioacuten infantil
Metabolismo oacuteseo
Enfermedad cardiovascular
Estreacutes oxidativo
Hipertensioacuten
Salud intestinal (inflamacioacuten)
Salud oral
Cribado
HTS de actividad bioloacutegica
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
Identificacioacuten y validacioacuten
Espectrometriacutea de masas y RMN
31
1000 extractos vegetales en un ensayo colorimeacutetrico descreening en placas de 96 Varios extractos cuyo contenido enflavonoides es conocido dieron resultado positivo Mediante eluso de patrones y LC-MS confirmamos la identidad delcompuesto causante del efecto positivo
Libreriacuteas productos naturales (extractos peacuteptidos hellip)
Marcador seleccionado en funcioacuten del objetivo
HT-SCREENING DE ACTIVIDAD BIOLOacuteGICA
32
AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
Fraccioacuten de oligosacaacuteridos aisladapor
bull deslipidacioacuten
bull precipitacioacuten de proteiacutenas
bull GPC en Sephadex G-25
bull colector de fracciones
Separacioacuten y cuantificacioacuten
bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
33
Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
34
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
36
La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
MUESTRAS biopsias de tejidos liacuteneas celulares fluidos bioloacutegicos
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Proteoacutemica de expresioacuten
ESI-APCI
(Q)TOF-MSCHIPMS PMF
Spectrum Mill for MH
MassHunter BioconfirmationMassHunter Profiling
Identificacioacuten y confirmacioacuten de proteiacutenas usando la huella peptiacutedica (PMF)
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APLICACIOacuteN DE ldquoOacuteMICASrdquo Metaboloacutemica y nutricioacuten
La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
Fluidos Bioloacutegicos
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APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Metaboloacutemica
Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
0
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Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
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Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Bioinformaacutetica
Muchas gracias por vuestra atencioacuten
1 Adicioacuten o suplementacioacuten de un alimento con sustancias o ingredientes con efectos beneacuteficos ej
Antioxidantes no vitamiacutenicos prebioacuteticos (FOS) hellip
2 Sustitucioacuten de las sustancias con efectos negativos por otras con efectos beneacuteficos por ejemplo grasa
animal por grasa vegetal
3 Eliminacioacuten de componentes que pueden tener efectos negativos en la salud de los consumidores por
ejemplo proteiacutenas alergeacutenicas
4 Incrementar la concentracioacuten de un componente naturalmente presente y que tiene efectos beneacuteficos en
la salud por ejemplo fortificacioacuten con un micronutriente aumentar la concentracioacuten de fibra alimentaria
beneacutefica
5 Aumentar la biodisponibilidad o estabilidad de un componente para producir efectos funcionales-
beneacuteficos
Son cinco las posibilidades para que un alimento sea transformado enfuncional o se incremente su funcionalidad
4
Son alimentos -No son piacuteldorasLa perspectiva europea difiere de la
norteamericana(ldquonutraceuticalsrdquo-ldquopharmafoodsrdquo)
Algunos componentes funcionales de los alimentos
5
Minerales y vitaminas Suplir carencias asociadas a haacutebitos alimentarios
Carotenoides Neutralizan radicales libres
Fibra dieteacutetica Reduce el riesgo de caacutencer de colon y enfermedades CV
Flavonoides Neutraliza radicales libres y reduce riesgos de caacutencer
Fenoles Antioxidante reduce el riesgo de enfermedades degenerativas
Esteroles vegetales Disminuye el colesterol en la sangre e inhibe laabsorcioacuten del mismo
ProbioacuteticosPrebioacuteticos Mejora la calidad de la flora intestinal
LC-PUFArsquos (Omega3) Reduce el riesgo de enfermedades CV y mejora lasfunciones mentales
iquestSon nuevos
6
7
Liacutepidos
Produccioacuten de aceites de pescado refinados ricos en LC-PUFAs
Estabilizacioacuten de aceites de pescado concentrados para uso farmaceacuteutico
Produccioacuten de aceites micro-encapsulados (emulsiones y polvo)
Ingredientes funcionales en Puleva Biotech
Probioacuteticos
Produccioacuten de cultivos probioacuteticos congelados o liofilizados para aplicaciones
alimentarias y farmaceacuteuticas
Extractos Vegetales
Produccioacuten y estandarizacioacuten de extractos nebulizados en polvo
Produccioacuten y estandarizacioacuten de extractos liacutequidos y formulaciones farmaceacuteuticas
Estandarizacioacuten de principios activos de plantas medicinales
8
Etapas en la industria de ingredientes funcionales Puleva Biotech
Desarrollo tecnoloacutegico
Planta piloto EscaladoProduccioacuten y C
Calidad
Composicioacutenestabilidad y
contaminantesCribado
Ensayos ldquoin vitrordquo
High throughput screening
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
espectrometriacutea de masas y RMN
Identificacioacuten y verificacioacuten
Ensayos de bioluminiscencia citometriacutea etc
Ensayos precliacutenicos
ldquoin vivordquo
Ensayos Cliacutenicos
RegulatoryHealth Claims
Transferencia
Genoacutemica expProteoacutemica expMetaboloacutemica
Ensayos a terceros
9
Etapas en las que participa el laboratorio de anaacutelisis
Composicioacuten
Contaminantes
Funcionalidad(Toxicidad y Eficacia)
Anaacutelisis
Desarrollo de nuevos meacutetodos
10
11
Anaacutelisis Ensayos de intereacutes
Minerales (Ca K Mg Na P Zn Fe Cu)Composicioacuten de aacutecidos grasos(incluidos los trans)Aacutecidos grasos Omega-3Vitaminas liposolubles (A D y E)Vitaminas hidrosolubles (b1 b2 b3 b5 b6 b9 y C)Hidratos de carbonoTrigliceacuteridosTocoferolesIsoflavonasEsterolesAminoaacutecidosComposicioacuten nutricional(Grasa total proteiacutenas cenizas fibra hellip)
12
bull Fenoles 18 meacutetodosbull Terpenos 36 meacutetodosbull Carbohidratos 9 meacutetodosbull Liacutepidos 41 meacutetodosbull Peacuteptidos 11 meacutetodosbull Fibras 36 meacutetodosbull Extractos vegetales13 meacutetodosbull Cultivos bacterianos 4 meacutetodosbull Miscelaacutenea 55 meacutetodos
(Edulcorantes polioles alcaloideshellip)
bull Vitaminasbull Minerales
223 meacutetodos para 100 compuestos
Falta de meacutetodos analiacuteticos que cubran los compuestos (y matrices) usados en el campo
de alimentos funcionales
Anaacutelisis Composicioacuten Caracterizacioacuten de ingredientes
bull Permite detectar la adicioacuten de grasas vegetales no lacteas (B-sitosterol stigmasterol o campesterol)bull Permite evaluar la calidad nutricional a partir del contenido en colesterolbull Control de ingrediente funcional fitoesteroles
Adicioacuten de patroacuten internoy saponificacioacuten con
KOH (MeOH)
Extraccioacuten del insaponificable y concentracioacuten
Extraccioacuten de la grasa laacutectea
Desarrollo de meacutetodos Deteccioacuten de esteroles
13
J Agric Food Chem 2006 Jun 2854(13)4531-6
Simultaneous determination of eight water-soluble vitamins in supplemented foods by liquid chromatographyZafra-Goacutemez A Garballo A Morales JC Garciacutea-Ayuso LEQuality Department Analytical Division Puleva Biotech SA Camino de Purchil 66 E-18004 Granada Spain
14
Desarrollo de meacutetodos Vitaminas hidrosolubles
15
ISO 230652009-IDF 211
min10 15 20 25 30 35 40
pA
5
6
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11
FID1 A (AG300106008F0701D)
Sample M0823 8379
- C
182n6
cis Linoleico
9976
- C
183n3
Linolen
ico
1063
2 - C
182 con
j CLA
1088
3 - C
184n3
2035
3 - C
205n3
EPA
2887
7 - C
230
3704
4 - C
225n3
DPA
4040
7 - C
226n3
DHA
Desarrollo de meacutetodos Omega-3 y 6 en grasa laacutectea
16
Isoflavonas en leche
Anaacutelisis Composicioacuten Extractos vegetales-APIs
Catequinas en te verde Polifenoles en Equinacea
+ 50 meacutetodos en extractos
y plantas
17
Desarrollo de meacutetodos Anaacutelisis en produccioacuten
Contaminantes reguladosAutenticidad y trazabilidad
Situaciones de alerta
18
19
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
Residuos de PesticidasResiduos de Antibioacuteticos(sulfonamidas B-lactamas tetraciclinasquinolonas y cloranfenicol)Micotoxinas(aflatoxinas B+G aflatoxina M1 y ocratoxina A)Metales pesados(plomo cadmio mercurio y arseacutenico)Hidrocarburos aromaacuteticos policiacuteclicosDisolventes residuales(MeOH EtOH hexano acetona acetato de etilo)Identificacioacuten de aleacutergenos(gluten lactosa hellip)Patoacutegenos(Salmonella Listeria E Coli B Cereus S AureusC Sakazakii)
20
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
21
S Alimentaria Micotoxinas
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AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
Black cohoshCimicifugae rhizomaMonograph Ndeg 2069HPTLC ndash Dr ReichEUROPEAN PHARMACOPOEIA
COMMISSION
Ensayo colaborativoDeteccioacuten de 5 adulteracioacuten con Cimicifuga foetida C dahurica C heracleifolia o C americana en muestras de Cimicifuga racemosa(Black Cohosh)
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Identificacioacuten de especies botaacutenicas para suplementos de la dieta
K He et al Journal of Chromatography A 1112 (2006) 241ndash254
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
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IRD
Perfil normal
Perfil alterado
AUTENTICIDAD Aceites concentrados
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TRAZABILIDAD Perfil proteico en leche
Tratamientos teacutermicos
bull HCl hasta pH 46bull Reposo 30 minbull Centrifugacioacuten y dilucioacuten de sobrenadante
Determinacioacuten de B-lactoglobulina(proteiacutena de lactosuero)
Determinacioacuten de Furosina(producto reaccioacuten Maillard)
bull Hidroacutelisis aacutecida a 110ordmCbull Filtrar y SPE (c18)bull HPLC - pares ioacutenicos (AcH y KCl)
bullEliminacioacuten de grasas y proteiacutenasbullHPLC en columna ioacutenicabullDeteccioacuten y cuantificacioacuten IR
Determinacioacuten de Lactulosa(isoacutemero de lactosa)
MV
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10000
Minutes
200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 2200 2400
Lact
osa
- 11
762
Lact
ulos
a -
148
43
26
Deteccioacuten de leche en polvo en leche UHT
Lactulosafurosinage25
(en leche UHT)
Leche en polvo Lactulosa 50
Ratio lf= 0125Furosina 400
Leche UHT Lactulosa 420
Ratio lf= 3000Furosina 140
90 leche UHT +
10 leche en polvo
Lactulosa 383
Ratio lf= 2307Furosina 166
27
28
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Situaciones de alerta
bull Melamina en productos laacutecteosbull ITX en envases de alimentos infantilesbull Hidrocarburos en aceite de girasolbull Benzo (a) pireno en aceites
Respuesta del laboratorio en
48 horas
Participacioacuten del laboratorio de anaacutelisis
29
30
Aacutereas de intereacutes
Obesidad y diabetes
Nutricioacuten infantil
Metabolismo oacuteseo
Enfermedad cardiovascular
Estreacutes oxidativo
Hipertensioacuten
Salud intestinal (inflamacioacuten)
Salud oral
Cribado
HTS de actividad bioloacutegica
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
Identificacioacuten y validacioacuten
Espectrometriacutea de masas y RMN
31
1000 extractos vegetales en un ensayo colorimeacutetrico descreening en placas de 96 Varios extractos cuyo contenido enflavonoides es conocido dieron resultado positivo Mediante eluso de patrones y LC-MS confirmamos la identidad delcompuesto causante del efecto positivo
Libreriacuteas productos naturales (extractos peacuteptidos hellip)
Marcador seleccionado en funcioacuten del objetivo
HT-SCREENING DE ACTIVIDAD BIOLOacuteGICA
32
AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
Fraccioacuten de oligosacaacuteridos aisladapor
bull deslipidacioacuten
bull precipitacioacuten de proteiacutenas
bull GPC en Sephadex G-25
bull colector de fracciones
Separacioacuten y cuantificacioacuten
bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
33
Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
34
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
36
La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
MUESTRAS biopsias de tejidos liacuteneas celulares fluidos bioloacutegicos
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Proteoacutemica de expresioacuten
ESI-APCI
(Q)TOF-MSCHIPMS PMF
Spectrum Mill for MH
MassHunter BioconfirmationMassHunter Profiling
Identificacioacuten y confirmacioacuten de proteiacutenas usando la huella peptiacutedica (PMF)
37
APLICACIOacuteN DE ldquoOacuteMICASrdquo Metaboloacutemica y nutricioacuten
La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
Fluidos Bioloacutegicos
38
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Metaboloacutemica
Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
0
200
400
600
800
week 0 week 2 week 4
bu
tyra
te (
mg
L)
0
200
400
600
800
week 0 week 2 week 4
bu
tyra
te (
mg
L)
Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
39
Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Bioinformaacutetica
Muchas gracias por vuestra atencioacuten
Algunos componentes funcionales de los alimentos
5
Minerales y vitaminas Suplir carencias asociadas a haacutebitos alimentarios
Carotenoides Neutralizan radicales libres
Fibra dieteacutetica Reduce el riesgo de caacutencer de colon y enfermedades CV
Flavonoides Neutraliza radicales libres y reduce riesgos de caacutencer
Fenoles Antioxidante reduce el riesgo de enfermedades degenerativas
Esteroles vegetales Disminuye el colesterol en la sangre e inhibe laabsorcioacuten del mismo
ProbioacuteticosPrebioacuteticos Mejora la calidad de la flora intestinal
LC-PUFArsquos (Omega3) Reduce el riesgo de enfermedades CV y mejora lasfunciones mentales
iquestSon nuevos
6
7
Liacutepidos
Produccioacuten de aceites de pescado refinados ricos en LC-PUFAs
Estabilizacioacuten de aceites de pescado concentrados para uso farmaceacuteutico
Produccioacuten de aceites micro-encapsulados (emulsiones y polvo)
Ingredientes funcionales en Puleva Biotech
Probioacuteticos
Produccioacuten de cultivos probioacuteticos congelados o liofilizados para aplicaciones
alimentarias y farmaceacuteuticas
Extractos Vegetales
Produccioacuten y estandarizacioacuten de extractos nebulizados en polvo
Produccioacuten y estandarizacioacuten de extractos liacutequidos y formulaciones farmaceacuteuticas
Estandarizacioacuten de principios activos de plantas medicinales
8
Etapas en la industria de ingredientes funcionales Puleva Biotech
Desarrollo tecnoloacutegico
Planta piloto EscaladoProduccioacuten y C
Calidad
Composicioacutenestabilidad y
contaminantesCribado
Ensayos ldquoin vitrordquo
High throughput screening
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
espectrometriacutea de masas y RMN
Identificacioacuten y verificacioacuten
Ensayos de bioluminiscencia citometriacutea etc
Ensayos precliacutenicos
ldquoin vivordquo
Ensayos Cliacutenicos
RegulatoryHealth Claims
Transferencia
Genoacutemica expProteoacutemica expMetaboloacutemica
Ensayos a terceros
9
Etapas en las que participa el laboratorio de anaacutelisis
Composicioacuten
Contaminantes
Funcionalidad(Toxicidad y Eficacia)
Anaacutelisis
Desarrollo de nuevos meacutetodos
10
11
Anaacutelisis Ensayos de intereacutes
Minerales (Ca K Mg Na P Zn Fe Cu)Composicioacuten de aacutecidos grasos(incluidos los trans)Aacutecidos grasos Omega-3Vitaminas liposolubles (A D y E)Vitaminas hidrosolubles (b1 b2 b3 b5 b6 b9 y C)Hidratos de carbonoTrigliceacuteridosTocoferolesIsoflavonasEsterolesAminoaacutecidosComposicioacuten nutricional(Grasa total proteiacutenas cenizas fibra hellip)
12
bull Fenoles 18 meacutetodosbull Terpenos 36 meacutetodosbull Carbohidratos 9 meacutetodosbull Liacutepidos 41 meacutetodosbull Peacuteptidos 11 meacutetodosbull Fibras 36 meacutetodosbull Extractos vegetales13 meacutetodosbull Cultivos bacterianos 4 meacutetodosbull Miscelaacutenea 55 meacutetodos
(Edulcorantes polioles alcaloideshellip)
bull Vitaminasbull Minerales
223 meacutetodos para 100 compuestos
Falta de meacutetodos analiacuteticos que cubran los compuestos (y matrices) usados en el campo
de alimentos funcionales
Anaacutelisis Composicioacuten Caracterizacioacuten de ingredientes
bull Permite detectar la adicioacuten de grasas vegetales no lacteas (B-sitosterol stigmasterol o campesterol)bull Permite evaluar la calidad nutricional a partir del contenido en colesterolbull Control de ingrediente funcional fitoesteroles
Adicioacuten de patroacuten internoy saponificacioacuten con
KOH (MeOH)
Extraccioacuten del insaponificable y concentracioacuten
Extraccioacuten de la grasa laacutectea
Desarrollo de meacutetodos Deteccioacuten de esteroles
13
J Agric Food Chem 2006 Jun 2854(13)4531-6
Simultaneous determination of eight water-soluble vitamins in supplemented foods by liquid chromatographyZafra-Goacutemez A Garballo A Morales JC Garciacutea-Ayuso LEQuality Department Analytical Division Puleva Biotech SA Camino de Purchil 66 E-18004 Granada Spain
14
Desarrollo de meacutetodos Vitaminas hidrosolubles
15
ISO 230652009-IDF 211
min10 15 20 25 30 35 40
pA
5
6
7
8
9
10
11
FID1 A (AG300106008F0701D)
Sample M0823 8379
- C
182n6
cis Linoleico
9976
- C
183n3
Linolen
ico
1063
2 - C
182 con
j CLA
1088
3 - C
184n3
2035
3 - C
205n3
EPA
2887
7 - C
230
3704
4 - C
225n3
DPA
4040
7 - C
226n3
DHA
Desarrollo de meacutetodos Omega-3 y 6 en grasa laacutectea
16
Isoflavonas en leche
Anaacutelisis Composicioacuten Extractos vegetales-APIs
Catequinas en te verde Polifenoles en Equinacea
+ 50 meacutetodos en extractos
y plantas
17
Desarrollo de meacutetodos Anaacutelisis en produccioacuten
Contaminantes reguladosAutenticidad y trazabilidad
Situaciones de alerta
18
19
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
Residuos de PesticidasResiduos de Antibioacuteticos(sulfonamidas B-lactamas tetraciclinasquinolonas y cloranfenicol)Micotoxinas(aflatoxinas B+G aflatoxina M1 y ocratoxina A)Metales pesados(plomo cadmio mercurio y arseacutenico)Hidrocarburos aromaacuteticos policiacuteclicosDisolventes residuales(MeOH EtOH hexano acetona acetato de etilo)Identificacioacuten de aleacutergenos(gluten lactosa hellip)Patoacutegenos(Salmonella Listeria E Coli B Cereus S AureusC Sakazakii)
20
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
21
S Alimentaria Micotoxinas
22
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
Black cohoshCimicifugae rhizomaMonograph Ndeg 2069HPTLC ndash Dr ReichEUROPEAN PHARMACOPOEIA
COMMISSION
Ensayo colaborativoDeteccioacuten de 5 adulteracioacuten con Cimicifuga foetida C dahurica C heracleifolia o C americana en muestras de Cimicifuga racemosa(Black Cohosh)
23
Identificacioacuten de especies botaacutenicas para suplementos de la dieta
K He et al Journal of Chromatography A 1112 (2006) 241ndash254
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
24
IRD
Perfil normal
Perfil alterado
AUTENTICIDAD Aceites concentrados
25
TRAZABILIDAD Perfil proteico en leche
Tratamientos teacutermicos
bull HCl hasta pH 46bull Reposo 30 minbull Centrifugacioacuten y dilucioacuten de sobrenadante
Determinacioacuten de B-lactoglobulina(proteiacutena de lactosuero)
Determinacioacuten de Furosina(producto reaccioacuten Maillard)
bull Hidroacutelisis aacutecida a 110ordmCbull Filtrar y SPE (c18)bull HPLC - pares ioacutenicos (AcH y KCl)
bullEliminacioacuten de grasas y proteiacutenasbullHPLC en columna ioacutenicabullDeteccioacuten y cuantificacioacuten IR
Determinacioacuten de Lactulosa(isoacutemero de lactosa)
MV
000
1000
2000
3000
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Minutes
200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 2200 2400
Lact
osa
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762
Lact
ulos
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Deteccioacuten de leche en polvo en leche UHT
Lactulosafurosinage25
(en leche UHT)
Leche en polvo Lactulosa 50
Ratio lf= 0125Furosina 400
Leche UHT Lactulosa 420
Ratio lf= 3000Furosina 140
90 leche UHT +
10 leche en polvo
Lactulosa 383
Ratio lf= 2307Furosina 166
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28
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Situaciones de alerta
bull Melamina en productos laacutecteosbull ITX en envases de alimentos infantilesbull Hidrocarburos en aceite de girasolbull Benzo (a) pireno en aceites
Respuesta del laboratorio en
48 horas
Participacioacuten del laboratorio de anaacutelisis
29
30
Aacutereas de intereacutes
Obesidad y diabetes
Nutricioacuten infantil
Metabolismo oacuteseo
Enfermedad cardiovascular
Estreacutes oxidativo
Hipertensioacuten
Salud intestinal (inflamacioacuten)
Salud oral
Cribado
HTS de actividad bioloacutegica
