procedimientos hematologicos para sangres anormales

AVISOS LEGALES

LEA TODOS LOS MANUALES DEL PRODUCTO Y CONSULTE CON PERSONAL ENTRENADO POR BECKMAN COUL TER ANTES DE INTENTAR DE OPERAR EL INSTRUMENTO

PELIGROS Y LIMITACIONES Y PRECAUCIONES OPERACIONALES

Las ADVERTENCIAS. PRECAUCIONES Y los IMPORTANTES lo alertan de la forma siguiente:

ADVERTENCIA PRECAUCION IMPORTANTE

Puede causar daos. Puede causar daos al instrumento. Puede causar resultados engaosos.

PRECAUCION: La integridad del sistema puede resultar comprometida y ocurrir fallos operacionales si:

Se usa este equipo de una forma otra que la especificada. Opere el instrumento como ha sido indicado en los Manuales del Producto.

Usted introduce programacin que no ha sido autorizada por Beckman Coulter en su computadora. Opere solamente la computadora de su sistema con programacin autorizada por Beckman Coulter.

Usted instala programacin que no es una versin con derechos de copia original. Use solamente programacin que sea una versin con derechos de copia originales para evitar la contaminacin de los virus.

Beckman Coulter Inc. urge a sus clientes a que cumplan con todos los estndares nacionales para la salud y seguridad tales como el uso de una barrera de proteccin. Esto puede incluir, pero no se encuentra limitado a, gafas protectoras, guantes y batas de laboratorio apropiadas cuando se est operando o dando mantenimiento a este o cualquier otro analizador de laboratorio automatizado.

COULTER, COULTER COUNTER CHANNELYZER, ISOTON, GENS, MAXM, ONYX, STKS son marcas registradas de BECKMAN COUL TER

Derechos de Copia de Beckman Coulter 2002. Todos los derechos reservados.

CONTENIDO

Seccin 1 Introduccin

Sobre este Manual 1

Como Usar Este Manual 2

Convenciones 4

Definicin de lo Normal 4

Tabla 1 Sustancias Interferentes 3

Seccin 2 Procedimientos Generales

Procedimiento 1 Rechazo Total (-----) 6

Procedimiento 2 Rechazo de Un Solo Periodo de Recuento (*V)_ 8

Procedimiento 3 Errores de Aspiracin 10

Seccin 3 Procedimientos con Leucocitos

Procedimiento 1 Obtencin de los Resultados Correctos cuando el Resultado de LEUC se encuentra Extralimitado (+++++) o por Encima de la Linealidad (+) __ 13

Procedimiento 2 Resultados de LEUC Sealizados con * *R 18

Procedimiento 3 Aglutinacin de LEUC o LEUC pequeos 20

Procedimiento 4 Eritrocitos Nucleados 22

Procedimiento 5 Crioglobulinas y/o Criofibringenos 25

Procedimiento 6 Fragmentos de LEUC 28

Procedimiento 7 Cl ulas Rojas Resistentes al Estromalizante (Lyse) _ 30

Procedimiento 8 Micromegacariocitos __________ _

Seccin 4 Procedimientos con Eritrocitos

Procedimiento 1 Obtencin de los Resultados Correctos cuando el Resultado de ERIT se encuentra Extralimitado (+++++) o por Encima de la Linealidad (+) ____ _

Procedimiento 2 Resultados de ERIT Disminuidos

---------

Procedim ento 3 Resultados de Hemoglobina Aumentados ____ _

ProcE~dimiento 4 Resultados de Hemoglobina Disminuidos _~ ___ _

Procedimiento 5 Resultado de VCM Aumentado ________ _

Procedimiento 6 Resultado Bajo de VCM __________ _

Procedimiento 7 Distribuciones Sealizadas de Eritrocitos _____ ~

Procedimiento 8 Aglutinacin de ERIT ___________ _

Procedimiento 9 ERIT Pequeos o Fragmentos de Erit ___ ~---

Procedimiento 10 Muestras Hemolizadas ________ ---~

Procedimiento 11 Muestras Lipmicas _________ ~ __ --

32

36

39

41

43

45

47

49

51

55

57

60

11

Procedimiento 12

Seccin 5

Qumicas Anormales (Sodio, Glucosa o BUN) ________ _

Procedimientos con Plaquetas

Procedimiento 1 Obtencin de los Resultados Correctos cuando el Resultado de Plq se encuentra Extralimitado (+++++) o por Encima de la Linealidad (+) ___ _

Procedimiento 2 Resultados de Plq Disminuidos ________ _

Procedimiento 3 Distribuciones de Plq Sealizadas con una "R" ___ _

Procedimiento 4 Plaquetas Gigantes ____________ _

Procedimiento 5 Plaquetas Agrupadas ___________ _

Procedimiento 6 Plaquetas Satlites ____________ _

Seccin 6 Procedimientos Diferenciales

Procedimiento 1 Muestra con un Grfico de Datos, Grfico de Dispersin o Histograma de Distribucin de LEUC Atpico ___ _

Apndice

Estimado de Leucocitos _____________ _

Estimado de Plaquetas _____________ _

63

67

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111

INTRODUCCION 1

SOBRE ESTE MANUAL

Ciertas anormalidades del espcimen pueden afectar adversamente los resultados del anlisis y requieren una mayor atencin. Este manual se encuentra destinado para ser usado con los instrumentos hematolgicos COULTER con capacidad de diferencial. Su propsito es ayudar al operador a reconocer, revisar y verificar la exactitud de los resultados cuando existen condiciones anormales.

Los instrumentos hematolgicos automatizados COULTER emplean diversos sistemas de sealizacin que ayudan al operador a identificar las muestras que necesitan una mayor atencin. El objetivo de este manual es utilizar los datos de estos instrumentos para reconocer exitosamente una muestra anormal. Estos datos incluyen: resultados de parmetros, seales, codificaciones y alertas, asi como la apariencia de los grficos de datos, los grficos de dispersin y/o los histogramas que se encuentren asociados con los resultados de una muestra.

Este material no es para localizar malfuncionamientos en el instrumento. Si usted sospecha que existe un problema con el instrumento, refirase a la Gua de Procedimientos Especiales y Localizacin de Malfuncionamientos de su instrumento.

IMPORTANTE Este documento se encuentra destinado a ser una gua solamente. Siempre cumpla con el protocolo de su laboratorio antes de reportar los resultados.

COMO USAR ESTE MANUAL

La Tabla 1 de esta seccin contiene una lista de anormalidades y los parmetros que pueden ser afectados cuando existe esta anormalidad. La tabla tambin contiene una referencia a los procedimientos que usted debe usar para obtener los resultados ms precisos para los parmetros afectados.

Observe que no todos los parmetros indicados en la columnas de Pudiese Afectar son siempre afectados. Es funcin del operador evaluar los datos y decidir cuales parmetros, si hay alguno, son afectados y necesitan ser corregidos.

Tenga en consideracin que ms de un parmetro puede ser afectado cuando una muestra exhibe mltiples anormalidades.

Usted puede usar la informacin de la Tabla 1 de varias formas para hallar el procedimiento apropiado para corregir los resultados de la muestra.

TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002

INTRODUCCION

Si usted ya ha identificado la sustancia interferente en el frotis de sangre, busque la sustancia en la columna de Interferencia y use el procedimiento indicado.

Si usted observa interferencia en un grfico de datos, grfico de dispersin o histograma pero no observa las sustancias anormales en el frotis de sangre, revise las sustancias relacionadas en la columna de Interferencia para ver las posibilidades. Revise la lmina otra vez. Si alguna de estas sustancias se encuentra en el frotis de sangre, use el procedimiento asociado.

Si los resultados de la muestra son inconsistentes con el cuadro hematolgico del paciente, y no existe una anormalidad aparente en el frotis, considere las sustancias interferentes listadas en la Tabla 1 que puede no ser detectadas en un frotis de sangre. Estas sustancias pueden incluir qumicas anormales, ERIT resistentes a la estromalizacin, ERIT rgidos, LEUC frgiles y otras sustancias interferentes conocidas. Si una de estas interferencias es sospechosa, emplee el procedimiento asociado.

Tenga en cuenta que las inconsistencias tambin pueden encontrarse relacionadas con la tcnica empleada para hacer el frotis, la coleccin de la muestra y manipulacin de sta o una posible mala identificacin de la muestra, frotis Ylo resultado impreso.

TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002 2

~ ..

*

i I

INTRODUCCION

Tabla 1 Sustancias Interferentes

Pudiese Afectar

. I

Los procedimientos citados en la Tabla 1 se encuentran localizados en sus respectivas secciones.

TPS H114A202 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002 3

CONVENCIONES

Los instrumentos tienen diferentes sistemas de sealizacin basados en sus capacidades. Por lo tanto, ciertos procedimientos o partes de procedimientos van a ser especficos para un instrumento en particular. Los pasos en un procedimiento que son nicos para un instrumento determinado se encuentran marcados con un icono especfico del instrumento.

Estos iconos son:

@ Para el sistema COULTER GENoSOM

@) Para el Analizador COUL TER STKS C0 Para el Analizador COULTER MAXWM

@) Para el Analizador COUL TER ONyx

Siempre haga referencia a la Gua del Operador especfica para su instrumento y Manual de Referencia o Sistema de Ayuda en Lnea para la interpretacin de las seales.

DEFINICION DE LO NORMAL

Para el propsito de este manual, usted puede aceptar una muestra como "normal" con un 95% de fiabilidad cuando existan las condiciones siguientes:

o Los resultados se encuentren dentro de las escalas de su laboratorio o lmites prestablecidos.

o No hayan cdigos de parmetros o seales. o No hayan mensajes de sospechoso. o No hayan irregularidadles en el grfico de datos, grfico de dispersin o

histograma. o Resultados de parmetros que sean compatibled unos con los otros. o Los resultados sean fisiolgicamente posibles.

