leishmaiasis ingles 8

7/28/2019 Leishmaiasis Ingles 8

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I N T R A D E R M A L T E S T I N A M E R I C A N L E I S H M A N I A S I S W I T H AP O L Y S A C C H A R I D E F R A C T I O N I S O L A T E D F R O ML E L S H M A N I A B R A S I L L N 8 I 8 *

T A N C R E D O A . F I J R T A I ) O , M I ) . A N D J . P E L L E G R I N O , M l ) .T h e d e m o n s t r a t i o n o f t h e e x i s t e n c e o f a s p e c i f i c c u t a n e o u s h y p e r s e n s i t i v i t y i nl e i s h m a n i a s i s w a s o r i g i n a l l y m a d e b y W a g e n e r ( 1 ) a n d b y W a g e n e r a n d K o c h( 2 ) w h o o b t a i n e d p o s i t i v e c u t a n e o u s r e a c t i o n s w i t h a l k a l i n e e x t r a c t s o f L e i s h -m a n i a t r o p i c a a n d o f L e i s h m a n i a i n f a n t u m ( = L . d o n o v a n i ) i n r a b b i t s p r e v i -o u s l y i n o c u l a t e d w i t h d e a d c u l t u r e f o r m s o f t h e s e f l a g e l l a t e s .M o n t e n e g r o ( 3 , 4 ) w a s t h e f i r s t o n e t o u s e t h e c u t a n e o u s t e s t f o r t h e d i a g n o s i so f h u m a n l e i s h m a n i a s i s , h a v i n g o b t a i n e d a p o s i t i v i t y i n d e x o f 8 6 . 4 p e r c e n t b yu s i n g a l k a l i n e e x t r a c t s p r e p a r e d f r o m c u l t u r e f o r m s o f L . b r a s i l i e n s i s . H e a l s os h o w e d t h a t a n a n t i g e n f r o m L . t r o p i c a c o u l d l i k e w i s e e l i c i t p o s i t i v e r e a c t i o n s .T h e s e c o n t r i b u t i o n s j u s t i f y t h e u s u a l d e s i g n a t i o n o f " M o n t e n e g r o ' s r e a c t i o n "g i v e n t o t h i s i n t r a d e r m i c t e s t .I n t h e s u b s e q u e n t y e a r s s e v e r a l i n v e s t i g a t o r s ( 6 , 7 , 8 , 9 , 1 0 , 1 1 , 1 2 ) c o n f i r m e dt h e p o s i t i v i t y o f t h e t e s t i n p a t i e n t s a f f e c t e d w i t h A m e r i c a n l e i s h m a n i a s i s ,

u s i n g a n a n t i g e n s u g g e s t e d b y J e s s n e r ( 5 ) , w h o u s e d a s u s p e n s i o n o f l e p t o m o n a sf o r t h e d i a g n o s i s o f o r i e n t a l s o r e . B e s i d e s i t s h i g h s e n s i t i v i t y a n d s p e c i f i c i t y t h et e s t w a s c o n s i d e r e d o f g r e a t d i a g n o s t i c v a l u e f o r t h e f o l l o w i n g r e a s o n s : ( 1 ) T h ed e m o n s t r a t i o n o f t h e e t i o l o g i c a g e n t i n s m e a r s i s l i m i t e d t o t h e e a r l y c a s e s ; t h er e s u l t s a r e p o s i t i v e i n p r a c t i c a l l y 1 0 0 p e r c e n t o n l y i f t h e l e s i o n s a r e o f t w o -m o n t h s d u r a t i o n o r l e s s , t h e p e r c e n t a g e d e c r e a s i n g t o 7 5 p e r c e n t i n l e s i o n s f r o m2 t o 6 m o n t h s o l d a n d t o 2 0 p e r c e n t i n o l d e r o n e s ( 9 , 1 3 ) . T h e i n d e x o f p o s i t i v i t yo b t a i n e d b y t h e e x a m i n a t i o n o f h i s t o l o g i c s e c t i o n s s h o w s c o m p a r a b l e f i g u r e s( 1 4 ) ; ( 2 ) T h e o t h e r i n d i r e c t m e t h o d s o f d i a g n o s i s ( c u l t u r e s a n d s e r o l o g i c r e -a c t i o n s ) h a v e n o t y e t p r o v e d s a t i s f a c t o r y f o r d i a g n o s t i c r o u t i n e , d u e t o t e c h -n i c a l d i f f i c u l t i e s a n d i n c o n s t a n t r e s u l t s . T h e d i a g n o s i s m u s t t h e r e f o r e v e r y o f t e nb e m a d e o n c l i n i c a l a n d e p i d e m i o l o g i c a l g r o u n d s , a n d c o n f i r m e d b y t h e c u t a n e o u s

t e s t . H o w e v e r , s t u d y i n g t h i s t e s t i n h i s r e c e n t t h e s i s , R o t b e r g ( 1 2 ) p o i n t s o u tt h a t " o v e r h a l f o f t h e c o n t r o l s s h o w e d a f t e r 4 8 7 2 h o u r s , s m a l l r e a c t i o n s , n o tl a r g e r t h a n 5 m m . , b u t p e r s i s t e n t a n d l i k e l y t o c a u s e d i f f i c u l t i e s f o r i n t e r p r e t a -t i o n " . C o r r e a ( 1 5 ) s t u d y i n g M o n t e n e g r o ' s r e a c t i o n i n t u b e r c u l o s i s p a t i e n t s ,p r o v e d i t t o b e p o s i t i v e i n a g r o u p o f 1 2 c a s e s w i t h l y m p h n o d e l e s i o n s , p r i m a r yi n f e c t i o n o r s c r o f u l o d e r m a . C a m p o s ( 1 6 ) p e r f o r m e d t h e t e s t o n 9 p a t i e n t s w i t hp e m p h i g u s f o l i a c e u s , a n d o b t a i n e d p o s i t i v e r e s u l t s i n 2 . A l l t h o s e w h o h a v e u s e dt h i s m e t h o d r o u t i n e l y h a v e h a d d i f f i c u l t y i n e v a l u a t i n g t h e r e s u l t s .T h e p r e c e d i n g c o n s i d e r a t i o n s a p p e a r e d t o w a r r a n t a t t e m p t s t o i m p r o v e* F r o m t h e D e r m a t o l o g i c C l i n i c o f t h e F a c u l t o f M e d i c i n e o f t h e U n i v e r s i t y o f M i n a s