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
Identificacioacuten y validacioacuten
Espectrometriacutea de masas y RMN
31
1000 extractos vegetales en un ensayo colorimeacutetrico descreening en placas de 96 Varios extractos cuyo contenido enflavonoides es conocido dieron resultado positivo Mediante eluso de patrones y LC-MS confirmamos la identidad delcompuesto causante del efecto positivo
Libreriacuteas productos naturales (extractos peacuteptidos hellip)
Marcador seleccionado en funcioacuten del objetivo
HT-SCREENING DE ACTIVIDAD BIOLOacuteGICA
32
AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
Fraccioacuten de oligosacaacuteridos aisladapor
bull deslipidacioacuten
bull precipitacioacuten de proteiacutenas
bull GPC en Sephadex G-25
bull colector de fracciones
Separacioacuten y cuantificacioacuten
bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
33
Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
34
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
36
La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
MUESTRAS biopsias de tejidos liacuteneas celulares fluidos bioloacutegicos
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Proteoacutemica de expresioacuten
ESI-APCI
(Q)TOF-MSCHIPMS PMF
Spectrum Mill for MH
MassHunter BioconfirmationMassHunter Profiling
Identificacioacuten y confirmacioacuten de proteiacutenas usando la huella peptiacutedica (PMF)
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APLICACIOacuteN DE ldquoOacuteMICASrdquo Metaboloacutemica y nutricioacuten
La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
Fluidos Bioloacutegicos
38
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Metaboloacutemica
Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
0
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week 0 week 2 week 4
bu
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mg
L)
0
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week 0 week 2 week 4
bu
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Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
39
Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Bioinformaacutetica
Muchas gracias por vuestra atencioacuten
iquestSon nuevos
6
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Liacutepidos
Produccioacuten de aceites de pescado refinados ricos en LC-PUFAs
Estabilizacioacuten de aceites de pescado concentrados para uso farmaceacuteutico
Produccioacuten de aceites micro-encapsulados (emulsiones y polvo)
Ingredientes funcionales en Puleva Biotech
Probioacuteticos
Produccioacuten de cultivos probioacuteticos congelados o liofilizados para aplicaciones
alimentarias y farmaceacuteuticas
Extractos Vegetales
Produccioacuten y estandarizacioacuten de extractos nebulizados en polvo
Produccioacuten y estandarizacioacuten de extractos liacutequidos y formulaciones farmaceacuteuticas
Estandarizacioacuten de principios activos de plantas medicinales
8
Etapas en la industria de ingredientes funcionales Puleva Biotech
Desarrollo tecnoloacutegico
Planta piloto EscaladoProduccioacuten y C
Calidad
Composicioacutenestabilidad y
contaminantesCribado
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High throughput screening
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
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Identificacioacuten y verificacioacuten
Ensayos de bioluminiscencia citometriacutea etc
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ldquoin vivordquo
Ensayos Cliacutenicos
RegulatoryHealth Claims
Transferencia
Genoacutemica expProteoacutemica expMetaboloacutemica
Ensayos a terceros
9
Etapas en las que participa el laboratorio de anaacutelisis
Composicioacuten
Contaminantes
Funcionalidad(Toxicidad y Eficacia)
Anaacutelisis
Desarrollo de nuevos meacutetodos
10
11
Anaacutelisis Ensayos de intereacutes
Minerales (Ca K Mg Na P Zn Fe Cu)Composicioacuten de aacutecidos grasos(incluidos los trans)Aacutecidos grasos Omega-3Vitaminas liposolubles (A D y E)Vitaminas hidrosolubles (b1 b2 b3 b5 b6 b9 y C)Hidratos de carbonoTrigliceacuteridosTocoferolesIsoflavonasEsterolesAminoaacutecidosComposicioacuten nutricional(Grasa total proteiacutenas cenizas fibra hellip)
12
bull Fenoles 18 meacutetodosbull Terpenos 36 meacutetodosbull Carbohidratos 9 meacutetodosbull Liacutepidos 41 meacutetodosbull Peacuteptidos 11 meacutetodosbull Fibras 36 meacutetodosbull Extractos vegetales13 meacutetodosbull Cultivos bacterianos 4 meacutetodosbull Miscelaacutenea 55 meacutetodos
(Edulcorantes polioles alcaloideshellip)
bull Vitaminasbull Minerales
223 meacutetodos para 100 compuestos
Falta de meacutetodos analiacuteticos que cubran los compuestos (y matrices) usados en el campo
de alimentos funcionales
Anaacutelisis Composicioacuten Caracterizacioacuten de ingredientes
bull Permite detectar la adicioacuten de grasas vegetales no lacteas (B-sitosterol stigmasterol o campesterol)bull Permite evaluar la calidad nutricional a partir del contenido en colesterolbull Control de ingrediente funcional fitoesteroles
Adicioacuten de patroacuten internoy saponificacioacuten con
KOH (MeOH)
Extraccioacuten del insaponificable y concentracioacuten
Extraccioacuten de la grasa laacutectea
Desarrollo de meacutetodos Deteccioacuten de esteroles
13
J Agric Food Chem 2006 Jun 2854(13)4531-6
Simultaneous determination of eight water-soluble vitamins in supplemented foods by liquid chromatographyZafra-Goacutemez A Garballo A Morales JC Garciacutea-Ayuso LEQuality Department Analytical Division Puleva Biotech SA Camino de Purchil 66 E-18004 Granada Spain
14
Desarrollo de meacutetodos Vitaminas hidrosolubles
15
ISO 230652009-IDF 211
min10 15 20 25 30 35 40
pA
5
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FID1 A (AG300106008F0701D)
Sample M0823 8379
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182n6
cis Linoleico
9976
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Linolen
ico
1063
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j CLA
1088
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EPA
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225n3
DPA
4040
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226n3
DHA
Desarrollo de meacutetodos Omega-3 y 6 en grasa laacutectea
16
Isoflavonas en leche
Anaacutelisis Composicioacuten Extractos vegetales-APIs
Catequinas en te verde Polifenoles en Equinacea
+ 50 meacutetodos en extractos
y plantas
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Desarrollo de meacutetodos Anaacutelisis en produccioacuten
Contaminantes reguladosAutenticidad y trazabilidad
Situaciones de alerta
18
19
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
Residuos de PesticidasResiduos de Antibioacuteticos(sulfonamidas B-lactamas tetraciclinasquinolonas y cloranfenicol)Micotoxinas(aflatoxinas B+G aflatoxina M1 y ocratoxina A)Metales pesados(plomo cadmio mercurio y arseacutenico)Hidrocarburos aromaacuteticos policiacuteclicosDisolventes residuales(MeOH EtOH hexano acetona acetato de etilo)Identificacioacuten de aleacutergenos(gluten lactosa hellip)Patoacutegenos(Salmonella Listeria E Coli B Cereus S AureusC Sakazakii)
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Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
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S Alimentaria Micotoxinas
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AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
Black cohoshCimicifugae rhizomaMonograph Ndeg 2069HPTLC ndash Dr ReichEUROPEAN PHARMACOPOEIA
COMMISSION
Ensayo colaborativoDeteccioacuten de 5 adulteracioacuten con Cimicifuga foetida C dahurica C heracleifolia o C americana en muestras de Cimicifuga racemosa(Black Cohosh)
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Identificacioacuten de especies botaacutenicas para suplementos de la dieta
K He et al Journal of Chromatography A 1112 (2006) 241ndash254
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IRD
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bull HCl hasta pH 46bull Reposo 30 minbull Centrifugacioacuten y dilucioacuten de sobrenadante
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Determinacioacuten de Furosina(producto reaccioacuten Maillard)
bull Hidroacutelisis aacutecida a 110ordmCbull Filtrar y SPE (c18)bull HPLC - pares ioacutenicos (AcH y KCl)
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osa
- 11
762
Lact
ulos
a -
148
43
26
Deteccioacuten de leche en polvo en leche UHT
Lactulosafurosinage25
(en leche UHT)
Leche en polvo Lactulosa 50
Ratio lf= 0125Furosina 400
Leche UHT Lactulosa 420
Ratio lf= 3000Furosina 140
90 leche UHT +
10 leche en polvo
Lactulosa 383
Ratio lf= 2307Furosina 166
27
28
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Situaciones de alerta
bull Melamina en productos laacutecteosbull ITX en envases de alimentos infantilesbull Hidrocarburos en aceite de girasolbull Benzo (a) pireno en aceites
Respuesta del laboratorio en
48 horas
Participacioacuten del laboratorio de anaacutelisis
29
30
Aacutereas de intereacutes
Obesidad y diabetes
Nutricioacuten infantil
Metabolismo oacuteseo
Enfermedad cardiovascular
Estreacutes oxidativo
Hipertensioacuten
Salud intestinal (inflamacioacuten)
Salud oral
Cribado
HTS de actividad bioloacutegica
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
Identificacioacuten y validacioacuten
Espectrometriacutea de masas y RMN
31
1000 extractos vegetales en un ensayo colorimeacutetrico descreening en placas de 96 Varios extractos cuyo contenido enflavonoides es conocido dieron resultado positivo Mediante eluso de patrones y LC-MS confirmamos la identidad delcompuesto causante del efecto positivo
Libreriacuteas productos naturales (extractos peacuteptidos hellip)
Marcador seleccionado en funcioacuten del objetivo
HT-SCREENING DE ACTIVIDAD BIOLOacuteGICA
32
AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
Fraccioacuten de oligosacaacuteridos aisladapor
bull deslipidacioacuten
bull precipitacioacuten de proteiacutenas
bull GPC en Sephadex G-25
bull colector de fracciones
Separacioacuten y cuantificacioacuten
bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
33
Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
34
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
36
La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
MUESTRAS biopsias de tejidos liacuteneas celulares fluidos bioloacutegicos
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Proteoacutemica de expresioacuten
ESI-APCI
(Q)TOF-MSCHIPMS PMF
Spectrum Mill for MH
MassHunter BioconfirmationMassHunter Profiling
Identificacioacuten y confirmacioacuten de proteiacutenas usando la huella peptiacutedica (PMF)
37
APLICACIOacuteN DE ldquoOacuteMICASrdquo Metaboloacutemica y nutricioacuten
La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
Fluidos Bioloacutegicos
38
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Metaboloacutemica
Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
0
200
400
600
800
week 0 week 2 week 4
bu
tyra
te (
mg
L)
0
200
400
600
800
week 0 week 2 week 4
bu
tyra
te (
mg
L)
Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
39
Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Bioinformaacutetica
Muchas gracias por vuestra atencioacuten
7
Liacutepidos
Produccioacuten de aceites de pescado refinados ricos en LC-PUFAs
Estabilizacioacuten de aceites de pescado concentrados para uso farmaceacuteutico
Produccioacuten de aceites micro-encapsulados (emulsiones y polvo)
Ingredientes funcionales en Puleva Biotech
Probioacuteticos
Produccioacuten de cultivos probioacuteticos congelados o liofilizados para aplicaciones
alimentarias y farmaceacuteuticas
Extractos Vegetales
Produccioacuten y estandarizacioacuten de extractos nebulizados en polvo
Produccioacuten y estandarizacioacuten de extractos liacutequidos y formulaciones farmaceacuteuticas
Estandarizacioacuten de principios activos de plantas medicinales
8
Etapas en la industria de ingredientes funcionales Puleva Biotech
Desarrollo tecnoloacutegico
Planta piloto EscaladoProduccioacuten y C
Calidad
Composicioacutenestabilidad y
contaminantesCribado
Ensayos ldquoin vitrordquo
High throughput screening
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
espectrometriacutea de masas y RMN
Identificacioacuten y verificacioacuten
Ensayos de bioluminiscencia citometriacutea etc
Ensayos precliacutenicos
ldquoin vivordquo
Ensayos Cliacutenicos
RegulatoryHealth Claims
Transferencia
Genoacutemica expProteoacutemica expMetaboloacutemica
Ensayos a terceros
9
Etapas en las que participa el laboratorio de anaacutelisis
Composicioacuten
Contaminantes
Funcionalidad(Toxicidad y Eficacia)
Anaacutelisis
Desarrollo de nuevos meacutetodos
10
11
Anaacutelisis Ensayos de intereacutes
Minerales (Ca K Mg Na P Zn Fe Cu)Composicioacuten de aacutecidos grasos(incluidos los trans)Aacutecidos grasos Omega-3Vitaminas liposolubles (A D y E)Vitaminas hidrosolubles (b1 b2 b3 b5 b6 b9 y C)Hidratos de carbonoTrigliceacuteridosTocoferolesIsoflavonasEsterolesAminoaacutecidosComposicioacuten nutricional(Grasa total proteiacutenas cenizas fibra hellip)
12
bull Fenoles 18 meacutetodosbull Terpenos 36 meacutetodosbull Carbohidratos 9 meacutetodosbull Liacutepidos 41 meacutetodosbull Peacuteptidos 11 meacutetodosbull Fibras 36 meacutetodosbull Extractos vegetales13 meacutetodosbull Cultivos bacterianos 4 meacutetodosbull Miscelaacutenea 55 meacutetodos
(Edulcorantes polioles alcaloideshellip)
bull Vitaminasbull Minerales
223 meacutetodos para 100 compuestos
Falta de meacutetodos analiacuteticos que cubran los compuestos (y matrices) usados en el campo
de alimentos funcionales
Anaacutelisis Composicioacuten Caracterizacioacuten de ingredientes
bull Permite detectar la adicioacuten de grasas vegetales no lacteas (B-sitosterol stigmasterol o campesterol)bull Permite evaluar la calidad nutricional a partir del contenido en colesterolbull Control de ingrediente funcional fitoesteroles
Adicioacuten de patroacuten internoy saponificacioacuten con
KOH (MeOH)
Extraccioacuten del insaponificable y concentracioacuten
Extraccioacuten de la grasa laacutectea
Desarrollo de meacutetodos Deteccioacuten de esteroles
13
J Agric Food Chem 2006 Jun 2854(13)4531-6
Simultaneous determination of eight water-soluble vitamins in supplemented foods by liquid chromatographyZafra-Goacutemez A Garballo A Morales JC Garciacutea-Ayuso LEQuality Department Analytical Division Puleva Biotech SA Camino de Purchil 66 E-18004 Granada Spain
14
Desarrollo de meacutetodos Vitaminas hidrosolubles
15
ISO 230652009-IDF 211
min10 15 20 25 30 35 40
pA
5
6
7
8
9
10
11
FID1 A (AG300106008F0701D)
Sample M0823 8379
- C
182n6
cis Linoleico
9976
- C
183n3
Linolen
ico
1063
2 - C
182 con
j CLA
1088
3 - C
184n3
2035
3 - C
205n3
EPA
2887
7 - C
230
3704
4 - C
225n3
DPA
4040
7 - C
226n3
DHA
Desarrollo de meacutetodos Omega-3 y 6 en grasa laacutectea
16
Isoflavonas en leche
Anaacutelisis Composicioacuten Extractos vegetales-APIs
Catequinas en te verde Polifenoles en Equinacea
+ 50 meacutetodos en extractos
y plantas
17
Desarrollo de meacutetodos Anaacutelisis en produccioacuten
Contaminantes reguladosAutenticidad y trazabilidad
Situaciones de alerta
18
19
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
Residuos de PesticidasResiduos de Antibioacuteticos(sulfonamidas B-lactamas tetraciclinasquinolonas y cloranfenicol)Micotoxinas(aflatoxinas B+G aflatoxina M1 y ocratoxina A)Metales pesados(plomo cadmio mercurio y arseacutenico)Hidrocarburos aromaacuteticos policiacuteclicosDisolventes residuales(MeOH EtOH hexano acetona acetato de etilo)Identificacioacuten de aleacutergenos(gluten lactosa hellip)Patoacutegenos(Salmonella Listeria E Coli B Cereus S AureusC Sakazakii)
20
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
21
S Alimentaria Micotoxinas
22
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
Black cohoshCimicifugae rhizomaMonograph Ndeg 2069HPTLC ndash Dr ReichEUROPEAN PHARMACOPOEIA
COMMISSION
Ensayo colaborativoDeteccioacuten de 5 adulteracioacuten con Cimicifuga foetida C dahurica C heracleifolia o C americana en muestras de Cimicifuga racemosa(Black Cohosh)
23
Identificacioacuten de especies botaacutenicas para suplementos de la dieta
K He et al Journal of Chromatography A 1112 (2006) 241ndash254
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
24
IRD
Perfil normal
Perfil alterado
AUTENTICIDAD Aceites concentrados
25
TRAZABILIDAD Perfil proteico en leche
Tratamientos teacutermicos
bull HCl hasta pH 46bull Reposo 30 minbull Centrifugacioacuten y dilucioacuten de sobrenadante
Determinacioacuten de B-lactoglobulina(proteiacutena de lactosuero)
Determinacioacuten de Furosina(producto reaccioacuten Maillard)
bull Hidroacutelisis aacutecida a 110ordmCbull Filtrar y SPE (c18)bull HPLC - pares ioacutenicos (AcH y KCl)
bullEliminacioacuten de grasas y proteiacutenasbullHPLC en columna ioacutenicabullDeteccioacuten y cuantificacioacuten IR
Determinacioacuten de Lactulosa(isoacutemero de lactosa)
MV
000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
Minutes
200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 2200 2400
Lact
osa
- 11
762
Lact
ulos
a -
148
43
26
Deteccioacuten de leche en polvo en leche UHT
Lactulosafurosinage25
(en leche UHT)
Leche en polvo Lactulosa 50
Ratio lf= 0125Furosina 400
Leche UHT Lactulosa 420
Ratio lf= 3000Furosina 140
90 leche UHT +
10 leche en polvo
Lactulosa 383
Ratio lf= 2307Furosina 166
27
28
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Situaciones de alerta
bull Melamina en productos laacutecteosbull ITX en envases de alimentos infantilesbull Hidrocarburos en aceite de girasolbull Benzo (a) pireno en aceites
Respuesta del laboratorio en
48 horas
Participacioacuten del laboratorio de anaacutelisis
29
30
Aacutereas de intereacutes
Obesidad y diabetes
Nutricioacuten infantil
Metabolismo oacuteseo
Enfermedad cardiovascular
Estreacutes oxidativo
Hipertensioacuten
Salud intestinal (inflamacioacuten)
Salud oral
Cribado
HTS de actividad bioloacutegica
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
Identificacioacuten y validacioacuten
Espectrometriacutea de masas y RMN
31
1000 extractos vegetales en un ensayo colorimeacutetrico descreening en placas de 96 Varios extractos cuyo contenido enflavonoides es conocido dieron resultado positivo Mediante eluso de patrones y LC-MS confirmamos la identidad delcompuesto causante del efecto positivo
Libreriacuteas productos naturales (extractos peacuteptidos hellip)
Marcador seleccionado en funcioacuten del objetivo
HT-SCREENING DE ACTIVIDAD BIOLOacuteGICA
32
AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
Fraccioacuten de oligosacaacuteridos aisladapor
bull deslipidacioacuten
bull precipitacioacuten de proteiacutenas
bull GPC en Sephadex G-25
bull colector de fracciones
Separacioacuten y cuantificacioacuten
bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
33
Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
34
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
36
La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
MUESTRAS biopsias de tejidos liacuteneas celulares fluidos bioloacutegicos
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Proteoacutemica de expresioacuten
ESI-APCI
(Q)TOF-MSCHIPMS PMF
Spectrum Mill for MH
MassHunter BioconfirmationMassHunter Profiling
Identificacioacuten y confirmacioacuten de proteiacutenas usando la huella peptiacutedica (PMF)
37
APLICACIOacuteN DE ldquoOacuteMICASrdquo Metaboloacutemica y nutricioacuten
La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
Fluidos Bioloacutegicos
38
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Metaboloacutemica
Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
0
200
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week 0 week 2 week 4
bu
tyra
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mg
L)
0
200
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week 0 week 2 week 4
bu
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mg
L)
Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
39
Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Bioinformaacutetica
Muchas gracias por vuestra atencioacuten
8
Etapas en la industria de ingredientes funcionales Puleva Biotech
Desarrollo tecnoloacutegico
Planta piloto EscaladoProduccioacuten y C
Calidad
Composicioacutenestabilidad y
contaminantesCribado
Ensayos ldquoin vitrordquo
High throughput screening
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
espectrometriacutea de masas y RMN
Identificacioacuten y verificacioacuten
Ensayos de bioluminiscencia citometriacutea etc
Ensayos precliacutenicos
