Tests rapides de dépistage du VIH

Dr C. Delamare

FORMATION CDAG/CIDDISTNANCY – 13 septembre 2011

Diagnostic biologique de l’infection par le VIH

Diagnostic Indirect : – Mise en évidence des anticorps anti-VIH (sérologie)

Diagnostic Direct :

Mise en évidence du virus, de ses composants ou de son génome

Ag p24ARN viral plasmatique

(charge virale) ou d ’ADN proviral

Culture virale

Tests de 1ere génération : lysats de cellules infectées par VIH-1- Faux négatifs, et spécificité médiocre

Actuellement 4ème

génération

1985

1986

1987

1991

Tests de 2eme génération : Antigènes recombinants et peptides de synthèse

Tests mixtes : détection des anticorps dirigés contre le VIH-1 et VIH-2

Tests sandwich (3ème génération) :- Sensibilité +++- Spécificité +++

Tests combinés détectant simultanément les anticorps anti-VIH-1 et anti-VIH-2 et de l’antigène p24 (4ème génération)

1997

Techniques de dépistage des anticorpsTests ELISA

ou EIA

Recommandations de la Haute autorité de santé (HAS)

Arrêté du 28 mai 2010 • Test combiné de 4e génération • seuil de détection de l’antigène p24 : 2UI/ml • L’utilisation de 2 tests pour le dépistage n’est plus

nécessaire • (Etude APHP sur 37 568 échantillons testés : Haute

sensibilité, meilleure spécificité, réduction du cout, Dominique Costagliola , AIDS 2008, 22:2035–2044)

• 2 prélèvements pour la confirmation d’un positif• Tout test positif doit être confirmé par un Western blot

ou Immunoblot (spécificité)

Détection des Anticorps anti VIH Tests ELISA MicroplaquesAutomatisation +++ Adaptée à de grandes séries Traçabilité informatique Rapide : 1 technicien =2h30 pour 90 échantillonsReproductible Sensible Spécifique

Tests EIA sur automatesHaut débit rapides+++

Tests unitaires diagnostic rapide (TDR) : sérum

TROD : sang capillaire

–1

Les marqueurs de la primo-infection VIH-1

3 marqueurs biologiquesARN plasmatique viral (charge virale)

antigène p24 Anticorps anti-VIH-1

Évolution des marqueurs au cours de la primo-infection par le VIH

Michael P. Busch Transfusion Medicine Review Vol 11, No 3 JUL Y 1997

ARN

Ag p24

Anticorps anti-VIH

Durée de la fenêtre sérologique estimée à 21 à 26 jours après la contamination

Délai entre détectabilité ARN et anticorps

Durée de la fenêtre sans Ag p24 et sans AC

Ag p24 Titres élevés dans la phase aiguë de primo-infection mais durée positivité courte Cas peu fréquent de réplication faible avec Ag p24 négatif Difficultés de détection de l’Ag p24 par formation de complexes Ag-Ac dans le sérum

ARN Détection primo-infection quelques jours (<7 jours) avant Ag et 12 jours avant un test Ac Beaucoup plus sensibles que la sérologie dans la période très précoce PCR très sensibles à la variabilité du génome et nettement plus sensible à cette variabilité que les tests sérologiques. ARN ne doit pas devenir un test de dépistageEn général fort mais peut parfois être faible

Charge virale + 20 copies/mL

Ag p24 -

Charge virale +> 20 000 copies

Ag p24 +

FIEBIG ET AL. LA FENÊTRE SÉROLOGIQUE POUR LES TESTS

COMBINÉS : 21 - 26 JOURS POST - CONTAMINATION *

• 6 semaines = •durée moyenne de la fenêtre sérologique + 2 semaines

incertitudes des performances des tests combinés (non –B)

Tests rapides de dépistage du VIH

Deux arrêtés •28 mai 2010 •9 novembre 2010

fixant les conditions de réalisation du diagnostic biologique de l’infection à VIH 1 et 2 et les conditions de réalisation des TROD dans les situations d’urgence

Arrêté du 28 mai 2010 TROD dans certaines situations d’urgence (sang total, sérum ou plasma)

Accident d’Exposition au Sang : patient « source » Accident d’exposition sexuelle : partenaires accouchement : statut sérologique inconnu ou exposition récente. Urgence diagnostique d’une pathologie aiguë évocatrice du sida.