G e r a i s , B e l o H o r i z o n t e , B r a z i l ( C h a i r m a n : P r o f . 0 . O r s i n i ) a n d t h e D e p a r t m e n t o f P a r a -s i t o l o g y o f t h e F a c u l t y o f M e d i c a l S c i e n c e s o f t h e C a t h o l i c l l J n i v e r s i t y o f i \ ' I i n a s G e r a i s ,B e l o H o r i z o n t e , B r a z i l ( C h a i r m a n : P r o f . J . P e l l e g r i n o ) .R e c e i v e d f o r p u b l i c a t i o n J a n u a r y 1 8 , 1 9 5 6 .5 3


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5 4 T H E J O U R N A L O F I N V E S T I G A T I V E D E R M A T O L O G YM o n t e n e g r o ' s t e s t , e l i m i n a t i n g a l l p o s s i b l e c a u s e s o f f a l s e r e a c t i o n s , t o i n s u r e i t sr e l i a b i l i t y i n t h e d i a g n o s i s o f A m e r i c a n l e i s h m a n i a s i s .

S i n c e S e n e k j i ( 1 7 ) u s e d t h e p o l y s a c c h a r i d e f r a c t i o n o f L . t r o p i c a i n p a t i e n t sw i t h o r i e n t a l s o r e , s h o w i n g a s p e c i f i c a n d c o n s t a n t a l l e r g y , o n e o f u s ( J . P . , 1 8 )w a s a b l e t o d e m o n s t r a t e i n 2 c a s e s o f A m e r i c a n l e i s h m a n i a s i s a p o s i t i v e r e a c t i o nw i t h a p o l y s a c c h a r i d e f r a c t i o n i s o l a t e d f r o m c u l t u r e f o r m s o f L . b r a s i l i e n s i s .T h e a i m o f t h e p r e s e n t w o r k w a s t o e n l a r g e t h e o r i g i n a l i n v e s t i g a t i o n .M A T E R I A L A N D M E T H O D S

C a s e s o f L e i s h m a n i a s i s a n d C o n t r o l sT h e i n v e s t i g a t i o n w a s c a r r i e d o u t i n 2 1 p a t i e n t s w i t h A m e r i c a n l e i s h m a n i a s i sh o s p i t a l i z e d i n t h e D e r m a t o l o g i c C l i n i c s ( M e n ' s W a r d D r . J . A l e i x o ; W o m e n ' s

W a r d P r o f . 0 . O r s i n i ) o f t h e S a n t a C a s a d e M i s e r i c o r d i a o f B e l o H o r i z o n t e( U n i v e r s i t y H o s p i t a l ) . T h e r e w e r e 1 6 p a t i e n t s a f f l i c t e d w i t h t h e m u c o c u t a n e o u sf o r m o f t h e d i s e a s e , t h r e e w i t h t h e c u t a n e o u s f o r m a n d t w o w i t h t h e m u c o u sf o r m . T h e d u r a t i o n o f t h e d i s e a s e w a s o n e y e a r o r l e s s i n t h r e e p a t i e n t s ( 4 m o n t h s ,1 0 m o n t h s a n d 1 y e a r ) a n d r a n g e d f r o m 2 t o 2 4 y e a r s i n 1 8 p a t i e n t s . M o n t e -

F I G . 1 . A m e r i c a n L e i s h m a n i a s i s . M o n t e n e g r o ' s t e s t : u p p e r w i t h a n a n t i g e n o f p o l y -s a c c h a r i d e f r a c t i o n o f L . b r a s i l i e n s i s a n d l o w e r w i t h a n a n t i g e n o f s u s p e n s i o n o f l e p t o -m o n a s .