Este manual se refiere a los resultados de la muestra que no cumplan con esto criterios, y por tanto se les refiere como "Anormales".

4 TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002

CONTENIDO 2

IMPORTANTE Los procedimientos siguientes son ofrecidos solamente como ~,ua. Siempre siga y cumpla con el protocolo de su laboratorio

antes de reportar los resultados

Procedimiento 1 Rechazo Total (-----) 6

Procedimiento 2 Rechazo de Un Solo Perodo de Recuento (*V) _ 8

Procedimiento 3 Errores de Aspiracin 10


PROCEDIMIENTOS GENERALES 2

PROCEDIMIENTO 1 Rechazo Total ( .... )

Principio

Un rechazo total ocurre cuando los resultados de las tres aperturas (o resultados del perodo de recuento) no concuerdan. Los guiones (-----) reemplazan al resultado numrico.

Cuando el cdigo (-----) reemplaza el resultado de un parmetro, la computadora no puede calcular los resultados que se encuentran basados en los valores numricos de este parmetro. Como resultado, los parmetros computados son reemplazados con el cdigo ( ..... ) para indicar un clculo incompleto.

El Espcimen o Muestra

Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.

Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.

Procedimiento

Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el @ @ (Q) y dentro de las 48 horas para @) .

. 1. Revise visualmente para ver si se encuentran algunas partculas presentes en las apertura( s) si su instrumento tiene pantalla para la observacin de las aperturas. Si no tiene pantalla, observe la matriz de rechazo.

2. Procese otra vez la muestra.

3. Si vuelve a ocurrir el rechazo, efecte los pasos siguientes en el orden ofrecido hasta que sea resuelto el problema.

a. Examine si la muestra presenta cogulos o si tiene fibrina. Si hay fibrina presente, obtenga otra muestra.


PROCEDIMIENTO 1

IMPORTANTE Cercirese de que el frotis de sangre fue hecho recientemente del tubo que est siendo analizado. Algunas anormalidades, tales como agrupaciones de plaquetas y aglutinacin de ERIT pueden no aparecer hasta que la muestra no est a temperatura ambiente por un rato.

b. Haga un frotis fresco del tubo de sangre que est siendo analizado. Examine el frotis de sangre, particularmente el borde extendido, a ver si observa clulas anormales, agrupaciones o cristales.

Si hay presentes agregados de LEUC, vea el Procedimiento 3 para LEUC.

Si hay presentes cristales de crioglobulinas/criofibringenos, vea el Procedimiento 5 para LEUC.

Si hay presentes aglutinaciones de ERIT, vea el Procedimiento 8 para ERIT.

Si hay presentes plaquetas gigantes, vea el Procedimiento 4 para PLQ.

Si hay presentes agrupaciones de plaquetas, vea el Procedimiento 5 para PLQ.

C. Revise la apertura o los resultados del perodo de recuento. Si los resultados de LEUC, ERIT PLQ se encuentran extralimitados (+++++), vaya al procedimiento apropiado.

Si los resultados de LEUC se encuentran extralimitados, vea el Procedimiento 1 para LEUC.

Si los resultados de ERIT se encuentran extralimitados, vea el Procedimiento 1 para ERIT.

Si los resultados de PLQ se encuentran extralimitados, vea el Procedimiento 1 para PLQ.


PROCEDIMIENTO 2 Rechazo de Un Slo Perodo de Recuento (*V) Principio

En los analizadores MAXM y ONYX, la codificacin *V aparece a continuacin del . parmetro cuando ocurre el rechazo de un solo perodo de recuento. Puede indicar un resultado errneo debido al bloqueo parcial o temporal de la apertura durante la fase de recuento. El cdigo *V aplica solamente a los parmetros de LEUC, ERIT, VCM, ADE, VPM ADP. La codificacin de V aparece a continuacin de cualquier parmetro que sea calculado del parmetro con el rechazo de un solo perodo de recuento.




Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin.

Procedimiento

1. Revise visualmente para ver si se encuentran algunas partculas presentes en . la apertura. Refirase a la Gua Para Procedimientos Especiales y Malfuncionamientos en la limpieza de las aperturas.

2. Cualquiera de los procedimientos siguientes puede ser empleado para resolver el problema:

a. Procese de nuevo la muestra. Si no recurre la V*, reporte los resultados.

b. Revise los tres perodos de recuento. Si no hay diferencias significativas entre los perodos de recuento, puede ser reportado el resultado promedio.

Revise los tres perodos de recuento oprimiendo primero F7, entonces Oprima AIt+F1 para proyectar los resultados del perodo de recuento uno, oprima Alt+F2 para el perodo de recuento dos y Alt+F3 para el perodo de recuento tres.

Revise los tres perodos de recuento oprimiendo F3. Oprima F3 repetidamente para ver individualmente las proyecciones de los tres perodos de recuento.

c. Detecte (o "escane") un frotis de sangre para verificar los resultados del instrumento.

8 TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002

PROCEDIMIENTO 2

3. Si el problema no puede ser resuelto, obtenga un recuento correcto usando un hemocitmetro.

a. Si se usa el resultado de LEUC del hemocitmetro, calcule los nmeros de clulas absolutas de la forma siguiente:

% Clulas (reportadas) x LEUC Correctos Recuento Absoluto =

100

b. Si se usa el resultado de ERIT del hemocitmetro, calcule La CHM y la CHCM de la forma siguiente:

Hgb CHM= x 10

ERIT (contados)

Hgb CHCM= x 100

VCM x ERIT (contados)


PROCEDIMIENTO 3 Errores de Aspiracin

Principio

@) El sistema GEN.S tiene detectores de sangre para garantizar la integridad de la muestra en el modo automtico de frasco cerrado. Las muestras identificadas como que no cumplen con los requisitos de aspiracin normal sealan todos los resultados con una P. El mensaje Parto Asp. aparece en el campo de Estado.

@ @ Los analizadores STKS y MAXM tienen detectores de sangre para garantizar la integridad de la muestra en el modo primario de frasco cerrado. Las muestras identificadas como que no cumplen con los requisitos de aspiracin normal son sealizadas con ( ..... ) como reemplazo de los resultados numricos. El mensaje Parto Asp. aparece en el campo de Estado.

@) El analizado ONYX tiene detectores de sangre para garantizar la integridad de la muestra en ambos modos el abierto y el cerrado. Cuando una muestra es aspirada, ambos el detector frontal y el detector del espacio de aire son activados. Si el detector del espacio de aire detecta aire antes de que el frontal detecte sangre, el sistema identifica la muestra como que no cumple los requisitos de aspiracin normales. El mensaje Error-Blood not detected aparece y todos los resultados son sealizados con una RR.


Sangre Total o Entera - Use sal de EOTA y colctela de acuerdo con lo establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.


Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el @ @ y dentro de las 48 horas para @) .

Procedimiento

1. Inspeccione visualmente la muestra.

2. a. Si no hay cogulos presentes, procese de nuevo la muestra. Si la seal no

vuelve a aparecer, reporte los resultados.

b. Si hay cogulos presentes, vuelva a extraer la muestra y repita el anlisis.

3. Examine los datos para ver si los resultados son lgicos, especialmente los ndices de ERIT.

10 . ~~~~~--~~~~--~--~----~--~~--~~~---TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002

PROCEDIMIENTO 3

4. Inspeccione los histogramas para ver si presentan anormalidades que se puedan relacionar con la integridad de la muestra.

5. Revise la historia del paciente, si es posible, para ver si hay sntomas que correspondan con los resultados.

6. Examine un frotis. Si hay una aglutinacin de ERIT, refirase al Procedimiento 8 de ERIT.

Notas del Procedimiento

Las muestras con hemoglobinas bajas pueden no exhibir las caractersticas pticas detectables mediante el proceso de aspiracin normal. Sin embargo, usted va a tener el resultado bajo, sealizado con RR en el analizador ONYX y con P en el Sistema GEN.S.

Los tubos llenados inapropiadamente o con un volumen bajo pueden producir un muestreo escaso o corto del espcimen.

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TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002

CONTENIDO 3

IMPORTANTE los procedimientos siguientes son ofrecidos solamente como gua. Siempre siga y cumpla con el protocolo de su laboratorio


Procedimiento 1 Obtencin de los Resultados Correctos cuando el Resultado de LEUC se encuentra Extralimitado (+++++) o por Encima de la Linealidad (+) ____ _ 13

Procedimiento 2 Resultados de LEUC Sealizados con * *R _____ _ 18

Procedimiento 3 Aglutinacin de LEUC o LEUC pequeos ______ _ 20

Procedimiento 4 Eritrocitos Nucleados __ _ 22

Procedimiento 5 Crioglobulinas y/o Criofibringenos ________ _ 25

Procedimiento 6 Fragmentos de LEUC ____________ _ 28

Procedimiento 7 Clulas Rojas Resistentes al Estromalizante (Lyse) __ _ 30

Procedimiento 8 Micromegacariocitos _____________ _ 32

____________________________ ~--~~~-----12


PROCEDIMIENTOS CON LEUCOCITOS 3

PROCEDIMIENTO 1 Obtencin de los Resultados Correctos cuando el Resultado de LEUC se encuentra Extralimitado (+++++) o por Encima de la Linealidad

Principio

Los resultados de LEUC generados por un sistema GEN.S son considerados extralimitados cuando el resultado es >500.0 x 103 clulas/ A... Los resultados de LEUC generados por un analizador STKS MAXM son considerados extralimitados cuando el resultado es >99.9 x 103 clulas/ A... El resultado de LEUC en el analizador ONYX es considerado extralimitado cuando el resultado excede 150.0 x 103 clulas/ A... (Vea el Manual de Referencia de su instrumento para la definicin exacta de la extralimitacin).