ldquoin vivordquo
Ensayos Cliacutenicos
RegulatoryHealth Claims
Transferencia
Genoacutemica expProteoacutemica expMetaboloacutemica
Ensayos a terceros
9
Etapas en las que participa el laboratorio de anaacutelisis
Composicioacuten
Contaminantes
Funcionalidad(Toxicidad y Eficacia)
Anaacutelisis
Desarrollo de nuevos meacutetodos
10
11
Anaacutelisis Ensayos de intereacutes
Minerales (Ca K Mg Na P Zn Fe Cu)Composicioacuten de aacutecidos grasos(incluidos los trans)Aacutecidos grasos Omega-3Vitaminas liposolubles (A D y E)Vitaminas hidrosolubles (b1 b2 b3 b5 b6 b9 y C)Hidratos de carbonoTrigliceacuteridosTocoferolesIsoflavonasEsterolesAminoaacutecidosComposicioacuten nutricional(Grasa total proteiacutenas cenizas fibra hellip)
12
bull Fenoles 18 meacutetodosbull Terpenos 36 meacutetodosbull Carbohidratos 9 meacutetodosbull Liacutepidos 41 meacutetodosbull Peacuteptidos 11 meacutetodosbull Fibras 36 meacutetodosbull Extractos vegetales13 meacutetodosbull Cultivos bacterianos 4 meacutetodosbull Miscelaacutenea 55 meacutetodos
(Edulcorantes polioles alcaloideshellip)
bull Vitaminasbull Minerales
223 meacutetodos para 100 compuestos
Falta de meacutetodos analiacuteticos que cubran los compuestos (y matrices) usados en el campo
de alimentos funcionales
Anaacutelisis Composicioacuten Caracterizacioacuten de ingredientes
bull Permite detectar la adicioacuten de grasas vegetales no lacteas (B-sitosterol stigmasterol o campesterol)bull Permite evaluar la calidad nutricional a partir del contenido en colesterolbull Control de ingrediente funcional fitoesteroles
Adicioacuten de patroacuten internoy saponificacioacuten con
KOH (MeOH)
Extraccioacuten del insaponificable y concentracioacuten
Extraccioacuten de la grasa laacutectea
Desarrollo de meacutetodos Deteccioacuten de esteroles
13
J Agric Food Chem 2006 Jun 2854(13)4531-6
Simultaneous determination of eight water-soluble vitamins in supplemented foods by liquid chromatographyZafra-Goacutemez A Garballo A Morales JC Garciacutea-Ayuso LEQuality Department Analytical Division Puleva Biotech SA Camino de Purchil 66 E-18004 Granada Spain
14
Desarrollo de meacutetodos Vitaminas hidrosolubles
15
ISO 230652009-IDF 211
min10 15 20 25 30 35 40
pA
5
6
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9
10
11
FID1 A (AG300106008F0701D)
Sample M0823 8379
- C
182n6
cis Linoleico
9976
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183n3
Linolen
ico
1063
2 - C
182 con
j CLA
1088
3 - C
184n3
2035
3 - C
205n3
EPA
2887
7 - C
230
3704
4 - C
225n3
DPA
4040
7 - C
226n3
DHA
Desarrollo de meacutetodos Omega-3 y 6 en grasa laacutectea
16
Isoflavonas en leche
Anaacutelisis Composicioacuten Extractos vegetales-APIs
Catequinas en te verde Polifenoles en Equinacea
+ 50 meacutetodos en extractos
y plantas
17
Desarrollo de meacutetodos Anaacutelisis en produccioacuten
Contaminantes reguladosAutenticidad y trazabilidad
Situaciones de alerta
18
19
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
Residuos de PesticidasResiduos de Antibioacuteticos(sulfonamidas B-lactamas tetraciclinasquinolonas y cloranfenicol)Micotoxinas(aflatoxinas B+G aflatoxina M1 y ocratoxina A)Metales pesados(plomo cadmio mercurio y arseacutenico)Hidrocarburos aromaacuteticos policiacuteclicosDisolventes residuales(MeOH EtOH hexano acetona acetato de etilo)Identificacioacuten de aleacutergenos(gluten lactosa hellip)Patoacutegenos(Salmonella Listeria E Coli B Cereus S AureusC Sakazakii)
20
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
21
S Alimentaria Micotoxinas
22
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
Black cohoshCimicifugae rhizomaMonograph Ndeg 2069HPTLC ndash Dr ReichEUROPEAN PHARMACOPOEIA
COMMISSION
Ensayo colaborativoDeteccioacuten de 5 adulteracioacuten con Cimicifuga foetida C dahurica C heracleifolia o C americana en muestras de Cimicifuga racemosa(Black Cohosh)
23
Identificacioacuten de especies botaacutenicas para suplementos de la dieta
K He et al Journal of Chromatography A 1112 (2006) 241ndash254
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
24
IRD
Perfil normal
Perfil alterado
AUTENTICIDAD Aceites concentrados
25
TRAZABILIDAD Perfil proteico en leche
Tratamientos teacutermicos
bull HCl hasta pH 46bull Reposo 30 minbull Centrifugacioacuten y dilucioacuten de sobrenadante
Determinacioacuten de B-lactoglobulina(proteiacutena de lactosuero)
Determinacioacuten de Furosina(producto reaccioacuten Maillard)
bull Hidroacutelisis aacutecida a 110ordmCbull Filtrar y SPE (c18)bull HPLC - pares ioacutenicos (AcH y KCl)
bullEliminacioacuten de grasas y proteiacutenasbullHPLC en columna ioacutenicabullDeteccioacuten y cuantificacioacuten IR
Determinacioacuten de Lactulosa(isoacutemero de lactosa)
MV
000
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Minutes
200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 2200 2400
Lact
osa
- 11
762
Lact
ulos
a -
148
43
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Deteccioacuten de leche en polvo en leche UHT
Lactulosafurosinage25
(en leche UHT)
Leche en polvo Lactulosa 50
Ratio lf= 0125Furosina 400
Leche UHT Lactulosa 420
Ratio lf= 3000Furosina 140
90 leche UHT +
10 leche en polvo
Lactulosa 383
Ratio lf= 2307Furosina 166
27
28
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Situaciones de alerta
bull Melamina en productos laacutecteosbull ITX en envases de alimentos infantilesbull Hidrocarburos en aceite de girasolbull Benzo (a) pireno en aceites
Respuesta del laboratorio en
48 horas
Participacioacuten del laboratorio de anaacutelisis
29
30
Aacutereas de intereacutes
Obesidad y diabetes
Nutricioacuten infantil
Metabolismo oacuteseo
Enfermedad cardiovascular
Estreacutes oxidativo
Hipertensioacuten
Salud intestinal (inflamacioacuten)
Salud oral
Cribado
HTS de actividad bioloacutegica
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
Identificacioacuten y validacioacuten
Espectrometriacutea de masas y RMN
31
1000 extractos vegetales en un ensayo colorimeacutetrico descreening en placas de 96 Varios extractos cuyo contenido enflavonoides es conocido dieron resultado positivo Mediante eluso de patrones y LC-MS confirmamos la identidad delcompuesto causante del efecto positivo
Libreriacuteas productos naturales (extractos peacuteptidos hellip)
Marcador seleccionado en funcioacuten del objetivo
HT-SCREENING DE ACTIVIDAD BIOLOacuteGICA
32
AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
Fraccioacuten de oligosacaacuteridos aisladapor
bull deslipidacioacuten
bull precipitacioacuten de proteiacutenas
bull GPC en Sephadex G-25
bull colector de fracciones
Separacioacuten y cuantificacioacuten
bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
33
Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
34
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
36
La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
MUESTRAS biopsias de tejidos liacuteneas celulares fluidos bioloacutegicos
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Proteoacutemica de expresioacuten
ESI-APCI
(Q)TOF-MSCHIPMS PMF
Spectrum Mill for MH
MassHunter BioconfirmationMassHunter Profiling
Identificacioacuten y confirmacioacuten de proteiacutenas usando la huella peptiacutedica (PMF)
37
APLICACIOacuteN DE ldquoOacuteMICASrdquo Metaboloacutemica y nutricioacuten
La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
Fluidos Bioloacutegicos
38
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Metaboloacutemica
Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
0
200
400
600
800
week 0 week 2 week 4
bu
tyra
te (
mg
L)
0
200
400
600
800
week 0 week 2 week 4
bu
tyra
te (
mg
L)
Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
39
Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Bioinformaacutetica
Muchas gracias por vuestra atencioacuten
9
Etapas en las que participa el laboratorio de anaacutelisis
Composicioacuten
Contaminantes
Funcionalidad(Toxicidad y Eficacia)
Anaacutelisis
Desarrollo de nuevos meacutetodos
10
11
Anaacutelisis Ensayos de intereacutes
Minerales (Ca K Mg Na P Zn Fe Cu)Composicioacuten de aacutecidos grasos(incluidos los trans)Aacutecidos grasos Omega-3Vitaminas liposolubles (A D y E)Vitaminas hidrosolubles (b1 b2 b3 b5 b6 b9 y C)Hidratos de carbonoTrigliceacuteridosTocoferolesIsoflavonasEsterolesAminoaacutecidosComposicioacuten nutricional(Grasa total proteiacutenas cenizas fibra hellip)
12
bull Fenoles 18 meacutetodosbull Terpenos 36 meacutetodosbull Carbohidratos 9 meacutetodosbull Liacutepidos 41 meacutetodosbull Peacuteptidos 11 meacutetodosbull Fibras 36 meacutetodosbull Extractos vegetales13 meacutetodosbull Cultivos bacterianos 4 meacutetodosbull Miscelaacutenea 55 meacutetodos
(Edulcorantes polioles alcaloideshellip)
bull Vitaminasbull Minerales
223 meacutetodos para 100 compuestos
Falta de meacutetodos analiacuteticos que cubran los compuestos (y matrices) usados en el campo
de alimentos funcionales
Anaacutelisis Composicioacuten Caracterizacioacuten de ingredientes
bull Permite detectar la adicioacuten de grasas vegetales no lacteas (B-sitosterol stigmasterol o campesterol)bull Permite evaluar la calidad nutricional a partir del contenido en colesterolbull Control de ingrediente funcional fitoesteroles
Adicioacuten de patroacuten internoy saponificacioacuten con
KOH (MeOH)
Extraccioacuten del insaponificable y concentracioacuten
Extraccioacuten de la grasa laacutectea
Desarrollo de meacutetodos Deteccioacuten de esteroles
13
J Agric Food Chem 2006 Jun 2854(13)4531-6
Simultaneous determination of eight water-soluble vitamins in supplemented foods by liquid chromatographyZafra-Goacutemez A Garballo A Morales JC Garciacutea-Ayuso LEQuality Department Analytical Division Puleva Biotech SA Camino de Purchil 66 E-18004 Granada Spain
14
Desarrollo de meacutetodos Vitaminas hidrosolubles
15
ISO 230652009-IDF 211
min10 15 20 25 30 35 40
pA
5
6
7
8
9
10
11
FID1 A (AG300106008F0701D)
Sample M0823 8379
- C
182n6
cis Linoleico
9976
- C
183n3
Linolen
ico
1063
2 - C
182 con
j CLA
1088
3 - C
184n3
2035
3 - C
205n3
EPA
2887
7 - C
230
3704
4 - C
225n3
DPA
4040
7 - C
226n3
DHA
Desarrollo de meacutetodos Omega-3 y 6 en grasa laacutectea
16
Isoflavonas en leche
Anaacutelisis Composicioacuten Extractos vegetales-APIs
Catequinas en te verde Polifenoles en Equinacea
+ 50 meacutetodos en extractos
y plantas
17
Desarrollo de meacutetodos Anaacutelisis en produccioacuten
Contaminantes reguladosAutenticidad y trazabilidad
Situaciones de alerta
18
19
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
Residuos de PesticidasResiduos de Antibioacuteticos(sulfonamidas B-lactamas tetraciclinasquinolonas y cloranfenicol)Micotoxinas(aflatoxinas B+G aflatoxina M1 y ocratoxina A)Metales pesados(plomo cadmio mercurio y arseacutenico)Hidrocarburos aromaacuteticos policiacuteclicosDisolventes residuales(MeOH EtOH hexano acetona acetato de etilo)Identificacioacuten de aleacutergenos(gluten lactosa hellip)Patoacutegenos(Salmonella Listeria E Coli B Cereus S AureusC Sakazakii)
20
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
21
S Alimentaria Micotoxinas
22
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
Black cohoshCimicifugae rhizomaMonograph Ndeg 2069HPTLC ndash Dr ReichEUROPEAN PHARMACOPOEIA
COMMISSION
Ensayo colaborativoDeteccioacuten de 5 adulteracioacuten con Cimicifuga foetida C dahurica C heracleifolia o C americana en muestras de Cimicifuga racemosa(Black Cohosh)
23
Identificacioacuten de especies botaacutenicas para suplementos de la dieta
K He et al Journal of Chromatography A 1112 (2006) 241ndash254
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
24
IRD
Perfil normal
Perfil alterado
AUTENTICIDAD Aceites concentrados
25
TRAZABILIDAD Perfil proteico en leche
Tratamientos teacutermicos
bull HCl hasta pH 46bull Reposo 30 minbull Centrifugacioacuten y dilucioacuten de sobrenadante
Determinacioacuten de B-lactoglobulina(proteiacutena de lactosuero)
Determinacioacuten de Furosina(producto reaccioacuten Maillard)
bull Hidroacutelisis aacutecida a 110ordmCbull Filtrar y SPE (c18)bull HPLC - pares ioacutenicos (AcH y KCl)
bullEliminacioacuten de grasas y proteiacutenasbullHPLC en columna ioacutenicabullDeteccioacuten y cuantificacioacuten IR
Determinacioacuten de Lactulosa(isoacutemero de lactosa)
MV
000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
Minutes
200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 2200 2400
Lact
osa
- 11
762
Lact
ulos
a -
148
43
26
Deteccioacuten de leche en polvo en leche UHT
Lactulosafurosinage25
(en leche UHT)
Leche en polvo Lactulosa 50
Ratio lf= 0125Furosina 400
Leche UHT Lactulosa 420
Ratio lf= 3000Furosina 140
90 leche UHT +
10 leche en polvo
Lactulosa 383
Ratio lf= 2307Furosina 166
27
28
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Situaciones de alerta
bull Melamina en productos laacutecteosbull ITX en envases de alimentos infantilesbull Hidrocarburos en aceite de girasolbull Benzo (a) pireno en aceites
Respuesta del laboratorio en
48 horas
Participacioacuten del laboratorio de anaacutelisis
29
30
Aacutereas de intereacutes
Obesidad y diabetes
Nutricioacuten infantil
Metabolismo oacuteseo
Enfermedad cardiovascular
Estreacutes oxidativo
Hipertensioacuten
Salud intestinal (inflamacioacuten)
Salud oral
Cribado
HTS de actividad bioloacutegica
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
Identificacioacuten y validacioacuten
Espectrometriacutea de masas y RMN
31
1000 extractos vegetales en un ensayo colorimeacutetrico descreening en placas de 96 Varios extractos cuyo contenido enflavonoides es conocido dieron resultado positivo Mediante eluso de patrones y LC-MS confirmamos la identidad delcompuesto causante del efecto positivo
Libreriacuteas productos naturales (extractos peacuteptidos hellip)
Marcador seleccionado en funcioacuten del objetivo
HT-SCREENING DE ACTIVIDAD BIOLOacuteGICA
32
AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
Fraccioacuten de oligosacaacuteridos aisladapor
bull deslipidacioacuten
bull precipitacioacuten de proteiacutenas
bull GPC en Sephadex G-25
bull colector de fracciones
Separacioacuten y cuantificacioacuten
bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
33
Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
34
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
36
La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
MUESTRAS biopsias de tejidos liacuteneas celulares fluidos bioloacutegicos
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Proteoacutemica de expresioacuten
ESI-APCI
(Q)TOF-MSCHIPMS PMF
Spectrum Mill for MH
MassHunter BioconfirmationMassHunter Profiling
Identificacioacuten y confirmacioacuten de proteiacutenas usando la huella peptiacutedica (PMF)
37
APLICACIOacuteN DE ldquoOacuteMICASrdquo Metaboloacutemica y nutricioacuten
La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
Fluidos Bioloacutegicos
38
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Metaboloacutemica
Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
0
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week 0 week 2 week 4
bu
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mg
L)
0
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week 0 week 2 week 4
bu
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mg
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Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
39
Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Bioinformaacutetica
Muchas gracias por vuestra atencioacuten
Anaacutelisis
Desarrollo de nuevos meacutetodos
10
11
Anaacutelisis Ensayos de intereacutes
Minerales (Ca K Mg Na P Zn Fe Cu)Composicioacuten de aacutecidos grasos(incluidos los trans)Aacutecidos grasos Omega-3Vitaminas liposolubles (A D y E)Vitaminas hidrosolubles (b1 b2 b3 b5 b6 b9 y C)Hidratos de carbonoTrigliceacuteridosTocoferolesIsoflavonasEsterolesAminoaacutecidosComposicioacuten nutricional(Grasa total proteiacutenas cenizas fibra hellip)
12
bull Fenoles 18 meacutetodosbull Terpenos 36 meacutetodosbull Carbohidratos 9 meacutetodosbull Liacutepidos 41 meacutetodosbull Peacuteptidos 11 meacutetodosbull Fibras 36 meacutetodosbull Extractos vegetales13 meacutetodosbull Cultivos bacterianos 4 meacutetodosbull Miscelaacutenea 55 meacutetodos
(Edulcorantes polioles alcaloideshellip)
bull Vitaminasbull Minerales
223 meacutetodos para 100 compuestos
Falta de meacutetodos analiacuteticos que cubran los compuestos (y matrices) usados en el campo
de alimentos funcionales
Anaacutelisis Composicioacuten Caracterizacioacuten de ingredientes
bull Permite detectar la adicioacuten de grasas vegetales no lacteas (B-sitosterol stigmasterol o campesterol)bull Permite evaluar la calidad nutricional a partir del contenido en colesterolbull Control de ingrediente funcional fitoesteroles
Adicioacuten de patroacuten internoy saponificacioacuten con
KOH (MeOH)
Extraccioacuten del insaponificable y concentracioacuten
Extraccioacuten de la grasa laacutectea
Desarrollo de meacutetodos Deteccioacuten de esteroles
13
J Agric Food Chem 2006 Jun 2854(13)4531-6
Simultaneous determination of eight water-soluble vitamins in supplemented foods by liquid chromatographyZafra-Goacutemez A Garballo A Morales JC Garciacutea-Ayuso LEQuality Department Analytical Division Puleva Biotech SA Camino de Purchil 66 E-18004 Granada Spain
14
Desarrollo de meacutetodos Vitaminas hidrosolubles
15
ISO 230652009-IDF 211
min10 15 20 25 30 35 40
pA
5
6
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FID1 A (AG300106008F0701D)
Sample M0823 8379
- C
182n6
cis Linoleico
9976
- C
183n3
Linolen
ico
1063
2 - C
182 con
j CLA
1088
3 - C
184n3
2035
3 - C
205n3
EPA
2887
7 - C
230
3704
4 - C
225n3
DPA
4040
7 - C
226n3
DHA
Desarrollo de meacutetodos Omega-3 y 6 en grasa laacutectea
16
Isoflavonas en leche
Anaacutelisis Composicioacuten Extractos vegetales-APIs
Catequinas en te verde Polifenoles en Equinacea
+ 50 meacutetodos en extractos
y plantas
17
Desarrollo de meacutetodos Anaacutelisis en produccioacuten
Contaminantes reguladosAutenticidad y trazabilidad
Situaciones de alerta
18
19
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
Residuos de PesticidasResiduos de Antibioacuteticos(sulfonamidas B-lactamas tetraciclinasquinolonas y cloranfenicol)Micotoxinas(aflatoxinas B+G aflatoxina M1 y ocratoxina A)Metales pesados(plomo cadmio mercurio y arseacutenico)Hidrocarburos aromaacuteticos policiacuteclicosDisolventes residuales(MeOH EtOH hexano acetona acetato de etilo)Identificacioacuten de aleacutergenos(gluten lactosa hellip)Patoacutegenos(Salmonella Listeria E Coli B Cereus S AureusC Sakazakii)
20
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
21
S Alimentaria Micotoxinas
22
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
Black cohoshCimicifugae rhizomaMonograph Ndeg 2069HPTLC ndash Dr ReichEUROPEAN PHARMACOPOEIA
COMMISSION
Ensayo colaborativoDeteccioacuten de 5 adulteracioacuten con Cimicifuga foetida C dahurica C heracleifolia o C americana en muestras de Cimicifuga racemosa(Black Cohosh)
23
Identificacioacuten de especies botaacutenicas para suplementos de la dieta
K He et al Journal of Chromatography A 1112 (2006) 241ndash254
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
24
IRD
Perfil normal
Perfil alterado
AUTENTICIDAD Aceites concentrados
25
TRAZABILIDAD Perfil proteico en leche
Tratamientos teacutermicos
bull HCl hasta pH 46bull Reposo 30 minbull Centrifugacioacuten y dilucioacuten de sobrenadante
Determinacioacuten de B-lactoglobulina(proteiacutena de lactosuero)
Determinacioacuten de Furosina(producto reaccioacuten Maillard)
bull Hidroacutelisis aacutecida a 110ordmCbull Filtrar y SPE (c18)bull HPLC - pares ioacutenicos (AcH y KCl)
bullEliminacioacuten de grasas y proteiacutenasbullHPLC en columna ioacutenicabullDeteccioacuten y cuantificacioacuten IR
Determinacioacuten de Lactulosa(isoacutemero de lactosa)
MV
000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
Minutes
200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 2200 2400
Lact
osa
- 11
762
Lact
ulos
a -
148
43
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Deteccioacuten de leche en polvo en leche UHT
Lactulosafurosinage25
(en leche UHT)
Leche en polvo Lactulosa 50
Ratio lf= 0125Furosina 400
Leche UHT Lactulosa 420
Ratio lf= 3000Furosina 140
90 leche UHT +
10 leche en polvo
Lactulosa 383
Ratio lf= 2307Furosina 166
27
28
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Situaciones de alerta
bull Melamina en productos laacutecteosbull ITX en envases de alimentos infantilesbull Hidrocarburos en aceite de girasolbull Benzo (a) pireno en aceites
Respuesta del laboratorio en
48 horas