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I N T R A D E B M I C T E S T I N L E I S H M A N I A S I S 5 5n e g r o ' s r e a c t i o n w a s p e r f o r m e d a l s o i n 4 5 c o n t r o l s ; 1 0 w e r e " n o r m a l " i n d i v i d u a l s a n d 3 5 w e r e a f f e c t e d w i t h m i s c e l l a n e o u s d e r m a t o s e s .A n t i g e n s o f L . b r a s i l i e n s i sF o r t h e i s o l a t i o n o f t h e p o l y s a c c h a r i d e f r a c t i o n f r o m c u l t u r e f o r m s o f L . b r o s i l i c n s i s ,F u l l e r ' s m e t h o d ( 1 9 ) f o r t h e e x t r a c t i o n o f p o l y s a c c h a r i d e s f r o m b a c t e r i a w a s u s e d , w i t hs o m e m o d i f i c a t i o n s a s d e s c r i b e d i n t h e p a p e r s b y M u n i z a n d F r e i t a s ( 2 0 ) a n d M u n i z ( 2 1 ) . T h e s a m e t e c h n i c h a d p r e v i o u s l y b e e n e m p l o y e d b y P e l l e g r i n o a n d B r e n e r ( 2 2 ) f o r t h ee x t r a c t i o n o f p o l y s a c e h a r i d e s f r o m L . b r a s i l i e n s i s . O n e w e e k a f t e r t r a n s p l a n t t h e c u l t u r eI u 1 m s o f t h e f l a g e l l a t e w e r e f r e e d f r o m t h e f r a g m e n t s o f a g a r o c c a s i o n a l l y s e p a r a t e d f r o mt h e m e d i u m , b y f i l t r a t i o n t h r o u g h g a u z e a n d c o t t o n . A f t e r p r o l o n g e d w a s h i n g w i t h n o r m a ls a l i n e s o l u t i o n b y c e n t r i f u g i n g , 3 m l . o f f o r m a m i d e w a s a d d e d t o e a c h 1 m l . o f m o i s t m a s so f t h e p a r a s i t e . T h e s u s p e n s i o n w a s s h a k e n , t h e n p l a c e d i n a s m a l l b e a k e r a n d h e a t e d i n ag l y c e r i n b a t h a t 1 5 0 d e g r e e s C . f o r 1 5 m i n u t e s a n d f i n a l l y a l l o w e d t o c o o l . T e n m l . o f a c i d -a l c o h o l m i x t u r e ( 9 5 p a r t s o f a b s o l u t e a l c o h o l w i t h 5 p a r t s o f 2 N h y d r o c h l o r i c a c i d ) w a sa d d e d , t h e s u s p e n s i o n s h a k e n f o r 2 0 m i n u t e s a n d t h e p r e c i p i t a t e r e m o v e d b y c e n t r i f u g i n g . T h e s u p e r n a t a n t w a s c a r e f u l l y d r a w n o f f a n d m i x e d w i t h 2 0 m l . o f a c e t o n e . T h e t u b e w a ss h a k e n , t h e p r e c i p i t a t e s p u n d o w n a n d t h e s u p e r n a t a n t d i s c a r d e d . T h e r e s i d u e w a s p l a c e di n a v a c u u m c h a m b e r t o a l l o w c o m p l e t e e v a p o r a t i o n o f t h e a c e t o n e . E i g h t m l . o f n o r m a ls a l i n e s o l u t i o n w e r e a d d e d t o t h e p r e c i p i t a t e a n d t h e p H w a s a d j u s t e d t o 7 . 0 7 . 2 w i t h aw e a k s o l u t i o n o f s o d i u m c a r b o n a t e . T h e s u s p e n s i o n w a s l e f t o v e r n i g h t i n t h e r e f r i g e r a t o ra n d t h e n c e n t r i f u g e d f o r 3 0 m i n u t e s a t 3 , 0 0 0 r . p . m . . T h e s u p e r n a t a n t w a s u s e d a s t h e a n -t i g e n .A n a n t i g e n c o m p o s e d o f a s u s p e n s i o n o f l e p t o m o n a s w a s a l s o u s e d f o r c o m p a r i s o n . C u l t u r ef o r m s o f L . b r o s i l i e n s i s w e r e w a s h e d t h r e e t i m e s i n n o r m a l s a l i n e s o l u t i o n a n d t h e n s u s -p e n d e d i n a 1 : 5 , 0 0 0 m e r t h i o l a t e d s a l i n e s o l u t i o n . T h e l e p t o m o n a s w e r e c o u n t e d a n d a d j u s t -

m e n t s m a d e s o t h a t t h e s u s p e n s i o n s h o u l d c o n t a i n 1 0 , 0 0 0 , 0 0 0 f l a g e l l a t e s p e r m l . , a c c o r d i n gt o t h e m e t h o d o f R o t b e r g ( 1 2 ) .T e c h n i c o f t e s t i n g , r e a d i n g a n d r e c o r d i n g t h e r e a c t i o n s

B o t h a n t i g e n s , t h e p o l y s a c c h a r i d e f r a c t i o n a n d t h e s u s p e n s i o n o f l e p t o m o n a s ,w e r e i n j e c t e d i n t r a d e r m a l l y , i n t h e d o s a g e o f 0 . 1 m l . , i n t h e f l e x o r s u r f a c e o f t h ef o r e a r m o f e a c h p a t i e n t .T h e r e a c t i o n w a s r e a d i n 4 8 7 2 h o u r s , r o u t i n e l y , a n d a l s o i n 8 a n d 2 1 d a y s i no r d e r t o o b s e r v e t h e s o - c a l l e d " l a t e r e a c t i o n s " . A p o s i t i v e t e s t w a s i n d i c a t e d , i nt h e 4 8 7 2 h o u r s r e a d i n g , e i t h e r b y t h e f o r m a t i o n o f a v e s i c l e o r a b u l l a , a p u s t u l eo r a n a r e a o f e r y t h e m a w i t h m a r k e d i n f i l t r a t i o n ( d e n o t i n g a s t r o n g r e a c t i o n ) , o rb y a s m a l l a r e a o f i n f i l t r a t i o n , o n l y p e r c e p t i b l e b y t o u c h i n g ( s l i g h t r e a c t i o n ) . T h el i m i t s o f t h e i n f i l t r a t i o n w e r e m a r k e d w i t h o r d i n a r y i n k a n d t r a n s f e r r e d t o a na b s o r b e n t p a p e r p r e v i o u s l y w e t . T h e a r e a s d r a w n i n t h e p a p e r w e r e m e a s u r e db y a p l a n i m e t e r f o l l o w i n g t h e m e t h o d a d v i s e d b y P e l l e g r i n o a n d M a c e d o ( 2 3 ) .W i t h t h i s p r o c e d u r e i t w a s p o s s i b l e t o c o m p a r e m o r e a c c u r a t e l y t h e r e s u l t so b t a i n e d w i t h e a c h a n t i g e n .

R E S U L T S A N D D I S C U S S I O NT h e a r e a s o f i n f i l t r a t i o n o b s e r v e d w i t h t h e i n j e c t i o n o f t h e p o l y s a c e h a r i d e

f r a c t i o n w e r e u n i f o r m , s l i g h t l y e l e v a t e d , b u t e a s i l y p e r c e p t i b l e t o t o u c h , a n ds h o w e d a m a r k e d e r y t h e m a i n w h i t e i n d i v i d u a l s . A f t e r 8 d a y s a r e d u c t i o n i n t h es i z e o f t h e i n f i l t r a t i o n w a s n o t i c e d . T h i s d e c r e a s e d p r o g r e s s i v e l y , b e c o m i n g v e r y


4/8

5 6 T H E J O U R N A L O F I N V E S T I G A T I V E D E R M A T O L O G YT A B L E 1I n t r a d e r m i c t e s t i n 2 1 c a s e s o f A m e r i c a n l e i s h m a n i a s i sR e s u l t s o f t h e m e a s u r e m e n t o f t h e a r e a s ( s q . c m )