Una extralimitacin del resultado de LEUC es reemplazada por el cdigo (+++++) y los nmeros absolutos diferencias son reemplazados por el cdigo ( ..... ) para indicar un clculo incompleto.

La linealidad en el sistema GEN.S es de 140.0 x 103 clulas/ A... El GEN.S proyecta una "+" a continuacin del resultado que se encuentre por encima de la escala lineal, pero por debajo del lmite de extralimitacin. La linealidad en los analizadores STKS, MAXM y ONYX es de 99.9 x 103 clulas/ A... El analizador ONYX proyecta una "+" a continuacin del resultado que se encuentre por encima de la escala lineal, pero por debajo del lmite de extralimitacin.


Reactivos



Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el @ @ @) y dentro de las 48 horas para @).

Diluente - ISOTON III es el fluido diluente preferido.

13' --------~--~~--~--~~~--~~~~~~--TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002

PROCEDIMIENTOS CON LEUCOCITOS

Procedimiento

1. Si el resultado se encuentra extralimitado (+++++), determine un valor de base numrica del cual proceder lo mismo revisando un frotis de sangre (vea el apndice) o siga las instrucciones a continuacin:

(K) Logre el acceso a Bsqueda en la Base de Datos y recupere la muestra en cuestin. Haga resaltar la muestra en la pantalla. Seleccione F3 Edit Y entonces oprima PgDn para proyectar la segunda pgina. El valor numrico promedio del resultado extralimitado aparece en la parte inferior de la pantalla.

Este resultado no puede ser editado, impreso o transmitido a una computadora principal. No debe ser reportado. Este nmero es simplemente un valor de base numrica para determinar la relacin de dilucin necesaria para traer el resultado de LEUC dentro de la escala lineal.

Logre el acceso a Bsqueda en la Base de Datos y recupere la muestra en cuestin. Haga resaltar la muestra en la pantalla. Seleccione F3 Edit Y entonces oprima End para proyectar la segunda pgina. El valor numrico promedio del resultado extralimitado aparece en la parte inferior de la pantalla.

Este resultado no puede ser editado, impreso o transmitido a una computadora principal. No debe ser reportado. Este nmero es simplemente un valor de base numrica para determinar la relacin de dilucin necesaria para traer el resultado de LEUC dentro de la escala lineal.

IMPORTANTE

Si el resultado de LEUC es (+++++), procese un ciclo en blanco para evitar el acarreo a la muestra siguiente.

2. Usando el diluente y un sistema de pipetear apropiadamente calibrado, prepare la dilucin ms baja para llevar el resultado de LEUC dentro de la escala lineal.

IMPORTANTE

Las diluciones de las muestras pueden producir resultados diferenciales errneos. No reporte el diferencial de la muestra diluida.

__________________________ ~------------------------~~-------14 TPS H114A202 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002


3. Cicle la muestra diluida inmediatamente.

4. Multiplique los resultados del Paso 3 por el factor de dilucin para obtener un resultado de LEUC correcto.

5. Efecte y reporte los porcientos de clulas blancas de un diferencial manual. Calcule los nmeros de clulas absoluto del diferencial de la manera siguiente:

% Clulas (reportadas) x LEUC Correctos Recuento Absoluto =

100

6. Corrija los ERIT sustrayendo el valor corregido de LEUC del resultado de ERIT impreso del valor original, muestra no diluida. La diferencia es el valor de ERrr corregido.

ERIT corregidos = Resultado Original de ERIT - Result Corregido LEUC

7. Determine los resultados correctos de Hgb, Hct, VCM, CHM, CHCM y ADE usando lo mismo los mtodos manuales o automatizados a continuacin:

Uso de los Mtodos Manuales

a. Efecte una hemoglobina manual de acuerdo con NCCLS H15-A2. La hemoglobina debe leerse usando el sobrenadante despus de la centrifugacin para remover la turbidez de los leucocitos.

b. Realice un hematocrito centrifugado de acuerdo con el procedimiento de la NCCLS H7-A2.

C. Calcule el VCM, CHM y CHCM de la forma siguiente:

Hct (centrifugado) VCM= x 10

ERIT (corregidos)

Hgb (manual) CHM= x 10

ERIT (centrifugado)

_______________________________________________________________ 15

TPS H114~A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales"- febrero del 2002


Hgb (corregida) CHCM= x 100

Hct (centrifugado)

el. Prepare un frotis de sangre para estimar cualquier anisocitosis.

e. Despus de completar estos procedimientos manuales, proceda al Paso 8.

liso de Mtodos Automatizados

a. Centrifugue una alcuota de sangre.

b. Retire tanto plasma como sea posible y la capa tamponada sin perturbar los ERlT.

c. Reemplace el plasma retirado con un volumen equivalente de diluente; mezcle bien.

d. Cicle esta muestra.

IMPORTANTE Es muy difcil retirar la capa tamponada sin perturbar los ERIT y reemplazarla con el volumen correcto de diluente. Si el resultado de ERIT no es comparable con el resultado de los ERIT corregidos, lo mismo puede realizar otro reemplazamient del plasma o hacer los mtodos alternativos ofrecidos a continuacin.

e. Verifique que no haya error de dilucin comparando los resultados de ERlT con el resultado de ERlT corregido.

a). Reporte solamente los ndices (VCM, CHM y CHCM) y ADE de este tubo de reemplazamiento del plasma.

b). Realice un hematocrito centrifugado de acuerdo con el procedimiento de la NCCLS H7 -A2 o calcule el Hct:

ERIT corregido x VCM corregido Hct Corregido =

10

__________________________________________________________________ 16 TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002

~.


e). Calcule de nuevo la Hgb:

CHCM corregida x Hct corregido Hgb Corregida =

100

8. Revise el histograma de plaquetas y el frotis de sangre para ver si existen fragmentos de LEUC. Si los fragmentos se encuentran presentes y aparecen como interferentes con los resultados de Plq y VPM:

a. Obtenga un recuento de plaquetas correcto usando un hemocitmetro; se prefiere un microscopio con contraste de fase.

b. Observe el tamao de las plaquetas (pequeas, normales o grandes) del frotis de sangre y verifique el nmero.


Referencias:

Los resultados de ERIT y VCM pueden ser falsamente elevados debido a que los LEUC estn siendo contados simultmeamente con los ERIT y Plaquetas en el bao de ERIT.

El Hct centrifugado es aproximadamente un 2% a un 5% ms elevado que el Hct calculado debido al plasma atrapado.

La hemoglobina puede ser falsamente elevada debido a la turbidez dentro del bao de LEUC.

Los resultados de CHM y CHCM pueden ser imprecisos debido a los parmetros afectados de los cuales son calculados.

Los resultados de LEUC falsamente elevados pueden ser observados con muestras de sangre criofibrinognicas, crioglobulinmicas o cualquier espcimen que contenga partculas anormales tales como eritrocitos nucleados o micromegacariocitos que tengan un tamao mayor de 35fL.

Cowell K. Hematology No. H-4, Tech. Sample, American Society of Clinical Pathologists, 1996.

Koepke JA. Tips on Technology, MLO, 1992; 24; 8: 14.

Kohn, JH. Hematology Problem. Am J. Med Technolo. 1979; 45: 1018-1019.

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TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002

~ ..

PROCEDIMIENTO 2 Resultados de LEUC Sealizados con * *R.

Principio Todas las partculas 35 fL o ms son contadas como LEUC usando el Principio Coulter. Los resultados de LEUC son sealizados con una * o un *R indicando que la comprobacin en el umbral de 35 fL fall.




Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el @ @ @J y dentro de las 48 horas para @) .

IMPORTANTE Cercirese de que el frotis de sangre fue hecho recientemente del tubo que est siendo analizado. Algunas anormalidades, tales como agrupaciones de plaquetas y aglutinacin de ERIT pueden no aparecer hasta que la muestra no est a temperatura ambiente por un rato.

1. Revise un frotis de sangre para determinar si la interferencia es significativa. Examine cuidadosamente el frotis de sangre, particularmente el borde extendido, a ver si hay partculas anormales (Vea el Apndice).

Si hay una anormalidad presente, vaya al procedimiento recomendado a . continuacin; de lo contrario proceda al paso 2.

Si hay LEUC pequeos presentes, vea el Procedimiento 3 para LEUC.

Si hay Eritrocitos Nucleados presentes, vea el Procedimiento 4 para LEUC.

Si hay cristales de crioglobulinas o criofibringenos presentes, vea el Procedimiento 5 para LEUC.

Si hay ERIT anormales resistentes al reactivo ltico presentes, tales como las clulas falciformes, vea el Procedimiento 7 para LEUC.

Si hay micromegacariocitos presentes, vea el Procedimiento 8 para LEUC.

Si hay presente aglutinacin de ERIT, vea el Procedimiento 8 para ERIT.

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Si hay plaquetas gigantes presentes, vea el Procedimiento 4 para LEUC.

Si hay agrupaciones de plaquetas, vea el Procedimiento 5 para LEUC.

Si hay plaquetas satlites, vea el Procedimiento 6 para LEUC.

