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Leeuwenhoek. Su microscopio

BREVE HISTORIA DEL MICROSCOPIO

El nombre microscopio deriva del griego: mikrs=pequeo,

skopo=observar. Este trmino designa, en sentido amplio, a todo instrumento

utilizado para amplificar la imagen de objetos que, por su tamao, no son

observables a simple vista. En la prctica, se refiere a un aparato formado por

un sistema de, al menos, dos lentes: un objetivo y un ocular, con el mismo fin.

El descubrim iento del m icroscopio

compuesto tuvo un precedente atribuido a

Galileo (1564-1642).

El verdadero impulsor de la Microscopa

fue, sin duda, el holands Anton Van

Leeuwenhoek, (1632-1723). Construy

microscopios simples, con lentes muy

convexas que l mismo pula y con los

cuales realiz observaciones m uy

diversas: estudi la composicin de la

sangre, fue el primero en observar y

dibujar los protozoos, descubri las

bacterias, etc. Sus trabajos fueron

publicados por la Real Sociedad de

Londres (1683).

Hoy da, hay unanimidad en considerar a

los holandeses Hans y Zacarias Janssen,

padre e hijo, como constructores del

primer microscopio compuesto en 1590.

Desde entonces y hasta nuestros das, el microscopio compuesto no ha cesado

de perfeccionarse, incorporndole mejoras, revolver portaobjetivos, visin

binocular, iluminacin halgena de gran rendimiento, filtros polarizadores, equipo

de contraste de fase, microscopio de contraste interferencial, microscopio de luz

ultravioleta, etc.

Pese a todo, el microscopio ptico presenta una serie de limitaciones que le

impone la naturaleza de la propia LUZ. Por encima de los 1500-2000 aumentos,

las aberraciones que origina la luz impiden hacer observaciones con nitidez.

Es por ello que los investigadores tuvieron la idea de utilizar haces de electrones

en lugar de rayos luminosos y potentes electroimanes, en lugar de lentes. Con

ello naci el microscopio electrnico.

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P A R T E S del M I C R O S C O P I O

Se relacionan en orden, segn la numeracin establecida en la figura adjunta.

1- Ocular: Sistema de lentes que queda prximo al ojo.

2- Anillo de correccin diptrica: Corrige las diferencias de visin entre ambos

ojos. Slo se presenta en los microscopios binoculares y trinoculares.

3- Revolver porta-objetivos: Accesorio que soporta de tres a seis objetivos,

segn los modelos, permitiendo cambiar de uno a otro, rpidamente. Posee un

"clic" que nos avisa cundo est el objetivo en la posicin correcta.

4- Objetivos: Componentes pticos que quedan prximos al objeto, de ah su

nombre. Cada uno contiene un delicado sistema de lentes.

Normalmente, se suministran cuatro objetivos: 4x, 10x, 40x y 100x. Los tres

primeros trabajan en seco, el cuarto, que lleva la inscripcin "OIL", y

generalmente se distingue por un anillo negro en su parte baja, requiere

imprescindiblemente el empleo de un aceite especial, disponible en el comercio,

"aceite de inmersin" o aceite de cedro cuyo ndice de refraccin es muy

similar al vidrio de las lentes (n = 1,515). Su funcin se explicar ms adelante.

El 40x y el 100x suelen estar provistos de montura retrctil.

5- Platina: Plataforma que sostiene la preparacin. En casi todos los diseos

actuales, presenta movimiento de elevacin-descenso para el enfoque.

6- Condensador: Conjunto de lentes que concentra la luz sobre la muestra.

7- Diafragma iris: Es un sistema mecnico formado por varias laminillas

dispuestas en forma radial delimitando un orificio de abertura variable, que regula

la cantidad de luz que entra al condensador. Se acciona mediante una palanca

de fcil acceso (en la figura aparece con ~). Su correcto uso es de vital

importancia en la observacin, slo la prctica nos permitir comprobarlo.

8- Portafiltros: Contiene, normalmente, un filtro de vidrio azul, dado que la luz de

longitud de onda corta mejora el poder de resolucin del microscopio.