Participacioacuten del laboratorio de anaacutelisis
29
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Aacutereas de intereacutes
Obesidad y diabetes
Nutricioacuten infantil
Metabolismo oacuteseo
Enfermedad cardiovascular
Estreacutes oxidativo
Hipertensioacuten
Salud intestinal (inflamacioacuten)
Salud oral
Cribado
HTS de actividad bioloacutegica
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
Identificacioacuten y validacioacuten
Espectrometriacutea de masas y RMN
31
1000 extractos vegetales en un ensayo colorimeacutetrico descreening en placas de 96 Varios extractos cuyo contenido enflavonoides es conocido dieron resultado positivo Mediante eluso de patrones y LC-MS confirmamos la identidad delcompuesto causante del efecto positivo
Libreriacuteas productos naturales (extractos peacuteptidos hellip)
Marcador seleccionado en funcioacuten del objetivo
HT-SCREENING DE ACTIVIDAD BIOLOacuteGICA
32
AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
Fraccioacuten de oligosacaacuteridos aisladapor
bull deslipidacioacuten
bull precipitacioacuten de proteiacutenas
bull GPC en Sephadex G-25
bull colector de fracciones
Separacioacuten y cuantificacioacuten
bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
33
Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
34
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
36
La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
MUESTRAS biopsias de tejidos liacuteneas celulares fluidos bioloacutegicos
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Proteoacutemica de expresioacuten
ESI-APCI
(Q)TOF-MSCHIPMS PMF
Spectrum Mill for MH
MassHunter BioconfirmationMassHunter Profiling
Identificacioacuten y confirmacioacuten de proteiacutenas usando la huella peptiacutedica (PMF)
37
APLICACIOacuteN DE ldquoOacuteMICASrdquo Metaboloacutemica y nutricioacuten
La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
Fluidos Bioloacutegicos
38
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Metaboloacutemica
Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
0
200
400
600
800
week 0 week 2 week 4
bu
tyra
te (
mg
L)
0
200
400
600
800
week 0 week 2 week 4
bu
tyra
te (
mg
L)
Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
39
Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Bioinformaacutetica
Muchas gracias por vuestra atencioacuten
11
Anaacutelisis Ensayos de intereacutes
Minerales (Ca K Mg Na P Zn Fe Cu)Composicioacuten de aacutecidos grasos(incluidos los trans)Aacutecidos grasos Omega-3Vitaminas liposolubles (A D y E)Vitaminas hidrosolubles (b1 b2 b3 b5 b6 b9 y C)Hidratos de carbonoTrigliceacuteridosTocoferolesIsoflavonasEsterolesAminoaacutecidosComposicioacuten nutricional(Grasa total proteiacutenas cenizas fibra hellip)
12
bull Fenoles 18 meacutetodosbull Terpenos 36 meacutetodosbull Carbohidratos 9 meacutetodosbull Liacutepidos 41 meacutetodosbull Peacuteptidos 11 meacutetodosbull Fibras 36 meacutetodosbull Extractos vegetales13 meacutetodosbull Cultivos bacterianos 4 meacutetodosbull Miscelaacutenea 55 meacutetodos
(Edulcorantes polioles alcaloideshellip)
bull Vitaminasbull Minerales
223 meacutetodos para 100 compuestos
Falta de meacutetodos analiacuteticos que cubran los compuestos (y matrices) usados en el campo
de alimentos funcionales
Anaacutelisis Composicioacuten Caracterizacioacuten de ingredientes
bull Permite detectar la adicioacuten de grasas vegetales no lacteas (B-sitosterol stigmasterol o campesterol)bull Permite evaluar la calidad nutricional a partir del contenido en colesterolbull Control de ingrediente funcional fitoesteroles
Adicioacuten de patroacuten internoy saponificacioacuten con
KOH (MeOH)
Extraccioacuten del insaponificable y concentracioacuten
Extraccioacuten de la grasa laacutectea
Desarrollo de meacutetodos Deteccioacuten de esteroles
13
J Agric Food Chem 2006 Jun 2854(13)4531-6
Simultaneous determination of eight water-soluble vitamins in supplemented foods by liquid chromatographyZafra-Goacutemez A Garballo A Morales JC Garciacutea-Ayuso LEQuality Department Analytical Division Puleva Biotech SA Camino de Purchil 66 E-18004 Granada Spain
14
Desarrollo de meacutetodos Vitaminas hidrosolubles
15
ISO 230652009-IDF 211
min10 15 20 25 30 35 40
pA
5
6
7
8
9
10
11
FID1 A (AG300106008F0701D)
Sample M0823 8379
- C
182n6
cis Linoleico
9976
- C
183n3
Linolen
ico
1063
2 - C
182 con
j CLA
1088
3 - C
184n3
2035
3 - C
205n3
EPA
2887
7 - C
230
3704
4 - C
225n3
DPA
4040
7 - C
226n3
DHA
Desarrollo de meacutetodos Omega-3 y 6 en grasa laacutectea
16
Isoflavonas en leche
Anaacutelisis Composicioacuten Extractos vegetales-APIs
Catequinas en te verde Polifenoles en Equinacea
+ 50 meacutetodos en extractos
y plantas
17
Desarrollo de meacutetodos Anaacutelisis en produccioacuten
Contaminantes reguladosAutenticidad y trazabilidad
Situaciones de alerta
18
19
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
Residuos de PesticidasResiduos de Antibioacuteticos(sulfonamidas B-lactamas tetraciclinasquinolonas y cloranfenicol)Micotoxinas(aflatoxinas B+G aflatoxina M1 y ocratoxina A)Metales pesados(plomo cadmio mercurio y arseacutenico)Hidrocarburos aromaacuteticos policiacuteclicosDisolventes residuales(MeOH EtOH hexano acetona acetato de etilo)Identificacioacuten de aleacutergenos(gluten lactosa hellip)Patoacutegenos(Salmonella Listeria E Coli B Cereus S AureusC Sakazakii)
20
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
21
S Alimentaria Micotoxinas
22
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
Black cohoshCimicifugae rhizomaMonograph Ndeg 2069HPTLC ndash Dr ReichEUROPEAN PHARMACOPOEIA
COMMISSION
Ensayo colaborativoDeteccioacuten de 5 adulteracioacuten con Cimicifuga foetida C dahurica C heracleifolia o C americana en muestras de Cimicifuga racemosa(Black Cohosh)
23
Identificacioacuten de especies botaacutenicas para suplementos de la dieta
K He et al Journal of Chromatography A 1112 (2006) 241ndash254
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
24
IRD
Perfil normal
Perfil alterado
AUTENTICIDAD Aceites concentrados
25
TRAZABILIDAD Perfil proteico en leche
Tratamientos teacutermicos
bull HCl hasta pH 46bull Reposo 30 minbull Centrifugacioacuten y dilucioacuten de sobrenadante
Determinacioacuten de B-lactoglobulina(proteiacutena de lactosuero)
Determinacioacuten de Furosina(producto reaccioacuten Maillard)
bull Hidroacutelisis aacutecida a 110ordmCbull Filtrar y SPE (c18)bull HPLC - pares ioacutenicos (AcH y KCl)
bullEliminacioacuten de grasas y proteiacutenasbullHPLC en columna ioacutenicabullDeteccioacuten y cuantificacioacuten IR
Determinacioacuten de Lactulosa(isoacutemero de lactosa)
MV
000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
Minutes
200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 2200 2400
Lact
osa
- 11
762
Lact
ulos
a -
148
43
26
Deteccioacuten de leche en polvo en leche UHT
Lactulosafurosinage25
(en leche UHT)
Leche en polvo Lactulosa 50
Ratio lf= 0125Furosina 400
Leche UHT Lactulosa 420
Ratio lf= 3000Furosina 140
90 leche UHT +
10 leche en polvo
Lactulosa 383
Ratio lf= 2307Furosina 166
27
28
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Situaciones de alerta
bull Melamina en productos laacutecteosbull ITX en envases de alimentos infantilesbull Hidrocarburos en aceite de girasolbull Benzo (a) pireno en aceites
Respuesta del laboratorio en
48 horas
Participacioacuten del laboratorio de anaacutelisis
29
30
Aacutereas de intereacutes
Obesidad y diabetes
Nutricioacuten infantil
Metabolismo oacuteseo
Enfermedad cardiovascular
Estreacutes oxidativo
Hipertensioacuten
Salud intestinal (inflamacioacuten)
Salud oral
Cribado
HTS de actividad bioloacutegica
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
Identificacioacuten y validacioacuten
Espectrometriacutea de masas y RMN
31
1000 extractos vegetales en un ensayo colorimeacutetrico descreening en placas de 96 Varios extractos cuyo contenido enflavonoides es conocido dieron resultado positivo Mediante eluso de patrones y LC-MS confirmamos la identidad delcompuesto causante del efecto positivo
Libreriacuteas productos naturales (extractos peacuteptidos hellip)
Marcador seleccionado en funcioacuten del objetivo
HT-SCREENING DE ACTIVIDAD BIOLOacuteGICA
32
AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
Fraccioacuten de oligosacaacuteridos aisladapor
bull deslipidacioacuten
bull precipitacioacuten de proteiacutenas
bull GPC en Sephadex G-25
bull colector de fracciones
Separacioacuten y cuantificacioacuten
bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
33
Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
34
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
36
La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
MUESTRAS biopsias de tejidos liacuteneas celulares fluidos bioloacutegicos
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Proteoacutemica de expresioacuten
ESI-APCI
(Q)TOF-MSCHIPMS PMF
Spectrum Mill for MH
MassHunter BioconfirmationMassHunter Profiling
Identificacioacuten y confirmacioacuten de proteiacutenas usando la huella peptiacutedica (PMF)
37
APLICACIOacuteN DE ldquoOacuteMICASrdquo Metaboloacutemica y nutricioacuten
La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
Fluidos Bioloacutegicos
38
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Metaboloacutemica
Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
0
200
400
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week 0 week 2 week 4
bu
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week 0 week 2 week 4
bu
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mg
L)
Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
39
Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Bioinformaacutetica
Muchas gracias por vuestra atencioacuten
12
bull Fenoles 18 meacutetodosbull Terpenos 36 meacutetodosbull Carbohidratos 9 meacutetodosbull Liacutepidos 41 meacutetodosbull Peacuteptidos 11 meacutetodosbull Fibras 36 meacutetodosbull Extractos vegetales13 meacutetodosbull Cultivos bacterianos 4 meacutetodosbull Miscelaacutenea 55 meacutetodos
(Edulcorantes polioles alcaloideshellip)
bull Vitaminasbull Minerales
223 meacutetodos para 100 compuestos
Falta de meacutetodos analiacuteticos que cubran los compuestos (y matrices) usados en el campo
de alimentos funcionales
Anaacutelisis Composicioacuten Caracterizacioacuten de ingredientes
bull Permite detectar la adicioacuten de grasas vegetales no lacteas (B-sitosterol stigmasterol o campesterol)bull Permite evaluar la calidad nutricional a partir del contenido en colesterolbull Control de ingrediente funcional fitoesteroles
Adicioacuten de patroacuten internoy saponificacioacuten con
KOH (MeOH)
Extraccioacuten del insaponificable y concentracioacuten
Extraccioacuten de la grasa laacutectea
Desarrollo de meacutetodos Deteccioacuten de esteroles
13
J Agric Food Chem 2006 Jun 2854(13)4531-6
Simultaneous determination of eight water-soluble vitamins in supplemented foods by liquid chromatographyZafra-Goacutemez A Garballo A Morales JC Garciacutea-Ayuso LEQuality Department Analytical Division Puleva Biotech SA Camino de Purchil 66 E-18004 Granada Spain
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Desarrollo de meacutetodos Vitaminas hidrosolubles
15
ISO 230652009-IDF 211
min10 15 20 25 30 35 40
pA
5
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FID1 A (AG300106008F0701D)
Sample M0823 8379
- C
182n6
cis Linoleico
9976
- C
183n3
Linolen
ico
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2 - C
182 con
j CLA
1088
3 - C
184n3
2035
3 - C
205n3
EPA
2887
7 - C
230
3704
4 - C
225n3
DPA
4040
7 - C
226n3
DHA
Desarrollo de meacutetodos Omega-3 y 6 en grasa laacutectea
16
Isoflavonas en leche
Anaacutelisis Composicioacuten Extractos vegetales-APIs
Catequinas en te verde Polifenoles en Equinacea
+ 50 meacutetodos en extractos
y plantas
17
Desarrollo de meacutetodos Anaacutelisis en produccioacuten
Contaminantes reguladosAutenticidad y trazabilidad
Situaciones de alerta
18
19
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
Residuos de PesticidasResiduos de Antibioacuteticos(sulfonamidas B-lactamas tetraciclinasquinolonas y cloranfenicol)Micotoxinas(aflatoxinas B+G aflatoxina M1 y ocratoxina A)Metales pesados(plomo cadmio mercurio y arseacutenico)Hidrocarburos aromaacuteticos policiacuteclicosDisolventes residuales(MeOH EtOH hexano acetona acetato de etilo)Identificacioacuten de aleacutergenos(gluten lactosa hellip)Patoacutegenos(Salmonella Listeria E Coli B Cereus S AureusC Sakazakii)
20
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
21
S Alimentaria Micotoxinas
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AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
Black cohoshCimicifugae rhizomaMonograph Ndeg 2069HPTLC ndash Dr ReichEUROPEAN PHARMACOPOEIA
COMMISSION
Ensayo colaborativoDeteccioacuten de 5 adulteracioacuten con Cimicifuga foetida C dahurica C heracleifolia o C americana en muestras de Cimicifuga racemosa(Black Cohosh)
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Identificacioacuten de especies botaacutenicas para suplementos de la dieta
K He et al Journal of Chromatography A 1112 (2006) 241ndash254
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
24
IRD
Perfil normal
Perfil alterado
AUTENTICIDAD Aceites concentrados
25
TRAZABILIDAD Perfil proteico en leche
Tratamientos teacutermicos
bull HCl hasta pH 46bull Reposo 30 minbull Centrifugacioacuten y dilucioacuten de sobrenadante
Determinacioacuten de B-lactoglobulina(proteiacutena de lactosuero)
Determinacioacuten de Furosina(producto reaccioacuten Maillard)
bull Hidroacutelisis aacutecida a 110ordmCbull Filtrar y SPE (c18)bull HPLC - pares ioacutenicos (AcH y KCl)
bullEliminacioacuten de grasas y proteiacutenasbullHPLC en columna ioacutenicabullDeteccioacuten y cuantificacioacuten IR
Determinacioacuten de Lactulosa(isoacutemero de lactosa)
MV
000
1000
2000
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6000
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Minutes
200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 2200 2400
Lact
osa
- 11
762
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ulos
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Deteccioacuten de leche en polvo en leche UHT
Lactulosafurosinage25
(en leche UHT)
Leche en polvo Lactulosa 50
Ratio lf= 0125Furosina 400
Leche UHT Lactulosa 420
Ratio lf= 3000Furosina 140
90 leche UHT +
10 leche en polvo
Lactulosa 383
Ratio lf= 2307Furosina 166
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Anaacutelisis de seguridad alimentaria Situaciones de alerta
bull Melamina en productos laacutecteosbull ITX en envases de alimentos infantilesbull Hidrocarburos en aceite de girasolbull Benzo (a) pireno en aceites
Respuesta del laboratorio en
48 horas
Participacioacuten del laboratorio de anaacutelisis
29
30
Aacutereas de intereacutes
Obesidad y diabetes
Nutricioacuten infantil
Metabolismo oacuteseo
Enfermedad cardiovascular
Estreacutes oxidativo
Hipertensioacuten
Salud intestinal (inflamacioacuten)
Salud oral
Cribado
HTS de actividad bioloacutegica
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
Identificacioacuten y validacioacuten
Espectrometriacutea de masas y RMN
31
1000 extractos vegetales en un ensayo colorimeacutetrico descreening en placas de 96 Varios extractos cuyo contenido enflavonoides es conocido dieron resultado positivo Mediante eluso de patrones y LC-MS confirmamos la identidad delcompuesto causante del efecto positivo
Libreriacuteas productos naturales (extractos peacuteptidos hellip)
Marcador seleccionado en funcioacuten del objetivo
HT-SCREENING DE ACTIVIDAD BIOLOacuteGICA
32
AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
Fraccioacuten de oligosacaacuteridos aisladapor
bull deslipidacioacuten
bull precipitacioacuten de proteiacutenas
bull GPC en Sephadex G-25
bull colector de fracciones
Separacioacuten y cuantificacioacuten
bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
33
Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
34
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
36
La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
MUESTRAS biopsias de tejidos liacuteneas celulares fluidos bioloacutegicos
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Proteoacutemica de expresioacuten
ESI-APCI
(Q)TOF-MSCHIPMS PMF
Spectrum Mill for MH
MassHunter BioconfirmationMassHunter Profiling
Identificacioacuten y confirmacioacuten de proteiacutenas usando la huella peptiacutedica (PMF)
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APLICACIOacuteN DE ldquoOacuteMICASrdquo Metaboloacutemica y nutricioacuten
La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
Fluidos Bioloacutegicos
38
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Metaboloacutemica
Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
0
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week 0 week 2 week 4
bu
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Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
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Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Bioinformaacutetica
Muchas gracias por vuestra atencioacuten
bull Permite detectar la adicioacuten de grasas vegetales no lacteas (B-sitosterol stigmasterol o campesterol)bull Permite evaluar la calidad nutricional a partir del contenido en colesterolbull Control de ingrediente funcional fitoesteroles
Adicioacuten de patroacuten internoy saponificacioacuten con
KOH (MeOH)
Extraccioacuten del insaponificable y concentracioacuten
Extraccioacuten de la grasa laacutectea
Desarrollo de meacutetodos Deteccioacuten de esteroles
13
J Agric Food Chem 2006 Jun 2854(13)4531-6
Simultaneous determination of eight water-soluble vitamins in supplemented foods by liquid chromatographyZafra-Goacutemez A Garballo A Morales JC Garciacutea-Ayuso LEQuality Department Analytical Division Puleva Biotech SA Camino de Purchil 66 E-18004 Granada Spain
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Desarrollo de meacutetodos Vitaminas hidrosolubles
15
ISO 230652009-IDF 211
min10 15 20 25 30 35 40
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FID1 A (AG300106008F0701D)
Sample M0823 8379
- C
182n6
cis Linoleico
9976
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Linolen
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1063
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1088
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205n3
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2887
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225n3
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4040
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226n3
DHA
Desarrollo de meacutetodos Omega-3 y 6 en grasa laacutectea
16
Isoflavonas en leche
Anaacutelisis Composicioacuten Extractos vegetales-APIs
Catequinas en te verde Polifenoles en Equinacea
+ 50 meacutetodos en extractos
y plantas
17
Desarrollo de meacutetodos Anaacutelisis en produccioacuten
Contaminantes reguladosAutenticidad y trazabilidad
Situaciones de alerta
18
19
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
Residuos de PesticidasResiduos de Antibioacuteticos(sulfonamidas B-lactamas tetraciclinasquinolonas y cloranfenicol)Micotoxinas(aflatoxinas B+G aflatoxina M1 y ocratoxina A)Metales pesados(plomo cadmio mercurio y arseacutenico)Hidrocarburos aromaacuteticos policiacuteclicosDisolventes residuales(MeOH EtOH hexano acetona acetato de etilo)Identificacioacuten de aleacutergenos(gluten lactosa hellip)Patoacutegenos(Salmonella Listeria E Coli B Cereus S AureusC Sakazakii)
20
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
21
S Alimentaria Micotoxinas
22
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
Black cohoshCimicifugae rhizomaMonograph Ndeg 2069HPTLC ndash Dr ReichEUROPEAN PHARMACOPOEIA
COMMISSION
Ensayo colaborativoDeteccioacuten de 5 adulteracioacuten con Cimicifuga foetida C dahurica C heracleifolia o C americana en muestras de Cimicifuga racemosa(Black Cohosh)
23
Identificacioacuten de especies botaacutenicas para suplementos de la dieta
K He et al Journal of Chromatography A 1112 (2006) 241ndash254
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
24
IRD
Perfil normal
Perfil alterado
AUTENTICIDAD Aceites concentrados
25
TRAZABILIDAD Perfil proteico en leche
Tratamientos teacutermicos
bull HCl hasta pH 46bull Reposo 30 minbull Centrifugacioacuten y dilucioacuten de sobrenadante
Determinacioacuten de B-lactoglobulina(proteiacutena de lactosuero)
Determinacioacuten de Furosina(producto reaccioacuten Maillard)