2. Manipule el especmen de la forma siguiente:

a. Obtenga un resultado de LEUC corregido usando lo mismo un hemocitmetro o un instrumento semi-automatizado tal como un COULTER COUNTER Modelo F Z.

b. Si los resultados del porciento diferencial son sealizados, detecte un frotis de sangre para verificar los resultados diferenciales del instrumento.

1). Si el diferencial del instrumento viene de acuerdo con la deteccin, reporte el diferencial del instrumento.

2). Si la deteccin no viene de acuerdo con el diferencial del instrumento, realice un diferencial manual.

C. Si el resultado de LEUC corregido y/o los resultados de un diferencial manual van a ser reportado, calcule de nuevo el diferencial absoluto de la forma siguiente:

% Clulas (reportado) x LEVC correcto Nmero Absoluto =

100


Referencias

La seal * *R tambin puede ser producida por la presencia de microorganismos en la muestra. Esta posibilidad debe ser considerada cuando se revise la lmina, y si estn presentes, indicado en el reporte.

Marshall BA, Theil KS, Brandt JT. Abnormalities of Leukocyte Histograms Resulting from Microorganisms. Am J Clin Pathol, 1990; 93: 73-76.

____________________ ----------------------------______ --____ ~-------- 19 TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002

PROCEDIMIENTO 3 Aglutinacin de LEUC O LEUC Pequeos

Principio Todas las partculas 35 fL o ms son contadas como LEUC usando el Principio Coulter. Los resultados pueden ser falsamente disminuidos cuando partculas, tales como las aglutininas de los LEUC se encuentren presentes o si la muestra contiene LEUC anormalmente pequeos que caigan por debajo del umbral de 35

. fL Y son excluidos del recuento.




Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el (]) @ @) y dentro de las 48 horas para @) .

Procedimiento

1. Si los resultados de LEUC son cuestionables, revise el frotis para verificar el resultado de LEUC (vea el Apndice). Si el resultado de LEUC del instrumento est correcto, reporte el resultado del instrumento.

IMPORTANTE Cercirese de que el frotis de sangre fue hecho recientemente del tubo que est siendo analizado. Algunas anormalidades, tales como aglutinaciones de LEUC pueden no aparecer hasta que la muestra no haya estado a temperatura ambiente por un rato.

2. Si la lmina muestra aglutinacin de LEUC, vuelva a extraer la muestra. Si los LEUC se aglutinan en la muestra fresca, tome una muestra de la yema del dedo, sin usar anticoagulantes y realice un recuento manual de leucocitos usando un hemocitmetro.

3. Si la lmina muestra LEUC pequeos, efecte un recuento con el hemocitmetro o analice la muestra en un instrumento semi-automatizado tal como un COUL TER COUNTER de la Serie F Z con un Analizador CHANNELYZER adjunto. Cercirese de que el umbral se encuentre ajustado para incluir todos los LEUC presentes.

~~~~~~ __ ~ ____________________________________________ 20 TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002


4. Si los resultados del diferencial son sealizados, detecte una muestra de sangre para verificar los resultados del diferencial del instrumento.

a. Si el diferencial del instrumento concuerda con la deteccin, reporte el diferencial del instrumento.

b. Si la deteccin no concuerda con el diferencial del instrumento, realice un diferencial manual en un frotis hecho a partir de una extraccin capilar.

5. Si un resultado de LEUC corregido y/o los resultados de un diferencial manual deben ser reportados, recalcule los nmeros absolutos del diferencial de la forma siguiente:

% Clulas (reportadas) x LEVC Correctos Nmero Absoluto =

100


Referencias

Los resultados de LEUC pueden ser sealizados bajo en muestras con agregacin de granulocitos en vitro debido a que un grupo de varios LEUC es contado como una sola partcula. Volver a extraer esta muestra en otro tipo de anticoagulante no corrige el resultado de LEUC.

Los pacientes con leucemina linfoctica crnica de la clula pueden ser linfocitos muy pequeos que caen por debajo del umbral de 35 fL y no son incluidos en el recuento de LEUC.

Epstein H y Kruskall M. Spurious Leukopenia Due to In Vitro Granulocyte Aggregation. Ame J Clin Pathol, 1988; 89; 652-655

Rohr LR y Rivers FM. Spurious Leukopenia Due to In Vitro Granulocyte Aggregation. Ame J Clin Pathol, 1990; 93; 572-574.

Coulter Corporation, Seminars & Case Studies, The Automated Differential. Pierre, R., Mayo Foundation, Rochester, MN, 1989.

____________________________________________________________________ 21

~ ) TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002

PROCEDIMIENTO 4 Eritrocitos Nucleados

Principio Todas las paltculas 35 fL o ms son contadas como LEUC usando el Principio Coulter. Algunas clulas rojas nucleadas pueden caer en o por encima de este umbral de 35 fL Y son incluidas en el resultado de LEUC.


Procedimiento



Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el @ @ @) y dentro de las 48 horas para @J .

1. Si el resultado de LEUC es sealizado con un * o *R y/o un mensaje de Sospechoso tal como NRBC Platelet Clumps se produce, revise un frotis de sangre para concordar del LEUC automatizado con un frotis manual estimado de los LEUC. (Vea el Apndice).

a. Si concuerdan, reporte el resultado de LEUC automatizado.

b. Si no concuerdan, siga al Paso 2.

2. Revise el frotis de sangre para determinar si todos las clulas nucleadas fueron lo suficientemente grandes para ser contadas y fueron, por lo tanto, incluidas en el resultado de LEUC.

a. Si todos los eritrocitos nucleados fueron contados, el resultado de LEUC es el recuento total de Erit Nuc; proceda al paso 3.

b. Si no todos los Erit Nuc fueron contados, efecte un recuento con el hemocitmetro o analice la muestra en un instrumento semi-automatizado tal como un COUL TER COUNTER de la Serie F Z con un Analizador CHANNELYZER adjunto. Cercirese de que el umbral se encuentre ajustado para incluir todos los eritrocitos nucleados del recuento.

3. Corrija el resultado de LEUC de la forma siguiente:

a. Determine el nmero de Erit Nuc/ 100 LEUC del frotis de sangre.

___________________________________________________________________ 22 TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002


b. Emplee la frmula siguiente:

Recuento total de clulas nuc!eadas x 100 Resultado de LEUC corregido =

100 + nmero Erit Nuc /100 LEUC

4. Use el protocolo de su laboratorio (tal como una comprobacin H & H) para verificar el resultado de Hgb. La turbidez de los eritrocitos nucleados puede elevar falsamente el valor de la Hgb.

a. Si el valor de la Hgb es aceptable, reporte el resultado.

b. Si el valor de Hgb aparece elevado.

1). Verifique el resultado de Hgb realizando un Hgb manual de acuerdo con el procedimiento NCCLS H15-A2. La lectura de hemoglobina debe ser realizada en el sobrenadante despus de la centrifugacin de un tubo alcuota para retirar el ncleo de las clulas rojas estromalizadas.

2). Si va a ser reportado un resultado corregido, calcule la CHM y la CHCM de la forma siguiente:

Hgb Corregida CHM= x 10

RBC

Hgb Corregida CHCM= x 100

Hct

5. Revise el grfico de datos, grfico de dispersin o histograma para ver si hay interferencia con el recuento de linfocitos. Si se halla alguna interferencia,

a. Realice un diferencial manual.

b. Calcule los nmeros absolutos diferenciales de la forma siguiente:

% Clulas (reportadas) x LEUC Correctos Nmero Absoluto =

100

___________________________________________________________________ 23 TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gcos para Sangres Anormales" - febrero del 2002



Referencias

Cuando los Erit Nuc se encuentran presentes en grandes cantidades, el resultado de la Hgb puede ser errneamente elevado debido a la turbidez causada por la presencia de ncleos de clulas rojas en el bao de LEUC.

Los Eri Nuc muy inmaduros con ncleos grandes puede no causar una seal si todos los ncleos caen por debajo del umbral de 35 fL. En este caso, el resultado de LEUC es en realidad el recuento total de clulas nucleadas, (todos los LEUC + todos los Eri Nuc).

Los Eri Nuc muy inmaduros con ncleos grandes puede no causar una seal si todos los ncleos caen por debajo del umbral de 35 fL. En este caso, , el resultado de LEUC incluye solamente los LEUC y es, por lo tanto, correcto.

Cowell K. Hematology No. HA, Tech Sample, American Society of Clinical Pathologists, 1996.

______________ ~----------------------~----~~--~~~-------24 TPS- H114-A2-o2 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002

PROCEDIMIENTO 5 Crioglobulinas y/o Criofibringenos

Principio Todas las partculas 35 fL o ms son contadas como LEUC usando el Principio Coulter. Las crioglobunlinas, las cuales son protenas de suero con solubilidad

. dependiente de la temperatura, pueden precipitarse. Si estas partculas precipitadas son 35 fL o mayores son incluidas en el resultado de LEUC.




Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el lKl @ @) y dentro de las 48 horas para @) .

Procedimiento

1. Seleccione y efecte alguna de las acciones correctivas siguientes:

a. Caliente el especmen a 37C durante un mnimo de 15 minutos y procselo de nuevo. Un tiempo de incubacin mayor puede ser requerido para eliminar la interferencia.

b. Coleccione una muestra nueva y anlcela inmediatamente. Mantenga la muestra caliente hasta el anlisis usando arena caliente, un calentador, una taza de agua a 3?OC o colectar el espcimen cerca del analizador.

2. Si el problema recurre con la muestra calentada, obtenga un resultado de LEUC usando un hemocitmetro.

3. Si los resultados del diferencial son sealizados, detecte un frotis de sangre para verificar los resultados diferenciales del instrumento.

a. Si el diferencial del instrumento viene de acuerdo con la deteccin, reporte el diferencial del instrumento.

b. Si el diferencial del instrumento no concuerda con la deteccin,

1). Efecte un diferencial manual

2). Calcule los nmeros absolutos diferenciales de la forma siguiente:

_______________________________________________________________ 25 TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002


% Clulas (reportadas) x LEVC Correctos Nmero Absoluto =

100

4. Las crioglobulinas pueden tambin afectar los resultados de ERIT, Plq Y VPM. Si calentar la muestra no corrige estos resultado, obtenga los recuentos de ERIT y Plq usando un hemocitmetro.

5. Use el protocolo de su laboratorio (tal como una comprobacin H & H) para verificar el resultado de Hgb. La turbidez de los eritrocitos nucleados puede elevar falsamente el valor de la Hgb.

a. Calentar el espcimen debe corregir los resultados de la hemoglobinaSi el valor de la Hgb es aceptable, reporte el resultado.

b. Si el valor de Hgb aparece elevado.

3). Verifique el resultado de Hgb realizando un Hgb manual de acuerdo con el procedimiento NCCLS H15-A2. La lectura de hemoglobina debe ser realizada en el sobrenadante despus de la centrifugacin de un tubo alcuota para retirar el ncleo de las clulas rojas estromalizadas.

4). Si va a ser reportado un resultado corregido, calcule la CHM y la CHCM de la forma siguiente:


RBC


Hct


Los frotis de sangre pueden revelar numerosas agrupaciones amorfas de glbulos de crioprotenas que pueden ser o no teidas.

Las crioglobulinas pueden ser vistas sin un estado de enfermedad subyacente o en casos de desrdens neoplsticos, autoinmunes o infecciones.

__ ~ ___________________________________________________________ 26 TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002

Referencias


Gulati GL, Piao YF, Song AS, Kim WB, Hyun BH, Interference of Cryoproteins in the Blood With Automated eBe. Lab Med, 1995; 26: 138-142.

Banfi G Bonini PA. Detection of Cryoglobulins by COULTER COUNTER Model S-Plus IV/D. C1in Lab Haemat. 1988; 10: 453-459.

Gullani GL, Hyun BH, Gabaldon H .. Falsely Elevated Automated Leukocyte Counts on Cryoglobulinemic and/or Cryofibrinogenic Blood Samples. Laboratory Medicine, 1977; 8; 12: 14-16.

