seminario amilasa
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Amilasa Sérica y Urinaria
• Díaz Fernández, Paola Roxana.• LLatas Calderón, Margarita.• Cáceres Quispe Andrés
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tipos de enzimas
Oxido – reductasasSi una molécula se reduce, tiene que haber otra que se oxide
Transferansas Grupos aldehídos, grupos acilos, grupos glucósidos, grupos fosfatos(quinasa)
Hidrolasas (reacciones de hidrolisis)
Transforman polímeros en monómeros. Actúan sobre enlace éster, glucósidico, peptídico, CN
Liasas(adición a los dobles en
enlaces)
Entre C y CEntre C y OEntre C y N
Isomerasas Glucosa galactosa
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La amilasa es un enzima
hidrolasa que tiene la función de digerir el glucógeno y el almidón para formar azúcares simples, se produce principalmente en las glándulas salivares y en el páncreas.
Que es la amilasa?
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Amilasa
Enzima mas pequeña
Es una enzima hidrolasa, cataliza la
descomposicion del almidon y el
glucogeno
Ataca los enlaces glucosidicos α 1-
4
Importante para digestion de almidones
Requiere iones de Ca y Cl para su activacion
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Clasificación
La amilasa se clasifican en las siguientes:
o α-Amilasa
o β-Amilasa
o γ-Amilasa
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α-Amilasa
• Son enzimas dependientes de cloruro, completamente afuncionales en ausencia de iones de cloruro.
• Actúan a lo largo de cualquier punto de la cadena de los carbohidratos, descomponiéndolos en maltotriosa y maltosa desde la amilosa o maltosa, glucosa y dextrina desde la amilopectina .
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Dado que puede actuar en cualquier punto de la cadena es más rápida que la β-amilasa.
En los animales es una enzima digestiva mayor y su pH óptimo está entre 6.7 y 7.0
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¿Qué es la B-amilasa?
Enzima que rompe enlaces 1,4-a-glucosídicos en los polisacáridos eliminando repetidas unidades de maltosa en las terminaciones no reductoras de los mismos.
El organismo humano carece de b -amilasa, que en los herbívoros facilita la digestión de la celulosa. Por esta razón el ser humano es incapaz de aprovechar la celulosa.
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Acción
ATACA A LA MOLECULA DE AMILOSA EN SU EXTREMIDAD NO REDUCTORA, SEPARANDO MOLÉCULAS DE MALTOSA EN LAS POSICIONES 1:4 Y CONTINUANDO DE ESTA FORMA HASTA QUE LLEGA AL PUNTO DE RAMIFICACIÓN DEL ENLACE 1:6, EN DONDE SU ACTIVIDAD SE DETIENE
DEGRADACIÓN DEL ALMIDÓN Lugar
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γ-Amilasa
Además de romper el último enlace α(1-4) glicosídico en el extremo no reductor de la cadena de amilosa y amilopectina, liberando glucosa, la γ-amilasa puede romper los enlaces glicosídicos α(1-6).
A diferencia de las otras amilasas esta forma es más eficaz en medios ácidos y su pH óptimo es de 3.
También colabora en el momento de la excitación.
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PANCREAS (porción exocrina del páncreas)Isoenzima P AMILASA PANCREATICA
GLÁNDULAS SALIVALES (parótidas, submaxilares y sublinguales) Isoenzima S o SALIVAR
UBICACION
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HIDROLISIS DEL ALMIDON
La amilasa (sacarasa o ptialina) Cataliza por hidrólisis de los enlaces 1-4
GLUCOGENO - ALMIDON
FORMAR AZÚCARES SIMPLES
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La Ptialina o Amilasa salival
Comienza la degradación del almidón
(Amilosa y amilopectina) monómero la glucosa
PRIMERA TRANSFORMACION
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Intestino delgado (Ampolla de Váter)
Jugo pancreático (Amilasa pancreática)
DEXTRINA
SEGUNDA TRANSFORMACION
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Glándulas intestinales (Amilasa intestinal - enzimas Sacarasa, Maltasa, Lactasa)
Desdoblar al almidón en Monómeros simples de Alfa-
Glucosa
Absorbidos por las vellosidades y micro
vellosidades intestinales
Transportados por la sangre a todas las células del cuerpo
TERCERA TRANSFORMACION
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Enzimas Origen Substra
to
Función Catalítica
o Productos
Amilasa Salival
Glándulas
salivales
Almidón
Hidroliza LOS enlaces
1,4, produciendo
dextrinas limitantes,
matotriosa y maltosa.
Amilasa Pancreát
ica
Páncreas
exocrino
Almidón Igual que la amilasa salival
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La determinación de los niveles de amilasa sérica se utiliza fundamentalmente para hacer el diagnostico de PANCREATITIS AGUDALos aumentos de amilasa en el suero dependen de básicamente:
Inflamación del páncreas
Glándula parótida.
Ruptura de la trompa de Falopio en caso de embarazo ectópico.
AMILASA SERICA
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Los valores normales de amilasa sanguínea deben ser inferiores a 120 UA/dl
Hiperamilasemia aparecía en suero entre la cuarta y sexta hora después del comienzo de la crisis de pancreatitis aguda, alcanzando el máximo en 24 a 30 horas. Sin embargo a partir de las 48 horas es posible encontrar valores plasmáticos dentro de los parámetros normales.
Los aumentos seguidos de las caídas bruscas de los valores hasta los niveles muy bajos se dan en la destrucción masiva del páncreas (PANCREATITIS NECROTIZANTE)
AMILASA SÉRICA
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LA PAROTIDITIS BACTERIANA Y
PAPERAS se asocian también con elevaciones de amilasa sérica.