bull Hidroacutelisis aacutecida a 110ordmCbull Filtrar y SPE (c18)bull HPLC - pares ioacutenicos (AcH y KCl)
bullEliminacioacuten de grasas y proteiacutenasbullHPLC en columna ioacutenicabullDeteccioacuten y cuantificacioacuten IR
Determinacioacuten de Lactulosa(isoacutemero de lactosa)
MV
000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
Minutes
200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 2200 2400
Lact
osa
- 11
762
Lact
ulos
a -
148
43
26
Deteccioacuten de leche en polvo en leche UHT
Lactulosafurosinage25
(en leche UHT)
Leche en polvo Lactulosa 50
Ratio lf= 0125Furosina 400
Leche UHT Lactulosa 420
Ratio lf= 3000Furosina 140
90 leche UHT +
10 leche en polvo
Lactulosa 383
Ratio lf= 2307Furosina 166
27
28
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Situaciones de alerta
bull Melamina en productos laacutecteosbull ITX en envases de alimentos infantilesbull Hidrocarburos en aceite de girasolbull Benzo (a) pireno en aceites
Respuesta del laboratorio en
48 horas
Participacioacuten del laboratorio de anaacutelisis
29
30
Aacutereas de intereacutes
Obesidad y diabetes
Nutricioacuten infantil
Metabolismo oacuteseo
Enfermedad cardiovascular
Estreacutes oxidativo
Hipertensioacuten
Salud intestinal (inflamacioacuten)
Salud oral
Cribado
HTS de actividad bioloacutegica
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
Identificacioacuten y validacioacuten
Espectrometriacutea de masas y RMN
31
1000 extractos vegetales en un ensayo colorimeacutetrico descreening en placas de 96 Varios extractos cuyo contenido enflavonoides es conocido dieron resultado positivo Mediante eluso de patrones y LC-MS confirmamos la identidad delcompuesto causante del efecto positivo
Libreriacuteas productos naturales (extractos peacuteptidos hellip)
Marcador seleccionado en funcioacuten del objetivo
HT-SCREENING DE ACTIVIDAD BIOLOacuteGICA
32
AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
Fraccioacuten de oligosacaacuteridos aisladapor
bull deslipidacioacuten
bull precipitacioacuten de proteiacutenas
bull GPC en Sephadex G-25
bull colector de fracciones
Separacioacuten y cuantificacioacuten
bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
33
Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
34
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
36
La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
MUESTRAS biopsias de tejidos liacuteneas celulares fluidos bioloacutegicos
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Proteoacutemica de expresioacuten
ESI-APCI
(Q)TOF-MSCHIPMS PMF
Spectrum Mill for MH
MassHunter BioconfirmationMassHunter Profiling
Identificacioacuten y confirmacioacuten de proteiacutenas usando la huella peptiacutedica (PMF)
37
APLICACIOacuteN DE ldquoOacuteMICASrdquo Metaboloacutemica y nutricioacuten
La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
Fluidos Bioloacutegicos
38
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Metaboloacutemica
Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
0
200
400
600
800
week 0 week 2 week 4
bu
tyra
te (
mg
L)
0
200
400
600
800
week 0 week 2 week 4
bu
tyra
te (
mg
L)
Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
39
Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Bioinformaacutetica
Muchas gracias por vuestra atencioacuten
J Agric Food Chem 2006 Jun 2854(13)4531-6
Simultaneous determination of eight water-soluble vitamins in supplemented foods by liquid chromatographyZafra-Goacutemez A Garballo A Morales JC Garciacutea-Ayuso LEQuality Department Analytical Division Puleva Biotech SA Camino de Purchil 66 E-18004 Granada Spain
14
Desarrollo de meacutetodos Vitaminas hidrosolubles
15
ISO 230652009-IDF 211
min10 15 20 25 30 35 40
pA
5
6
7
8
9
10
11
FID1 A (AG300106008F0701D)
Sample M0823 8379
- C
182n6
cis Linoleico
9976
- C
183n3
Linolen
ico
1063
2 - C
182 con
j CLA
1088
3 - C
184n3
2035
3 - C
205n3
EPA
2887
7 - C
230
3704
4 - C
225n3
DPA
4040
7 - C
226n3
DHA
Desarrollo de meacutetodos Omega-3 y 6 en grasa laacutectea
16
Isoflavonas en leche
Anaacutelisis Composicioacuten Extractos vegetales-APIs
Catequinas en te verde Polifenoles en Equinacea
+ 50 meacutetodos en extractos
y plantas
17
Desarrollo de meacutetodos Anaacutelisis en produccioacuten
Contaminantes reguladosAutenticidad y trazabilidad
Situaciones de alerta
18
19
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
Residuos de PesticidasResiduos de Antibioacuteticos(sulfonamidas B-lactamas tetraciclinasquinolonas y cloranfenicol)Micotoxinas(aflatoxinas B+G aflatoxina M1 y ocratoxina A)Metales pesados(plomo cadmio mercurio y arseacutenico)Hidrocarburos aromaacuteticos policiacuteclicosDisolventes residuales(MeOH EtOH hexano acetona acetato de etilo)Identificacioacuten de aleacutergenos(gluten lactosa hellip)Patoacutegenos(Salmonella Listeria E Coli B Cereus S AureusC Sakazakii)
20
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
21
S Alimentaria Micotoxinas
22
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
Black cohoshCimicifugae rhizomaMonograph Ndeg 2069HPTLC ndash Dr ReichEUROPEAN PHARMACOPOEIA
COMMISSION
Ensayo colaborativoDeteccioacuten de 5 adulteracioacuten con Cimicifuga foetida C dahurica C heracleifolia o C americana en muestras de Cimicifuga racemosa(Black Cohosh)
23
Identificacioacuten de especies botaacutenicas para suplementos de la dieta
K He et al Journal of Chromatography A 1112 (2006) 241ndash254
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
24
IRD
Perfil normal
Perfil alterado
AUTENTICIDAD Aceites concentrados
25
TRAZABILIDAD Perfil proteico en leche
Tratamientos teacutermicos
bull HCl hasta pH 46bull Reposo 30 minbull Centrifugacioacuten y dilucioacuten de sobrenadante
Determinacioacuten de B-lactoglobulina(proteiacutena de lactosuero)
Determinacioacuten de Furosina(producto reaccioacuten Maillard)
bull Hidroacutelisis aacutecida a 110ordmCbull Filtrar y SPE (c18)bull HPLC - pares ioacutenicos (AcH y KCl)
bullEliminacioacuten de grasas y proteiacutenasbullHPLC en columna ioacutenicabullDeteccioacuten y cuantificacioacuten IR
Determinacioacuten de Lactulosa(isoacutemero de lactosa)
MV
000
1000
2000
3000
4000
5000
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7000
8000
9000
10000
Minutes
200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 2200 2400
Lact
osa
- 11
762
Lact
ulos
a -
148
43
26
Deteccioacuten de leche en polvo en leche UHT
Lactulosafurosinage25
(en leche UHT)
Leche en polvo Lactulosa 50
Ratio lf= 0125Furosina 400
Leche UHT Lactulosa 420
Ratio lf= 3000Furosina 140
90 leche UHT +
10 leche en polvo
Lactulosa 383
Ratio lf= 2307Furosina 166
27
28
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Situaciones de alerta
bull Melamina en productos laacutecteosbull ITX en envases de alimentos infantilesbull Hidrocarburos en aceite de girasolbull Benzo (a) pireno en aceites
Respuesta del laboratorio en
48 horas
Participacioacuten del laboratorio de anaacutelisis
29
30
Aacutereas de intereacutes
Obesidad y diabetes
Nutricioacuten infantil
Metabolismo oacuteseo
Enfermedad cardiovascular
Estreacutes oxidativo
Hipertensioacuten
Salud intestinal (inflamacioacuten)
Salud oral
Cribado
HTS de actividad bioloacutegica
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
Identificacioacuten y validacioacuten
Espectrometriacutea de masas y RMN
31
1000 extractos vegetales en un ensayo colorimeacutetrico descreening en placas de 96 Varios extractos cuyo contenido enflavonoides es conocido dieron resultado positivo Mediante eluso de patrones y LC-MS confirmamos la identidad delcompuesto causante del efecto positivo
Libreriacuteas productos naturales (extractos peacuteptidos hellip)
Marcador seleccionado en funcioacuten del objetivo
HT-SCREENING DE ACTIVIDAD BIOLOacuteGICA
32
AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
Fraccioacuten de oligosacaacuteridos aisladapor
bull deslipidacioacuten
bull precipitacioacuten de proteiacutenas
bull GPC en Sephadex G-25
bull colector de fracciones
Separacioacuten y cuantificacioacuten
bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
33
Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
34
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
36
La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
MUESTRAS biopsias de tejidos liacuteneas celulares fluidos bioloacutegicos
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Proteoacutemica de expresioacuten
ESI-APCI
(Q)TOF-MSCHIPMS PMF
Spectrum Mill for MH
MassHunter BioconfirmationMassHunter Profiling
Identificacioacuten y confirmacioacuten de proteiacutenas usando la huella peptiacutedica (PMF)
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APLICACIOacuteN DE ldquoOacuteMICASrdquo Metaboloacutemica y nutricioacuten
La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
Fluidos Bioloacutegicos
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APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Metaboloacutemica
Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
0
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week 0 week 2 week 4
bu
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mg
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week 0 week 2 week 4
bu
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te (
mg
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Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
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Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Bioinformaacutetica
Muchas gracias por vuestra atencioacuten
15
ISO 230652009-IDF 211
min10 15 20 25 30 35 40
pA
5
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FID1 A (AG300106008F0701D)
Sample M0823 8379
- C
182n6
cis Linoleico
9976
- C
183n3
Linolen
ico
1063
2 - C
182 con
j CLA
1088
3 - C
184n3
2035
3 - C
205n3
EPA
2887
7 - C
230
3704
4 - C
225n3
DPA
4040
7 - C
226n3
DHA
Desarrollo de meacutetodos Omega-3 y 6 en grasa laacutectea
16
Isoflavonas en leche
Anaacutelisis Composicioacuten Extractos vegetales-APIs
Catequinas en te verde Polifenoles en Equinacea
+ 50 meacutetodos en extractos
y plantas
17
Desarrollo de meacutetodos Anaacutelisis en produccioacuten
Contaminantes reguladosAutenticidad y trazabilidad
Situaciones de alerta
18
19
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
Residuos de PesticidasResiduos de Antibioacuteticos(sulfonamidas B-lactamas tetraciclinasquinolonas y cloranfenicol)Micotoxinas(aflatoxinas B+G aflatoxina M1 y ocratoxina A)Metales pesados(plomo cadmio mercurio y arseacutenico)Hidrocarburos aromaacuteticos policiacuteclicosDisolventes residuales(MeOH EtOH hexano acetona acetato de etilo)Identificacioacuten de aleacutergenos(gluten lactosa hellip)Patoacutegenos(Salmonella Listeria E Coli B Cereus S AureusC Sakazakii)
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Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
21
S Alimentaria Micotoxinas
22
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
Black cohoshCimicifugae rhizomaMonograph Ndeg 2069HPTLC ndash Dr ReichEUROPEAN PHARMACOPOEIA
COMMISSION
Ensayo colaborativoDeteccioacuten de 5 adulteracioacuten con Cimicifuga foetida C dahurica C heracleifolia o C americana en muestras de Cimicifuga racemosa(Black Cohosh)
23
Identificacioacuten de especies botaacutenicas para suplementos de la dieta
K He et al Journal of Chromatography A 1112 (2006) 241ndash254
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
24
IRD
Perfil normal
Perfil alterado
AUTENTICIDAD Aceites concentrados
25
TRAZABILIDAD Perfil proteico en leche
Tratamientos teacutermicos
bull HCl hasta pH 46bull Reposo 30 minbull Centrifugacioacuten y dilucioacuten de sobrenadante
Determinacioacuten de B-lactoglobulina(proteiacutena de lactosuero)
Determinacioacuten de Furosina(producto reaccioacuten Maillard)
bull Hidroacutelisis aacutecida a 110ordmCbull Filtrar y SPE (c18)bull HPLC - pares ioacutenicos (AcH y KCl)
bullEliminacioacuten de grasas y proteiacutenasbullHPLC en columna ioacutenicabullDeteccioacuten y cuantificacioacuten IR
Determinacioacuten de Lactulosa(isoacutemero de lactosa)
MV
000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
Minutes
200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 2200 2400
Lact
osa
- 11
762
Lact
ulos
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148
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Deteccioacuten de leche en polvo en leche UHT
Lactulosafurosinage25
(en leche UHT)
Leche en polvo Lactulosa 50
Ratio lf= 0125Furosina 400
Leche UHT Lactulosa 420
Ratio lf= 3000Furosina 140
90 leche UHT +
10 leche en polvo
Lactulosa 383
Ratio lf= 2307Furosina 166
27
28
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Situaciones de alerta
bull Melamina en productos laacutecteosbull ITX en envases de alimentos infantilesbull Hidrocarburos en aceite de girasolbull Benzo (a) pireno en aceites
Respuesta del laboratorio en
48 horas
Participacioacuten del laboratorio de anaacutelisis
29
30
Aacutereas de intereacutes
Obesidad y diabetes
Nutricioacuten infantil
Metabolismo oacuteseo
Enfermedad cardiovascular
Estreacutes oxidativo
Hipertensioacuten
Salud intestinal (inflamacioacuten)
Salud oral
Cribado
HTS de actividad bioloacutegica
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
Identificacioacuten y validacioacuten
Espectrometriacutea de masas y RMN
31
1000 extractos vegetales en un ensayo colorimeacutetrico descreening en placas de 96 Varios extractos cuyo contenido enflavonoides es conocido dieron resultado positivo Mediante eluso de patrones y LC-MS confirmamos la identidad delcompuesto causante del efecto positivo
Libreriacuteas productos naturales (extractos peacuteptidos hellip)
Marcador seleccionado en funcioacuten del objetivo
HT-SCREENING DE ACTIVIDAD BIOLOacuteGICA
32
AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
Fraccioacuten de oligosacaacuteridos aisladapor
bull deslipidacioacuten
bull precipitacioacuten de proteiacutenas
bull GPC en Sephadex G-25
bull colector de fracciones
Separacioacuten y cuantificacioacuten
bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
33
Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
34
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
36
La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
MUESTRAS biopsias de tejidos liacuteneas celulares fluidos bioloacutegicos
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Proteoacutemica de expresioacuten
ESI-APCI
(Q)TOF-MSCHIPMS PMF
Spectrum Mill for MH
MassHunter BioconfirmationMassHunter Profiling
Identificacioacuten y confirmacioacuten de proteiacutenas usando la huella peptiacutedica (PMF)
37
APLICACIOacuteN DE ldquoOacuteMICASrdquo Metaboloacutemica y nutricioacuten
La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
Fluidos Bioloacutegicos
38
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Metaboloacutemica
Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
0
200
400
600
800
week 0 week 2 week 4
bu
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te (
mg
L)
0
200
400
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800
week 0 week 2 week 4
bu
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te (
mg
L)
Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
39
Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Bioinformaacutetica
Muchas gracias por vuestra atencioacuten
16
Isoflavonas en leche
Anaacutelisis Composicioacuten Extractos vegetales-APIs
Catequinas en te verde Polifenoles en Equinacea
+ 50 meacutetodos en extractos
y plantas
17
Desarrollo de meacutetodos Anaacutelisis en produccioacuten
Contaminantes reguladosAutenticidad y trazabilidad
Situaciones de alerta
18
19
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
Residuos de PesticidasResiduos de Antibioacuteticos(sulfonamidas B-lactamas tetraciclinasquinolonas y cloranfenicol)Micotoxinas(aflatoxinas B+G aflatoxina M1 y ocratoxina A)Metales pesados(plomo cadmio mercurio y arseacutenico)Hidrocarburos aromaacuteticos policiacuteclicosDisolventes residuales(MeOH EtOH hexano acetona acetato de etilo)Identificacioacuten de aleacutergenos(gluten lactosa hellip)Patoacutegenos(Salmonella Listeria E Coli B Cereus S AureusC Sakazakii)
20
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
21
S Alimentaria Micotoxinas
22
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
Black cohoshCimicifugae rhizomaMonograph Ndeg 2069HPTLC ndash Dr ReichEUROPEAN PHARMACOPOEIA
COMMISSION
Ensayo colaborativoDeteccioacuten de 5 adulteracioacuten con Cimicifuga foetida C dahurica C heracleifolia o C americana en muestras de Cimicifuga racemosa(Black Cohosh)
23
Identificacioacuten de especies botaacutenicas para suplementos de la dieta
K He et al Journal of Chromatography A 1112 (2006) 241ndash254
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
24
IRD
Perfil normal
Perfil alterado
AUTENTICIDAD Aceites concentrados
25
TRAZABILIDAD Perfil proteico en leche
Tratamientos teacutermicos
bull HCl hasta pH 46bull Reposo 30 minbull Centrifugacioacuten y dilucioacuten de sobrenadante
Determinacioacuten de B-lactoglobulina(proteiacutena de lactosuero)
Determinacioacuten de Furosina(producto reaccioacuten Maillard)
bull Hidroacutelisis aacutecida a 110ordmCbull Filtrar y SPE (c18)bull HPLC - pares ioacutenicos (AcH y KCl)
bullEliminacioacuten de grasas y proteiacutenasbullHPLC en columna ioacutenicabullDeteccioacuten y cuantificacioacuten IR
Determinacioacuten de Lactulosa(isoacutemero de lactosa)
MV
000
1000
2000
3000
4000
5000
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10000
Minutes
200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 2200 2400
Lact
osa
- 11
762
Lact
ulos
a -
148
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26
Deteccioacuten de leche en polvo en leche UHT
Lactulosafurosinage25
(en leche UHT)
Leche en polvo Lactulosa 50
Ratio lf= 0125Furosina 400
Leche UHT Lactulosa 420
Ratio lf= 3000Furosina 140
90 leche UHT +
10 leche en polvo
Lactulosa 383
Ratio lf= 2307Furosina 166
27
28
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Situaciones de alerta
bull Melamina en productos laacutecteosbull ITX en envases de alimentos infantilesbull Hidrocarburos en aceite de girasolbull Benzo (a) pireno en aceites
Respuesta del laboratorio en
48 horas
Participacioacuten del laboratorio de anaacutelisis
29
30
Aacutereas de intereacutes
Obesidad y diabetes
Nutricioacuten infantil
Metabolismo oacuteseo
Enfermedad cardiovascular
Estreacutes oxidativo
Hipertensioacuten
Salud intestinal (inflamacioacuten)
Salud oral
Cribado
HTS de actividad bioloacutegica
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
Identificacioacuten y validacioacuten
Espectrometriacutea de masas y RMN
31
1000 extractos vegetales en un ensayo colorimeacutetrico descreening en placas de 96 Varios extractos cuyo contenido enflavonoides es conocido dieron resultado positivo Mediante eluso de patrones y LC-MS confirmamos la identidad delcompuesto causante del efecto positivo
Libreriacuteas productos naturales (extractos peacuteptidos hellip)
Marcador seleccionado en funcioacuten del objetivo
HT-SCREENING DE ACTIVIDAD BIOLOacuteGICA
32
AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
Fraccioacuten de oligosacaacuteridos aisladapor
bull deslipidacioacuten
bull precipitacioacuten de proteiacutenas
bull GPC en Sephadex G-25
bull colector de fracciones
Separacioacuten y cuantificacioacuten
bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
33
Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
34
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
36
La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
MUESTRAS biopsias de tejidos liacuteneas celulares fluidos bioloacutegicos
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Proteoacutemica de expresioacuten
ESI-APCI
(Q)TOF-MSCHIPMS PMF
Spectrum Mill for MH
MassHunter BioconfirmationMassHunter Profiling
Identificacioacuten y confirmacioacuten de proteiacutenas usando la huella peptiacutedica (PMF)
37
APLICACIOacuteN DE ldquoOacuteMICASrdquo Metaboloacutemica y nutricioacuten
La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
Fluidos Bioloacutegicos
38
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Metaboloacutemica
Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
0
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Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
39
Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Bioinformaacutetica
Muchas gracias por vuestra atencioacuten
17
Desarrollo de meacutetodos Anaacutelisis en produccioacuten
Contaminantes reguladosAutenticidad y trazabilidad
Situaciones de alerta
18