~~~~~~ __ ~~ _____________________________________________ 27 TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002

PROCEDIMIENTO 6 Fragmentos de LEUC

Principio Todas las partculas 35 fL o ms son contadas como LEUC usando el Principio Coulter. Los LEUC que se han fragmentado y caen por debajo del umbral de 35 fL no son incluidas en el resultado de LEUC.


Reactivos



Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el ~ @ @) y dentro de las 48 horas para @) .

El fluido diluente preferido es el ISOTON IlI.

Albmina, 22% bovina.

Procedimiento

.1. Verifique el resultado de LEUC detectando un frotis de sangre. (Vea el Apndice)

a_ Si el estimado de LEUC del frotis y el resultado de LEUC del instrumento concuerdan, reporte el resultado del instrumento.

b. Si hay ms de un 2% de clulas rotas o "clulas borrosas" en la lmina, proceda al Paso 2.

2. Prepare una lmina de sangre fresca de una mezcla de una gota 22% de albmina bovina a 5 gotas de sangre (para reducir la formacin de clulas borrosas). Detecte la lmina teida y estime los LEUC. (Vea el Apndice).

a_ Si el estimado de LEUC del frotis y el del instrumento concuerdan ahora, reporte el resultado del instrumento.

b. Si el estimado de LEUC del frotis de sangre y el del instrumento no concuerdan, proceda al Paso 3.

___________________________________________________________________ 28

TPS H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002


3. Efecte un recuento de leucocitos usando lo mismo un hemocitmetro o un instrumento semi-automatizado tal como un COULTER COUNTER Modelo F o un instrumento de la Serie Z.

4. Si un resultado corregido de LEUC va a ser reportado.

a. Determine los porcientos de clulas del diferencial manual.

b. Calcule los nmeros absolutos diferenciales de la forma siguiente:


100

5. Revise el histograma de plaquetas a ver si existe una posible interferencia de los fragmentos celulares. Si aparecen como que interfieren con los resultados de Plq y VPM: .

a. Obtenga un recuento de plaquetas preciso usando un hemocitmetro;se prefiere el microscopio de fase de contraste.

b. Observe el tamao de las plaquetas (pequeo, normal o grande) del frotis de sangre y verifique el nmero.


Referencias

Las clulas borrosas o fragmentacin de las clulas son el resultado de la fuerza mecnica usada para hacer una lmina. Los frotis centrifugados raramente muestras la presencia de clulas borrosas.

Los pacientes leucmicos pueden, en casos raros, tener LEUC fragmentados parecidos a plaquetas. Los recuentos de plaquetas normales o casi normales cuando un paciente est sangrando, pueden ser una indicacin de este problema. La inspeccin visual de la lmina puede no revelar el problema ya que los fragmentos son difciles de distinguir de la plaquetas. En casos no resueltos, puede ser apropiado indicarle sealizaciones del instrumento al mdico.

Nosanchuk JS. The Effect of Smudge CeHs on Leukocyte Counting - Are Chamber Counts Necessary? Am J Clin Pathol, 1979; 71; 2: 161-166

Koepke JA. Tips on Technology, MLO, 1992; 24; 7: 14.

Hammerstrom J. Spurious Platelet Counts in Acute Leukaemia with DIC Due to CeH Fragmentation. Clin Lab Hemat, 1992; 14: 239-243,

__________________________________________________________________ 29 TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales"- febrero del 2002

PROCEDIMIENTO 7 Eritrocitos Resistentes al Lyse

Principio Todas las partculas 35 fL o ms son contadas como LEUC usando el Principio Coulter. Los eritrocitos que son resistentes allyse pueden elevar espuriamente el resultado de LEUC y el de la hemoglobina debido a su presencia y producir turbidez.

Los ERIT tambin son medidos usando el Principio Coulter. Los eritrocitos que son resistentes al Iyse pueden permanecer rgidos a medida que pasan a travs de la apertura de ERIT. Estas clulas son detectadas como mayores que lo que son en realidad y pueden causar que el VCM y posiblemente el ADE sean erroneamente elevados.


Reactivos



Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el () @) @) y dentro de las 48 horas para @] .

El fluido diluente preferido es el ISOTON III.

Agua destilada.

Procedimiento

1. Verifique el resultado de LEUC detectando un frotis de sangre (Vea el Apndice).

a. Si el estimado de LEUC del frotis y el resultado de LEUC del instrumento concuerdan, reporte el resultado del instrumento.

b. Si el resultado de LEUC del instrumento y el del frotis no concuerdan, realice un recuento del hemocitmetro.

2. Si el resultado corregido de LEUC del hemocitmetro va a ser reportado o si los resultados del diferencial son sealizados con una R, corrija los nmeros absolutos del diferencial de la forma siguiente:

a. Determine los porcientos de clulas con un diferencial manual.

___________________________________________________________________ 30 TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002


b. Calcule los nmeros absolutos del diferencial de la forma siguiente:


100

3. Use el protocolo de su laboratorio (tal como una comprobacin H & H) para verificar el resultado de Hgb. La turbidez de los eritrocitos resistentes puede elevar falsamente el valor de la Hgb.

a. Si el valor de la Hgb es aceptable, reporte el resultado.

C. Si el valor de Hgb aparece elevado.

1). Verifique el resultado de Hgb realizando un Hgb manual de acuerdo con el procedimiento NCCLS H15-A2.

a. Antes de leer, aada una cantidad equivalente de agua destilada al tubo para irrumpir en los ERIT resistentes.

b. Mezcle bien V entonces lea la Hgb manual, multiplique el resultado por 2 para obtener la Hgb corregida total.

2). Si va a ser reportado un resultado corregido de Hgb, calcule la CHM V la CHCM de la forma siguiente:


RBC


Hct

4. Estime la anisocitosis del frotis de sangre. Si la anisocitosis viene de acuerdo con el ADE, reporte el ADE del instrumento. Sino, reporte la anisocitosis del frotis.

Nota del Procedimiento

Los eritrocitos que contienen una gran cantidad de Hemoglobina S vio Hemoglobina C pueden ser resistentes a la lsis.

~ __ ~ ________ ~~ __________________________________ 31 TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero de12002

PROCEDIMIENTO 8 Micromegacariocitos

Principio Todas las partculas 35 fL o ms son contadas como LEUC usando el Principio Coulter. Todas las partculas de 36 fL o ms son contadas como ERIT usando el Principio Coulter. Todas las partculas entre 2 y 20 fL son contadas como

. plaquetas usando el Principio Coulter.

Si el recuento de plaquetas es mayor de 20 x 103 clulas/~L, la computadora suaviza cada histograma de plaquetas y usa la informacin para ajustar la curva normal de un logaritmo de O a 70 fL. Ciertas comprobaciones distribucionales son entonces realizadas contra la curva ajustada. Si no se cumple con alguno de los criterios, ocurre una condicin de no ajuste. El recuento de plaquetas y VPM es entonces derivado de la parte del histograma entre 2 y 20 fL.

Los micromegacariocitos pueden variar en tamao y son contados en ambos baos de LEUC y ERIT dado a que el volumen de la clula excede el umbral correspondiente.




Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el (J @ @) y dentro de las 48 horas para @) .

