Sergio Wehinger WehingerLínea Alimentación y EnvejecimientoSub Línea Enfermedades Cardiovasculares, Dislipidemias y E.O.Tercera Jornada PIEI-ES, noviembre 2015

Efectos Biológicos del propóleos en líneas celulares beta pancreática, tumorales y

fibroblastos

PROPÓLEOSProducto resinoso recolectado por las abejas. Lo obtienen a partir de yemas, brotes y heridas de arboles de hoja caduca y se mezcla con secreciones de la glándula mandibular

Barrientos, Herrera et al. 2013, Kurek-Górecka, Rzepecka-Stojko et al. 2013

Algunos compuestos fenólicos y flavonoides típicos presentes en el propóleos

Toreti V. et al 2013

EFECTO DEL CONSUMO DE PROPÓLEOS SOBRE STRESS OXIDATIVO EN ADULTOS DE TALCA

Objetivo general Evaluar el efecto de Propóleos sobre marcadores de estrés oxidativo en adultos de la ciudad de Talca

Investigadores: Elba Leiva, Verónica Mujica, Roxana Orrego, Luis Guzmán, Sergio Wehinger Alumnos: Paula Romero, Felipe Muñoz, Jorge Pérez, Jeanette San Martín

Proyecto FIC-Región del Maule 2013-2016

Métodos

Muestra voluntaria a 80 sujetos de 30 a 60 años. Selección aleatoria doble ciego: Propóleos-Placebos. Consumo durante 90 días, 30 gotas diariasEvaluaciones 45 y 90 días : Parámetros Metabólicos: Glicemia, HbA1c y lípidos. PCR y Stress Oxidativo. Análisis estadístico :Test de Shapiro-Wilk para distribución normal de las variables. T test paread o para variables paramétricas . Mann-Whitney test para variables no paramétricas. Se consideró un valor p<0,05 como estadísticamente significativo. El estudio contó con aprobación del Comité de Ética de la Universidad de Talca.

Propóleos indujo un aumento significativo del cHDL

Voluntarios

Lípidos(mg/dl)

Pre-tratamiento

Post-tratamiento

Valor p

Col T 187,8+33,1 198,6+41,9 0,0051

Col LDL 108,1+41,63 113,8+33,2 0,0820

Triglicéridos 116,7+58,5 126,5+71,6 0,1704

Col HDL 56,4+16,4 60,7+19,5 0,0064

Propóleosn = 35

Placebo n= 33

Edad (años) 48+12 44+14

Peso (kg) 73,8+16,6 74,1+14,5

IMC 27,9+4,8 28,3+4,7

CC (cm) 91,7+13,9 92,8+12,2

PAS (mmHg) 125,2+10,6 123,1+13,1

PAD (mmHg) 79,6+10,1 77,8+8,1

Propóleos redujo los niveles de TBARS y

aumentó el GSH, sugiriendo una

disminución en el estrés oxidativo en los

voluntarios

Propóleos Placebo

Propóleos Placebo

Efecto protector del propóleos sobre la célula beta pancreática sometida a estrés

oxidativo

Obesidad

Ácidos grasos libresLipotoxicidad

AdipoquinasInflamación

Estrés oxidativo Insulinoresistencia

HiperglicemiaGlucotoxicidad

Otros factores

Fisiopatología DIABETICA

Maritim, Sanders et al. 2003

β↑ROS

↓Antiox

La oxidación excede las defensas antioxidantesYoshikawa and Naito 2002

Lenzen 2008

Giacco, F. and M. Brownlee, Oxidative stress and diabetic complications. Circulation research, 2010. 107(9): p. 1058-1070.Baynes, J.W. and S.R. Thorpe, Role of oxidative stress in diabetic complications: a new perspective on an old paradigm. Diabetes, 1999. 48(1): p. 1-9.Baynes, J.W. and S.R. Thorpe, The role of oxidative stress in diabetic complications. Current Opinion in Endocrinology, Diabetes and Obesity, 1996. 3(4): p. 277-284.

Objetivo general Evaluar el efecto de un extracto de propóleos frente al estrés oxidativo inducido por H2O2 y t-BOOH en células β pancreáticas de la línea MIN-6 y β TC-6.

Investigadores: Sergio Wehinger, Elba LeivaAlumno: Sebastián Zagmutt

RESULTADOS

A B

Ensayo de Viabilidad en células MIN-6 y β TC-6 expuestas a H2O2, t-BOOH y EP.En A se presentan los resultados de viabilidad celular de la línea celular MIN-6 (barras negras) y β TC-6 (barras grises) utilizando H2O2 como oxidante y en B se presenta los resultados de la viabilidad celular de la línea MIN-6 (barras negras) y β TC-6 (barras grises) utilizando t-BOOH como oxidante . Los resultados se presentan como promedio ± DS. (n = 3). ANOVA una vía, p < 0,0001, Dunnett’s post hoc test *** = p < 0,001

Los EP protegen a las células β frente al E.O. in vitro

VIABILIDAD CELULAR

LIPOPEROXIDACIÓN

Concentración de TBARs en la línea MIN-6 y β TC-6 expuestas a H2O2, t-BOOH y EP.En A se presentan la concentración de TBARs en la línea celular MIN-6 a las 24 (barras blancas) y 48 (barras grises) horas de incubación y en B se presenta presentan la concentración de TBARs en la línea celular β TC-6 a las 24 (barras blancas) y 48 (barras grises) horas de incubación, bajo las condiciones de estudio. Los resultados se presentan como promedio ± DS. (n = 3). ANOVA una vía, p < 0,0001, Dunnett’s post hoc test *** = p < 0,001