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Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
Residuos de PesticidasResiduos de Antibioacuteticos(sulfonamidas B-lactamas tetraciclinasquinolonas y cloranfenicol)Micotoxinas(aflatoxinas B+G aflatoxina M1 y ocratoxina A)Metales pesados(plomo cadmio mercurio y arseacutenico)Hidrocarburos aromaacuteticos policiacuteclicosDisolventes residuales(MeOH EtOH hexano acetona acetato de etilo)Identificacioacuten de aleacutergenos(gluten lactosa hellip)Patoacutegenos(Salmonella Listeria E Coli B Cereus S AureusC Sakazakii)
20
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
21
S Alimentaria Micotoxinas
22
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
Black cohoshCimicifugae rhizomaMonograph Ndeg 2069HPTLC ndash Dr ReichEUROPEAN PHARMACOPOEIA
COMMISSION
Ensayo colaborativoDeteccioacuten de 5 adulteracioacuten con Cimicifuga foetida C dahurica C heracleifolia o C americana en muestras de Cimicifuga racemosa(Black Cohosh)
23
Identificacioacuten de especies botaacutenicas para suplementos de la dieta
K He et al Journal of Chromatography A 1112 (2006) 241ndash254
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
24
IRD
Perfil normal
Perfil alterado
AUTENTICIDAD Aceites concentrados
25
TRAZABILIDAD Perfil proteico en leche
Tratamientos teacutermicos
bull HCl hasta pH 46bull Reposo 30 minbull Centrifugacioacuten y dilucioacuten de sobrenadante
Determinacioacuten de B-lactoglobulina(proteiacutena de lactosuero)
Determinacioacuten de Furosina(producto reaccioacuten Maillard)
bull Hidroacutelisis aacutecida a 110ordmCbull Filtrar y SPE (c18)bull HPLC - pares ioacutenicos (AcH y KCl)
bullEliminacioacuten de grasas y proteiacutenasbullHPLC en columna ioacutenicabullDeteccioacuten y cuantificacioacuten IR
Determinacioacuten de Lactulosa(isoacutemero de lactosa)
MV
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200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 2200 2400
Lact
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Deteccioacuten de leche en polvo en leche UHT
Lactulosafurosinage25
(en leche UHT)
Leche en polvo Lactulosa 50
Ratio lf= 0125Furosina 400
Leche UHT Lactulosa 420
Ratio lf= 3000Furosina 140
90 leche UHT +
10 leche en polvo
Lactulosa 383
Ratio lf= 2307Furosina 166
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Anaacutelisis de seguridad alimentaria Situaciones de alerta
bull Melamina en productos laacutecteosbull ITX en envases de alimentos infantilesbull Hidrocarburos en aceite de girasolbull Benzo (a) pireno en aceites
Respuesta del laboratorio en
48 horas
Participacioacuten del laboratorio de anaacutelisis
29
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Aacutereas de intereacutes
Obesidad y diabetes
Nutricioacuten infantil
Metabolismo oacuteseo
Enfermedad cardiovascular
Estreacutes oxidativo
Hipertensioacuten
Salud intestinal (inflamacioacuten)
Salud oral
Cribado
HTS de actividad bioloacutegica
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
Identificacioacuten y validacioacuten
Espectrometriacutea de masas y RMN
31
1000 extractos vegetales en un ensayo colorimeacutetrico descreening en placas de 96 Varios extractos cuyo contenido enflavonoides es conocido dieron resultado positivo Mediante eluso de patrones y LC-MS confirmamos la identidad delcompuesto causante del efecto positivo
Libreriacuteas productos naturales (extractos peacuteptidos hellip)
Marcador seleccionado en funcioacuten del objetivo
HT-SCREENING DE ACTIVIDAD BIOLOacuteGICA
32
AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
Fraccioacuten de oligosacaacuteridos aisladapor
bull deslipidacioacuten
bull precipitacioacuten de proteiacutenas
bull GPC en Sephadex G-25
bull colector de fracciones
Separacioacuten y cuantificacioacuten
bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
33
Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
34
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
36
La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
MUESTRAS biopsias de tejidos liacuteneas celulares fluidos bioloacutegicos
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Proteoacutemica de expresioacuten
ESI-APCI
(Q)TOF-MSCHIPMS PMF
Spectrum Mill for MH
MassHunter BioconfirmationMassHunter Profiling
Identificacioacuten y confirmacioacuten de proteiacutenas usando la huella peptiacutedica (PMF)
37
APLICACIOacuteN DE ldquoOacuteMICASrdquo Metaboloacutemica y nutricioacuten
La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
Fluidos Bioloacutegicos
38
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Metaboloacutemica
Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
0
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week 0 week 2 week 4
bu
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week 0 week 2 week 4
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Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
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Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Bioinformaacutetica
Muchas gracias por vuestra atencioacuten
Contaminantes reguladosAutenticidad y trazabilidad
Situaciones de alerta
18
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Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
Residuos de PesticidasResiduos de Antibioacuteticos(sulfonamidas B-lactamas tetraciclinasquinolonas y cloranfenicol)Micotoxinas(aflatoxinas B+G aflatoxina M1 y ocratoxina A)Metales pesados(plomo cadmio mercurio y arseacutenico)Hidrocarburos aromaacuteticos policiacuteclicosDisolventes residuales(MeOH EtOH hexano acetona acetato de etilo)Identificacioacuten de aleacutergenos(gluten lactosa hellip)Patoacutegenos(Salmonella Listeria E Coli B Cereus S AureusC Sakazakii)
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Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
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S Alimentaria Micotoxinas
22
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
Black cohoshCimicifugae rhizomaMonograph Ndeg 2069HPTLC ndash Dr ReichEUROPEAN PHARMACOPOEIA
COMMISSION
Ensayo colaborativoDeteccioacuten de 5 adulteracioacuten con Cimicifuga foetida C dahurica C heracleifolia o C americana en muestras de Cimicifuga racemosa(Black Cohosh)
23
Identificacioacuten de especies botaacutenicas para suplementos de la dieta
K He et al Journal of Chromatography A 1112 (2006) 241ndash254
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
24
IRD
Perfil normal
Perfil alterado
AUTENTICIDAD Aceites concentrados
25
TRAZABILIDAD Perfil proteico en leche
Tratamientos teacutermicos
bull HCl hasta pH 46bull Reposo 30 minbull Centrifugacioacuten y dilucioacuten de sobrenadante
Determinacioacuten de B-lactoglobulina(proteiacutena de lactosuero)
Determinacioacuten de Furosina(producto reaccioacuten Maillard)
bull Hidroacutelisis aacutecida a 110ordmCbull Filtrar y SPE (c18)bull HPLC - pares ioacutenicos (AcH y KCl)
bullEliminacioacuten de grasas y proteiacutenasbullHPLC en columna ioacutenicabullDeteccioacuten y cuantificacioacuten IR
Determinacioacuten de Lactulosa(isoacutemero de lactosa)
MV
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Minutes
200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 2200 2400
Lact
osa
- 11
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Lact
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Deteccioacuten de leche en polvo en leche UHT
Lactulosafurosinage25
(en leche UHT)
Leche en polvo Lactulosa 50
Ratio lf= 0125Furosina 400
Leche UHT Lactulosa 420
Ratio lf= 3000Furosina 140
90 leche UHT +
10 leche en polvo
Lactulosa 383
Ratio lf= 2307Furosina 166
27
28
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Situaciones de alerta
bull Melamina en productos laacutecteosbull ITX en envases de alimentos infantilesbull Hidrocarburos en aceite de girasolbull Benzo (a) pireno en aceites
Respuesta del laboratorio en
48 horas
Participacioacuten del laboratorio de anaacutelisis
29
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Aacutereas de intereacutes
Obesidad y diabetes
Nutricioacuten infantil
Metabolismo oacuteseo
Enfermedad cardiovascular
Estreacutes oxidativo
Hipertensioacuten
Salud intestinal (inflamacioacuten)
Salud oral
Cribado
HTS de actividad bioloacutegica
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
Identificacioacuten y validacioacuten
Espectrometriacutea de masas y RMN
31
1000 extractos vegetales en un ensayo colorimeacutetrico descreening en placas de 96 Varios extractos cuyo contenido enflavonoides es conocido dieron resultado positivo Mediante eluso de patrones y LC-MS confirmamos la identidad delcompuesto causante del efecto positivo
Libreriacuteas productos naturales (extractos peacuteptidos hellip)
Marcador seleccionado en funcioacuten del objetivo
HT-SCREENING DE ACTIVIDAD BIOLOacuteGICA
32
AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
Fraccioacuten de oligosacaacuteridos aisladapor
bull deslipidacioacuten
bull precipitacioacuten de proteiacutenas
bull GPC en Sephadex G-25
bull colector de fracciones
Separacioacuten y cuantificacioacuten
bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
33
Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
34
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
36
La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
MUESTRAS biopsias de tejidos liacuteneas celulares fluidos bioloacutegicos
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Proteoacutemica de expresioacuten
ESI-APCI
(Q)TOF-MSCHIPMS PMF
Spectrum Mill for MH
MassHunter BioconfirmationMassHunter Profiling
Identificacioacuten y confirmacioacuten de proteiacutenas usando la huella peptiacutedica (PMF)
37
APLICACIOacuteN DE ldquoOacuteMICASrdquo Metaboloacutemica y nutricioacuten
La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
Fluidos Bioloacutegicos
38
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Metaboloacutemica
Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
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200
400
600
800
week 0 week 2 week 4
bu
tyra
te (
mg
L)
Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
39
Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Bioinformaacutetica
Muchas gracias por vuestra atencioacuten
19
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
Residuos de PesticidasResiduos de Antibioacuteticos(sulfonamidas B-lactamas tetraciclinasquinolonas y cloranfenicol)Micotoxinas(aflatoxinas B+G aflatoxina M1 y ocratoxina A)Metales pesados(plomo cadmio mercurio y arseacutenico)Hidrocarburos aromaacuteticos policiacuteclicosDisolventes residuales(MeOH EtOH hexano acetona acetato de etilo)Identificacioacuten de aleacutergenos(gluten lactosa hellip)Patoacutegenos(Salmonella Listeria E Coli B Cereus S AureusC Sakazakii)
20
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
21
S Alimentaria Micotoxinas
22
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
Black cohoshCimicifugae rhizomaMonograph Ndeg 2069HPTLC ndash Dr ReichEUROPEAN PHARMACOPOEIA
COMMISSION
Ensayo colaborativoDeteccioacuten de 5 adulteracioacuten con Cimicifuga foetida C dahurica C heracleifolia o C americana en muestras de Cimicifuga racemosa(Black Cohosh)
23
Identificacioacuten de especies botaacutenicas para suplementos de la dieta
K He et al Journal of Chromatography A 1112 (2006) 241ndash254
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
24
IRD
Perfil normal
Perfil alterado
AUTENTICIDAD Aceites concentrados
25
TRAZABILIDAD Perfil proteico en leche
Tratamientos teacutermicos
bull HCl hasta pH 46bull Reposo 30 minbull Centrifugacioacuten y dilucioacuten de sobrenadante
Determinacioacuten de B-lactoglobulina(proteiacutena de lactosuero)
Determinacioacuten de Furosina(producto reaccioacuten Maillard)
bull Hidroacutelisis aacutecida a 110ordmCbull Filtrar y SPE (c18)bull HPLC - pares ioacutenicos (AcH y KCl)
bullEliminacioacuten de grasas y proteiacutenasbullHPLC en columna ioacutenicabullDeteccioacuten y cuantificacioacuten IR
Determinacioacuten de Lactulosa(isoacutemero de lactosa)
MV
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1000
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Minutes
200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 2200 2400
Lact
osa
- 11
762
Lact
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a -
148
43
26
Deteccioacuten de leche en polvo en leche UHT
Lactulosafurosinage25
(en leche UHT)
Leche en polvo Lactulosa 50
Ratio lf= 0125Furosina 400
Leche UHT Lactulosa 420
Ratio lf= 3000Furosina 140
90 leche UHT +
10 leche en polvo
Lactulosa 383
Ratio lf= 2307Furosina 166
27
28
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Situaciones de alerta
bull Melamina en productos laacutecteosbull ITX en envases de alimentos infantilesbull Hidrocarburos en aceite de girasolbull Benzo (a) pireno en aceites
Respuesta del laboratorio en
48 horas
Participacioacuten del laboratorio de anaacutelisis
29
30
Aacutereas de intereacutes
Obesidad y diabetes
Nutricioacuten infantil
Metabolismo oacuteseo
Enfermedad cardiovascular
Estreacutes oxidativo
Hipertensioacuten
Salud intestinal (inflamacioacuten)
Salud oral
Cribado
HTS de actividad bioloacutegica
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
Identificacioacuten y validacioacuten
Espectrometriacutea de masas y RMN
31
1000 extractos vegetales en un ensayo colorimeacutetrico descreening en placas de 96 Varios extractos cuyo contenido enflavonoides es conocido dieron resultado positivo Mediante eluso de patrones y LC-MS confirmamos la identidad delcompuesto causante del efecto positivo
Libreriacuteas productos naturales (extractos peacuteptidos hellip)
Marcador seleccionado en funcioacuten del objetivo
HT-SCREENING DE ACTIVIDAD BIOLOacuteGICA
32
AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
Fraccioacuten de oligosacaacuteridos aisladapor
bull deslipidacioacuten
bull precipitacioacuten de proteiacutenas
bull GPC en Sephadex G-25
bull colector de fracciones
Separacioacuten y cuantificacioacuten
bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
33
Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
34
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
36
La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
MUESTRAS biopsias de tejidos liacuteneas celulares fluidos bioloacutegicos
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Proteoacutemica de expresioacuten
ESI-APCI
(Q)TOF-MSCHIPMS PMF
Spectrum Mill for MH
MassHunter BioconfirmationMassHunter Profiling
Identificacioacuten y confirmacioacuten de proteiacutenas usando la huella peptiacutedica (PMF)
37
APLICACIOacuteN DE ldquoOacuteMICASrdquo Metaboloacutemica y nutricioacuten
La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
Fluidos Bioloacutegicos
38
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Metaboloacutemica
Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
0
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0
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week 0 week 2 week 4
bu
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Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
39
Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Bioinformaacutetica
Muchas gracias por vuestra atencioacuten
20
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Contaminantes regulados
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S Alimentaria Micotoxinas
22
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
Black cohoshCimicifugae rhizomaMonograph Ndeg 2069HPTLC ndash Dr ReichEUROPEAN PHARMACOPOEIA
COMMISSION
Ensayo colaborativoDeteccioacuten de 5 adulteracioacuten con Cimicifuga foetida C dahurica C heracleifolia o C americana en muestras de Cimicifuga racemosa(Black Cohosh)
23
Identificacioacuten de especies botaacutenicas para suplementos de la dieta
K He et al Journal of Chromatography A 1112 (2006) 241ndash254
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
24
IRD
Perfil normal
Perfil alterado
AUTENTICIDAD Aceites concentrados
25
TRAZABILIDAD Perfil proteico en leche
Tratamientos teacutermicos
bull HCl hasta pH 46bull Reposo 30 minbull Centrifugacioacuten y dilucioacuten de sobrenadante
Determinacioacuten de B-lactoglobulina(proteiacutena de lactosuero)
Determinacioacuten de Furosina(producto reaccioacuten Maillard)
bull Hidroacutelisis aacutecida a 110ordmCbull Filtrar y SPE (c18)bull HPLC - pares ioacutenicos (AcH y KCl)
bullEliminacioacuten de grasas y proteiacutenasbullHPLC en columna ioacutenicabullDeteccioacuten y cuantificacioacuten IR
Determinacioacuten de Lactulosa(isoacutemero de lactosa)
MV
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200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 2200 2400
Lact
osa
- 11
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a -
148
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Deteccioacuten de leche en polvo en leche UHT
Lactulosafurosinage25
(en leche UHT)
Leche en polvo Lactulosa 50
Ratio lf= 0125Furosina 400
Leche UHT Lactulosa 420
Ratio lf= 3000Furosina 140
90 leche UHT +
10 leche en polvo
Lactulosa 383
Ratio lf= 2307Furosina 166
27
28
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Situaciones de alerta
bull Melamina en productos laacutecteosbull ITX en envases de alimentos infantilesbull Hidrocarburos en aceite de girasolbull Benzo (a) pireno en aceites
Respuesta del laboratorio en
48 horas
Participacioacuten del laboratorio de anaacutelisis
29
30
Aacutereas de intereacutes
Obesidad y diabetes
Nutricioacuten infantil
Metabolismo oacuteseo
Enfermedad cardiovascular
Estreacutes oxidativo
Hipertensioacuten
Salud intestinal (inflamacioacuten)
Salud oral
Cribado
HTS de actividad bioloacutegica
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
Identificacioacuten y validacioacuten
Espectrometriacutea de masas y RMN
31
1000 extractos vegetales en un ensayo colorimeacutetrico descreening en placas de 96 Varios extractos cuyo contenido enflavonoides es conocido dieron resultado positivo Mediante eluso de patrones y LC-MS confirmamos la identidad delcompuesto causante del efecto positivo
Libreriacuteas productos naturales (extractos peacuteptidos hellip)
Marcador seleccionado en funcioacuten del objetivo
HT-SCREENING DE ACTIVIDAD BIOLOacuteGICA
32
AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
Fraccioacuten de oligosacaacuteridos aisladapor
bull deslipidacioacuten
bull precipitacioacuten de proteiacutenas
bull GPC en Sephadex G-25
bull colector de fracciones
Separacioacuten y cuantificacioacuten
bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
33
Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
34
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
36
La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
MUESTRAS biopsias de tejidos liacuteneas celulares fluidos bioloacutegicos
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Proteoacutemica de expresioacuten
ESI-APCI
(Q)TOF-MSCHIPMS PMF
Spectrum Mill for MH
MassHunter BioconfirmationMassHunter Profiling
Identificacioacuten y confirmacioacuten de proteiacutenas usando la huella peptiacutedica (PMF)
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APLICACIOacuteN DE ldquoOacuteMICASrdquo Metaboloacutemica y nutricioacuten
La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
Fluidos Bioloacutegicos
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APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Metaboloacutemica
Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
0
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Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
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Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Bioinformaacutetica
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AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
Black cohoshCimicifugae rhizomaMonograph Ndeg 2069HPTLC ndash Dr ReichEUROPEAN PHARMACOPOEIA
COMMISSION
Ensayo colaborativoDeteccioacuten de 5 adulteracioacuten con Cimicifuga foetida C dahurica C heracleifolia o C americana en muestras de Cimicifuga racemosa(Black Cohosh)
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Identificacioacuten de especies botaacutenicas para suplementos de la dieta
K He et al Journal of Chromatography A 1112 (2006) 241ndash254
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
24
IRD
Perfil normal
Perfil alterado
AUTENTICIDAD Aceites concentrados
25
TRAZABILIDAD Perfil proteico en leche
Tratamientos teacutermicos
bull HCl hasta pH 46bull Reposo 30 minbull Centrifugacioacuten y dilucioacuten de sobrenadante
Determinacioacuten de B-lactoglobulina(proteiacutena de lactosuero)
Determinacioacuten de Furosina(producto reaccioacuten Maillard)