Réalisation par : médecin exerçant en cabinet médecin ou biologiste médical (établissement ou service de santé) sage-femme infirmier ou technicien de laboratoire (sous la responsabilité d’un médecin ou d’un biologiste)

Information du patient concernant les limites inhérentes à l’interprétation du résultat Consentement éclairé de la personne obligatoire Validation obligatoire par un test de 4eme génération

Sur un échantillon biologique distinct Mise en place une procédure d’assurance qualité formalisée

DépistageArrêté du 9 novembre 2010

• En dehors des situations d'urgence mentionnées dans l'arrêté du 28 mai 2010

• En dehors des services ou établissements de santé cités dans l'arrêté du 28 mai 2010

• Elargissement aux : – structure de prévention habilitée– structure associative habilitée

• médecin, sage-femme ou infirmier • Salarié ou bénévole, non professionnel de santé, formation validée

• TROD+ : test de 4ème génération

Principales caractéristiques Test unitaire ou petites séries Lecture visuelle et subjective Pas d’équipements de laboratoire Délai résultat < 30 mn Détection Ac anti-VIH-1 et VIH-2. Peut être confiée à des personnes

ayant une expertise technique limitée

Processus de contrôle interne de qualité : «antigène non VIH» qui lie les Ig présentes dans le sérum Positivité du contrôle interne indispensable pour la validation

Inconvénients Absence d’automatisation Non adaptable à de grandes séries Pas de lecture code barre Risque d’inversion traçabilité résultats ? Temps technicien ++ si arrivage

séquentiel des tubes

Tests rapide

sang total– évite l’utilisation de centrifugeuse et matériel de laboratoire– hémolyse des globules rouges peut gêner la réaction de

liaison anticorps-antigène.– Moins sensible : 1 ml de sang total présente 50% d’anticorps

en moins qu’1 ml de plasmasalive :

- liquide craviculaire - Non autorisé en France- taux d’anticorps est 100 à 1000 fois inférieur à celui du plasma

Sérum ou plasma : meilleure sensibilité

Principes des TROD• Ag d’enveloppe : VIH-1

(gp41) et VIH-2 (gp36)

• immuno-chromatographie ou filtration sur membrane

• Migration du sérum déposé sur le support

– par capillarité en entraînant avec lui des réactifs déjà présents sur TDR

– rencontre des antigènes déposés sur la membrane lors de la filtration du sérum

Etude prospective française - Hôpital Saint-Louis Sensibilité de 5 TROD sur sang capillaire et/ou salive

200 HIV + adultes : 194 VIH-1 et 6 VIH-2

20 séronégatifs

5 TROD Oraquick Advance: sang capillaire et salive VIKIA HIV ½ Determine HIV 1–2 et combo INSTI HIV K

Sensitivity of Five Rapid HIV Tests on Oral Fluid or Finger-Stick Whole Blood: A Real-Time Comparison in a Healthcare Setting Juliette Pavie, Anne Rachline, Benedicte Loze, Laurence Niedbalski, Constance Delaugerre, Eric Laforgerie, Jean-Christophe Plantie, Willy Rozenbaum, Sylvie Chevre, Jean-Michel Molina, Francois Simon. PLoS ONE, July 2010, Volume 5

Etude de la sensibilité des TROD

Salive : OraQuick significativement moins sensible que sur sang capillaire Sang capillaire :

• sensibilité OraQuick et Détermine < INSTI (p = 0,025 et 0,03, respectivement) Faux négatifs

• 5,2% (60 essais provenant de 36 patients) • - 6 avaient > 3 tests négatifs (infection récente)• - 4 patients traités avec CV indétectable (seuil à 200 cp/ml associée a faux négatif)VIH-2 : 2 faux négatifs sur salive mais positifs sang capillaire OraQuick Spécificité : 20 VIH-négatifs par tous les TDR Tests invalides

39 (3,2%) dont 33 avec Test 4G Détermine (16,5%) Pavie et al.

Sensibilité sérum>sang capillaire

• Faux négatifs sang capillaire : – Oraquick : 11

– Vikia : 3

– Determine Ac : 10 et Ag-Ac : 7

– INSTI : 2

• 18 patients avec au moins un test négatif sur sang capillaire• 12/ 18 patients : + sur le sérum

Comparaison de 8 TDR sériques

• 100 patients HIV + 46 sous types B41 sous types non-B2 groupes O5 HIV-2WB indeterminés

• 3 panels de séroconversion• 11 échantillons de séroconversion • 50 HIV-

Sensitivity of 8 CE (European Community)-approved rapid disposable tests for anti-HIV antibody detection during and after seroconversion.Laforgerie E et al. J Virol Methods 2010

tests échantillon fabriquant

Oraquick AdvanceRapid HIV ½ Antibody test

Salive, sang capillaire, sérum Orasuretechnologies (USA)

VIKIA HIV 1/2 Sérum, plasma, sang capillaire bioMerieux (France)