C a s e s S u s p e n s i o n o f L e p t o m o n a s P o l y s a c c h a r i d e F r a c t i o n1 0 02 1 . 5 1 . 13 0 04 1 . 2 1 . 35 0 . 8 1 . 26 0 07 0 . 3 08 3 . 5 2 . 59 2 . 1 2 . 1

1 0 1 . 1 3 . 01 1 1 . 3 1 . 71 2 1 . 3 1 . 91 3 1 . 4 0 . 91 4 0 . 3 1 . 21 5 0 . 9 1 . 31 6 0 . 7 0 . 51 7 0 . 9 0 . 9

1 8 1 . 2 0 . 91 9 0 . 8 0 . 8

2 0 0 . 8 1 . 22 1 0 . 8 2 . 2M e a n 1 . 0 s q . c m 1 . 2 s q . c m

d i s c r e t e o r e v e n d i s a p p e a r i n g a t t h e e n d o f 2 1 d a y s . O n t h e c o n t r a r y , a t t h e 4 8 - 7 2h o u r s r e a d i n g , t h e s u s p e n s i o n o f l e p t o m o n a s e l i c i t e d a n e r y t h e m a t o u s p a p u l e ,m o r e e l e v a t e d i n i t s c e n t e r . A t t h e 8 a n d 2 1 d a y s r e a d i n g s t h e p a p u l e s t i l l p e r -s i s t e d , a n d i n 6 6 p e r c e n t o f t h e c a s e s d e v e l o p e d s o m e n e c r o s i s . T h i s " l a t e r e a c -t i o n " w a s s t u d i e d h i s t o l o g i c a l l y b y P o r t u g a l a n d G i m e n e z ( 2 4 ) , w h o r e p o r t e dt h e f o r m a t i o n o f a t u b e r c u l o i d s t r u c t u r e a f t e r t h e 8 t h d a y . R a b e l l o e t a l . ( 2 5 )a n d R o t b e r g ( 1 2 ) b e l i e v e t h i s r e a c t i o n h a s a s p e c i a l m e a n i n g i n t h e a l l e r g i cp i c t u r e o f l e i s h m a n i a s i s . T h e f a c t t h a t t h e p o l y s a c c h a r i d e f r a c t i o n , w h i c h i s as o l u b l e a n t i g e n , d o e s n o t c a u s e t h e l a t e r e s p o n s e , l e a d s u s t o o f f e r t h e t e n t a t i v ei n t e r p r e t a t i o n t h a t t h e " s o l i d " c o m p o n e n t o f t h e a n t i g e n i s r e s p o n s i b l e f o r t h el a t e r e a c t i o n . T h e a v e r a g e a r e a o f i n f i l t r a t i o n w a s 1 . 0 s q . c m . f o r t h e l e p t o m o n a ss u s p e n s i o n a n d 1 . 2 s q . c m . f o r t h e p o l y s a c c h a r i d e f r a c t i o n ( T a b l e 1 ) . S t a t i s t i ca n a l y s i s o f t h e r e s u l t s s h o w e d t h a t t h i s d i f f e r e n c e i s n o t s i g n i f i c a n t ( t = 1 . 2 8 4 ) .T h e r e a c t i o n w i t h t h e p o l y s a c c h a r i d e f r a c t i o n w a s p o s i t i v e i n 1 7 o u t o f 2 1c a s e s o f A m e r i c a n l e i s h m a n i a s i s ; w i t h t h e s u s p e n s i o n o f l e p t o m o n a s i t w a s p o s i -t i v e i n 1 8 p a t i e n t s , o n e g i v i n g a s l i g h t r e a c t i o n . T h u s , r e g a r d i n g s e n s i t i v i t y t h er e s u l t s w e r e c o m p a r a b l e . T h e n e g a t i v e r e s u l t s , r e p o r t e d b y m a n y a u t h o r s ( 1 3 . 6

p e r c e n t M o n t e n e g r o ( 3 , 4 ) ; 2 . 5 p e r c e n t G o m e s ( 8 ) ; 8 p e r c e n t L o p e s a n dL a e n d e r ( 1 1 ) ) h a v e b e e n r e g a r d e d e i t h e r a s a n a n e r g i c p h e n o m e n o n , o r a s o c c u r -r i n g i n t h e e a r l y c a s e s , b e c a u s e t h e t i m e n e e d e d f o r t h e d e v e l o p m e n t o f t h e a l l e r g i c


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I N T R A D E R M I C T E S T I N L E I S H M A N I A S I S 5 7T A B L E 2

R e s u l t s o f M o n t e n e q r o ' s t e s t i n c o n t r o l sD i a g n o s i s N u m b e r o f C a s e s P o l y s a c c h a r i d eF r a c t i o n( P o s i t i v e s ) S u s p e n s i o n o fL e p t o m o n a s( P o s i t i v e s )