Por otra parte, si el foco de luz no es plano o uniforme (bombilla blanca-mate o

luz da) colocaremos en el anillo un filtro de vidrio esmerilado, blanco o azul.

9- Tornillo elevador del condensador: Permite bajar el condensador para

cambio o limpieza del mismo y, a veces, para trabajar con aumentos dbiles.

10- Iluminador: Este modelo presenta a un eficaz equipamiento de iluminacin,

alojado en la base, con lmpara halgena y regulacin de la intensidad luminosa.

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11- Pie o base: Sostiene todo el conjunto del microscopio y puede soportar un

espejo plano-cncavo, un iluminador de subplatina acoplable o un equipo de

iluminacin halgena, como es el caso que describimos aqu.

12- Corrector de la distancia interpupilar: Imprescindible en los modelos

binoculares, ya que la distancia entre nuestros ojos vara de una persona a otra.

13- Cabezal binocular: Equivale al tubo de los modelos con diseo antiguo.

Es la estructura que soporta al ocular u oculares. En este caso contiene un

sistema de prismas que inclinan el rayo luminoso a 45 a la vez que lo dividen en

dos, uno para cada ocular. Existen tambin cabezales monoculares y

trinoculares, estos ltimos con tubo adicional para cmara fotogrfica o de vdeo.

14- Estativo: Columna que soporta al cabezal y sirve como asa de transporte.

15- Tornillo fijador del cabezal: Al aflojarlo, permite el giro de ste, para un

segundo observador, y su desmonte, en caso necesario.

16- Carro mvil porta-preparados: Accesorio que sujeta la preparacin y

permite moverla en direccin frontal y lateral, para su exploracin. Presenta una

pieza fija y otra mvil entre las cuales se ancla el porta. Suele ir provisto de dos

escalas con nonius, perpendiculares entre s para tomar las coordenadas de

zonas interesantes de la preparacin.

17- Enfoque macromtrico: Este mando realiza un enfoque rpido pero con

poca precisin, sobre todo cuando trabajamos con objetivos de gran aumento.

Acta subiendo y bajando la platina, en modelos antiguos mueve el tubo.

18- Enfoque micromtrico: Tornillo de enfoque con precisin, mueve la platina

con extrema lentitud. Es imprescindible para afinar el enfoque de los objetivos

con aumentos fuertes. En este modelo es coaxial con el macromtrico.

19- Mando de movimiento frontal del carro.

20- Mando de movimiento lateral del carro.

21- Regulador de intensidad luminosa.

22- Interruptor de iluminacin.

NOTA 1: Los elementos con n 1, 4, 6, 10 y 13 constituyen la parte ptica del

microscopio, todos los dems forman la parte mecnica.

NOTA 2: El aumento total de trabajo se calcula multiplicando el aumento indicado

en el objetivo por el indicado en el ocular (Ej.- objetivo 40x, ocular 10x, aumento

total = 400x). Esto debe constar en los dibujos que se hagan sobre nuestras

observaciones.

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M A N E J O del M I C R O S C O P I O

L Es muy importante respetar todos los pasos que se detallan acontinuacin.

1- Quitar la funda de plstico (con cuidado de no coger el ocular, al mismo

tiempo), doblarla y guardarla donde no estorbe.

2- Conectar el foco de luz.

3- Separar objetivo y platina, colocar la preparacin en sta y centrar la zona

teida sobre la lente superior del condensador.

4- Abrir poco el diafragma y colocar el condensador en posicin alta.

5- Colocar el objetivo de menor aumento (4x o 10x, segn modelos). Observando

lateralmente el microscopio, aproximar el objetivo a la preparacin (bajando el

tubo o subiendo platina, segn modelos) hasta que queden lo ms juntos posible,

sin llegar a tocarla.

6- Observando a travs del ocular, levantar lentamente el objetivo (o bajar platina)

con el macromtrico, hasta que aparezca un imagen ntida.

Dado el bajo aumento del objetivo, es posible que la iluminacin resulte excesiva.