Determine HIV 1–2 et combo Sérum, plasma, sang capillaire Orgenics Ltd (Israel)

INSTI HIV K Sérum, plasma, sang capillaire Biolytical (Canada)

Immunoflow Sérum (Core Diagnostics, Birmingham, UK

Core HIV 1-2 sérum Core Diagnostics , UK

Retroscreen sérum Qualpro Diagnostics, inde)

Double check II Sérum, plasma Orgenics Yavne (Israel)

ImmunoComb IIHIV 1&2 Serum

Sérum, plasma BiSpot(Orgenics, Israel)

Résultats discordants

1 faux + en Determine

1/3 sous-type A retrouvé négatifs par 3/8 tests

Groupe O : négatifs avec l'un des kits (Core VIH 1 & 2)

100% détection des WB indéterminés

HIV2 : 100% détection

Tous les sous types B sont détectés

Nb : peu d’étude avec virus non B avec les TROD, beaucoup moins d’étude qu’avec les ELISA

Sensibilité avec les 3 panels de séroconversionEchantillons très précoces : 0 à 50% des tests +

séroconversion : 83 à 100%

Comparaison des TRODtests échantillon fabriquant principe Contrôle Volume Durée

mn

Oraquick AdvanceRapid HIV ½ Antibody test

Salie, sang capillaire, sérum

Orasuretechnologies (USA)

Immunochromatographie HIV-1 groupe M –ss type O (gp41) et HIV-2 (gp36)Peptides synthétiques

Proteine A (IgG)

5 l salive ou sang capillaire

20-40

VIKIA HIV 1/2 Sérum, plasma, sang capillaire

bioMerieux (France)

Immunochromatographie HIV-1 groupe M –ss type O (gp41) et HIV-2 (gp36)Peptides synthétiques

SAB 75 l sang capillaire

20-30

Determine HIV 1–2 et combo

Sérum, plasma, sang capillaire

Orgenics Ltd (Israel)

Immunochromatographie HIV-1 (gp41) et HIV-2 (gp36)Protéine recombinante

Colloidal selenium?

50 l sang capillaire

15-60

INSTI HIV K Sérum, plasma, sang capillaire

Biolytical (Canada)

Immunofiltration HIV-1 (gp41) et HIV-2 (gp36)Protéine recombinante

Proteine A (IgG)

50 l sang capillaire

5

2 éléments à prendre en compte :-Volume d’échantillons- durée de la réaction

Sensibilité des différents tests

semaines

Importance du programme de formation sur l’exactitude

• 4 TROD : – Advance Quality HIV Rapid Test (In Tec Products)– Determine HIV-1/2 (Inverness Medical)– Insti HIV-1/HIV-2 (BioLytical Laboratories) – SD Bioline

• 10 échantillons (3 - et 7 +)

N = 19 N = 22 N = 34

Photographed Rapid HIV Test Results Pilot Novel Quality Assessment andTraining Schemes

Yu-Ho C. Chiu et al. mars 2011

Amélioration de l’exactitude

Réf : FOR-LABOS-MTZ-062-ORG

Date de révision : juillet 2012

Date de diffusion : juillet 2011

Arrêté du 28 mai 2010 et du 9 novembre 2010 fixant les conditions de réalisation du diagnostic biologique de l’infection à VIH 1 et 2 et les conditions de réalisation du test rapide d’orientation diagnostique dans les situations d’urgence

Identification de la structure

Personne formée

Nom prénom : signature :

fonction :

Détail de la formation

Ouverture du coffret, notion de numéro de lot, vérification du contenu du coffret, date de péremption

Orientation du test et identification

Maitrise de la lancette et recueil de la quantité de sang nécessaire à la réalisation du test

Manipulation du test

Interprétation du résultat

Recommandations du fabricant

Modalités de conservation

Modalités de la traçabilité des tests utilisés et de leurs résultats

Procédure de rendu de résultat

Information du patient concernant les limites inhérentes à l’interprétation de ce résultat et à sa différence de sensibilité dans les périodes de séroconversion par rapport à un test de 4ème génération

Elimination des déchets

laboratoires référents pour la réalisation du diagnostic biologique de l’infection

Laboratoire de biologie CHR Metz-Thionville Site de Metz

20 rue Drogon, Metz ' 0387553806

Date de la formation

Durée de validité de la formation 1 an

le présent certificat délivré par le laboratoire du CHR Metz-Thionville atteste que la personne susmentionnée a suivi la formation à l'utilisation des TROD

Certificat de formation à l’utilisation des Tests rapides d’orientation diagnostic du VIH (TROD)

Photocopie ou photo du test