7 0 15 0 24 0 14 0 03 0 13 1 13 0 02 0 01 0 01 0 01 0 01 0 0

1 0 0 04 5 1 6

s t a t e h a d n o t y e t e l a p s e d . I t s h o u l d b e p o i n t e d o u t , h o w e v e r , t h a t c o n t r a r y t ot h e f a c t o b s e r v e d i n m a n y i n f e c t i o u s d i s e a s e s , t h i s a n e r g y i n l e i s h m a n i a s i s d o e sn o t m e a n n e c e s s a r i l y a n u n f a v o r a b l e p r o g n o s i s , f o r o u t o f o u r 4 c a s e s w i t h n e g a -t i v e t e s t s , 3 w e r e c u r e d a f t e r o n e c o u r s e o f a n t i m o n y t h e r a p y a n d t h e o t h e r t w oc o u r s e s . I n t h e s e p a t i e n t s t h e d u r a t i o n o f t h e d i s e a s e w a s 4 m o n t h s i n 1 c a s e ,1 y e a r i n 2 c a s e s a n d 2 y e a r s i n 1 c a s e , s o t h a t t h e a n e r g y c o u l d n o t b e a t t r i b u t e dt o t h e e a r l y s t a t e o f t h e i n f e c t i o n . T h e s e a r c h f o r L . b r a s i l i e n s i s w a s n e g a t i v eb o t h i n s e c t i o n s a n d i n s m e a r s . T h e d i a g n o s i s w a s b a s e d o n c l i n i c a l a n d e p i -d e m i o l o g i c a l d a t a a n d c o n f i r m e d b y t h e t h e r a p e u t i c t e s t .R e g a r d i n g t h e s p e c i f i c i t y o f t h e t e s t , a n a l y s i s o f t h e c o n t r o l g r o u p s h o w s t h a tw i t h t h e s u s p e n s i o n o f l e p t o m o n a s s l i g h t p o s i t i v e r e a c t i o n s , m e a s u r i n g l e s s t h a n0 . 5 s q . c m . w e r e o b t a i n e d i n 5 i n d i v i d u a l s , w i t h t h e f o l l o w i n g d e r m a t o s e s : 2l e p r o m a t o u s l e p r o s y , 1 s c r o f u l o d e r m a , 1 p e m p h i g u s f o l i a c e u s a n d 1 S o u t hA m e r i c a n b l a s t o m y c o s i s . I t s h o u l d b e c o n s i d e r e d s i g n i f i c a n t t h a t t h e s e r e a c t i o n sd i s a p p e a r e d b y t h e 8 t h d a y . I n 1 p a t i e n t w i t h a c t i n o m y c o s i s t h e t e s t w a s s t r o n g l yp o s i t i v e , a n d p e r s i s t e d i n t h e l a t e r e a d i n g s . T h e p a t i e n t ' s h i s t o r y i n d i c a t e d ,h o w e v e r , t h a t h e c a m e f r o m a r e g i o n w h e r e l e i s h m a n i a s i s i s e n d e m i c , a n d h a d h a du l c e r a t e d l e s i o n s o n t h e l e g s s e v e r a l y e a r s b e f o r e , w h i c h l e f t t y p i c a l s c a r s ; t h e r ea p p e a r e d t o b e n o d o u b t t h a t h e h a d b e e n a f f l i c t e d w i t h t h e d i s e a s e . W i t h t h ee x c e p t i o n o f t h i s p a t i e n t a l l t h e o t h e r c o n t r o l s g a v e n e g a t i v e r e s u l t s w i t h t h ep o l y s a c c h a r i d e f r a c t i o n , w h i c h i n d i c a t e s a h i g h e r d e g r e e o f s p e c i f i c i t y f o r t h i sa n t i g e n a s c o m p a r e d w i t h t h e s u s p e n s i o n o f l e p t o m o n a s ( T a b l e 2 ) .

S U M M A R Y A N D C O N C L U S I O N ST w o t y p e s o f a n t i g e n s f o r i n t r a d e r m a l t e s t i n l e i s h m a n i a s i s w e r e s t u d i e d c o m -p a r a t i v e l y : ( a ) A p o l y s a c c h a r i d e f r a c t i o n i s o l a t e d f r o m c u l t u r e f o r m s o f L e i s h -

P e m p h i g u s f o l i a c e u sL e p r o s yS c r o f u l o d e r m aC h r o m o m y c o s i sS o u t h A m e r i c a n h i a s t o m y c o s i sA c t i n o m y c o s i s *M y c e t o m a p e d i sS p o r o t r i c h o s i sC h a n c r o i dS y p h i l i t i c c h a n c r eD e r m a t i t i s v e r r u c o s a ( ? )L u p u s e r y t h e m a t o s u sN o r m a l i n d i v i d u a l sT o t a l

* C u r e d c a s e o f A m e r i c a n l e i s h m a n i a s i s .


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5 8 T H E J O U R N A L O F I N V E S T I G A T I V E D E R M A T O L O G Ym a n i a b r a s i l i e n s i s ; ( b ) A s u s p e n s i o n o f l e p t o m o n a s c o n t a i n i n g 1 0 , 0 0 0 , 0 0 0 f l a g e l -l a t e s p e r m l .T h e t e s t s w e r e p e r f o r m e d i n 2 1 p a t i e n t s h a v i n g A m e r i c a n l e i s h m a n i a s i s a n d i n4 5 c o n t r o l s , i n c l u d i n g 1 0 n o r m a l i n d i v i d u a l s a n d 3 5 w i t h m i s c e l l a n e o u s d e r -m a t o l o g i c a l c o n d i t i o n s .I n t h e l e i s h m a n i a s i s g r o u p t h e r e a c t i o n s w e r e p o s i t i v e i n 1 7 c a s e s w i t h t h ep o l y s a c c h a r i d e f r a c t i o n a n d i n 1 8 c a s e s w i t h t h e s u s p e n s i o n o f l e p t o m o n a s . I nt h e c o n t r o l g r o u p t h e s u s p e n s i o n o f l e p t o m o n a s c a u s e d f a l s e p o s i t i v e r e a c t i o n si n 5 c a s e s : 2 o f l e p r o m a t o u s l e p r o s y , 1 o f s c r o f u l o d e r m a , 1 o f p e m p h i g u s f o l i -a c e u s a n d 1 o f S o u t h A m e r i c a n b l a s t o m y c o s i s ; t h e r e s u l t s w i t h t h e p o l y s a c -c h a r i d e f r a c t i o n w e r e a l w a y s n e g a t i v e . T h e f o l l o w i n g c o n c l u s i o n s c a n b e d r a w n :( 1 ) T h e i n t r a d e r m a l t e s t w i t h t h e p o l y s a c c h a r i d e f r a c t i o n w a s s h o w n t o b e

c o m p a r a b l e i n s e n s i t i v i t y t o t h e r e a c t i o n o b t a i n e d w i t h t h e s u s p e n s i o n o f l e p t o -m o n a s i n c a s e s o f A m e r i c a n l e i s h m a n i a s i s ; ( 2 ) T h e r e a c t i o n w i t h t h e p o l y s a c -c h a r i d e f r a c t i o n i s m o r e s p e c i f i c ; ( 3 ) C o n s i d e r i n g t h e h i g h d i a g n o s t i c v a l u e o fM o n t e n e g r o ' s t e s t , t h e u s e o f t h e p o l y s a c c h a r i d e a n t i g e n i s t o b e p r e f e r r e d ,p a r t i c u l a r l y i n r e g i o n s w h e r e l e i s h m a n i s i s i s e n d e m i c a n d d i f f e r e n t i a l d i a g n o s i sw i t h v a r i o u s t r o p i c a l d e r m a t o s e s i s o f g r e a t i m p o r t a n c e .R E F E R E N C E S