bull Hidroacutelisis aacutecida a 110ordmCbull Filtrar y SPE (c18)bull HPLC - pares ioacutenicos (AcH y KCl)
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Determinacioacuten de Lactulosa(isoacutemero de lactosa)
MV
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Minutes
200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 2200 2400
Lact
osa
- 11
762
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Deteccioacuten de leche en polvo en leche UHT
Lactulosafurosinage25
(en leche UHT)
Leche en polvo Lactulosa 50
Ratio lf= 0125Furosina 400
Leche UHT Lactulosa 420
Ratio lf= 3000Furosina 140
90 leche UHT +
10 leche en polvo
Lactulosa 383
Ratio lf= 2307Furosina 166
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Anaacutelisis de seguridad alimentaria Situaciones de alerta
bull Melamina en productos laacutecteosbull ITX en envases de alimentos infantilesbull Hidrocarburos en aceite de girasolbull Benzo (a) pireno en aceites
Respuesta del laboratorio en
48 horas
Participacioacuten del laboratorio de anaacutelisis
29
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Aacutereas de intereacutes
Obesidad y diabetes
Nutricioacuten infantil
Metabolismo oacuteseo
Enfermedad cardiovascular
Estreacutes oxidativo
Hipertensioacuten
Salud intestinal (inflamacioacuten)
Salud oral
Cribado
HTS de actividad bioloacutegica
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
Identificacioacuten y validacioacuten
Espectrometriacutea de masas y RMN
31
1000 extractos vegetales en un ensayo colorimeacutetrico descreening en placas de 96 Varios extractos cuyo contenido enflavonoides es conocido dieron resultado positivo Mediante eluso de patrones y LC-MS confirmamos la identidad delcompuesto causante del efecto positivo
Libreriacuteas productos naturales (extractos peacuteptidos hellip)
Marcador seleccionado en funcioacuten del objetivo
HT-SCREENING DE ACTIVIDAD BIOLOacuteGICA
32
AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
Fraccioacuten de oligosacaacuteridos aisladapor
bull deslipidacioacuten
bull precipitacioacuten de proteiacutenas
bull GPC en Sephadex G-25
bull colector de fracciones
Separacioacuten y cuantificacioacuten
bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
33
Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
34
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
36
La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
MUESTRAS biopsias de tejidos liacuteneas celulares fluidos bioloacutegicos
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Proteoacutemica de expresioacuten
ESI-APCI
(Q)TOF-MSCHIPMS PMF
Spectrum Mill for MH
MassHunter BioconfirmationMassHunter Profiling
Identificacioacuten y confirmacioacuten de proteiacutenas usando la huella peptiacutedica (PMF)
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APLICACIOacuteN DE ldquoOacuteMICASrdquo Metaboloacutemica y nutricioacuten
La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
Fluidos Bioloacutegicos
38
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Metaboloacutemica
Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
0
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week 0 week 2 week 4
bu
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week 0 week 2 week 4
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Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
39
Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Bioinformaacutetica
Muchas gracias por vuestra atencioacuten
22
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
Black cohoshCimicifugae rhizomaMonograph Ndeg 2069HPTLC ndash Dr ReichEUROPEAN PHARMACOPOEIA
COMMISSION
Ensayo colaborativoDeteccioacuten de 5 adulteracioacuten con Cimicifuga foetida C dahurica C heracleifolia o C americana en muestras de Cimicifuga racemosa(Black Cohosh)
23
Identificacioacuten de especies botaacutenicas para suplementos de la dieta
K He et al Journal of Chromatography A 1112 (2006) 241ndash254
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
24
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Perfil normal
Perfil alterado
AUTENTICIDAD Aceites concentrados
25
TRAZABILIDAD Perfil proteico en leche
Tratamientos teacutermicos
bull HCl hasta pH 46bull Reposo 30 minbull Centrifugacioacuten y dilucioacuten de sobrenadante
Determinacioacuten de B-lactoglobulina(proteiacutena de lactosuero)
Determinacioacuten de Furosina(producto reaccioacuten Maillard)
bull Hidroacutelisis aacutecida a 110ordmCbull Filtrar y SPE (c18)bull HPLC - pares ioacutenicos (AcH y KCl)
bullEliminacioacuten de grasas y proteiacutenasbullHPLC en columna ioacutenicabullDeteccioacuten y cuantificacioacuten IR
Determinacioacuten de Lactulosa(isoacutemero de lactosa)
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Minutes
200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 2200 2400
Lact
osa
- 11
762
Lact
ulos
a -
148
43
26
Deteccioacuten de leche en polvo en leche UHT
Lactulosafurosinage25
(en leche UHT)
Leche en polvo Lactulosa 50
Ratio lf= 0125Furosina 400
Leche UHT Lactulosa 420
Ratio lf= 3000Furosina 140
90 leche UHT +
10 leche en polvo
Lactulosa 383
Ratio lf= 2307Furosina 166
27
28
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Situaciones de alerta
bull Melamina en productos laacutecteosbull ITX en envases de alimentos infantilesbull Hidrocarburos en aceite de girasolbull Benzo (a) pireno en aceites
Respuesta del laboratorio en
48 horas
Participacioacuten del laboratorio de anaacutelisis
29
30
Aacutereas de intereacutes
Obesidad y diabetes
Nutricioacuten infantil
Metabolismo oacuteseo
Enfermedad cardiovascular
Estreacutes oxidativo
Hipertensioacuten
Salud intestinal (inflamacioacuten)
Salud oral
Cribado
HTS de actividad bioloacutegica
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
Identificacioacuten y validacioacuten
Espectrometriacutea de masas y RMN
31
1000 extractos vegetales en un ensayo colorimeacutetrico descreening en placas de 96 Varios extractos cuyo contenido enflavonoides es conocido dieron resultado positivo Mediante eluso de patrones y LC-MS confirmamos la identidad delcompuesto causante del efecto positivo
Libreriacuteas productos naturales (extractos peacuteptidos hellip)
Marcador seleccionado en funcioacuten del objetivo
HT-SCREENING DE ACTIVIDAD BIOLOacuteGICA
32
AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
Fraccioacuten de oligosacaacuteridos aisladapor
bull deslipidacioacuten
bull precipitacioacuten de proteiacutenas
bull GPC en Sephadex G-25
bull colector de fracciones
Separacioacuten y cuantificacioacuten
bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
33
Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
34
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
36
La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
MUESTRAS biopsias de tejidos liacuteneas celulares fluidos bioloacutegicos
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Proteoacutemica de expresioacuten
ESI-APCI
(Q)TOF-MSCHIPMS PMF
Spectrum Mill for MH
MassHunter BioconfirmationMassHunter Profiling
Identificacioacuten y confirmacioacuten de proteiacutenas usando la huella peptiacutedica (PMF)
37
APLICACIOacuteN DE ldquoOacuteMICASrdquo Metaboloacutemica y nutricioacuten
La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
Fluidos Bioloacutegicos
38
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Metaboloacutemica
Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
0
200
400
600
800
week 0 week 2 week 4
bu
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te (
mg
L)
0
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week 0 week 2 week 4
bu
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te (
mg
L)
Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
39
Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Bioinformaacutetica
Muchas gracias por vuestra atencioacuten
23
Identificacioacuten de especies botaacutenicas para suplementos de la dieta
K He et al Journal of Chromatography A 1112 (2006) 241ndash254
AUTENTICIDAD Identificacioacuten de especies botaacutenicas
24
IRD
Perfil normal
Perfil alterado
AUTENTICIDAD Aceites concentrados
25
TRAZABILIDAD Perfil proteico en leche
Tratamientos teacutermicos
bull HCl hasta pH 46bull Reposo 30 minbull Centrifugacioacuten y dilucioacuten de sobrenadante
Determinacioacuten de B-lactoglobulina(proteiacutena de lactosuero)
Determinacioacuten de Furosina(producto reaccioacuten Maillard)
bull Hidroacutelisis aacutecida a 110ordmCbull Filtrar y SPE (c18)bull HPLC - pares ioacutenicos (AcH y KCl)
bullEliminacioacuten de grasas y proteiacutenasbullHPLC en columna ioacutenicabullDeteccioacuten y cuantificacioacuten IR
Determinacioacuten de Lactulosa(isoacutemero de lactosa)
MV
000
1000
2000
3000
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5000
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10000
Minutes
200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 2200 2400
Lact
osa
- 11
762
Lact
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a -
148
43
26
Deteccioacuten de leche en polvo en leche UHT
Lactulosafurosinage25
(en leche UHT)
Leche en polvo Lactulosa 50
Ratio lf= 0125Furosina 400
Leche UHT Lactulosa 420
Ratio lf= 3000Furosina 140
90 leche UHT +
10 leche en polvo
Lactulosa 383
Ratio lf= 2307Furosina 166
27
28
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Situaciones de alerta
bull Melamina en productos laacutecteosbull ITX en envases de alimentos infantilesbull Hidrocarburos en aceite de girasolbull Benzo (a) pireno en aceites
Respuesta del laboratorio en
48 horas
Participacioacuten del laboratorio de anaacutelisis
29
30
Aacutereas de intereacutes
Obesidad y diabetes
Nutricioacuten infantil
Metabolismo oacuteseo
Enfermedad cardiovascular
Estreacutes oxidativo
Hipertensioacuten
Salud intestinal (inflamacioacuten)
Salud oral
Cribado
HTS de actividad bioloacutegica
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
Identificacioacuten y validacioacuten
Espectrometriacutea de masas y RMN
31
1000 extractos vegetales en un ensayo colorimeacutetrico descreening en placas de 96 Varios extractos cuyo contenido enflavonoides es conocido dieron resultado positivo Mediante eluso de patrones y LC-MS confirmamos la identidad delcompuesto causante del efecto positivo
Libreriacuteas productos naturales (extractos peacuteptidos hellip)
Marcador seleccionado en funcioacuten del objetivo
HT-SCREENING DE ACTIVIDAD BIOLOacuteGICA
32
AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
Fraccioacuten de oligosacaacuteridos aisladapor
bull deslipidacioacuten
bull precipitacioacuten de proteiacutenas
bull GPC en Sephadex G-25
bull colector de fracciones
Separacioacuten y cuantificacioacuten
bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
33
Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
34
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
36
La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
MUESTRAS biopsias de tejidos liacuteneas celulares fluidos bioloacutegicos
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Proteoacutemica de expresioacuten
ESI-APCI
(Q)TOF-MSCHIPMS PMF
Spectrum Mill for MH
MassHunter BioconfirmationMassHunter Profiling
Identificacioacuten y confirmacioacuten de proteiacutenas usando la huella peptiacutedica (PMF)
37
APLICACIOacuteN DE ldquoOacuteMICASrdquo Metaboloacutemica y nutricioacuten
La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
Fluidos Bioloacutegicos
38
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Metaboloacutemica
Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
0
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Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
39
Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Bioinformaacutetica
Muchas gracias por vuestra atencioacuten
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IRD
Perfil normal
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AUTENTICIDAD Aceites concentrados
25
TRAZABILIDAD Perfil proteico en leche
Tratamientos teacutermicos
bull HCl hasta pH 46bull Reposo 30 minbull Centrifugacioacuten y dilucioacuten de sobrenadante
Determinacioacuten de B-lactoglobulina(proteiacutena de lactosuero)
Determinacioacuten de Furosina(producto reaccioacuten Maillard)
bull Hidroacutelisis aacutecida a 110ordmCbull Filtrar y SPE (c18)bull HPLC - pares ioacutenicos (AcH y KCl)
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Determinacioacuten de Lactulosa(isoacutemero de lactosa)
MV
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Lactulosafurosinage25
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Leche en polvo Lactulosa 50
Ratio lf= 0125Furosina 400
Leche UHT Lactulosa 420
Ratio lf= 3000Furosina 140
90 leche UHT +
10 leche en polvo
Lactulosa 383
Ratio lf= 2307Furosina 166
27
28
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Situaciones de alerta
bull Melamina en productos laacutecteosbull ITX en envases de alimentos infantilesbull Hidrocarburos en aceite de girasolbull Benzo (a) pireno en aceites
Respuesta del laboratorio en
48 horas
Participacioacuten del laboratorio de anaacutelisis
29
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Aacutereas de intereacutes
Obesidad y diabetes
Nutricioacuten infantil
Metabolismo oacuteseo
Enfermedad cardiovascular
Estreacutes oxidativo
Hipertensioacuten
Salud intestinal (inflamacioacuten)
Salud oral
Cribado
HTS de actividad bioloacutegica
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
Identificacioacuten y validacioacuten
Espectrometriacutea de masas y RMN
31
1000 extractos vegetales en un ensayo colorimeacutetrico descreening en placas de 96 Varios extractos cuyo contenido enflavonoides es conocido dieron resultado positivo Mediante eluso de patrones y LC-MS confirmamos la identidad delcompuesto causante del efecto positivo
Libreriacuteas productos naturales (extractos peacuteptidos hellip)
Marcador seleccionado en funcioacuten del objetivo
HT-SCREENING DE ACTIVIDAD BIOLOacuteGICA
32
AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
Fraccioacuten de oligosacaacuteridos aisladapor
bull deslipidacioacuten
bull precipitacioacuten de proteiacutenas
bull GPC en Sephadex G-25
bull colector de fracciones
Separacioacuten y cuantificacioacuten
bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
33
Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
34
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
36
La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
MUESTRAS biopsias de tejidos liacuteneas celulares fluidos bioloacutegicos
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Proteoacutemica de expresioacuten
ESI-APCI
(Q)TOF-MSCHIPMS PMF
Spectrum Mill for MH
MassHunter BioconfirmationMassHunter Profiling
Identificacioacuten y confirmacioacuten de proteiacutenas usando la huella peptiacutedica (PMF)
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APLICACIOacuteN DE ldquoOacuteMICASrdquo Metaboloacutemica y nutricioacuten
La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
Fluidos Bioloacutegicos
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APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Metaboloacutemica
Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
0
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week 0 week 2 week 4
bu
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0
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week 0 week 2 week 4
bu
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Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
39
Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Bioinformaacutetica
Muchas gracias por vuestra atencioacuten
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TRAZABILIDAD Perfil proteico en leche
Tratamientos teacutermicos
bull HCl hasta pH 46bull Reposo 30 minbull Centrifugacioacuten y dilucioacuten de sobrenadante
Determinacioacuten de B-lactoglobulina(proteiacutena de lactosuero)
Determinacioacuten de Furosina(producto reaccioacuten Maillard)
bull Hidroacutelisis aacutecida a 110ordmCbull Filtrar y SPE (c18)bull HPLC - pares ioacutenicos (AcH y KCl)
bullEliminacioacuten de grasas y proteiacutenasbullHPLC en columna ioacutenicabullDeteccioacuten y cuantificacioacuten IR
Determinacioacuten de Lactulosa(isoacutemero de lactosa)
MV
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Minutes
200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 2200 2400
Lact
osa
- 11
762
Lact
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Deteccioacuten de leche en polvo en leche UHT
Lactulosafurosinage25
(en leche UHT)
Leche en polvo Lactulosa 50
Ratio lf= 0125Furosina 400
Leche UHT Lactulosa 420
Ratio lf= 3000Furosina 140
90 leche UHT +
10 leche en polvo
Lactulosa 383
Ratio lf= 2307Furosina 166
27
28
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Situaciones de alerta
bull Melamina en productos laacutecteosbull ITX en envases de alimentos infantilesbull Hidrocarburos en aceite de girasolbull Benzo (a) pireno en aceites
Respuesta del laboratorio en
48 horas
Participacioacuten del laboratorio de anaacutelisis
29
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Aacutereas de intereacutes
Obesidad y diabetes
Nutricioacuten infantil
Metabolismo oacuteseo
Enfermedad cardiovascular
Estreacutes oxidativo
Hipertensioacuten
Salud intestinal (inflamacioacuten)
Salud oral
Cribado
HTS de actividad bioloacutegica
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
Identificacioacuten y validacioacuten
Espectrometriacutea de masas y RMN
31
1000 extractos vegetales en un ensayo colorimeacutetrico descreening en placas de 96 Varios extractos cuyo contenido enflavonoides es conocido dieron resultado positivo Mediante eluso de patrones y LC-MS confirmamos la identidad delcompuesto causante del efecto positivo
Libreriacuteas productos naturales (extractos peacuteptidos hellip)
Marcador seleccionado en funcioacuten del objetivo
HT-SCREENING DE ACTIVIDAD BIOLOacuteGICA
32
AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
Fraccioacuten de oligosacaacuteridos aisladapor
bull deslipidacioacuten
bull precipitacioacuten de proteiacutenas
bull GPC en Sephadex G-25
bull colector de fracciones
Separacioacuten y cuantificacioacuten
bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
33
Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
34
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
36
La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
MUESTRAS biopsias de tejidos liacuteneas celulares fluidos bioloacutegicos
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Proteoacutemica de expresioacuten
ESI-APCI
(Q)TOF-MSCHIPMS PMF
Spectrum Mill for MH
MassHunter BioconfirmationMassHunter Profiling
Identificacioacuten y confirmacioacuten de proteiacutenas usando la huella peptiacutedica (PMF)
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APLICACIOacuteN DE ldquoOacuteMICASrdquo Metaboloacutemica y nutricioacuten
La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
Fluidos Bioloacutegicos
38
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Metaboloacutemica
Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
0
200
400
600
800
week 0 week 2 week 4
bu
tyra
te (
mg
L)
0
200
400
600
800
week 0 week 2 week 4
bu
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te (
mg
L)
Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
39
Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Bioinformaacutetica
Muchas gracias por vuestra atencioacuten
Tratamientos teacutermicos
bull HCl hasta pH 46bull Reposo 30 minbull Centrifugacioacuten y dilucioacuten de sobrenadante
Determinacioacuten de B-lactoglobulina(proteiacutena de lactosuero)
Determinacioacuten de Furosina(producto reaccioacuten Maillard)
bull Hidroacutelisis aacutecida a 110ordmCbull Filtrar y SPE (c18)bull HPLC - pares ioacutenicos (AcH y KCl)
bullEliminacioacuten de grasas y proteiacutenasbullHPLC en columna ioacutenicabullDeteccioacuten y cuantificacioacuten IR
Determinacioacuten de Lactulosa(isoacutemero de lactosa)
MV
000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
Minutes
200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 2200 2400
Lact
osa
- 11
762
Lact
ulos
a -
148
43
26
Deteccioacuten de leche en polvo en leche UHT
Lactulosafurosinage25
(en leche UHT)
Leche en polvo Lactulosa 50
Ratio lf= 0125Furosina 400
Leche UHT Lactulosa 420
Ratio lf= 3000Furosina 140
90 leche UHT +
10 leche en polvo
Lactulosa 383
Ratio lf= 2307Furosina 166
27
28
Anaacutelisis de seguridad alimentaria Situaciones de alerta
bull Melamina en productos laacutecteosbull ITX en envases de alimentos infantilesbull Hidrocarburos en aceite de girasolbull Benzo (a) pireno en aceites