El deslumbramiento nos impedir obtener una visin satisfactoria, en tal caso,

cerrar el diafragma, o bajar el condensador.

NOTA: Tngase en cuenta que antes de enfocar la preparacin, observaremos

la posible suciedad que haya sobre la lente superior del condensador y sobre la

cara inferior del porta. Saldremos de dudas moviendo el condensador o el carro.

Tambin se puede dar el caso de que veamos puntos o manchas que no

desaparecen al mover los elementos antes citados. Sin duda, se trata de

suciedad depositada en el ocular, lo que comprobaremos haciendo girar ste.

Una vez enfocada la preparacin, rara vez necesitaremos volver a tocar el tornillo

macromtrico, incluso al cambiar de objetivos.

7- Explorar la preparacin, utilizando los

mandos del carro, lentamente de izquierda

a derecha y de arriba a abajo, procurando

no pasar varias veces por la misma zona.

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Dependiendo del material que se estudie, el aumento puede ser insuficiente para

obtener una imagen significativa (el profesor debe dar indicaciones al respecto),

en cuyo caso pasaremos al objetivo siguiente, 10x, El "clic" nos avisar la

correcta colocacin del objetivo.

Si el anterior estaba bien enfocado, podemos cambiar de objetivo directamente,

sin modificar el enfoque, aunque luego habr que afinar con el micromtrico.

Continuar la exploracin.

8- Puede ser conveniente tomar las coordenadas de las zonas ms interesantes.

Para ello, nos ayudaremos de los nonius, que estn dispuestos

perpendicularmente entre s, sobre la platina. Pedir indicaciones al profesor.

9- Pasar al objetivo siguiente (40x), reenfocar con el micromtrico, ser

conveniente modificar la altura del condensador hasta su posicin ms alta as

como la abertura del diafragma.

NOTA: Es muy importante que los objetivos no toquen la preparacin, el

10x y 40x tienen ese riesgo, al igual que el 100x.

10- Slo si est previsto en el guin de prcticas, pasaremos al objetivo de 100x-

inmersin. En tal caso, depositaremos una gota de aceite, que nos proporcionar

el profesor, sobre la preparacin.

Bajar el objetivo de 100x, mirando lateralmente el

microscopio, hasta tocar la gota de aceite,

observaremos la formacin de un menisco.

El aceite impide la dispersin de los rayos de luz,

mejorando notablemente la nitidez de la imagen y la

luminosidad del objetivo.

Mirando a travs del ocular, enfocaremos con el

micromtrico. Debemos explorar la preparacin muy

lentamente.

11- Terminada la observacin, levantar el objetivo (o bajar platina). Retirar la

preparacin y apagar el foco. No olvidar limpiar el objetivo 100x, si se ha usado

aceite de inmersin (ver MANTENIMIENTO).

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RECOMENDACIONES

* Aunque los objetivos de 40x y 100x, en los microscopios modernos, suelen ser

retrctiles, es decir, retroceden parcialmente al tocar la preparacin para no

daarla, corremos el riesgo de rayar y ensuciar el objetivo, es preferible evitar el

contacto entre ste y el preparado, salvo en el caso de objetivo inmersin.

* Con cada objetivo deberemos ajustar la abertura del diafragma y, a veces, la

posicin del condensador, hasta obtener una visin satisfactoria.

En teora, el condensador debe estar siempre en su posicin ms alta.

* Los microscopios modernos, suelen venir equipados con oculares de punto focal

alto, es decir, si nos acercamos demasiado a l, la visin ser defectuosa.

Debemos, por tanto, buscar la altura adecuada.

* En los microscopios de formato antiguo, sin inclinacin en el cabezal, se pueden

inclinar estativo y platina, para mayor comodidad. Esto no se podr hacer si

estamos utilizando inmersin o preparaciones con lquido entre porta y cubre.

* En los microscopios binoculares, debemos tener en cuenta que la distancia

entre los ojos vara de una persona a otra. Habr que ajustar la separacin entre

los oculares.