1 . W A G E N E R , E . H . A s k i n r e a c t i o n t o e x t r a c t s o f l e i s h m a n i a t r o p i c a a n d l e i s h m a n i a i n -f a n t u m . U n i v . C a l i f o r n i a P u b ! . , Z o l . , 2 0 : 4 7 3 4 8 8 , 1 9 2 3 .2 . W A G E N E R , E . H . A N D K O C H , D . A . T h e b i o l o g i c a l r e l a t i o n s h i p s o f l e i s h m a n i a a n d c e r t a i nh e r p e t o m o n a d s . U n i v . C a l i f o r n i a P u b i . , Z o l . , 2 8 : 3 6 5 3 8 6 , 1 9 2 6 .3 . M O N T E N E G R O , J . : A c u t i s r e a c S o n a l e i s h m a n i o s e . A n . F a c . d e m e d . d a U n i v . d e S oP a u l o , 1 : 3 2 3 3 3 0 , 1 9 2 6 .4 . M O N T E N E G R O , J . : C u t a n e o u s r e a c t i o n s i n L e i s h m a n i a s i s . A r c h . D e r m a t . & S y p h . , 1 3 :1 8 7 , 1 9 2 6 .5 . J E S S N E R , M . : W i e s i n d d i e A u s s i c h t e n e i n e r I m m u n i s i e r u n g g e g e n H a u t l e i s h m a n i o s eu n d e i n e r T h e r a p i e d e r E r k r a n k u n g m i t L e i s h m a n i a V a k z i n e ? A r c h . f . S c h i f f s - u .T r o p e n . - H y g . , 2 1 : 7 2 7 4 , 1 9 2 7 .6 . B u s s , C . : U n t e r s u c h u n g e n m i t L e i s h m a n i a - V a k z i n e , A r c h . 1 . S c h i f f s - u . T r o p e n . - H y g . ,3 3 : 6 5 8 3 , 1 9 2 9 .7 . B O E Z O N E , R . A . : C a s o e s t a c i o n r i o d e l e i s h m a n i o s i s t e g u m e n t a r i a a m e r i c a n a o b s e r v a d oe m S a n t a F e . R e u n . S o c . A r g e n t . P a t . R e g . N o r t e , 5 : 6 0 0 6 0 4 , 1 9 3 0 .8 . G o r e s s , L . S . : A i n t r a d e r m o - r e a c o d e M o n t e n e g r o n a l e i s h m a n i o s e e o u t r a s p e s q u i s a sa f i n s . B r a s i l - m e d . , 5 3 : 1 0 7 9 1 0 8 7 , 1 9 3 9 .9 . P s s o . & , S . B . A N D P E S T A N A , B . R . : A i n t r a d e r m o - r e a c o d e M o n t e n e g r o n a s c a m p a n h a ss a n i t a r i a s c o n t r a a l e i s h m a n i o s e . S o P a u l o m e d . , 1 5 : 1 3 3 1 5 1 , 1 9 4 0 .1 0 . P s s o , S . B . : I n d i c e s d e d i s s e m i n a c S o d a l e i s h m a n i o s e t e g u m e n t a r e m a l g u m a s z o n a sn o v a s d o E s t a d o d e S o P a u l o . R e v . B i o l . & h g . , 1 1 : 1 9 , 1 9 4 1 .1 1 . L o r s , C . F . A N D L A E N D E R , J . F . : A i n t r a d e r m o - r e a c o d e M o n t e n e g r o n o d i a g n s t i c od a l e i s h m a n i o s e t e g u m e n t a r a m e r i c a n a . B r a s i l - m e d . , 5 9 : 4 1 4 6 , 1 9 4 5 .1 2 . R O T B E R G , A . : C o n t r i b u i o p a r a o e s t u d o d a a l e r g i a n a L e i s h m a n i o s e T e g u m e n t a rA m e r i c a n a . T h e s i s . F a c . M e d . U n i v . S o P a u l o , B r a z i l , 1 9 5 1 .1 3 . P E 5 5 0 A , S . B . A N D B A R R E T T O , M . P . : L e i s h m a n i o s e T e g u m e n t a r A m e r i c a n a . M m . E d .S a ( i d e . S e r v . d e D o c u m e n t a c o . R i o d e J a n e i r o , B r a z i l , 1 9 4 4 .1 4 . B u s s , G . : D i e A m e r i k a n i s c h e H a u t l e i s h m a n i o s e . A r c h . f . D e r m a t . u . S y p h . , 1 5 8 : 2 2 3 2 6 5 , 1 2 9 .1 5 . C O R R E A , C . : A i n t r a d e r m o - r e a c o d e M o n t e n e g r o n a t u b e r c u l o s e . A r q . d e h i g . e s a d e

p i l b l . , S o P a u l o , 6 1 6 3 , 1 9 4 1 .