Respuesta del laboratorio en
48 horas
Participacioacuten del laboratorio de anaacutelisis
29
30
Aacutereas de intereacutes
Obesidad y diabetes
Nutricioacuten infantil
Metabolismo oacuteseo
Enfermedad cardiovascular
Estreacutes oxidativo
Hipertensioacuten
Salud intestinal (inflamacioacuten)
Salud oral
Cribado
HTS de actividad bioloacutegica
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
Identificacioacuten y validacioacuten
Espectrometriacutea de masas y RMN
31
1000 extractos vegetales en un ensayo colorimeacutetrico descreening en placas de 96 Varios extractos cuyo contenido enflavonoides es conocido dieron resultado positivo Mediante eluso de patrones y LC-MS confirmamos la identidad delcompuesto causante del efecto positivo
Libreriacuteas productos naturales (extractos peacuteptidos hellip)
Marcador seleccionado en funcioacuten del objetivo
HT-SCREENING DE ACTIVIDAD BIOLOacuteGICA
32
AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
Fraccioacuten de oligosacaacuteridos aisladapor
bull deslipidacioacuten
bull precipitacioacuten de proteiacutenas
bull GPC en Sephadex G-25
bull colector de fracciones
Separacioacuten y cuantificacioacuten
bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
33
Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
34
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
36
La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
MUESTRAS biopsias de tejidos liacuteneas celulares fluidos bioloacutegicos
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Proteoacutemica de expresioacuten
ESI-APCI
(Q)TOF-MSCHIPMS PMF
Spectrum Mill for MH
MassHunter BioconfirmationMassHunter Profiling
Identificacioacuten y confirmacioacuten de proteiacutenas usando la huella peptiacutedica (PMF)
37
APLICACIOacuteN DE ldquoOacuteMICASrdquo Metaboloacutemica y nutricioacuten
La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
Fluidos Bioloacutegicos
38
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Metaboloacutemica
Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
0
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week 0 week 2 week 4
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week 0 week 2 week 4
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Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
39
Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Bioinformaacutetica
Muchas gracias por vuestra atencioacuten
Deteccioacuten de leche en polvo en leche UHT
Lactulosafurosinage25
(en leche UHT)
Leche en polvo Lactulosa 50
Ratio lf= 0125Furosina 400
Leche UHT Lactulosa 420
Ratio lf= 3000Furosina 140
90 leche UHT +
10 leche en polvo
Lactulosa 383
Ratio lf= 2307Furosina 166
27
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Anaacutelisis de seguridad alimentaria Situaciones de alerta
bull Melamina en productos laacutecteosbull ITX en envases de alimentos infantilesbull Hidrocarburos en aceite de girasolbull Benzo (a) pireno en aceites
Respuesta del laboratorio en
48 horas
Participacioacuten del laboratorio de anaacutelisis
29
30
Aacutereas de intereacutes
Obesidad y diabetes
Nutricioacuten infantil
Metabolismo oacuteseo
Enfermedad cardiovascular
Estreacutes oxidativo
Hipertensioacuten
Salud intestinal (inflamacioacuten)
Salud oral
Cribado
HTS de actividad bioloacutegica
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
Identificacioacuten y validacioacuten
Espectrometriacutea de masas y RMN
31
1000 extractos vegetales en un ensayo colorimeacutetrico descreening en placas de 96 Varios extractos cuyo contenido enflavonoides es conocido dieron resultado positivo Mediante eluso de patrones y LC-MS confirmamos la identidad delcompuesto causante del efecto positivo
Libreriacuteas productos naturales (extractos peacuteptidos hellip)
Marcador seleccionado en funcioacuten del objetivo
HT-SCREENING DE ACTIVIDAD BIOLOacuteGICA
32
AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
Fraccioacuten de oligosacaacuteridos aisladapor
bull deslipidacioacuten
bull precipitacioacuten de proteiacutenas
bull GPC en Sephadex G-25
bull colector de fracciones
Separacioacuten y cuantificacioacuten
bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
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Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
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APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
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La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
MUESTRAS biopsias de tejidos liacuteneas celulares fluidos bioloacutegicos
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Proteoacutemica de expresioacuten
ESI-APCI
(Q)TOF-MSCHIPMS PMF
Spectrum Mill for MH
MassHunter BioconfirmationMassHunter Profiling
Identificacioacuten y confirmacioacuten de proteiacutenas usando la huella peptiacutedica (PMF)
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APLICACIOacuteN DE ldquoOacuteMICASrdquo Metaboloacutemica y nutricioacuten
La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
Fluidos Bioloacutegicos
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APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Metaboloacutemica
Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
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Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
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Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
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Anaacutelisis de seguridad alimentaria Situaciones de alerta
bull Melamina en productos laacutecteosbull ITX en envases de alimentos infantilesbull Hidrocarburos en aceite de girasolbull Benzo (a) pireno en aceites
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48 horas
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Nutricioacuten infantil
Metabolismo oacuteseo
Enfermedad cardiovascular
Estreacutes oxidativo
Hipertensioacuten
Salud intestinal (inflamacioacuten)
Salud oral
Cribado
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Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
Identificacioacuten y validacioacuten
Espectrometriacutea de masas y RMN
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1000 extractos vegetales en un ensayo colorimeacutetrico descreening en placas de 96 Varios extractos cuyo contenido enflavonoides es conocido dieron resultado positivo Mediante eluso de patrones y LC-MS confirmamos la identidad delcompuesto causante del efecto positivo
Libreriacuteas productos naturales (extractos peacuteptidos hellip)
Marcador seleccionado en funcioacuten del objetivo
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AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
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bull deslipidacioacuten
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bull colector de fracciones
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bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
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Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
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APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
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Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
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La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
MUESTRAS biopsias de tejidos liacuteneas celulares fluidos bioloacutegicos
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ESI-APCI
(Q)TOF-MSCHIPMS PMF
Spectrum Mill for MH
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La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
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Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
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week 0 week 2 week 4
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week 0 week 2 week 4
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Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
39
Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Bioinformaacutetica
Muchas gracias por vuestra atencioacuten
Participacioacuten del laboratorio de anaacutelisis
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Obesidad y diabetes
Nutricioacuten infantil
Metabolismo oacuteseo
Enfermedad cardiovascular
Estreacutes oxidativo
Hipertensioacuten
Salud intestinal (inflamacioacuten)
Salud oral
Cribado
HTS de actividad bioloacutegica
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
Identificacioacuten y validacioacuten
Espectrometriacutea de masas y RMN
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1000 extractos vegetales en un ensayo colorimeacutetrico descreening en placas de 96 Varios extractos cuyo contenido enflavonoides es conocido dieron resultado positivo Mediante eluso de patrones y LC-MS confirmamos la identidad delcompuesto causante del efecto positivo
Libreriacuteas productos naturales (extractos peacuteptidos hellip)
Marcador seleccionado en funcioacuten del objetivo
HT-SCREENING DE ACTIVIDAD BIOLOacuteGICA
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AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
Fraccioacuten de oligosacaacuteridos aisladapor
bull deslipidacioacuten
bull precipitacioacuten de proteiacutenas
bull GPC en Sephadex G-25
bull colector de fracciones
Separacioacuten y cuantificacioacuten
bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
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Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
34
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
36
La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
MUESTRAS biopsias de tejidos liacuteneas celulares fluidos bioloacutegicos
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Proteoacutemica de expresioacuten
ESI-APCI
(Q)TOF-MSCHIPMS PMF
Spectrum Mill for MH
MassHunter BioconfirmationMassHunter Profiling
Identificacioacuten y confirmacioacuten de proteiacutenas usando la huella peptiacutedica (PMF)
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APLICACIOacuteN DE ldquoOacuteMICASrdquo Metaboloacutemica y nutricioacuten
La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
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Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
0
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Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
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Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Bioinformaacutetica
Muchas gracias por vuestra atencioacuten
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Aacutereas de intereacutes
Obesidad y diabetes
Nutricioacuten infantil
Metabolismo oacuteseo
Enfermedad cardiovascular
Estreacutes oxidativo
Hipertensioacuten
Salud intestinal (inflamacioacuten)
Salud oral
Cribado
HTS de actividad bioloacutegica
Aislamiento y purificacioacuten
Cromatografiacutea preparativa
Identificacioacuten y validacioacuten
Espectrometriacutea de masas y RMN
31
1000 extractos vegetales en un ensayo colorimeacutetrico descreening en placas de 96 Varios extractos cuyo contenido enflavonoides es conocido dieron resultado positivo Mediante eluso de patrones y LC-MS confirmamos la identidad delcompuesto causante del efecto positivo
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AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
Fraccioacuten de oligosacaacuteridos aisladapor
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Separacioacuten y cuantificacioacuten
bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
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Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
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Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
34
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
36
La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
MUESTRAS biopsias de tejidos liacuteneas celulares fluidos bioloacutegicos
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Proteoacutemica de expresioacuten
ESI-APCI
(Q)TOF-MSCHIPMS PMF
Spectrum Mill for MH
MassHunter BioconfirmationMassHunter Profiling
Identificacioacuten y confirmacioacuten de proteiacutenas usando la huella peptiacutedica (PMF)
37
APLICACIOacuteN DE ldquoOacuteMICASrdquo Metaboloacutemica y nutricioacuten
La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
Fluidos Bioloacutegicos
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APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Metaboloacutemica
Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
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week 0 week 2 week 4
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Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
39
Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Bioinformaacutetica
Muchas gracias por vuestra atencioacuten
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1000 extractos vegetales en un ensayo colorimeacutetrico descreening en placas de 96 Varios extractos cuyo contenido enflavonoides es conocido dieron resultado positivo Mediante eluso de patrones y LC-MS confirmamos la identidad delcompuesto causante del efecto positivo
Libreriacuteas productos naturales (extractos peacuteptidos hellip)
Marcador seleccionado en funcioacuten del objetivo
HT-SCREENING DE ACTIVIDAD BIOLOacuteGICA
32
AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
Fraccioacuten de oligosacaacuteridos aisladapor
bull deslipidacioacuten
bull precipitacioacuten de proteiacutenas
bull GPC en Sephadex G-25
bull colector de fracciones
Separacioacuten y cuantificacioacuten
bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
33
Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
34
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
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La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
MUESTRAS biopsias de tejidos liacuteneas celulares fluidos bioloacutegicos
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Proteoacutemica de expresioacuten
ESI-APCI
(Q)TOF-MSCHIPMS PMF
Spectrum Mill for MH
MassHunter BioconfirmationMassHunter Profiling
Identificacioacuten y confirmacioacuten de proteiacutenas usando la huella peptiacutedica (PMF)
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APLICACIOacuteN DE ldquoOacuteMICASrdquo Metaboloacutemica y nutricioacuten
La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
Fluidos Bioloacutegicos
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APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Metaboloacutemica
Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
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Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
39
Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Bioinformaacutetica
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AISLAMIENTO PURIFICACIOacuteN e IDENTIFICACIOacuteN Cromatografiacutea preparativa
Anaacutelisis de peacuteptidos bioactivos yoligosacaacuteridos en leche
Fraccioacuten de oligosacaacuteridos aisladapor
bull deslipidacioacuten
bull precipitacioacuten de proteiacutenas
bull GPC en Sephadex G-25
bull colector de fracciones
Separacioacuten y cuantificacioacuten
bullCromatografiacutea de intercambioanioacutenico con deteccioacuten amperomeacutetricapulsada (HPAEC-PAD)
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Estudios ldquoIn Vitrordquo e ldquoIn Vivordquo
Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
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Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
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La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
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Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
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imaacutegenes
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Reacciones quiacutemicas (ensayos de antioxidantes ORAC
ABTS etc)
Ensayos enzimaacuteticos (lipasas amilasas etc)
Liacuteneas celulares (enterocitos macroacutefagos fibroblastos
etchellip)
Ensayos microbioloacutegicos actividad antibacteriana
resistencia a antibioacuteticos actividad prebioacutetica etc
Modelos animales tolerancia y toxicidad modelos de
obesidad modelos de hipertensioacuten modelos de IBD
alergias etchellip
In vitro
Reacciones (bio)quiacutemicasLiacuteneas celulares
In vivo
Tecnologiacuteas basadas en ldquoOacutemicasrdquo
Validacioacuten pre-cliacutenica de compuestos funcionales
34
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Genoacutemica de expresioacuten
Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
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La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
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La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
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Determinacioacuten de aacutecidos grasos de cadena corta en heces (butiacuterico propioacutenico foacutermico y aceacutetico)
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Los compuestos con actividad bioloacutegica inducen cambios caracteriacutesticos en la expresioacuten de los genes
Las muestras de cada tratamiento (dieta) se compararaacuten individualmente con las muestras de la dieta control
35
Titulo experimento Efecto aceites w-3 en ratones balbc hembras (20 g)Oacutergano-tejido HiacutegadoNuacutemero experimento GEN00104Nuacutemero de muestras 5 replicas grupos 3 y 4 3 replicas grupos 1 y 2
Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
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La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
PAPEL CENTRAL DE LAS PROTEINAS EN LA NUTRICIOacuteNTransportadores (absorcioacuten intestinal distribucioacuten y transporte en sangre) Enzimas(metabolismo en tejidos) Proteiacutenas de intercambio (excrecioacuten en el tuacutebulo renal)
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La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
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bullDos estrategias generales para explorar datos
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Grupos(10 animales por grupo)
GRUPO 1 (Mantequilla)GRUPO 2 (Mantequilla +10 w-3 alto EPA)GRUPO 3 (Girasol)GRUPO 4 (Girasol +10 w-3 alto EPA)
Objetivos estudio
Analizar los efectos de la dietas ricas engrasas saturadas y el posible efectobeneficioso de los aceites w-3 en ratones
Se extraeraacute hiacutegado hipocampo sangrebazo corazoacuten y mucosa intestinal (Intestinodelgado)
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La proteoacutemica trata del estudio del conjunto de proteiacutenas expresadas por un genoma en un momento determinado ybajo determinadas condiciones ambientales
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imaacutegenes
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Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
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datos
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La metaboloacutemica es el anaacutelisis comparativo de los metabolitos encontrados en conjuntos de muestras bioloacutegicassimilares Los metabolitos son los intermediarios y los productos del metabolismo y actuacutean comobiomarcadores (enfermedad toxicologiacutea nutricioacutenhellip)
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L)
Determinacioacuten de Homocisteiacutena en plasma(indicador de riesgo cardiovascular)
Determinacioacuten de Glutatioacuten y γ-GluCis celular(estreacutes oxidativo)
39
Anaacutelisis de
imaacutegenes
Data
mining
EstadiacutesticaBases de
datos
bullDos estrategias generales para explorar datos
bull Ensayos de hipoacutetesis
Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
APLICACIOacuteN DE OacuteMICAS Bioinformaacutetica
Muchas gracias por vuestra atencioacuten
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Induccioacuten o perturbacioacuten de un proceso bioloacutegico lleva a resultados previstos con anterioridad (aunque a menudo puede revelar nuevos fenoacutemenos)
bull Descubrimiento
Anaacutelisis exploratorio de los datos Los datos lsquohablan por siacute mismosrsquo despueacutes de un procedimiento estadiacutestico o de visualizacioacuten
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