MANTENIMIENTO

1- El microscopio es un instrumento de precisin, debe ser manipulado con

suavidad, despacio, nunca intentar forzar ningn mecanismo.

2- Terminada la prctica, separar objetivo y platina, retirar la preparacin y apagar

el foco.

3- Si se ha empleado aceite de inmersin, debe limpiarse el objetivo 100x con un

pauelo suave de celulosa, y papel siliconado para limpieza de lentes. Si esto

resulta insuficiente, se utilizar xilol o mezcla alcohol-ter, impregnando

levemente el pauelo o papel limpia-gafas.

4- Cubrir bien el microscopio con su funda y, si no se va a usar en un cierto

tiempo, guardarlo en su estuche o armario.

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OBSERVACIN DE PREPARACIONES MONTADAS

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INSTRUMENTOS MS USUALES EN MICROSCOPA

1- PORTAOBJETOS.- Vidrio rectangular de 75mm.x 25mm.(aprox.) sobre el que

se deposita la muestra que pretendemos observar. Se expenden en el comercio

en cajas de 50 unidades, generalmente. Existen modelos excavados para el

examen "en gota pendiente" de infusorios, por ejemplo

2- CUBREOBJETOS.- Vidrio cuadrado extremadamente delgado, de

dimensiones variables (20x20mm, 22x22mm, 22x50mm.,etc.) con el que se cubre

la muestra. El tamao 20x20 mm. es el ms usual. Se suelen vender en cajas

de100 unidades.

3- AGUJA ENMANGADA DE DISECCIN.- Aguja, ms o menos larga, con

mango, de usos mltiples. No suele ser cara, pero se puede hacer de fabricacin

casera.

4- LANCETA.- Similar a la anterior pero con la punta aplanada en forma de lanza

y bordes cortantes. Presenta usos mltiples: diseccin, montar preparaciones...

5- ESCALPELO .- Instrumento cortante de uso en ciruga. Se aconseja utilizar

modelos de un solo uso, su precio es ms asequible y su afilado, excelente . En

determinados casos, se podr sustituir por una hoja de afeitar o un cter.

6- ASA DE PLATINO .- Consta de un mango provisto en su extremo de un fino

alambre, de aleacin nquel-cromo generalmente, con un anillo terminal. Se

utiliza normalmente para manipular los cultivos de bacterias.

7- PINZAS.- Se aconsejan de presin suave. La hay puntiagudas, de puntas

redondeadas, curvas, etc.

8- TIJERAS DE DISECCIN.- Deben ser de acero inoxidable. Existen en el

comercio modelos desmontables que permiten una fcil limpieza y secado. Las

hay de punta roma, fina, curva, etc.

9- CUENTAGOTAS.- Para dosificar colorantes y otros reactivos.

10- PINCEL DE PELO FINO .- Para manipular cortes histolgicos. Tambin es

conveniente disponer de otro destinado exclusivamente a la limpieza de lentes.

Los hay muy decentes en los "Todo a 100".

11- CUCHARILLA ESPTULA: Muy til para manipular sustancias slidas, sobre

todo al pesar en la balanza.

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12- VIDRIOS DE RELOJ.- Vidrios cncavos de distintos dimetros y usos

mltiples: para calentar suavemente, para teir cortes etc.

13-CAPSULA DE PORCELANA.- Recipiente cncavo de porcelana, utilizado

para calentar.

14- CPSULA DE PETRI.- Tambin llamada placa de Petri o caja de Petri. Es

un recipiente cilndrico, de fondo plano cuya altura es notablemente menor que

su dimetro. Consta de dos partes de igual forma, una mayor que la otra, que

encajan entre s. Se emplea para cultivos de bacterias y otros usos.

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15- MECHERO DE ALCOHOL.- Es conveniente que las fibras de la mecha no

estn muy apretadas y que sta no sobresalga demasiado de la boca del

mechero, para tener una llama estable. Es imprescindible.