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I N T R A D E R M I C T E S T I N L E I S H M A N I A S I S 5 91 6 . C A M P O S , J . A . : A i n t r a d e r m o r e a o d e M o n t e n e g r o n o p o n f i g o t r o p i c a l . A r q . d e h i g . es a d d e p d b l . , S o P a u l o , 9 : 1 2 1 1 2 3 , 1 9 4 4 .1 7 . S E N E K J I , H . A . : O n t h e p o l y s a c c h a r i d e o f l e i s h i n a n i a t r o p i c a . A m . J . H y g . , S e c . C . , 3 4 :

6 2 6 6 , 1 9 4 1 .1 8 . P R L L E G R I N O , J . : N o t a p r e l i r n i n a r s o b r e a r e a f l o i n t r a d r m i c a f e i t a c o r n a f r a S o p o l i s -s a c a r i d e a i s o l a d a d e f o r m a s d e c u l t u r a d e L e i s h m a n i a b r a s i l i e n s i s e m e a s o d e l e i s h -m a n i o s e t e g u m e n t a r a m e r i c a n a . 0 H o s p i t a l , 3 9 : 8 5 9 8 6 3 , 1 9 5 1 .1 9 . F U L L E R , A . T . : T h e f o r m a m i d e r n e t h o d f o r t h e e x t r a c t i o n o f p o l y s a c c h a r i d e s f r o mh a e m o l y t i c s t r e p t o c o c c i . B r i t . J . E x p e r . P a t h . , 1 9 : 1 3 0 1 3 9 , 1 9 3 8 .2 0 . M U N I Z , J . A N D F R R I T A 5 , C . : C o n t r i b u i h o p a r a o d i a g n o s t i c o d a d o e n a d e C h a g a s p e l a sr e a S o e s d e i m u n i d a d e . I T I s o l a m e n t o d e p o l i s s a c a r i d e o s d e " S c h i z o t r y p a n u r nc r u z i " e d e o u t r o s T r y p a n o s o r n i d e o s , s e u c o m p o r t a m e n t o n a s r e a h o e s d e p r e c i p i t a -c a b , d e f i x a a o d o c o r n p l e m e n t o e d e h i p e r s e n s i b i l i d a d e . O s " t e s t s " d e f i o c u l a a o( s u b l i r n a d o e f o r m o l g e l ) . R e v . b r a s i l . d a b i o l . , 4 : 4 2 1 4 3 8 , 1 9 4 4 .2 1 . M u N I z , J . : D o v a l o r d a r e a h o d e p r e c i p i t i n a n o d i a g n o s t i c o d a s f o r m a s a g u d a s e s u b -a g u d a s d a d o e n a d e C h a g a s ( T r y p a n o s o m i a s i s A m e r i c a n a ) . M e m . I n s t . O s w a l d oC r u z , 4 5 : 5 3 7 5 4 9 , 1 9 4 7 .2 2 . P E L L E G R I N O , J . A N D B R E N E R , Z . : A r e a h o d e p r e c i p i t i n a c o r n a f r a h o p o l i s s a c a r i d e ai s o l a d a d e f o r m a s d e c u l t u r a d a L e i s h m a n i a b r a s i l i e n s i s e d o S c h i z o i r y p a n u m c r u z i , n al e i s h m a n i o s e t e g u r n e n t a r a m e r i c a n a . A r q . s a d d e p u b . M i n a s G e r a i s , B r a z i l , 2 : 5 6 6 2 ,1 9 5 1 .2 3 . P E L L E G R I N O , J . A N D M A C E D O , D . G . : A s i m p l i f i e d m e t h o d f o r t h e c o n c e n t r a t i o n o fe e r c a r i a e . J . P a r a s i t o l . , 4 1 : 3 2 9 3 3 0 , 1 9 5 5 .2 4 . P O R T U G A L , H . A N D G I M E N R E , M . : H i s t o l o g i a d a r e a h o d e M o n t e n e g r o . N o t a p r v i a .A n . b r a s i l . d e d e r m a t . e . s i f . , 1 8 : 1 7 6 1 7 9 , 1 9 4 3 .

2 5 . R A B E L L O , F . E . , P O R T U G A L , H . , S E R R A , 0 . A N D R o d n A , C . L . : L e i s h m a n i o s e t e g u m e n t a r :f o r m a s c l i n i c a s , a l e r g i a e s p e c i f i c a , e s t r u t u r a h i s t o l o g i c a e n u r n e r o d e g e r m e n s . A n . d a1 a R e u n . D e r r n a . B r a s i l . , R i o , p p . 3 7 7 1 , 1 9 4 5 .


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9 4 T H E J O U R N A L O F I N V E S T I G A T I V E D E R M A T O L O G Y2 4 . W y n n , C . H . a n d I q b a l , M . : I s o l a t i o n o f r a ts k i n l y s o s o m e s a n d a c o m p a r i s o n w i t h l i v e r