A B

La incubación con EP disminuyen la lipoperoxidación en células β expuestas a E.O. in vitro

GLUTATIÓN REDUCIDO

A B

Concentración de GSH reducido en la línea MIN-6 y β TC-6 expuestas a H2O2, t-BOOH y EP.En A se presentan los resultados de la concentración de GSH reducido en la línea celular MIN-6 expuestas a H2O2, (barras oscuras) y t-BOOH (barras grises) y en B la línea celular β TC-6 expuestas a H2O2, (barras oscuras) y t-BOOH (barras grises). Los resultados se presentan como promedio ± DS. (n = 3) ANOVA una vía, p < 0,0001, Dunnett’s post hoc test *** = p < 0,001

La incubación con E.P. restablecen los niveles de GSH en células β expuestas a E.O. in vitro

ENSAYO DE APOPTOSIS POR ANEXINA V

A B C

Porcentaje de células β TC-6 marcadas con Anexina V y Yoduro de propidioEn A se presentan las células β TC-6 viables (anexina V y IP negativas) en B se presentan el porcentaje de células β TC-6 anexina V positivas (apoptóticas) y en C se presentan las células IP positivas (necróticas). Las barras negras representan la incubación con H 2O2 y

las barras plomas representan la incubación con t-BOOH Los resultados se presentan como el porcentaje promedio ± DS. (n = 3) ANOVA una vía, p < 0,0001, Dunnett’s post hoc test * p < 0,05, *** = p < 0,001

Viables Apoptóticas Necróticas

Propóleos inhibe la apoptosis inducida por estrés oxidativo in vitro en células β-TC6

RESUMEN

H2O2t-BOOH

Lipoperoxiación MDA

2 GSH

GS-SG

H2O2

t-BOOH

APOPTOSIS

PROPÓLEOS

Efecto de extractos de propóleos sobre la migración y proliferación de fibroblastos in vitro

Investigadores: Sergio Wehinger, Elba LeivaAlumno: Felipe Romero

CICATRIZACIÓN DE HERIDA

INTRODUCCIÓN

Existen efectos anómalos en la cicatrización de herida, los cuales son

provocados por desórdenes fibroproliferativos en la dermis. (8)

Formación de queloide (Tejido fibroso de color rosado)

Cicatrización hipertrófica (Lesión fibrosa eritematosa)

PROLONGACIÓN FASE INFLAMATORIAFactor de crecimiento transformador β 1 y β 2 (TGF β 1 y β 2)

Factor de crecimiento epidérmicos (EGF)

PROPÓLEOS EN CICATRIZACIÓN ANÓMALA

Actúa restableciendo la acción del Interferón I y II (INF I y II), produciendo una inhibición en la

proliferación y migración de fibroblastos evitando una formación excesiva de colágeno. (9)

QUELOIDE CICATRIZACIÓN HIPERTRÓFICA

Evaluar los efectos cicatrizantes de extractos de propóleos a través de ensayos de cierre de herida y proliferación en una línea celular de fibroblastos de ratón NIH-3T3 in vitro.

Objetivo general

Proliferación de fibroblastos NIH-3T3 en presencia de extractos de propóleos

Proliferación Celular de Fibroblastos NIH-

3T3 mediante el ensayo de MTT.

Comparación de la velocidad de

proliferación de las células NIH-3T3 en

presencia de extractos de propóleos.

Vel

ocid

ad d

e p

roli

fera

ción

(p

end

ien

te)

20 μg/ml

20 μg/ml

0

0,5

1

1,5

2

2,5

3

3,5

4

4,5

1 2 3

Series1

Series2

Series3

Abs

orba

ncia

a 5

70 n

m

(vec

es e

l tiem

po in

icia

l)

3 h 24 h 48 h

E1

E2

Control

RESULTADOSEnsayo de cierre de herida in vitro

*p<0,05**p<0,001

***p<0,001

Los extractos de propóleos inhibieron la

proliferación y migración de fibroblastos

Evaluación del Efecto antitumoral de dos Extractos de Propóleos de la Región Centro Sur en Líneas Celulares

de Cáncer

Investigadores: Sergio Wehinger, Elba LeivaAlumno: César Sepúlveda

Evaluar los efectos citotóxicos y pro-apoptóticos de extractos de propóleos en células de líneas celulares tumorales humanas de colon HT-29 y de mama MCF-7

Objetivo general

Líneas Tumorales

• MCF-7• Carcinoma de células

epiteliales de glándula mamaria

• Sobreexpresión oncogén WNT7B

Líneas tumorales

• HT-29• Adenocarcinoma de

colon• Sobreexpresión de p53

no funcional

Viabilidad en presencia de propóleos

HT-29

MCF-7

*p<0,05**p<0,001

***p<0,001

Los extractos de propóleos disminuyeron la viabilidad

HT29 y MCF-7 de manera significativa desde los 30 μg/ml

Proliferación celular en presencia de propóleos

HT-29

MCF-7

vs tiempo 3 h*p<0,05

**p<0,001***p<0,001

20 μg/ml

20 μg/ml

•vs E1p<0,05

#vs E2p<0,05

Los extractos de propóleos inhibieron la proliferación de

HT29 y MCF-7 de manera significativa

GRACIAS