Procedimiento

1. Si el resultado de LEUC es sealizado con un * o *R y/o el histograma de plaquetas es consistente con posible interferencia, revise un frotis de sangre para ver la concordancia del LEUC automatizado con un frotis manual estimado del resultado de LEUC. (Vea el Apndice).

a. Si concuerdan, reporte el resultado de LEUC automatizado.

b. Si no concuerda con el resultado del instrumento, proceda al Paso 2.

2. Obtenga un recuento total de clulas nucleadas usando lo mismo un hemocitmetro o analice la muestra en un instrumento semi-automatizado tal como un COULTER COUNTER de la Serie F Z con un Analizador CHANNEL YZER adjunto. Cercirese de que el umbral se encuentre ajustado para incluir todas las clulas nucleadas del recuento.

_______________________________________________________________ 32 TPS Hl14-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002


3. Corrija el resultado de LEUC de la forma siguiente:

a. Determine el nmero de micromegacariocitos por 100 LEUC del frotis de sangre.

b. Use la frmula siguiente:

Recuento Total de Clulas Nucleadas x 100 Recuento de LEUC corregido =

100 + micromegacariocitos /100 LEUC

4. Si los resultados del diferencial son sealizados, detecte un frotis de sangre para verificar el diferencial del instrumento.

a. Si el diferencial del instrumento concuerda con el frotis, reporte el diferencial del instrumento.

b. Si no concuerda:

1). Efecte un diferencial manual

2). Calcule los nmeros absolutos del diferencial de la forma siguiente:


100


Referencia

Los micromegacariocitos son vistos comunmente en las leucemias mielocticas y mielomonocticas, los sndromes mieloproliferativos y la crisis de blastocitos de la leucemia mielgena crnica.

Los micromegacariocitos pueden ser confundidos por linfocitos.

Las plaquetas gigantes y los Erit Nuc con frecuencia son observados con los micromegacariocitos. El recuento total de nucleados debe incluir los tres tipos de clulas anormales.

Cowell K. Hematology No. H-4, Tech Sample, American Society of Clinical Pathologists, 1996.


~

~

CONTENIDO 4

IMPORTANTE los procedimientos siguientes son ofrecidos solamente como gua. Siempre siga y cumpla con el protocolo de su laboratorio


Procedimiento 1 Obtencin de los Resultados Correctos cuando el Resultado de ERIT se encuentra Extralimitado (+++++) o por Encima de la Linealidad (+) 36

Procedimiento 2 Resultados de ERIT Disminuidos 39

Procedimiento 3 Resultados de Hemoglobina Aumentados 41

Procedimiento 4 Resultados de Hemoglobina Disminuidos 43

Procedimiento 5 Resultado de VCM Aumentado 45

Procedimiento 6 Resultado Bajo de VCM 47

Procedimiento 7 Distribuciones Sealizadas de Eritrocitos 49

Procedimiento 8 Aglutinacin de ERIT 51

Procedimiento 9 ERIT Pequeos o Fragmentos de Erit 55

Procedimiento 10 Muestras Hemolizadas 57

~~~~ __ ~ __ ~~ __ ~ __ ~~ ____ ~ __________ ~~ __ ~~~ _______ 34 TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002

Procedimiento 11 Muestras Lipmicas _______________ _

Procedimiento 12 Qumicas Anormales (Sodio, Glucosa o BUN) ____________ _

CONTENIDO 4

60

63

=-~~----------------------------------------------35 TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002

PROCEDIMIENTOS CON ERITROCITOS

PROCEDIMIENTO 1 Obtencin de los Resultados Correctos cuando el Resultado de ERIT se encuentra Extralimitado (+++++) o por Encima de la Linealidad

Principio

Los resultados de ERIT generados por un sistema GEN.S son considerados extralimitados cuando el resultado es > 20.00 x 106 clulas! f.-. Los resultados de ERIT generados por un analizador STKS MAXM son considerados extralimitados cuando el resultado es >9.99 x 106 clulas! f.-. (Vea el Manual de Referencia de su instrumento para la definicin exacta de la extralimitacin).

Una extralimitacin del resultado de ERIT es reemplazada por el cdigo (+++++) y cualquier parmetro derivado del parmetro extralimitado es reemplazados por el cdigo ( ..... ) para indicar un clculo incompleto.

La linealidad en el sistema GEN.S es de 0.00 a 8.00 x 106 clulas! f.- . El GEN.S proyecta una "+" a continuacin del resultado que se encuentre por encima de la escala lineal, pero por debajo del lmite de extralimitacin. La linealidad en los analizadores STKS, MAXM y ONYX es de 0.0 a 7.0 106 clulas! f.-. El analizador ONYX proyecta una" +" a continuacin del resultado que se encuentre por encima de la escala lineal, pero por debajo del lmite de extralimitacin.

Para obtener un resultado reportable, debe ser diluuda una alcuota de la muestra de sangre total o entera y vuelta a procesar. El resultado es entonces multiplicado por el factor de dilucin para obtener el resultado de ERIT correcto.


Reactivos



Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el ~ @ @) y dentro de las 48 horas para @).

Diluente - ISOTON III es el fluido diluente preferido.

__________________________________________________________________ 36;



Procedimiento

1. Si el resultado de ERIT se encuentra extralimitado (+++++), determine un valor de base numrica siguiendo las instrucciones a continuacin:

(ID Logre el acceso a Bsqueda en la Base de Datos y recupere la muestra en cuestin. Haga resaltar la muestra en la pantalla. Seleccione F3 Edit y entonces oprima PgDn para proyectar la segunda pgina. El valor numrico promedio del resultado extralimitado aparece en la parte inferior de la pantalla.

Este resultado no puede ser editado, impreso o transmitido a una computadora principal. No debe ser reportado. Este nmero es simplemente un valor de base numrica para determinar la relacin de dilucin necesaria para traer el resultado de ERIT dentro de la escala lineal.

Logre el acceso a Bsqueda en la Base de Datos y recupere la muestra en cuestin. Haga resaltar la muestra en la pantalla. Seleccione F3 Edit Y entonces oprima End para proyectar la segunda pgina. El valor numrico promedio del resultado extralimitado aparece en la parte inferior de la pantalla.

Este resultado no puede ser editado, impreso o transmitido a una computadora principal. No debe ser reportado. Este nmero es simplemente un valor de base numrica para determinar la relacin de dilucin necesaria para traer el resultado de ERIT dentro de la escala lineal.

IMPORTANTE

Si el resultado de ERIT es (+++++), procese un ciclo en blanco para evitar el acarreo a la muestra siguiente.

2. Usando el diluente y un sistema de pipetear apropiadamente calibrado, prepare la dilucin ms baja para llevar el resultado de ERIT dentro de la escala lineal.

IMPORTANTE

Las diluciones de las muestras pueden producir resultados diferenciales errneos. No reporte el diferencial de la muestra diluida.

________________ --------------------------------------------37 TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002


3. Cicle la muestra diluida inmediatamente.

4. Multiplique los resultados del Paso 3 por el factor de dilucin para obtener un resultado de ERIT correcto.

5. Reporte el resultados de VCM, CHM. CHCM y ADE de la dilucin.

6. Si los resultados finales de la dilucin de ERIT son significativamente diferentes de los resultados no diluidos de ERIT, corrija el Hct efectuando un hematocrito centrifugado de acuerdo con el procedimiento de la NCCLS H7-A2 o calcule el Hct de la forma siguiente:

VCM (Paso 5) x ERIT (Paso 4) Hct=

10

7. Revise el histograma de plaquetas y el frotis de sangre para la presencia de ERIT pequeos o fragmentos de ERIT. Si hay presentes algunos de stos y aparecen como interferentes con los resultados de Plq y VPM:

a. Obtenga un recuento de plaquetas correcto usando un hemocitmetro, se prefiere el microscopio por fase de contraste.



Un Hct centrifugado es aproximadamente de un 2% a un 5% ms elevado que el Hct calculado debido al plasma atrapado.

Cualquier nmero grande de partculas mayores de 36 fL (LEUC y/o plaquetas gigantes) pueden causar que los ERIT sean sealados como altos.

__________________________________________________________________ 38



PROCEDIMIENTO 2 Resultados de Eritrocitos Disminuidos

Principio Todas las partculas de 36 fL o ms son contadas como ERIT usando el Principio Coulter. Un resultado de ERIT puede ser sealizado como bajo en cualquier muestra que tenga aglutinacin o fragmentacin de los ERIT.


Procedimiento



Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el @ @ @) y dentro de las 48 horas para @) .

IMPORTANTE Cercirese de que el frotis de sangre fue hecho recientemente del tubo que est siendo analizado. Algunas anormalidades, tales como agrupaciones de plaquetas y aglutinacin de ERIT pueden no aparecer hasta que la muestra no haya estado a temperatura ambiente por un rato.

1. Verifique que la muestra no est coagulada. Si existe alguna aglutinacin (macroscpica o microscpica) obtenga una nueva muestra.

a. Si la muestra nueva tambin contiene aglutinados de ERIT, vea el Procedimiento 8 para ERIT.

b. Si no hay aglutinaciones de ERIT, pero el resultado de ERIT puede ser incorrecto debido a ERIT pequeos, vea el Procedimiento 6 el Procedimiento 9 para ERIT.


Las muestras que contienen ERIT microcticos pueden tener resultados de plaquetas sealizados como altos o de no ajuste.



La aglutinacin en vivo o en vitro de las clulas (aglutininas fras o cualquier proceso de aglutinacin) puede producir bajas seales en los resultados de LEUC, ERIT y Plq.

La recoleccin/manipulacin impropia de la mestra puede causar tambin aglutinacin de ERIT.