a n d s p l e e n l y s o s o m e s . B i o c h e m . J . , 9 8 : l O P ,1 9 6 6 .2 5 . O l s o n , R . L . a n d N o r d q u i s t , R . E . : U l t r a m i c r o -s c o p i c l o c a l i z a t i o n o f a c i d p h o s p h a t a s e i nh u m a n e p i d e r m i s . J . I n v e s t . D e r m . , 4 6 : 4 3 1 ,1 9 6 6 .2 6 . R o w d e n , C . : U l t r a s t r u c t u r a l s t u d i e s o f k e r a -t i n i z e d e p i t h e l i a o f t h e m o u s e . I . C o m b i n e de l e c t r o n m i c r o s c o p e a n d c y t o c h e m i c a l s t u d yo f l y s o s o m e s i n m o u s e e p i d e r m i s a n d e s o -p h a g e a l e p i t h e l i u m . J . I n v e s t . D e r m . , 4 9 : 1 8 1 ,1 9 6 7 .2 7 . P r o s e , P . H . , S e d l i s , E . a n d B i g e l o w , M . : T h ed e m o n s t r a t i o n o f l y s o s o m e s i n t h e d i s e a s e ds k i n o f i n f a n t s w i t h i n f a n t i l e e c z e m a . J . I n -v e s t . D e r m . , 4 5 : 4 4 8 , 1 9 6 5 .2 8 . H a l l , J . H . , S m i t h , J . G . , J r . a n d B u r n e t t , S .C . : T h e l y s o s o m e i n c o n t a c t d e r m a t i t i s : Ah i s t o c h e m i c a l s t u d y . J . I n v e s t . D e r m . , 4 9 :5 9 0 , 1 9 6 7 .2 9 . P e a r s e , A . C . E . : p . 8 8 2 , H i s t o c h e m i s t r y T h e o -r e t i c a l a n d A p p l i e d , 2 n d e d . , C h u r c h i l l , L o n -d o n , 1 9 6 0 .3 0 . P e a r s e , A . C . E . : p . 9 1 0 , H i s t a c h e i n i . s t r y T h e a -r e t s c a l a n d A p p l i e d , 2 n d e d . , C h u r c h i l l , L o n -d o n , 1 9 6 0 .3 1 . D a n i e l s , F . , J r . , B r o p h y , D . a n d L o b i t z , W . C . :H i s t o c h e m i c a l r e s p o n s e s o f h u m a n s k i n f o l -l o w i n g u l t r a v i o l e t i r r a d i a t i o n . J . I n v e s t .D e r m . , 3 7 : 3 5 1 , 1 9 6 1 .3 2 . B i t e n s k y , L . : T h e d e m o n s t r a t i o n o f l y s o s o m e sb y t h e c o n t r o l l e d t e m p e r a t u r e f r e e z i n g s e c -t i o n m e t h o d . Q u a r t . J . M i c r . S c i . , 1 0 3 : 2 0 5 ,1 9 5 2 .3 3 . D i e n g d o h , J . V . : T h e d e m o n s t r a t i o n o f l y s o -s o m e s i n m o u s e s k i n . Q u a r t . J . M i c r . S c i . ,1 0 5 : 7 3 , 1 9 6 4 .3 4 . J a r r e t , A . , S p e a r m a n , R . I . C . a n d H a r d y , J . A . :H i s t o c h e m i s t r y o f k e r a t i n i z a t i o n . B r i t . J .D e r m . , 7 1 : 2 7 7 , 1 9 5 9 .3 5 . D e D u v e , C . a n d W a t t i a u x , R . : F u n c t i o n s o fl y s o s o m e s . A n n . R e v . P h y s i o l . , 2 8 : 4 3 5 , 1 9 6 6 .3 6 . W a r a v d e k a r , V . S . , S a c l a w , L . D . , J o n e s , W . A .a n d K u h n s , J . C . : S k i n c h a n g e s i n d u c e d b y

U V i r r a d i a t e d l i n o l e n i c a c i d e x t r a c t . A r c h .P a t h . , 8 0 : 9 1 , 1 9 6 5 .3 7 . N i c o l a i d e s , N . : L i p i d s , m e m b r a n e s , a n d t h eh u m a n e p i d e r m i s , p . 5 1 1 , T h e E p i d e r m i sE d s . , M o n t a g n a , W . a n d L o b i t z , W . C . A c a -d e m i c P r e s s , N e w Y o r k .3 8 . W i l l s , E . D . a n d W i l k i n s o n , A . E . : R e l e a s e o fe n z y m e s f r o m l y s o s o m e s b y i r r a d i a t i o n a n dt h e r e l a t i o n o f l i p i d p e r o x i d e f o r m a t i o n t oe n z y m e r e l e a s e . B i o c h e m . J . , 9 9 : 6 5 7 , 1 9 6 6 .3 9 . L a n e , N . I . a n d N o v i k o f f , A . B . : E f f e c t s o fa r g i n i n e d e p r i v a t i o n , u l t r a v i o l e t r a d i a t i o na n d X - r a d i a t i o n o n c u l t u r e d K B c e l l s . J .C e l l B i o l . , 2 7 : 6 0 3 , 1 9 6 5 .4 0 . F u k u y a m a , K . , E p s t e i n , W . L . a n d E p s t e i n ,J . H . : E f f e c t o f u l t r a v i o l e t l i g h t o n R N Aa n d p r o t e i n s y n t h e s i s i n d i f f e r e n t i a t e d e p i -

d e r m a l c e l l s . N a t u r e , 2 1 6 : 1 0 3 1 , 1 9 6 7 .4 1 . D a n i e l s , F . , J r . a n d J o h n s o n , B . E . : I n p r e p a -r a t i o n .4 2 . I t o , M . : H i s t o c h e m i c a l i n v e s t i g a t i o n s o f U n n a ' so x y g e n a n d r e d u c t i o n a r e a s b y m e a n s o fu l t r a v i o l e t i r r a d i a t i o n , S t u d i e s o n M e l a n i n ,T o h o k u , J . E x p . M e d . , 6 5 : S u p p l e m e n tV , 1 0 , 1 9 5 7 .4 3 . B i t c n s k y , L . : L y s o s o m e s i n n o r m a l a n d p a t h o -l o g i c a l c e l l s , p p . 3 6 2 3 7 5 , L y s a s a m e s E d s . ,d e R e u c k , A . V . S . a n d C a m e r o n , M . C h u r c h -i l l , L o n d o n , 1 9 5 3 .4 4 . J a n o f f , A . a n d Z w e i f a c h , B . W . : P r o d u c t i o n o fi n f l a m m a t o r y c h a n g e s i n t h e m i c r o c i r c u l a -t i o n b y c a t i o n i c p r o t e i n s e x t r a c t e d f r o m l y s o -s o m e s . J . E x p . M e d . , 1 2 0 : 7 4 7 , 1 9 6 4 .4 5 . H e r i o n , J . C . , S p i t z n a g e l , J . K . , W a l k e r , R . I .a n d Z e y a , H . I . : P y r o g e n i c i t y o f g r a n u l o -c y t e l y s o s o m e s . A m e r . J . P h y s i o l . , 2 1 1 : 6 9 3 ,1 9 6 6 .4 6 . B a d e n , H . P . a n d P e a r l m a n , C . : T h e e f f e c t o fu l t r a v i o l e t l i g h t o n p r o t e i n a n d n u c l e i c a c i ds y n t h e s i s i n t h e e p i d e r m i s . J . I n v e s t . D e r m . ,4 3 : 7 1 , 1 9 6 4 .4 7 . B u l l o u g h , W . S . a n d L a u r e n c e , E . B . : M i t o t i cc o n t r o l b y i n t e r n a l s e c r e t i o n : t h e r o l e o ft h e c h a l o n e - a d r e n a l i n c o m p l e x . E x p . C e l l .R e s . , 3 3 : 1 7 6 , 1 9 6 4 .

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