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DETERMINACIÓN AMILASA SÉRICA Obtener una
muestra de sangre
Paciente tiene que encontrarse en ayunas, (no haber ingerido alimentos en más de 8 a 12 horas)
Inmediato llevarlo a laboratorio para su análisis
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Inicialmente, la amilasa se determinaba cuantitativamente según el método iodométrico de Wohlgemuth.
Posteriormente, Somogyi estandarizó las cantidades de almidón y iodo, siendo estas modificaciones las bases de los métodos amiloclásticos y iodométricos introducidos posteriormente por Caraway.
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MÉTODO AMILOCLÁSTICO IODOMÉTRICO PARA LA DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE LA ACTIVIDAD DE AMILASAS EN LÍQUIDOS BIOLÓGICOS
El sustrato, almidón tamponado, se incuba con la muestra produciéndose la hidrólisis enzimática.
Esta se detiene por el agregado de REACTIVO DE YODO, que al mismo tiempo produce color con el remanente del almidón no hidrolizado.
La disminución de color respecto de un sustrato color (sin muestra) es la medida de la actividad enzimática
Expresa en Unidades
Amilolíticas/decilitro (UA/dl) comparables con las Unidades sacarogénicas (somogyi)/decilitro.
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Valores de la Amilasa Sérica
Condición clínicaSuero
(UA/dl)
Normal
Pancreatitis
aguda
Pancreatitis
crónica
Parotiditis
Procesos
abdominales
agudos (sin
pancreatitis)
<120
300 a 12,000
Hasta 200
200 a 350
normal
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Amilsa Urinaria
Condición clínica Orina
(UA/hora)
Normal
Pancreatitis
aguda
Pancreatitis
crónica
Parotiditis
Procesos abdominales agudos(sin pancreatitis)
<260
Mas de 900
Mas de 300
Mas de 750
normal
El paciente debe miccionar, descartando esta micción, dos horas después vuelve a orinar y recoge toda la orina. Esta muestra que corresponde a dos horas de diuresis, se diluye a 200ml. Con agua.
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La determinación se efectúa con 20 ul. De esta dilución, obteniéndose el resultado directamente en Unidades Amilolíticas por hora.
Debido a las grandes variaciones de la diuresis en los cuadros agudos compatibles con diagnóstico de Pancreatitis, la determinación de amilasuria sobre muestras simples de orina carece de valor, por lo que debe determinarse la excreción horaria.
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Material requerido
•Espectrofotómetro
• Micro pipetas • Tubos de ensayo • Baños de agua a
37°C
• Tiempo de reacción: 7´ y 30´
• Volumen de muestra: 20ul
• Volumen final de la reacción: 10 ml
Unidades: una Unidad Amilolítica(UA) es la cantidad contenida en 100 ml. De muestra, que puede hidrolizar 10 mg de almidón en 30 minutos, en las condiciones de la reacción, en esta técnica se incuban 20 ul de muestra con 0,5 mg. de almidón contenidos en 1ml de sustrato.
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PROCEDIMIENTO
En dos tubos de fotocolorímetro marcados C
(control) y D (desconocido)colocar:
C
D
Sustrato 1 1ml.
1ml.
Dejar unos minutos en baño de agua a 370C y
agregar :
Muestra
20ul
Incubar a 370C a los 7 minutos y medio exactos,
agregar:
Reactivo de lodo 2 1ml
1ml
Mezclar por agitación suave. Retirar los tubos del
baño y agregar:
Agua destilada 8ml
8ml
Mezclar por inversión. Leer en fotocolorímetro con filtro
rojo en espectrofotómetro alrededor de 640nm,
llevando a cero el aparato con agua destilada.
ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCION FINAL
El color de la reacción es estable durante una hora por lo que la absorbancia debe ser leída dentro de ese lapso. Si la temperatura ambiente es superior a 250C, lectura deberá efectuarse dentro de los 20 minutos.
CALCULO DE LOS RESULTADOS
Abs. Control - Abs.muestra
Amilasa UA/dl=------------------------------------x100
Abs. Control
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Valoración de resultados
anormales Los niveles aumentados de
Amilasa en la sangre pueden indicar:
•Cáncer de páncreas, ovarios, pulmón.
•Colecistitis. •Cólico de vesícula biliar. •Embarazo ectópico con
rotura de trompas. •Obstrucción intestinal. •Pancreatitis aguda. •Problemas de obstrucción
de conductos biliares o pancreáticos.
•Ulcera de estómago perforada.
Amilasa en pancreatitis
aguda
Su elevación mayor de tres veces el valor superior normal hace sospechar pancreatitis. La amilasa se eleva en las 6 a 12 horas posteriores al inicio, tiene una vida media de 10 horas, y persiste elevada por 3 a 5 días.
Es importante saber que la amilasa pancreática representa 35 a 50%, y a la salival el resto
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Los niveles disminuidos de Amilasa en la sangre pueden indicar:
•Cáncer de páncreas.
•Lesión pancreática. •Enfermedades
renales. •Toxemia en el
embarazo.
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PANCREATITIS CRÓNICA
Definición: Es un estado inflamatorio crónico que determina un daño irreversible de la estructura y función pancreática. Ésta es causada por la lesión obstructiva, es la forma más común de pancreatitis, la que se caracteriza por cambios crónicos irreversibles.
Causas: Pancreatitis Alcohólica - Pancreatitis
Idiopática - Pancreatitis Crónica Tropical - Pancreatitis Hereditaria - Pancreatitis por Hipoparatiroidismo Pancreatitis por Lesiones Traumáticas del Conducto Ductal
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MUCHAS GRACIAS
MUCHAS GRACIAS