~~~~~~--~~~~--~---------------------------------40 TPS- H114-A2-02 UProcedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormalesl1 - febrero del 2002


PROCEDIMIENTO 3 Resultado Aumentado de Hemoglobina

Principio

La hemoglobina es medida fotomtricamente usando un procedimiento de cianometahemoglobina modificado. La absorbancia del pigmento es directamente proporcional a la concentracin de hemoglobina de la muestra. Cualquier substancia que cause turbidez interfiere con la lectura de hemoglobina.


Reactivos

.. Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.


.. Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el [J @ [Q] y dentro de las 48 horas para @] .

El Diluente ISOTON nI es el fluido diluente preferido. Procedimiento

1. Si el resultado de LEUC es alto o se encuentra extralimitado, vea el Procedimiento 1 de LEUC, comience en el Paso 7. Si el resultado de LEUC es normal proceda al Paso 2.

2. Inspeccione visualmente el plasma para ver si tiene turbidez o hemlisis permitiendo que la muestra se asiente o centrifugando una alcuota de la muestra.

a. Si se nota turbidez, vea el Procedimiento 11 de ERIT.

b. Si se nota hemlisis, vea el Procedimiento 10 de ERIT.

C. Si no hay turbidez o hemlisis presente! proceda al Paso 3.

3. Usando diluente y un sistema de pipetear preciso, prepare la dilucin ms baja que va a traer el resultado de Hgb dentro de la escala reportable.de laboratorio.

4. Cicle la muestra diluida tan rpidamente como sea posible.

5. Multiplique el resultados de Hgb del Paso 4 por el factor de dilucin para obtener el resultado corregido de Hgb.



Referencias

6. Reporte la CHM y la CHCM de la dilucin.

los resultados de Hgb pueden ser aumentados en las muestra cuyo plasma es turbio debido a una anormalidad tal como la lipemia, extralimitacin de los lEUC o ERIT no estromalizados.

Las emulsiones de nutricin parenteral tambin han sido asociadas con elevaciones del resultado de hemoglobina.

Las proteinas del plasma anormales y/o elevadas, tales como el aumento del IgM visto en la macroglobulinemia de Waldenstrom, puede reaccionar con el reactivo ltico y causar la precipitacin de las protenas la cual interfiere con el Hgb.

Si el resultado de Hgb es afectado, los resultados de CHM y CHCM son tambin afectados.

Nicholls PD. Erroneous Model S COUl TER COUNTER Values on Patients Undergoing Pa rentera I Nutrition with Intravenous Upid Emulsions. Med lab Tech 1972; 30: 293-295.

linz LJ. Elevation of Hemoglobin MCH and MCHC by Paraprotein: How to Recognize and Correct the Interference. Clin lab Scien[ 1994, 7; 4: 211-212.

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PROCEDIMIENTO 4 Resultado Disminuido de Hemoglobina

Principio La hemoglobina es medida fotomtricamente usando un procedimientos de cianometahemoglobina modificado. La absorbancia del pigmento es directamente proporcional a la concentracin de hemoglobina de la muestra.




Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el @ @ (Q) y dentro de las 48 horas para @ .

Procedimiento

1. Repita la muestra en el modo manual l secundario o de frasco abierto.

2. Use el protocolo de su laboratorio para verificar los resultados de Hgb. Mtodos que pueden ser usados para verificar la Hgb incluyen:

El Hgb yel Hct concuerdan (CHCM dentro de la escala aceptable)

El hemoglobinmetro

La Hemoglobina Manual ( de acuerdo al procedimiento NCCLS H15-A2)

3. Si el Hgb es incorrecto, reporte los resultados del manual de hemoglobina o hemoglobinmetro.

4. Calcule la CHM y la CHCM, si es necesario, de la forma siguiente:

Hgb Corregida CHM= xl0

RBC


Hct

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TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales"- febrero del 2002



Las muestras analizadas en el modo automtico en el sistema GEN S pueden dar errores de aspiracin ( todos los resultados con un fondo rojo y sealizados \\P/'). Esta codificacin de error indica que la Hemoglobina era demasiado baja para que los detectores de sangre la detectaran.

Las muestras analizadas en el modo automtico en un alizador GEN S pueden dar errores de aspiracin (. . ... ) para todos los parmetros. Esta codificacin de error indica que la Hemoglobina era demasiado baja para que los detectores de sangre la detectaran.

Las muestras analizadas en el Analizador pueden dar errores de aspiracin Y los resultados van a ser sealizados con una RR. Esta codificacin de error indica que la Hemoglobina era demasiado baja para que los detectores de sangre la detectaran.

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PROCEDIMIENTOS CON Er~/TI~OCITOS

PROCEDIMIENTO 5 Resultado Aumentado de VCM

Principio

L.as partculas entre 24 y 360 fL son detectadas usando el Principio Coulter. Estas partculas se usan para construir un histograma de ERIT que refleje la distribucin de los eritrocitos que estn siendo analizados. Cuando la acumulacin de datos para el histograma de ERIT se completa, el resultado de VCM se deriva usando la informacin de partculas de 36 a 360 fL.

La distribucin de volumen de clulas rojas normal es unimodal y Gaussiano. Las curvas no Gaussianas pueden ser indicadores de desrdenes discretos, reconocibles como la fragmentacin de los eritrocitos, recuperacin de deficiencias nutricionales, transfusin o aglutininas fras.




Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el (]] @ @] y dentro de las 48 horas para @] .

Procedim iento

1. Use el protocolo de su laboratorio para verificar los resultados de VCM. Detectar el frotis de sangre es un mtodo aceptable. Si el resultado de VCM parece incorrecto debido a:

Aglutininas fras o aglutinacin de ERIT, vea el Procedimiento 8 para RBC.

Extralimitacin de LEUC, vea el Procedimiento 1 y comience en el Paso 7.

Niveles anormales de sodio, glucosa o BUN, vea el Procedimiento 12 para ERIT.

2. Corrija el Hct, VCM y CHCM, si es necesario, de la forma siguiente:

a. Efecte un hematocrito centrifugado de acuerdo con el procedimiento de la NCCLS H7 -A2.

--------------______________________________________________________ 45 TPS- H114-A2-02 l/Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002


b. Calcule el VCM:

Hct (Centrifugado) x 10 VCM (corregido)

RBC

C. Calcule la CHCM:

Hgb Corregida CHCM x 100

Hct (centrifugado)

Notas del Proced miento

Un Hct centrifugado es aproximadamente un 2/0 a un 51o ms elevado que un Hct calculado debido al plasma atrapado.

Cualquier aglutinacin (in vivo o in vitro) tales como las aglutininas frast pueden causar que el VCM sea sealizado como alto.

La hiperglicemia severa ha sido asociada cono una macrocitosis espuria debido a la hiperosmolaridad de los ERIT comparado con el diluente isotnico.

La extralimitacin de los LEUC puede causar que el VCM sea aumentado debido al nmero significativo de LEUC que estn siendo medidos en el bao . de ERIT.

Los reactivos que han estado congelados y no han sido mezclados completamente antes del uso, pueden alterar el VCM.

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PROCEDIMIENTO 6 Resultado Bajo de VCM Principio

Las partculas entre 24 y 360 fL son detectadas usando el Principio Coulter. Estas partculas se usan para construir un histograma de ERIT que refleje la distribucin de los eritrocitos que estn siendo analizados. Cuando la acumulacin de datos para el histograma de ERIT se completa, el resultado de VCM se deriva usando la informacin de partculas de 36 a 360 fL.

La distribucin de volumen de clulas rojas normal-es unimodal y Gaussiano. Las curvas no Gaussianas pueden ser indicadores de desrdenes discretos, reconocibles como la fragmentacin de los eritrocitos recuperacin de deficiencias nutricionales, transfusin o aglutininas fras.




Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el (] CM] [Q) y dentro de las 48 horas para @) .

Procedimiento

1. Examine el extremo inferior del histograma de ERIT

a. Si las partculas se encuentran localizalizadas por debajo de los 36 fL, decida si esta prdida puede estar afectando significativamente los resultados del parmetro de ERIT.

Si el nmero de partculas por debajo del umbral es significativo, vea el Procedimiento 9 para ERIT.

Si el nmero de partculas por debajo del umbral es insignificante, proceda al Paso 2.

2. Use el protocolo de su laboratorio para verificar los resultados de VCM. Detectar el frotis de sangre es un mtodo aceptable.

3. Corrija el Hct, VCM y CHCM, si es necesario de la forma siguiente:

Efecte un hematocrito centrifugado de acuerdo con el procedimiento de la NCCLS H7 -A2.

----------------__________________________________________________ 47 TPS- H114A202 itprocedmentos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002


b. Calcule el VCM:

Hct (Centnfugado) x 10 VCM (corregido) =

RBC

c. Calcule la CHCM:


Hct (centrifugado)

-4. Revise el histograma de plaquetas para ver si hay una posible interferencia. Si parece que ERIT pequeos o fragmentos de ERIT pequeos estn interfiriendo con los resultados de Plq y VPM.

a. Obtenga un recuento correcto de plaquetas usando un hemocitmetro; se prefiere el microscopio de contraste de fase.

b. Observe el tamao de las plaquetas (pequeo normal o grande) del frotis de sangre y verifique el nmero.


Un Hct centrifugado es aproximadamente de un 2/0 a un 51o ms elevado que el Hct calculado debido al plasma atrapado.

Si estn presentes las partculas pequeas, tales como las crioglobulinas o plaquetas gigantes, son detectadas con los ERIT y puede causar que el VCM sea disminuido artificialmente.