16- CUBETA DE TINCIONES.- Recipiente de forma rectangular o cuadrada,

generalmente de plstico, de dimensiones opcionales (por ejemplo 25x25 cm.),

sobre el que se deposita una varilla de vidrio o metlica, doblada en "U" que

sujetar el porta durante la tincin. Se puede hacer con una cubeta de un "Todo

a 100" y un par de varillas de los zapatos o dos agujas de hacer punto, de

aluminio. Es imprescindible.

17- VASO DE PRECIPITADOS.- Vaso de vidrio con pico en el borde para verter

su contenido. Tiene usos diversos como calentar, por ejemplo.

18- PIPETA.- Tubo graduado para medir volmenes de lquidos, con precisin.

Como solucin casera, se puede sustituir por una jeringuilla de plstico.

19- MICRTOMO.- Instrumento para hacer cortes suficientemente delgados,

como para ser observados por transparencia. El ms asequible es el micrtomo

de mano, pero, incluso ste modelo, es un instrumento caro.

20- NAVAJA HISTOLGICA.- Es la clsica navaja barbera. Se usa para cortes

con microtomo y su perfecto afilado es esencial. (Es peligrosa de manejo se puede

sustituir por una hoja de afeitar y slo se necesita si se piensan hacer cortes histolgicos).

21- FRASCOS CUENTAGOTAS.- Muy tiles para dosificar los diversos

colorantes que se utilizan. Dependiendo de su contenido, se usarn de vidrio o

plstico. Se recomiendan los de vidrio color topacio. Para lquidos muy voltiles,

se aconsejan de tapn esmerilado, algo ms caros.

22- FRASCO LAVADOR.- Frasco de plstico con un tubo curvo de salida, muy

til para lavar las preparaciones. Los de 0,5 l. tienen un tamao manejable.

23- TUBOS DE ENSAYO .- De usos mltiples, por ejemplo, para cultivos de

bacterias.

24- ESTUCHE PARA PREPARACIONES.- Todas las preparaciones definitivas

deben ser almacenadas en estuches adecuados, disponibles en el comercio a

precio asequible.

25- ETIQUETAS.- Antes de almacenar las preparaciones debemos etiquetarlas

en los extremos del porta. La etiqueta debe indicar cuantos datos sean de inters

(muestra, tincin, quin realiz la preparacin, fecha, lugar, etc.). Pueden ser

apropiadas las adhesivas de 16x22 mm. (aprox.).

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26- PERA DE GOMA.- Se adquiere en el comercio para lavados nasales. En

nuestro caso, ser de gran utilidad para eliminar polvo o pelusas de los oculares,

a los cuales no debemos soplar nunca, pues una diminuta gota de saliva puede

formar una mancha de tamao considerable, a la hora de mirar a travs del

ocular.

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OBSERVACIONES GENERALES SOBRE EL MONTAJE DE PREPARACIONES

1) Para la observacin la luz debe atravesar la preparacin, luego sta debe ser

fina, bien extendida y capaz de ser traspasada por la luz.

2) La LIMPIEZA del material es IMPRESCINDIBLE y debe evitarse siempre la

grasa, huellas, pelusas, rayados, polvo, etc., tanto en las lentes del microscopio

como en el porta y el cubreobjetos.

3) Los portaobjetos deben sujetarse con los dedos por los bordes, Los

cubreobjetos se manipulan de igual manera y/o con ayuda de un instrumento fino

(aguja enmangada) para evitar huellas y

suciedad.

4) Las gotas de agua, colorantes u otros

productos, deben colocarse con cuidado,

utilizando el cuentagotas o una pipeta fina.

Si es preciso se extendern sobre el porta de

forma homognea con ayuda de una aguja

enmangada o lanceta, con cuidado de no rayar.

5) Cuando se coloca el cubreobjetos sobre una gota previamente situada en el

porta, se debe proceder como indica la figura. Rozando el lquido en la unin

porta-cubre hasta que se situ a lo largo de toda la linea de contacto. Despus se

deja caer "de golpe", como al cerrar un libro, para evitar que queden burbujas de

aire entre cubre y porta..

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OBSERVACIN DE PREPARACIONES MONTADAS

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