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PROCEDIMIENTO 7 Distribuciones de Eritrocitos Sealizadas (R *) Principio

Las partculas entre 24 y 360 fL son detectadas usando el Principio Coulter. Estas partculas se usan para construir un histograma de ERIT que refleje la distribucin de los eritrocitos que estn siendo analizados. Cuando la acumulacin de datos para el histograma de ERIT se completa( la poblacin principal de ERIT es evaluada y los extremos izquierdo y derecho de esa poblacin son electronicamente eliminados. El ADE es calculado a partir de la desviacin estndar de la distribucin de eritrocitos reducida y es expresada como %CV.

La distribucin de volumen de clulas rojas normal es unimodat y Gaussiano. Las curvas no Gaussianas pueden ser indicadores de desrdenes discretos( reconocibles como la fragmentacin de los eritrocitos, recuperacin de deficiencias nutricionales( transfusin o agtutininas fras.




Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el 1]] @] (Q] y dentro de las 48 horas para @] .

Procedimiento

1.. Vuelva a procesar la muestra. Si la R * desaparecen, reporte el resultados de ADE no sealizado. Si no es as, proceda al Paso 2.

2.. Examine el frotis de sangre para determinar el grado de anisocitosis y proceda de la forma siguiente:

a. Si el grado de anisocitosis concuerda con el ADE, reporte el resultado sealizado.

b. Si el grado de anisocitosis no concuerda con el ADE, y aparecen:

ERIT de diferente escala de tamao, reporte entonces el grado de anisocitosis del frotis; el resultado de ADE representa solamente una poblacin de ERIT.

Recuento de LEUC elevado, vea el Procedimiento 1 de LEUC.

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Referencia

ERIT aglutinados, vea el Procedimiento 8 para ERIT.

Fragmentos de ERIT, vea el Procedimiento 9 para ERIT

Plaquetas gigantes, vea el Procedimiento 4 para PLQ

Plaquetas agrupadas, vea el Procedimiento 5 para PLQ

Coulter Currents. More on Why ADE is Flagged. 1983,3: 1-2.

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PROCEDIMIENTO 8 Aglutinacin de Eritrocitos

Principio

Las partculas entre 24 y 360 fL son detectadas usando el Principio Coulter. Estas partculas se usan para construir un histograma de ERIT que refleje la distribucin de los eritrocitos que estn siendo analizados. Cuando la acumulacin de datos para el histograma de ERIT se completa, el resultado de VCM se deriva usando la informacin de partculas de 36 a 360 fL.

Las muestras con aglutinacin de ERIT pueden conducir a resultados de ERIT que son falsamente reducidos y correspondientemente, resultados de VCM, HCM y CHCM falsamente elevados.




Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el @J @ (Q) y dentro de las 48 horas para @) .

Procedimiento

1. Caliente el espcimen a 3rC durante al menos 15 minutos entonces mezcle y vuelva a procesar la muestra.

a. Si el precalentamiento de la muestra invierte parte de la aglutinacin, pero no la elimina completamente, proceda al Paso 2.

b. Si el precalentamiento de la muestra no invierte significativamente la aglutinacin, proceda al Paso 3.

2. Si el precalentamiento de la muestra invierte parte de la aglutinacin, pero no la elimina completamente, trate con lo siguiente:

a. Colecte una muestra nueva y analcela inmediatamente. Cercirese de mantener la muestra a 37C hasta el anlisis. Esto puede ser realizado mediante el uso de arena caliente, un calentador, un recipiente con agua a 37C o colectando la muestra cerca del analizador.

__________________________________________________________________ 51


~.

~ .


b. Procedimiento para el Reemplazamiento del Plasma:

1). Centrifugue una alcuota de la muestra de sangre y marque la parte superior del nivel del plasma.

2). Usando una pipeta de transferencia, remueva cuidadosamente tanto del plasma como sea posible sin perturbar las capas celulares.

3). Reemplace el plasma con una cantidad equivalente de diluente tibio (37C).

4). Mezcle la muestra y cclela por el instrumento.

a. Use los resultados de LEUC yde plaquetas como gua para verificar los efectos de la dilucin.

b. Use los parmetros de ERIT de esta muestra.

IMPORTANTE

Las diluciones de la muestra pueden producir resultados diferenciales errneos. No reporte el diferencial de la muestra diluida.

3. Si el precalentamiento de la muestra nonvierte la aglutinacin, proceda de la forma siguiente:' .

a. Efecte un hematocrito centrifugado de acuerdo con el procedimiento de la NCCLS H7-A2.

b. Efecte una hemoglobina manual de acuerdo con el procedimiento de la NCCLS H15-A2.

C. Calcule la CHCM de la forma siguiente:


Hct (centrifugado)

d. Use el protocolo de su laboratorio para reportar los ERIT, VCM y CHM. Estos parmetros no son precisos en la presencia de agrupaciones de ERIT.

==~~~~~=--~~ ________________ . __________________ ~ _________ 52 TPS H114A202 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002


IMPORTANTE Cercirese de que el frotis de sangre fue hecho recientemente del tubo que est siendo analizado. Algunas anormalidades, tales como agrupaciones de plaquetas y aglutinacin de ERIT pueden no aparecer hasta que la muestra no haya estado a temperatura ambiente por un rato.

e. Estime la anisocitosis del frotis de sangre. Si la anisocitosis concuerda con el ADE, reporte el ADE. De lo contrario, reporte la anisocitosis solamente del frotis.

f. Verifique los resultados de LEUC. Si los resultados de LEUC son sealizados con una * una *R o el estimado de la lmina con concuerda con el recuento automatizado, obtenga una resultados de LEUC usando un hemocitmetro.

g. Si los resultados del diferencial son sealizados, detecte un frotis de sangre para verificar el diferencial del instrumento, reporte el diferencial del instrumento.

1). Si el diferencial del instrumento concuerda con la deteccin del frotis, reporte el diferencial del instrumento.

2). Si la deteccin no concuerda con el diferencial del instrumento, realice un diferencial manual.

h. Si un resultado de LEUC corregido y/o los resultados de un diferencial manual deben ser reportados, calcule de nuevo los nmeros absolutos del diferencial de la forma siguiente:

% Clulas (reportadas) x LEUC Corregido Nmero Absoluto =

100


Un Hct centrifugado es aproximadamente un 2% a un 5% ms elevado que un Hct calculado debido al plasma atrapado.



Referencias

Una CHCM elevada junto con un VCM elevado es una buena indicacin de una aglutinina fra. Los pacientes con ERIT microcticos tambin pueden tener aglutininas fras resultantes en una CHCM elevada con un VCM aparentemente normal.

Bessman JD, Banks D, Spurious Macrocytosis, A Common Clue to Eritrocyte Cold Agglutinins. Am J C!in Pathol, 1980; 74; 5: 797-800.

Behan KJ. Letters to the Editor. MLO Nov. 1996; 10.

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PROCEDIMIENTO 9 Eritrocitos Pequeos o Fragmentos de ERIT

Principio Todas las partculas 36 fL o ms son contadas como ERIT usando el Principio Coulter. Los ERIT ms pequeos de 36 fL no son incluidos en el resultado de ERIT conduciendo a resultados de eritrocitos falsamente disminuidos.




Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el () (0 @) y dentro de las 48 horas para @) .

Procedimiento

1. Examine el extremo inferior del histograma de ERIT y el extremo superior del histograma de plaquetas.

2. Si un nmero significativo de eritrocitos pequeos cae por debajo del umbral de ERIT de 36 fL, o si un nmero significativo de fragmentos de ERIT cae por encima del umbral de 36 fL, proceda al Paso 3. De lo contrario, proceda al Paso 4.

3. Correcte los parmetros de ERIT de la forma siguiente:

a. Obtenga un recuento correcto de ERIT usando lo mismo un hemocitmetro o analice la muestra en un instrumento semi-automatizado tal como un COULTER COUNTER de la Serie F Z con un Analizador CHANNELYZER adjunto. Cercirese de que el umbral se encuentre ajustado para incluir todas los ERIT, pero excluya cualquier fragmento de ERIT.

b. Realice un hematocrito centrifugado de acuerdo con el procedimiento de la NCCLS H7-A2.

c. Calcule el VCM, CHM y CHCM de la forma siguiente:

Hct (Centrifugado) VCM = --------- x 10

RBC (corregido)

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Hgb CHM= x 10

RBC (corregido)

Hgb CHCM= x 100

Hct (centrigufado)

d. Estime la anisocitosis del frotis de sangre. Si la anisocitosis viene de acuerdo con el ADE del instrumento, reporte el ADE; de lo contrario reporte solamente la anisocitosis solamente de la muestra.

4. Si los resultados de VPM y plaquetas son sealizados o el histograma de plaquetas muestra una posible interferencia de eritrocitos pequeos o fragmentos de eritrocitos, proceda de la forma siguiente:

a. Obtenga el recuento correcto de plaquetas usando un hemocitmetro; se prefiere el microscopio de contraste de fase.



Referencias

Los nmeros grandes de fragmentos de ERIT o microesferocitos pueden causar que el recuento de plaquetas sea falsamente elevado.

Los pacientes quemados con frecuencia tienen microesferocitos y fragmentos de ERIT en las etapas tempranas post trauma.

Akwari A, Ross D, Stass S. Spuriously Elevated Platelet Counts Due to Microespherocytosis. Am J Clin Pathol, 1982; 77; 2: 220-221.

Bessman, D. Mycrocytosis Cause by RBC Fragmentatioll. JAMA, 1978; 239; 23: 2475-2476.

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PROCEDIMIENTO 10 Especmenes Hemolizados

Principio Todas las partculas de 36 fL o ms grandes son contadas como ERIT usand

procedimientos hematologicos para sangres anormales

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